СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ПАНКРЕОНЕКРОЗА Российский патент 2014 года по МПК G09B23/28 A61K31/549 A61P1/18 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной форме панкреонекроза, и может быть использовано для моделирования панкреонекроза с последующим медикаментозным воздействием для наблюдения его эффективности.

Острый панкреатит относится к числу наиболее частых нозологических форм и составляет 3-10% случаев среди ургентных заболеваний органов брюшной полости. На сегодняшний день острый панкреатит стоит на первом месте в структуре больных, поступающих в порядке неотложной помощи в стационары хирургического профиля. Несмотря на большое количество различных оперативных и консервативных методов лечения, смертность при остром панкреатите продолжает оставаться высокой - 10-15%, достигая 30-40% и более при деструктивных формах острого панкреатита - панкреонекрозе.

Основными причинами летального исхода при панкреонекрозе являются: развитие полиорганной дисфункции в результате развития эндотоксикоза и септического состояния при формировании гнойного воспаления вокруг очагов некроза. Высокая летальность диктует необходимость разработки новых методов лечения этого тяжелого заболевания, которые бы предотвращали развитие или снижали выраженность указанных осложнений панкреонекроза.

Моделирование острого деструктивного панкреатита на крысах, по нашему мнению, является наиболее обоснованным, т.к. эти лабораторные животные имеют схожую с человеком пищеварительную систему, также питаются тканями органического происхождения. Схожее течение физиологических и патологических процессов у крыс и человека позволяет использовать результаты исследований на животных для создания новых методов лечения этого заболевания у человека.

Известен для лечения острого панкреатита препарат курантил (дипиридамол), который обладает сложным механизмом действия, тормозит активность фосфодиэстеразы, что ведет к увеличению содержания циклической АМФ в тромбоците и нарушению реакции высвобождения из канальцев ионов кальция, стимулирует высвобождение простациклина из эндотелия сосудов, тормозит обратный захват аденозина, что повышает его уровень в плазме, чем стимулирует аденилатциклазу и увеличивает продукцию циклической АМФ в тромбоцитах.

Введение курантила (дипиридамола) может осуществляться обычным способом и не требует дорогостоящего оборудования, он обладает дезагрегационными свойствами, может тормозить активность фосфодиэстеразы, увеличивает содержание циклического АМФ, стимулирует высвобождение простациклина из эндотелия сосудов. Обычная суточная доза составляет 75-100 мг 3 раза в сутки.

Недостаток: Не оказывает влияния на течение острой фазы путем снижения уровня эндогенной токсемии в острую фазу панкреонекроза, не способствует предотвращению перехода острой фазы панкреонекроза в фазу гнойных осложнений.

Источник:

1. Чупрова А.В., Лоскутова С.А., Анмут С.Я., Стуров В.Г. Геморрагические и тромботические заболевания и синдромы у детей: диагностика, терапия. // Новосибирск, изд. Феникс 2007. - глава 7. - стр.159-189.

2. Ералина С.Н., Кенжебаев A.M., Седова Н.А., Манкараев К.Б. Интенсивная терапия острого панкреатита / Сайт Алматинского государственного института усовершенствования врачей, Кафедра анестезиологии и реаниматологию - 2008. - Режим доступа: www.kazanesthesia.kz/pankreatit.php

Известен патент РСТ РФ №2259371 (27.08.2005). Изобретение относится к области биологически активных соединений, в частности к замещенным 5Rl, 6R2 - тиадиазин-2-аминам и содержащим их фармацевтическим композициям, которые могут быть использованы в медицине в качестве потенциальных фармакологически активных веществ. Из них выбрано соответствующее поставленной цели соединение - «2-морфолино-5-фенил-6Н-1,3,4-тиадиазин,гидробромид».

Действие соединения «2-морфолино-5-фенил-6H-1,3,4-тиадиазин, гидробромид» и всей группы веществ отличается от используемых в медицинской практике препаратов.

Его недостаток. Не изучено действие при панкреонекрозе.

Источники:

1. Чупахин О.Н., Сидорова Л.П., Петрова Н.М., Чарушин В.Н., Русинов В.Л., Муляр А.Г. Замещенные 5R₁,R6₂, 3,4-тиадиазин-2 амины и содержащие их фармацевтические композиции в качестве фармакологически активных средств, обладающих антикоагулянтным и антиагрегантным действием. - Патент на изобретение №2259371 (Зарегистрировано в Государственном реестре изобретений Российской Федерации 27 августа 2005 г.).

Известен способ лечения, описанный в работе Повзун П.А. «Использование пентоксифиллина в лечении экспериментального панкреонекроза», Журн. Акад. мед. наук Украiнu, 1998, Т4, №3, стр.530-539 - ПРОТОТИП.

Пентоксифиллин оказывает сосудорасширяюще действие, усиливает реакции освобождения простациклина из эндотелия сосудов, способствует улучшению снабжения тканей кислородом, ингибирует фосфодиэстеразу, вызывает накопление в тканях циклического АМФ, тормозит агрегацию тромбоцитов и уменьшает вязкость крови, в результате снижается синтез цитокинов, особенно TNF-α.

Его положительные стороны: введение пентоксифиллина, может осуществляться стандартным способом, не требует дорогостоящего оборудования, он обладает дезагрегационными свойствами, может ингибировать TNF и цитокиновую реакцию.

Отрицательные стороны: не оказывает влияния на течение острой фазы путем снижения уровня эндогенной токсемии в острую фазу панкреонекроза, не ускоряет формирование грануляционной ткани, не способствует предотвращению перехода острой фазы панкреонекроза в фазу гнойных осложнений.

Источники:

1) Сторч Н.Н. «Острый панкреатит». / Официальный сайт Российской ассоциации специалистов по хирургическим инфекциям. Раздел - Инфекции в хирургии - Интрабдоминальные инфекции - Деструктивный панкреатит. - 2006. - Режим доступа: http://www.sia-r.ru/infections/surgeon/abdomen/pankreas/Sharp_pancreatitis/

2) Сепсис в начале XXI века. Под ред. Савельева B.C., Гельфанда Б.Р. / Практическое руководство. - Москва, Литера. - 2006. - 176 стр.

3) Машковский М.Д. «Лекарственные средства» в 2-х томах // Москва, Медицина. - 10-е издание. - 1 том. - стр.461.

4) Чупрова А.В., Лоскутова С.А., Анмут С.Я., Стуров В.Г. Геморрагические и тромботические заболевания и синдромы у детей: диагностика, терапия. // Новосибирск, изд. Феникс 2007. - глава 7. - стр.159-189.

Технической задачей изобретения является повышение эффективности лечения панкреонекроза с большей вероятностью излечения.

Для решения поставленной задачи предлагается способ лечения острой фазы синдрома системной воспалительной реакции при экспериментальном панкреонекрозе, основанный на моделировании панкреонекроза с последующим медикаментозным вмешательством, отличающийся тем, что выполняется внутривенное введение соединения «2-морфолино-5-фенил-6H-1,3,4-тиадиазин, гидробромид» из класса 1,3,4-тиадиазинов в дозировке 40 мг/кг после создания модели панкреонекроза с последующим исследованием показателей воспалительного ответа (интерлейкины), тромбоцитарно-сосудистого и плазменного звеньев гемостаза, показателей эндотоксикоза и проведением гистологического исследования ткани поджелудочной железы. Соединение «2-морфолино-5-фенил-6H-1,3,4-тиадиазин, гидробромид», воздействуя на показатели воспалительного ответа (интерлейкины), тромбоцитарно-сосудистого и плазменного звеньев гемостаза (концентрация Д-димеров, фибриногена, антитромбина III, протромбиновый индекс, количество тромбоцитов, ортофенантролиновый тест, тромбоэластография: R, K, MA), корригирует течение острой фазы синдрома системной воспалительной реакции и путем снижения выраженности синдрома эндогенной интоксикации (по показателям концентрации веществ низкой и средней молекулярной массы в плазме и в эритроцитах, оценки связывающей способности альбумина) ускоряет формирование грануляционной ткани с пролиферацией клеток фибропластического ряда, с последующим замещением зоны некроза без явлений гнойного воспаления рубцовой тканью, представленной активными фибробластами и волокнистыми структурами, стимулируя пролиферацию протоковых структур поджелудочной железы.

Лечение происходит следующим образом.

Осуществляется моделирование панкреонекроза в эксперименте на беспородных белых крысах в возрасте 5-6 месяцев женского пола в соответствии с методикой, описанной в патенте РФ №2388063 от 27.04.2010, основанной на временном пережатии главного протока поджелудочной железы и краевого сосуда двенадцатиперстной кишки.

Выполняется внутривенное введение соединения «2-морфолино-5-фенил-6Н-1,3,4-тиадиазин, гидробромид» из класса 1,3,4-тиадиазинов в дозировке 40 мг/кг после создания модели панкреонекроза с последующим исследованием показателей воспалительной реакции (интерлейкинов), эндотоксикоза (по показателям концентрации веществ низкой и средней молекулярной массы в плазме и в эритроцитах, оценки связывающей способности альбумина), оценкой системы гемостаза (концентрация Д-димеров, фибриногена, антитромбина III, протромбиновый индекс, количество тромбоцитов, ортофенантролиновый тест, тромбоэластография: R, K, MA) и проведением гистологического исследования ткани поджелудочной железы в течение 7 суток. Пример расчета дозы соединения «2-морфолино-5-фенил-6H-1,3,4-тиадиазин, гидробромид»: на 1 крысу весом в 200 г используется 8 мг соединения из расчета 40 мг/кг веса лабораторного животного.

Воздействуя на характер островоспалительной реакции (уменьшая поступление нейтрофильных лейкоцитов, выделяющих факторы стимуляции воспаления), соединение «2-морфолино-5-фенил-6H-1,3,4-тиадиазин, гидробромид» из класса 1,3,4-тиадиазинов в дозировке 40 мг/кг корригирует течение острой фазы синдрома системной воспалительной реакции, что приводит к уменьшению выраженности лейкоцитарной реакции, стимулирует миграцию иммуно-компетентных клеток - лимфоцитов, плазматических клеток, тучных клеток, макрофагов в очаги некроза, ускоряет формирование грануляционной ткани с пролиферацией клеток фибропластического ряда и вызывает замещение зоны некроза рубцовой тканью, представленной активными фибробластами и волокнистыми структурами, без явлений гнойного воспаления рубцовой тканью, стимулирует пролиферацию протоковых структур поджелудочной железы.

Прослежено действие соединения «2-морфолино-5-фенил-6H-1,3,4-тиадиазин, гидробромид» на течение острой фазы системной воспалительной реакции при экспериментальном панкреонекрозе в 50 случаях.

Результаты экспериментов.

На первые сутки панкреонекроза без введения соединения отмечено, что очаг некроза представлен разрушенными ацинарными структурами экзокринной части поджелудочной железы. Клетки с признаками кариорексиса и кариолизиса ядер, плазморексиса и плазмолизиса цитоплазмы. Трабекулярные сосуды полнокровны в просвете определяются сладж-комплексы, в части сосудов обнаруживается краевое стояние лейкоцитов с явлениями лейкодиапедеза. Выражена экссудативная реакция в виде инфильтрации полиморфно-ядерными лейкоцитами трабекулярных структур. В ряде случаев в дольке железы определяется некроз не только ацинусов, но и эндокринного аппарата.

На первые сутки панкреонекроза с введением соединения «2-морфолино-5-фенил-6H-1,3,4-тиадиазин, гидробромид» очаг некроза представлен разрушенными ацинарными структурами и частично некрозом островкового аппарата в отдельных дольках. Выражена экссудативная реакция в трабекулах, полнокровие сосудов, диффузная инфильтрация полиморфно- ядерными лейкоцитами. В прилежащих структурах наблюдались явления отека, полнокровие сосудов с образованием сладж-комплексов.

На пятые сутки течения панкреонекроза без введения соединения определяется зона некроза в виде разрушенных структур нескольких долек паренхимы органа. Определяется деструкция стенки сосудов в соединительно-канных трабекулах. В прилегающих брыжейке и брюшине - диффузная лейкоцитарная инфильтрация с образованием абсцессов. Начальные признаки развития перитонита.

На пятые сутки панкреонекроза с введением соединения «2-морфолино-5-фенил-6H-1,3,4-тиадиазин, гидробромид» зона некроза окружена демаркационным валом, некротические массы пропитаны кровью, по периферии отмечается формирование грануляционной ткани с пролиферацией клеток фибропластического ряда, отмечается миграция иммунокомпетентных клеток - лимфоцитов, плазматических клеток, тучных клеток. В трабекулярных структурах определяется очаги гемосидероза.

На седьмые сутки течения панкреонекроза, без введения соединения, область повреждения замещена грануляционной тканью, представленной фибробластами, волокнистыми структурами, множественными капиллярами синусоидального типа. Грануляционная ткань инфильтрирована лимфоцитами небольшим количеством полиморфно-ядерных лейкоцитов, отмечается миграция тучных клеток. В клетчатке сальника определяются стеатонекрозы, часть из них с признаками организации. Выражена макрофагальная реакция. В прилегающих брыжейке и брюшине - диффузная лейкоцитарная инфильтрация с образованием абсцессов, имеются признаки перитонита.

На седьмые сутки течения панкреонекроза, с введением соединения «2-морфолино-5-фенил-6H-1,3,4-тиадиазин, гидробромид», отмечено, что имеется фаза организации - зона некроза замещена рубцовой тканью, представленной функционально активными фибробластами, волокнистыми структурами, выражена макрофагальная реакция, гемокапилляров значительно меньше (т.е. ткань более зрелая). Отмечается пролиферация протоковых структур.

Из представленного материала видно, что введение соединения «2-морфолино-5-фенил-6H-1,3,4-тиадиазин, гидробромид» влияет на формирование более благоприятной морфофункциональной картины в паренхиме поджелудочной железы животных с экспериментальным панкреонекрозом, уже на пятые сутки отмечается стихание явлений деструктивного воспаления вокруг очагов некроза поджелудочной железы, а на седьмые сутки за счет активизации регенерационных процессов происходит пролиферация протоковых структур поджелудочной железы и замещение очагов некроза, без фазы гнойного некролизиса, грануляционной и рубцовой тканью. Наиболее ярким показателем, указывающим на высокую эффективность применения соединения при экспериментальном панкреонекрозе, является снижение летальности в два раза.

Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть использовано для разработки медикаментозного лечения острого панкреонекроза с последующим наблюдением за его эффективностью с помощью гистологического исследования. Для этого проводят моделирование панкреонекроза у животных. Затем выполняют внутривенное введение соединения «2-морфолино-5-фенил-6Н-1,3,4-тиадиазин, гидробромид» из класса 1,3,4-тиадиазинов в дозировке 40 мг/кг. Способ обеспечивает эффективное лечение панкреонекроза, в т.ч. за счет купирования острой фазы системной воспалительной реакции, увеличивая вероятность излечения от этого заболевания, и уменьшение летальности.

Способ лечения экспериментального панкреонекроза, основанный на моделировании экспериментального панкреонекроза с последующим медикаментозным вмешательством, отличающийся тем, что выполняют внутривенное введение соединения «2-морфолино-5-фенил-6H-1,3,4-тиадиазин, гидробромид» из класса 1,3,4-тиадиазинов в дозе 40 мг/кг после создания модели панкреонекроза с последующим проведением гистологического исследования ткани поджелудочной железы.