СПОСОБ СОЗДАНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ МОДЕЛИ ПАНКРЕОНЕКРОЗА У КРЫС Российский патент 2010 года по МПК G09B23/28 

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной форме острого панкреатита, и может быть использовано для моделирования острого деструктивного панкреатита.

Острый панкреатит относится к числу наиболее частых нозологических форм и составляет 3% случаев среди ургентных заболеваний органов брюшной полости. Несмотря на большое количество различных оперативных и консервативных методов лечения смертность при остром панкреатите продолжает оставаться высокой -10-15%, достигая 30-40% при деструктивных формах.

Высокая летальность диктует необходимость разработки новых методов лечения этого тяжелого заболевания. Испытания новых лекарственных препаратов проводятся на большом количестве экспериментальных животных с острым панкреатитом, но требуется достаточно простая и в то же время достаточно надежная операция получения этого заболевания на подопытных животных.

Моделирование острого деструктивного панкреатита на крысах, по нашему мнению, является наиболее обоснованным, т.к. эти лабораторные животные имеют схожую с человеком пищеварительную систему, также питаются тканями органического происхождения, не требуют больших затрат на закупку и содержание.

Известен способ моделирования острого деструктивного панкреатита у крыс, включающий введение в общий желчный проток соли желчных кислот, отличающийся тем, что в общий желчный проток вводят 0,3 мл буферного раствора, содержащего 0,3 г трис-гидроксиметил-аминометана и 0,6 г дезоксихолата натрия в 100 мл с рН 8,8, со скоростью потока 0,07 мл в минуту, и регулируют площадь панкреонекроза наложением лигатур выше или ниже места впадения дополнительного протока поджелудочной железы в общий желчный проток, см. патент РФ №2236709.

Известен способ моделирования острого некротического панкреатита, включающий деструкцию ткани поджелудочной железы крыс тритоном Х-100, отличающийся тем, что в поджелудочную железу взрослой крысы вводят дозу 0,2 мл комплекса, состоящего из 1%-ного водного раствора тритона Х-100 и 10%-ного водного раствора аминокислоты лизина, взятых в равных объемах, получая в течение 24-72 ч сформированный панкреонекроз, см. патент РФ №2286608.

Недостатками этих способов является их фармакологическая направленность, а это не всегда даст положительный результат в силу различных индивидуальностей каждой подопытной крысы, кроме того они достаточно сложны, т.к. надо строго выдерживать скорости вводимых потоков.

Известен способ по К.Heinkel (1953) и De D Carvalnho (1959), в котором вызывали геморрагический панкреатит у крыс путем временного пережатия желчного протока и введения трансдуоденально через фатеров сосок под минимальным давлением 0,6 мл 2% раствора таухлората натрия или 1 мг трипсина в 0,6 мл физиологического раствора или в таком же объеме 1 мг энтерокиназы и оливкового масла, см. Сыновец А.С., Левицкий А.П., Мичурин В.Ф. Экспериментальный острый панкреатит (обзор литературы). // Журнал "Патологическая физиология". - 1980. - №1 - с.41-46.

Недостатки способа - большая сложность методики, а именно:

- требует вскрытия просвета двенадцатиперстной кишки и канюляции большого дуоденального сосочка;

- инфицирование брюшной полости содержимым желудочно-кишечного тракта;

- высокий процент несостоятельности швов на кишке;

- длительность операции;

- требует наличия операционной лупы или операционного микроскопа.

Известен способ, в котором под наркозом после верхней срединной лапаротомии в паранефрон, клетчатку паховых областей и брыжейку тонкой кишки вводят 0,25% раствор новокаина общим объемом 1,0 мл. В рану выводят двенадцатиперстную кишку (ДПК) со связанной с ней протоковой системой частью поджелудочной железы (ПЖ). На переднюю поверхность контакта протокового отдела ПЖ и ДПК укладывают микроирригатор с леской в просвете (турникет), концы которой у верхнего и нижнего краев контакта органов через проколы дорзальной стенки живота выводят наружу. ПЖ и ДПК возвращают в исходное положение. Под визуальным контролем перекрывают протоковую систему ПЖ подтягиванием концов микроирригатора. Брюшную полость орошают 0,25% р-ром новокаина, осушают. Контроль гемостаза. Брюшную полость ушивают послойно наглухо. Через 60 минут из просвета микроирригатора извлекают леску, восстанавливая проходимость протоковой системы ПЖ. Перфорированный микроирригатор используется как для подведения, так для отведения лекарственных веществ и растворов. Если в этом нет необходимости, то последний может быть извлечен вместе с леской - ПРОТОТИП, см. Луговой А.О., Заринская С.А., Владимиров В.Г., Попова Е.Ю., Былова Н.А. «Моделирование острого деструктивного панкреатита в эксперименте», Электронный научный журнал «Морфология», 2007, том 1-2. www.morphology.dp.ua.

Способ не требует дорогостоящего оборудования и материалов. Способ не сопровождается вскрытием просвета двенадцатиперстной кишки и канюляцией большого дуоденального сосочка.

Недостатки способа следующие:

- не выполняется трансиллюминация брыжейки двенадцатиперстной кишки, т.е. сложность в нахождении вирсунгова протока поджелудочной железы;

- необходимость в использовании микроирригатора для проведения нити, что повышает травматичность брыжейки двенадцатиперстной кишки, резко увеличивает риск кровотечения из-за повреждения сосудов;

- выведение микроирригатора на дорзальную стенку брюшной полости повышает риск повреждения забрюшинных сосудов и почки с мочеточниками, а также вызывает пережатие портальной вены;

- нет пережатия краевого сосуда двенадцатиперстной кишки, что позволяет говорить об использовании только одного механизма формирования панкреонекроза, что снижает процент удачных результатов воспроизведения модели данного заболевания.

Технической задачей изобретения является повышение вероятности удачной повторяемости результатов воспроизведения модели данного заболевания.

Для решения поставленной задачи предлагается «Способ создания экспериментальной модели панкреонекроза у крыс», основанный на хирургическом вмешательстве, отличающийся тем, что у подопытного животного, например крысы, выполняют верхнюю срединную лапаротомию длиной 2,0-2,5 см, в полученную рану выводят желудок и двенадцатиперстную кишку вместе с поджелудочной железой, затем путем трансиллюминации визуализируют вирсунгов проток поджелудочной железы, после чего под контролем зрения производят изолированную перевязку вирсунгова протока поджелудочной железы; в зависимости от необходимости получения тотального или очагового панкреонекроза место перевязки вирсунгова протока варьируют от дистальной до проксимальной части; после чего ушивают лапаротомную рану; перевязка вирсунгова протока производят при помощи атраматичной нити номеров 10/0 или 8/0; выживаемость подопытных животных после проведенной операции составляет не менее 3-х суток при отсутствии медикаментозного вмешательства; время протекания болезни после операции составляет 7 и более суток, а это позволяет применять для апробации новые лекарственные формы; продолжительность операции составляет 10-15 минут.

Таким образом, данный способ позволяет:

- минимизировать время операции;

- получать высокий достоверный результат операций при минимальной гибели подопытных животных, т.е. высокая повторяемость положительных результатов;

- техническая простота и доступность операций;

- возможность протекания моделируемого заболевания в течение длительного времени до 7 и более суток, что дает возможность медикаментозного вмешательства и испытания новых лекарственных форм и препаратов для лечения и изучения их влияния.

Следует отметить, что предлагаемый способ соответствует основному экономическому постулату: «стоимость - эффективность» и значительно превышает по этому показателю все известные другие способы.

Результаты моделирования

Крыса №1:

Макро: Брыжейка двенадцатиперстной кишки, которая утолщена, с множественными очагами белесоватой окраски на всем протяжении, также имеются локусы кровоизлияний диаметром до 0,2-0,4 см, темно-коричневого цвета.

Микро: Зона некроза занимает все паренхиматозные участки органа, в виде деструкции экзокринных и эндокринных структур поджелудочной железы. Некротические массы с диффузной умеренной лейкоцитарной инфильтрацией.

Стенка трабекулярных сосудов сохранена с признаками плазматического пропитывания, в части сосудов определяется краевое стояние лейкоцитов.

Крыса №2:

Макро: Брыжейка двенадцатиперстной кишки, которая значительно утолщена в дистальной части, с очагами белесоватой окраски - стеатонекрозы, там же три очага кровоизлияния диаметром до 0,3 см, темно-коричневого цвета.

Микро: Зона некроза представлена очагами деструкции паренхимы поджелудочной железы, с гибелью экзокринных структур и островкового аппарата. В перифокальной области трабекулярные сосуды полнокровны, определяются очаговые кровоизлияния, выражена лимфо-лейкоцитарная инфильтрация.

Крыса №3:

Макро: Брыжейка двенадцатиперстной кишки, которая утолщена на площади 1 -1,5 см, с двумя очагами белесоватой окраски и единичным кровоизлиянием диаметром до 0,4 см, темно-коричневого цвета.

Микро: Зона некроза представлена мелкими очагами деструкции ткани поджелудочной железы, с гибелью экзокринных структур и островкового аппарата. В области некротических изменений обнаруживается диффузная лейкоцитарная инфильтрация, трабекулярные сосуды полнокровны, в части сосудов определяется краевое стояние лейкоцитов и лейкодиапедез.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к экспериментальной гастроэнтерологии, и может быть использовано для моделирования панкреатита. Для этого у подопытного животного выполняют верхнюю срединную лапаротомию длиной 2,0-2,5 см. В полученную рану выводят желудок и двенадцатиперстную кишку вместе с поджелудочной железой. Затем путем трансиллюминации визуализируют вирсунгов проток поджелудочной железы. После чего под контролем зрения производят изолированную перевязку вирсунгова протока поджелудочной железы. В зависимости от необходимости получения тотального или очагового панкреонекроза место перевязки вирсунгова протока варьируют от дистальной до проксимальной части. После чего ушивают лапаротомную рану. При этом выживаемость подопытных животных после проведенной операции составляет не менее 3-х суток при отсутствии медикаментозного вмешательства. Способ обеспечивает адекватное воспроизведение модели.

1. Способ создания экспериментальной модели панкреонекроза у крыс, основанный на хирургическом вмешательстве, отличающийся тем, что у подопытного животного выполняют верхнюю срединную лапаротомию длиной 2,0-2,5 см, в полученную рану выводят желудок и двенадцатиперстную кишку вместе с поджелудочной железой, затем путем трансиллюминации визуализируют вирсунгов проток поджелудочной железы, после чего под контролем зрения производят изолированную перевязку вирсунгова протока поджелудочной железы; в зависимости от необходимости получения тотального или очагового панкреонекроза место перевязки вирсунгова протока варьируют от дистальной до проксимальной части, после чего ушивают лапаротомную рану.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что перевязку вирсунгова протока производят при помощи атравматичной иглы.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что выживаемость подопытных животных после проведенной операции составляет не менее 3 суток при отсутствии медикаментозного вмешательства.