Показать метаданные Скрыть метаданные

(19)

(11)

2 532 222

(13)

(51)

МПК

C07K14/775(2006-01-01)

A61K38/16(2006-01-01)

A61P9/00(2006-01-01)

A61P7/00(2006-01-01)

(21) (22)

Заявка

2011138011/10, 2010-02-12

(24)

Дата начала отсчета патента

2010-02-12

(22)

дата подачи заявки

2010-02-12

(45)

опубликовано

2014-10-27

(72)

авторы

Дассе,Жан-ЛуиШвендеман,Анна,ШендероваЧжу,Линюй

(73)

патентообладатели

Серенис Терапьютикс Холдинг С.А,

(56)

Документы, цитированные в отчете о поиске

WO 9916409 A2, 08.04.1999COPELAND T.Det al, Substitution of proline with pipecolic acid at the scissile bond converts a peptide substrate of HIV proteinase into a selective inhibitor, Biochem Biophys Res Commun, 1990, vHATANO Met al., Properties of a toxic phospholipids in the northern

МИМЕТИКИ АПОЛИПОПРОТЕИНА А-I Российский патент 2014 года по МПК C07K14/775 A61K38/16 A61P9/00 A61P7/00

Описание патента на изобретение RU2532222C2

Перекрестная ссылка на родственные заявки

В настоящей заявке заявлен приоритет, соответствующий дате приоритета по предварительным заявкам США с серийными № 61/152962, поданной 16 февраля 2009, 61/152966, поданной 16 февраля 2009, и 61/152960, поданной 16 февраля 2009, полное содержание которых включено в настоящее описание в виде ссылки.

Область изобретения

Настоящее изобретение связано с пептидами, содержащими их композициями и способами лечения или предупреждение дислипидемии, сердечно-сосудистого заболевания, эндотелиальной дисфункции, макрососудистого расстройства или микрососудистого расстройства.

Предшествующий уровень техники

Холестерин, циркулирующий в организме человека, переносится липопротеинами плазмы, которые являются частицами комплексной липидной и белковой композиции, которые осуществляют транспорт липидов в крови. Двумя типами липопротеинов плазмы, которые переносят холестерин, являются липопротеины низкой плотности ("ЛПНП") и липопротеины высокой плотности ("ЛПВП"). Считается, что ЛПНП ответственны за доставку холестерина из печени (где он синтезируется или куда доставляется из пищевых источников) к тканям организма, находящимся вне пределов печени. С другой стороны, считается, что ЛПВП способствуют транспорту холестерина из внепеченочных тканей в печень, где холестерин катаболизируется и подвергается элиминации. Такой транспорт холестерина из внепеченочных тканей в печень называется "обратным транспортом холестерина".

Путь обратного транспорта холестерина ("RCT") имеет три основных стадии: (i) выход холестерина, то есть первоначальное удаление холестерина из различных пулов периферических клеток; (ii) этерификацию холестерина под действием лецитин-холестерин-ацилтрансферазы ("LCAT"), таким образом предотвращающую обратный вход вышедшего холестерина в клетку; и (iii) поглощение сложного эфира холестерина липопротеином высокой плотности и доставку комплекса сложного эфира холестерина с ЛПВП к клеткам печени.

Путь RCT опосредован частицами ЛПВП. Каждая частица ЛПВП имеет липидный компонент и белковый компонент. Липидный компонент ЛПВП может быть фосфолипидом, холестерином (или сложным эфиром холестерина) или триглицеридом. Белковый компонент ЛПВП первоначально состоит из ApoA-I. ApoA-I синтезируется печенью и тонким кишечником в виде пре-про-аполипопротеина, который секретируется в виде про-протеина, который быстро расщепляется с получением зрелого полипептида, имеющего 243 аминокислотных остатка. ApoA-I первоначально состоит из 6-8 различных повторяющихся элементов, состоящих из 22 аминокислотных остатков, пространственно разделенных линкерным фрагментом, которым часто служит пролин, а в некоторых случаях он образован несколькими остатками. ApoA-I образует три типа стабильных комплексов с липидами: малые, обедненные липидами комплексы, так называемые ЛПВП пре-β-1; уплощенные дискообразные частицы, содержащие полярные липиды (фосфолипид и холестерин), так называемые ЛПВП пре-β-2; и сферические частицы, содержащие как полярные, так и неполярные липиды, так называемые сферические или зрелые ЛПВП (ЛПВП₃ и ЛПВП₂).

Были сделаны попытки рекомбинантного продуцирования и введения ApoA-I пациентам с целью защиты от атеросклеротического заболевания. Однако с продуцированием и применением ApoA-I связано множество трудностей, что делает его менее чем идеальным в качестве лекарственного средства; например, ApoA-I является крупным белком, который трудно и дорого производить, и надо будет обойти значительные трудности, связанные с проблемами производства и воспроизведения, в том, что касается стабильности в процессе хранения, доставки активного продукта и времени полужизни in vivo.

С учетом указанных недостатков, были сделаны попытки получения пептидов, которые имитируют активность ApoA-I in vivo. В данной области есть потребность в разработке дополнительных пептидов, которые могли бы имитировать активность ApoA-I in vivo, продукция которых была бы простой и оправданной в отношении расходов.

Краткое описание изобретения

В одном из воплощений настоящее изобретение связано с пептидами, содержащими от 22 до 29 остатков, имеющими формулу I:

R¹-Y¹-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸-X⁹-X¹⁰-X¹¹-X¹²-X¹³-X¹⁴-X¹⁵-X¹⁶-X¹⁷-X¹⁸-X¹⁹-X²⁰-X²¹-X²²-X²³-Y²-R²

Формула I

и их фармацевтически приемлемыми солями, в которых

X¹отсутствует или является ахиральным, D- или L-основным аминокислотным остатком;

X²является ахиральным, D- или L-алифатическим аминокислотным остатком;

X³является ахиральным, D- или L-алифатическим аминокислотным остатком;

X⁴является ахиральным, D- или L-основным аминокислотным остатком;

X⁵представляет собой Gln, Asn, D-Gln, D-Asn или основный ахиральный аминокислотный остаток, D- или L-основный аминокислотный остаток;

X⁶является ахиральным, D- или L-основным аминокислотным остатком;

X⁷является ахиральным, D- или L-гидрофобным аминокислотным остатком;

X⁸является ахиральным, D- или L-гидрофобным аминокислотным остатком;

X⁹является ахиральным, D- или L-гидрофобным аминокислотным остатком;

X¹⁰представляет собой Leu, Trp, Gly, Nal, D-Leu, D-Trp или D-Nal;

X¹¹представляет собой Gly или ахиральный, D- или L-алифатический аминокислотный остаток;

X¹²является ахиральным, D- или L-гидрофильным аминокислотным остатком;

X¹³является ахиральным, D- или L-гидрофильным аминокислотным остатком;

X¹⁴представляет собой Leu, Trp, Gly, D-Leu или D-Trp;

X¹⁵представляет собой Leu, Gly или D-Leu;

X¹⁶является ахиральным, D- или L-кислым аминокислотным остатком;

X¹⁷является ахиральным, D- или L-гидрофильным аминокислотным остатком;

X¹⁸ представляет собой Leu, Phe, D-Leu или D-Phe;

X¹⁹ представляет собой Leu, Phe, D-Leu или D-Phe;

X²⁰является ахиральным, D- или L-кислым аминокислотным остатком;

X²¹ представляет собой Leu, Phe, D-Leu или D-Phe;

X²²является ахиральным, D- или L-алифатическим аминокислотным остатком; и

X²³ представляет собой Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip или D-Pip;

Y¹ отсутствует или является аминокислотной последовательностью, содержащей от 1 до 7 остатков;

Y² отсутствует или является аминокислотной последовательностью, содержащей от 1 до 7 остатков;

R¹ представляет собой H или аминозащитную группу;

R² представляет собой OH или карбоксильную защитную группу; при этом

a) каждый хиральный аминокислотный остаток является L-аминокислотным остатком;

b) каждый хиральный аминокислотный остаток является D- аминокислотным остатком;

c) каждый хиральный аминокислотный остаток является L-аминокислотным остатком, за исключением того, что один или более из каждых хиральных концевых аминокислотных остатков и каждых хиральных аминокислотных остатков, непосредственно к ним примыкающих, является D-аминокислотным остатком; или

d) каждый хиральный аминокислотный остаток является D- аминокислотным остатком, за исключением того, что один или более из каждых хиральных концевых аминокислотных остатков и каждых хиральных аминокислотных остатков, непосредственно к ним примыкающих, является L-аминокислотным остатком.

В другом воплощении настоящее изобретение связано с пептидами, содержащими от 15 до 22 остатков, имеющими следующую формулу II:

R¹-Y¹-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸-X⁹-X¹⁰-X¹¹-X¹²-X¹³-X¹⁴-X¹⁵-X¹⁶-X¹⁷-X¹⁸-Y²-R²

Формула II

и их фармацевтически приемлемыми солями, в которых

X¹является ахиральным, D- или L-основным аминокислотным остатком;

X²представляет собой Leu или D-Leu;

X³является ахиральным, D- или L-основным аминокислотным остатком;

X⁴представляет собой Gln, Asn, D-Gln или D-Asn;

X⁵представляет собой Leu, D-Leu или ахиральный, D- или L-основный аминокислотный остаток;

X⁶представляет собой Leu, Trp, Phe, D-Leu, D-Trp или D-Phe;

X⁷является ахиральным, D- или L-кислым аминокислотным остатком;

X⁸представляет собой Asn, D-Asn или является ахиральным, D-или L-кислым аминокислотным остатком;

X⁹представляет собой Leu, Trp, D-Leu или D-Trp;

X¹⁰представляет собой Leu, Trp, D-Leu или D-Trp;

X¹¹представляет собой ахиральный, D- или L-кислый аминокислотный остаток;

X¹²является ахиральным, D- или L-основным аминокислотным остатком;

X¹³представляет собой Leu, Phe, D-Leu или D-Phe;

X¹⁴представляет собой Leu, Phe, D-Leu или D-Phe;

X¹⁵является ахиральным, D- или L-кислым аминокислотным остатком;

X¹⁶представляет собой Leu или D-Leu;

X¹⁷является ахиральным, D- или L-алифатическим аминокислотным остатком;

X¹⁸ представляет собой Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip или D-Pip;

Y¹ отсутствует или является аминокислотной последовательностью, содержащей от 1 до 4 остатков;

Y² отсутствует;

R¹ представляет собой H или аминозащитную группу;

R² представляет собой OH или карбоксильную защитную группу;

причем от нуля до трех остатков от X¹до X¹⁷отсутствуют; и при этом

a) каждый хиральный аминокислотный остаток является L-аминокислотным остатком;

b) каждый хиральный аминокислотный остаток является D- аминокислотным остатком;

d) каждый хиральный аминокислотный остаток является D-аминокислотным остатком, за исключением того, что один или более из каждых хиральных концевых аминокислотных остатков и каждых хиральных аминокислотных остатков, непосредственно к ним примыкающих, является L-аминокислотным остатком.

В другом воплощении настоящее изобретение связано с пептидами, содержащими от 22 до 29 остатков, имеющими формулу III:

R¹-Y¹-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸-X⁹-X¹⁰-X¹¹-X¹²-X¹³-X¹⁴-X¹⁵-X¹⁶-X¹⁷-X¹⁸-X¹⁹-X²⁰-X²¹-X²²-X²³-Y²-R²

Формула III

и их фармацевтически приемлемыми солями, в которых

X¹отсутствует или является ахиральным, D- или L-основным аминокислотным остатком;

X²является ахиральным, D- или L-основным аминокислотным остатком;

X³представляет собой Leu или D-Leu;

X⁴является ахиральным, D- или L-основным аминокислотным остатком;

X⁵является ахиральным, D- или L-основным аминокислотным остатком;

X⁶представляет собой Gln, Asn, D-Gln или D-Asn;

X⁷представляет собой Leu или D-Leu;

X⁸представляет собойAla или D-Ala;

X⁹представляет собойAsp или D-Asp;

X¹⁰ представляет собойLeu, Phe, Gly, D-Leu или D-Phe;

X¹¹ представляет собой Gly, Leu или D-Leu;

X¹² представляет собой Arg или D-Arg;

X¹³является ахиральным, D- или L-кислым аминокислотным остатком;

X¹⁴представляет собой Leu, Trp, Gly, D-Leu или D-Trp;

X¹⁵представляет собой Leu или D-Leu;

X¹⁶представляет собой Gln или D-Gln;

X¹⁷представляет собой Glu, Leu, D-Glu или D-Leu;

X¹⁸представляет собой Leu, Phe, D-Leu или D-Phe;

X¹⁹ является ахиральным, D- или L-алифатическим аминокислотным остатком;

X²⁰представляет собой Glu или D-Glu;

X²¹ представляет собой Leu, Phe, D-Leu или D-Phe;

X²²является ахиральным, D- или L-алифатическим аминокислотным остатком;

X²³ представляет собой Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip или D-Pip;

Y¹ отсутствует или является аминокислотной последовательностью, содержащей от 1 до 7 остатков;

Y² отсутствует или является аминокислотной последовательностью, содержащей от 1 до 7 остатков;

R¹ представляет собой H или аминозащитную группу;

R² представляет собой OH или карбоксильную защитную группу; при этом

a) каждый хиральный аминокислотный остаток является L-аминокислотным остатком;

b) каждый хиральный аминокислотный остаток является D-аминокислотным остатком;

d) каждый хиральный аминокислотный остаток является D-аминокислотным остатком, за исключением того, что один или более из каждых хиральных концевых аминокислотных остатков и каждых хиральных аминокислотных остатков, непосредственно к ним примыкающих, является L-аминокислотным остатком.

Пептид формулы I, II или III, или его фармацевтически приемлемая соль ("миметик ApoA-I") применимы для лечения или предупреждения дислипидемии, сердечно-сосудистого заболевания, эндотелиальной дисфункции, макрососудистого расстройства или микрососудистого расстройства (каждое из которых является "Состоянием").

В другом воплощении настоящее изобретение связано с композициями, содержащими эффективное количество миметика ApoA-I и фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель.

В другом воплощении настоящее изобретение связано со способами лечения или предупреждения состояния, предусматривающими введение в случае необходимости эффективного количества миметика ApoA-I млекопитающему.

Краткое описание графического материала

Фиг.1A представляет собой диаграмму Шиффера и Эдмундсона «helical wheel» (диаграмма «Спиральные колеса») идеализированной амфипатической α-спирали, в которой полыми кружочками обозначены гидрофильные аминокислотные остатки, а заполненными кружочками обозначены гидрофобные аминокислотные остатки.

Фиг.1В представляет собой схему-диаграмму спиральной сетки («helical net») идеализированной амфипатической спирали, изображенной на фиг.1A.

Фиг.1С представляет собой цилиндрическую диаграмму амфипатической спирали, изображенной на фиг.1A.

Фиг.2 представляет собой диаграмму Шиффера и Эдмундсона «helical wheel» 22-мерного консенсусного пептида Сегреста (SEQ ID NO:1).

На фиг.3A проиллюстрирована разветвленная сеть миметиков ApoA-I третьего порядка.

На фиг.3B проиллюстрирована разветвленная сеть миметиков ApoA-I четвертого порядка.

На фиг.3C проиллюстрирована разветвленная сеть миметиков ApoA-I смешанного порядка.

На фиг.3D проиллюстрированы примеры разветвленных сетей "Lys-tree" миметиков ApoA-I.

Фиг.4A представляет собой динамическое изображение различных состояний агрегации и пептид-липидных комплексов, которые могут быть получены с помощью миметиков ApoA-I согласно изобретению. Слева: процесс мультимеризации пептидов, происходящий в результате взаимодействия нескольких пептидных спиралей и ведущий к образованию олигомеров в условиях с определенной концентрацией пептида, значениями pH и ионной силы. В центре: взаимодействие миметиков ApoA-I (в любом из указанных состояний агрегации) с липидными компонентами (например, малыми униламеллярными везикулами ("SUV", small unilamellar vesicles)) приводит к реорганизации липидов. Справа: путем изменения липид-пептидного молярного отношения можно получить различные типы пептид-липидных комплексов, от липид-пептидных комицелл при низких липид-пептидных соотношениях до дискообразных частиц и, наконец, до крупных мультиламеллярных комплексов при все более возрастающих липид-пептидных соотношениях.

На фиг.4B проиллюстрирована общепринятая модель дискообразных комплексов миметик ApoA-I-липид, образуемых в определенном интервале соотношений миметик ApoA-I-липид. Каждый миметик ApoA-I, окружающий каемку диска, находится в тесном контакте с двумя своими ближайшими соседями.

Фиг.5 представляет собой репрезентативную хроматограмму проникновения в гель пептид 16/липидного комплекса (липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC (дипальмитоилфосфатидилхолин) и DPPG (дипальмитоилфосфатидилглицерин)).

Фиг.6 представляет собой кривую повышения, над исходным уровнем, фракции ЛПВП общего холестерина после введения пептид 16/липидного комплекса (липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG, и указанные компоненты присутствуют в весовом соотношении пептид 16:сфингомиелин:DPPC:DPPG как 1:1,35:1,35:0,30) кроликам.

Фиг.7 представляет собой кривую повышения фракции ЛПВП свободного холестерина после введения пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) кроликам.

Фиг.8 представляет собой профиль элюции гельпроникающей хроматографии на исходном уровне (темная линия) и через 20 мин после введения 2,5 мг/кг пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) кроликам.

Фиг.9 представляет собой кривую повышения уровня фосфолипида в плазме после введения пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) кроликам на голодный желудок в дозах 0 (квадратики), 10 (треугольники), 20 (кружочки) или 30 (ромбики) мг/кг. Через различные промежутки времени после введения дозы измеряли уровни фосфолипида в плазме. Исходные значения (варьирующие от 0,96 до 1,18 г/л для указанных четырех групп) вычитали для того, чтобы определить степень повышения уровней фосфолипида в плазме. Брали по 3 животных на группу. К 30-34-часовому сроку после введения дозы указанные уровни возвращались к значениям, равным или меньшим, чем исходный уровень.

Фиг.10A представляет собой кривую повышения уровня общего холестерина в плазме после инфузии пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) кроликам на голодный желудок в дозах 0 (квадратики), 10 (треугольники), 20 (кружочки) или 30 (ромбики) мг/кг. Через различные промежутки времени после введения дозы измеряли уровни общего холестерина в плазме. Исходные значения вычитали для того, чтобы определить степень повышения уровней холестерина в плазме. Исходные значения варьировали от 0,59 до 0,77 г/л. Брали по 3 животных на группу. К 30-34-часовому сроку после введения дозы указанные уровни возвращались к значениям, меньшим, чем исходный уровень, или равным ему.

Фиг.10B представляет собой кривую повышения уровня свободного холестерина в плазме после инфузии пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) кроликам на голодный желудок в дозах 0 (квадратики), 10 (треугольники), 20 (кружочки) или 30 (ромбики) мг/кг. Через различные промежутки времени после введения дозы измеряли уровни свободного холестерина в плазме. Исходные значения вычитали для того, чтобы определить степень повышения уровней холестерина в плазме. Исходные значения варьировали от 0,21 до 0,27 г/л. Брали по 3 животных на группу. К 30-34-часовому сроку после введения дозы указанные уровни возвращались к значениям, меньшим, чем исходный уровень, или равным ему.

Фиг.10C представляет собой кривую повышения уровня этерифицированного холестерина в плазме после инфузии пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) кроликам на голодный желудок в дозах 0 (квадратики), 10 (треугольники), 20 (кружочки) или 30 (ромбики) мг/кг. Через различные промежутки времени после введения дозы измеряли уровни этерифицированного холестерина в плазме. Исходные значения вычитали для того, чтобы определить степень повышения уровней холестерина. Исходные значения варьировали от 0,39 до 0,52 г/л. Брали по 3 животных на группу. К 30-34-часовому сроку после введения дозы указанные уровни возвращались к значениям, меньшим, чем исходный уровень, или равным ему.

Фиг.11A представляет собой кривую повышения уровня общего холестерина ЛПВП в плазме после инфузии пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) кроликам на голодный желудок в дозах 0 (квадратики), 10 (треугольники), 20 (кружочки) или 30 (ромбики) мг/кг. Через различные промежутки времени после введения дозы измеряли уровни общего холестерина ЛПВП. Исходные значения вычитали для того, чтобы определить степень повышения уровней холестерина. Исходные значения общего холестерина ЛПВП варьировали от 0,33 до 0,38 г/л. Брали по 3 животных на группу. К 30-34-часовому сроку после введения дозы указанные уровни возвращались к значениям, меньшим, чем исходный уровень, или равным ему.

Фиг.11B представляет собой кривую повышения уровня свободного холестерина ЛПВП в плазме после инфузии пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) кроликам на голодный желудок в дозах 0 (квадратики), 10 (треугольники), 20 (кружочки) или 30 (ромбики) мг/кг. Через различные промежутки времени после введения дозы измеряли уровни свободного холестерина ЛПВП. Исходные значения вычитали для того, чтобы определить степень повышения уровней холестерина. Исходные значения свободного холестерина ЛПВП варьировали от 0,11 до 0,13 г/л. Брали по 3 животных на группу. К 30-34-часовому сроку после введения дозы указанные уровни возвращались к значениям, меньшим, чем исходный уровень, или равным ему.

Фиг.11C представляет собой кривую повышения уровня общего холестерина ЛПВП в плазме после инфузии пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) кроликам на голодный желудок в дозах 0 (квадратики), 10 (треугольники), 20 (кружочки) или 30 (ромбики) мг/кг. Через различные промежутки времени после введения дозы измеряли уровни общего холестерина ЛПВП. Исходные значения вычитали для того, чтобы определить степень повышения уровней холестерина. Исходные значения общего холестерина ЛПВП варьировали от 0,17 до 0,33 г/л. Брали по 3 животных на группу. К 30-34-часовому сроку после введения дозы указанные уровни возвращались к значениям, меньшим, чем исходный уровень, или равным ему.

Фиг.11D представляет собой кривую повышения уровня свободного холестерина ЛПВП после инфузии пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) кроликам на голодный желудок в дозах 0 (квадратики), 10 (треугольники), 20 (кружочки) или 30 (ромбики) мг/кг. Через различные промежутки времени после введения дозы измеряли уровни свободного холестерина ЛПВП. Исходные значения вычитали для того, чтобы определить степень повышения уровней холестерина. Исходные значения свободного холестерина ЛПВП варьировали от 0,06 до 0,11 г/л. Брали по 3 животных на группу. К 30-34-часовому сроку после введения дозы указанные уровни возвращались к значениям, меньшим, чем исходный уровень, или равным ему.

Фиг.11E представляет собой кривую повышения уровня общего холестерина ЛПВП после инфузии пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) кроликам на голодный желудок в дозах 0 (квадратики), 10 (треугольники), 20 (кружочки) или 30 (ромбики) мг/кг. Через различные промежутки времени после введения дозы измеряли уровни общего холестерина ЛПВП. Исходные значения вычитали для того, чтобы определить степень повышения уровней холестерина. Исходные значения свободного холестерина ЛПВП варьировали от 0,04 до 0,11 г/л. Брали по 3 животных на группу. К 30-34-часовому сроку после введения дозы указанные уровни возвращались к значениям, меньшим, чем исходный уровень, или равным ему.

Фиг.11F представляет собой кривую повышения уровня свободного холестерина ЛПВП после инфузии пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) кроликам на голодный желудок в дозах 0 (квадратики), 10 (треугольники), 20 (кружочки) или 30 (ромбики) мг/кг. Через различные промежутки времени после введения дозы измеряли уровни свободного холестерина ЛПВП. Исходные значения вычитали для того, чтобы определить степень повышения уровней холестерина. Исходные значения свободного холестерина ЛПВП варьировали от 0,02 до 0,04 г/л. Брали по 3 животных на группу. К 30-34-часовому сроку после введения дозы указанные уровни возвращались к значениям, меньшим, чем исходный уровень, или равным ему.

Фиг.12 представляет собой кривую повышения уровня триглицеридов в плазме после инфузии пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) кроликам на голодный желудок в дозах 0 (квадратики), 10 (треугольники), 20 (кружочки) или 30 (ромбики) мг/кг. Через различные промежутки времени после введения дозы измеряли уровни триглицеридов в плазме. Исходные значения (варьировавшие от 0,40 до 0,80 г/л для указанных четырех групп) вычитали для того, чтобы определить степень повышения уровней триглицеридов в плазме. Брали по 3 животных на группу.

Фиг.13 представляет собой кривую повышения уровней свободного холестерина ЛПВП в плазме после инфузии пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) кроликам на голодный желудок в дозах 0 (квадратики), 2,5 (треугольники), 5 (кружочки) или 10 (ромбики) мг/кг. На исходном уровне и через 5, 20, 40, 60, 90 и 120 минут после инициации инфузии измеряли уровни свободного холестерина ЛПВП в плазме. Исходные значения вычитали для того, чтобы определить степень повышения уровней свободного холестерина ЛПВП в плазме. Брали по 4 животных на группу.

Фиг.14A представляет собой профиль элюции гельпроникающей ВЭЖХ-хроматографии на исходном уровне (темная линия) и через 20 мин после инфузии 2,5 мг/кг пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5). На оси Y отложено поглощение, полученное в результате непрерывного компьютерного анализа свободного холестерина липопротеиновых фракций, элюирующихся с колонки гельпроникающей ВЭЖХ-хроматографии. Пики слева направо соответствуют фракциям ЛПОНП, ЛПНП и ЛПВП.

Фиг.14B представляет собой профиль элюции гельпроникающей ВЭЖХ-хроматографии на исходном уровне (темная линия) и через 20 мин после инфузии 5,0 мг/кг пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5). На оси Y отложено поглощение, полученное в результате непрерывного компьютерного анализа свободного холестерина липопротеиновых фракций, элюирующихся с колонки гельпроникающей ВЭЖХ-хроматографии. Пики слева направо соответствуют фракциям ЛПОНП, ЛПНП и ЛПВП.

Фиг.15 представляет собой кривую повышения уровней свободного холестерина ЛПВП в плазме после инфузии пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) кроликам на голодный желудок в дозе 20 мг/кг со скоростью 1 мл/мин (треугольники) или 0,2 мл/мин (ромбики). Через различные промежутки времени после введения дозы измеряли уровни свободного холестерина ЛПВП в плазме. Исходные значения вычитали для того, чтобы определить степень повышения уровней свободного холестерина ЛПВП в плазме. Брали по 4 животных на группу, обрабатываемую пептид 16/липидным комплексом, и по 2 животных на группу, обрабатываемую наполнителем.

На фиг.16 проиллюстрированы кривые кинетических профилей пептида 16 (верхние панели), свободного холестерина (средние панели) и фосфолипида (нижние панели) у самцов и самок крыс после введения первой дозы пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) на день 0. Снижение уровней пептида 16 и фосфолипида в плазме со временем указывает на клиренс пептид 16/липидного комплекса. Представлены кинетики свободного холестерина. Данные в каждой точке представляют собой среднее ± SD (N=3 крысам/группу).

На фиг.17 проиллюстрированы кривые кинетических профилей пептида 16 (верхние панели), свободного холестерина (средние панели) и фосфолипида (нижние панели) у самцов и самок крыс после введения множественной дозы пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) на день 26. Указанные животные получали пептид 16/липидный комплекс через день в течение 4 недель. Снижение уровней пептида 16 и фосфолипида в плазме со временем указывает на клиренс пептид 16/липидного комплекса. Представлены кинетики свободного холестерина. Данные в каждой точке представляют собой среднее ± SD (N=3 крысам/группу).

На фиг.18 проиллюстрированы кривые кинетических профилей пептида 16 (верхние панели), свободного холестерина (средние панели) и фосфолипида (нижние панели) у самцов и самок макак-крабоедов после введения первой дозы пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) на день 0. Снижение уровней пептида 16 и фосфолипида в плазме со временем указывает на клиренс пептид 16/липидного комплекса. Представлены кинетики свободного холестерина. Данные в каждой точке представляют собой среднее ± SD (N=3 макакам/группу).

На фиг.19 проиллюстрированы кривые кинетических профилей пептида 16 (верхние панели), свободного холестерина (средние панели) и фосфолипида (нижние панели) у самцов и самок макак-крабоедов после введения множественной дозы пептид 16/липидного комплекса (указанные липиды представляют собой сфингомиелин, DPPC и DPPG в весовом соотношении 1:1,2125:1,2125:0,075, и весовое соотношение пептид:липид составляет 1:2,5) на день 26. Указанные животные получали пептид 16/липидный комплекс через день в течение 4 недель. Снижение уровней пептида 16 и фосфолипида в плазме со временем указывает на клиренс пептид 16/липидного комплекса. Представлены кинетики свободного холестерина. Данные в каждой точке представляют собой среднее ± SD (N=3 макакам/группу).

Фиг.20A представляет собой кривую, отражающую % возрастания, по сравнению с уровнем, наблюдавшимся перед введением дозы, суммарного холестерина плазмы у мышей C57B1/6J после обработки композицией A, B или C. В разных временных точках у животных последовательно отбирали пробы, по 6 животных/на группу.

Фиг.20B представляет собой кривую повышения уровней суммарного холестерина в плазме у мышей C57B1/6J после обработки композицией A, B или C. В разных временных точках у животных последовательно отбирали пробы, по 6 животных/на группу.

Фиг.21A представляет собой кривую, отражающую % возрастания, по сравнению с уровнем, наблюдавшимся перед введением дозы, этерифицированного холестерина у мышей C57B1/6J после обработки композицией A, B или C. В разных временных точках у животных последовательно отбирали пробы, по 6 животных/на группу.

Фиг.21B представляет собой кривую повышения уровней этерифицированного холестерина у мышей C57B1/6J после обработки композицией A, B или C. В разных временных точках у животных последовательно отбирали пробы, по 6 животных/на группу.

Подробное описание изобретения

I. Определения

Термин "приблизительно", который непосредственно предваряет числовое или количественное значение, означает, что указанное числовое или количественное значение имеет разброс величин, составляющий плюс или минус 10%. Например, "приблизительно 1:1" в диапазоне от 0,9:1 до 1,1:1.

Используемый здесь термин "алкил", если не оговорено иначе, относится к необязательно замещенному насыщенному углеводородному радикалу с разветвленной, прямой цепью или циклическому углеводородному радикалу. Типичными алкильными группами являются (C₁-C₆)-алкильные группы, которые включают в себя, но не ограничены перечисленным, метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, трет-бутил, пентил, изопентил, гексил и т.п. В определенных воплощениях алкильные группы представляют собой (C₁-C₄)-алкил. Если не оговорено иначе, алкил является незамещенным.

Используемый здесь термин "алкенил", если не оговорено иначе, относится к ненасыщенному углеводородному радикалу с разветвленной, прямой цепью или циклическому неароматическому углеводородному радикалу, имеющему одну или более углерод-углеродных двойных связей. Указанные одна или несколько двойных связей могут быть либо в цис-, либо в транс-конформации. Обычно алкенильные группы включают в себя, но не ограничены перечисленным, этенил, пропенил, изопропенил, бутенил, изобутенил, трет-бутенил, пентенил, гексенил и т.п. В определенных воплощениях алкенильная группа представляет собой (C₂-C₆)-алкенил.

Используемый здесь термин "алкинил", если не оговорено иначе, относится к ненасыщенному углеводородному радикалу с разветвленной или прямой цепью, имеющему по меньшей мере одну углерод-углеродную тройную связь. Обычно алкинильные группы включают в себя, но не ограничены перечисленным, этинил, пропинил, бутинил, изобутинил, пентинил, гексинил и т.п. В определенных воплощениях алкинильная группа представляет собой (C₂-C₆)-алкинил.

Используемый здесь термин "арил", если не оговорено иначе, относится к необязательно замещенной системе ароматических колец, в которых каждый атом внутри кольца представляет собой C, O, N или S, таким образом обслуживая гетероциклические ароматические кольца. Обычно арильные группы включают в себя, но не ограничены перечисленным, бензил, фенил, нафтил, антрацил, фуран, имидазол, индазол, индол, изохинолин, изотиазол, изоксазол, пиран, пиразин, пиразол, пиридазин, пиридин, пиримидин, пиррол, пирролизин, хиназолин, хинолин, хинолизин, хиноксалин, тиазол и тиофен. В определенных воплощениях арильная группа представляет собой (C₅-C₂₆-арил). В определенных воплощениях гетероарильная группа представляет собой 5-20-членный гетероарил. Если не оговорено иначе, арил является незамещенным.

Используемый здесь термин "аралкил", если не оговорено иначе, относится к алкильной группе, замещенной арильной группой.

Используемый здесь термин "замещенный алкил или арил", если не оговорено иначе, относится к алкильной или арильной группе, в которой один или несколько ее атомов водорода заменены другим заместителем. Типичные заместители включают в себя OR^a, -SR^a, -NR^aR^a, -NO₂, -CN, галоген, -SO₂R^a, -C(O)R^a, -C(O)OR^a и -C(O)NR^aR^a, где каждый R^aнезависимо является водородом, алкилом или арилом.

Используемый здесь термин "гидрофильная оболочка" если не оговорено иначе, относится к наружной поверхности спирали, имеющей в целом гидрофильный характер.

Используемый здесь термин "гидрофобная оболочка" если не оговорено иначе, относится к наружной поверхности пептида, имеющего в целом гидрофобный характер.

Здесь, когда речь идет о миметике ApoA-I, имеется в виду, что число концевых -NH₂-групп равно нулю, когда R¹ представляет собой аминозащитную группу, и равно 1, когда R¹ является H.

Здесь, когда речь идет о миметике ApoA-I, имеется в виду, что число концевых -COOH-групп равно нулю, когда R¹ представляет собой карбоксильную защитную группу, и равно 1, когда R¹ является OH.

Используемый здесь термин "млекопитающее", если не оговорено иначе, относится к человеку, мыши, крысе, морской свинке, собаке, кошке, лошади, корове, свинье или не принадлежащему человеческому роду примату, такому как обезьяна, шимпанзе или павиан. В одном из воплощений указанное млекопитающее является человеком.

Когда термин "эффективное количество" используется в связи с миметиком ApoA-I, он означает количество, которое эффективно для лечения или предупреждения какого-либо Состояния.

Используемый здесь термин "свободный холестерин ЛПВП" означает количество такого холестерина, который имеет свободную гидроксильную группу ("свободный холестерин"), которая содержится внутри частиц ЛПВП в сыворотке. Частицы ЛПВП могут образовываться из миметик ApoA-I/липидного комплекса.

Используемый здесь термин "суммарный холестерин ЛПВП" означает количество холестерина, который имеет гидроксильную группу, которая этерифицирована ("этерифицированный холестерин"), которая содержится внутри частиц ЛПВП в сыворотке. Частицы ЛПВП могут образовываться из миметик ApoA-I/липидного комплекса.

Используемый здесь термин "аминокислотный остаток", если не оговорено иначе, включает в себя генетически кодируемые аминокислотные остатки и генетически не кодируемые аминокислотные остатки.

Аббревиатуры, существующие для используемых здесь генетически кодируемых аминокислотных остатков, приведены ниже в таблице 1.

Таблица 1 Аминокислота Однобуквенная аббревиатура Трехбуквенная аббревиатура Аланин A Ala Аргинин R Arg Аспарагин N Asn Аспарагиновая кислота D Asp Цистеин C Cys Глутамин Q Gln Глутаминовая кислота E Glu Глицин G Gly Гистидин H His Изолейцин I Ile Лейцин L Leu Лизин K Lys Метионин M Met Фенилаланин F Phe Пролин P Pro Серин S Ser Треонин T Thr Триптофан W Trp Тирозин Y Tyr Валин V Val

Генетически не кодируемые аминокислотные остатки включают в себя, но не ограничены перечисленным, β-аланин (β-Ala); 2,3-диаминопропионовую кислоту (Dpr); нипекотиновую кислоту (Nip); пипеколиновую кислоту (Pip); орнитин (Orn); цитруллин (Cit); трет-бутилаланин (t-BuA); 2-трет-бутилглицин (t-BuG); N-метилизолейцин (MeIle); фенилглицин (PhG); циклогексилаланин (ChA); норлейцин (Nle); нафтилаланин (Nal); 4-хлорфенилаланин (Phe(4-Cl)); 2-фторфенилаланин (Phe(2-F)); 3-фторфенилаланин (Phe(3-F)); 4-фторфенилаланин (Phe(4-F)); пеницилламин (Pen); l,2,3,4-тетрагидроизохинолин-3-карбоновую кислоту (Tic); β-2-тиенилаланин (Thi); метионинсульфоксид (MSO); гомоаргинин (hArg); N-ацетиллизин (AcLys); 2,4-диаминомасляную кислоту (Dbu); 2,3-диаминомасляную кислоту (Dab); пара-аминофенилаланин (Phe(pNH₂)); N-метилвалин (MeVal); гомоцмстемн (hCys), гомофенилаланин (hPhe); гомосерин (hSer); гидроксипролин (Hyp); гомопролин (hPro); и соответствующий D-энантиомер каждого из указанных выше соединений, например, D-β-Ala, D-Dpr, D-Nip, D-Orn, D-Cit, D-t-BuA, D-t-BuG, D-MeIle, D-PhG, D-ChA, D-Nle, D-Nal, D-Phe(4-Cl), D-Phe(2-F), D-Phe(3-F), D-Phe(4-F), D-Pen, D-Tic, D-Thi, D-MSO, D-hArg, D-AcLys, D-Dbu, D-Dab, D-Phe(pNH₂), D-MeVal, D-hCys, D-hPhe, D-hSer, D-Hyp и D-hPro. Другие генетически не кодируемые аминокислотные остатки включают в себя 3-аминопропионовую кислоту; 4-аминомасляную кислоту; изонипекотиновую кислоту (Inp); аза-пипеколиновую кислоту (azPip); аза-пролин (azPro); α-аминоизомасляную кислоту (Aib); ε-аминогексановую кислоту (Aha); δ-аминовалериановую кислоту (Ava); N-метилглицин (MeGly).

Термин "хиральный", используемый здесь в отношении аминокислотного остатка, означает аминокислотный остаток, имеющий по меньшей мере один хиральный центр. В одном из воплощений указанный хиральный аминокислотный остаток является L-аминокислотным остатком. Примеры L-аминокислотных остатков включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Glu, His, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Trp, Tyr, Val, β-Ala, Dpr, Nip, Orn, Cit, t-BuA, t-BuG, MeIle, PhG, ChA, NIe, Nal, Phe(4-Cl), Phe(2-F), Phe(3-F), Phe(4-F), Pen, Tic, Thi, MSO, hArg, AcLys, Dbu, Dab, Phe(pNH₂), MeVal, hCys, hPhe, hSer, Hyp и hPro. В одном из воплощений указанный хиральный аминокислотный остаток является D-аминокислотным остатком. Примеры D-аминокислотных остатков включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, D-Ala, D-Arg, D-Asn, D-Asp, D-Cys, D-Gln, D-Glu, D-His, D-Ile, D-Leu, D-Lys, D-Met, D-Phe, D-Pro, D-Ser, D-Thr, D-Trp, D-Tyr, D-Val, D-β-Ala, D-Dpr, D-Nip, D-Pip, D-Orn, D-Cit, D-t-BuA, D-t-BuG, D-MeIle, D-PhG, D-ChA, D-Nle, D-Nal, D-Phe(4-Cl), D-Phe(2-F), D-Phe(3-F), D-Phe(4-F), D-Pen, D-Tic, D-Thi, D-MSO, D-hArg, D-AcLys, D-Dbu, D-Dab, D-Phe(pNH₂), D-MeVal, D-hCys, D-hPhe, D-hSer, D-Hyp и D-hPro.

Термин "ахиральный", используемый здесь в отношении аминокислотного остатка, означает аминокислотный остаток, который не имеет хирального центра. Примеры ахиральных аминокислотных остатков включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, Gly, Inp, Aib, Aha, Ava, MeGly, azPip и azPro.

Используемый здесь термин "алифатический аминокислотный остаток", если не оговорено иначе, относится к аминокислотному остатку, имеющему алифатическую углеводородную цепь. Алифатический аминокислотный остаток включает в себя, не ограничиваясь перечисленным, Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), azPro, Pip, azPip, β-Ala, Aib, t-BuA, t-BuG, MeIle, ChA, Nle, MeVal, Inp, Nip, hPro, D-Ala, D-Val, D-Leu, D-Ile, D-Pro, D-β-Ala, D-t-BuA, D-t-BuG, D-MeIle, D-Nle, D-MeVal, D-Nip, D-Pip, D-ChA и D-hPro. В одном из воплощений указанный алифатический аминокислотный остаток является L-аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный алифатический аминокислотный остаток является D-аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный алифатический аминокислотный остаток является ахиральным аминокислотным остатком.

Используемый здесь термин "гидрофильный аминокислотный остаток", если не оговорено иначе, относится к аминокислотному остатку, проявляющему менее чем нулевую гидрофобность, согласно общепринятой нормированной шкале гидрофобности Айзенберга, Eisenberg et al., 1984, J. Mol. Biol. 179:125-142. Гидрофильный аминокислотный остаток включает в себя, не ограничиваясь перечисленным, Pro (P), Gly (G), Thr (T), Ser (S), His (H), Glu (E), Asn (N), Gln (Q), Asp (D), Lys (K), Arg (R), Dpr, Orn, Cit, Pen, MSO, hArg, AcLys, Dbu, Dab, Phe(p-NH₂), hCys, hSer, Hyp, D-Pro, D-Thr, D-Ser, D-His, D-Glu, D-Asn, D-Gln, D-Asp, D-Lys, D-Arg, D-Dpr, D-Orn, D-Cit, D-Pen, D-MSO, D-hArg, D-AcLys, D-Dbu, D-Dab, D-Phe(p-NH₂), D-hCys, D-hSer и D-Hyp. Другие гидрофильные аминокислотные остатки включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, аналоги боковых цепей C_1-4, имеющие следующие формулы:

, где n является целым числом от 1 до 4. В одном из воплощений указанный гидрофильный аминокислотный остаток является L-аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный гидрофильный аминокислотный остаток является D-аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный гидрофильный аминокислотный остаток является ахиральным аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный гидрофильный аминокислотный остаток является кислым L-аминокислотным остатком, кислым D-аминокислотным остатком или кислым ахиральным аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный гидрофильный аминокислотный остаток является основным L-аминокислотным остатком, основным D-аминокислотным остатком или основным ахиральным аминокислотным остатком.

Используемый здесь термин "гидрофобный аминокислотный остаток", если не оговорено иначе, относится к аминокислотному остатку, проявляющему более чем нулевую гидрофобность, согласно общепринятой нормированной шкале гидрофобности Айзенберга, Eisenberg, 1984, J. Mol. Biol. 179:125-142. Гидрофобный аминокислотный остаток включает в себя, не ограничиваясь перечисленным, Ile (I), Phe (F), Val (V), Leu (L), Trp (W), Met (M), Ala (A), Gly (G), Tyr (Y), β-Ala, Nip, t-BuA, t-BuG, MeIle, PhG, ChA, Nle, Nal, Phe(4-Cl), Phe(2-F), Phe(3-F), Phe(4-F), Tic, Thi, MeVal, hPhe, hPro, 3-аминопропионовую кислоту, 4-аминомасляную кислоту, Inp, Aib, Aha, Ava, MeGly, D-Pro, D-Ile, D-Phe, D-Val, D-Leu, D-Trp, D-Met, D-Ala, D-Tyr, D-β-Ala, D-Nip, D-t-BuA, D-t-BuG, D-MeIle, D-PhG, D-ChA, D-Nle, D-Nal, D-Phe(4-Cl), D-Phe(2-F), D-Phe(3-F), D-Phe(4-F), D-Tic, D-Thi, D-MeVal, D-hPhe и D-hPro. Другие гидрофобные аминокислоты включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, аналоги боковых цепей C_1-4, имеющие следующие формулы:

где n является целым числом от 1 до 4. В одном из воплощений указанный гидрофобный аминокислотный остаток является L-аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный гидрофобный аминокислотный остаток является D-аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный гидрофобный аминокислотный остаток является ахиральным аминокислотным остатком.

Используемый здесь термин "полярный аминокислотный остаток", если не оговорено иначе, относится к гидрофильному аминокислотному остатку, имеющему боковую цепь, которая не заряжена при физиологических значениях pH, но которая содержит по меньшей мере одну связь, в которой пара электронов, обобществленная двумя атомами, удерживается в большей близости к одному из атомов. Полярные аминокислотные остатки включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, Asn (N), Gln (Q), Ser (S), Thr (T), Cit, Pen, MSO, AcLys, hCys, hSer, Hyp, D-Asn, D-Gln, D-Ser, D-Thr, D-Cit, D-Pen, D-MSO, D-AcLys, D-hCys, D-hSer и D-Hyp. Другие полярные аминокислоты включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, аналоги боковых цепей C_1-4, имеющие следующие формулы:

где n является целым числом от 1 до 4. В одном из воплощений указанный полярный аминокислотный остаток является L-аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный полярный аминокислотный остаток является D-аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный полярный аминокислотный остаток является ахиральным аминокислотным остатком.

Используемый здесь термин "кислый аминокислотный остаток", если не оговорено иначе, относится к гидрофильному аминокислотному остатку, имеющему значение pK боковой цепи, которое составляет менее чем 7. Кислые аминокислотные остатки обычно при физиологических значениях pH имеют отрицательно заряженные боковые цепи в силу утраты иона водорода. Кислые аминокислотные остатки включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, Glu (E), Asp (D), D-Glu и D-Asp. Другие кислые аминокислотные остатки включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, аналоги боковых цепей C_1-4, имеющие следующую формулу:

, где n является целым числом от 1 до 4. В одном из воплощений указанный кислый аминокислотный остаток является L-аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный кислый аминокислотный остаток является D-аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный полярный аминокислотный остаток является ахиральным аминокислотным остатком.

Используемый здесь термин "основный аминокислотный остаток", если не оговорено иначе, относится к гидрофильному аминокислотному остатку, имеющему значение pK боковой цепи, которое составляет более чем 7. Основные аминокислотные остатки обычно при физиологических значениях pH имеют положительно заряженные боковые цепи в силу ассоциации с ионом гидрония. Основные аминокислотные остатки включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, His (H), Arg (R), Lys (K), Dpr, Orn, hArg, Dbu, Dab, Phe(p-NH₂), D-His, D-Arg, D-Lys, D-Dpr, D-Orn, D-hArg, D-Dbu, D-Dab и D-Phe(p-NH₂). Другие основные аминокислотные остатки включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, аналоги боковых цепей C_1-4, имеющие следующие формулы:

, где n является целым числом от 1 до 4. В одном из воплощений указанный основный аминокислотный остаток является L-аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный основный аминокислотный остаток является D-аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный основный аминокислотный остаток является ахиральным аминокислотным остатком.

Используемый здесь термин "неполярный аминокислотный остаток", если не оговорено иначе, относится к гидрофобному аминокислотному остатку, имеющему боковую цепь, которая не заряжена при физиологических значениях pH и которая содержит связи, в которых пара электронов, обобществленная двумя атомами, удерживается по существу в одинаковой степени обоими этими атомами (то есть указанная боковая цепь является неполярной). Неполярные аминокислотные остатки включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, Leu (L), Val (V), Ile (I), Met (M), Gly (G), Ala (A), Pro (P), azPro, Pip, azPip, β-Ala, Nip, t-BuG, MeIle, ChA, Nle, MeVal, hPro, 3-аминопропионовую кислоту, 4-аминомасляную кислоту, Inp, Aib, Aha, Ava, MeGly, D-Leu, D-Val, D-Ile, D-Met, D-Ala, D-Pro, D-β-Ala, D-Inp, D-t-BuG, D-MeIle, D-ChA, D-Nle, D-MeVal, D-Nip, D-Pip и D-hPro. Другие неполярные аминокислотные остатки включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, аналоги боковых цепей C_1-4, имеющие следующие формулы:

где n является целым числом от 1 до 4. В одном из воплощений указанный неполярный аминокислотный остаток является L-аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный неполярный аминокислотный остаток является D-аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный неполярный аминокислотный остаток является ахиральным аминокислотным остатком.

Используемый здесь термин "ароматический аминокислотный остаток", если не оговорено иначе, относится к гидрофобному аминокислотному остатку с боковой цепью, имеющей по меньшей мере одно ароматическое или гетероароматическое кольцо. Указанное ароматическое или гетероароматическое кольцо может содержать один или несколько заместителей, таких как -OH, -SH, -CN, -F, -Cl, -Br, -I, -NO₂, -NO, -NH₂, -NHR, -NRR, -C(O)R, -C(O)OH, -C(O)OR, -C(O)NH₂, -C(O)NHR, -C(O)NRR, где каждый R независимо является (C₁-C₆)-алкилом, замещенным (C₁-C₆)-алкилом, 5-26-членным арилом и замещенным 5-26-членным арилом. Ароматические аминокислотные остатки включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, Phe (F), Tyr (Y), Trp (W), PhG, Nal, Phe(4-Cl), Phe(2-F), Phe(3-F), Phe(4-F), Tic, Thi, hPhe, D-Phe, D-Tyr и D-Trp, D-PhG, D-Nal, D-Phe(4-Cl), D-Phe(2-F), D-Phe(3-F), D-Phe(4-F), D-Tic, D-Thi и D-hPhe. Другие ароматические аминокислотные остатки включают в себя, не ограничиваясь перечисленным, аналоги боковых цепей C_1-4, имеющие следующие формулы:

где n является целым числом от 1 до 4. В одном из воплощений указанный ароматический аминокислотный остаток является L-аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный ароматический аминокислотный остаток является D-аминокислотным остатком. В другом воплощении указанный ароматический аминокислотный остаток является ахиральным аминокислотным остатком.

Классификации генетически кодируемых и генетически не кодируемых аминокислотных остатков в соответствии с указанными выше категориями суммированы ниже в таблице. Следует понимать, что приведенная ниже таблица представлена здесь лишь в иллюстративных целях и не претендует на исчерпывающий список аминокислотных остатков, которые могут быть использованы в описанных здесь миметиках ApoA-I. Другие аминокислотные остатки, специально здесь не описанные, можно с легкостью отнести к той или иной категории на основании наблюдаемых у них физических и химических свойств, с учетом приведенных выше определений. Некоторые классификации аминокислотных остатков включены в таблицу 2 ниже.

Таблица 2
Классификации некоторых аминокислотных остатков Классификация Генетически кодируемые Генетически не кодируемые Гидрофобные Ароматические F, Y, W PhG, Nal, Thi, Tic, Phe(4-Cl), Phe(2-F), Phe(3-F), Phe(4-F), hPhe Неполярные L, V, I, M, G, A, P β-Ala, t-BuA, t-BuG, MeIle, Nle, MeVal, ChA, MeGly, Aib, Nip, hPro, 3-аминопропионовая кислота, 4-аминомасляная кислота, Inp, Aha, Ava, MeGly, azPro, Pip, azPip Алифатические A, V, L, I, P β-Ala, Aib, t-BuA, t-BuG, MeIle, ChA, Nle, MeVal, Nip, hPro, Inp, azPro, Pip, azPip Гидрофильные Кислые D, E Основные H, K, R Dpr, Orn, hArg, Phe(p-NH₂), Dbu, Dab, hArg

Полярные С, Q, N, S, T Cit, Pen, AcLys, MSO, bAla, hSer, hCys, hSer, Hyp Нарушающие спиральную структуру P, G MeGly, L-аминокислоты (в D-пептидах), D-Pro и другие D-аминокислоты (в L-пептидах)

Как должно быть очевидно специалистам в данной области, определяемые выше категории не являются взаимоисключающими. Таким образом, аминокислотные остатки, имеющие боковые цепи, проявляющие два или более физико-химических свойств, могут быть включены во множественные категории. Например, аминокислотные боковые цепи, имеющие ароматические фрагменты, которые дополнительно замещены полярными заместителями, такими как Tyr (Y) или его соответствующим D-энантиомером, могут проявлять как гидрофобные ароматические свойства, так и полярные или гидрофильные свойства, и, следовательно, могут быть включены в обе категории, ароматическую и полярную. Отнесение любого аминокислотного остатка к той или иной категории должно быть очевидно специалисту в данной области, в частности, в свете представленного здесь описания.

Кроме того, аминокислотный остаток Cys (C) или его соответствующий D-энантиомер может образовывать дисульфидные мостики с другими остатками Cys (C) или их соответствующими D-энантиомерами или с другими сульфанил-содержащими аминокислотами. Способность остатков Cys (C) (и других аминокислот, содержащих SH-боковые цепи) существовать в пептиде либо в редуцированной форме со свободными SH-группами, либо в виде окисленной образующей дисульфидные мостики форме, влияет на то, будут ли остатки Cys (C) или их соответствующие D-энантиомеры в результате придавать пептиду гидрофобный или гидрофильный характер. Поскольку Cys (C) или его соответствующий D-энантиомер проявляет гидрофобность, соответствующую 0,29, согласно общепринятой нормированной шкале Айзенберга (Eisenberg, 1984, выше), следует понимать, что в целях осуществления настоящего изобретения Cys (C) и его соответствующий D-энантиомер подпадают под категорию полярных гидрофильных аминокислот, несмотря на общую классификацию, определяемую выше.

II. Миметики ApoA-I

A. Пептиды формулы I

В одном из воплощений настоящее изобретение связано с пептидами, содержащими от 15 до 29 остатков, имеющими формулу I:

R¹-Y¹-X¹-X²-X³-X⁴-X⁵-X⁶-X⁷-X⁸-X⁹-X¹⁰-X¹¹-X¹²-X¹³-X¹⁴-X¹⁵-X¹⁶-X¹⁷-X¹⁸-X¹⁹-X²⁰-X²¹-X²²-X²³-Y²-R²

Формула I

и их фармацевтически приемлемыми солями, в которых

X¹отсутствует или является ахиральным, D- или L-основным аминокислотным остатком;

X²является ахиральным, D- или L-основным аминокислотным остатком;

X³является ахиральным, D- или L-алифатическим аминокислотным остатком;

X⁴является ахиральным, D- или L-основным аминокислотным остатком;

X⁵представляет собой Gln, Asn, D-Gln, D-Asn или ахиральный, D- или L-основный аминокислотный остаток;

X⁶представляет собой Gln, Asn, D-Gln, D-Asn или ахиральный, D- или L-основный аминокислотный остаток;

X⁷является ахиральным, D- или L-гидрофобным аминокислотным остатком;

X⁸является ахиральным, D- или L-гидрофобным аминокислотным остатком;

X⁹является ахиральным, D- или L-гидрофильным аминокислотным остатком;

X¹⁰представляет собой Leu, Trp, Gly, Nal, D-Leu, D-Trp или D-Nal;

X¹¹представляет собой Gly или ахиральный, D- или L-алифатический аминокислотный остаток;

X¹²является ахиральным, D- или L-гидрофильным аминокислотным остатком;

X¹³является ахиральным, D- или L-гидрофильным аминокислотным остатком;

X¹⁴представляет собой Leu, Trp, Gly, D-Leu или D-Trp;

X¹⁵представляет собой Leu, Gly или D-Leu;

X¹⁶является ахиральным, D- или L-кислым аминокислотным остатком, или ахиральным, D- или L-основным аминокислотным остатком;

X¹⁷является ахиральным, D- или L-гидрофильным аминокислотным остатком;

X¹⁸ представляет собой Leu, Phe, D-Leu или D-Phe;

X¹⁹ представляет собой Leu, Phe, D-Leu или D-Phe;

X²⁰является ахиральным, D- или L-кислым аминокислотным остатком;

X²¹ представляет собой Leu, Phe, D-Leu или D-Phe;

X²²является ахиральным, D- или L-алифатическим аминокислотным остатком; и

X²³ представляет собой Inp, Nip, azPro, Pip, azPip, D-Nip или D-Pip;

Y¹ отсутствует или является аминокислотной последовательностью, содержащей от 1 до 7 остатков;

Y² отсутствует или является аминокислотной последовательностью, содержащей от 1 до 7 остатков;

R¹ представляет собой H или аминозащитную группу;

R² представляет собой OH или карбоксильную защитную группу;

причем от нуля до восьми остатков X²-X²² отсутствуют; и

при этом

a) каждый хиральный аминокислотный остаток является L-аминокислотным остатком;

b) каждый хиральный аминокислотный остаток является D-аминокислотным остатком;

d) каждый хиральный аминокислотный остаток является D-аминокислотным остатком, за исключением того, что один или более из каждых хиральных концевых аминокислотных остатков и каждых хиральных аминокислотных остатков, непосредственно к ним примыкающих, является L-аминокислотным остатком.

В другом воплощении настоящее изобретение связано с пептидами, содержащими от 22 до 29 остатков, имеющими формулу I: