СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ГИПЕРЛИПИДЕМИИ У ПАЦИЕНТОВ С ДИАБЕТОМ ПОСРЕДСТВОМ ВВЕДЕНИЯ ИНГИБИТОРА PCSK9 Российский патент 2022 года по МПК A61K39/395 A61P3/10 C07K16/40 

РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет по предварительной заявке на патент США № 62/517672, поданной 9 июня 2017 года, предварительной заявке на патент США № 62/532162, поданной 13 июля 2017 года, а также заявке на Европейский патент № 18305565.6, поданной 4 мая 2018 года. Содержание каждой из этих родственных заявок включено в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[0002] Настоящее изобретение относится к области терапевтических воздействий на заболевания и нарушения, которые связаны с повышенными уровнями липидов и липопротеинов. Более конкретно, настоящее изобретение относится к применению ингибиторов PCSK9 для лечения пациентов с диабетом, страдающих гиперлипидемией, в том числе гиперхолестеринемией.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0003] Гиперлипидемия представляет собой общий термин, который охватывает заболевания и нарушения, характеризующиеся или связанные с повышенными уровнями липидов и/или липопротеинов в крови. Виды гиперлипидемии включают гиперхолестеринемию, гипертриглицеридемию, комбинированную гиперлипидемию и повышенный уровень липопротеина А (Lp(a)). Особо распространенной формой гиперлипидемии во многих популяциях является гиперхолестеринемия.

[0004] Гиперхолестеринемия, в частности, повышение уровней холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL) (LDL-C), представляет собой основной риск развития атеросклероза и коронарного заболевания сердца (CHD) (Sharrett et al., 2001, Circulation 104:1108-1113). Холестерин липопротеинов низкой плотности определяется как главная мишень снижающей холестерин терапии и принимается в качестве пригодной суррогатной конечной точки терапии. Многочисленные исследования продемонстрировали, что снижение уровней LDL-C снижает риск возникновения CHD, при этом существует сильная прямая зависимость между уровнями LDL-C и явлениями CHD; при снижении уровня LDL-C на каждый 1 ммоль/л (~40 мг/дл) смертность от сердечно-сосудистых заболеваний (CVD) и заболеваемость сердечно-сосудистыми заболеваниями снижается на 22%. Большие снижения LDL-C приводят к большему снижению явлений CHD, а сравнительные данные интенсивного относительно стандартного лечения с помощью статина указывают на то, что чем ниже уровень LDL-C, тем большей является польза для пациентов с очень высоким риском возникновения сердечно-сосудистых (CV) заболеваний.

[0005] Сердечно-сосудистые заболевания (CVD) являются основной причиной заболеваемости и смертности у пациентов с сахарным диабетом (DM) типа 1 (Т1) или типа 2 (Т2), и у пациентов с диабетом, лечение которых осуществляют инсулином, риск CV еще выше. Кроме того, наличие сопутствующего DM среди пациентов с атеросклеротическим CVD (ASCVD) значительно увеличивает риск CV событий. Несколько исследований и проведенные мета-анализы показали, что снижение уровня LDL-C с применением статинов приводит к значительному снижению CV событий у пациентов с DM, причем дальнейшее снижение риска CV связано с дополнительным снижением уровня LDL-C посредством применения эзетимиба в качестве сопутствующего препарата. Однако даже при доступных в настоящее время средствах лечения у многих пациентов с DM сохраняются постоянные нарушения липидного обмена, и поэтому они подвергаются остаточному риску CV событий.

[0006] Современные лекарственные препараты, снижающие уровень LDL-C, включают ингибиторы пропротеинконвертазы субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9), такие как антитела к PCSK9. Несмотря на то, что антитела к PCSK9 подвергались обширному клиническому исследованию, эффективность и безопасность алирокумаба в популяции с диабетом до конца не изучены. Таким образом, в данной области существует потребность в определении схем лечения с применением антител к PCSK9, которые обеспечивают оптимальную эффективность и безопасность при лечении гиперхолестеринемии у пациентов с диабетом, получающих средство терапии на основе инсулина, которые характеризуются высоким риском CV.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0007] В настоящем изобретении предусмотрены способы лечения гиперхолестеринемии у пациента с сахарным диабетом (DM), получающего средство терапии на основе инсулина. В некоторых вариантах осуществления способы предусматривают введение одной или нескольких доз антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают PCSK9 человека, пациенту с гиперхолестеринемией и диабетом. В определенных вариантах осуществления пациент характеризуется высоким сердечно-сосудистым риском. В определенных вариантах осуществления пациент получает сопутствующее средство противодиабетической терапии в дополнение к средству терапии на основе инсулина.

[0008] В соответствии с одним аспектом способы предусматривают способ лечения гиперхолестеринемии у пациента с сахарным диабетом 1 типа (T1DM), при этом способ предусматривает

(а) отбор пациента с высоким сердечно-сосудистым риском, получающего средство терапии на основе инсулина, который имеет (i) T1DM и (ii) гиперхолестеринемию, недостаточно контролируемые посредством средства терапии на основе статина в максимально переносимой дозе; и

(b) введение пациенту 75 мг, 150 мг или 300 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека, где пациент получает сопутствующее средство терапии на основе инсулина.

[0009] В определенных вариантах осуществления пациенту вводят 75 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента каждые две недели. В других вариантах осуществления пациенту вводят 150 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента каждые две недели. В других вариантах осуществления пациенту вводят 300 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента каждые четыре недели.

[0010] В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат CDR тяжелой и легкой цепей из пары аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, содержащей SEQ ID NO: 1/6. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат три CDR тяжелой цепи, приведенные под SEQ ID NO: 2, 3 и 4, и три CDR легкой цепи, приведенные под SEQ ID NO: 7, 8 и 10. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи (HCVR) с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и вариабельную область легкой цепи (LCVR) с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент конкурируют за связывание с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, которые содержат HCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и LCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с тем же эпитопом на PCSK9, что и антитело, содержащее HCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и LCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с эпитопом на PCSK9, который перекрывается с эпитопом антитела, содержащего HCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и LCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6.

[0011] В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат аминокислотные последовательности CDR тяжелой и легкой цепей, имеющие SEQ ID NO: 86, 87, 88, 90, 91 и 92. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат HCVR с аминокислотной последовательностью, идентичной на по меньшей мере 90%, 95% или 99% аминокислотной последовательности, приведенной под SEQ ID NO:85, и LCVR с аминокислотной последовательностью, идентичной на по меньшей мере 90%, 95% или 99% аминокислотной последовательности, приведенной под SEQ ID NO:89.

[0012] В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из алирокумаба, эволокумаба, бокоцизумаба, лоделцизумаба, ралпанцизумаба и LY3015014. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой алирокумаб.

[0013] В определенных вариантах осуществления способ, раскрытый в данном документе, дополнительно предусматривает (c) введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 75 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если, например, через 8 недель, уровень LDL-C у пациента ниже порогового уровня, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если, например, через 8 недель уровень LDL-C у пациента равняется пороговому уровню или превышает его. В некоторых вариантах осуществления пороговый уровень составляет 70 мг/дл.

[0014] В определенных вариантах осуществления способ, раскрытый в данном документе, дополнительно предусматривает (c) введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 300 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые четыре недели, если, например, через 8 недель, уровень LDL-C у пациента ниже порогового уровня, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если, например, через 8 недель уровень LDL-C у пациента равняется пороговому уровню или превышает его. В некоторых вариантах осуществления пороговый уровень составляет 70 мг/дл.

[0015] В определенных вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно.

[0016] В определенных вариантах осуществления пациент дополнительно получает сопутствующее средство липидокорригирующей терапии (LMT). В некоторых вариантах осуществления LMT выбрано из группы, состоящей из статина, ингибитора абсорбции холестерина, фибрата, ниацина, омега-3 жирной кислоты и секвестранта желчных кислот. В определенных вариантах осуществления LMT представляет собой средство терапии на основе статина. В некоторых вариантах осуществления статин выбран из группы, состоящей из аторвастатина, розувастатина, симвастатина, правастатина, ловастатина, флувастатина, питавастатина и церивастатина. В определенных вариантах осуществления средство терапии на основе статина представляет собой средство терапии на основе статина в максимально переносимой дозе. В некоторых вариантах осуществления ингибитор абсорбции холестерина представляет собой эзетимиб. В некоторых вариантах осуществления пациент страдает непереносимостью статина.

[0017] В некоторых вариантах осуществления средство терапии на основе инсулина выбрано из группы, состоящей из человеческого инсулина, инсулина гларгина, инсулина глулизина, инсулина детемир, инсулина лизпро, инсулина деглудека, инсулина аспарт и базального инсулина. В некоторых вариантах осуществления пациент дополнительно получает дополнительное сопутствующее средство противодиабетической терапии в дополнение к средству терапии на основе инсулина. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство противодиабетической терапии выбрано из группы, состоящей из средства терапии на основе глюкагоноподобного пептида 1 (GLP-1), желудочно-кишечного пептида, агониста или антагониста рецептора глюкагона, агониста или антагониста рецептора глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (GIP), антагониста или обратного агониста грелина, ксенина, аналога ксенина, бигуанида, сульфонилмочевины, меглитинида, тиазолидиндиона, ингибитора DPP-4, ингибитора альфа-глюкозидазы, ингибитора натрий-зависимого переносчика глюкозы 2 (SGLT-2), ингибитора SGLT-1, агониста или модулятора рецептора, активируемого пероксисомным пролифератором (PPAR-) (альфа, гамма или альфа/гамма), амилина, аналога амилина, агониста рецептора 119, связанного с G-белком (GPR119), агониста GPR40, агониста GPR120, агониста GPR142, системного или слабопоглощаемого агониста TGR5, иммунотерапевтического средства, применяемые при диабете, противовоспалительных средств для лечения метаболического синдрома и диабета, стимулятора активируемой аденозинмонофосфатом протеинкиназы (AMPK), ингибитора 11-бета-гидроксистероиддегидрогеназы 1, активатора глюкокиназы, ингибитора диацилглицерол-O-ацилтрансферазы (DGAT), модулятора глюкозного транспортера-4, агониста соматостатинового рецептора 3, гиполипидемического средства и их комбинации.

[0018] В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень LDL-C у пациента, например, на по меньшей мере 30%, 35%, 40% или 45%. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень холестерина, отличного от HDL-C, у пациента, например, на по меньшей мере 25%, 30%, 35% или 40%. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень аполипопротеина C3 (ApoC3) у пациента (например, на по меньшей мере приблизительно 6,0%, приблизительно 6,5%, приблизительно 7,0% или приблизительно 7,5% после 12 или 24 недель лечения). В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают число липопротеиновых частиц у пациента (например, на по меньшей мере приблизительно 20%, приблизительно 30%, приблизительно 40% или приблизительно 50%% после 12 или 24 недель лечения). В других вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают размер липопротеиновых частиц у пациента (например, на по меньшей мере приблизительно 1,5%, приблизительно 2%, приблизительно 2,5% или приблизительно 3% после 12 или 24 недель лечения).

[0019] В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (а) не влияют на уровень гемоглобина A1c (HbA1c) у пациента и/или (b) не влияют на уровень глюкозы в плазме крови натощак (FPG) у пациента.

[0020] В соответствии с другим аспектом способы предусматривают способ лечения гиперхолестеринемии у пациента с сахарным диабетом 1 типа (T1DM), при этом способ предусматривает

(a) отбор пациента с высоким сердечно-сосудистым риском, получающего средство терапии на основе инсулина, который имеет (i) T1DM и (ii) гиперхолестеринемию, недостаточно контролируемые посредством средства терапии на основе статина в максимально переносимой дозе;

(b) введение пациенту каждые две недели 75 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека;

(c) введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 75 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если, например, через 8 недель уровень LDL-C у пациента ниже, чем 70 мг/дл, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если, например, через 8 недель уровень LDL-C у пациента равняется 70 мг/дл или больше, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат HCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и LCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6, и где пациент получает сопутствующее средство терапии на основе инсулина.

[0021] В соответствии с другим аспектом способы предусматривают способ лечения гиперхолестеринемии у пациента с сахарным диабетом 1 типа (T1DM), при этом способ предусматривает

(a) отбор пациента с высоким сердечно-сосудистым риском, получающего средство терапии на основе инсулина, который имеет (i) T1DM и (ii) гиперхолестеринемию, недостаточно контролируемые посредством средства терапии на основе статина в максимально переносимой дозе;

(b) введение пациенту каждые четыре недели 300 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека; и

(c) введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 300 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые четыре недели, если через 8 недель, уровень LDL-C у пациента выше порогового уровня, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если через 8 недель уровень LDL-C у пациента равняется пороговому уровню или меньше,

где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат HCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и LCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6, и где пациент получает сопутствующее средство терапии на основе инсулина. В одном варианте осуществления пороговый уровень составляет 15 мг/дл. В другом варианте осуществления пороговый уровень составляет 25 мг/дл.

[0022] В соответствии с другим аспектом способы предусматривают способ лечения гиперхолестеринемии у пациента с сахарным диабетом 2 типа (T2DM), при этом способ предусматривает

(а) отбор пациента с высоким сердечно-сосудистым риском, получающего средство терапии на основе инсулина, который имеет (i) T2DM и (ii) гиперхолестеринемию, недостаточно контролируемые посредством средства терапии на основе статина в максимально переносимой дозе; и

(b) введение пациенту 75 мг, 150 мг или 300 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека, где пациент получает сопутствующее средство терапии на основе инсулина.

[0023] В определенных вариантах осуществления пациенту вводят 75 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента каждые две недели. В других вариантах осуществления пациенту вводят 150 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента каждые две недели. В других вариантах осуществления пациенту вводят 300 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента каждые четыре недели.

[0024] В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат CDR тяжелой и легкой цепей из пары аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, содержащей SEQ ID NO: 1/6. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат три CDR тяжелой цепи, приведенные под SEQ ID NO: 2, 3 и 4, и три CDR легкой цепи, приведенные под SEQ ID NO: 7, 8 и 10. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи (HCVR) с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и вариабельную область легкой цепи (LCVR) с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент конкурируют за связывание с антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, которые содержат HCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и LCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с тем же эпитопом на PCSK9, что и антитело, содержащее HCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и LCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с эпитопом на PCSK9, который перекрывается с эпитопом антитела, содержащего HCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и LCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6.

[0025] В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат определяющие комплементарность области (CDR) вариабельной области тяжелой цепи (HCVR) и вариабельной области легкой цепи (LCVR), содержащие аминокислотные последовательности, приведенные под SEQ ID NO: 85 и 89 соответственно. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат аминокислотные последовательности CDR тяжелой и легкой цепей, имеющие SEQ ID NO: 86, 87, 88, 90, 91 и 92. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат HCVR с аминокислотной последовательностью, идентичной на по меньшей мере 90%, 95% или 99% аминокислотной последовательности, приведенной под SEQ ID NO:85, и LCVR с аминокислотной последовательностью, идентичной на по меньшей мере 90%, 95% или 99% аминокислотной последовательности, приведенной под SEQ ID NO:89.

[0026] В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из алирокумаба, эволокумаба, бокоцизумаба, лоделцизумаба, ралпанцизумаба и LY3015014. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой алирокумаб.

[0027] В определенных вариантах осуществления способ, раскрытый в данном документе, дополнительно предусматривает (c) введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 75 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента ниже порогового уровня, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента равняется пороговому уровню или превышает его. В некоторых вариантах осуществления пороговый уровень составляет 70 мг/дл.

[0028] В определенных вариантах осуществления способ, раскрытый в данном документе, дополнительно предусматривает (c) введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 300 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые четыре недели, если, например, через 8 недель, уровень LDL-C у пациента ниже порогового уровня, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если, например, через 8 недель уровень LDL-C у пациента равняется пороговому уровню или превышает его. В некоторых вариантах осуществления пороговый уровень составляет 70 мг/дл.

[0029] В определенных вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно.

[0030] В определенных вариантах осуществления пациент дополнительно получает сопутствующее средство липидокорригирующей терапии (LMT). В некоторых вариантах осуществления LMT выбрано из группы, состоящей из статина, ингибитора абсорбции холестерина, фибрата, ниацина, омега-3 жирной кислоты и секвестранта желчных кислот. В определенных вариантах осуществления LMT представляет собой средство терапии на основе статина. В некоторых вариантах осуществления статин выбран из группы, состоящей из аторвастатина, розувастатина, симвастатина, правастатина, ловастатина, флувастатина, питавастатина и церивастатина. В определенных вариантах осуществления средство терапии на основе статина представляет собой средство терапии на основе статина в максимально переносимой дозе. В определенных вариантах осуществления ингибитор абсорбции холестерина представляет собой эзетимиб.

[0031] В определенных вариантах пациент страдает непереносимостью статина.

[0032] В некоторых вариантах осуществления средство терапии на основе инсулина выбрано из группы, состоящей из человеческого инсулина, инсулина гларгина, инсулина глулизина, инсулина детемир, инсулина лизпро, инсулина деглудека, инсулина аспарт и базального инсулина.

[0033] В определенных вариантах осуществления пациент дополнительно получает сопутствующее средство противодиабетической терапии в дополнение к средству терапии на основе инсулина. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство противодиабетической терапии выбрано из группы, состоящей из средства терапии на основе глюкагоноподобного пептида 1 (GLP-1), желудочно-кишечного пептида, агониста или антагониста рецептора глюкагона, агониста или антагониста рецептора глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (GIP), антагониста или обратного агониста грелина, ксенина, аналога ксенина, бигуанида, сульфонилмочевины, меглитинида, тиазолидиндиона, ингибитора DPP-4, ингибитора альфа-глюкозидазы, ингибитора натрий-зависимого переносчика глюкозы 2 (SGLT-2), ингибитора SGLT-1, агониста или модулятора рецептора, активируемого пероксисомным пролифератором (PPAR-) (альфа, гамма или альфа/гамма), амилина, аналога амилина, агониста рецептора 119, связанного с G-белком (GPR119), агониста GPR40, агониста GPR120, агониста GPR142, системного или слабопоглощаемого агониста TGR5, иммунотерапевтического средства, применяемые при диабете, противовоспалительных средств для лечения метаболического синдрома и диабета, стимулятора активируемой аденозинмонофосфатом протеинкиназы (AMPK), ингибитора 11-бета-гидроксистероиддегидрогеназы 1, активатора глюкокиназы, ингибитора диацилглицерол-O-ацилтрансферазы (DGAT), модулятора глюкозного транспортера-4, агониста соматостатинового рецептора 3, гиполипидемического средства и их комбинации.

[0034] В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень LDL-C у пациента, например, на по меньшей мере 30%, 35%, 40% или 45%. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень холестерина, отличного от HDL-C, у пациента, например, на по меньшей мере 20%, 25%, 30% или 35%. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень аполипопротеина C3 (ApoC3) у пациента (например, на по меньшей мере приблизительно 6,0%, приблизительно 6,5%, приблизительно 7,0% или приблизительно 7,5% после 12 или 24 недель лечения). В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают число липопротеиновых частиц у пациента (например, на по меньшей мере приблизительно 20%, приблизительно 30%, приблизительно 40% или приблизительно 50%% после 12 или 24 недель лечения). В других вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают размер липопротеиновых частиц у пациента (например, на по меньшей мере приблизительно 1,5%, приблизительно 2%, приблизительно 2,5% или приблизительно 3% после 12 или 24 недель лечения).

[0035] В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент (а) не влияют на уровень гемоглобина A1c (HbA1c) у пациента и/или (b) не влияют на уровень глюкозы в плазме крови натощак (FPG) у пациента.

[0036] В соответствии с другим аспектом способы предусматривают способ лечения гиперхолестеринемии у пациента с сахарным диабетом 2 типа (T2DM), при этом способ предусматривает

(a) отбор пациента с высоким сердечно-сосудистым риском, получающего средство терапии на основе инсулина, который имеет (i) T2DM и (ii) гиперхолестеринемию, недостаточно контролируемые посредством средства терапии на основе статина в максимально переносимой дозе;

(b) введение пациенту каждые две недели 75 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека;

(c) введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 75 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если через 8 недель, уровень LDL-C у пациента ниже 70 мг/дл, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если, например, через 8 недель уровень LDL-C у пациента равняется 70 мг/дл или больше,

где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат HCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и LCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6, и где пациент получает сопутствующее средство терапии на основе инсулина.

[0037] В соответствии с другим аспектом способы предусматривают способ лечения гиперхолестеринемии у пациента с сахарным диабетом 2 типа (T2DM), при этом способ предусматривает

(a) отбор пациента с высоким сердечно-сосудистым риском, получающего средство терапии на основе инсулина, который имеет (i) T2DM и (ii) гиперхолестеринемию, недостаточно контролируемые посредством средства терапии на основе статина в максимально переносимой дозе;

(b) введение пациенту каждые четыре недели 300 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека; и

(c) введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 300 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые четыре недели, если через 8 недель, уровень LDL-C у пациента выше порогового уровня, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если через 8 недель уровень LDL-C у пациента равняется пороговому уровню или меньше,

где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат HCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и LCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6, и где пациент получает сопутствующее средство терапии на основе инсулина. В одном варианте осуществления пороговый уровень составляет 15 мг/дл. В другом варианте осуществления пороговый уровень составляет 25 мг/дл.

[0038] В соответствии с другим аспектом способы предусматривают способ лечения гиперхолестеринемии у пациента с T2DM и атеросклеротическим сердечно-сосудистым заболеванием (ASCVD), при этом способ предусматривает

(а) отбор пациента с высоким сердечно-сосудистым риском, получающего средство терапии на основе инсулина, который имеет (i) T2DM, (ii) ASCVD и (iii) гиперхолестеринемию, недостаточно контролируемые посредством средства терапии на основе статина в максимально переносимой дозе; и

(b) введение пациенту 75 мг, 150 мг или 300 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека, где пациент получает сопутствующее средство терапии на основе инсулина.

[0039] В некоторых вариантах осуществления ASCVD определяется как ишемическая болезнь сердца (CHD), ишемический инсульт или заболевание периферических артерий. В некоторых вариантах осуществления CHD включает острый инфаркт миокарда, бессимптомный инфаркт миокарда и нестабильную стенокардию.

[0040] В определенных вариантах осуществления пациенту вводят 75 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента каждые две недели. В определенных вариантах осуществления пациенту вводят 150 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента каждые две недели. В определенных вариантах осуществления пациенту вводят 300 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента каждые четыре недели.

[0041] В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат CDR тяжелой и легкой цепей из пары аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, содержащей SEQ ID NO: 1/6. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат три CDR тяжелой цепи, приведенные под SEQ ID NO: 2, 3 и 4, и три CDR легкой цепи, приведенные под SEQ ID NO: 7, 8 и 10. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи (HCVR) с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и вариабельную область легкой цепи (LCVR) с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с тем же эпитопом на PCSK9, что и антитело, содержащее HCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и LCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связываются с эпитопом на PCSK9, который перекрывается с эпитопом антитела, содержащего HCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и LCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6.

[0042] В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат определяющие комплементарность области (CDR) вариабельной области тяжелой цепи (HCVR) и вариабельной области легкой цепи (LCVR), содержащие аминокислотные последовательности, приведенные под SEQ ID NO: 85 и 89 соответственно. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат аминокислотные последовательности CDR тяжелой и легкой цепей, имеющие SEQ ID NO: 86, 87, 88, 90, 91 и 92. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат HCVR с аминокислотной последовательностью, идентичной на по меньшей мере 90%, 95% или 99% аминокислотной последовательности, приведенной под SEQ ID NO:85, и LCVR с аминокислотной последовательностью, идентичной на по меньшей мере 90%, 95% или 99% аминокислотной последовательности, приведенной под SEQ ID NO:89.

[0043] В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из алирокумаба, эволокумаба, бокоцизумаба, лоделцизумаба, ралпанцизумаба и LY3015014. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой алирокумаб.

[0044] В определенных вариантах осуществления способ дополнительно предусматривает

(c) введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 75 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента ниже порогового уровня, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента равняется пороговому уровню или превышает его.

[0045] В определенных вариантах осуществления способ дополнительно предусматривает

(c) введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 300 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые четыре недели, если уровень LDL-C у пациента ниже порогового уровня, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента равняется пороговому уровню или превышает его.

[0046] В некоторых вариантах осуществления пороговый уровень составляет 70 мг/дл.

[0047] В определенных вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно.

[0048] В определенных вариантах осуществления пациент дополнительно получает сопутствующее средство липидокорригирующей терапии (LMT). В некоторых вариантах осуществления LMT выбрано из группы, состоящей из статина, ингибитора абсорбции холестерина, фибрата, ниацина, омега-3 жирной кислоты и секвестранта желчных кислот. В определенных вариантах осуществления LMT представляет собой средство терапии на основе статина. В некоторых вариантах осуществления статин выбран из группы, состоящей из аторвастатина, розувастатина, симвастатина, правастатина, ловастатина, флувастатина, питавастатина и церивастатина. В определенных вариантах осуществления средство терапии на основе статина представляет собой средство терапии на основе статина в максимально переносимой дозе. В определенных вариантах осуществления ингибитор абсорбции холестерина представляет собой эзетимиб.

[0049] В определенных вариантах пациент страдает непереносимостью статина.

[0050] В некоторых вариантах осуществления средство терапии на основе инсулина выбрано из группы, состоящей из человеческого инсулина, инсулина гларгина, инсулина глулизина, инсулина детемир, инсулина лизпро, инсулина деглудека, инсулина аспарт и базального инсулина. В определенных вариантах осуществления пациент получает сопутствующее средство противодиабетической терапии в дополнение к средству терапии на основе инсулина. В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство противодиабетической терапии выбрано из группы, состоящей из средства терапии на основе глюкагоноподобного пептида 1 (GLP-1), желудочно-кишечного пептида, агониста или антагониста рецептора глюкагона, агониста или антагониста рецептора глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (GIP), антагониста или обратного агониста грелина, ксенина, аналога ксенина, бигуанида, сульфонилмочевины, меглитинида, тиазолидиндиона, ингибитора DPP-4, ингибитора альфа-глюкозидазы, ингибитора натрий-зависимого переносчика глюкозы 2 (SGLT-2), ингибитора SGLT-1, агониста или модулятора рецептора, активируемого пероксисомным пролифератором (PPAR-) (альфа, гамма или альфа/гамма), амилина, аналога амилина, агониста рецептора 119, связанного с G-белком (GPR119), агониста GPR40, агониста GPR120, агониста GPR142, системного или слабопоглощаемого агониста TGR5, иммунотерапевтического средства, применяемые при диабете, противовоспалительных средств для лечения метаболического синдрома и диабета, стимулятора активируемой аденозинмонофосфатом протеинкиназы (AMPK), ингибитора 11-бета-гидроксистероиддегидрогеназы 1, активатора глюкокиназы, ингибитора диацилглицерол-O-ацилтрансферазы (DGAT), модулятора глюкозного транспортера-4, агониста соматостатинового рецептора 3, гиполипидемического средства и их комбинации.

[0051] В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень LDL-C у пациента, например, на по меньшей мере 30%, 35%, 40% или 45%. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень холестерина, отличного от HDL-C, у пациента, например, на по меньшей мере 20%, 25%, 30%, 35%. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень ApoC3 у пациента. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают число и/или размер липопротеиновых частиц у пациента. В некоторых вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент

(а) не влияют на уровень гемоглобина A1c (HbA1c) у пациента и/или

(b) не влияют на уровень глюкозы в плазме крови натощак (FPG) у пациента.

[0052] В соответствии с другим аспектом способы предусматривают способ лечения гиперхолестеринемии у пациента с T2DM и ASCVD, при этом способ предусматривает

(а) отбор пациента с высоким сердечно-сосудистым риском, получающего средство терапии на основе инсулина, который имеет (i) T2DM, (ii) ASCVD и (iii) гиперхолестеринемию, недостаточно контролируемые посредством средства терапии на основе статина в максимально переносимой дозе;

(b) введение пациенту каждые две недели 75 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека; и

(c) введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 75 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента ниже 70 мг/дл, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента равняется 70 мг/дл или больше,

где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат HCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и LCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6, и где пациент получает сопутствующее средство терапии на основе инсулина.

[0053] Другие варианты осуществления будут очевидны из обзора последующего подробного описания.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

[0054] На фигуре 1 представлена диаграмма, иллюстрирующая общую схему основной фазы исследования, описанной в примере 2 в данном документе. Исследование включает период скрининга, период лечения в двойном слепом режиме и период наблюдения за данными безопасности.

[0055] На фигуре 2 представлен график, отображающий средние значения LS (+/-SE) процентного изменения рассчитанных уровней LDL-C от исходного уровня в популяции ITT пациентов с диабетом 1 типа согласно IVRS. Средние значения, определенные методом наименьших квадратов, и стандартные ошибки (SE) получены с помощью анализа на основе MMRM (модели со смешанными эффектами для повторных измерений). Модель включает фиксированные категориальные эффекты группы лечения, страты рандомизации согласно IVRS, момент времени и взаимосвязи группы лечения-момент времени, страта-момент времени, группа лечения-страта, группа лечения-страта-момент времени, а также фиксированные ковариаты значения исходного уровня LDL-C и взаимосвязь значение исходного уровня-момент времени. Модель MMRM применяли в отношении всех пациентов в популяции ITT (т. е. пациентов с диабетом 1 типа и 2 типа).

[0056] На фигуре 3 представлен график, отображающий средние значения LS (+/-SE) процентного изменения рассчитанных уровней LDL-C от исходного уровня в популяции ITT пациентов с диабетом 2 типа согласно IVRS. Средние значения, определенные методом наименьших квадратов, и стандартные ошибки (SE) получены с помощью анализа на основе MMRM (модели со смешанными эффектами для повторных измерений). Модель включает фиксированные категориальные эффекты группы лечения, страты рандомизации согласно IVRS, момент времени и взаимосвязи группы лечения-момент времени, страта-момент времени, группа лечения-страта, группа лечения-страта-момент времени, а также фиксированные ковариаты значения исходного уровня LDL-C и взаимосвязь значение исходного уровня-момент времени. Модель MMRM применяли в отношении всех пациентов в популяции ITT (т. е. пациентов с диабетом 1 типа и 2 типа).

[0057] На фигуре 4 представлен график, отображающий процентное изменение от исходного уровня до недели 24 для уровня холестерина, отличного от HDL-C, LDL-C, ApoB и LDL-PN в популяции ITT с диабетом 2 типа и ASCVD.

[0058] На фигуре 5 представлен график, отображающий процентную долю индивидуумов, достигающих уровень холестерина, отличного от HDL-C, <100 мг/дл, LDL-C <70 мг/дл и ApoB <80 мг/дл на неделе 24 в популяции ITT с диабетом 2 типа и ASCVD.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

[0059] Способы не ограничены конкретными способами и описанными экспериментальными условиями, поскольку такие способы и условия можно варьировать. Также необходимо понимать, что терминология, используемая в данном документе, предназначена лишь для целей описания конкретных вариантов осуществления и не предполагает ограничительный характер, поскольку объем представленных способов будет ограничиваться лишь прилагаемой формулой изобретения.

[0060] Если не определено иное, то все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют такое же значение, которое обычно понятно специалисту в данной области техники. Используемый в данном документе термин "приблизительно", при использовании со ссылкой на конкретное описываемое числовое значение, означает, что значение может отличаться от описываемого значения на не более чем 1%. Например, используемое в данном документе выражение "приблизительно 100" включает 99 и 101 и все значения между ними (например, 99,1, 99,2, 99,3, 99,4 и т. д.).

[0061] Хотя можно использовать любые способы и материалы, подобные или эквивалентные тем, которые описаны в данном документе, ниже описаны предпочтительные способы и материалы. Все публикации, упомянутые в данном документе, включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме.

Способы лечения пациента с гиперхолестеринемией и диабетом, получающего средство терапии на основе инсулина

[0062] Предусмотрены способы и композиции, предназначенные для лечения пациентов с диабетом, страдающих гиперхолестеринемией, получающих средство терапии на основе инсулина. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления данные способы приводят к снижению уровней липопротеинов (например, LDL-C и/или Lp(a)) в сыворотке крови таких пациентов.

[0063] Настоящее изобретение также относится к ингибитору PCSK9 (например, антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которые специфически связываются с PCSK9 (например, PCSK9 человека) или композиции, содержащей ингибитор PCSK9, для применения при лечении пациентов с диабетом, страдающих гиперхолестеринемией, получающих средство терапии на основе инсулина. В некоторых вариантах осуществления ингибитор PCSK9 или композиция пригодны для снижения уровней липопротеинов (например, LDL-C и/или Lp(a)) в сыворотке крови таких пациентов.

[0064] Используемый в данном документе термин "липопротеин" означает биомолекулярную частицу, содержащую как белок, так и липид. Примеры липопротеинов включают, например, липопротеин низкой плотности (LDL), липопротеин очень низкой плотности (VLDL), липопротеин средней плотности (IDL) и липопротеин (а) (Lp(а)).

[0065] Сахарный диабет, часто называемый просто диабетом, представляет собой группу метаболических заболеваний, при которых индивидуум имеет высокие уровни сахара в крови, либо потому, что организм не вырабатывает достаточного количества инсулина, либо потому, что клетки не реагируют на вырабатываемый инсулин. Наиболее распространенными типами диабета являются (1) диабет 1 типа, при котором организм не в состоянии вырабатывать инсулин; (2) диабет 2 типа, при котором организм не в состоянии использовать инсулин надлежащим образом в сочетании с увеличением дефицита инсулина с течением времени, и (3) гестационный диабет, при котором у женщины развивается диабет вследствие беременности. Все формы диабета увеличивают риск долговременных осложнений, которые, как правило, развиваются по прошествии многих лет. Основой большинства таких долговременных осложнений является повреждение кровеносных сосудов, и их можно разделить на две категории: "макрососудистое" заболевание, возникающее в результате атеросклероза крупных кровеносных сосудов, и "микрососудистое" заболевание, возникающее в результате повреждения мелких кровеносных сосудов. Примерами макрососудистых заболеваний являются ишемическая болезнь сердца, инфаркт миокарда, инсульт и заболевание периферических сосудов. Примерами микрососудистых заболеваний являются диабетическая ретинопатия, диабетическая нефропатия, а также диабетическая нейропатия.

[0066] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления пациент, подлежащий лечению, страдает сахарным диабетом 1 типа (T1DM) или сахарным диабетом 2 типа (T2DM) и получает средство терапии на основе инсулина. В некоторых вариантах осуществления у пациента был диагностирован T1DM или T2DM по меньшей мере один год назад. В некоторых вариантах у пациента был диагностирован T1DM в возрасте до 30 лет. В некоторых вариантах осуществления пациент с T1DM характеризуется уровнем С-пептида ниже 0,2 пмоль/мл. В некоторых вариантах осуществления пациент характеризуется уровнем гликозилированного гемоглобина (HbA1c) ниже, чем 10%.

[0067] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления пациент, подлежащий лечению, страдает гиперхолестеринемией, недостаточно контролируемой посредством средства липидокорригирующей терапии (LMT). Считается, что гиперхолестеринемия недостаточно контролируется посредством LMT, если концентрации LDL-C в сыворотке крови у пациента не снижаются до установленного, приемлемого с медицинской точки зрения уровня, например, менее 70 мг/дл (с учетом относительного риска возникновения у пациента коронарного заболевания сердца) после как минимум 4 недель лечения посредством LMT. В определенных вариантах осуществления LMT представляет собой средство терапии на основе статина в максимально переносимой дозе. Как используется в данном документе "средство терапии на основе статина в максимально переносимой дозе" означает самую высокую дозу статина, которую можно вводить пациенту без недопустимых нежелательных побочных эффектов у того пациента. Например, способы, раскрытые в данном документе, предусматривают лечение пациента с T1DM или T2DM, страдающего гиперхолестеринемией, недостаточно контролируемой посредством суточной дозы статина, выбранного из группы, состоящей из аторвастатина (в том числе аторвастатин+эзетимиб), розувастатина, церивастатина, питавастатина, флувастатина, ловастатина, симвастатина (в том числе симвастатин+эзетимиб), правастатина и их комбинаций. В определенных вариантах осуществления пациент не получает сопутствующую терапию с помощью статина, если пациент страдает непереносимостью такой терапии. Пациенты с непереносимостью статина могут иметь, например, симптомы, связанные со скелетными мышцами, помимо тех, которые возникают из-за растяжения или травмы, такие как боль, ломота, слабость или спазмы, которые возникают или усиливаются во время приема средства терапии на основе статина и исчезают при прекращении приема средства терапии на основе статина.

Отбор пациентов

[0068] Способы и композиции по настоящему изобретению пригодны для лечения пациентов, имеющих гиперхолестеринемию и диабет и получающих средство терапии на основе инсулина. Пациент, подлежащий лечению, может также демонстрировать один или несколько дополнительных критериев для отбора. Например, пациент может быть отобран для лечения, если у пациента рассчитанный уровень LDL-C равняется 70 мг/дл, 100 мг/дл или 130 мг/дл или больше. Лечение пациента можно осуществлять с помощью максимально переносимой дозы статина, необязательно в комбинации с по меньшей мере одним другим средством липидокорригирующей терапии (LMT) в течение по меньшей мере 4 недель, или при этом лечение пациента осуществляли посредством оптимальной дозы по меньшей мере одного отличного от статина LMT в течение по меньшей мере 4 недель, если пациент страдает непереносимостью статина. Максимально переносимая доза статина может быть определена, например, как доза, назначаемая в соответствии с региональной практикой или принципами местного руководства, или представляет собой дозу, которая является максимально переносимой вследствие возникновения нежелательных эффектов при более высоких дозах, как указано в местном листке-вкладыше для пациентов детского возраста. Непереносимость статина может быть определена, например, как неспособность переносить по меньшей мере 2 статина: один статин в самой низкой суточной начальной дозе и другой статин в любой дозе из-за связанных со скелетными мышцами симптомов, отличных от симптомов, возникающих из-за растяжения или травмы, таких как боль, ломота, слабость или спазмы, которые возникали или усиливались во время приема средства терапии на основе статина и исчезали после прекращения приема средства терапии на основе статина. Пациенты, не получающие статин в соответствии с ежесуточной схемой приема (например, от 1 до 3 раз в неделю), также считаются не способными переносить суточную дозу.

[0069] Кроме того, пациент может быть отобран для лечения, если пациент характеризуется высоким риском возникновения сердечно-сосудистых заболеваний (CV). В некоторых вариантах осуществления пациент с высоким риском CV имеет документально подтвержденный анамнез сердечно-сосудистого заболевания (CVD) и/или по меньшей мере один дополнительный фактор риска CV. CVD включает без ограничения ишемическую болезнь сердца (CHD) и эквивалентные риски CHD. CHD включает без ограничения острый инфаркт миокарда (MI), бессимптомный MI, нестабильную стенокардию, процедуру коронарной реваскуляризации (например, чрескожную коронарную ангиопластику (PCI) или хирургическое вмешательство по шунтированию коронарных артерий (CABG)) и клинически значимое CHD (например, диагностированное с помощью инвазивных или неинвазивных обследований, таких как коронарография, электрокардиограмма с нагрузкой на беговой дорожке, стресс-эхокардиография или радионуклидная визуализация). Эквивалентные риски CHD включают без ограничения заболевание периферических артерий (например, как описано в критериях включения в примере 2) и предшествующий ишемический инсульт с очаговым ишемическим неврологическим дефицитом, который сохраняется более 24 часов, атеротромботического происхождения. Факторы риска CV включают без ограничения гипертонию, текущее курение сигарет, возраст ≥45 лет для мужчин и ≥55 лет для женщин, микро/макроальбуминурию в анамнезе, диабетическую ретинопатию в анамнезе, семейный анамнез преждевременной CHD (у отца или брата в возрасте до 55 лет; у матери или сестры в возрасте до 65 лет), низкий уровень HDL-C (у мужчин <40 мг/дл [1,0 ммоль/л] и у женщин <50 мг/дл [1,3 ммоль/л]) и документально подтвержденное хроническое заболевание почек (CKD) (например, как определено в критериях включения в примере 2).

[0070] В некоторых вариантах осуществления пациент с высоким риском CV имеет атеросклеротическое сердечно-сосудистое заболевание (ASCVD). В некоторых вариантах осуществления ASCVD определяется как ишемическая болезнь сердца (CHD), ишемический инсульт или заболевание периферических артерий. В некоторых вариантах осуществления CHD включает острый инфаркт миокарда, бессимптомный инфаркт миокарда и нестабильную стенокардию. В некоторых вариантах осуществления CHD определяют как острый инфаркт миокарда, бессимптомный инфаркт миокарда или нестабильную стенокардию.

Средство терапии на основе инсулина

[0071] Как указано в данном документе, пациенты с диабетом, отобранные для лечения с помощью способов по настоящему изобретению, получали и продолжают получать средство терапии на основе инсулина, включающую инсулин или его производные. Виды инсулина, представленные на рынке, отличаются по происхождению инсулина (например, бычий, свиной, человеческий инсулин), а также по их составу, что может влиять профиль действия (начало действия и продолжительность действия). Посредством комбинирования различных продуктов на основе инсулина, можно получить широкий спектр профилей действия и установить уровни сахара в крови, максимально приближенные к физиологическим. Иллюстративные средства терапии на основе инсулина могут включать природный инсулин, такой как человеческий инсулин, а также модифицированные виды инсулина с увеличенной продолжительностью действия, такие как инсулин гларгин (Gly(A21)-Arg(B31)-Arg(B32) человеческий инсулин, например, Lantus^®). Инсулин гларгин вводят в виде кислого прозрачного раствора и благодаря свойствам его раствора в физиологическом диапазоне рН подкожной ткани осаждается в виде стабильного гексамерного ассоциата. Инсулин гларгин вводят один раз в сутки и он отличается от других видов инсулина с длительной активностью своим плоским сывороточным профилем и связанным с этим снижением риска ночных гипогликемий (Schubert-Zsilavecz et al., 2:125-130 (2001)). Инсулин гларгин можно вводить в концентрациях выше 100 Ед/мл, например 270-330 Ед/мл инсулина гларгина или 300 Ед/мл инсулина гларгина (как описано в ЕР 2387989). Другие иллюстративные средства терапии на основе инсулина включают инсулин глулизин (например, Apidra^®), инсулин детемир (например, Levemir^®), инсулин лизпро (например, Humalog^®, Liprolog^®), инсулин деглудек (например, DegludecPlus^®, IdegLira (NN9068)), инсулин аспарт и составы на основе инсулина аспарта (например, NovoLog^®), базальный инсулин и аналоги (например, LY2605541, LY2963016, NN1436), пегилированный инсулин лизпро (например, LY-275585), инсулины длительного действия (например, NN1436, Insumera (PE0139), AB-101, AB-102, Sensulin LLC), инсулины средней продолжительности действия (например, Humulin^®N, Novolin^®N), виды инсулина быстрого действия и кратковременного действия (например, Humulin^®R, Novolin^®R, Linjeta^® (VIAject^®), инсулин PH20, NN1218, HinsBet^®), предварительно смешанные виды инсулина, SuliXen^®, NN1045, инсулин плюс Symlin^®, PE-0139, включенный в гидрогель инсулин ACP-002 и виды инсулина для перорального, ингаляционного, трансдермального и буккального или сублингвального введения (например, Exubera^®, Nasulin^®, Afrezza^®, инсулин трегопил, инсулин TPM-02, Capsulin^®, Oral-lyn^®, инсулин Cobalamin^® для перорального введения, ORMD-0801, инсулин Oshadi для перорального введения, NN1953, NN1954, NN1956, VIAtab^®). Также подходящими являются такие производные инсулина, которые связаны с альбумином или другим белком с помощью бифункционального линкера.

Ингибиторы PCSK9

[0072] Способы предусматривают введение пациенту терапевтической композиции, содержащей ингибитор PCSK9. Используемый в данном документе "ингибитор PCSK9" означает любое средство, которое связывается или взаимодействует с PCSK9 человека и ингибирует нормальную биологическую функцию PCSK9 in vitro или in vivo. Неограничивающие примеры категорий ингибиторов PCSK9 включают низкомолекулярные антагонисты PCSK9, ингибиторы экспрессии или активности PCSK9 на основе нуклеиновых кислот (например, siRNA или антисмысловые), молекулы на основе пептидов, которые специфически взаимодействуют с PCSK9 (например, пептидные антитела), молекулы рецепторов, которые специфически взаимодействуют с PCSK9, белки, содержащие лиганд-связывающую часть рецептора LDL, каркасные молекулы, связывающие PCSK9 (например, сконструированные белки с анкириновым повтором, белки с повтором HEAT, белки с повтором ARM, белки с повтором тетратрикопептида, основанные на фибронектине каркасные конструкции и другие каркасы, основанные на встречающихся в природе белках с повторами и т. д. [см., например, Boersma and Pluckthun, 2011, Curr. Opin. Biotechnol. 22: 849-857, и ссылки, цитируемые в них]), и аптамеры к PCSK9 или их части. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления ингибиторы PCSK9, которые можно использовать в контексте способов по настоящему изобретению, представляют собой антитела к PCSK9 или антигенсвязывающие фрагменты антител, которые специфически связывают PCSK9 человека.

[0073] Термин "пропротеиновая конвертаза субтилизин/кексинового типа 9 человека", или "PCSK9 человека", или "hPCSK9", используемый в данном документе, относится к PCSK9 с последовательностью нуклеиновой кислоты, представленной под SEQ ID NO:197, и аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO:198 или его биологически активному фрагменту.

[0074] Термин "антитело", используемый в данном документе, предназначен для обозначения молекул иммуноглобулинов, содержащих четыре полипептидные цепи, две тяжелые (H) цепи и две легкие (L) цепи, соединенные между собой дисульфидными связями, а также их мультимеров (например, IgM). Каждая тяжелая цепь содержит вариабельную область тяжелой цепи (в данном документе обозначен аббревиатурой HCVR или V_H) и константную область тяжелой цепи. Константная область тяжелой цепи содержит три домена: C_H1, C_H2 и C_H3. Каждая легкая цепь содержит вариабельную область легкой цепи (в данном документе обозначена аббревиатурой LCVR или V_L) и константную область легкой цепи. Константная область легкой цепи содержит один домен (C_L1). Области V_H и V_L можно дополнительно подразделять на области гипервариабельности, называемые областями, определяющими комплементарность (CDR), чередующиеся с областями, которые являются более консервативными, называемыми каркасными областями (FR). Каждый V_H и V_L состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных от амино-конца к карбокси-концу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Согласно различным вариантам осуществления FR антитела к PCSK9 (или его антигенсвязывающего участка) могут быть идентичны последовательностям иммуноглобулина зародышевой линии человека или могут быть изменены естественным или искусственным путем. Аминокислотная консенсусная последовательность может быть определена на основании анализа "бок-о-бок" двух или более CDR.

[0075] Термин "антитело", используемый в данном документе, также включает антигенсвязывающие фрагменты целых молекул антител. Термины "антигенсвязывающая часть" антитела, "антигенсвязывающий фрагмент" антитела и т. п., используемые в данном документе, включают любой встречающийся в природе, получаемый ферментативным путем, синтетический или полученный с помощью методик генной инженерии полипептид или гликопротеин, который специфически связывает антиген с образованием комплекса. Антигенсвязывающие фрагменты антитела могут быть получены, например, из целых молекул антител с помощью любых подходящих стандартных методик, таких как протеолитическое расщепление или рекомбинантные технологии генной инженерии, включающие манипуляцию с ДНК, кодирующей вариабельные и необязательно константные домены антител, и ее экспрессию. Такая ДНК известна и/или легкодоступна, например, из коммерческих источников, библиотек ДНК (в том числе, например, библиотек "фаг-антитело"), или ее можно синтезировать. ДНК можно секвенировать и с ней можно проводить химические манипуляции или манипуляции с помощью методик молекулярной биологии, например, для расположения одного или нескольких вариабельных и/или константных доменов в подходящей конфигурации или для введения кодонов, создания цистеиновых остатков, модификации, добавления или удаления аминокислот и т. д.

[0076] Неограничивающие примеры антигенсвязывающих фрагментов включают (i) Fab-фрагменты; (ii) F(ab')2-фрагменты; (iii) Fd-фрагменты; (iv) Fv-фрагменты; (v) одноцепочечные молекулы Fv (scFv); (vi) dAb-фрагменты и (vii) минимальные распознающие единицы, состоящие из аминокислотных остатков, имитирующих гипервариабельную область антитела (например, выделенную определяющую комплементарность область (CDR), такую как пептид CDR3), или пептид c ограниченной конформационной свободой FR3-CDR3-FR4. Другие сконструированные молекулы, такие как домен-специфические антитела, однодоменные антитела, антитела с удаленным доменом, химерные антитела, CDR-привитые антитела, диатела, триатела, тетратела, минитела, нанотела (например, моновалентные антитела, бивалентные антитела и т. д.), иммунопрепараты на основе модульного белка с малым размером молекул (SMIP) и вариабельные домены IgNAR акулы, также включены в выражение "антигенсвязывающий фрагмент", используемое в данном документе.

[0077] Антигенсвязывающий фрагмент антитела, как правило, будет содержать по меньшей мере один вариабельный домен. Вариабельный домен может быть любого размера или аминокислотного состава и будет, как правило, содержать по меньшей мере одну CDR, которая прилегает к рамке считывания с одной или несколькими каркасными последовательностями или находится в ней. В антигенсвязывающих фрагментах, имеющих домен V_H, связанный с доменом V_L, домены V_H и V_L могут быть расположены относительно друг друга в любом подходящем расположении. Например, вариабельная область может быть димерной и содержать димеры V_H-V_H, V_H-V_L или V_L-V_L. Альтернативно антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать мономерный домен V_H или V_L.

[0078] В определенных вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать по меньшей мере один вариабельный домен, ковалентно связанный c по меньшей мере одним константным доменом. Неограничивающие иллюстративные конфигурации вариабельных и константных доменов, которые можно выявить в антигенсвязывающем фрагменте антитела, включают (i) V_H-C_H1; (ii) V_H-C_H2; (iii) V_H-C_H3; (iv) V_H-C_H1-C_H2; (v) V_H-C_H1-C_H2-C_H3; (vi) V_H-C_H2-C_H3; (vii) V_H-C_L; (viii) V_L-C_H1; (ix) V_L-C_H2; (x) V_L-C_H3; (xi) V_L-C_H1-C_H2; (xii) V_L-C_H1-C_H2-C_H3; (xiii) V_L-C_H2-C_H3 и (xiv) V_L-C_L. В любой конфигурации вариабельных и константных доменов, в том числе любых иллюстративных конфигурациях, перечисленных выше, вариабельные и константные домены могут быть либо непосредственно связаны друг с другом, либо могут быть связаны с помощью целой или неполной шарнирной или линкерной области. Шарнирная область может состоять из по меньшей мере 2 (например, 5, 10, 15, 20, 40, 60 или более) аминокислот, которые приводят к образованию гибкой или полугибкой связи между смежными вариабельными и/или константными доменами в одной молекуле полипептида. Кроме того, антигенсвязывающий фрагмент антитела может содержать гомодимер или гетеродимер (или другой мультимер) из любых конфигураций вариабельных и константных доменов, изложенных выше, в нековалентной ассоциации друг с другом и/или с одним или несколькими мономерными доменами V_H или r V_L (например, с помощью дисульфидной связи(связей)).

[0079] Как и в случае с целыми молекулами антител антигенсвязывающие фрагменты могут быть моноспецифическими или мультиспецифическими (например, биспецифическими). Мультиспецифический антигенсвязывающий фрагмент антитела будет, как правило, содержать по меньшей мере два различных вариабельных домена, где каждый вариабельный домен способен специфически связываться с отдельным антигеном или с другим эпитопом того же антигена. Любой формат мультиспецифических антител, в том числе форматы иллюстративных биспецифических антител, раскрытых в данном документе, могут быть адаптированы для применения в контексте антигенсвязывающего фрагмента антитела согласно способам по настоящему изобретению с помощью стандартных методик, доступных в данной области техники.

[0080] Константная область антитела важна с точки зрения способности антитела связывать комплемент и опосредовать клеточнозависимую цитотоксичность. Таким образом, изотип антитела может быть выбран на основании того, требуется ли антителу опосредовать цитотоксичность.

[0081] Термин "человеческое антитело", используемый в данном документе, предназначен для включения антител, имеющих вариабельные и константные области, полученные из последовательностей иммуноглобулинов зародышевой линии человека. Человеческие антитела могут включать аминокислотные остатки, не кодируемые последовательностями иммуноглобулинов зародышевой линии человека (например, мутации, вводимые случайным или сайт-специфичным мутагенезом in vitro или соматической мутацией in vivo), например в CDR, и в частности CDR3. Однако термин "человеческое антитело", используемый в данном документе, не предназначен для включения антител, в которых последовательности CDR, полученные из зародышевой линии другого вида млекопитающего, такого как мышь, привиты на каркасные последовательности человека.

[0082] Термин "рекомбинантное человеческое антитело", используемый в данном документе, предназначен для включения всех человеческих антител, которые получены, экспрессированы, созданы или выделены рекомбинантными способами, таких как антитела, экспрессируемые с помощью рекомбинантного вектора экспрессии, трансфицированного в клетку-хозяина (описанные подробнее далее), антитела, выделенные из комбинаторной библиотеки рекомбинантных человеческих антител (описанные подробнее далее), антитела, выделенные из животного (например, мыши), которое является трансгенным по генам иммуноглобулинов человека (см., например, Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295), или антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные посредством любых других способов, которые включают соединение последовательностей генов человеческих иммуноглобулинов с другими последовательностями ДНК. Такие рекомбинантные человеческие антитела имеют вариабельные и константные области, полученные из последовательностей иммуноглобулинов зародышевой линии человека. Однако согласно определенным вариантам осуществления такие рекомбинантные человеческие антитела подвергают in vitro мутагенезу (или в случае использования животного, трансгенного по последовательностям человеческого Ig, in vivo соматическому мутагенезу) и, таким образом, аминокислотные последовательности областей V_H и V_L рекомбинантных антител представляют собой последовательности, которые, хотя и происходят из последовательностей V_H и V_L зародышевой линии человека и связаны с ними, могут не встречаться в природе в наборе антител зародышевой линии человека in vivo.

[0083] Человеческие антитела могут встречаться в двух формах, что связано с гетерогенностью шарнирных областей. В одной форме молекула иммуноглобулина содержит стабильную четырехцепочечную конструкцию массой примерно 150-160 кДа, в которой димеры удерживаются вместе посредством дисульфидной связи, которая связывает тяжелые цепи. Во второй форме димеры не соединены дисульфидными связями, связывающими цепи, и образуется молекула массой приблизительно 75-80 кДа, состоящая из ковалентно связанных легкой и тяжелой цепей (полуантитело). Эти формы крайне сложно разделить даже после аффинной очистки.

[0084] Частота появления второй формы в различных изотипах интактных IgG обусловлена без ограничения структурными различиями, связанными с изотипом шарнирной области антитела. Единственная аминокислотная замена в шарнирной области шарнира человеческого IgG4 может значимо снизить появление второй формы (Angal et al. (1993) Molecular Immunology 30:105) до уровней, обычно наблюдаемых при использовании шарнира человеческого IgG1. Способы по настоящему изобретению охватывают антитела с одной или несколькими мутациями в шарнирной области, области C_H2 или C_H3, что может быть предпочтительным, например, при получении, для повышения выхода предпочтительной формы антитела.

[0085] Термин "выделенное антитело", используемый в данном документе, означает антитело, которое было идентифицировано и отделено и/или извлечено из по меньшей мере одного компонента своего естественного окружения. Например, антитело, которое было отделено или извлечено от/из по меньшей мере одного компонента организма или ткани или клетки, в которых антитело изначально присутствует или продуцируется естественным путем, представляет собой "выделенное антитело" для целей способов по настоящему изобретению. Выделенное антитело также включает антитело in situ в рекомбинантной клетке. Выделенные антитела представляют собой антитела, которые были подвергнуты по меньше мере одной стадии очистки или выделения. Согласно определенным вариантам осуществления выделенное антитело может практически не содержать другого клеточного материала и/или других химических соединений.

[0086] Термин "специфически связывает" и т. п. означает, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент образуют комплекс с антигеном, который является сравнительно устойчивым в физиологических условиях. Способы определения наличия специфического связывания антитела с антигеном хорошо известны из уровня техники и включают, например, равновесный диализ, поверхностный плазмонный резонанс и т. п. Например, антитело, которое "специфически связывает" PCSK9, как используется в контексте способов по настоящему изобретению, включает антитела, которые связывают PCSK9 или его часть с K_D, составляющей менее приблизительно 1000 нМ, менее приблизительно 500 нМ, менее приблизительно 300 нМ, менее приблизительно 200 нМ, менее приблизительно 100 нМ, менее приблизительно 90 нМ, менее приблизительно 80 нМ, менее приблизительно 70 нМ, менее приблизительно 60 нМ, менее приблизительно 50 нМ, менее приблизительно 40 нМ, менее приблизительно 30 нМ, менее приблизительно 20 нМ, менее приблизительно 10 нМ, менее приблизительно 5 нМ, менее приблизительно 4 нМ, менее приблизительно 3 нМ, менее приблизительно 2 нМ, менее приблизительно 1 нМ или менее приблизительно 0,5 нМ, измеренной в анализе поверхностного плазмонного резонанса. Однако выделенное антитело, которое специфически связывается с PCSK9 человека, характеризуется перекрестной реактивностью по отношению к другим антигенам, таким как молекулы PCSK9 из других (не относящихся к человеку) видов.

[0087] Антитела к PCSK9, пригодные для способов по настоящему изобретению, могут содержать одну или несколько аминокислотных замен, вставок и/или делеций в каркасных областях и/или областях CDR вариабельных доменов тяжелой и легкой цепей по сравнению с соответствующими последовательностями зародышевой линии, из которых были получены антитела. Такие мутации можно легко определить посредством сравнения аминокислотных последовательностей, раскрытых в данном документе, с последовательностями зародышевой линии, доступными, например, из публичных баз данных последовательностей антител. Способы предусматривают применение антител и их антигенсвязывающих фрагментов, которые получены из любых аминокислотных последовательностей, раскрытых в данном документе, где одна или несколько аминокислот в одном или нескольких каркасных областях и/или областях CDR подвергнуты мутации по отношению к соответствующему остатку(остаткам) последовательности зародышевой линии, из которой антитело было получено, или в соответствующий остаток(остатки) последовательности другой зародышевой линии человека, или по отношению к консервативной аминокислотной замене соответствующего остатка(остатков) зародышевой линии (такие изменения последовательностей называются в данном документе собирательно как "мутации зародышевой линии"). Специалист в данной области техники, исходя из последовательностей вариабельных областей тяжелой и легкой цепей, раскрытых в данном документе, может легко получить множество антител и антигенсвязывающих фрагментов, которые содержат одну или несколько отдельных мутаций зародышевой линии или их комбинации. Согласно определенным вариантам осуществления все остатки каркасных областей и/или CDR в доменах V_H и/или V_L обратно подвергнуты мутации в остатки, встречающиеся в исходной последовательности зародышевой линии, из которой произошло антитело. Согласно другим вариантам осуществления только определенные остатки обратно подвергнуты мутации в остатки исходной последовательности зародышевой линии, например, подвергнуты мутации только остатки, расположенные в первых 8 аминокислотах FR1 или в последних 8 аминокислотах FR4, или подвергнуты мутации только остатки, расположенные в CDR1, CDR2 или CDR3. Согласно другим вариантам осуществления один или несколько остатков каркасных областей и/или CDR подвергнуты мутации в соответствующий остаток(остатки) последовательности другой зародышевой линии (т. е. последовательности зародышевой линии, которая отличается от последовательности зародышевой линии, из которой изначально произошло антитело). Кроме того, антитела могут содержать любую комбинацию из двух или более мутаций зародышевых линий в каркасных областях и/или областях CDR, например, где определенные отдельные остатки подвергнуты мутации в соответствующий остаток последовательности определенной зародышевой линии, в то время как определенные другие остатки, которые отличаются от последовательности исходной зародышевой линии, сохраняются или подвергнуты мутации в соответствующий остаток последовательности другой зародышевой линии. Сразу после получения антитела и антигенсвязывающие фрагменты, которые содержат одну или несколько мутаций зародышевой линии, могут быть легко протестированы в отношении одного или нескольких требуемых свойств, таких как улучшенная специфичность связывания, повышенная аффинность связывания, улучшенные или усиленные биологические антагонистические или агонистические свойства (в случае необходимости), сниженная иммуногенность и т. п. Применение антител и антигенсвязывающих фрагментов, полученных с помощью этого общего способа, охвачено способами по настоящему изобретению.

[0088] Способы предусматривают применение антител к PCSK9, содержащих варианты любых из аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, раскрытых в данном документе, с одной или несколькими консервативными заменами. Например, способы по настоящему изобретению включает применение антител к PCSK9 с аминокислотными последовательностями HCVR, LCVR и/или CDR с, например, 10 или менее, 8 или менее, 6 или менее, 4 или менее и т. д., консервативными аминокислотными заменами относительно любой из аминокислотных последовательностей HCVR, LCVR и/или CDR, раскрытых в данном документе.

[0089] Термин "поверхностный плазмонный резонанс", используемый в данном документе, относится к оптическому феномену, который обеспечивает возможность анализа взаимодействий в реальном времени посредством выявления изменений концентраций белков в биосенсорной матрице, например, с помощью системы BIAcore™ (отдел Biacore Life Sciences в GE Healthcare, Пискатауэй, Нью-Джерси).

[0090] Термин "K_D", используемый в данном документе, относится к равновесной константе диссоциации взаимодействия определенного антитела и антигена.

[0091] Термин "эпитоп" относится к антигенной детерминанте, которая взаимодействует со специфическим антигенсвязывающим сайтом в вариабельной области молекулы антитела, известном как паратоп. Один антиген может иметь более одного эпитопа. Таким образом, различные антитела могут связываться с различными участками на антигене и могут оказывать различные биологические эффекты. Эпитопы могут быть конформационными или линейными. Конформационный эпитоп образован пространственно сближенными аминокислотами из различных сегментов линейной полипептидной цепи. Линейный эпитоп образован смежными аминокислотными остатками в полипептидной цепи. При определенных условиях эпитоп может включать фрагменты сахаридов, фосфорильных групп или сульфонильных групп антигена.

[0092] Согласно определенным вариантам осуществления антитело к PCSK9, используемое в способах, является антителом с pH-зависимыми характеристиками связывания. Используемое в данном документе выражение "pH-зависимое связывание" означает, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент проявляют "сниженное связывание с PCSK9 при кислом pH по сравнению с нейтральным pH" (для целей настоящего раскрытия оба выражения могут использоваться взаимозаменяемо). Например, антитела "с pH-зависимыми характеристиками связывания" включают антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые связываются с PCSK9 с более высокой аффинностью при нейтральном pH, чем при кислом pH. В определенных вариантах осуществления антитела и антигенсвязывающие фрагменты связывают PCSK9 с в по меньшей мере 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, раз или более высокой аффинностью при нейтральном pH, чем при кислом pH.

[0093] Согласно данному аспекту антитела к PCSK9 с pH-зависимыми характеристиками связывания могут характеризоваться одной или несколькими аминокислотными вариациями относительно исходного антитела к PCSK9. Например, антитело к PCSK9 с pH-зависимыми характеристиками связывания может содержать одну или несколько замен на гистидин или вставок из гистина, например, в одной или нескольких CDR исходного антитела к PCSK9. Таким образом, согласно определенным вариантам осуществления представлены способы, предусматривающие введение антитела к PCSK9, которое содержит аминокислотные последовательности CDR (например, CDR тяжелой и легкой цепи), которые идентичны аминокислотным последовательностям CDR исходного антитела к PCSK9, за исключением замены одной или нескольких аминокислот в одной или нескольких CDR исходного антитела на остаток гистидина. Антитела к PCSK9 с pH-зависимым связыванием могут характеризоваться, например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или более заменами на гистидин, либо в пределах одной CDR исходного антитела, либо распределенными в нескольких (например, 2, 3, 4, 5 или 6) CDR исходного антитела к PCSK9. Например, способы по настоящему изобретению включают применение антител к PCSK9 с pH-зависимым связыванием, содержащих одну или несколько замен на гистидин в HCDR1, одну или несколько замен на гистидин в HCDR2, одну или несколько замен на гистидин в HCDR3, одну или несколько замен на гистидин в LCDR1, одну или несколько замен на гистидин в LCDR2 и/или одну или несколько замен на гистидин в LCDR3 исходного антитела к PCSK9.

[0094] Как используется в данном документе, выражение "кислый pH" означает pH 6,0 или меньше (например, менее приблизительно 6,0, менее приблизительно 5,5, менее приблизительно 5,0 и т. п.). Выражение "кислый pH" включает значения pH, составляющие приблизительно 6,0, 5,95, 5,90, 5,85, 5,8, 5,75, 5,7, 5,65, 5,6, 5,55, 5,5, 5,45, 5,4, 5,35, 5,3, 5,25, 5,2, 5,15, 5,1, 5,05, 5,0, или меньше. Используемое в данном документе выражение "нейтральный pH" означает значение pH, составляющее от приблизительно 7,0 до приблизительно 7,4. Выражение "нейтральный pH" включает значения pH, составляющие приблизительно 7,0, 7,05, 7,1, 7,15, 7,2, 7,25, 7,3, 7,35, и 7,4.

[0095] Неограничивающие примеры антител к PCSK9, которые можно использовать в контексте способов по настоящему изобретению, включают, например, алирокумаб, эволокумаб, бокоцизумаб, лоделцизумаб, ралпанцизумаб, LY3015014 или антигенсвязывающие участки любого из вышеуказанных антител.

Получение человеческих антител

[0096] Из уровня техники известны способы получения человеческих антител в трансгенных мышах. Любые такие известные способы можно применять в контексте способов по настоящему изобретению для создания человеческих антител, которые специфически связываются с PCSK9 человека.

[0097] С помощью технологии VELOCIMMUNE™ (см., например, US 6596541, Regeneron Pharmaceuticals) или любого другого известного способа получения моноклональных антител изначально выделяют высокоаффинные химерные антитела к PCSK9 с человеческой вариабельной областью и мышиной константной областью. Технология VELOCIMMUNE^® включает получение трансгенной мыши с геномом, содержащим вариабельные области человеческих тяжелой и легкой цепей, функционально связанные с эндогенными мышиными локусами константной области так, что мышь продуцирует антитело, содержащее человеческую вариабельную область и мышиную константную область в ответ на антигенную стимуляцию. ДНК, кодирующую вариабельные области тяжелой и легкой цепей антитела, выделяют и функционально связывают с ДНК, кодирующей константные области человеческих тяжелой и легкой цепей. Затем ДНК экспрессируют в клетке, способной экспрессировать полностью человеческое антитело.

[0098] Как правило, на мышь, полученную с помощью VELOCIMMUNE^®, воздействуют антигеном, представляющим интерес, и из мышей, которые экспрессируют антитела, извлекают лимфатические клетки (такие как B-клетки). Лимфатические клетки можно сливать с линией клеток миеломы с получением иммортализированных линий клеток гибридомы, и такие линии клеток гибридомы подвергают скринингу и отбирают для идентификации линий клеток гибридомы, которые продуцируют антитела, специфические в отношении антигена, представляющего интерес. ДНК, кодирующую вариабельные области тяжелой цепи и легкой цепи, можно выделить и связать с константными областями требуемых изотипов тяжелой цепи и легкой цепи. Такой белок-антитело можно получать в клетке, такой как клетка CHO. Альтернативно ДНК, кодирующую антиген-специфические химерные антитела или вариабельные домены легкой и тяжелой цепей, можно выделить непосредственно из антиген-специфических лимфоцитов.

[0099] Изначально выделяют высокоаффинные химерные антитела с человеческой вариабельной областью и мышиной константной областью. Антитела характеризуют и выбирают по требуемым характеристикам, в том числе по аффинности, селективности, эпитопу и т. д., с помощью общепринятых процедур, известных специалистам в данной области техники. Мышиные константные области заменяют требуемой человеческой константной областью с получением полностью человеческого антитела, например IgG1 или IgG4 дикого типа или модифицированного IgG1 или IgG4. В то время как выбранная константная область может варьировать в зависимости от конкретного применения, у вариабельной области сохраняются характеристики высокоаффинного связывания с антигеном и специфичности в отношении мишеней.

[00100] Как правило, антитела, которые можно использовать, характеризуются высокой аффинностью, как описано выше, при измерении связывания с антигеном как при иммобилизации на твердой фазе, так и в жидкой фазе. Мышиные константные области заменяют требуемыми человеческими константными областями с получением полностью человеческих антител. В то время как выбранная константная область может варьировать в зависимости от конкретного применения, у вариабельной области сохраняются характеристики высокоаффинного связывания с антигеном и специфичности в отношении мишеней.

[00101] Конкретные примеры человеческих антител или антигенсвязывающих фрагментов антител, которые специфически связываются с PCSK9, которые можно применять в контексте способов по настоящему изобретению, включают любое антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которые содержат три CDR тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3), содержащиеся в вариабельной области тяжелой цепи (HCVR), с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:1 и 11 или практически подобной им последовательности, которая характеризуется по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности. Альтернативно конкретные примеры человеческих антител или антигенсвязывающих фрагментов антител, которые специфически связываются с PCSK9, которые можно применять в контексте способов по настоящему изобретению, включают любое антитело или антигенсвязывающий фрагмент, которые содержат три CDR тяжелой цепи (HCDR1, HCDR2 и HCDR3), содержащиеся в вариабельной области тяжелой цепи (HCVR), с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOs 37, 45, 53, 61, 69, 77, 85, 93, 101, 109, 117, 125, 133, 141, 149, 157, 165, 173, 181, и 189, или по сути подобной им последовательности, которая характеризуется по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности. Антитело или антигенсвязывающий фрагмент могут содержать три CDR легкой цепи (LCVR1, LCVR2 и LCVR3), содержащиеся в вариабельной области тяжелой цепи (LCVR), с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO:6 и 15, или практически подобной ее последовательности, которая характеризуется по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности. Альтернативно антитело или антигенсвязывающий фрагмент могут содержать три CDR легкой цепи (LCVR1, LCVR2 и LCVR3), содержащиеся в вариабельной области легкой цепи (LCVR), с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOs 41, 49, 57, 65, 73, 81, 89, 97, 105, 113, 121, 129, 137, 145, 153, 161, 169, 177, 185, и 193, или по сути подобной им последовательности, которая характеризуется по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95%, по меньшей мере 98% или по меньшей мере 99% идентичностью последовательности.

[00102] Идентичность последовательностей между двумя аминокислотными последовательностями определяют по всей длине эталонной аминокислотной последовательности, т. е. аминокислотной последовательности, определенной под SEQ ID NO, с помощью наилучшего выравнивания последовательностей, и/или по области наилучшего выравнивания последовательностей между двумя аминокислотными последовательностями, где наилучшее выравнивание последовательностей можно получить известными из уровня техники способами, например, Align, с использованием стандартных установок, предпочтительно EMBOSS::needle, Matrix: Blosum62, Gap Open 10.0, Gap Extend 0.5.

[00103] Согласно определенным вариантам осуществления антитело или антигенсвязывающий белок содержат шесть CDR (HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3) из пар аминокислотных последовательностей вариабельной области тяжелой и легкой цепи (HCVR/LCVR), выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO:1/6 и 11/15. Альтернативно в определенных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий белок содержат шесть CDR (HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 и LCDR3) из пар аминокислотных последовательностей вариабельной области тяжелой и легкой цепи (HCVR/LCVR), выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NOs:37/41, 45/49, 53/57, 61/65, 69/73, 77/81, 85/89, 93/97, 101/105, 109/113, 117/121, 125/129, 133/137, 141/145, 149/153, 157/161, 165/169, 173/177, 181/185, и 189/193.

[00104] Согласно определенным вариантам осуществления антитело к PCSK9 или антигенсвязывающий белок, которые можно применять в способах по настоящему изобретению, имеет аминокислотные последовательности HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3, выбранные из SEQ ID NO: 2/3/4/7/8/10 (mAb316P [также обозначаемое как "REGN727" или "алирокумаб"]) и 12/13/14/16/17/18 (mAb300N) (см. опубл. патентную заявку США № 2010/0166768) и 12/13/14/16/17/18, где SEQ ID NO:16 содержит замену гистидина на лейцин в аминокислотном остатке 30 (L30H).

[00105] В определенных вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий белок содержат пары аминокислотных последовательностей HCVR/LCVR, выбранные из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1/6 и 11/15. В определенных иллюстративных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий белок содержат аминокислотную последовательность HCVR под SEQ ID NO: 1 и аминокислотную последовательность LCVR под SEQ ID NO: 6. В определенных иллюстративных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий белок содержат аминокислотную последовательность HCVR под SEQ ID NO: 11 и аминокислотную последовательность LCVR под SEQ ID NO: 15. В определенных иллюстративных вариантах осуществления антитело или антигенсвязывающий белок содержат аминокислотную последовательность HCVR под SEQ ID NO: 11 и аминокислотную последовательность LCVR под SEQ ID NO: 15, содержащую замену гистидина на лейцин в аминокислотном остатке 30 (L30H).

Фармацевтические композиции и способы введения

[00106] Способы по настоящему изобретению предусматривают введение пациенту ингибитора PCSK9, где ингибитор PCSK9 содержится в фармацевтической композиции. Фармацевтические композиции составляют с подходящими носителями, наполнителями и другими средствами, которые обеспечивают подходящий перенос, доставку, переносимость и т. п. Множество подходящих составов можно найти в справочнике, известном химикам-фармацевтам: Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Истон, Пенсильвания. Эти составы включают, например, порошки, пасты, мази, желе, воски, масла, липиды, везикулы, содержащие (катионные или анионные) липиды (такие как LIPOFECTIN™), конъюгаты ДНК, безводные абсорбционные пасты, эмульсии типа "масло в воде" и "вода в масле", эмульсии карбовакс (полиэтиленгликоли с различной молекулярной массой), полужидкие гели и полужидкие смеси, содержащие карбовакс. См. также Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311.

[00107] Иллюстративные фармацевтические составы, содержащие антитела к PCSK9, которые можно использовать в контексте способов по настоящему изобретению, включают любые составы, изложенные в патенте США № 8795669 (описывающий, inter alia, иллюстративные составы, содержащие алирокумаб), или в WO2013/166448, или WO2012/168491.

[00108] Известны различные системы доставки и их можно применять для введения фармацевтической композиции, например, инкапсулирование в липосомы, микрочастицы, микрокапсулы, рекомбинантные клетки, способные экспрессировать мутантные вирусы, опосредованный рецепторами эндоцитоз (смотри, например, Wu et al., 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432). Способы введения включают без ограничения внутрикожный, внутримышечный, интраперитонеальный, внутривенный, подкожный, интраназальный, эпидуральный и пероральный пути. Композицию можно вводить любым удобным путем, например, путем инфузии или болюсной инъекции, путем абсорбции через эпителиальные или слизистые оболочки (например, слизистую оболочку полости рта, слизистую оболочку прямой кишки и кишечника и т. д.) и можно вводить вместе с другими биологически активными средствами.

[00109] Фармацевтическую композицию можно доставлять подкожно или внутривенно с помощью стандартной иглы и шприца. Кроме того, что касается подкожной доставки, при доставке фармацевтической композиции широко используется устройство для доставки в виде шприца-ручки. Такое устройство для доставки в виде шприца-ручки может быть многоразового и одноразового использования. В устройстве для доставки в виде шприца-ручки многоразового использования, как правило, используется заменяемый картридж, который содержит фармацевтическую композицию. После введения всей фармацевтической композиции из картриджа и после опустошения картриджа пустой картридж можно легко утилизировать и заменить новым картриджем, который содержит фармацевтическую композицию. Затем устройство для доставки в виде шприца-ручки можно использовать повторно. В устройстве для доставки в виде шприца-ручки одноразового использования заменяемый картридж отсутствует. Вместо этого устройство для доставки в виде шприца-ручки одноразового использования выпускают предварительно заполненным фармацевтической композицией, содержащейся в резервуаре устройства. После того как резервуар опустошается от фармацевтической композиции, устройство полностью утилизируют.

[00110] Многочисленные многоразовые шприц-ручки и изделия для автоинжекторной доставки используются в подкожной доставке фармацевтической композиции. Примеры включают без ограничения AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Вудсток, Великобритания), шприц-ручку DISETRONIC™ (Disetronic Medical Systems, Бургдорф, Швейцария), шприц-ручку HUMALOG MIX 75/25™, шприц-ручку HUMALOG™, шприц-ручку HUMALIN 70/30™ (Eli Lilly and Co., Индианаполис, Индиана), NOVOPEN™ I, II и III (Novo Nordisk, Копенгаген, Дания), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Копенгаген, Дания), шприц-ручку BD™ (Becton Dickinson, Франклин-Лэйкс, Нью-Джерси), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™ и OPTICLIK™ (Sanofi-Aventis, Франкфурт, Германия), при этом упомянуты лишь некоторые из них. Примеры устройств для доставки в виде шприца-ручки многоразового использования, используемых при подкожном введении фармацевтической композиции согласно способам по настоящему изобретению, включают без ограничения шприц-ручку SOLOSTAR™ (sanofi-aventis), FLEXPEN™ (Novo Nordisk) и KWIKPEN™ (Eli Lilly), автоинжектор SURECLICK^TM (Amgen, Таузанд-Окс, Калифорния), PENLET^TM (Haselmeier, Штутгарт, Германия), EPIPEN (Dey, L.P.) и шприц-ручку HUMIRA^TM (Abbott Labs, Эббот-Парк, Иллинойс), при этом упомянуты лишь некоторые из них.

[00111] В определенных ситуациях фармацевтическую композицию можно доставлять в системе с контролируемым высвобождением. В одном варианте осуществления можно использовать насос (см. Langer, выше; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201). В другом варианте осуществления можно использовать полимерные материалы; см. Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida. Согласно еще одному варианту осуществления систему с контролируемым высвобождением можно поместить вблизи мишени для композиции, при этом требуется лишь часть системной дозы (см., например, Goodson, 1984, в Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138). Другие системы с контролируемым высвобождением описаны в обзоре Langer, 1990, Science 249:1527-1533.

[00112] Инъекционные препараты могут включать лекарственные формы для внутривенных, подкожных, внутрикожных и внутримышечных инъекций, капельных инфузий и т. д. Эти инъекционные препараты можно получать с помощью известных способов. Например, инъекционные препараты можно получать, например, растворением, суспендированием или эмульгированием антитела или его соли, описанных выше, в стерильной водной среде или масляной среде, обычно используемых для инъекций. Водной средой для инъекций является, например, физиологический солевой раствор, изотонический раствор, содержащий глюкозу и другие вспомогательные средства и т. п., которые можно использовать совместно с подходящим солюбилизирующим средством, таким как спирт (например, этанол), многоатомный спирт (например, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль), неионогенное поверхностно-активное вещество [например, полисорбат 80, HCO-50 (полиоксиэтиленовый (50 моль) аддукт гидрогенизированного касторового масла)] и т. п. В качестве масляной среды используют, например, кунжутное масло, соевое масло и т. п., которые можно использовать совместно с солюбилизирующим средством, таким как бензилбензоат, бензиловый спирт и т. п. Полученным таким способом инъекционным составом предпочтительно наполняют подходящую ампулу.

[00113] Преимущественно фармацевтические композиции для перорального или парентерального применения, описанные выше, получают в лекарственных формах в стандартной дозе, подходящей для подбора дозы активных ингредиентов. Такие лекарственные формы в стандартной дозе включают, например, таблетки, пилюли, капсулы, инъекционные формы (ампулы), суппозитории и т. д.

Доза

[00114] Количество ингибитора PCSK9 (например, антитела к PCSK9), вводимого пациенту, как правило, представляет собой терапевтически эффективное количество. Используемое в данном документе выражение "терапевтически эффективное количество" означает дозу ингибитора PCSK9, которая в результате приводит к выявляемому снижению (на по меньшей мере приблизительно 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, или больше от исходного уровня) одного или нескольких параметров, выбранных из группы, состоящей из LDL-C, ApoB, ApoB100, холестерина, отличного от HDL-C, общего холестерина, VLDL-C, триглицеридов, ApoC3, частиц TRL, Lp(a) и остаточного холестерина.

[00115] В случае антитела к PCSK9 терапевтически эффективное количество может составлять от приблизительно 0,05 мг до приблизительно 600 мг, например, приблизительно 0,05 мг, приблизительно 0,1 мг, приблизительно 1,0 мг, приблизительно 1,5 мг, приблизительно 2,0 мг, приблизительно 10 мг, приблизительно 20 мг, приблизительно 30 мг, приблизительно 40 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 60 мг, приблизительно 70 мг, приблизительно 75 мг, приблизительно 80 мг, приблизительно 90 мг, приблизительно 100 мг, приблизительно 110 мг, приблизительно 120 мг, приблизительно 130 мг, приблизительно 140 мг, приблизительно 160 мг, приблизительно 170 мг, приблизительно 180 мг, приблизительно 190 мг, приблизительно 200 мг, приблизительно 210 мг, приблизительно 220 мг, приблизительно 230 мг, приблизительно 240 мг, приблизительно 250 мг, приблизительно 260 мг, приблизительно 270 мг, приблизительно 280 мг, приблизительно 290 мг, приблизительно 300 мг, приблизительно 310 мг, приблизительно 320 мг, приблизительно 330 мг, приблизительно 340 мг, приблизительно 350 мг, приблизительно 360 мг, приблизительно 370 мг, приблизительно 380 мг, приблизительно 390 мг, приблизительно 400 мг, приблизительно 410 мг, приблизительно 420 мг, приблизительно 430 мг, приблизительно 440 мг, приблизительно 450 мг, приблизительно 460 мг, приблизительно 470 мг, приблизительно 480 мг, приблизительно 490 мг, приблизительно 500 мг, приблизительно 510 мг, приблизительно 520 мг, приблизительно 530 мг, приблизительно 540 мг, приблизительно 550 мг, приблизительно 560 мг, приблизительно 570 мг, приблизительно 580 мг, приблизительно 590 мг или приблизительно 600 мг антитела к PCSK9. В соответствии с некоторыми иллюстративными вариантами осуществления, терапевтически эффективное количество антитела к PCSK9 составляет 30 мг, 40 мг или 75 мг (например, в случае алирокумаба для пациентов с весом тела менее 50 кг и/или в возрасте 17 лет или моложе), 50 мг, 75 мг или 150 мг (например, в случае алирокумаба для пациентов с весом тела, равном 50 кг или больше, и/или в возрасте 17 лет или моложе), или 140 мг или 420 мг (например, в случае эволокумаба). Другие дозированные количества ингибиторов PCSK9 будут очевидны для специалистов в данной области техники.

[00116] Количество антитела к PCSK9, содержащееся в отдельных дозах, можно выражать в миллиграммах антитела на килограмм веса тела пациента (т. е. мг/кг). Например, антитело к PCSK9 можно вводить пациенту в дозе, составляющей от приблизительно 0,0001 до приблизительно 10 мг/кг веса тела.

Схемы введения

[00117] Согласно определенным вариантам осуществления субъекту в течение определенного периода времени (например, наряду со схемой лечения ежесуточным введением статина или другого фонового LMT) можно вводить несколько доз ингибитора PCSK9 (т. е. фармацевтической композиции, содержащей ингибитор PCSK9). Способы по данному аспекту включают последовательное введение субъекту нескольких доз ингибитора PCSK9. Как используется в данном документе, выражение "последовательное введение" означает, что каждую дозу ингибитора PCSK9 вводят субъекту в различные моменты времени, например, в различные дни, разделенные предварительно определенным интервалом (например, часами, днями, неделями или месяцами). Способы по настоящему изобретению предусматривают последовательное введение пациенту одной начальной дозы ингибитора PCSK9, затем одной или нескольких вторичных доз ингибитора PCSK9, а затем необязательно одной или нескольких третичных доз ингибитора PCSK9.

[00118] Термины "начальная доза", "вторичные дозы" и "третичные дозы" относятся к временной последовательности введения отдельных доз фармацевтической композиции, содержащей ингибитор PCSK9. Таким образом, "начальная доза" представляет собой дозу, которую вводят в начале схемы лечения (также обозначается как "исходная доза"); "вторичные дозы" представляют собой дозы, которые вводят после начальной дозы; и "третичные дозы" представляют собой дозы, которые вводят после вторичных доз. Все из начальной, вторичных и третичных доз могут содержать одинаковое количество ингибитора PCSK9, но, как правило, они могут отличаться друг от друга по частоте введения. Однако согласно определенным вариантам осуществления количества ингибитора PCSK9, содержащегося в начальной, вторичных и/или третичных дозах, отличаются друг от друга (например, корректируются в сторону повышения или понижения при необходимости) в ходе курса лечения. В определенных вариантах осуществления две или более (например, 2, 3, 4 или 5) доз вводят в начале схемы лечения в виде "ударных доз", затем последующие дозы вводят с меньшей частотой (например, "поддерживающие дозы").

[00119] В соответствии с иллюстративными вариантами осуществления каждую вторичную и/или третичную дозу вводят через 1-26 (например, 1, 1½, 2, 2½, 3, 3½, 4, 4½, 5, 5½, 6, 6½, 7, 7½, 8, 8½, 9, 9½, 10, 10½, 11, 11½, 12, 12½, 13, 13½, 14, 14½, 15, 15½, 16, 16½, 17, 17½, 18, 18½, 19, 19½, 20, 20½, 21, 21½, 22, 22½, 23, 23½, 24, 24½, 25, 25½, 26, 26½, или более) недель после непосредственно предшествующей дозы. Выражение "непосредственно предшествующая доза", как используется в данном документе, означает дозу антигенсвязывающей молекулы в последовательности из нескольких введений, которую вводят пациенту перед введением ближайшей следующей дозы в последовательности, без промежуточных доз.

[00120] Способы по данному аспекту могут включать введение пациенту любого числа вторичных и/или третичных доз ингибитора PCSK9. Например, в определенных вариантах осуществления пациенту вводят только одну вторичную дозу. Согласно другим вариантам осуществления пациенту вводят две или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более) вторичных доз. Аналогично в определенных вариантах осуществления пациенту вводят только одну третичную дозу. Согласно другим вариантам осуществления пациенту вводят две или более (например, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 или более) третичных доз.

[00121] В вариантах осуществления, включающих несколько вторичных доз, каждую вторичную дозу можно вводить с той же частотой, что и другие вторичные дозы. Например, каждую вторичную дозу можно вводить пациенту через 1-2, 4, 6, 8 или более недель после непосредственно предшествующей дозы. Аналогично в вариантах осуществления, включающих несколько третичных доз, каждую третичную дозу можно вводить с той же частотой, что и остальные третичные дозы. Например, каждую третичную дозу можно вводить пациенту через 1-2, 4, 6, 8 или более недель после непосредственно предшествующей дозы. Альтернативно частота, с которой вторичные и/или третичные дозы вводят пациенту, может варьироваться в ходе схемы лечения. Частоту введения может регулировать врач в ходе курса лечения в зависимости от потребностей отдельного пациента после клинического обследования.

[00122] Способы по настоящему изобретению включают схемы введения, предусматривающие вариант с повышением (также обозначается в данном документе как "изменение дозы"). Используемое в данном документе, выражение "вариант с повышением дозы" означает, что после получения определенного числа доз ингибитора PCSK9 в случае, если пациент не достиг определенного снижения одного или нескольких определенных терапевтических параметров, впоследствии дозу ингибитора PCSK9 повышают. Например, в случае использования схемы терапии, предусматривающей введение пациенту антитела к PCSK9 в дозах по 75 мг с частотой один раз в две недели, если через 8 недель (т. е. после 5 доз, вводимых на 0 неделе, 2 неделе, 4 неделе, 6 неделе и 8 неделе) пациент не достиг концентрации LDL-C в сыворотке крови менее 70 мг/дл, то дозу антитела к PCSK9 повышают, например, до 150 мг, которую вводят впоследствии один раз в две недели (например, начиная с 10 недели или 12 недели или позже).

[00123] В определенных вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связывают PCSK9, вводят пациенту в дозе, составляющей приблизительно 75 мг, с частотой один раз каждые две недели. В определенных вариантах осуществления дозу, составляющую приблизительно 75 мг, продолжают вводить, если уровень LDL-C у пациента, измеренный после одной или более, двух или более, трех или более, четырех или более или пяти или более доз составляет <70 мг/дл. В определенных вариантах осуществления введение дозы, составляющей приблизительно 75 мг, прекращают, если уровень LDL-C у пациента, измеренный после одной или более, двух или более, трех или более, четырех или более или пяти или более доз остается на уровне ≥70 мг/дл, и при этом антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связывают PCSK9, впоследствии вводят пациенту в дозе, составляющей приблизительно 150 мг, с частотой один раз каждые две недели.

[00124] В определенных вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связывают PCSK9, вводят пациенту в дозе, составляющей приблизительно 300 мг, с частотой один раз каждые четыре недели. В определенных вариантах осуществления дозу, составляющую приблизительно 300 мг, продолжают вводить, если уровень LDL-C у пациента, измеренный после одной или более, двух или более, трех или более, четырех или более или пяти или более доз составляет <70 мг/дл. В определенных вариантах осуществления введение дозы, составляющей приблизительно 300 мг, прекращают, если уровень LDL-C у пациента, измеренный после одной или более, двух или более, трех или более, четырех или более или пяти или более доз остается на уровне ≥70 мг/дл, и при этом антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связывают PCSK9, впоследствии вводят пациенту в дозе, составляющей приблизительно 150 мг, с частотой один раз каждые две недели.

[00125] В определенных вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связывают PCSK9, вводят пациенту в дозе, составляющей приблизительно 150 мг, с частотой один раз каждые две недели.

[00126] В некоторых вариантах осуществления, если антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связывают PCSK9, вводят пациенту в дозе приблизительно 150 мг с частотой один раз каждые две недели, введение дозы приблизительно 150 мг прекращают, если у пациента уровень LDL-C, измеренный после по меньшей мере одной дозы или по меньшей мере двух, трех, четырех или пяти последовательных доз, составляет <10, 15, 20 или 25 мг/дл, и при этом последовательно вводят антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связывают PCSK9, пациенту в дозе приблизительно 75 мг с частотой один раз каждые две недели. Не желая ограничиваться какой-либо теорией, предполагают, что очень низкий уровень LDL-C (например, <10, 15, 20 или 25 мг/дл) может усугубить течение диабета. В определенных вариантах осуществления дозу приблизительно 150 мг вводят пациенту как постоянную дозу. В некоторых вариантах осуществления дозу приблизительно 150 мг вводят пациенту после корректировки дозы, как описано в данном документе (например, от приблизительно 75 мг каждые две недели или от приблизительно 300 мг каждые четыре недели).

Средства комбинированной терапии

[00127] Как описано в других частях данного документа способы могут предусматривать введение пациенту ингибитора PCSK9 в комбинации с ("наряду с") ранее назначенным пациенту средством липидокорригирующей терапии (LMT). Средства LMT включают без ограничения статины, фибраты, ниацин (например, никотиновую кислоту и ее производные), секвестранты желчных кислот, эзетимиб, ломитапид, фитостеролы, орлистат и т. д. Например, ингибитор PCSK9 можно вводить пациенту в комбинации с постоянной ежесуточной терапевтической схемой приема статина. Иллюстративные ежесуточные терапевтические схемы приема статина, с которыми ингибитор PCSK9 можно вводить в комбинации в контексте способов по настоящему изобретению, включают, например, аторвастатин (10, 20, 40 или 80 мг в сутки), (аторвастатин/эзетимиб 10/10 или 40/10 мг в сутки), розувастатин (5, 10 или 20 мг в сутки), церивастатин (0,4 или 0,8 мг в сутки), питавастатин (1, 2 или 4 мг в сутки), флувастатин (20, 40 или 80 мг в сутки), симвастатин (5, 10, 20, 40 или 80 мг в сутки), симвастатин/эзетимиб (10/10, 20/10, 40/10 или 80/10 мг в сутки), ловастатин (10, 20, 40 или 80 мг в сутки), правастатин (10, 20, 40 или 80 мг в сутки) и их комбинации. В определенных вариантах осуществления средство терапии на основе статина представляет собой средство терапии на основе статина в максимально переносимой дозе для пациента. Другие средства LMT, которые можно вводить в комбинации с ингибитором PCSK9 в соответствии с контекстом способов по настоящему изобретению, включают, например, (1) средство, которое ингибирует всасывание холестерина и/или реабсорбцию желчных кислот (например, эзетимиб); (2) средство, которое повышает катаболизм липопротеинов (такое как ниацин); и/или (3) активаторы фактора транскрипции LXR, который играет роль в выведении холестерина, такого как 22-гидроксихолестерин.

[00128] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления предусмотрены способы, предусматривающие введение ингибитора PCSK9 (например, антитела к PCSK9, такого как алирокумаб, эволокумаб, бокоцизумаб, лоделцизумаб, ралпанцизумаб или LY3015014) пациенту в комбинации с ингибитором ангиопоэтин-подобного белка 3 (например, антитела к ANGPTL3, такого как REGN1500), ингибитором ангиопоэтин-подобного белка 4 (например, антитела к ANGPTL4, такого как антитело к ANGPTL4, упоминаемого в патенте США № 9120851 как "H1H268P" или "H4H284P") или ингибитора ангиопоэтин-подобного белка 8 (например, антитела к ANGPTL8).

[00129] В соответствии с некоторыми вариантами осуществления предусмотрены способы, предусматривающие введение пациенту ингибитора PCSK9 (например, антитела к PCSK9, такого как алирокумаб, эволокумаб, бокоцизумаб, лоделцизумаб, ралпанцизумаб или LY3015014), в комбинации с дополнительным средством противодиабетической терапии в дополнение к средству терапии на основе инсулина. Иллюстративные виды дополнительных средств противодиабетической терапии включают без ограничения

(а) все лекарственные средства, упомянутые в Rote Liste 2016, (например, все противодиабетические средства, упомянутые в главе 12 Rote Liste 2014), все средства, обеспечивающие снижение веса, или подавляющие аппетит средства, упомянутые в главе 06 Rote Liste 2016, все гиполипидемические средства, упомянутые в главе 58 Rote Liste 2016, все гипотензивные средства, упомянутые в главе 17 Rote Liste 2016, все нефропротективные средства, упомянутые в Rote Liste, или все диуретики, упомянутые в главе 36 Rote Liste 2016;

(b) средства терапии на основе глюкагоноподобного пептида 1 (GLP-1), в том числе GLP-1, аналогов GLP-1 и агонистов рецептора GLP-1, например, GLP-1(7-37), GLP-1(7-36)амид, ликсисенатид (например, Lyxumia^®), эксенатид (например, эксендин-4, r-эксендин-4, Byetta^®, Bydureon^®, эксенатид NexP), эксенатид-LAR, лираглутид (например, Victoza^®), семаглутид, таспоглутид, албиглутид, дулаглутид, албугон, оксинтомодулин, генипрозид, ACP-003, CJC-1131, CJC-1134-PC, GSK-2374697, PB-1023, TTP-054, лангленатид (HM-11260C), CM-3, GLP-1 элиген, AB-201, ORMD-0901, NN9924, NN9926, NN9927, нодексен, виадор-GLP-1, CVX-096, ZYOG-1, ZYD-1, ZP-3022, CAM-2036, DA-3091, DA-15864, ARI-2651, ARI-2255, эксенатид-XTEN (VRS-859), эксенатид-XTEN+глюкагон-XTEN (VRS-859+AMX-808) и связанный с полимером GLP-1 и аналоги GLP-1;

(с) двойные агонисты GLP-1/GIP (например, RG-7697 (MAR-701), MAR-709, BHM081, BHM089, BHM098); двойные агонисты GLP-1/рецептора глюкагона (например, BHM-034, OAP-189 (PF-05212389, TKS-1225), TT-401/402, ZP2929, LAPS-HMOXM25, MOD-6030);

(d) двойные агонисты GLP-1/гастрина (например, ZP-3022).

(e) желудочно-кишечные пептиды, такие как пептид YY 3-36 (PYY3-36) или его аналоги и панкреатический полипептид (PP) или его аналоги;

(f) агонисты или антагонисты рецептора глюкагона, агонисты или антагонисты рецептора глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (GIP), антагонисты или обратные агонисты грелина, ксенин и его аналоги;

(g) ингибиторы дипептидилпептидазы-IV (DPP-4), например алоглиптин (например, Nesina^®, Kazano^®), линаглиптин (например, Ondero^®, Trajenta^®, Tradjenta^®, Trayenta^®), саксаглиптин (например, Onglyza^®, Komboglyze XR^®), ситаглиптин (например, Januvia^®, Xelevia^®, Tesavel^®, Janumet^®, Velmetia^®, Juvisync^®, Janumet XR^®), анаглиптин, тенелиглиптин (например, Tenelia^®), трелаглиптин, вилдаглиптин (например, Galvus^®, Galvumet^®), гемиглиптин, омариглиптин, эвоглиптин, дутоглиптин, DA-1229, MK-3102, KM-223, KRP-104, PBL-1427, гидрохлорид пиноксацина и Ari-2243;

(h) ингибиторы натрий-зависимого переносчика глюкозы 2 (SGLT-2), например канаглифлозин, дапаглифлозин, ремоглифлозин, этабонат ремоглифлозина, серглифлозин, эмпаглифлозин, ипраглифлозин, тофоглифлозин, лузеоглифлозин, эртуглифлозин, EGT-0001442, LIK-066, SBM-TFC-039 и KGA-3235 (DSP-3235);

(i) двойные ингибиторы SGLT-2 и SGLT-1 (например, LX-4211, LIK066);

(j) ингибиторы SGLT-1 (например, LX-2761, KGA-3235) или ингибиторы SGLT-1 в комбинации с лекарственными средствами против ожирения, такими как ингибиторы переноса желчных кислот в подвздошной кишке (IBAT) (например, GSK-1614235+GSK-2330672);

(k) бигуаниды (например, метформин, буформин, фенформин);

(l) тиазолидиндионы (например, пиоглитазон, розиглитазон), аналоги глитазона (например, лобеглитазон);

(m) агонисты или модуляторы рецепторов, активируемых пероксисомным пролифератором (PPAR-)(альфа, гамма или альфа/гамма) (например, сароглитазар (например, Lipaglyn^®), GFT-505) или частичные агонисты PPAR гамма (например, Int-131);

(n) сульфонилмочевины (например, толбутамид, глибенкламид, глимепирид, Amaryl^®, глипизид) и меглитиниды (например, натеглинид, репаглинид, митиглинид);

(o) ингибиторы альфа-глюкозидазы (например, акарбоза, миглитол, воглибоза);

(q) амилин и аналоги амилина (например, прамлинтид, Symlin^®);

(p) агонисты сопряженного с G-белком рецептора 119 (GPR119) (например, GSK-1292263, PSN-821, MBX-2982, APD-597, ARRY-981, ZYG-19, DS-8500, HM-47000, YH-Chem1);

(q) агонисты GPR40 (например, TUG-424, P-1736, P-11187, JTT-851, GW9508, CNX-011-67, AM-1638, AM-5262);

(r) агонисты GPR120 и агонисты GPR142;

(s) системные или слабопоглощаемые агонисты TGR5 (GPBAR1=сопряженного с G-белком рецептора желчных кислот 1) (например, INT-777, XL-475, SB756050);

(t) иммунотерапевтические средства, применяемые при диабете, например антагонисты C-C-хемокинового рецептора типа 2 (CCR-2) для перорального введения (например, CCX-140, JNJ-41443532), антагонисты интерлейкина 1 бета (IL-1ß) (например, AC-201) или моноклональные антитела (MoA) для перорального введения (например, металозамид, VVP808, PAZ-320, P-1736, PF-05175157, PF-04937319);

(v) противовоспалительные средства для лечения метаболического синдрома и диабета, например, ингибиторы ядерного фактора каппа B (например, Triolex^®);

(w) стимуляторы активируемой аденозинмонофосфатом протеинкиназы (AMPK), например, имеглимин (PXL-008), Debio-0930 (MT-63-78), R-118;

(x) ингибиторы 11-бета-гидроксистероиддегидрогеназы 1 (11-бета-HSD-1) (например, LY2523199, BMS770767, RG-4929, BMS816336, AZD-8329, HSD-016, BI-135585);

(y) активаторы глюкокиназы (например, PF-04991532, TTP-399 (GK1-399), GKM-001 (ADV-1002401), ARRY-403 (AMG-151), TAK-329, TMG-123, ZYGK1);

(z) ингибиторы диацилглицерин O-ацилтрансферазы (DGAT) (например, прадигастат (LCQ-908)), ингибиторы протеинтирозинфосфатазы 1 (например, тродусквемин), ингибиторы глюкозо-6-фосфатазы, ингибиторы фруктозо-1,6-бисфосфатазы, ингибиторы гликогенфосфорилазы, ингибиторы фосфоенолпируваткарбоксикиназы, ингибиторы киназы гликогенсинтазы, ингибиторы киназы пируватдегидрогеназы;

(aa) модуляторы переносчика глюкозы-4, агонисты рецепторов 3 соматостатина (например, MK-4256);

(bb) в качестве партнеров для комбинаций подходящими являются также одно или несколько липидокорригирующих средств, например, ингибиторы 3-гидрокси-3-метилглутарил-кофермент-A-редуктазы (HMG-CoA-редуктазы), такие как симвастатин (например, Zocor^®, Inegy^®, Simcor^®), аторвастатин (например, Sortis^®, Caduet^®), розувастатин (например, Crestor^®), правастатин (например, Lipostat^®, Selipran^®), флувастатин (например, Lescol^®), питавастатин (например, Livazo^®, Livalo^®), ловастатин (например, Mevacor^®, Advicor^®), мевастатин (например, Compactin^®), ривастатин, церивастатин (Lipobay^®), фибраты, такие как безафибрат (например, Cedur^® retard), ципрофибрат (например, Hyperlipen^®), фенофибрат (например, Antara^®, Lipofen^®, Lipanthyl^®), гемфиброзил (например, Lopid^®, Gevilon^®), этофибрат, симфибрат, ронифибрат, клинофибрат, клофибрид, никотиновая кислота и ее производные (например, ниацин, в том числе составы с замедленным высвобождением на основе ниацина), агонисты рецептора никотиновой кислоты 1 (например, GSK-256073), агонисты PPAR-дельта, ингибиторы ацетил-CoA-ацетилтрансферазы (ACAT) (например, авасимиб), ингибиторы поглощения холестерина (например, эзетимиб, Ezetrol^®, Zetia^®, Liptruzet^®, Vytorin^®, S-556971), вещества, связывающие желчные кислоты, (например, холестирамин, колесевелам), ингибиторы транспорта желчных кислот в подвздошной кишке (IBAT) (например, GSK-2330672, LUM-002), ингибиторы микросомального белка-переносчика триглицеридов (MTP) (например, ломитапид (AEGR-733), SLx-4090, гранотапид), модуляторы пропротеиновой конвертазы субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) (например, алирокумаб (REGN727/SAR236553), AMG-145, LGT-209, PF-04950615, MPSK3169A, LY3015014, ALD-306, ALN-PCS, BMS-962476, SPC5001, ISIS-394814, 1B20, LGT-210, 1D05, BMS-PCSK9Rx-2, SX-PCK9, RG7652), позитивные регуляторы рецепторов LDL, например, избирательные в отношении печени бета-агонисты рецепторов тиреоидных гормонов (например, эпротиром (KB-2115), MB07811, собетиром (QRX-431), VIA-3196, ZYT1), повышающие уровень HDL соединения, такие как ингибиторы белка-переносчика сложного эфира холестерина (CETP) (например, анацетрапиб (MK0859), далцетрапиб, эвацетрапиб, JTT-302, DRL-17822, TA-8995, R-1658, LY-2484595, DS-1442), или двойные ингибиторы CETP/PCSK9 (например, K-312), регуляторы ATP-связывающей кассеты (ABC1), модуляторы липидного обмена (например, BMS-823778, TAP-301, DRL-21994, DRL-21995), ингибиторы фосфолипазы A2 (PLA2) (например, дарапладиб, Tyrisa^®, вареспладиб, рилапладиб), энхансеры ApoA-I (например, RVX-208, CER-001, MDCO-216, CSL-112), ингибиторы синтеза холестерина (например, ETC-1002), модуляторы липидного обмена (например, BMS-823778, TAP-301, DRL-21994, DRL-21995) и омега-3-жирные кислоты и их производные (например, икосапент этил (AMR101), Epanova^®, AKR-063, NKPL-66, PRC-4016, CAT-2003);

(cc) бромкриптин (например, Cycloset^®, Parlodel^®), фентермин и составы или комбинации на основе фентермина (например, адипекс-P, ионамин, Qsymia^®), бензфетамин (например, Didrex^®), диэтилпропион (например, Tenuate^®), фендиметразин (например, Adipost^®, Bontril^®), бупропион и комбинации (например, Zyban^®, Wellbutrin XL^®, Contrave^®, Empatic^®), сибутрамин (например, Reductil^®, Meridia^®), топирамат (например, Topamax^®), зонисамид (например, Zonegran^®), тесофензин, антагонисты опиоидов, такие как налтрексон (например, Naltrexin^®, налтрексон+бупропион), антагонисты каннабиноидых рецепторов 1 (CB1) (например, TM-38837), антагонисты меланиноконцентрирующего гормона (MCH-1) (например, BMS-830216, ALB-127158(a)), агонисты и частичные агонисты рецептора MC4 (например, AZD-2820, RM-493), антагонисты нейропептида Y5 (NPY5) или NPY2 (например, велнеперит, S-234462), агонисты NPY4 (например, PP-1420), агонисты бета-3-адренорецептора, лептин или миметики лептина, агонисты рецептора 5-гидрокситриптамина 2c (5HT2c) (например, лоркасерин, Belviq^®), прамлинтид/метрелептин, ингибиторы липазы, такие как цетилистат (например, Cametor^®), орлистат (например, Xenical^®, Calobalin^®), ингибиторы ангиогенеза (например, ALS-L1023), антагонисты бетагистидина и гистамина H3 (например, HPP-404), ингибиторы AgRP (агути-подобного белка) (например, TTP-435), ингибиторы повторного поглощения серотонина, такие как флуоксетин (например, Fluctine^®), дулоксетин (например, Cymbalta^®), двойные или тройные ингибиторы поглощения моноаминов (повторного поглощения допамина, норэпинефрина и серотонина), такие как сертралин (например, Zoloft^®), тезофензин, ингибиторы метионинаминопептидазы 2 (MetAP2) (например, белораниб), и антисмысловые олигонуклеотиды против продуцирования рецептора фактора роста фибробластов 4 (FGFR4) (например, ISIS-FGFR4Rx) или целенаправленно воздействующий на прохибитин пептид-1 (например, Adipotide^®); и

(dd) доноры оксида азота, антагонисты AT1 или антагонисты рецептора ангиотензина II (AT2), такие как телмисартан (например, Kinzal^®, Micardis^®), кандесартан (например, Atacand^®, Blopress^®), валсартан (например, Diovan^®, Co-Diovan^®), лосартан (например, Cosaar^®), эпросартан (например, Teveten^®), ирбесартан (например, Aprovel^®, CoAprovel^®), олмесартан (например, Votum^®, Olmetec^®), тазосартан, азилсартан (например, Edarbi^®), двойные блокаторы рецепторов ангиотензина (двойные ARB), ингибиторы ангиотензинпревращающего фермента (ACE), активаторы ACE-2, ингибиторы ренина, ингибиторы проренина, ингибиторы эндотелинпревращающего фермента (ECE), блокаторы рецепторов эндотелина (ET1/ETA), антагонисты эндотелина, диуретики, антагонисты альдостерона, ингибиторы альдостеронсинтазы, альфа-блокаторы, антагонисты альфа-2-адренорецептора, бета-блокаторы, смешанные альфа-/бета-блокаторы, антагонисты кальция, блокаторы кальциевых каналов (CCB), составы для назального применения на основе блокатора кальциевых каналов дильтиазема (например, CP-404), двойные минералокортикоиды/CCB, гипотензивные средства центрального действия, ингибиторы нейтральной эндопептидазы, ингибиторы аминопептидазы-A, ингибиторы вазопептида, двойные ингибиторы вазопептида, такие как ингибиторы неприлизина-ACE или ингибиторы неприлизина-ECE, ингибиторы рецепторов ангиотензина (AT) и неприлизина двойного действия, двойные антагонисты AT1/ETA, расщепители конечных продуктов усиленного гликирования (AGE), рекомбинантная реналаза, вакцины против высокого кровяного давления, такие как вакцины против RAAS (система ренин-ангиотензин-альдостерон), AT1- или AT2-вакцины, лекарства на основе фармакогеномики повышенного кровяного давления, такие как модуляторы генных полиморфизмов с противогипертоническим эффектом, ингибиторы агрегации тромбоцитов, и другие; а также

(ee) их комбинации, которые являются подходящими.

[00130] В некоторых вариантах осуществления дополнительное средство противодиабетической терапии представляет собой средство терапии на основе GLP-1 (например, ликсисенатид). В некоторых вариантах осуществления средство терапии на основе GLP-1 составляют с метионином (например, L-метионином или D-метионином). В некоторых вариантах осуществления полисорбат (например, полисорбат 20, полисорбат 80), полоксамер (например, полоксамер 188), хлорид бензалкония, гистидин, лизин и/или EDTA отсутствуют или практически отсутствуют в составе средства терапии на основе GLP-1. В некоторых вариантах осуществления состав средства терапии на основе GLP-1 не содержит или практически не содержит поверхностно-активных веществ, таких как полиолы (например, полипропиленгликоли, полиэтиленгликоли, полоксамеры, плюроники, тетроники), неполные эфиры или сложные эфиры жирных кислот и простые эфиры многоатомных спиртов, таких как глицерин и сорбит (например, Span.RTM., Tween.RTM., Myrj.RTM., Brij.RTM., Cremophor.RTM). Состав средства терапии на основе GLP-1 может содержать подходящий консервант (например, фенол, м-крезол, бензиловый спирт и/или сложные эфиры п-гидроксибензоата) и подходящие модификаторы тоничности (например, глицерин, декстроза, лактоза, сорбит, маннит, глюкоза, NaCl, соединения кальция или магния, такие как CaCl₂). Концентрации глицерина, декстрозы, лактозы, сорбита, маннита и глюкозы обычно находятся в диапазоне 100-250 мМ, NaCl в концентрации до 150 мМ.

[00131] В некоторых вариантах осуществления средство терапии на основе инсулина, которое получает пациент, комбинируют с дополнительным средством противодиабетической терапии (например, любым из вышеупомянутых средств противодиабетической терапии, которые не являются средствами терапии на основе инсулина). Например, в определенных вариантах осуществления средство противодиабетической терапии включает комбинацию средства терапии на основе инсулина (например, инсулин гларгин) и средства терапии на основе GLP-1 (например, ликсисенатид). Такие средства терапии могут быть предоставлены либо отдельно, либо в виде одной фармацевтической композиции. Например, инсулин гларгин и ликсисенатид могут быть составлены в одну фармацевтическую композицию (например, Soliqua^® 100/33) для ежесуточной инъекции.

[00132] В контексте указанных способов дополнительный терапевтически активный компонент(компоненты), например любое из перечисленных выше средств или их производных, может быть введен непосредственно перед, одновременно или сразу после введения ингибитора PCSK9; (для целей настоящего изобретения такие схемы введения считаются введением ингибитора PCSK9 "в комбинации с" дополнительным терапевтически активным компонентом). Способы по настоящему изобретению включают фармацевтические композиции и способы их применения, в которых ингибитор PCSK9 составлен совместно с одним или несколькими дополнительными терапевтически активными компонентами, как описано в другом месте данного документа.

Введение ингибитора PCSK9 в качестве дополнительной терапии

[00133] Способы по настоящему изобретению лечения, включающие лечение пациента с гиперхолестеринемией и диабетом с помощью ингибитора PCSK9, такого как антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфически связывают PCKS9, где ингибитор PCSK9 можно вводить в качестве дополнения к изначальному средству терапии пациента на основе инсулина и/или к LMT (если применимо), например, в качестве дополнения к изначальной ежесуточной терапевтической схеме лечения пациента с помощью инсулина и/или статина.

[00134] Например, способы включают дополнительные терапевтические схемы, где ингибитор PCSK9 вводят в качестве дополнительной терапии к той же постоянной многократной ежесуточной схеме введения инсулина и/или ежесуточной терапевтической схеме введения статина (т. е. к такому же дозированному количеству статина), которые получал пациент до получения ингибитора PCSK9. Согласно другим вариантам осуществления ингибитор PCSK9 вводят в виде дополнительной терапии к терапевтической схеме введения инсулина и/или статина, предусматривающей инсулин и/или статин в количестве, которое больше или меньше дозы инсулина или статина, которую пациент получал до получения ингибитора PCSK9. Например, после начала терапевтической схемы, предусматривающей ингибитор PCSK9, вводимый с определенной частотой и в определенном количестве, суточная доза инсулина и/или статина, вводимых или назначаемых пациенту, может (a) оставаться той же, (b) повышаться или (c) снижаться (например, доза повышается или доза снижается) по сравнению с суточной дозой статина, которую пациент принимал до начала терапевтической схемы с помощью ингибитора PCSK9 в зависимости от терапевтических потребностей пациента.

Терапевтическая эффективность

[00135] Способы приводят к снижению уровней в сыворотке крови одного или нескольких липидных компонентов, выбранных из группы, состоящей из LDL-C, ApoB, ApoB100, холестерина, отличного от HDL-C, общего холестерина, VLDL-C, триглицеридов, Lp(a), HDL-C, числа частиц LDL, размера частиц LDL, ApoC3, ApoA-1, богатого триглицеридами холестерина липопротеинов (TRL-C) и остаточного холестерина. В соответствии с некоторыми вариантами осуществления введение фармацевтической композиции, содержащей ингибитор PCSK9, пациенту приведет к среднему процентному снижению по сравнению с исходным уровнем уровня в сыворотке крови холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-C) на по меньшей мере приблизительно 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, или больше; среднему процентному снижению по сравнению с исходным уровнем уровня ApoB на по меньшей мере приблизительно 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, или больше; среднему процентному снижению по сравнению с исходным уровнем уровня ApoB100 на по меньшей мере приблизительно 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, или больше; среднему процентному снижению по сравнению с исходным уровнем уровня холестерина, отличного от HDL-C, на по меньшей мере приблизительно 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, или больше; среднему процентному снижению по сравнению с исходным уровнем уровня общего холестерина на по меньшей мере приблизительно 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, или больше; среднему процентному снижению по сравнению с исходным уровнем уровня VLDL-C на по меньшей мере приблизительно 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, или больше; среднему процентному снижению по сравнению с исходным уровнем уровня триглицеридов на по меньшей мере приблизительно 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35% или больше; среднему процентному снижению по сравнению с исходным уровнем числа частиц LDL на по меньшей мере приблизительно 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50% или больше; среднему процентному снижению по сравнению с исходным уровнем размера частиц LDL на по меньшей мере приблизительно 1,5%, 2%, 2,5%, 3%, 3,5% или 4% или больше; среднему процентному снижению по сравнению с исходным уровнем уроня аполипопротеина C3 (ApoC3) на по меньшей мере приблизительно 5%, 5,5%, 6,0%, 6,5%, 7,0%, 7,5%, 8,0%, 9,0%, 10% или больше; среднему процентному повышению по сравнению с исходным уровнем уровня HDL-C на по меньшей мере приблизительно 1%, 2%, 3%, 4%, 5% или больше; среднему процентному повышению по сравнению с исходным уровнем уровня ApoA-1 на по меньшей мере приблизительно 1%, 2%, 3%, 4%, 5% или больше; среднему процентному снижению по сравнению с исходным уровнем уровня TRL-C на по меньшей мере приблизительно 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, или больше; и/или среднему процентному снижению по сравнению с исходным уровнем уровня Lp(a) на по меньшей мере приблизительно 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, или больше.

[00136] Способы по настоящему изобретению предусматривают лечение пациента с гиперхолестеринемией и T1DM, который получает средство терапии на основе инсулина, при этом способы предусматривают введение пациенту нескольких доз антитела к PCSK9 или его антигенсвязывающего фрагмента в дозе приблизительно от 75 до 150 мг на дозу, и частоту дозирования приблизительно один раз каждые две недели или каждые четыре недели, или режим дозирования в соответствии с режимом дозирования с повышением дозы, как раскрыто в данном документе. После приблизительно 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 или более недель лечения с помощью антитела к PCSK9 у пациента может наблюдаться снижение уровня LDL-C по сравнению с исходным уровнем на по меньшей мере 35%, 50% или 60%. В некоторых вариантах осуществления после одной или нескольких недель лечения с помощью антитела к PCSK9 у пациента наблюдается снижение уровня LDL-C по сравнению с исходным уровнем на приблизительно 35%, 50% или 60% или больше.

[00137] Способы по настоящему изобретению также предусматривают лечение пациента с гиперхолестеринемией и T2DM, который получает средство терапии на основе инсулина, при этом способы предусматривают введение пациенту нескольких доз антитела к PCSK9 или его антигенсвязывающего фрагмента в дозе приблизительно от 75 до 150 мг на дозу, и частоту дозирования приблизительно один раз каждые две недели или каждые четыре недели, или режим дозирования в соответствии с режимом дозирования с повышением дозы, как раскрыто в данном документе. После приблизительно 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24 или более недель лечения с помощью антитела к PCSK9 у пациента может наблюдаться снижение уровня LDL-C по сравнению с исходным уровнем на по меньшей мере 40%, 48% или 54%. В некоторых вариантах осуществления после одной или нескольких недель лечения с помощью антитела к PCSK9 у пациента наблюдается снижение уровня LDL-C по сравнению с исходным уровнем на приблизительно 40%, 48% или 54% или больше.

[00138] Как раскрыто в данном документе, способы по настоящему изобретению не изменяют диабетические параметры пациента. Например, в определенных вариантах осуществления способ не оказывает влияния (например, не вызывает изменений более чем на 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, или 10%) уровня гемоглобина A1c (HbA1c) у пациента. В определенных вариантах осуществления способ не оказывает влияния (например, не вызывает изменений более чем на 2%, 4%, 6%, 8%, 10%, 12%, 15%, 18%, или 20%) уровня глюкозы в плазме крови натощак (FPG) у пациента.

[00139] В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека, для лечения гиперхолестеринемии у пациента с сахарным диабетом 1 типа (T1DM).

[00140] В других дополнительных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения гиперхолестеринемии у пациента с сахарным диабетом 1 типа (T1DM).

[00141] В одном варианте осуществления указанные применение и/или способ включают стадии:

(a) отбора пациента с высоким сердечно-сосудистым риском, получающего средство терапии на основе инсулина, который имеет

(i) T1DM и

(ii) гиперхолестеринемию, недостаточно контролируемые посредством средства терапии на основе статина в максимально переносимой дозе; и

(b) введения пациенту 75 мг, 150 мг или 300 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека, где пациент получает сопутствующее средство терапии на основе инсулина.

[00142] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа 75 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента вводят пациенту каждые две недели.

[00143] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа 150 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента вводят пациенту каждые две недели.

[00144] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа 300 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента вводят пациенту каждые четыре недели.

[00145] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат три CDR тяжелой цепи, приведенные под SEQ ID NO: 2, 3 и 4, и три CDR легкой цепи, приведенные под SEQ ID NO: 7, 8 и 10.

[00146] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи (HCVR) с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и вариабельную область легкой цепи (LCVR) с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6.

[00147] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из алирокумаба, эволокумаба, бокоцизумаба, лоделцизумаба, ралпанцизумаба и LY3015014.

[00148] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой алирокумаб.

[00149] В одном варианте осуществления указанные применение и/или способ дополнительно включают стадии:

(c) введения пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 75 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента ниже порогового уровня, или введения одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента равняется пороговому уровню или превышает его.

[00150] В одном варианте осуществления указанные применение и/или способ дополнительно включают стадию:

(c) введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 300 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые четыре недели, если уровень LDL-C у пациента ниже порогового уровня, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента равняется пороговому уровню или превышает его.

[00151] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа пороговый уровень составляет 70 мг/дл.

[00152] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно.

[00153] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа пациент дополнительно получает сопутствующее средство липидокорригирующей терапии (LMT).

[00154] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа LMT выбрано из группы, состоящей из статина, ингибитора абсорбции холестерина, фибрата, ниацина, омега-3 жирной кислоты и секвестранта желчных кислот.

[00155] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа LMT представляет собой средство терапии на основе статина.

[00156] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа статин выбран из группы, состоящей из аторвастатина, розувастатина, симвастатина, правастатина, ловастатина, флувастатина, питавастатина и церивастатина.

[00157] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа LMT представляет собой средство терапии на основе статина в максимально переносимой дозе.

[00158] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа ингибитор абсорбции холестерина представляет собой эзетимиб.

[00159] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа пациент страдает непереносимостью статина.

[00160] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа средство терапии на основе инсулина выбрано из группы, состоящей из человеческого инсулина, инсулина гларгина, инсулина глулизина, инсулина детемир, инсулина лизпро, инсулина деглудека, инсулина аспарт и базального инсулина.

[00161] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа пациент получает сопутствующее средство противодиабетической терапии в дополнение к средству терапии на основе инсулина.

[00162] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа дополнительное сопутствующее средство противодиабетической терапии выбрано из группы, состоящей из средства терапии на основе глюкагоноподобного пептида 1 (GLP-1), желудочно-кишечного пептида, агониста или антагониста рецептора глюкагона, агониста или антагониста рецептора глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (GIP), антагониста или обратного агониста грелина, ксенина, аналога ксенина, бигуанида, сульфонилмочевины, меглитинида, тиазолидиндиона, ингибитора DPP-4, ингибитора альфа-глюкозидазы, ингибитора натрий-зависимого переносчика глюкозы 2 (SGLT-2), ингибитора SGLT-1, агониста или модулятора рецептора, активируемого пероксисомным пролифератором (PPAR-) (альфа, гамма или альфа/гамма), амилина, аналога амилина, агониста рецептора 119, связанного с G-белком (GPR119), агониста GPR40, агониста GPR120, агониста GPR142, системного или слабопоглощаемого агониста TGR5, иммунотерапевтического средства, применяемого при диабете, противовоспалительных средств для лечения метаболического синдрома и диабета, стимулятора активируемой аденозинмонофосфатом протеинкиназы (AMPK), ингибитора 11-бета-гидроксистероиддегидрогеназы 1, активатора глюкокиназы, ингибитора диацилглицерол-O-ацилтрансферазы (DGAT), модулятора глюкозного транспортера-4, агониста соматостатинового рецептора 3, гиполипидемического средства и их комбинации.

[00163] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень LDL-C у пациента на по меньшей мере 30%, 35%, 40%, или 45%.

[00164] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень холестерина, отличного от HDL-C, у пациента на по меньшей мере 25%, 30%, 35%, или 40%.

[00165] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень аполипопротеина C3 (ApoC3) у пациента.

[00166] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают число и/или размер липопротеиновых частиц у пациента.

[00167] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент

(а) не влияют на уровень гемоглобина A1c (HbA1c) у пациента и/или

(b) не влияют на уровень глюкозы в плазме крови натощак (FPG) у пациента.

[00168] В дополнительных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к путям применения и/или способам лечения гиперхолестеринемии у пациента с сахарным диабетом 1 типа (T1DM), при этом способ включает следующие стадии:

(a) отбора пациента с высоким сердечно-сосудистым риском, получающего средство терапии на основе инсулина, который имеет

(i) T1DM и

(ii) гиперхолестеринемию, недостаточно контролируемые посредством средства терапии на основе статина в максимально переносимой дозе;

(b) введения пациенту каждые две недели 75 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека; и

(c) введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 75 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента ниже 70 мг/дл, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента равняется 70 мг/дл или больше,

где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат HCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и LCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6, и где пациент получает сопутствующее средство терапии на основе инсулина.

[00169] В дополнительных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к путям применения и/или способам лечения гиперхолестеринемии у пациента с сахарным диабетом 2 типа (T2DM), при этом способ включает следующие стадии:

(a) отбора пациента с высоким сердечно-сосудистым риском, получающего средство терапии на основе инсулина, который имеет

(i) T2DM и

(ii) гиперхолестеринемию, недостаточно контролируемые посредством средства терапии на основе статина в максимально переносимой дозе; и

(b) введения пациенту 75 мг, 150 мг или 300 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека, где пациент получает сопутствующее средство терапии на основе инсулина.

[00170] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа 75 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента вводят пациенту каждые две недели.

[00171] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа 150 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента вводят пациенту каждые две недели.

[00172] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа 300 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента вводят пациенту каждые четыре недели.

[00173] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат три CDR тяжелой цепи, приведенные под SEQ ID NO: 2, 3 и 4, и три CDR легкой цепи, приведенные под SEQ ID NO: 7, 8 и 10.

[00174] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи (HCVR) с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и вариабельную область легкой цепи (LCVR) с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6.

[00175] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из алирокумаба, эволокумаба, бокоцизумаба, лоделцизумаба, ралпанцизумаба и LY3015014.

[00176] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой алирокумаб.

[00177] В одном варианте осуществления указанные применение и/или способ дополнительно включают стадии:

(c) введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 75 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента ниже порогового уровня, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента равняется пороговому уровню или превышает его.

[00178] В одном варианте осуществления указанные применение и/или способ дополнительно включают стадии:

(c) введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 300 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые четыре недели, если уровень LDL-C у пациента ниже порогового уровня, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента равняется пороговому уровню или превышает его.

[00179] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа пороговый уровень составляет 70 мг/дл.

[00180] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно.

[00181] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа пациент дополнительно получает сопутствующее средство липидокорригирующей терапии (LMT).

[00182] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа LMT выбрано из группы, состоящей из статина, ингибитора абсорбции холестерина, фибрата, ниацина, омега-3 жирной кислоты и секвестранта желчных кислот.

[00183] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа LMT представляет собой средство терапии на основе статина.

[00184] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа статин выбран из группы, состоящей из аторвастатина, розувастатина, симвастатина, правастатина, ловастатина, флувастатина, питавастатина и церивастатина.

[00185] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа средство терапии на основе статина представляет собой средство терапии на основе статина в максимально переносимой дозе.

[00186] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа ингибитор абсорбции холестерина представляет собой эзетимиб.

[00187] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа пациент страдает непереносимостью статина.

[00188] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа средство терапии на основе инсулина выбрано из группы, состоящей из человеческого инсулина, инсулина гларгина, инсулина глулизина, инсулина детемир, инсулина лизпро, инсулина деглудека, инсулина аспарт и базального инсулина.

[00189] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа пациент получает сопутствующее средство противодиабетической терапии в дополнение к средству терапии на основе инсулина.

[00190] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа дополнительное средство противодиабетической терапии выбрано из группы, состоящей из средства терапии на основе глюкагоноподобного пептида 1 (GLP-1), желудочно-кишечного пептида, агониста или антагониста рецептора глюкагона, агониста или антагониста рецептора глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (GIP), антагониста или обратного агониста грелина, ксенина, аналога ксенина, бигуанида, сульфонилмочевины, меглитинида, тиазолидиндиона, ингибитора DPP-4, ингибитора альфа-глюкозидазы, ингибитора натрий-зависимого переносчика глюкозы 2 (SGLT-2), ингибитора SGLT-1, агониста или модулятора рецептора, активируемого пероксисомным пролифератором (PPAR-) (альфа, гамма или альфа/гамма), амилина, аналога амилина, агониста рецептора 119, связанного с G-белком (GPR119), агониста GPR40, агониста GPR120, агониста GPR142, системного или слабопоглощаемого агониста TGR5, иммунотерапевтического средства, применяемого при диабете, противовоспалительных средств для лечения метаболического синдрома и диабета, стимулятора активируемой аденозинмонофосфатом протеинкиназы (AMPK), ингибитора 11-бета-гидроксистероиддегидрогеназы 1, активатора глюкокиназы, ингибитора диацилглицерол-O-ацилтрансферазы (DGAT), модулятора глюкозного транспортера-4, агониста соматостатинового рецептора 3, гиполипидемического средства и их комбинации.

[00191] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень LDL-C у пациента на по меньшей мере 30%, 35%, 40%, или 45%.

[00192] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень холестерина, отличного от HDL-C, у пациента на по меньшей мере 20%, 25%, 30%, или 35%.

[00193] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень ApoC3 у пациента.

[00194] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают число и/или размер липопротеиновых частиц у пациента.

[00195] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент

(а) не влияют на уровень гемоглобина A1c (HbA1c) у пациента и/или

(b) не влияют на уровень глюкозы в плазме крови натощак (FPG) у пациента.

[00196] В дополнительных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к путям применения и/или способам лечения гиперхолестеринемии у пациента с сахарным диабетом 2 типа (T2DM), при этом способ включает следующие стадии:

(a) отбора пациента с высоким сердечно-сосудистым риском, получающего средство терапии на основе инсулина, который имеет

(i) T2DM и

(ii) гиперхолестеринемию, недостаточно контролируемые посредством средства терапии на основе статина в максимально переносимой дозе;

(b) введения пациенту каждые две недели 75 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека; и

(c) введения пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 75 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента ниже, чем 70 мг/дл, или введения одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента равняется 70 мг/дл или больше, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат HCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и LCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6, и где пациент получает сопутствующее средство терапии на основе инсулина.

[00197] В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к применению антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека, для лечения гиперхолестеринемии у пациента с сахарным диабетом 2 типа (T2DM) и атеросклеротическим сердечно-сосудистым заболеванием (ASCVD).

[00198] В других дополнительных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способам лечения гиперхолестеринемии у пациента с T2DM и ASCVD.

[00199] В одном варианте осуществления указанные применение и/или способ включают стадии:

(a) отбора пациента с высоким сердечно-сосудистым риском, получающего средство терапии на основе инсулина, который имеет

(i) T2DM,

(ii) ASCVD и

(iii) гиперхолестеринемию, недостаточно контролируемые посредством средства терапии на основе статина в максимально переносимой дозе; и

(b) введение пациенту 75 мг, 150 мг или 300 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека, где пациент получает сопутствующую средство терапии на основе инсулина.

[00200] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа ASCVD определяется как ишемическая болезнь сердца (CHD), ишемический инсульт или заболевание периферических артерий.

[00201] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа CHD включает острый инфаркт миокарда, бессимптомный инфаркт миокарда и нестабильную стенокардию.

[00202] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа 75 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента вводят пациенту каждые две недели.

[00203] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа 150 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента вводят пациенту каждые две недели.

[00204] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа 300 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента вводят пациенту каждые четыре недели.

[00205] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат три CDR тяжелой цепи, приведенные под SEQ ID NO: 2, 3 и 4, и три CDR легкой цепи, приведенные под SEQ ID NO: 7, 8 и 10.

[00206] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи (HCVR) с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и вариабельную область легкой цепи (LCVR) с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6.

[00207] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент выбраны из группы, состоящей из алирокумаба, эволокумаба, бокоцизумаба, лоделцизумаба, ралпанцизумаба и LY3015014.

[00208] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляют собой алирокумаб.

[00209] В одном варианте осуществления указанные применение и/или способ дополнительно включают стадии:

(c) введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 75 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента ниже порогового уровня, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента равняется пороговому уровню или превышает его.

[00210] В одном варианте осуществления указанные применение и/или способ дополнительно включают стадии:

(c) введения пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 300 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые четыре недели, если уровень LDL-C у пациента ниже порогового уровня, или введения одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента равняется пороговому уровню или превышает его.

[00211] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа пороговый уровень составляет 70 мг/дл.

[00212] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно.

[00213] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа пациент дополнительно получает сопутствующее средство липидокорригирующей терапии (LMT).

[00214] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа LMT выбрано из группы, состоящей из статина, ингибитора абсорбции холестерина, фибрата, ниацина, омега-3 жирной кислоты и секвестранта желчных кислот.

[00215] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа LMT представляет собой средство терапии на основе статина.

[00216] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа статин выбран из группы, состоящей из аторвастатина, розувастатина, симвастатина, правастатина, ловастатина, флувастатина, питавастатина и церивастатина.

[00217] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа средство терапии на основе статина представляет собой средство терапии на основе статина в максимально переносимой дозе.

[00218] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа ингибитор абсорбции холестерина представляет собой эзетимиб.

[00219] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа пациент страдает непереносимостью статина.

[00220] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа средство терапии на основе инсулина выбрано из группы, состоящей из человеческого инсулина, инсулина гларгина, инсулина глулизина, инсулина детемир, инсулина лизпро, инсулина деглудека, инсулина аспарт и базального инсулина.

[00221] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа пациент получает сопутствующее средство противодиабетической терапии в дополнение к средству терапии на основе инсулина.

[00222] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа дополнительное средство противодиабетической терапии выбрано из группы, состоящей из средства терапии на основе глюкагоноподобного пептида 1 (GLP-1), желудочно-кишечного пептида, агониста или антагониста рецептора глюкагона, агониста или антагониста рецептора глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (GIP), антагониста или обратного агониста грелина, ксенина, аналога ксенина, бигуанида, сульфонилмочевины, меглитинида, тиазолидиндиона, ингибитора DPP-4, ингибитора альфа-глюкозидазы, ингибитора натрий-зависимого переносчика глюкозы 2 (SGLT-2), ингибитора SGLT-1, агониста или модулятора рецептора, активируемого пероксисомным пролифератором (PPAR-) (альфа, гамма или альфа/гамма), амилина, аналога амилина, агониста рецептора 119, связанного с G-белком (GPR119), агониста GPR40, агониста GPR120, агониста GPR142, системного или слабопоглощаемого агониста TGR5, иммунотерапевтического средства, применяемого при диабете, противовоспалительных средств для лечения метаболического синдрома и диабета, стимулятора активируемой аденозинмонофосфатом протеинкиназы (AMPK), ингибитора 11-бета-гидроксистероиддегидрогеназы 1, активатора глюкокиназы, ингибитора диацилглицерол-O-ацилтрансферазы (DGAT), модулятора глюкозного транспортера-4, агониста соматостатинового рецептора 3, гиполипидемического средства и их комбинации.

[00223] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень LDL-C у пациента на по меньшей мере 30%, 35%, 40%, или 45%.

[00224] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень холестерина, отличного от HDL-C, у пациента на по меньшей мере 20%, 25%, 30%, или 35%.

[00225] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают уровень ApoC3 у пациента.

[00226] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент снижают число и/или размер липопротеиновых частиц у пациента.

[00227] В одном варианте осуществления указанных применения и/или способа антитело или его антигенсвязывающий фрагмент

(а) не влияют на уровень гемоглобина A1c (HbA1c) у пациента и/или

(b) не влияют на уровень глюкозы в плазме крови натощак (FPG) у пациента.

[00228] В дополнительных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к путям применения и/или способам лечения гиперхолестеринемии у пациента с T2DM и ASCVD, при этом способ включает стадии:

(a) отбора пациента с высоким сердечно-сосудистым риском, получающего средство терапии на основе инсулина, который имеет

(i) T2DM,

(ii) ASCVD и

(iii) гиперхолестеринемию, недостаточно контролируемые посредством средства терапии на основе статина в максимально переносимой дозе;

(b) введения пациенту каждые две недели 75 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека; и

(c) введения пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 75 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента ниже 70 мг/дл, или введения одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента равняется 70 мг/дл или больше,

где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат HCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и LCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6, и где пациент получает сопутствующее средство терапии на основе инсулина.

ПРИМЕРЫ

[00229] Следующие примеры изложены для того, чтобы обеспечить обычных специалистов в данной области техники полным раскрытием и описанием того, как осуществлять и применять способы и получать и применять композиции по настоящему изобретению, и они не предполагают ограничение объема того, что авторы настоящего изобретения рассматривают в качестве своего изобретения. Были приложены усилия для обеспечения точности в отношении используемых чисел (например, количеств, температуры и т. п.), однако, необходимо учитывать некоторые экспериментальные ошибки и отклонения. Если не указано иное, то части являются частями по весу, молекулярная масса является средней молекулярной массой, температура представлена в градусах Цельсия, а давление является атмосферным или близким к атмосферному.

Пример 1. Получение человеческих антител к PCSK9 человека

[00230] Человеческие антитела к PCSK9 получали, как описано выше в патенте США № 8062640. Иллюстративный ингибитор PCSK9, используемый в следующем примере, представляет собой человеческое антитело к PCSK9, обозначаемое "mAb316P", также известное как "REGN727" или "алирокумаб". mAb316P имеет следующие характеристики аминокислотной последовательности: тяжелая цепь, содержащая SEQ ID NO:5, и легкая цепь, содержащая SEQ ID NO:9; вариабельная область тяжелой цепи (HCVR), содержащая SEQ ID NO:1, и вариабельный домен легкой цепи (LCVR), содержащий SEQ ID NO:6; область, определяющая комплементарность 1 тяжелой цепи (HCDR1), содержащая SEQ ID NO:2, HCDR2, содержащая SEQ ID NO:3, HCDR3, содержащая SEQ ID NO:4, область, определяющая комплементарность 1 легкой цепи (LCDR1), содержащая SEQ ID NO:7, LCDR2, содержащая SEQ ID NO:8, и LCDR3, содержащая SEQ ID NO:10.

Пример 2. Рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое, параллельно-групповое исследование для оценки эффективности и безопасности алирокумаба у получающих лечение с помощью инсулина пациентов с диабетом типа 1 или типа 2 и гиперхолестеринемией при высоком сердечно-сосудистом риске, недостаточно контролируемой посредством LDL-C-корригирующей терапии в максимально переносимой дозе

ВВЕДЕНИЕ

[00231] Более 380 миллионов человек во всем мире имеют диабет, большинство из которых погибнет вследствие сердечно-сосудистого заболевания (CVD). По сравнению с людьми без диабета, те, которые имеют диабет, подвержены более высокому риску развития CVD, развивают связанные с ними клинические осложнения и в более раннем возрасте, и характеризуются продолжительностью жизни, сокращенной на приблизительно 6-7 лет. В дополнение к значительным последствиям для человечества вследствие заболевания, CVD в значительной степени провоцирует общие расходы на здравоохранение у этих пациентов.

[00232] Это исследование, названное Odyssey DM-Insulin, включало взрослых пациентов с сахарным диабетом типа 1 или типа 2, получающих средство терапии на основе инсулина, с гиперхолестеринемией при высоком риске возникновения сердечно-сосудистых (CV) заболеваний, недостаточно контролируемой посредством максимально переносимой дозы статина, с другим средством липидокорригирующей терапии (LMT) или без него.

ЦЕЛИ ИССЛЕДОВАНИЯ

[00233] Первичными целями настоящего исследования было следующее: (а) оценить эффективность алирокумаба по сравнению с плацебо в снижении рассчитанного уровня холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-C) после 24 недель лечения у пациентов с высоким сердечно-сосудистым рискомс диабетом, лечение которых осуществляли посредством инсулина, и с гиперхолестеринемией, недостаточно контролируемой посредством LDL-C-корригирующей терапии в максимально переносимой дозе; и (b) оценить безопасность и переносимость алирокумаба у пациентов с диабетом, лечение которых осуществляли посредством инсулина.

[00234] Вторичными целями исследования было оценить эффективность алирокумаба по сравнению с плацебо по другим липидным параметрам на 12 и 24 неделях (например, по измеренным уровням LDL-C, холестерина, не относящегося к холестерину липопротеинов высокой плотности (холестерина, отличного от HDL-C), аполипопротеина B (Apo B), общего холестерина (TC), липопротеина A (Lp(a)), холестерина липопротеинов высокой плотности (HDL-C), уровням триглицеридов (TG), богатых триглицеридами липопротеинов (TGRL), аполипопротеина A-1 (Apo A-1), аполипопротеина C3 (ApoC3) и количеству и размеру частиц LDL.

ПЛАН ИССЛЕДОВАНИЯ

[00235] Это было рандомизированное, двойное слепое, плацебо-контролируемое, многонациональное и многоцентровое исследование фазы 3b для оценки эффективности и безопасности алирокумаба, вводимого подкожной (SC) инъекцией пациентам, лечение которых осуществляли посредством инсулина, с высоким CV риском при сахарном диабете типа 1 или типа 2 и с гиперхолестеринемией, недостаточно контролируемой посредством LDL-C-корригирующей терапии в максимально переносимой дозе. Исследование состояло из периода скрининга в течение до 3 недель, периода двойного слепого лечения в течение 24 недель и периода наблюдения за данными безопасности в течение 8 недель после окончания периода двойного слепого лечения.

[00236] Пациенты, при условии, что они не страдают непереносимостью статина, принимали постоянную, максимально переносимую дозу средства терапии на основе статина с другим средством липидокорригирующей терапии (LMT) или без него. Доза и режим дозирования статина, а также режим дозирования и дозы других липидокорригирующих средств лечения (если применимо), были стабильными на протяжении всей продолжительности исследования, включая 4 недели до периода скрининга, в течение периода скрининга и от скрининга до рандомизации. Пациенты находились на стабильном рационе для контроля уровня глюкозы и липидов в течение всей продолжительности исследования от скрининга до визита на 24 неделе. Пациенты получали лечение от диабета в соответствии с местными/региональными стандартами лечения.

[00237] У пациентов проводили стратификацию по типу диабета (т. е. диабет 1 типа по сравнению с диабетом 2 типа). Набор пациентов с диабетом 2 типа завершали после проведения стратификации у приблизительно 400 пациентов. Набор пациентов с диабетом 1 типа завершали в конце периода целевого набора.

[00238] Алирокумаб вводили подкожно с начальной дозой 75 мг Q2W в течение 12 недель при повышении дозы алирокумаба слепым образом до 150 мг Q2W на 12 неделе, если уровень LDL-C при визите на 8 неделе составлял ≥70 мг/дл (1,81 ммоль/л). Пациенты, у которых LDL-C <70 мг/дл (1,81 ммоль/л) при визите на 8 неделе, продолжали прием алирокумаба в количестве 75 мг Q2W до конца периода лечения.

[00239] Данные по липидным параметрам из образцов крови были скрыты после рандомизации. Исследователь или пациент не предпринимали попыток провести независимую оценку липидных показателей пациента после рандомизации до визита на 24 неделе, за исключением безопасности для пациента, на усмотрение исследователя.

[00240] Пациенты посещали исследовательский центр на 3, 0, 8, 12, 20 и 24 неделях, подвергаясь лабораторным исследованиям при каждом визите. Кроме того, проводились визиты в виде телефонного звонка на 4 и 32 неделях.

[00241] Нежелательные явления (AE), которые возникали в течение 70 дней после последней дозы исследуемого лекарственного продукта (IMP), были задокументированы. Пациенты с серьезным нежелательным явлением (SAE) или нежелательным явлением, представляющим особый интерес (AESI), наблюдались до разрешения, стабилизации или смерти.

ОТБОР ПАЦИЕНТОВ

[00242] В исследовании приняли участие 517 пациентов, в том числе 76 пациентов с T1DM и 441 пациент с T2DM.

Критерии включения

[00243] Пациенты, включенные в это исследование, удовлетворяли всем следующим критериям:

[00244] (1) Пациент с диабетом 1 типа или 2 типа, лечение которого осуществляли с помощью инсулина, и характеризующийся уровнями LDL-C ≥70 мг/дл (1,81 ммоль/л), недостаточно контролируемыми постоянной максимальной дозой/режимом приема статина, который переносился пациентом, по меньшей мере за 4 недели до скринингового визита (неделя -3) с другим LMT или без него. Максимальная доза/режим приема статина, который переносил пациент, был самой высокой зарегистрированной дозой/режимом приема, которую переносил пациент, основываясь на суждении или соображениям исследователя. Некоторые примеры допустимых причин для пациента, принимающего более низкую дозу статина, включали без ограничения неблагоприятные эффекты при высоких дозах, пожилой возраст, низкий индекс веса тела (BMI), региональные практики, местный листок-вкладыш или сопутствующие лекарственные препараты. Пациенты могли принимать дозу статина через день, если доза принимается постоянно (например, доза каждые понедельник, среда, пятница и т. д.). Сопутствующее лечение более чем 1 статином не допускалось. Пациенты, у которых было задокументирована непереносимость статина по заключению исследователя, и которые в результате перестали получать средство терапии на основе статина, также были пригодны для участия в исследовании. Причина(причины) нарушения максимальной дозы/режима приема статина (в том числе непереносимость статина) были задокументированы в индивидуальной регистрационной карте.

[00245] (2) Пациенты в возрасте ≥18 лет или совершеннолетнего возраста при скрининговом визите, в зависимости от того, что является большим.

[00246] (3) Пациенты с диагнозом диабет 1 типа или 2 типа, установленным за по меньшей мере год до скринингового визита (неделя -3). Пациенты с диагнозом диабет 1 типа должны соответствовать всем следующим критериям:

(а) диагноз до достижения возраста 30 лет;

(b) лечение в режиме многократного ежесуточного введения/режима введения базально-прандиального инсулина или режима инсулиновой помпы в течение 6 месяцев после постановки диагноза; и

(c) уровень С-пептида <0,2 пмоль/мл при скрининговом визите.

[00247] (4) уровень гликозилированного гемоглобина (HbA1c) <10% при скрининговом визите (неделя -3). Пациенты с повышенным уровнем HbA1c (до 10%) были пригодными для участия, при условии, что не было плана нацелиться на более низкий уровень HbA1c во время исследования, согласно оценкам исследователя.

[00248] (5) Пациенты с документально подтвержденным анамнезом CVD (в том числе CHD и/или эквивалентные риски CHD) и/или хотя бы один дополнительный фактор риска CV.

[00249] Анамнез CHD включал по меньшей мере одно из следующего:

(a) острый инфаркт миокарда (MI);

(b) бессимптомный MI;

(c) нестабильная стенокардия;

(d) процедура реваскуляризации коронарных сосудов (например, чрескожное коронарное вмешательство (PCI) или хирургическое вмешательство по шунтированию коронарных артерий (CABG)); и

(e) клинически значимое CHD, диагностированное с помощью инвазивного или неинвазивного тестирования (такого как коронарография, электрокардиограмма с нагрузкой на беговой дорожке, стресс-эхокардиография или радионуклидная визуализация).

[00250] Эквивалентные риски CHD включали по меньшей мере одно из следующего:

(a) документально подтвержденное заболевание периферических артерий, удовлетворяющее одному из следующих критериев:

(i) текущая перемежающаяся хромота (мышечный дискомфорт в нижней конечности, который является как повторяющимся, так и проявляющимся при физических нагрузках и облегчаемым при покое в течение 10 минут) предполагаемого атеросклеротического происхождения вместе с лодыжечно-брахиальным индексом < 0,90 в каждой ноге в состоянии покоя;

(ii) перемежающаяся хромота в анамнезе (мышечный дискомфорт в нижней конечности, который является как повторяющимся, так и проявляющимся при физических нагрузках и облегчаемым при покое в течение 10 минут) вместе с эндоваскулярной процедурой или хирургическим вмешательством по отношению к одной или обеим ногам по причине атеросклеротического заболевания, и

(iii) критическая ишемия конечностей в анамнезе вместе с тромболизисом, эндоваскулярной процедурой или хирургическим вмешательством по отношению к одной или обеим ногам по причине атеросклеротического заболевания; и

(b) документально подтвержденный ишемический инсульт с очаговым ишемическим неврологическим дефицитом, который продолжался более 24 часов, как считается, имеющий атеротромботическое происхождение. Компьютерная томография или магнитная радиовизуализация должны были быть выполнены для исключения кровоизлияния и неишемического неврологического заболевания.

[00251] Факторы сердечно-сосудистого риска включали по меньшей мере одно из следующего:

(a) гипертензия (установленная при приеме медицинских препаратов против гипертензии);

(b) текущее курение сигарет;

(c) возраст ≥45 лет для мужчин и ≥55 лет для женщин;

(d) микро/макроальбуминурия в анамнезе;

(e) диабетическая ретинопатия в анамнезе (препролиферативная или пролиферативной);

(f) семейный анамнез преждевременной CHD (у отца или брата в возрасте до 55 лет; у матери или сестры в возрасте до 65 лет);

(g) низкий уровень HDL-C (у мужчин <40 мг/дл (1,0 ммоль/л) и у женщин <50 мг/дл (1,3 ммоль/л)); и

(h) документально подтвержденное хроническое заболевание почки средней тяжести (CKD), характеризующееся 15 ≤ eGFR <60 мл/мин./1,73 м² в течение 3 месяцев или больше, включая скрининговый визит).

[00252] (6) Подписавшие письменное информированное согласие.

Критерии исключения

[00253] Пациенты, которые соответствовали всем вышеуказанным критериям включения были подвергнуты скринингу в отношении следующих критериев исключения:

[00254] (1) Критерии исключения, связанные с методологией исследования:

(а) планируется начать прием нового LMT в ходе исследования или изменить дозу текущего LMT;

(b) отсутствие приема постоянной дозы LMT (включая статин или другое LMT) на протяжении по меньшей мере 4 недель до скринингового визита (неделя -3) или от момента скрининга до рандомизации, за исключением случаев непереносимости статина, в этом случае отменяли прием статина на 4 недели до скринингового визита/в ходе периода скрининга;

(с) применение нутрицевтических продуктов или безрецептурных терапевтических средств, которые могут воздействовать на содержание липидов и доза которых не была постоянной в течение по меньшей мере 4 недель до скринингового визита (неделя -3) или между скрининговым визитом и визитом рандомизации.

(d) употребление продуктов на основе красного ферментированного риса в течение 4 недель до скринингового визита (неделя -3) или между скрининговыми визитом и визитом рандомизации.

(e) применение системных кортикостероидов, кроме случаев использования в качестве заместительной терапии при заболевании гипофиза/надпочечников с постоянным режимом в течение по меньшей мере 6 недель до рандомизации. Стероидные препараты для местного, внутрисуставного, назального, ингаляционного и офтальмического применения не рассматриваются в качестве "системных" и разрешены;

(f) применение непрерывной заместительной гормональной терапии, кроме случаев, когда режим был постоянным в течение последних 6 недель до скринингового визита (неделя -3) и не запланировано изменение режима в ходе исследования.

(g) недавний (в пределах 3 месяцев до скринингового визита (неделя -3) или между скрининговыми визитом и визитом рандомизации) MI, нестабильная стенокардия, приведшая к госпитализации, неконтролируемая аритмия сердца, CABG, PCI, каротидное хирургическое вмешательство или стентирование, инсульт, транзиторный ишемический приступ (TIA), эндоваскулярная процедура или хирургическое вмешательство по поводу болезни периферических сосудов;

(h) запланированные плановые PCI, CABG, каротидная или периферическая реваскуляризация в ходе исследования;

(i) наличие в анамнезе сердечной недостаточности III или IV класса (см. таблицу 1) согласно Нью-Йоркской кардиологической ассоциации (NYHA) в течение последних 12 месяцев;

(j) систолическое кровяное давление >180 мм рт. ст. или диастолическое кровяное давление >110 мм рт. ст. во время скринингового визита или визита рандомизации;

(k) пациент, который получал лечение посредством плазмафереза в течение 2 месяцев до скринингового визита (неделя -3) или между скрининговым визитом и визитом рандомизации, или собирается пройти его в ходе исследования;

(l) наличие в анамнезе геморрагического инсульта;

(m) наличие в анамнезе потери функции PCSK9 (т. е. генетической мутации или изменения последовательности) или наличие в анамнезе гомозиготной семейной гиперхолестеринемии;

(n) впервые выявленный или активно прогрессирующий рак в течение последних 5 лет, кроме случаев излечения базально-клеточного рака кожи, плоскоклеточного рака кожи или рака шейки матки in situ в той мере, в которой это возможно;

(o) наличие в анамнезе положительного результата анализа на HIV;

(p) пациент, который принимал любые активные экспериментальные лекарственные средства в течение 1 месяца или 5 периодов полужизни, в зависимости от того, что дольше.

(q) пациенты, ранее не получившие указания в отношении гипохолестеринемического рациона до скринингового визита (неделя -3).

(r) пациент, который отозвал согласие во время скрининга (начиная с подписанной ICF);

(s) нестабильный вес, определенный как изменение >5 кг в пределах 2 месяцев до скринингового визита, по заключению исследователя.

(t) BMI >45 кг/м2 или планы по прохождению бариатрического хирургического вмешательства, программы по снижению веса или планы по началу приема лекарственных средств для снижения веса в ходе исследования;

(u) недавнее начало приема лекарственных средств для снижения веса (т. е. в течение 3 месяцев до скринингового визита или между скринингом и рандомизацией) или недавнее бариатрическое хирургическое вмешательство (в течение последних 6 месяцев) и активная фаза похудения, по оценке исследователя;

(v) пациенты, лечение которых не осуществляли с помощью инсулина в течение по меньшей мере 6 месяцев до скринингового визита, или не находящиеся на постоянной схеме приема инсулина (т. е. происходило изменение типа инсулина, общего времени/частоты инъекций, способа или места введения, таких как исключительно базальное (диабет 2 типа), базально-прандиальное и т. д.) в течение по меньшей мере 3 месяцев до скринингового визита или существующая вероятность необходимости изменения типа/частоты введения инсулина или способа введения в течение периода исследования;

(w) отсутствие приема постоянной дозы инсулина в течение по меньшей мере 3 месяцев до скрининга (т. е. более чем 30%-ное изменение общей суточной дозы инсулина в соответствии с оценками исследователя) или вероятность необходимости усиления режима инсулин/гипогликемический режим в течение курса исследования, по мнению исследователя (например, добавление нового средства, планы по повышению дозы инсулина и т. д.);

(x) другие гипогликемические лекарственные препараты, вводимые пациенту, не являлись постоянными в течение по меньшей мере

3 месяцев до скринингового визита;

(y) анамнез недавней декомпенсации диабета в течение 2 месяцев до скринингового визита (т. е. диабетический кетоацидоз или гиперосмолярный гипергликемический статус (HHS));

(z) получение или планирование получения заместительной почечной терапии во время исследования (например, гемодиализ, пересадка почки и т. д.);

(аa) наличие любого клинически значимого неконтролируемого эндокринного заболевания, которое, как известно, влияет на содержание липидов или липопротеинов в сыворотке крови. Пациенты, получающие заместительную терапию гормонами щитовидной железы, могут быть включены в том случае, если дозировка тироксина была постоянной в течение по меньшей мере 3 месяцев до скрининга, а уровни чувствительности пациента к тиреостимулирующему гормону (s-TSH), находились в пределах ±10% от нормального диапазона лабораторного показателя во время скринингового визита;

(bb) лабораторные данные в течение скринингового периода (не включая лабораторные исследования при рандомизации, кроме теста на беременность):

(i) уровень TG в сыворотке >400 мг/дл (>4,52 ммоля/л) (допускается 1 повторное лабораторное исследование);

(ii) положительный тест сыворотки крови или мочи на беременность у женщин репродуктивного возраста;

(iii) положительный тест на поверхностный антиген вируса гепатита B или антитело к вирусу гепатита С;

(iv) (eGFR) <15 мл/мин./1,73 м2 в соответствии с уравнением модификации диеты при заболевании почки с 4 переменными

(MDRD);

(v) ALT или AST >3 x ULN (допускается 1 повторное лабораторное исследование); или

(vi) уровень креатинфосфокиназы (CPK) >3 x ULN (допускается 1 повторное оценивание); или

(cc) состояния/ситуации, такие как

(i) пациенты с короткой ожидаемой продолжительностью жизни;

(ii) необходимость сопутствующего лечения, которое может повлиять на первичную оценку;

(iii) невозможность удовлетворить определенные требования протокола (например, необходимость госпитализации, возможность посещать учебные заведения и т. д.);

(iv) пациент являлся исследователем или любым младшим исследователем, научным сотрудником, фармацевтом, координатором исследования, другим сотрудником или его родственником, непосредственно участвующими в осуществлении протокола.

(v) неконтактность или любое состояние, которое могло бы сделать пациента не соблюдающим процедуры исследования;

(vi) любая техническая/административная причина, не позволяющая проводить рандомизацию пациента в исследовании; или

(vii) любое клинически значимое отклонение, идентифицированное во время скрининга, которое по мнению исследователя или любого младшего исследователя сделало бы невозможным безопасное завершение исследования или ограничило бы оценку конечных точек, такое как основные системные заболевания, пациенты с короткой ожидаемой продолжительностью жизни.

Таблица 1. Функциональная классификация сердечной недостаточности согласно Нью-Йоркской кардиологической ассоциации (NYHA)

Класс Симптомы пациента Класс I (Норма) Без ограничения физической активности. Обычная физическая активность не вызывает чрезмерной усталости, учащенного сердцебиения или одышки (нехватка воздуха). Класс II (легкие) Небольшие ограничения физической активности. Ничего не беспокоит в состоянии покоя, но обычная физическая активность приводит к усталости, учащенному сердцебиению или одышке. Класс III (умеренные) Выраженные ограничения физической активности. Ничего не беспокоит в состоянии покоя, но активность, меньшая, чем обычная, приводит к усталости, учащенному сердцебиению или одышке. Класс IV (тяжелые) Невозможность выполнять никакую физическую активность без дискомфорта. Симптомы сердечной недостаточности в состоянии покоя. В случае совершения любой физической активности дискомфорт увеличивается.

[00255] (2) Критерии исключения, которые относятся к активным препаратам сравнения и/или средствам обязательной фоновой терапии: все противопоказания по отношению к средствам фоновой терапии или предупреждения/меры предосторожности по применению (при необходимости), представленные в соответствующей национальной маркировке продукта.

[00256] (3) Критерии исключения, связанные с современным уровнем знаний относительно алирокумаба:

(a) гиперчувствительность к алирокумабу или к любому из ингредиентов алирокумаба;

(b) беременная или кормящая женщина;

(с) женщины репродуктивного возраста, не защищенные высокоэффективным способом(способами) контрацепции (как определено в ICF и/или в региональном протоколе в случае конкретного регионального требования) и/или которые не желают или не способны пройти тест на беременность. Женщины репродуктивного возраста должны иметь подтвержденный отрицательный результат теста на беременность при скрининговом визите и визите включения. Они должны применять эффективный способ контрацепции в течение всего срока исследуемого лечения и на протяжении по меньшей мере 10 недель после последней инъекции IMP. Используемые способы контрацепции должны были соответствовать критериям высокоэффективного способа контроля рождаемости согласно "Международной конференции по гармонизации технических требований для регистрации фармацевтических препаратов для применения в медицине. M3(R2): Руководство по не клиническим исследованиям безопасности для проведения клинических испытаний на людях и регистрационному свидетельству фармацевтических препаратов. ICH. 2009 Jun: 1-25." У женщин постклимактерического возраста менструации должны отсутствовать на протяжении по меньшей мере 12 месяцев.

ИССЛЕДУЕМЫЕ СРЕДСТВА ЛЕЧЕНИЯ

Исследуемый лекарственный продукт

[00257] Стерильный продукт, представляющий собой лекарственное средство, на основе алирокумаба поставляли в концентрации 75 мл/мл и 150 мг/мл в водном буфере, рН 6,0, с содержанием сахарозы, гистидина и полисорбата 20, объемом 1 мл, в автоинжекторе (также известном как предварительно заполненный шприц-ручка). Стерильное плацебо для алирокумаба получали в том же составе, что и алирокумаб, без добавления белка в объеме 1 мл в предварительно заполненном шприце-ручке, для пациентов, проходящих обучение по проведению инъекций, а также для тех, кто находится в группе лечения, получающей плацебо. В течение скринингового периода пациент (или другое назначенное лицо) должен был выполнить тренировку самоинъекции посредством плацебо, используя предварительно заполненный шприц-ручку, перед первым введением IMP.

[00258] Для пациентов, рандомизированных для получения алирокумаба, начальная доза составляла 75 мг, вводимая подкожно один раз Q2W. Дозу повышали слепым способом до 150 мг Q2W на 12 неделе для пациентов, рандомизированных для получения алирокумаба, если значение LDL-C на 8 неделе составляет ≥70 мг/дл (1,81 ммоль/л). Пациентам, рандомизированным в группу плацебо, вводили инъекцию подкожно Q2W в течение всего 24-недельного периода лечения.

Путь и способ введения

[00259] Руководство по предварительно заполненному шприцу-ручке (руководство по использованию автоинжектора) было предоставлено исследовательским центрам, и пациенту были предоставлены инструкции по применению (автоинжектор для применения). Каждое введение IMP представляло собой 1 мл подкожной инъекции в брюшную полость, бедро или внешнюю область плеча (т. е. в дельтовидную область). Если другое сопутствующее лекарственное средство вводили в то же место, запланированное для инъекции IMP, пациенту рекомендовали использовать альтернативное местоположение для введения IMP.

[00260] IMP может быть введен путем самоинъекции или с помощью другого назначенного лица (например, супруга, родственника и т. д.). В случае, если назначенное лицо должно было вводить алирокумаб пациенту во время исследования, было гарантировано, что этот человек был надлежащим образом обучен до введения инъекции. Все, кто планировал вводить IMP, были обучены сотрудником штата исследования.

[00261] Инструкции были предоставлены пациенту (или другому назначенному лицу (например, супругу, родственнику и т. д.), который будет вводить инъекции) во время обучения и по мере необходимости в ходе исследования. При первом визите и других визитах проводили тщательное наблюдение и предоставляли обратную связь по мере необходимости.

[00262] Использованный предварительно заполненный шприц-ручку выбрасывали в контейнер для острых предметов, который был предоставлен пациентам. Было рекомендовано, чтобы подкожные инъекции IMP чередовались в пределах анатомической области (например, правое бедро, затем левое бедро или живот справа, затем живот слева). Пациенты также имели возможность получать инъекции в другую анатомическую область (например, бедро, затем живот или внешняя область плеча и т. д.) во время исследования.

[00263] Пациентов просили хранить IMP в холодильнике. До введения IMP следует достать и оставить в безопасном месте при комнатной температуре в течение приблизительно 30-40 минут. После этого IMP следует ввести как можно скорее.

Сроки введения

[00264] В течение скринингового периода пациенты или другое назначенное лицо должны были выполнять тренировку самоинъекции плацебо, используя предварительно заполненный шприц-ручку, перед первым введением IMP.

[00265] При визите рандомизации пациентом или другим назначенным лицом (таким как супруг(супруга), родственник и т. д.) выполнялась первая инъекция IMP в исследовательском центре под непосредственным наблюдением сотрудника штата исследовательского центра. Пациенты находились под наблюдением в исследовательском центре в течение по меньшей мере 30 минут после такой первой инъекции данного исследования. Если назначенное лицо изменялось в ходе исследования, новое назначенное лицо обучали с применением плацебо.

[00266] Затем подкожные инъекции IMP выполняли за пределами клиники, Q2W до последней инъекции. Если инъекцию назначали на ту же дату, что и визит в исследовательский центр, то тогда IMP вводили после завершения забора образцов крови. В исключительных случаях, если пациент предпочитал получать инъекцию в исследовательском центре, и были предусмотрены меры для проведения инъекций в исследовательском центре, это также было разрешено.

[00267] IMP следует вводить подкожно Q2W, в идеале примерно в одно и то же время суток. Однако был приемлемым период интервала ± 3 дня. Время дня выбирали исходя из предпочтения пациентов.

[00268] Если по ошибке или из-за других обстоятельств инъекция была отложена на более чем 7 дней после пропущенной даты или полностью пропущена, то пациенту было предложено вернуться к первоначальному графику введения IMP без введения отложенных инъекций. Если по ошибке или из-за других обстоятельств инъекция была отложена на менее чем 7 дней после пропущенной даты, то пациенту было предложено провести отложенную инъекцию и затем возобновить первоначальный график введения IMP.

НЕИССЛЕДУЕМЫЕ ЛЕКАРСТВЕННЫЕ ПРЕПАРАТЫ

[00269] Следующие классы лекарственных средств были идентифицированы как не относящиеся к IMP, потому что лекарственный препарат является либо фоновой терапией, либо потенциальным средством неотложной помощи:

(a) статины;

(b) ингибиторы абсорбции холестерина (эзетимиб);

(c) секвестранты, связывающие желчные кислоты (например, холестирамин, колестипол, колесевелам);

(d) никотиновая кислота;

(e) фибраты (например, фенофибрат);

(f) омега-3 жирные кислоты (≥ 1000 мг ежесуточно); и

(g) виды инсулина.

[00270] При фоновом LMT, в том числе на основе статинов, исследовательские центры следовали национальной маркировке продукта для мониторинга безопасности и контроля пациентов. Пациенты находились на постоянной, максимальной дозе/схеме приема средства терапии на основе статина, переносимой пациентом, с другим LMT или без него во время исследования. Значения липидного профиля в образцах, полученных после рандомизации, были замаскированы. Тем не менее, по соображениям безопасности, исследовательские центры ставили в известность об опасных уровнях TG, с тем чтобы принимать решения о фоновом LMT для пациента.

[00271] Начиная от скринингового визита (неделя -3) и до визита на 24 неделе фоновое LMT не изменяли. На протяжении этого времени не происходили коррекция дозы, прекращение или начало получения других статинов или другого LMT, кроме исключительных обстоятельств, при которых особая озабоченность (включая без ограничений опасные уровни TG, переданные центральной лабораторией) оправдывали такие изменения, на усмотрение исследователя. В случае опасных уровней TG, которые были подтверждены повторными анализами, исследователь проводил исследования, оказывал помощь пациенту и добавлял другое LMT по его/ее врачебному мнению.

[00272] Все фибраты были разрешены при поступлении, если пациент переносил медицинский препарат и оставался на постоянной дозе. Если пациенту требовалось введение фибрата в ходе исследования (т. е. как неотложное лечение в ответ на опасные уровни TG), разрешалось добавлять только фенофибрат. Фоновое LMT и инсулин были предоставлены спонсором. Пациенты получали указанные лекарственные препараты в соответствии с региональными правилами.

[00273] ПРОЦЕДУРЫ ОСЛЕПЛЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЯ

[00274] Алирокумаб и плацебо для алирокумаба были предоставлены в идентично подобранных предварительно заполненных шприцах-ручках и упакованы одинаково, с включением маркировки для защиты системы ослепления. Каждый набор для лечения был помечен номером, который был сгенерирован компьютерной программой, полученной от спонсора. Номера наборов для лечения были получены Исследователем во время рандомизации пациентов, а последующие визиты пациентов были запланированы с помощью IVRS/IWRS, которые были доступны 24 часа в сутки, 7 дней в неделю.

[00275] В соответствии с двойной слепой схемой, исследуемые пациенты, исследователи и персонал исследовательского центра оставались непроинформированными в отношении исследуемого лечения и не имели доступа к рандомизации (кодам лечения), за исключением случаев, описанных ниже.

Нежелательное явление

[00276] Код лечения был открытым для сообщения органу здравоохранения о любой предполагаемой непредвиденной серьезной нежелательной реакции (SUSAR), т. е. любом серьезном нежелательном явлении, которое является как непредвиденным (на основании брошюры исследователя), так и обоснованно ассоциировано с применением IMP в соответствии с мнением одного из исследователя и/или спонсора.

Липидные параметры

[00277] Значения липидных параметров из образцов крови, полученных после визита рандомизации, проведенного центральной лабораторией, не были переданы исследовательским центрам, так что они не смогли сделать выводы о группе лечения своих пациентов на основании достигнутого уровня LDL-C. Руководящая группа спонсора не имела доступа к липидным параметрам, связанным с идентификацией пациента, до тех пор, пока не происходила окончательная блокировка базы данных. В целях безопасности оповещения об опасных уровнях TG при значениях TG ≥500 мг/дл в любое время после рандомизации направлялись исследователю.

[00278] В конце периода двойного слепого лечения (визит на 24 неделе) исследователь продолжал контролировать уровни липидов пациента в соответствии со стандартной практикой. Любые значения уровня липидов после рандомизации редактировались в исходных документах и не передавались спонсору.

Антитела к алирокумабу

[00279] Результаты исследования антител к алирокумабу пациентов не передавались исследовательским центрам во время исследования. Руководящая группа спонсора не имела доступа к результатам исследования антител к алирокумабу, связанным с идентификационным номером пациента, до тех пор, пока не происходила окончательная блокировка базы данных. Лаборанты, участвующие в определении титров антител к алирокумабу пациентов, были исключены из операционной группы, и был установлен способ для предотвращения возможного раскрытия информации.

Раскрытие кода рандомизации на протяжении исследования

[00280] В случае AE код раскрывался тогда, когда знание IMP было необходимо для лечения пациента. По возможности перед раскрытием кода необходимо было связаться с мониторинговой группой/медицинским экспертом спонсора. Все вызовы были задокументированы мониторинговой группой соответствующим образом с указанием даты и времени вызова, имени человека, с которым связались в мониторинговой группе, ID пациента, с документацией запроса и решения об отмене ослепления или нет.

[00281] Раскрытие кода может быть выполнено в любое время с использованием соответствующего модуля интерактивной системы голосового ответа (IVRS)/интерактивной системы веб-ответа (IWRS), в зависимости от того, какая система была использована в исследовательском центре, и/или путем вызова любого другого телефонного номера, предоставленного спонсором для этой цели. Тем не менее, было бы предпочтительнее связаться с врачом-исследователем, чтобы обсудить случай, прежде чем отменить ослепление. Если произошла отмена ослепления, исследователю было предложено задокументировать дату, время суток и причину раскрытия кода и сообщить эту информацию на соответствующей странице e-CRF. При документировании причины отмены ослепления исследователь не предоставлял каких-либо подробностей относительно характера IMP. Исследователь не разглашал детали IMP ни представителю спонсора, ни сотрудникам до закрытия базы данных. Кроме того, при заполнении форм (например, AE, SAE) исследуемое лечение не раскрывалось в формах.

[00282] Материалы для раскрытия кода также хранились в форме, служащей для "системы 24-часовой готовности"; но эту систему следует применять только в самых исключительных случаях (т. е. при недоступности системы IVR/IWR или невозможности связаться с исследователем и/или штатом исследовательского центра). Тем не менее, предпочтительным вариантом была отмена ослепления с применением IVRS. Клиническая мониторинговая группа сообщала исследователям о доступности материалов для раскрытия регионального кода. Карта пациента, включающая соответственный телефонный номер “системы 24-часовой готовности”, была предоставлена каждому пациенту, который будет принимать участие в исследовании. Спонсору также было разрешено выполнять отмену ослепления в случае некоторых SAE, чтобы соответствовать требованиям нормативной отчетности (т. е. для некоторых SAE, которые являются как связанными, так и неожиданными).

[00283] Если код раскрывали, пациент окончательно прекращал прием IMP.

СПОСОБ РАСПРЕДЕЛЕНИЯ ПАЦИЕНТОВ В ГРУППУ ЛЕЧЕНИЯ

[00284] Рандомизированный список номеров наборов для лечения был составлен централизованно спонсором. IMP (наборы алирокумаба 75 или 150 мг или набор плацебо) были упакованы в соответствии с этим списком.

[00285] Менеджер по операциям с поставками для испытаний предоставлял рандомизированный список номеров наборов для лечения, а специалист по биостатистике исследования предоставлял схему рандомизации поставщику централизованной системы распределения лечения. Затем указанный поставщик централизованной системы распределения лечения формировал список рандомизации пациентов, в соответствии с которым он распределял средства лечения среди пациентов.

[00286] Пациентов рандомизировали для получения либо плацебо, либо алирокумаба во время периода лечения в ходе двойного слепого исследования. Рандомизационное соотношение алирокумаб:плацебо составляло 2:1. Для каждого рандомизированного пациента было несколько соответствующих номеров набора для лечения (визиты для пополнения запаса), которые были распределены через централизованную систему распределения лечения. Рандомизацию стратифицировали по типу диабета (т. е. 1 тип по сравнению с 2 типом).

[00287] Номера наборов для лечения были распределены с использованием централизованной системы распределения лечения при визите рандомизации (день 1, неделя 0), а затем на 12 неделе в качестве визитов для пополнения запаса и при незапланированных визитах, если это необходимо.

[00288] Для пациентов в группе лечения алирокумабом набор для лечения, распределенный на 12 неделе, основывался на их уровне LDL-C на 8 неделе в соответствии с правилами повышения дозы. Между центральной лабораторией и поставщиком централизованной системы распределения лечения планировался регулярный обмен данными, чтобы слепым образом перейти к исследовательским центрам и спонсору.

[00289] Прежде чем рандомизировать пациента, исследователь или назначенное им лицо должны были связаться с централизованной системой распределения лечения.

[00290] Рандомизированный пациент определялся как пациент, которого зарегистрировали и который получил номер набора для лечения из централизованной системы распределения лечения, как задокументировано в журнале регистрации. Пациент не мог быть рандомизирован более одного раза за исследование. Если лечение использовалось без обращения к централизованной системе распределения лечения, пациент считался нерандомизированным и исключался из исследования.

[00291] В зависимости от выбора исследовательского центра использовались два типа централизованных систем распределения лечения: IVRS и IWRS.

УПАКОВКА И МАРКИРОВАНИЕ

[00292] В течение периода двойного слепого лечения каждый набор для двойного слепого лечения, либо алирокумаб, либо плацебо для алирокумаба, готовили так, чтобы он содержал 6 предварительно заполненных шприцев-ручек в упаковке, безопасной для детей. Для защиты системы ослепления, все коробки для двойного слепого набора для инъекций имели одинаковый внешний вид и следовательно были помечены двойной слепой маркировкой.

[00293] В дополнение к двойным слепым наборам для инъекций был подготовлен тренировочный набор, содержащий 1 плацебо для алирокумаба в предварительно заполненном шприце-ручке, с целью инструктирования пациентов в отношении введения инъекции, которое должно было быть выполнено до рандомизации при скрининговом визите (неделя -3, визит 1). Если это было сочтено необходимым, перед рандомизацией проводили вторую тренировку по введению инъекций с применением плацебо для алирокумаба с использованием дополнительного тренировочного набора. Тренировку по введению инъекций с плацебо выполняли и записывали в CRF, в том числе, если назначенное лицо, которое вводило IMP пациенту, изменилось в ходе исследования.

[00294] Упаковка соответствовала режиму введения. Содержание маркировки соответствовало региональным нормативным спецификациям и требованиям.

УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И СРОК ХРАНЕНИЯ

[00295] Исследователи или другие уполномоченные лица (например, фармацевты) были ответственны за хранение IMP в защищенном и безопасном месте в соответствии с региональными правилами, спецификациями маркировки, политикой и процедурами. Контроль условий хранения IMP, в особенности контроль температуры (например, хранение в условиях холодильника), и информация в отношении стабильности при применении, и инструкции для обращения с IMP должны были осуществляться в соответствии с правилами, предусмотренными спонсором.

[00296] IMP хранили в холодильнике при температуре от +2°C до +8°C (от 36 до 46°F) в исследовательском центре. Температуру холодильника в исследовательском центре проверяли ежедневно и заносили в журнал. IMP, который хранился в исследовательском центре, хранился в соответствующей закрытой комнате, под ответственность исследователя или назначенного лица или другого уполномоченного лица в соответствии с условиями хранения, указанными на этикетке.

[00297] После пополнения запасов наборов IMP для пациентов во время визитов в исследовательский центр были созданы соответствующие условия для транспортировки наборов IMP от исследовательского центра до холодильника пациента.

КОНЕЧНЫЕ ТОЧКИ ИССЛЕДОВАНИЯ

[00298] Исходные характеристики включали стандартные демографические показатели (например, возраст, расовую принадлежность, вес, рост и т. п.), характеристики заболевания, в том числе медицинский анамнез и лекарственный анамнез для каждого пациента.

Первичная конечная точка эффективности

[00299] Первичной конечной точкой эффективности было процентное изменение уровня LDL-C от исходного уровня до 24 недели в популяции, образованной в зависимости от назначенного лечения (ITT), с использованием всех значений LDL-C независимо от соблюдения схемы лечения (оцениваемая величина ITT). Процентное изменение было определено как 100x (рассчитанное значение LDL-C на 24 неделе - рассчитанное значение LDL-C на исходном уровне)/рассчитанное значение LDL-C на исходном уровне.

[00300] Исходное рассчитанное значение уровня LDL-C представляло собой последний уровень LDL-C, полученный до первой инъекции IMP в двойном слепом исследовании. Рассчитанный уровень LDL-C на 24 неделе представлял собой уровень LDL-C, полученный во время интервала анализа на 24 неделе. Все рассчитанные значения уровня LDL-C (плановые или внеплановые, натощак или не натощак) между неделями 8-24 можно использовать для получения значения для первичной конечной точки эффективности, при необходимости, согласно вышеупомянутому определению.

Первичные конечные точки эффективности

[00301] Параметры безопасности (АЕ, лабораторные показатели, показатели жизнедеятельности) оценивались на протяжении всего исследования. Наблюдение данных безопасности было следующим:

(а) период до лечения определялся от подписанного информированного согласия до первой дозы IMP двойного слепого введения;

(b) период возникших в ходе лечения нежелательных явлений (TEAE), определяли как время от первой дозы IMP двойного слепого введения до последней дозы IMP+70 дней (10 недель), поскольку остаточный эффект лечения ожидается до 10 недель после остановки двойного слепого исследования IMP; и

(c) период после лечения определяли как время, начинающееся на следующий день после окончания периода TEAE до разрешения/стабилизации всех SAE и AESI, в зависимости от того, что наступит последним.

[00302] AE представляло собой любое нежелательное медицинское явление у пациента или пациента, участвующего в клиническом исследовании, которому вводили фармацевтический продукт, и которое не обязательно должно было иметь причинно-следственную связь с данным лечением.

[00303] SAE представляет собой любое неблагоприятное медицинское явление, которое при какой-либо дозе

(a) приводило к смерти;

(b) представляло угрозу для жизни. Термин "представляет угрозу для жизни" в определении "серьезный" относилось к явлению, при котором пациент подвергался риску смерти в момент явления; при этом он не относился к явлению, которое гипотетически могло бы вызвать смерть, если было бы более тяжелым;

(с) требовало госпитализации в стационаре или продления действующей госпитализации;

(d) приводило к стойкой или значительной инвалидизации/утрате трудоспособности;

(e) представляло собой врожденную аномалию/врожденный порок развития; или

(f) представляло собой важное медицинское явление.

[00304] Медицинское и научное мнение должно учитываться при решении вопроса о том, подходит ли экспресс-отчетность в других ситуациях, как, например, важные медицинские явления, которые непосредственно могут не представлять угрозу для жизни или не приводить к смерти или госпитализации, однако могут подвергать риску пациента или могут требовать осуществления медицинского или хирургического вмешательства (т. е. специальных мер или корректирующей терапии) для предотвращения одного из других исходов, перечисленных в определении выше.

[00305] Следующий перечень важных с медицинской точки зрения явлений предназначен служить в качестве руководства для определения того, какое состояние следует рассматривать как важное с медицинской точки зрения явление. Перечень не предназначен быть исчерпывающим:

(a) интенсивная терапия в кабинете неотложной помощи или дома по причине бронхоспазма при аллергии, патологического изменения состава крови (т. е. агранулоцитоз, апластическая анемия, аплазия костного мозга, миелодисплазия, панцитопения и т. д.)или судорог (конвульсии, эпилепсия, эпилептический припадок, кратковременная потеря сознания и т. д.);

(b) развитие зависимости от лекарственных средств или злоупотребления лекарственными средствами;

(c) ALT >3 x ULN+уровень общего билирубина >2 x ULN или бессимптомное повышение уровня ALT >10 x ULN;

(d) попытка самоубийства или любое явление, указывающее на склонность к суициду;

(e) обморок, потеря сознания (за исключением задокументированных случаев как следствие взятия пробы крови);

(f) буллезные кожные высыпания;

(g) виды рака, диагностированные во время исследования или усугубленный во время исследования;

(h) хронические нейродегенеративные заболевания (впервые диагностированные) или усугубленные во время исследования; и

(i) подозрение на передачу возбудителя инфекции, если есть подозрение на передачу возбудителя инфекции через лекарственный продукт (например, загрязнение продукта).

[00306] Нежелательное явление, представляющее особый интерес (AESI), представляет собой AE (серьезное или несерьезное), которое необходимо отслеживать, документировать и контролировать заранее определенным образом. В отношении данного исследования AESI представляли собой

(a) повышение уровня ALT: ALT ≥3 x ULN (если исходный уровень ALT <ULN) или ALT ≥2-кратного исходного значения (если исходное значение ALT ≥ULN);

(b) о явлениях аллергии: аллергические реакции на лекарственное средство и/или местные реакции в месте инъекции, которые исследователь считает аллергическими (или имеют аллергический компонент), которые требуют консультации с другим врачом для дальнейшей оценки гиперчувствительности/аллергии в соответствии с медицинским заключением исследователя должны сообщать как о AESI;

(c) беременность: беременность, возникающая у пациента-женщины или партнера пациента-мужчины (если это допускается партнером-женщиной и местными регулирующими органами) во время исследования или в течение 70 дней после последней дозы исследуемого лекарственного средства. Беременность регистрировали как AESI во всех случаях. Беременность квалифицировали как SAE, только если она удовлетворяла одному или нескольким критериям SAE. В случае беременности пациента-женщины, включенной в исследование, введение продукта исследования прекращали. Последующее наблюдение беременности было обязательным до тех пор, пока не был определен ее исход.

(d) передозировка IMP с клиническими проявлениями. Передозировка (случайная или преднамеренная) представляла собой событие, предполагаемое исследователем или спонтанно сообщенное пациентом (не основано на систематических подсчетах инъекций) и определяемое как прием дозы в по меньшей мере два раза больше предполагаемой дозы в течение предполагаемого терапевтического интервала (т. е. 2 или более инъекций вводили в течение <7 календарных дней), о чем следует сообщать с использованием термина "симптоматическая передозировка (случайная или преднамеренная)", с указанием на наличие обстоятельств в скобках (например, "симптоматическая передозировка (случайная)" или "симптоматическая передозировка (преднамеренная)"). Пациент находился под наблюдением и ему назначали соответствующее симптоматическое лечение. Обстоятельства передозировки явно указывались в виде определенных слов, а симптомы, если таковые имели место, заносились в отдельные формы для AE/SAE. Бессимптомную передозировку было предложено сообщать как стандартное AE;

(e) неврологические явления: неврологические явления, которые требуют дополнительных обследований/процедур и/или направления к специалисту, предлагалось сообщать как AESI. Если явление не требовало дополнительных обследований/процедур и/или направления к специалисту, его предлагали сообщать как стандартное AE; и

(f) Нейрокогнитивные явления: все нейрокогнитивные явления рассматривали как AESI.

Вторичные конечные точки эффективности.

[00307] Ключевые вторичные конечные точки настоящего язобретения были следующими:

(a) процентное изменение рассчитанного уровня LDL-C от исходного уровня до 24 недели, с применением всех значений уровня LDL-C в течение периода лечения для оценки эффективности (оцениваемая величина при лечении);

(b) процентное изменение измеренного уровня LDL-C от исходного уровня до 24 недели (оцениваемая величина ITT);

(с) процентное изменение рассчитанного уровня LDL-C от исходного уровня до 12 недели (оцениваемая величина ITT);

(d) процентное изменение измеренного уровня LDL-C от исходного уровня до 12 недели (оцениваемая величина ITT);

(е) процентное изменение уровня холестерина, отличного от НDL-C, от исходного уровня до 24 недели (оцениваемая величина ITT);

(f) процентное изменение уровня Apo B от исходного уровня до 24 недели (оцениваемая величина ITT);

(g) процентное изменение уровня общего холестерина от исходного уровня до 24 недели (оцениваемая величина ITT);

(h) доля пациентов, достигших уровня LDL-C <70 мг/дл до 24 недели (оцениваемая величина при лечении);

(i) доля пациентов, достигших уровня LDL-C <50 мг/дл до 24 недели (оцениваемая величина при лечении);

(j) доля пациентов, достигших уровня холестерина, отличного от HDL-C, <100 мг/дл до 24 недели (оцениваемая величина при лечении);

(k) доля пациентов, достигших уровня холестерина, отличного от HDL-C, <80 мг/дл до 24 недели (оцениваемая величина при лечении);

(l) процентное изменение уровня Lp(a) от исходного уровня до 24 недели (оцениваемая величина ITT);

(m) процентное изменение уровня HDL-C от исходного уровня до 24 недели (оцениваемая величина ITT);

(n) процентное изменение уровня TG от исходного уровня до 24 недели (оцениваемая величина ITT);

(o) процентное изменение числа частиц LDL-C от исходного уровня до 24 недели (оцениваемая величина ITT); и

(p) процентное изменение размера частиц LDL-C от исходного уровня до 24 недели (оцениваемая величина ITT).

[00308] Также в данном исследовании измеряли следующие связанные с диабетом конечные точки:

(a) абсолютное изменение уровня HbA1c от исходного уровня до 12 и 24 недель (оцениваемые ITT и оцениваемые величины при лечении);

(b) абсолютное изменение уровня FPG от исходного уровня до 12 и 24 недель (оцениваемые ITT и оцениваемые величины при лечении);

(c) абсолютное изменение общей суточной дозы инсулина от исходного уровня до 12 и 24 недель (оцениваемые ITT и оцениваемые величины при лечении); и

(d) абсолютное изменение количества средств лечения, снижающих уровень глюкозы, от исходного уровня до 12 и

24 недель (оцениваемые ITT и оцениваемые величины при лечении).

[00309] Другие конечные точки эффективности в данном исследовании включали

(a) процентное изменение рассчитанного уровня LDL-C от исходного уровня до 12 недели (оцениваемая величина при лечении);

(b) процентное изменение измеренного уровня LDL-C от исходного уровня до 12 и 24 недель (оцениваемая величина при лечении);

(c) процентное изменение уровня отличного от HDL, Apo B, общего холестерина, Lp(a), HDL-C и TG от исходного уровня до 12 недели (оцениваемые ITT и оцениваемые величины при лечении) и 24 недели (оцениваемая величина при лечении);

(d) доля пациентов, достигших рассчитанного уровня LDL-C <50, а также <70 мг/дл до 12 недели (оцениваемые ITT и оцениваемые величины при лечении) и 24 (оцениваемые ITT);

(e) доля пациентов со снижением на 50% или больше по сравнению с исходным уровнем в рассчитанном LDL-C на 12 и 24 неделях (оцениваемые ITT);

(f) доля пациентов, достигших уровня холестерина, отличного от HDL-C, <80 мг/дл, а также <100 мг/дл на 12 неделе (оцениваемые ITT и оцениваемые величины при лечении) и 24 неделе (оцениваемые ITT);

(g) доля пациентов, достигших уровня Apo B <80 мг/дл на 12 и 24 неделях (оцениваемые ITT и оцениваемые величины при лечении);

(h) процентное изменение числа и размера частиц LDL-C от исходного уровня до 12 недели (оцениваемые ITT и оцениваемые величины при лечении) и 24 недели (оцениваемые величины при лечении);

(i) процентное изменение уровней TGRL, Apo A-1 и Apo C-III от исходного уровня до 12 и 24 недель (оцениваемые ITT и оцениваемые величины при лечении);

(j) абсолютное изменение соотношения Apo B/Apo A-1 и TC/HDL-C от исходного уровня до 12 и 24 недель (оцениваемые ITT и оцениваемые величины при лечении);

(k) доля пациентов, достигших рассчитанного уровня LDL-C <70 и <50 мг/дл на 12 и 24 неделях в соответствии с исходным уровнем А1с <8% или ≥8% (оцениваемые ITT и оцениваемые величины при лечении); и

(l) доля пациентов, достигших рассчитанного уровня LDL-C <70 мг/дл и <50 мг/дл на 12 и 24 неделях в соответствии с исходным уровнем A1c <медианного A1c или ≥медианного A1c (оцениваемые ITT и оцениваемые величины при лечении).

ПРОЦЕДУРЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

[00310] Период интервала для 0 недели составлял +3 дня. Период интервала для 8, 12 и 24 недель составлял ±3 дня. Период интервала для 4, 20 и 32 недель составлял ±7 дней. Для всех визитов после дня 1/визита включения, если дата одного визита была изменена, то следующий визит происходил в соответствии с исходной схемой, как изложено на фигуре 1.

Забор образцов крови

[00311] Все заборы образцов крови, в том числе забор крови для определения липидных параметров (например, TC, LDL-C, HDL-C, TG, холестерина, отличного от HDL-C, Apo A, Apo B, Apo C-III, Lp(a), размер и число частиц LDL), а также для определения уровня глюкозы в плазме, выполняли утром, в состоянии натощак (т. е. на протяжении ночи, по меньшей мере 10-12 часов голодания и воздержания от курения), и до инъекции IMP для всех визитов в исследовательский центр на всем протяжении исследования. Не рекомендовались употребление алкоголя в течение 48 часов и интенсивная физическая нагрузка в течение 24 часов до забора крови. Если пациент не находился в состоянии натощак, то забор образцов крови не проводили, а пациенту назначали новый прием на следующий день (или как можно ближе к этой дате) с инструктированием о голодании (см. описанные выше условия).

Лабораторные исследования

[00312] Лабораторные данные собирали в соответствии с графиком исследований, приведенным на фигуре 1, и следующими рекомендациями:

(a) гематология: все визиты, кроме 4 и 20 недель; можно выполнять на 0 неделе, в зависимости от обстоятельств и на основании клинического усмотрения исследователя;

(b) химические анализы: все визиты, кроме визитов 3 и 6; можно выполнять на 0 неделе, в зависимости от обстоятельств и на основании клинического усмотрения исследователя, за исключением определения уровня глюкозы в плазме крови, которое должно быть выполнено на 0 неделе для всех пациентов;

(c) HbA1c: на этапе скрининга и на 0, 12 и 24 неделях;

(d) липидная панель: на этапе скрининга и на 0, 8, 12, 20 и 24 неделях;

(e) измеренный уровень LDL-C посредством количественного определения бета-холестерина: 0, 12 и 24 недели;

(f) другие оценки липидов (Apo B, Apo A-1, Apo C-III, размер и число частиц LDL, Lp[a]): 0, 12 и 24 недели;

(g) печеночная проба: все визиты, кроме визитов 3 и 6; можно выполнять на 0 неделе, в зависимости от обстоятельств и на основании клинического усмотрения исследователя. В случае, если значения уровней общего билирубина выше нормального диапазона, дифференциация на конъюгированный и неконъюгированный билирубин будет происходить автоматически;

(h) уровень креатинфосфокиназы (CPK): все визиты, кроме визитов 3 и 6; можно выполнять на 0 неделе, в зависимости от обстоятельств и на основании клинического усмотрения исследователя;

(i) поверхностный антиген вируса гепатита B: только на этапе скрининга;

(j) антитело к вирусу гепатита С: на этапе скрининга и 24 неделе; в случае увеличения уровня ALT во время исследования следует определить антитела к вирусу гепатита С. Если результат анализа антитела к вирусу гепатита С был положительным во время исследования, проводили повторное тестирование;

(k) тестирование на беременность (только у женщин с детородным потенциалом): тест сыворотки крови на наличие беременности только на этапе скрининга, тест мочи на наличие беременности на 0 и 24 неделях;

(l) тиреостимулирующий гормон: скрининг только для пациентов, которые получают заместительную терапию гормонами щитовидной железы;

(m) C-пептид: только на этапе скрининга;

(n) уровни PCSK9 только на 0 неделе; и

(o) уровни антител к алирокумабу (0 неделя, 12 неделя и 24 неделя).

Забор образцов мочи

[00313] Общий анализ мочи проводили на этапе скрининга и при визите на 24 неделе. С помощью индикаторной полоски проводили оценку рН, удельной плотности и наличия крови, белка, глюкозы, кетонов, нитратов, лейкоцитарной эстеразы, уробилиногена и билирубина. Если результаты на индикаторной полоске были ненормальными, тогда проводили стандартную микроскопию. Микроскопию использовали для оценки наличия эритроцитов (RBC), скоплений RBC, лейкоцитов (WBC), скоплений WBC, эпителиальных клеток (переходных, почечных канальцев и сквамозных), цилиндров (гиалиновых, эпителиальных, WBC, RBC, гранулярных, жировых, клеточных, широких зернистых, восковидных), кристаллов (трипельфосфата, оксалата кальция, фосфата кальция, карбоната кальция, мочевой кислоты, аморфных, биурата аммония, билирубина, лейцина, тирозина, цистина), бактерий, почкующихся дрожжей, дрожжевых гиф, трихомонад, овальных жировых телец, жира, слизи и сперматозоидов.

[00314] Для определения соотношения альбумин:креатинин на этапе скрининга и визите на 24 неделе проводили тестирование разовой порции мочи в отношении альбумина и креатинина. Любое клинически значимое отклонение от нормы немедленно перепроверяли для подтверждения, прежде чем принимать какое-либо решение для соответствующего пациента.

Физический осмотр

[00315] Проводили общий физический осмотр. Если после включения обнаруживали новую клинически значимую аномалию или ухудшение по сравнению с исходным уровнем, то сообщали об АЕ, и пациента направляли для дальнейших клинических исследований и/или консультации специалиста в соответствии с медицинским заключением исследователя.

Кровяное давление и частота сердечных сокращений

[00316] Кровяное давление (BP) измеряли в положении сидя в стандартных условиях, примерно в одно и то же время суток, на одной и той же руке, одним и тем же аппаратом (после того, как пациент спокойно отдыхал в положении сидя в течение по меньшей мере 5 минут). Значения записывали в e-CRF; регистрировали как систолическое, так и диастолическое BP. В первый скрининговый визит BP измеряли на обеих руках. В этот визит определяли руку с более высоким диастолическим давлением и BP измеряли на этой руке в течение всего исследования. Это самое высокое значение регистрировали в e-CRF.

[00317] Частоту сердечных сокращений измеряли во время измерения BP.

Вес тела и рост

[00318] Вес тела определяли с учетом надетого на пациента нижнего белья или в очень легкой одежде и без обуви, с пустым мочевым пузырем. Те же весы использовали в течение всего исследования.

[00319] Рост измеряли, поскольку собственная оценка роста не была приемлемой.

Опросник iTAQ

[00320] ITAQ был показателем результата (PRO), сообщаемым пациентом, для оценки приемлемости лечения в течение 4-недельного периода до заполнения опросника. Пациенту предлагали его заполнить при визитах на 8 и 24 неделях.

Журнал приема инсулина

[00321] Пациентов инструктировали в отношении заполнения журнала приема инсулина для записи его/ее суточной дозы инсулина (для базального инсулина и для прандиального инсулина, в зависимости от случая) за по меньшей мере 7 дней до каждого визита, и просили принести эту информацию на следующий визит для исследования. Пациент мог записывать суточную дозу инсулина в течение более 7 дней до визитов для исследования, однако в CRF вводили информацию, собранную только за последние 7 дней перед каждым визитом.

РЕЗУЛЬТАТЫ

[00322] Всего было зарегистрировано 76 пациентов с T1DM и 441 пациент с T2DM.

[00323] Все из 76 рандомизированных пациентов с T1DM, прошли лечение и, следовательно, были включены в популяцию для оценки безопасности. Два рандомизированных пациента с T1DM (оба в группе алирокумаба) не были включены в популяцию "сформированную в зависимости от назначенного лечения" (ITT).

[00324] Из 441 пациента с T2DM, 3 не получали лечения (1 в группе алирокумаба и 2 в группе плацебо) и, следовательно, не были включены в популяцию для оценки безопасности. Двенадцать рандомизированных пациентов с T2DM (7 в группе алирокумаба и 5 в группе плацебо) не были включены в популяцию ITT.

[00325] Пациенты не были включены в популяцию ITT, если не было рассчитанного значения LDL-C, доступного на исходном уровне или в одном из периодов анализа до 24 недели.

ПАЦИЕНТЫ-УЧАСТНИКИ ИССЛЕДОВАНИЯ

[00326] Шесть (7,9%) пациентов с T1DM преждевременно прекратили исследуемое лечение (3 [5,9%] в группе алирокумаба (2 пациента прекратили в связи с АЕ) и 3 [12,0%] в группе плацебо (2 пациента прекратили в связи с AE). Все 3 пациента в группе алирокумаба также не завершили период исследования, тогда как в группе плацебо 2 пациента также не завершили период исследования, и 1 пациент оставался в исследовании до завершения периода исследования.

Таблица 2. Распределение пациентов с T1DM в соответствии с IVRS

Плацебо (N=25) Алирокумаб (N=51) Всего (N=76) Рандомизированные, но не получавшие лечения 0 0 0 Рандомизированные и получавшие лечение 25 (100) 51 (100) 76 (100) Завершили период исследуемого лечения 22 (88,0) 48 (94,1) 70 (92,1) Не завершили период исследуемого лечения 3 (12,0) 3 (5,9) 6 (7,9) Завершили период исследования 22 (88,0) 49 (96,1) 71 (93,4) Не завершили период исследования 3 (12,0) 2 (3,9) 5 (6,6) Причина прекращения лечения Нежелательное явление 2 (8,0) 2 (3,9) 4 (5,3) Субъект отказался от продолжения 1 (4,0) 1 (2,0) 2 (2,6) Причина прекращения исследования Субъект отказался от продолжения 3 (12,0) 2 (3,9) 5 (6,6) Статус на момент последнего контакта во время исследования Живые 25 (100) 51 (100) 76 (100) Мертвые 0 0 0

Процентные доли рассчитаны с применением количества рандомизированных пациентов в качестве знаменателя.

[00327] Тридцать девять (8,8%) пациентов с T2DM преждевременно прекратили исследуемое лечение (29 (9,9%) в группе алирокумаба и 10 (6,8%) в группе плацебо). Из 29 пациентов в группе алирокумаба 18 пациентов также не завершили исследование, и 11 пациентов оставались в исследовании до завершения периода исследования. В группе плацебо из 10 пациентов 7 пациентов также не завершили период исследования, а 3 пациента оставались в исследовании до завершения периода исследования.

[00328]

[00329] Таблица 3. Распределение пациентов с T2DM в соответствии с IVRS

Плацебо (N=147) Алирокумаб (N=294) Всего (N=441) Рандомизированные, но не получавшие лечения 2 (1,4) 1 (0,3) 3 (0,7) Причина отсутствия лечения Другие 2 (1,4) 1 (0,3) 3 (0,7) Рандомизированные и получавшие лечение 145 (98,6) 293 (99,7) 438 (99,3) Завершили период исследуемого лечения 135 (91,8) 264 (89,8) 399 (90,5) Не завершили период исследуемого лечения 10 (6,8) 29 (9,9) 39 (8,8) Завершили период исследования 138 (93,9) 275 (93,5) 413 (93,7) Не завершили период исследования 7 (4,8) 18 (6,1) 25 (5,7) Причина прекращения лечения Нежелательное явление 2 (1,4) 15 (5,1) 17 (3,9) Субъект отказался от продолжения 3 (2,0) 8 (2,7) 11 (2,5) Недостаточное соблюдение протокола исследования 2 (1,4) 0 2 (0,5) Летальный исход 1 (0,7) 0 1 (0,2) Другие 2 (1,4) 6 (2,0) 8 (1,8) Причина прекращения исследования Нежелательное явление 0 1 (0,3) 1 (0,2) Летальный исход 1 (0,7) 0 1 (0,2) Субъект отказался от продолжения 4 (2,7) 13 (4,4) 17 (3,9) Утрачено для последующего наблюдения 0 1 (0,3) 1 (0,2) Недостаточное соблюдение протокола исследования 2 (1,4) 1 (0,3) 3 (0,7) Другие 0 2 (0,7) 2 (0,5) Статус на момент последнего контакта во время исследования Живые 146 (99,3) 294 (100) 440 (99,8) Мертвые 1 (0,7) 0 1 (0,2)

Процентные доли рассчитаны с применением количества рандомизированных пациентов в качестве знаменателя.

Демографические данные и характеристики на исходном уровне

[00330] Исходные характеристики в целом были схожими в группах алирокумаба и плацебо. 60,5% рандомизированных пациентов с T1DM были мужчинами, тогда как рандомизированных пациентов-мужчин с T2DM было 54,2%. Пациенты с T1DM были моложе со средним возрастом 56,1 (SD=9,5), чем пациенты с T2DM со средним возрастом 64,0 (SD=9,1). Средний BMI для пациентов с T1DM составил 30,0 кг/м² (SD=5,9), а средний BMI 32,6 кг/м² (SD=5,06) наблюдался для пациентов с T2DM.

Таблица 4. Демографические данные и характеристики пациентов на исходном уровне - пациенты с диабетом 1 типа в соответствии с IVRS.

Плацебо (N=25) Алирокумаб (N=51) Всего (N=76) Возраст (лет) Число Среднее значение (SD) 58,5 (7,8) 54,9 (10,1) 56,1 (9,5) Возрастная группа (лет) [n(%)] <65 19 (76,0) 42 (82,4) 61 (80,3) от >=65 до <75 6 (24,0) 8 (15,7) 14 (18,4) >=75 0 1 (2,0) 1 (1,3) Пол [n (%)] Число Мужской 17 (68,0) 29 (56,9) 46 (60,5) Женский 8 (32,0) 22 (43,1) 30 (39,5) Вес (кг) Среднее значение (SD) 86,98 (18,41) 87,93 (18,47) 87,62 (18,33) BMI (кг/м²) Среднее значение (SD) 28,71 (4,82) 30,59 (6,25) 29,97 (5,85) Систолическое артериальное давление (мм рт. ст.) Среднее значение (SD) 126,5 (15,5) 129,9 (14,5) 128,8 (14,8) Диастолическое артериальное давление (мм рт. ст.) Среднее значение (SD) 69,5 (8,5) 74,7 (9,8) 73,0 (9,7) Частота сердечных сокращений (ударов в минуту) Среднее значение (SD) 68,4 (9,3) 73,0 (10,9) 71,5 (10,6) BMI: индекс веса тела

Таблица 5. Демографические данные и характеристики пациентов на исходном уровне - пациенты с диабетом 2 типа в соответствии с IVRS.

Плацебо (N=147) Алирокумаб (N=294) Всего (N=441) Возраст (лет) Число 147 294 441 Среднее значение (SD) 64,0 (9,4) 63,9 (8,9) 64,0 (9,1) Возрастная группа (лет) [n(%)] <65 73 (49,7) 143 (48,6) 216 (49,0) от >=65 до <75 55 (37,4) 126 (42,9) 181 (41,0) >=75 19 (12,9) 25 (8,5) 44 (10,0) Пол [n (%)] Число 147 294 441 Мужской 78 (53,1) 161 (54,8) 239 (54,2) Женский 69 (46,9) 133 (45,2) 202 (45,8) Вес (кг) Среднее значение (SD) 92,58 (20,80) 92,45 (18,38) 92,49 (19,20) BMI (кг/м²) Среднее значение (SD) 32,69 (5,50) 32,55 (4,84) 32,60 (5,06) Систолическое артериальное давление (мм рт. ст.) Среднее значение (SD) 132,4 (15,5) 131,7 (16,1) 131,9 (15,9) Диастолическое артериальное давление (мм рт. ст.) Среднее значение (SD) 75,1 (8,2) 76,0 (9,2) 75,7 (8,8) Частота сердечных сокращений (ударов в минуту) Среднее значение (SD) 72,5 (10,9) 72,8 (10,6) 72,7 (10,7) BMI: индекс веса тела

[00331] Рассчитанный уровень LDL-C на исходном уровне был выше у пациентов с T1DM (среднее значение=121,0 мг/дл, SD=51,2), чем у пациентов с T2DM (среднее значение=110,4 мг/дл, SD=37,3). Уровни триглицеридов на исходном уровне были ниже у пациентов с T1DM с медианой (Q1: Q3) = 102,0 мг/дл (76,5 : 135,0), чем у пациентов с T2DM с медианой (Q1 : Q3) = 147,0 мг/дл (105,0 : 212,0 ).

Таблица 6. Липидные параметры на исходном уровне - обобщенные результаты количественной оценки в стандартных единицах - пациенты с диабетом 1 типа в соответствии с IVRS.

Плацебо (N=25) Алирокумаб (N=51) Всего (N=76) Рассчитанный уровень LDL-C (мг/дл) Среднее значение (SD) 110,2 (31,2) 126,4 (58,2) 121,0 (51,2) Измеренный уровень LDL-C (мг/дл) Среднее значение (SD) 109,8 (31,4) 127,7 (58,1) 121,7 (51,1) Уровень холестерина, отличного от HDL-C, (мг/дл) Среднее значение (SD) 130,7 (34,2) 150,2 (62,9) 143,8 (55,6) Уровень общего холестерина (мг/дл) Среднее значение (SD) 195,2 (36,0) 205,1 (65,1) 201,9 (57,1) Уровень HDL-C (мг/дл) Среднее значение (SD) 64,4 (17,4) 54,9 (13,7) 58,1 (15,6) Уровень триглицеридов (мг/дл) Среднее значение (SD) 100,0 (38,1) 119,1 (58,4) 112,8 (53,1) Уровень богатых триглицеридами липопротеинов (мг/дл) Среднее значение (SD) 20,9 (7,6) 23,7 (11,4) 22,8 (10,4) Уровень липопротеина-(a) (мг/дл) Среднее значение (SD) 24,8 (29,2) 22,8 (23,0) 23,5 (25,1) Уровень аполипопротеина B (мг/дл) Среднее значение (SD) 87,0 (21,0) 99,7 (35,6) 95,4 (31,8) Уровень аполипопротеина A1 (мг/дл) Среднее значение (SD) 166,3 (23,8) 152,3 (26,4) 157,0 (26,2)

Что касается других липидных параметров, у пациентов с T1DM выявлено процентное снижение по сравнению с исходным уровнем числа частиц LDL-C (среднее значение LS) на 40,7% на 12 неделе и 44,4% на 24 неделе и процентное уменьшение размера частиц LDL-C на 2,3% на 12 неделе и 2,3% на 24 неделе. Уровень ApoC3 был снижен у этих пациентов на 6,9% на 12 неделе и 7,5% на 24 неделе.

Таблица 7. Липидные параметры на исходном уровне - обобщенные результаты количественной оценки в стандартных единицах - пациенты с диабетом 2 типа в соответствии с IVRS.

Плацебо (N=147) Алирокумаб (N=294) Всего (N=441) Рассчитанный уровень LDL-C (мг/дл) Среднее значение (SD) 109,6 (39,1) 110,8 (36,5) 110,4 (37,3) Измеренный уровень LDL-C (мг/дл) Среднее значение (SD) 110,5 (37,4) 112,1 (34,3) 111,6 (35,3) Уровень холестерина, отличного от HDL-C, (мг/дл) Среднее значение (SD) 144,9 (48,5) 144,7 (42,6) 144,8 (44,6) Уровень общего холестерина (мг/дл) Среднее значение (SD) 189,9 (47,6) 190,2 (42,4) 190,1 (44,1) Уровень HDL-C (мг/дл) Среднее значение (SD) 44,9 (13,2) 45,5 (12,5) 45,3 (12,7) Уровень триглицеридов (мг/дл) Среднее значение (SD) 189,4 (148,2) 174,6 (110,1) 179,5 (124,2) Уровень богатых триглицеридами липопротеинов (мг/дл) Среднее значение (SD) 34,6 (27,4) 33,2 (20,5) 33,7 (23,0) Уровень липопротеина-(a) (мг/дл) Среднее значение (SD) 29,7 (37,6) 38,9 (49,6) 35,8 (46,1) Уровень аполипопротеина B (мг/дл) Среднее значение (SD) 96,2 (26,8) 97,0 (24,7) 96,7 (25,4) Уровень аполипопротеина A1 (мг/дл) Среднее значение (SD) 141,7 (23,8) 141,6 (22,8) 141,6 (23,1)

[00332] Что касается других липидных параметров, у пациентов с T2DM выявлено процентное снижение по сравнению с исходным уровнем числа частиц LDL-C (среднее значение LS) на 37,6% на 12 неделе и 38,3% на 24 неделе и процентное уменьшение размера частиц LDL-C на 2,6% на 12 неделе и 2,8% на 24 неделе. Уровень ApoC3 был снижен у этих пациентов на 6,3% на 12 неделе и 5,8% на 24 неделе.

[00333] У пациентов с T1DM средняя продолжительность диабета и применения инсулина были схожими в группах лечения. Средняя продолжительность диабета составила 34,92 года (SD=12,67), а средняя продолжительность применения инсулина составила 34,81 года (SD=12,77). У пациентов с T2DM средняя продолжительность диабета и применения инсулина были схожими в группах лечения. Средняя продолжительность диабета составила 16,75 года (SD=8,13), а средняя продолжительность применения инсулина составила 8,01 года (SD=6,90) у пациентов с T2DM.

[00334] Продолжительность гиперхолестеринемии была в целом схожей в группах лечения и у пациентов с T1DM и T2DM.

[00335] Доля пациентов с непереносимостью статина, как сообщалось исследователем, составила 31,6% у пациентов с T1DM и 23,8% у пациентов с T2DM.

[00336] Доля пациентов, получавших фибраты при рандомизации, составила 2,6% у пациентов с T1DM и 8,8% у пациентов с T2DM.

[00337] Доля пациентов, принимавших ингибиторы абсорбции холестерина (в том числе эзетимиб) при рандомизации, была выше в группе алирокумаба (13,6%), чем в группе плацебо (7,6%), в частности у пациентов с T2DM: 45 пациентов (15,3%) против 10 пациентов (6,8%).

[00338] Сердечно-сосудистые нарушения в анамнезе и факторы риска были в целом схожими в группах лечения. Наблюдались следующие различия между пациентами с T1DM и T2DM:

(1) ASCVD было более частым у пациентов с T2DM, чем у пациентов с T1DM (40,1% относительно 21,1%) с более частой ишемической болезнью сердца (34,7% относительно 15,8%) и инсультом (8,2% относительно 2,6%) и более редким PAD (4,3% относительно 9,2%) у пациентов с T2DM относительно пациентов с T1DM.

(2) Среди пациентов без ASCVD у 56,7% пациентов с T1DM наблюдалось поражение органа-мишени (микроальбуминурия, макроальбуминурия) и/или CKD и/или ретинопатия по сравнению с 39,4% у пациентов с T2DM. Тем не менее среди пациентов без ASCVD наблюдались следующие дополнительные факторы сердечно-сосудистого риска:

(a) чаще встречается у пациентов с T1DM, чем у пациентов с T2DM: курильщик на данный момент (20,0% относительно 14,0%), препролиферативная диабетическая ретинопатия (36,7% относительно 12,9%) и пролиферативная диабетическая ретинопатия (20,0% относительно 5,7%).

(b) Реже встречается у пациентов с T1DM, чем у пациентов с T2DM: гипертония (55,0% относительно 84,8%), микроальбуминурия (10,0% относительно 19,7%), низкий уровень HDL-C (16,7% относительно 28,0%).

(3) Наличие 3 или более дополнительных факторов риска сердечно-сосудистых заболеваний у пациентов без ASCVD наблюдалось у 45% пациентов с T1DM и 55,7% пациентов с T2DM.

[00339] В целом, лечение пациентов с T1DM и T2DM осуществляли с помощью статинов высокой и средней интенсивности в обеих группах лечения, при этом лечение более высокой доли пациентов осуществляли с помощью статинов средней интенсивности (58,9%). В общем, лечение 59,0% пациентов с T1DM и T2DM осуществляли только статином.

Таблица 8. Средства фоновой липидокорригирующей терапии при рандомизации

Плацебо (N=172) Алирокумаб (N=345) Всего (N=517) Любой статин [n (%)] 129 (75,0) 258 (74,8) 387 (74,9) Интенсивность статина^{a, c} [n (%)] Число 127 257 384 Высокая 38 (29,5) 102 (39,5) 140 (36,2) Средняя 85 (65,9) 143 (55,4) 228 (58,9) Низкая 4 (3,1) 12 (4,7) 16 (4,1) Только статин [n (%)] 100 (58,1) 205 (59,4) 305 (59,0) Любой статин в дополнение к другому LMT [n (%)] 29 (16,9) 53 (15,4) 82 (15,9) Только другое LMT (без статина) [n (%)] 11 (6,4) 32 (9,3) 43 (8,3) Любое LMT, отличное от статинов^b [n (%)] 40 (23,3) 85 (24,6) 125 (24,2) Фибраты 15 (8,7) 26 (7,5) 41 (7,9) Секвестрант желчных кислот 0 1 (0,3) 1 (0,2) Ингибитор абсорбции холестерина 13 (7,6) 47 (13,6) 60 (11,6) Никотиновая кислота и производные 2 (1,2) 3 (0,9) 5 (1,0) Омега-3 жирные кислоты >= 1000 мг/день 17 (9,9) 16 (4,6) 33 (6,4) Ингибитор PCSK9 0 0 0 Нутрицевтики, воздействующие на липиды/другое 4 (2,3) 10 (2,9) 14 (2,7) Отсутствие LMT (ни статинов, ни другого LMT) [n (%)] 32 (18,6) 55 (15,9) 87 (16,8) Примечание: ^a Только для пациентов, которые в настоящее время принимают статин. ^b совместно со статинами или без них. ^c Статин с высокой интенсивностью соответствует 40-80 мг аторвастатина ежесуточно, 20-40 мг розувастатина ежесуточно или 80 мг симвастатина ежесуточно. Статин со средней интенсивностью соответствует 10-20 мг аторвастатина ежесуточно или 5-10 мг розувастатина ежесуточно, или 20-40 мг симвастатина ежесуточно, или 40-80 мг правастатина ежесуточно, или 40 мг ловастатина ежесуточно, или 80 мг флувастатина ежесуточно, или 2-4 мг питавастатина ежесуточно. Статины с низкой интенсивностью соответствует 10 мг симвастатина ежесуточно или 10-20 мг правастатина ежесуточно, или 20 мг ловастатина ежесуточно, или 20-40 мг флувастатина ежесуточно, или 1 мг питавастатина ежесуточно. Пациенты, получающие статин с более чем одним уровнем интенсивности, учитываются как принимающие статин с самой высокой интенсивностью. % рассчитывается с использованием числа пациентов, рандомизированных в качестве знаменателя, за исключением каждой интенсивности статинов, где % рассчитывается с использованием числа пациентов, принимающих статины, в качестве знаменателя, и для каждой категории ежесуточной дозы, где% рассчитывается с использованием числа пациентов, принимающих этот конкретный статин, в качестве знаменателя.

[00340] Воздействие исследуемого лекарственного продукта на популяцию для оценки безопасности обобщено в таблице 9.

Таблица 9. Воздействие исследуемого лекарственного продукта - инъекция

Плацебо (N=170) Алирокумаб (N=344) Продолжительность воздействия инъекции IMP (недели) Среднее значение (SD) 23,31 (3,92) 23,16 (3,90) Продолжительность воздействия инъекции IMP по категориям [n (%)] от >=1 до <4 недель 0 2 (0,6) от >=4 недель до <8 недель 5 (2,9) 6 (1,7) от >=8 недель до <12 недель 1 (0,6) 6 (1,7) от >=12 недель до <16 недель 3 (1,8) 7 (2,0) от >=16 недель до <24 недель 13 (7,6) 34 (9,9) >=24 недель 148 (87,1) 289 (84,0) Количество инъекций IMP Среднее значение (SD) 11,3 (2,0) 11,3 (2,1) Изменение дозы [n (%)] Пациенты с повышением дозы^a Н. о. 77/326 (23,6) Примечание: ^a пациенты с повышением дозы после контакта посредством IVRS на 12 неделе на по меньшей мере одну инъекцию алирокумаба 150 мг. Знаменатель соответствует пациентам, получавшим по меньшей мере одну инъекцию после контакта посредством IVRS на W12. Считалось, что пациенты находились в группе лечения, в которую их фактически определили. Продолжительность воздействия IMP в неделях определяется как: (дата последней инъекции IMP+14 дней - дата первой инъекции IMP)/7, независимо от прерываний.

ЭФФЕКТИВНОСТЬ

Первичная конечная точка эффективности

[00341] Алирокумаб превосходил плацебо по проценту изменения в рассчитанном уровне LDL-C от исходного уровня до недели 24 в популяции ITT пациентов с T1DM и T2DM (как показано в таблицах 10 и 11 и на фигурах 2 и 3). Среди пациентов с T1DM доля индивидуумов, достигших уровня LDL-C <70 мг/дл (<1,8 ммоль/л), составила 70,2% в группе алирокумаба и 5,1% в группе плацебо (P<0,0001), а также доля индивидуумов, достигших уровня LDL-C <50 мг/дл (1,3 ммоль/л) составила 55,1% в группе алирокумаба и 0% в группе плацебо (Р-значение не рассчитано). Среди пациентов с T2DM доля индивидуумов, достигших уровня LDL-C <70 мг/дл (<1,8 ммоль/л), составила 76,4% в группе алирокумаба и 7,4% в группе плацебо (P<0,0001), а также доля индивидуумов, достигших уровня LDL-C <50 мг/дл (1,3 ммоль/л) составила 50,7% в группе алирокумаба и 2,4% в группе плацебо (P<0,0001). Анализ чувствительности по первичной конечной точке эффективности показал схожие результаты в обеих популяциях (данные не показаны).

Таблица 10. Процентное изменение рассчитанного уровня LDL-C от исходного уровня до 24 недели: MMRM - пациенты с диабетом 1 типа в соответствии с IVRS

Рассчитанные уровни холестерина LDL Плацебо (N=25) Алирокумаб (N=49) Исходный уровень (ммоль/л) Число 25 49 Среднее значение (SD) 2,9 (0,8) 3,2 (1,2) Медианное значение 2,6 3,0 Min : Max 2: 5 1: 7 Исходный уровень (мг/дл) Число 25 49 Среднее значение (SD) 110,2 (31,2) 122,5 (47,8) Медианное значение 100,0 114,0 Min : Max 71: 180 48: 273 Процентное изменение от исходного уровня на 24 неделе (%) Среднее значение, определенное методом наименьших квадратов (SE) -3,9 (5,3) -51,8 (3,7) Различие для среднего значения, определенного методом наименьших квадратов (SE), по сравнению с плацебо -47,8 (6,5) 95% CI (от -60,7 до -35,0) P-значение по сравнению с плацебо <0.0001* Примечание: средние значения, определенные методом наименьших квадратов, стандартные ошибки (SE) и p-значение, полученные из анализа на основе MMRM (модели со смешанными эффектами для повторных измерений). Модель включает фиксированные категориальные эффекты группы лечения, страты рандомизации согласно IVRS, момент времени и взаимосвязи группы лечения-момент времени, страта-момент времени, группа лечения-страта, группа лечения-страта-момент времени, а также фиксированные ковариаты значения исходного уровня LDL-C и взаимосвязь значение исходного уровня-момент времени. Модель MMRM применяют в отношении всех пациентов в популяции ITT (т. е. пациентов с диабетом 1 типа и 2 типа). Модель MMRM и описание исходного уровня проводили в отношении пациентов со значением на исходном уровне и значением после исходного уровня в по меньшей мере одном из периодов анализа, используемых в модели. За p-значением следует '*', если оно является статистически значимым согласно фиксированному иерархическому подходу, применяемому для обеспечения строгого контроля общего показателя ошибки I рода на уровне 0,05.

Таблица 11. Процентное изменение рассчитанного уровня LDL-C от исходного уровня до 24 недели: MMRM - пациенты с диабетом 2 типа в соответствии с IVRS

Рассчитанные уровни холестерина LDL Плацебо (N=142) Алирокумаб (N=297) Исходный уровень (ммоль/л) Число 142 287 Среднее значение (SD) 2,8 (1,0) 2,9 (0,9) Медианное значение 2,6 2,7 Min : Max 1: 8 1: 7 Исходный уровень (мг/дл) Число 142 287 Среднее значение (SD) 109,5 (38,7) 110,3 (35,9) Медианное значение 102,0 104,0 Min : Max 43: 309 45: 279 Процентное изменение от исходного уровня на 24 неделе (%) Среднее значение, определенное методом наименьших квадратов (SE) 0,8 (2,2) -48,2 (1,6) Различие для среднего значения, определенного методом наименьших квадратов (SE), по сравнению с плацебо -49,0 (2,7) 95% CI (от -54,4 до -43,6) P-значение по сравнению с плацебо <0.0001* Примечание: средние значения, определенные методом наименьших квадратов, стандартные ошибки (SE) и p-значение, полученные из анализа на основе MMRM (модели со смешанными эффектами для повторных измерений). Модель включает фиксированные категориальные эффекты группы лечения, страты рандомизации согласно IVRS, момент времени и взаимосвязи группы лечения-момент времени, страта-момент времени, группа лечения-страта, группа лечения-страта-момент времени, а также фиксированные ковариаты значения исходного уровня LDL-C и взаимосвязь значение исходного уровня-момент времени. Модель MMRM применяют в отношении всех пациентов в популяции ITT (т. е. пациентов с диабетом 1 типа и 2 типа). Модель MMRM и описание исходного уровня проводили в отношении пациентов со значением на исходном уровне и значением после исходного уровня в по меньшей мере одном из периодов анализа, используемых в модели. За p-значением следует '*', если оно является статистически значимым согласно фиксированному иерархическому подходу, применяемому для обеспечения строгого контроля общего показателя ошибки I рода на уровне 0,05.

Вторичные конечные точки эффективности

[00342] Алирокумаб в результате обеспечивал значительное снижение от исходного уровня до недели 24 (по сравнению с плацебо) уровней холестерина, отличного от HDL-C, АроВ, общего холестерина и Lp(а), а также увеличение уровня HDL-C в популяции ITT пациентов с T1DM и T2DM (как показано в таблицах 12 и 13 соответственно).

Таблица 12. Процентное изменение в ключевых вторичных конечных точках эффективности от исходного уровня - пациенты с диабетом 1 типа

Выбранные ключевые вторичные конечные точки эффективности
% изменения от исходного уровня, среднее значение (SD) Плацебо (N=25) Алирокумаб (N=49) Различие по сравнению с плацебо, % [95% CI], P-значение Рассчитанный уровень LDL-C (неделя 12) -4,5 (5,0) -49,4 (3,5) -44,8 (6,1) [от -56,9 до -32,8], p<0,0001. Уровень холестерина, отличного от HDL-C (неделя 24) -3,2 (4,8) -45,9 (3,3) -42,7 (5,8) [от -54,2 до -31,3], p<0,0001. Уровень Apo B (неделя 24) -0,4 (4,3) -39,4 (3,0) -39,0 (5,3) [от -49,4 до -28,7], p<0,0001. Уровень общего холестерина (неделя 24) -0,7 (3,6) -29,9 (2,5) -29,2 (4,3) [от -37,8 до -20,7], p<0,0001. Lp(a) (неделя 24) -4,3 (5,3) -23,0 (3,8) -18,7 (6,5) [от -31,4 до -6,0], p<0,0001. Уровень HDL-C (неделя 24)† 7,3 (3,5) 11,2 (2,4) 3,9 (4,1) [от -4,2 до 12,0], p=0,343‡ Уровень триглицеридов (неделя 24)† 1,9 (6,7) -13,6 (4,7) -15,5 (8,1) [от -31,4 до 0,4], p=0,056‡ Число частиц LDL (неделя 24) -4,4 (4,6) -44,4 (3,2) -40,0 (5,6) [от -51,0 до -28,9], p<0,0001‡ Размер частиц LDL (неделя 24) 0,8 (0,5) -2,3 (0,3) -3,0 (0,6) [от -4,2 до -1,9], p<0,0001‡ Уровень ApoC3 (неделя 24, ITT) 1,6 (5,8) -7,4 (4,0) -9,0 [от 22,7 до 4,8] Уровень ApoA-I (неделя 24, ITT) 7,9 (2,6) 10,2 (1,8) 2,3 [от 3,8 до 8,4] Уровень TRL-C (неделя 24, ITT) -8,4 (8,1) -24,7 (5,6) -16,3 [от -35,4 до 2,8] Уровень TRL-C (неделя 24, при лечении) -4,2 (8,2) -24,3 (5,8) -20,1 [от 39,5 до 0,6] ^†Иерархическое тестирование прекращалось в конечной точке триглицеридов у участников с T2D и в конечной точке HDL-C у участников с T1D, поэтому все последующие статистические сравнения не считались статистически значимыми. ‡P-значения предоставлены только для наглядности. Apo - аполипопротеин; ITT - в зависимости от назначенного лечения; LDL-C - холестерин липопротеинов низкой плотности; Lp (а) - липопротеин (а); LS - метод наименьших квадратов; холестерин, отличный от HDL-C - не относящийся к холестерину липопротеинов низкой плотности; TRL-C - богатый триглицеридами холестерин липопротеинов; SE - стандартная ошибка; SD - стандартное отклонение.

Таблица 13. Процентное изменение в ключевых вторичных конечных точках эффективности от исходного уровня - пациенты с диабетом 2 типа

Выбранные ключевые вторичные конечные точки эффективности % изменения от исходного уровня, среднее значение (SD) Плацебо (N=142) Алирокумаб (N=287) Различие по сравнению с плацебо, % [95% CI], P-значение Рассчитанный уровень LDL-C (неделя 12) 1,4 (2,1) -48,8 (1,4) -50,2 (2,5) [от 55,2 до -45,3], p<0,0001. Уровень холестерина, отличного от HDL-C (неделя 24) 0,7 (2,0) -37,9 (1,4) -38,7 (2,4) [от 43,4 до -33,9], p<0,0001. Уровень Apo B (неделя 24) 3,3 (1,7) -33,4 (1,3) -36,7 (2,1) [от 40,9 до -32,5], p<0,0001. Уровень общего холестерина (неделя 24) 0,8 (1,5) -26,8 (1,0) -27,6 (1,8) [от 31,2 до -24,1], p<0,0001. Lp(a) (неделя 24) -0,5 (2,2) -19,0 (1,6) -18,4 (2,7) [от 23,7 до -13,2], p<0,0001. Уровень HDL-C (неделя 24)† 3,7 (1,4) 8,1 (1,0) 4,4 (1,7) [от 1,1 до 7,7]
P<0,01 Уровень триглицеридов (неделя 24)† 0,0 (2,7) -5,7 (2,0) -5,7 (3,4) [от 12,3 до 0,9], p=0,0902‡ Число частиц LDL (неделя 24) 1,9 (1,9) -38,3 (1,3) -40,2 (2,3) [от 44,7 до -35,6], p<0,0001‡ Размер частиц LDL (неделя 24) -0,3 (0,2) -2,8 (0,1) -2,5 (0,2) [от 2,9 до 2,0], p<0,0001‡ Уровень ApoC3 (неделя 24, ITT) 4,2 (2,3) -5,8 (1,7) -10,0 [от 15,6 до 4,4] Уровень ApoA-I (неделя 24, ITT) 4,5 (1,0) 7,4 (0,7) 2,9 [от 0,5 до 5,4] Уровень TRL-C (неделя 24, ITT) 1,4 (3,3) -15,7 (2,3) -17,2 (4,0) [от 25,1 до -9,3] Уровень TRL-C (неделя 24, при лечении) 2,2 (3,4) -16,4 (2,4) -18,6 [от 26,6 до 10,5] ^†Иерархическое тестирование прекращалось в конечной точке триглицеридов у участников с T2D и в конечной точке HDL-C у участников с T1D, поэтому все последующие статистические сравнения не считались статистически значимыми. ‡P-значения предоставлены только для наглядности. Apo - аполипопротеин; ITT - в зависимости от назначенного лечения; LDL-C - холестерин липопротеинов низкой плотности; Lp (а) - липопротеин (а); LS - метод наименьших квадратов; холестерин, отличный от HDL-C - не относящийся к холестерину липопротеинов низкой плотности; TRL-C - богатый триглицеридами холестерин липопротеинов; SE - стандартная ошибка; SD - стандартное отклонение.

Связанные с диабетом конечные точки

[00343] В целом, лечение посредством FPG и HbA1c, а также снижения уровня глюкозы оставалось постоянным с течением времени у пациентов с T1DM и T2DM в обеих группах лечения.

[00344] Что касается HbA1c, в когорте T1DM, в группе алирокумаба среднее значение HbA1c% составляло 7,84% (SD=0,94) на исходном уровне со средним абсолютным изменением=-0,03% (0,6), в то время как в группе плацебо среднее значение HbA1c составляло 7,68% (0,78) на исходном уровне, со средним абсолютным изменением=-0,23% (0,36). В когорте T2DM, в группе алирокумаба среднее значение HbA1c составляло 7,52% (0,96) на исходном уровне со средним абсолютным изменением=0,18% (0,74), в то время как в группе плацебо среднее значение HbA1c составляло 7,54% (1,02) на исходном уровне, со средним абсолютным изменением=0,06% (0,66).

[00345] Что касается FPG, в когорте T1DM, в группе алирокумаба среднее значение FPG составляло 173 мг/дл (SD=70,6) на исходном уровне со средним абсолютным изменением=-0,03 мг/дл (0,6), в то время как в группе плацебо среднее значение FPG составляло 166,5 мг/дл (75,6) на исходном уровне, со средним абсолютным изменением=14,6 мг/дл (75,9). В когорте T2DM, в группе алирокумаба среднее значение FPG составляло 154,1 мг/дл (50,1) на исходном уровне со средним абсолютным изменением=9,5 мг/дл (61,8), в то время как в группе плацебо среднее значение FPG составляло 153,5 мг/дл (52,5) на исходном уровне, со средним абсолютным изменением=10,0 мг/дл (47,0).

Безопасность

[00346] В общей сложности 344 пациента (51 с T1DM и 293 с T2DM) подвергались воздействию алирокумаба, а 170 пациентов (25 с T1DM и 145 с T2DM) - плацебо.

[00347] В целом, показатели пациентов с любыми возникающими нежелательными явлениями лечения (TEAE) были одинаковыми в группах лечения в популяции для оценки безопасности пациентов с T1DM или T2DM (см. таблицу 14).

Таблица 14. Обзор профиля нежелательных явлений: нежелательные явления, возникшие в ходе лечения

Плацебо (N=170) n (%) Алирокумаб (N=344) n (%) Всего (N=514) n (%) Пациенты с каким-либо TEAE 109 (64,1) 222 (64,5) 331 (64,4) Пациенты с каким-либо SAE, возникшим в ходе лечения 14 (8,2) 25 (7,3) 39 (7,6) Пациенты с каким-либо TEAE, приведшим к смерти 1 (0,6) 0 1 (0,2) Пациенты с каким-либо TEAE, которое приводило к окончательному прекращению лечения 4 (2,4) 17 (4,9) 21 (4,1) Примечание: TEAE: Возникшее после начала лечения нежелательное явление, SAE: Серьезное нежелательное явление. n (%) = количество и процентная доля пациентов c по меньшей мере одним TEAE.

[00348] TEAE чаще (≥ 10%) регистрировались в следующих системно-органных классах (SOC):

(а) инфекции и инвазии (21,8% в группе алирокумаба относительно 21,8% в группе плацебо);

(b) желудочно-кишечные нарушения (13,1% в группе алирокумаба относительно 12,4% в группе плацебо);

(c) нарушения со стороны костно-мышечной и соединительной тканей (21,5% в группе алирокумаба относительно 15,9% в группе плацебо); и

(d) общие нарушения и нарушения в месте введения (11,0% в группе алирокумаба относительно 8,8% в группе плацебо)

[00349] На уровне PT наиболее часто регистрируемые TEAE (≥ 2%) в группе алирокумаба и с отличием ≥ 0,5% в группе плацебо наблюдались в порядке убывания частоты в группе алирокумаба: миалгия (4,4% относительно 1,8%) артралгия (2,9% относительно 1,8%), бронхит (2,6% относительно 0,6%), головокружение (2,6% относительно 1,2%) и периферические отеки (2,0% относительно 0,6%). Напротив, наиболее часто сообщаемыми TEAE (≥ 2%) в группе плацебо и с отличием ≥ 0,5% в группе алирокумаба были: грипп (2,3% относительно 2,9%), боль в конечностях (1,7% относительно 2,9%) гипогликемия (1,7% относительно 2,4%), кашель (1,5% относительно 2,9%), скелетно-мышечная боль (1,2% относительно 2,4%), инфекция верхних дыхательных путей (0,9% относительно 2,4%), гипергликемия (0,9% относительно 2,4%) и пневмония (0,6% относительно 2,4%).

[00350] В целом, возникающие при лечении SAE были зарегистрированы у 25 пациентов (7,3%) в группе алирокумаба и у 14 пациентов (8,2%) в группе плацебо. SAE (на уровне PT), о которых сообщалось более чем у 1 пациента в обеих группах лечения, были пневмония (у 1 пациента (0,3%) в группе алирокумаба относительно 2 пациентов (1,2%) в группе плацебо), вертебрально-фораминальный стеноз (у 2 пациентов (0,6%) в группе алирокумаба по сравнению с отсутствием пациентов в группе плацебо) и инфекции мочевыводящих путей (у 2 пациентов (0,6%) по сравнению с отсутствием пациентов в группе плацебо). Один летальный случай от инфаркта миокарда был зарегистрирован у пациента с T2DM в группе плацебо через 1 месяц после первого введения дозы IMP (визит 3). В целом, 17 пациентов (4,9%) в группе алирокумаба и 4 пациента (2,4%) в группе плацебо испытывали TEAE, что приводило к окончательному прекращению лечения. На уровне PT доля пациентов с TEAE, что привело к окончательному прекращению лечения у более чем одного пациента из группы лечения была головная боль (2 пациента (0,6%) в группе алирокумаба и отсутствие пациента в группе плацебо), когнитивное нарушение (2 пациента (0,6%) по сравнению с отсутствием пациентов), аллергический дерматит (2 пациента (0,6%) по сравнению с отсутствием пациентов) и миалгия (3 пациента (0,9%) относительно 2 пациентов (1,2%)).

[00351] Что касается нежелательных явлений, представляющих особый интерес (AESI), увеличение ALT, отвечающего критериям AESI, было определено как ALT ≥3 x ULN (если исходный уровень ALT <ULN) или ALT ≥2 раза от исходного значения (если исходный уровень ALT ≥ULN). Эти явления были зарегистрированы у 2 пациентов (0,6%) в группе алирокумаба относительно 1 пациента (0,6%) в группе плацебо.

[00352] Аллергические реакции на лекарственное средство, отвечающие критериям AESI, были определены как аллергические явления, которые требуют консультации с другим врачом для дальнейшей оценки. Эти явления были зарегистрированы у 5 пациентов (1,5%) в группе алирокумаба относительно 4 пациентов (2,4%) в группе плацебо. Эти реакции касались в основном кожных нарушений и нарушений подкожных тканей, о которых сообщалось у 3 пациентов (0,9%) в группе алирокумаба (1 аллергический дерматит, 1 экзема и 1 реакция фоточувствительности) и у 2 пациентов (1,2%) в группе плацебо (1 дерматит, 1 лекарственная сыпь). Двумя другими аллергическими реакциями на лекарственное средство AESI в группе алирокумаба были гиперчувствительность к лекарственным средствам и эозинофилия.

[00353] Неврологические явления, отвечающие критериям AESI, были определены как неврологические явления, которые требуют дополнительных обследований/процедур и/или направления к специалисту. Эти явления были зарегистрированы у 1 пациента (0,3%) в группе алирокумаба (парастезия) относительно 1 пациента (0,6%) в группе плацебо. Оба явления были зарегистрированы у пациентов с T2DM.

[00354] Все нейрокогнитивные явления рассматривали как AESI. Нейрокогнитивные явления по данным спонсора или группы FDA были зарегистрированы у 4 пациентов (1,2%) в группе алирокумаба по сравнению с отсутствием пациентов в группе плацебо. Все явления были зарегистрированы у пациентов с T2DM: когнитивные нарушения были зарегистрированы у 2 пациентов (0,6%), а также ухудшение памяти и амнезия у 1 пациента (0,3%) в каждом случае. Следует отметить, что 2 случая когнитивных нарушений также привели к окончательному прекращению лечения.

[00355] Локальные реакции в месте инъекции, отвечающие критериям AESI, были определены как реакции в месте инъекции, которые были аллергическими, и требовали консультации с другим врачом, или реакции в месте инъекции, которые не были аллергическими, которые были клинически значимыми (например, реакция отека или эритема с диаметром>2,5 см; реакция, которая мешает активности). LISR, подтвержденная исследователем как связанная с IMP ('в eCRF'), была зарегистрирована у 6 пациентов (1,7%) в группе алирокумаба относительно 8 пациентов (4,7%) в группе плацебо (реакция в месте инъекции плацебо для алирокумаба). Нет сообщений о местных реакциях в месте инъекции (LISR), отвечающих критериям AESI, определяемых как реакции, которые требуют консультации с другим врачом для дальнейшей оценки.

[00356] Не было сообщений о симптоматической передозировке или беременности.

[00357] Анализы функциональных проб печени (ALT, AST, ALP, общий билирубин), CPK и почечных функциональных проб (креатинин, eGFR, BUN) не выявили различий между группами лечения в изменениях во времени ни для одного из изученных параметров. Анализ PCSA не выявил увеличения PCSA ALT ни в одной из групп лечения во время исследования. У пациентов с нормальными значениями CPK на исходном уровне увеличение> 3 ULN (и ≤ 10 ULN) было зарегистрировано у 7 пациентов (2,1%) в группе алирокумаба по сравнению с 1 пациентом (0,6%) в группе плацебо. Все пациенты страдали T2DM. Об увеличении CPK> 10 ULN не сообщалось.

[00358] Численные, незначительные различия наблюдались в долях пациентов с легким, средним или серьезным снижением скорости клубочковой фильтрации (GFR) в течение периода лечения, независимо от исходного состояния: легкое, среднее и серьезное снижение GFR у 49,7%, 28,1% и 3,8% пациентов соответственно в группе алирокумаба и у 50,6%, 24,4% и 3,6% пациентов соответственно в группе плацебо. Аналогичным образом, повышение уровня креатинина в крови (≥30% и <100%) было измерено у 13 (3,8%) пациентов в группе алирокумаба относительно 5 пациентов (3,0%) в группе плацебо. Ни у одного пациента не было увеличения уровня креатинина в крови> = 100%. Не было значимых различий при оценке почечной функции.

[00359] Никаких значимых различий по жизненно важным показателям между группами лечения не наблюдалось.

Пример 3. Анализ индивидуумов с сахарным диабетом 2 типа и ASCVD из клинических испытаний Odyssey DM-Insulin

[00360] Индивидуумы с диабетом часто имеют высокий уровень атерогенных липопротеинов и холестерина, отраженный в повышенном уровне холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-C), уровне холестерина, не относящегося к холестерину липопротеинов высокой плотности (холестерина, отличного от HDL-C), аполипопротеина В (АроВ) и числе частиц липопротеинов низкой плотности (LDL-PN). Наличие атеросклеротического сердечно-сосудистого заболевания (ASCVD) увеличивает риск будущих сердечно-сосудистых явлений.

[00361] В этом анализе авторы настоящего изобретения оценивали эффективность и безопасность алирокумаба среди индивидуумов с T2DM, высоким уровнем LDL-C или холестерина, отличного от HDL-C, и установили ASCVD для получения максимально переносимой дозы статина в исследовании DM-Insulin. Участники исследования DM-Insulin с ASCVD и T1DM не были включены в этот анализ из-за низкого числа индивидуумов в этой группе (алирокумаб: n=11; плацебо: n=5). Как используется в этом примере, ASCVD было определено как ишемическая болезнь сердца (CHD; острый и бессимптомный инфаркт миокарда (MI) и нестабильная стенокардия), ишемический инсульт или заболевание периферических артерий.

[00362] Исходные данные и данные об эффективности были проанализированы в соответствии с исследованиями. Анализ эффективности включал процентное снижение на 24 неделе по сравнению с исходным уровнем холестерина, отличного от HDL-C, LDL-C, АроВ и LDL-PN, а также процентную долю индивидуумов, достигших уровня отличного от HDL-C <100 мг/дл (<2,59 ммоль/л), LDL-C <70 мг/дл (<1,81 ммоль/л) и ApoB <80 мг/дл на 24 неделе. Анализ в отношении группы пациентов, сформированной в зависимости от назначенного лечения (ITT) включал всех рандомизированных индивидуумов с исходным значением LDL-C и по меньшей мере одним значением LDL-C до 24 недели.

[00363] Этот анализ включал 177 индивидуумов DM-Insulin с установленными ASCVD и T2DM (таблица 15).

Таблица 15. Исходные характеристики (рандомизированная популяция)

Алирокумаб n=119) Плацебо (n=58) Возраст, лет, среднее значение (SD) 66,2 (8,7) 64,9 (8,9) Пол, мужской, n (%) 79 (66,4) 32 (55,2) BMI, кг/м², среднее (SD) 32,6 (4,5) 33,4 (5,8) CHD, n (%) 102 (85,7) 51 (87,9) Острый MI 59 (49,6) 18 (31,0) Бессимптомный MI 4 (3,4) 4 (6,9) Нестабильная стенокардия 15 (12,6) 4 (6,9) Процедура реваскуляризации коронарных сосудов 80 (67,2) 37 (63,8) Другое клинически значимое CHD^† 31 (26,1) 15 (25,9) Ишемический инсульт, n (%) 27 (22,7) 9 (15,5) PAD, n (%) 13 (10,9) 6 (10,3) HTN,^‡ n (%) 105 (88,2) 53 (91,4) CKD,^§ n (%) 37 (31,1) 13 (22,4) Случаи диабета с поражением органа-мишени,^ǁ n (%) 60 (50,4) 28 (48,3) Статин, n (%) 88 (73,9) 39 (67,2) Любое LLT, отличное от статина, n (%) 34 (28,6) 11 (19,0) HbA1c, %, среднее значение (SD) 7,5 (0,9) 7,4 (1,0) FPG, мг/дл [ммоль/л], среднее значение (SD) 162,6 (52,5) [9,0 (2,9)] 146,7 (45,2) [8,1 (2,5)] Инсулин, n (%) 119 (100) 57 (98,3)^¶ Отличное от инсулина GLT, n (%) Бигуаниды 57 (47,9) 33 (56,9) Сульфонилмочевины 11 (9,2) 7 (12,1) Ингибитор DPP-4 21 (17,6) 7 (12,1) Агонист рецептора GLP-1 11 (9,2) 8 (13,8) Ингибитор SGLT2 10 (8,4) 11 (19,0) Липиды, мг/дл [ммоль/л], среднее значение (SD) Уровень холестерина, отличного от HDL-C, 142,8 (41,5) 147,0 (54,9) [3,70 (1,08)] [3,81 (1,42)] Уровень LDL-C 107,2 (35,1) 111,9 (46,4) [2,78 (0,91)] [2,90 (1,20)] Уровень ApoB 96,4 (25,1) 98,7 (32,0) LDL-PN, нмоль/л, среднее значение (SD) 1339,5 (408,5) 1425,0 (467,9) ^†Диагностированное с помощью инвазивного или неинвазивного тестирования. ^‡Включает пациентов с установленной HTN, принимающих препараты против HTN. ^§Определяется как рассчитанная скорость клубочковой фильтрации 15-60 мл/мин./1,73 м². ^ǁОпределяется как микроальбуминурия, макроальбуминурия, ретинопатия и/или CKD. ^¶Один индивидуум в группе плацебо не получал инсулин во время рандомизации и оставался без лечения инсулином в течение всего исследования.
BMI - индекс веса тела; DPP4 - дипептидилпептидаза 4; GLP-1, глюкагоноподобный петид 1; GLT - средство лечения, снижающее уровень глюкозы; FPG - уровень глюкозы в плазме крови натощак; HbA1c - гликированный гемоглобин; HTN - гипертония; SGLT2 - натрий-глюкозный котранспортер 2 типа.

[00364] Независимо от распределения лечения 89,3% обследованных индивидуумов имели гипертонию в анамнезе, а 28,2% имели хроническое заболевание почек (CKD) в дополнение к ASCVD. В целом, 20,3% имели в анамнезе ишемический инсульт, а 10,7% имели заболевание периферических артерий (PAD). В начале исследования средний (стандартное отклонение [SD]) уровень холестерина, отличного от HDL-C, составлял 144,2 (46,2) мг/дл [3,73 (1,20) ммоль/л]; средний уровень LDL-C составлял 108,7 (39,1) мг/дл [2,82 (1,01) ммоль/л], независимо от распределения лечения.

Эффективность

[00365] Алирокумаб обеспечивал снижение уровня холестерина, отличного от HDL-C, ApoB, LDL-PN и LDL-C от исходного уровня на 24 неделе по сравнению с контролем (фигура 4). На 24 неделе значительно большая доля людей достигла уровня холестерина, отличного от HDL-C, <100 мг/дл (<2,59 ммоль/л), уровня LDL-C <70 мг/дл (<1,81 ммоль/л) и уровня ApoB <80 мг/дл по сравнению с контролем (все P <0,0001; фигура 5).

Безопасность

[00366] Анализ безопасности проводился в объединенной популяции индивидуумов с T2DM, высоким уровнем LDL-C или холестерина, отличного от HDL-C, и установленным ASCVD, получающих максимально переносимые дозы статина в исследовании DM-Insulin, и индивидуумов с T1DM или T2DM, высоким уровнем LDL-C или холестерина, отличного от HDL-C, и установленным ASCVD, получающих максимально переносимые дозы статина в исследовании DM-Dyslipidemia (см. Chan et al. (2017) Ann Transl Med. 5 (23): 477, который включен в данный документ посредством ссылки в полном объеме). В общей сложности 66,4% (алирокумаб) и 67,0% (контроль) пациентов сообщили о нежелательных явлениях, возникающих при лечении (TEAE; таблица 16). Картина неблагоприятных явлений была одинаковой в обеих группах. Средние (SD) уровни HbA1c были одинаковыми в каждой группе лечения на исходном уровне (алирокумаб: 7,3 [0,9]%; контроль: 7,3 [0,9]%) и 24 неделе (алирокумаб: 7,6 [1,2]%; контроль: 7,5 [1,2]%; анализ безопасности). Уровни FPG также были одинаковыми независимо от распределения лечения на исходном уровне (алирокумаб: 154,2 [47,9] мг/дл, 8,6 [2,7] ммоль/л; контроль: 149,5 [43,7] мг/дл, 8,3 [2,4] ммоль/л) и на 24 неделе (алирокумаб: 164,7 [54,9] мг/дл, 9,1 [3,0] ммоль/л; контроль: 159,4 [48,4] мг/дл, 8,9 [2,7] ммоль/л; анализ безопасности).

Таблица 16. Сводные данные безопасности

n (%) Алирокумаб (n=213) Контроль (n=104) TEAE 142 (66,7) 70 (67,3) Возникшие в ходе лечения SAE 28 (13,1) 10 (9,6) TEAE, приведшие к смерти 1 (0,5) 1 (1,0) TEAE, приведшие к окончательному прекращению лечения 13 (6,1) 2 (2,3) TEAE, встречающиеся у >2% людей, в соответствии с предпочтительным термином Инфекция мочевыводящих путей 8 (3,8) 6 (5,8) Диарея 8 (3,8) 6 (5,8) Назофарингит 6 (2,8) 5 (4,8) Грипп 7 (3,3) 4 (3,8) Гипертензия 8 (3,8) 4 (3,8) Головная боль 7(3,3) 1 (1,0) Костно-мышечная боль 7(3,3) 3 (2,9) Артралгия 3 (1,4) 3(2,9) Бронхит 3 (1,4) 3 (2,9) Кашель 1 (0,5) 3 (2,9) Усталость 5 (2,3) 3 (2,9) Гипергликемия 0 (0,0) 3 (2,9) Гипотензия 2 (0,9) 3 (2,9) Тошнота 4 (1,9) 3 (2,9) Боль в конечности 4 (1,9) 3 (2,9) Боль в спине 6 (2,8) 2 (1,9) Головокружение 6 (2,8) 3 (2,9) Катаракта 5 (2,3) 1 (1,0) Миалгия 5 (2,3) 1 (1,0) SAE, серьезное нежелательное явление.

Выводы

Среди индивидуумов с T2DM и ASCVD, которые имели высокие уровни LDL-C, несмотря на прием максимально переносимой дозы статинов, алирокумаб значительно снижал содержание атерогенного холестерина и LDL-PN по сравнению с контролем.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Sanofi Biotechnology

<120> СПОСОБЫ ЛЕЧЕНИЯ ГИПЕРЛИПИДЕМИИ У ПАЦИЕНТОВ С ДИАБЕТОМ ПОСРЕДСТВОМ ВВЕДЕНИЯ ИНГИБИТОРА PCSK9

<130> 602044:SA9-208

<150> US 62/517,672

<151> 2017-06-09

<150> US 62/532,162

<151> 2017-07-13

<150> EP 18305565.6

<151> 2018-05-04

<160> 198

<170> PatentIn версия 3.5

<210> 1

<211> 118

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 1

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Ser Ser Lys His Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Ser Asn Trp Gly Asn Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 2

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 2

Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr Ala

1 5

<210> 3

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 3

Ile Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr

1 5

<210> 4

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 4

Ala Lys Asp Ser Asn Trp Gly Asn Phe Asp Leu

1 5 10

<210> 5

<211> 447

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид тяжелой цепи REGN727

<400> 5

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Gly Ser Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Ser Ser Lys His Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Lys Asp Ser Asn Trp Gly Asn Phe Asp Leu Trp Gly Arg Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro

115 120 125

Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly

130 135 140

Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn

145 150 155 160

Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln

165 170 175

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser

180 185 190

Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser

195 200 205

Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr

210 215 220

His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser

225 230 235 240

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

245 250 255

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro

260 265 270

Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

275 280 285

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

290 295 300

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

305 310 315 320

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr

325 330 335

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

340 345 350

Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

355 360 365

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

370 375 380

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

385 390 395 400

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser

405 410 415

Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

420 425 430

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly

435 440 445

<210> 6

<211> 113

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 6

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Arg

20 25 30

Ser Asn Asn Arg Asn Phe Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Asn Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 7

<211> 12

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 7

Gln Ser Val Leu Tyr Arg Ser Asn Asn Arg Asn Phe

1 5 10

<210> 8

<211> 3

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 8

Trp Ala Ser

1

<210> 9

<211> 220

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид легкой цепи REGN727

<400> 9

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Arg

20 25 30

Ser Asn Asn Arg Asn Phe Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Asn Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

115 120 125

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

130 135 140

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

145 150 155 160

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

165 170 175

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

180 185 190

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

195 200 205

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

210 215 220

<210> 10

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 10

Gln Gln Tyr Tyr Thr Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 11

<211> 127

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 11

Glu Met Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser His

20 25 30

Trp Met Lys Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Asn Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Tyr Val Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Phe

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Ile Val Leu Met Val Tyr Asp Met Asp Tyr Tyr Tyr Tyr

100 105 110

Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 12

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 12

Gly Phe Thr Phe Ser Ser His Trp

1 5

<210> 13

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 13

Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys

1 5

<210> 14

<211> 20

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 14

Ala Arg Asp Ile Val Leu Met Val Tyr Asp Met Asp Tyr Tyr Tyr Tyr

1 5 10 15

Gly Met Asp Val

20

<210> 15

<211> 112

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 15

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser

20 25 30

Asn Gly Asn Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Thr

85 90 95

Leu Gln Thr Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 16

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 16

Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Asn Tyr

1 5 10

<210> 17

<211> 3

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 17

Leu Gly Ser

1

<210> 18

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 18

Met Gln Thr Leu Gln Thr Pro Leu Thr

1 5

<210> 19

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 19

Gly Phe Thr Phe Ser Ser His Trp

1 5

<210> 20

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 20

Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys

1 5

<210> 21

<211> 20

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 21

Ala Arg Asp Ile Val Leu Met Val Tyr Asp Met Asp Tyr Tyr Tyr Tyr

1 5 10 15

Gly Met Asp Val

20

<210> 22

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 22

Gln Ser Leu His His Ser Asn Gly Asn Asn Tyr

1 5 10

<210> 23

<211> 3

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 23

Leu Gly Ser

1

<210> 24

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 24

Met Gln Thr Leu Gln Thr Pro Leu Thr

1 5

<210> 25

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 25

Gly Phe Thr Phe Ser Ser His Trp

1 5

<210> 26

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 26

Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys

1 5

<210> 27

<211> 20

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 27

Ala Arg Asp Ile Val Leu Met Val Tyr His Met Asp Tyr Tyr Tyr Tyr

1 5 10 15

Gly Met Asp Val

20

<210> 28

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 28

Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Asn Tyr

1 5 10

<210> 29

<211> 3

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 29

Leu Gly Ser

1

<210> 30

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 30

Met Gln Thr Leu Gln Thr Pro Leu Thr

1 5

<210> 31

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 31

Gly Phe Thr Phe Ser Ser His Trp

1 5

<210> 32

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 32

Ile Asn Gln Asp Gly Ser Glu Lys

1 5

<210> 33

<211> 20

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 33

Ala Arg Asp Ile Val Leu Met Val Tyr His Met Asp Tyr Tyr Tyr Tyr

1 5 10 15

Gly Met Asp Val

20

<210> 34

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 34

Gln Ser Leu His His Ser Asn Gly Asn Asn Tyr

1 5 10

<210> 35

<211> 3

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 35

Leu Gly Ser

1

<210> 36

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 36

Met Gln Thr Leu Gln Thr Pro Leu Thr

1 5

<210> 37

<211> 131

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид VH; m2CX1D05

<400> 37

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Asn Ser His

20 25 30

Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Gly Ile Asn Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Tyr Glu Ile Gln Ile Gly Arg Tyr Gly Met Asn Val Tyr

100 105 110

Tyr Leu Met Tyr Arg Phe Ala Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

115 120 125

Val Ser Ser

130

<210> 38

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR1 VH; m2CX1D05

<400> 38

Gly Gly Thr Phe Asn Ser His Ala Ile Ser

1 5 10

<210> 39

<211> 20

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR2 VH; m2CX1D05

<400> 39

Trp Met Gly Gly Ile Asn Pro Ile Leu Gly Ile Ala Asn Tyr Ala Gln

1 5 10 15

Lys Phe Gln Gly

20

<210> 40

<211> 22

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR3 VH; m2CX1D05

<400> 40

His Tyr Glu Ile Gln Ile Gly Arg Tyr Gly Met Asn Val Tyr Tyr Leu

1 5 10 15

Met Tyr Arg Phe Ala Ser

20

<210> 41

<211> 213

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид LC; m2CX1D05

<400> 41

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Ser Ala

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asn Gly Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asp Gly Asp Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro

100 105 110

Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr

115 120 125

Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys

130 135 140

Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu

145 150 155 160

Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser

165 170 175

Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala

180 185 190

Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe

195 200 205

Asn Arg Gly Glu Ala

210

<210> 42

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR1 VL; m2CX1D05

<400> 42

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Ser Ala Leu Asn

1 5 10

<210> 43

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR2 VL; m2CX1D05

<400> 43

Leu Leu Ile Tyr Asn Gly Ser Thr Leu Gln Ser

1 5 10

<210> 44

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR3 VL; m2CX1D05

<400> 44

Gln Gln Phe Asp Gly Asp Pro

1 5

<210> 45

<211> 119

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид VH; 1B20

<400> 45

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu

1 5 10 15

Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe

50 55 60

Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Tyr Trp Tyr Lys Pro Leu Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 46

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR1 VH; 1B20

<400> 46

Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr Trp Ile Ser

1 5 10

<210> 47

<211> 20

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR2 VH; 1B20

<400> 47

Trp Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro

1 5 10 15

Ser Phe Gln Gly

20

<210> 48

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR3 VH; 1B20

<400> 48

Asp Tyr Trp Tyr Lys Pro Leu Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 49

<211> 220

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид LC; 1B20

<400> 49

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Ser Ser Phe Pro Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp

115 120 125

Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn

130 135 140

Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu

145 150 155 160

Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp

165 170 175

Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr

180 185 190

Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser

195 200 205

Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Ala

210 215 220

<210> 50

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR1 VL; 1B20

<400> 50

Arg Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 51

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR2 VL; 1B20

<400> 51

Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5 10

<210> 52

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR3 VL; 1B20

<400> 52

Gln Gln Tyr Ser Ser Phe Pro Ile

1 5

<210> 53

<211> 120

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид вариабельной области тяжелой цепи антитела

<400> 53

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Trp Ile Asp Pro Gly Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Arg Tyr Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser

115 120

<210> 54

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид области CDR1 тяжелой цепи антитела AX132

<400> 54

Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met Tyr Trp Val Arg

1 5 10 15

<210> 55

<211> 23

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид области CDR2 тяжелой цепи антитела AX132

<400> 55

Trp Ile Gly Trp Ile Asp Pro Gly Ser Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu

1 5 10 15

Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr

20

<210> 56

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид области CDR3 тяжелой цепи антитела AX132

<400> 56

Cys Ala Arg Glu Arg Tyr Gly Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

1 5 10 15

<210> 57

<211> 108

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид вариабельной области легкой цепи антитела

<400> 57

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Val Gly Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Pro Pro

85 90 95

Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 58

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид области CDR1 легкой цепи антител AX213 и AX132

<400> 58

Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Val Gly Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr

1 5 10 15

Gln

<210> 59

<211> 13

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид области CDR2 легкой цепи антител AX213 и AX132

<400> 59

Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro

1 5 10

<210> 60

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид участка CDR3 легкой цепи антител AX132 и AX213

<400> 60

Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Pro Pro Val Val Phe Gly Gly

1 5 10 15

<210> 61

<211> 120

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид вариабельной области тяжелой цепи антитела

<400> 61

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr

20 25 30

Gly Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Gly Asn Gly Gly Thr Arg Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ala Asn Asp Gly Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser

115 120

<210> 62

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид области CDR1 тяжелой цепи антитела AX213

<400> 62

Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Arg Tyr Gly Ile Asn Trp Val Arg

1 5 10 15

<210> 63

<211> 23

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид области CDR2 тяжелой цепи антитела AX213

<400> 63

Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Gly Asn Gly Gly Thr Arg Tyr Asn Glu

1 5 10 15

Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr

20

<210> 64

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид области CDR3 тяжелой цепи антитела AX213

<400> 64

Cys Ala Arg Ala Asn Asp Gly Tyr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

1 5 10 15

<210> 65

<211> 108

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид вариабельной области легкой цепи антитела

<400> 65

Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Val Gly Ser Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Pro Pro

85 90 95

Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 66

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид области CDR1 легкой цепи антител AX213 и AX132

<400> 66

Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Val Gly Ser Tyr Leu Asn Trp Tyr

1 5 10 15

Gln

<210> 67

<211> 13

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид области CDR2 легкой цепи антител AX213 и AX132

<400> 67

Leu Ile Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro

1 5 10

<210> 68

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид участка CDR3 легкой цепи антител AX132 и AX213

<400> 68

Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Pro Pro Val Val Phe Gly Gly

1 5 10 15

<210> 69

<211> 119

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Последовательность синтетического полипептида VH антитела AX1

<400> 69

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asn Pro Asp Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Arg Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Gly Arg Leu Ser Trp Asp Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 70

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Последовательность синтетического пептида CDR1 VH антитела AX1

<400> 70

Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His Trp Val Arg

1 5 10 15

<210> 71

<211> 23

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Последовательность синтетического пептида CDR2 VH антитела AX1

<400> 71

Trp Ile Gly Arg Ile Asn Pro Asp Ser Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu

1 5 10 15

Lys Phe Lys Gly Arg Ala Thr

20

<210> 72

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Последовательность синтетического пептида CDR3 VH антитела AX1

<400> 72

Cys Ala Arg Gly Gly Arg Leu Ser Trp Asp Phe Asp Val Trp Gly Gln

1 5 10 15

<210> 73

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Последовательность синтетического полипептида VL антитела AX

<400> 73

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Arg Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Ala Tyr Asp Tyr Ser Leu Gly

85 90 95

Gly Tyr Val Phe Gly Asp Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 74

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Последовательность синтетического пептида CDR1 VL антитела AX1

<400> 74

Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Arg Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 75

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Последовательность синтетического пептида CDR2 VL антител AX1, AX9, AX189

<400> 75

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 76

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Последовательность синтетического пептида CDR3 VL антитела AX1

<400> 76

Ala Ala Tyr Asp Tyr Ser Leu Gly Gly Tyr Val

1 5 10

<210> 77

<211> 121

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Последовательность синтетического полипептида VH антител AX9, AX189

<400> 77

Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Tyr Gly Tyr Tyr Leu Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 78

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Последовательность синтетического пептида CDR1 VH антител AX9, AX189

<400> 78

Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Tyr Trp Met His Trp Val Arg

1 5 10 15

<210> 79

<211> 23

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Последовательность синтетического пептида CDR2 VH антител AX9, AX189

<400> 79

Trp Ile Gly Arg Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Lys Tyr Asn Glu

1 5 10 15

Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr

20

<210> 80

<211> 18

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Последовательность синтетического пептида CDR3 VH антител AX9, AX189

<400> 80

Cys Ala Arg Tyr Gly Tyr Tyr Leu Gly Ser Tyr Ala Met Asp Tyr Trp

1 5 10 15

Gly Gln

<210> 81

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Последовательность синтетического полипептида VL антитела AX189

<400> 81

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Arg Tyr

20 25 30

Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Ala Tyr Asp Tyr Ser Leu Ser

85 90 95

Gly Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 82

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Последовательность синтетического пептида CDR1 VL антитела AX189

<400> 82

Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Arg Tyr Leu Thr

1 5 10

<210> 83

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Последовательность синтетического пептида CDR2 VL антител AX1, AX9, AX189

<400> 83

Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser

1 5

<210> 84

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Последовательность синтетического пептида CDR3 VL антитела AX189

<400> 84

Gln Ala Tyr Asp Tyr Ser Leu Ser Gly Tyr Val

1 5 10

<210> 85

<211> 115

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 85

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Leu Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Trp Val Ser Phe Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu

50 55 60

Gln Gly Arg Gly Thr Met Thr Thr Asp Pro Ser Thr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr

100 105 110

Val Ser Ser

115

<210> 86

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 86

Ser Tyr Gly Ile Ser

1 5

<210> 87

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 87

Trp Val Ser Phe Tyr Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 88

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 88

Gly Tyr Gly Met Asp Val

1 5

<210> 89

<211> 109

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 89

Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln

1 5 10 15

Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr

20 25 30

Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Met Ile Tyr Glu Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Asn Ser Tyr Thr Ser Thr

85 90 95

Ser Met Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105

<210> 90

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 90

Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Ser Val Ser

1 5 10

<210> 91

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 91

Glu Val Ser Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 92

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 92

Asn Ser Tyr Thr Ser Thr Ser Met Val

1 5

<210> 93

<211> 123

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 93

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Tyr Asp Phe Trp Ser Ala Tyr Tyr Asp Ala Phe Asp Val

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 94

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 94

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn

1 5 10

<210> 95

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 95

Ser Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Ser Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 96

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 96

Asp Tyr Asp Phe Trp Ser Ala Tyr Tyr Asp Ala Phe Asp Val

1 5 10

<210> 97

<211> 111

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 97

Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln

1 5 10 15

Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly

20 25 30

Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu

35 40 45

Leu Ile Ser Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu

65 70 75 80

Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Asp Ser Ser

85 90 95

Leu Ser Gly Ser Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu

100 105 110

<210> 98

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 98

Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ala Gly Tyr Asp Val His

1 5 10

<210> 99

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 99

Gly Asn Ser Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 100

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 100

Gln Ser Tyr Asp Ser Ser Leu Ser Gly Ser Val

1 5 10

<210> 101

<211> 114

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 101

Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Ala Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Tyr Tyr Asp Gly Ile Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Arg Gly Leu Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val

100 105 110

Ser Ser

<210> 102

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 102

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His

1 5 10

<210> 103

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 103

Val Ile Tyr Tyr Asp Gly Ile Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 104

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 104

Asp Arg Gly Leu Asp

1 5

<210> 105

<211> 113

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 105

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser

20 25 30

Ser Asn Ser Lys Asn Tyr Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Tyr Ser Thr Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile

100 105 110

Lys

<210> 106

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 106

Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser Ser Asn Ser Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Val

<210> 107

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 107

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 108

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 108

Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Trp Thr

1 5

<210> 109

<211> 118

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид вариабельной области (FR1-FR4) Vh тяжелой цепи моноклонального антитела pJG04 к PCSK9 (клоны LGT-209 и LGT-210)

<400> 109

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Thr Met

20 25 30

Tyr Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Arg Ile Asp Pro Ala Asn Glu His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Arg Leu Thr Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Asn Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 110

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR1 тяжелой цепи моноклональных антител к PCSK9 клонов LGT-209, LGT-210 и LGT-211

<400> 110

Thr Met Tyr Met Ser

1 5

<210> 111

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR2 тяжелой цепи моноклональных антител к PCSK9 клонов LGT-209, LGT-210 и LGT-211

<400> 111

Arg Ile Asp Pro Ala Asn Glu His Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 112

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид определяющей комплементарность области 3 (CDR3) Vh тяжелой цепи моноклонального антитела pJG04 к PCSK9 (клоны LGT-209 и LGT-210).

<400> 112

Ser Tyr Tyr Tyr Tyr Asn Met Asp Tyr

1 5

<210> 113

<211> 106

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид вариабельной области (FR1-FR4) Vk легкой цепи моноклонального антитела pJG04 к PCSK9 (клоны LGT-209 и LGT-211)

<400> 113

Gln Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Tyr Met

20 25 30

His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr

35 40 45

Gly Val Phe Arg Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser

50 55 60

Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Gly Arg Leu Glu Pro Glu

65 70 75 80

Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Trp Ser Ser Asp Pro Pro Thr

85 90 95

Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 114

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR1 легкой цепи моноклональных антител к PCSK9 клонов LGT-209, LGT-210 и LGT-211

<400> 114

Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Tyr Met His

1 5 10

<210> 115

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR1 легкой цепи моноклональных антител к PCSK9 клонов LGT-209, LGT-210 и LGT-211

<400> 115

Gly Val Phe Arg Arg Ala Thr

1 5

<210> 116

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR3 легкой цепи мышиного моноклонального антитела LFU720 к PCSK9 и моноклонального антитела к PCSK9 клонов LGT-209, LGT-210 и LGT-211

<400> 116

Leu Gln Trp Ser Ser Asp Pro Pro Thr

1 5

<210> 117

<211> 118

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 117

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Glu Ile Ser Pro Phe Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Arg Pro Leu Tyr Ala Ser Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 118

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 118

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

1 5

<210> 119

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 119

Ser Pro Phe Gly Gly Arg

1 5

<210> 120

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR вариабельной области тяжелой цепи

<400> 120

Glu Arg Pro Leu Tyr Ala Ser Asp Leu

1 5

<210> 121

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 121

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Tyr Ser Leu Trp Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 122

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR вариабельной области легкой цепи

<400> 122

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Ala Leu Ala

1 5 10

<210> 123

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR вариабельной области легкой цепи

<400> 123

Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr

1 5

<210> 124

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR вариабельной области легкой цепи

<400> 124

Gln Gln Arg Tyr Ser Leu Trp Arg Thr

1 5

<210> 125

<211> 118

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 125

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Glu Ile His Pro Ser Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Arg Pro Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 126

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 126

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His

1 5 10

<210> 127

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 127

Glu Ile His Pro Ser Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Ser

<210> 128

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 128

Glu Arg Pro Leu Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5

<210> 129

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 129

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr His Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Tyr Ser Leu Trp Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 130

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 130

Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala Val Ala

1 5 10

<210> 131

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 131

His Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr

1 5

<210> 132

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 132

Gln Gln Arg Tyr Ser Leu Trp Arg Thr

1 5

<210> 133

<211> 118

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 133

Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Glu Ile His Pro Ser Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Ser Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Arg Pro Leu Tyr Ala Ser Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 134

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 134

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr Met His

1 5 10

<210> 135

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 135

Glu Ile His Pro Ser Gly Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys

1 5 10 15

Ser

<210> 136

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 136

Glu Arg Pro Leu Tyr Ala Ser Asp Leu

1 5

<210> 137

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 137

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr His Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Tyr Ser Leu Trp Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 138

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 138

Lys Ala Ser Gln Asp Val His Thr Ala Val Ala

1 5 10

<210> 139

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 139

His Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr

1 5

<210> 140

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 140

Gln Gln Arg Tyr Ser Leu Trp Arg Thr

1 5

<210> 141

<211> 118

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 141

Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Arg Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Arg Pro Leu Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 142

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 142

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

1 5

<210> 143

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 143

Asn Pro Ser Asn Gly Arg

1 5

<210> 144

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 144

Glu Arg Pro Leu Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5

<210> 145

<211> 108

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 145

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Tyr Ser Thr Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 146

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 146

Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala

1 5 10

<210> 147

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR вариабельной области легкой цепи

<400> 147

Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr

1 5

<210> 148

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 148

Gln Gln Arg Tyr Ser Thr Pro Arg Thr

1 5

<210> 149

<211> 115

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 149

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Thr Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Tyr Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Leu Leu Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr

100 105 110

Val Ser Ala

115

<210> 150

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 150

Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

1 5

<210> 151

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 151

Asn Pro Asn Asn Gly Gly

1 5

<210> 152

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 152

Trp Leu Leu Phe Ala Tyr

1 5

<210> 153

<211> 108

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 153

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ala Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Leu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Phe Tyr Ser Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 154

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 154

Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala

1 5 10

<210> 155

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 155

Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser

1 5

<210> 156

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 156

Gln Gln Phe Tyr Ser Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 157

<211> 123

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 157

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Asn Pro Asn Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Gly Gly Gly Ile Tyr Tyr Arg Tyr Asp Arg Asn Tyr Phe Asp Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 158

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 158

Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr

1 5

<210> 159

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 159

Asn Pro Asn Asn Gly Gly

1 5

<210> 160

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 160

Gly Gly Ile Tyr Tyr Arg Tyr Asp Arg Asn Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 161

<211> 107

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 161

Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Asn Leu Glu Pro

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Phe

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 162

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 162

Ser Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 163

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 163

Tyr Thr Ser Ser Leu His Ser

1 5

<210> 164

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 164

Gln Gln Tyr Ser Lys Leu Pro Phe Thr

1 5

<210> 165

<211> 117

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 165

Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Glu Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Ser

1 5 10 15

Ser Met Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Val Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Asn Ile Asn Tyr Asp Gly Ser Asn Thr Ser Tyr Leu Asp Ser Leu

50 55 60

Lys Ser Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ile Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Lys Phe Ala Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 166

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 166

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

1 5

<210> 167

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 167

Asn Tyr Asp Gly Ser Asn

1 5

<210> 168

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 168

Glu Lys Phe Ala Ala Met Asp Tyr

1 5

<210> 169

<211> 108

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 169

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Phe Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Asn Ala

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly His Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 170

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 170

Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Asn Ala Leu Ala

1 5 10

<210> 171

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид CDR вариабельной области легкой цепи

<400> 171

Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr

1 5

<210> 172

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Mus musculus

<400> 172

Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Trp Thr

1 5

<210> 173

<211> 121

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 173

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Arg His

20 25 30

Thr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Ser Pro Ala Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Ile Gly Ser Arg Glu Leu Tyr Ile Met Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 174

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 174

Gly Phe Thr Phe Thr Arg His Thr Ile His

1 5 10

<210> 175

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 175

Arg Ile Ser Pro Ala Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 176

<211> 12

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 176

Trp Ile Gly Ser Arg Glu Leu Tyr Ile Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 177

<211> 108

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 177

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Arg Ile Gln Pro

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 178

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 178

Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala

1 5 10

<210> 179

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 179

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser

1 5

<210> 180

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 180

Gln Gln Ser Tyr Arg Ile Gln Pro Thr

1 5

<210> 181

<211> 121

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 181

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Thr

20 25 30

Ala Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Ser Pro Ala Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Trp Ile Gly Ser Arg Glu Leu Tyr Ile Met Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 182

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 182

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Thr Ala Ile His

1 5 10

<210> 183

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 183

Arg Ile Ser Pro Ala Asn Gly Asn Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 184

<211> 12

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 184

Trp Ile Gly Ser Arg Glu Leu Tyr Ile Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 185

<211> 108

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 185

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Pro Ala Leu His

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg

100 105

<210> 186

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 186

Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala

1 5 10

<210> 187

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 187

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser

1 5

<210> 188

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 188

Gln Gln Ser Tyr Pro Ala Leu His Thr

1 5

<210> 189

<211> 125

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 189

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Pro Phe Ser Lys Leu

20 25 30

Gly Met Val Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ser Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Glu Gly Ile Ser Phe Gln Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Val Met

100 105 110

Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 190

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 190

Gly Phe Pro Phe Ser Lys Leu Gly Met Val

1 5 10

<210> 191

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 191

Thr Ile Ser Ser Gly Gly Gly Tyr Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 192

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 192

Glu Gly Ile Ser Phe Gln Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Val Met Asp Tyr

1 5 10 15

<210> 193

<211> 112

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический полипептид

<400> 193

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Arg

20 25 30

Asn Gly Ile Thr Tyr Ser Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Leu Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Tyr Gln Asn

85 90 95

Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 194

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 194

Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Arg Asn Gly Ile Thr Tyr Ser Tyr

1 5 10 15

<210> 195

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 195

Gln Leu Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 196

<211> 9

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Описание искусственной последовательности: Синтетический пептид

<400> 196

Tyr Gln Asn Leu Glu Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 197

<211> 2076

<212> ДНК

<213> Homo sapiens

<400> 197

atgggcaccg tcagctccag gcggtcctgg tggccgctgc cactgctgct gctgctgctg 60

ctgctcctgg gtcccgcggg cgcccgtgcg caggaggacg aggacggcga ctacgaggag 120

ctggtgctag ccttgcgttc cgaggaggac ggcctggccg aagcacccga gcacggaacc 180

acagccacct tccaccgctg cgccaaggat ccgtggaggt tgcctggcac ctacgtggtg 240

gtgctgaagg aggagaccca cctctcgcag tcagagcgca ctgcccgccg cctgcaggcc 300

caggctgccc gccggggata cctcaccaag atcctgcatg tcttccatgg ccttcttcct 360

ggcttcctgg tgaagatgag tggcgacctg ctggagctgg ccttgaagtt gccccatgtc 420

gactacatcg aggaggactc ctctgtcttt gcccagagca tcccgtggaa cctggagcgg 480

attacccctc cacggtaccg ggcggatgaa taccagcccc ccgacggagg cagcctggtg 540

gaggtgtatc tcctagacac cagcatacag agtgaccacc gggaaatcga gggcagggtc 600

atggtcaccg acttcgagaa tgtgcccgag gaggacggga cccgcttcca cagacaggcc 660

agcaagtgtg acagtcatgg cacccacctg gcaggggtgg tcagcggccg ggatgccggc 720

gtggccaagg gtgccagcat gcgcagcctg cgcgtgctca actgccaagg gaagggcacg 780

gttagcggca ccctcatagg cctggagttt attcggaaaa gccagctggt ccagcctgtg 840

gggccactgg tggtgctgct gcccctggcg ggtgggtaca gccgcgtcct caacgccgcc 900

tgccagcgcc tggcgagggc tggggtcgtg ctggtcaccg ctgccggcaa cttccgggac 960

gatgcctgcc tctactcccc agcctcagct cccgaggtca tcacagttgg ggccaccaat 1020

gcccaagacc agccggtgac cctggggact ttggggacca actttggccg ctgtgtggac 1080

ctctttgccc caggggagga catcattggt gcctccagcg actgcagcac ctgctttgtg 1140

tcacagagtg ggacatcaca ggctgctgcc cacgtggctg gcattgcagc catgatgctg 1200

tctgccgagc cggagctcac cctggccgag ttgaggcaga gactgatcca cttctctgcc 1260

aaagatgtca tcaatgaggc ctggttccct gaggaccagc gggtactgac ccccaacctg 1320

gtggccgccc tgccccccag cacccatggg gcaggttggc agctgttttg caggactgta 1380

tggtcagcac actcggggcc tacacggatg gccacagccg tcgcccgctg cgccccagat 1440

gaggagctgc tgagctgctc cagtttctcc aggagtggga agcggcgggg cgagcgcatg 1500

gaggcccaag ggggcaagct ggtctgccgg gcccacaacg cttttggggg tgagggtgtc 1560

tacgccattg ccaggtgctg cctgctaccc caggccaact gcagcgtcca cacagctcca 1620

ccagctgagg ccagcatggg gacccgtgtc cactgccacc aacagggcca cgtcctcaca 1680

ggctgcagct cccactggga ggtggaggac cttggcaccc acaagccgcc tgtgctgagg 1740

ccacgaggtc agcccaacca gtgcgtgggc cacagggagg ccagcatcca cgcttcctgc 1800

tgccatgccc caggtctgga atgcaaagtc aaggagcatg gaatcccggc ccctcaggag 1860

caggtgaccg tggcctgcga ggagggctgg accctgactg gctgcagtgc cctccctggg 1920

acctcccacg tcctgggggc ctacgccgta gacaacacgt gtgtagtcag gagccgggac 1980

gtcagcacta caggcagcac cagcgaaggg gccgtgacag ccgttgccat ctgctgccgg 2040

agccggcacc tggcgcaggc ctcccaggag ctccag 2076

<210> 198

<211> 692

<212> БЕЛОК

<213> Homo sapiens

<400> 198

Met Gly Thr Val Ser Ser Arg Arg Ser Trp Trp Pro Leu Pro Leu Leu

1 5 10 15

Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Gly Pro Ala Gly Ala Arg Ala Gln Glu

20 25 30

Asp Glu Asp Gly Asp Tyr Glu Glu Leu Val Leu Ala Leu Arg Ser Glu

35 40 45

Glu Asp Gly Leu Ala Glu Ala Pro Glu His Gly Thr Thr Ala Thr Phe

50 55 60

His Arg Cys Ala Lys Asp Pro Trp Arg Leu Pro Gly Thr Tyr Val Val

65 70 75 80

Val Leu Lys Glu Glu Thr His Leu Ser Gln Ser Glu Arg Thr Ala Arg

85 90 95

Arg Leu Gln Ala Gln Ala Ala Arg Arg Gly Tyr Leu Thr Lys Ile Leu

100 105 110

His Val Phe His Gly Leu Leu Pro Gly Phe Leu Val Lys Met Ser Gly

115 120 125

Asp Leu Leu Glu Leu Ala Leu Lys Leu Pro His Val Asp Tyr Ile Glu

130 135 140

Glu Asp Ser Ser Val Phe Ala Gln Ser Ile Pro Trp Asn Leu Glu Arg

145 150 155 160

Ile Thr Pro Pro Arg Tyr Arg Ala Asp Glu Tyr Gln Pro Pro Asp Gly

165 170 175

Gly Ser Leu Val Glu Val Tyr Leu Leu Asp Thr Ser Ile Gln Ser Asp

180 185 190

His Arg Glu Ile Glu Gly Arg Val Met Val Thr Asp Phe Glu Asn Val

195 200 205

Pro Glu Glu Asp Gly Thr Arg Phe His Arg Gln Ala Ser Lys Cys Asp

210 215 220

Ser His Gly Thr His Leu Ala Gly Val Val Ser Gly Arg Asp Ala Gly

225 230 235 240

Val Ala Lys Gly Ala Ser Met Arg Ser Leu Arg Val Leu Asn Cys Gln

245 250 255

Gly Lys Gly Thr Val Ser Gly Thr Leu Ile Gly Leu Glu Phe Ile Arg

260 265 270

Lys Ser Gln Leu Val Gln Pro Val Gly Pro Leu Val Val Leu Leu Pro

275 280 285

Leu Ala Gly Gly Tyr Ser Arg Val Leu Asn Ala Ala Cys Gln Arg Leu

290 295 300

Ala Arg Ala Gly Val Val Leu Val Thr Ala Ala Gly Asn Phe Arg Asp

305 310 315 320

Asp Ala Cys Leu Tyr Ser Pro Ala Ser Ala Pro Glu Val Ile Thr Val

325 330 335

Gly Ala Thr Asn Ala Gln Asp Gln Pro Val Thr Leu Gly Thr Leu Gly

340 345 350

Thr Asn Phe Gly Arg Cys Val Asp Leu Phe Ala Pro Gly Glu Asp Ile

355 360 365

Ile Gly Ala Ser Ser Asp Cys Ser Thr Cys Phe Val Ser Gln Ser Gly

370 375 380

Thr Ser Gln Ala Ala Ala His Val Ala Gly Ile Ala Ala Met Met Leu

385 390 395 400

Ser Ala Glu Pro Glu Leu Thr Leu Ala Glu Leu Arg Gln Arg Leu Ile

405 410 415

His Phe Ser Ala Lys Asp Val Ile Asn Glu Ala Trp Phe Pro Glu Asp

420 425 430

Gln Arg Val Leu Thr Pro Asn Leu Val Ala Ala Leu Pro Pro Ser Thr

435 440 445

His Gly Ala Gly Trp Gln Leu Phe Cys Arg Thr Val Trp Ser Ala His

450 455 460

Ser Gly Pro Thr Arg Met Ala Thr Ala Val Ala Arg Cys Ala Pro Asp

465 470 475 480

Glu Glu Leu Leu Ser Cys Ser Ser Phe Ser Arg Ser Gly Lys Arg Arg

485 490 495

Gly Glu Arg Met Glu Ala Gln Gly Gly Lys Leu Val Cys Arg Ala His

500 505 510

Asn Ala Phe Gly Gly Glu Gly Val Tyr Ala Ile Ala Arg Cys Cys Leu

515 520 525

Leu Pro Gln Ala Asn Cys Ser Val His Thr Ala Pro Pro Ala Glu Ala

530 535 540

Ser Met Gly Thr Arg Val His Cys His Gln Gln Gly His Val Leu Thr

545 550 555 560

Gly Cys Ser Ser His Trp Glu Val Glu Asp Leu Gly Thr His Lys Pro

565 570 575

Pro Val Leu Arg Pro Arg Gly Gln Pro Asn Gln Cys Val Gly His Arg

580 585 590

Glu Ala Ser Ile His Ala Ser Cys Cys His Ala Pro Gly Leu Glu Cys

595 600 605

Lys Val Lys Glu His Gly Ile Pro Ala Pro Gln Glu Gln Val Thr Val

610 615 620

Ala Cys Glu Glu Gly Trp Thr Leu Thr Gly Cys Ser Ala Leu Pro Gly

625 630 635 640

Thr Ser His Val Leu Gly Ala Tyr Ala Val Asp Asn Thr Cys Val Val

645 650 655

Arg Ser Arg Asp Val Ser Thr Thr Gly Ser Thr Ser Glu Gly Ala Val

660 665 670

Thr Ala Val Ala Ile Cys Cys Arg Ser Arg His Leu Ala Gln Ala Ser

675 680 685

Gln Glu Leu Gln

690

<---

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к применению рекомбинантных антител, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека, и может быть использовано в медицине для лечения пациентов с высоким сердечно-сосудистым риском, страдающих гиперхолестеринемией и сахарным диабетом 1 или 2 типа, получающих средство терапии на основе инсулина. Изобретение позволяет безопасно и эффективно снизить уровень LDL-C у пациентов с сахарным диабетом 1 или 2 типа, которые имеют высокий сердечно-сосудистый риск и высокий уровень LDL-C, несмотря на лечение максимально переносимой дозой статинов. 3 н. и 16 з.п. ф-лы, 5 ил., 16 табл., 3 пр.

1. Способ лечения гиперхолестеринемии, предусматривающий

введение пациенту, нуждающемуся в этом, 75 мг, 150 мг или 300 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека, каждые две недели или каждые четыре недели,

где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат три CDR тяжелой цепи, приведенные под SEQ ID NO: 2, 3 и 4, и три CDR легкой цепи, приведенные под SEQ ID NO: 7, 8 и 10, и

при этом пациент является пациентом с высоким сердечно-сосудистым риском, получающим средство терапии на основе инсулина, который имеет (i) сахарный диабет 1 типа (T1DM) и (ii) гиперхолестеринемию, недостаточно контролируемую посредством средства терапии на основе статина в максимально переносимой дозе.

2. Способ лечения гиперхолестеринемии, предусматривающий

введение пациенту, нуждающемуся в этом, 75 мг, 150 мг или 300 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека,

где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат три CDR тяжелой цепи, приведенные под SEQ ID NO: 2, 3 и 4, и три CDR легкой цепи, приведенные под SEQ ID NO: 7, 8 и 10, и

при этом пациент является пациентом с высоким сердечно-сосудистым риском, получающим средство терапии на основе инсулина, который имеет (i) сахарный диабет 2 типа (T2DM) и (ii) гиперхолестеринемию, недостаточно контролируемую посредством средства терапии на основе статина в максимально переносимой дозе.

3. Способ по п. 2, где пациент дополнительно имеет атеросклеротическое сердечно-сосудистое заболевание (ASCVD).

4. Способ по п. 3, где ASCVD включает ишемическую болезнь сердца (CHD), ишемический инсульт или заболевание периферических артерий.

5. Способ по п. 4, где CHD включает острый инфаркт миокарда, бессимптомный инфаркт миокарда и нестабильную стенокардию.

6. Способ по любому из пп. 1-5, где

(a) 75 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента вводят пациенту каждые две недели;

(b) 150 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента вводят пациенту каждые две недели, или

(c) 300 мг антитела или антигенсвязывающего фрагмента вводят пациенту каждые четыре недели.

7. Способ по любому из пп. 1-6, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат вариабельную область тяжелой цепи (HCVR) с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и вариабельную область легкой цепи (LCVR) с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6.

8. Способ по любому из пп. 1-7, дополнительно предусматривающий

введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 75 мг, указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента ниже порогового уровня, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента равняется пороговому уровню или превышает его.

9. Способ по любому из пп. 1-7, дополнительно предусматривающий

введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 300 мг, указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента каждые четыре недели, если уровень LDL-C у пациента ниже порогового уровня, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приблизительно каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента равняется пороговому уровню или превышает его.

10. Способ по п. 8 или п. 9, где пороговый уровень составляет 70 мг/дл.

11. Способ по любому из пп. 1-10, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят подкожно.

12. Способ по любому из пп. 1-11, где пациент дополнительно получает сопутствующее средство липидокорригирующей терапии (LMT).

13. Способ по п. 12, где LMT выбрано из группы, состоящей из статина, ингибитора абсорбции холестерина, фибрата, ниацина, омега-3 жирной кислоты и секвестранта желчных кислот.

14. Способ по п. 13, где LMT представляет собой средство терапии на основе статина,

(a) при этом статин выбран из группы, состоящей из аторвастатина, розувастатина, симвастатина, правастатина, ловастатина, флувастатина, питавастатина и церивастатина; и/или

(b) средство терапии на основе статина представляет собой средство терапии на основе статина в максимально переносимой дозе.

15. Способ по любому из пп. 1-13, где пациент страдает непереносимостью статина.

16. Способ по любому из пп. 1-15, где средство терапии на основе инсулина выбрано из группы, состоящей из человеческого инсулина, инсулина гларгина, инсулина глулизина, инсулина детемир, инсулина лизпро, инсулина деглудека, инсулина аспарт и базального инсулина.

17. Способ по любому из пп. 1-16, где пациент получает сопутствующее средство противодиабетической терапии в дополнение к средству терапии на основе инсулина, где дополнительное средство противодиабетической терапии выбрано из группы, состоящей из средства терапии на основе глюкагоноподобного пептида 1 (GLP-1), желудочно-кишечного пептида, агониста или антагониста рецептора глюкагона, агониста или антагониста рецептора глюкозозависимого инсулинотропного полипептида (GIP), антагониста или обратного агониста грелина, ксенина, аналога ксенина, бигуанида, сульфонилмочевины, меглитинида, тиазолидиндиона, ингибитора DPP-4, ингибитора альфа-глюкозидазы, ингибитора натрий-зависимого переносчика глюкозы 2 (SGLT-2), ингибитора SGLT-1, агониста или модулятора рецептора, активируемого пероксисомным пролифератором (PPAR-) (альфа, гамма или альфа/гамма), амилина, аналога амилина, агониста рецептора 119, связанного с G-белком (GPR119), агониста GPR40, агониста GPR120, агониста GPR142, системного или слабопоглощаемого агониста TGR5, иммунотерапевтического средства, применяемого при диабете, противовоспалительных средств для лечения метаболического синдрома и диабета, стимулятора активируемой аденозинмонофосфатом протеинкиназы (AMPK), ингибитора 11-бета-гидроксистероиддегидрогеназы 1, активатора глюкокиназы, ингибитора диацилглицерол-O-ацилтрансферазы (DGAT), модулятора глюкозного транспортера-4, агониста соматостатинового рецептора 3, гиполипидемического средства и их комбинации.

18. Способ по любому из пп. 1-17, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент

(a) снижают уровень LDL-C у пациента на по меньшей мере 40%;

(b) снижают уровень холестерина, отличного от HDL-C, у пациента на по меньшей мере 35%;

(c) снижают уровень ApoC3 у пациента;

(d) снижают число и/или размер липопротеиновых частиц у пациента;

(e) не влияют на уровень гемоглобина A1c (HbA1c) у пациента и/или

(f) не влияют на уровень глюкозы в плазме крови натощак (FPG) у пациента.

19. Способ лечения гиперхолестеринемии, предусматривающий

введение каждые две недели пациенту, нуждающемуся в этом, 75 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфически связывают пропротеиновую конвертазу субтилизин/кексинового типа 9 (PCSK9) человека; и

введение пациенту одной или нескольких последующих доз, составляющих 75 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента ниже 70 мг/дл, или введение одной или нескольких последующих доз, составляющих 150 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента каждые две недели, если уровень LDL-C у пациента равняется 70 мг/дл или больше,

где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент содержат HCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 1 и LCVR с аминокислотной последовательностью под SEQ ID NO: 6, и где пациент получает сопутствующее средство терапии на основе инсулина, и

при этом пациент является пациентом с высоким сердечно-сосудистым риском, получающим средство терапии на основе инсулина, который имеет (i) T1DM или T2DM и (ii) гиперхолестеринемию, недостаточно контролируемые посредством средства терапии на основе статина в максимально переносимой дозе.