СПОСОБ ОТБОРА БИОЛОГИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ ЛЕПТОСПИРОЗА У ДИКИХ ЖИВОТНЫХ Российский патент 2015 года по МПК G01N33/48 G01N1/00 

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к способам получения биологического материала для диагностики лептоспироза у диких животных.

Известен способ отбора проб для определения возбудителя лептоспироза в моче животных, согласно которого мочу собирают при естественном мочеиспускании в чистые пробирки и микроскопируют непосредственно в хозяйствах. При этом микроскопия мочи должна быть закончена при температуре 30-40°С в течение 3 ч, 25-30°С - 4-5 ч, 20-25°С - 6-8 ч, 16-20°С - 10-12 ч с момента взятия (Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики лептоспироза. ГОСТ 25386-91. М., 1992).

В соответствии с инструкцией «О мероприятиях по профилактике и оздоровлению животных от лептоспироза» от 23 июня 1992 г., №22-3/40, мочу собирают и микроскопируют непосредственно в хозяйствах, при этом патологический материал должен быть взят и исследован на лептоспироз в течение 6 часов после взятия в летнее время, 10-12 часов после взятия в зимнее время или при хранении в охлажденном состоянии.

Вышеуказанные способы предполагаю проведение отбора проб биологического материала - мочи, для диагностики лептоспироза у животных в период естественного мочеиспускания непосредственно в хозяйствах, что делает невозможным его применение при исследовании диких животных, а также исключает возможность длительного хранения проб биологического материала.

Возможно хранение отобранных проб при температуре не выше 16°С, для чего мочу переносят в пробирку и туда же вносят глицерин в пропорции 1/9 (глицерин/моча), тщательного перемешивают, замораживают и хранят (сайт научно-исследовательского центра биобезопасности и экологического контроля ресурсов АПК Днепропетровского государственного аграрного университета http: biosafety-center.dp.ua/viddil-imunohimichniy-molekulyarno-genetichniy-analiz/Bolezni/Leptospirosis.php).

Данный способ также, как и вышеперечисленные, предполагает исследование проб, отобранных от животных непосредственно в хозяйствах, что ограничивает его широкое применение, в частности, для диагностики лептоспироза у диких животных, кроме того, ведет к удорожанию процесса лабораторных исследовании за сет применения глицерина.

Известен способ определения стериодиных гормонов в фекалиях и моче, собранных со снегом для оценки стрессированности у диких грызунов (Л.А. Герлинская, М.П. Мошкин, В.И. Евсиков ж. Экология, 1993. №1, с. 97 и онлайн http: w^-3/rfbr.ru/default.asp?doc_id-4762).

Однако данный способ не для диагностики инфекционных болезней, в частности лептоспироза диких млекопитающих

Техническим результатом, достигаемым в результате решения поставленной задачи, является получение способа отбора биологического материала - мочи, замороженной в местах зимнего содержания для диагностики лептоспироза у диких животных.

Поставленная задача достигается тем, что в предполагаемом способе отбор биологического материала - мочи производится в зимний период при наружной температуре воздуха минус 10-50°С в замороженном виде вместе со снегом.

Технический результат изобретения достигается следующим образом.

Отбор биологического материала для диагностики лептоспироза диких животных осуществляется в зимнее время при температуре наружного воздуха минус 10-50°С в местах зимнего пастбищного содержания диких животных в заповеднике или парковых зонах, в также в путях миграции устанавливают наблюдение за животными. В течение 1-12 часов после естественного мочеиспускания животного замерзшую мочу со снегом собирают в стерильную емкость и в замороженном виде направляют в лабораторию. В лаборатории биологический материал исследуют общепринятыми методами - микроскопией мочи или методом полимеразной цепной реакции. Кроме того, предлагаемый способ позволяет хранить отобранные пробы в течение 1-2 месяцев при температуре минус 20°С.

Заявляемый способ отбора биологического материала для диагностики лептоспироза у диких животных также может быть использован для исследования мочи лошадей табунного содержания.

Животные-лептоспироносители выделяют лептоспир во внешнюю среду с мочой и инфицируют воду, корма, пастбища, почву, подстилку и другие объекты внешней среды, через которые заражаются здоровые животные. Водный путь передачи возбудителя инфекции основной. При этом лептоспиры весьма устойчивы к низким температурам, они остаются жизнеспособными после длительного замораживании во льду. При плюсовых температурах лептоспиры погибают.

При температуре наружного воздуха минус 10-50°С моча животного замерзает в течение 1 часа, при этом лептоспиры, находящиеся в моче, остаются жизнеспособными и определяются при лабораторных исследованиях. Поскольку отбор биологического материала производится после естественного мочеиспускания животного, материал - замерзшую мочу отбирают в стерильную емкость со снегом. Пробы мочи отбирают при температурах минус 10°С, 20°С, 30°С, 40°С и 50°С (5-6 проб в каждом интервале температуры).

Отобранный биологический материал в замороженном виде направляют для исследования в лабораторию.

При температуре выше минус 10°С сбор замороженной мочи имеет определенные трудности. Так как при этом не формируется замороженный «комок», моча растекается на поверхности и в глубь снега. При взятии пробы снижается концентрация лептоспир. Следовательно, снижается достоверность диагностики.

Мочу можно исследовать непосредственно после оттаивания или после центрифугирования. Прозрачную мочу, не содержащую кристаллов, солей, хлопьев, спермиев и других посторонних частиц, центрифугируют при 10000-12000 об/мин в течение 30 минут, сливают надосадочную жидкость, осадок ресеспендируют в оставшейся капле мочи и микроскопируют. В моче больных и носителей возбудителя обнаруживают лептоспиры в пробах, собранных в любом интервале температуры. Мочу, содержащую значительное количество посторонних частиц, очищают центрифугированием при 3000 об/мин, в течение 10 минут, затем сливают надосадочную жидкость и центрифугируют ее для осаждения лептоспир при 10000-12000 об/мин в течение 30 минут.

Дополнительно можно установить диагноз на лептоспироз исследованием мочи полимеразной цепной реакцией. Результат выявления болезни составляет 100% (лептоспироз).

Таким образом, заявленный способ отбора биологического материала - мочи, замороженной со снегом при минус 10-50°С в местах естественной среды обитания диких млекопитающих без их изъятия и отлова, позволяет провести оперативно диагностику лептоспироза и с наименьшими затратами, что обеспечивает своевременное проведение специальных профилактических мероприятий по выявлению больных и носителей лептоспир.

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к способу отбора биологического материала для диагностики лептоспироза у диких животных. Способ включает сбор мочи после естественного мочеиспускания животного в стерильную емкость. При этом пробы замороженной мочи отбирают вместе со снегом в зимний период при температуре наружного воздуха минус 10-50°C. Использование предлагаемого способа позволяет расширить круг исследуемых животных на носительство патогенных лептоспир, обеспечить наиболее длительное хранение отобранного биологического материала - мочи, а так же повысить точность определения очага лептоспироза.

Способ отбора биологического материала для диагностики лептоспироза у диких животных, включающий сбор мочи после естественного мочеиспускания животного в стерильную емкость, отличающийся тем, что пробы замороженной мочи отбирают вместе со снегом в зимний период при температуре наружного воздуха минус 10-50°С.