СПОСОБ ОЦЕНКИ ИНДУЦИРУЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ НА ТРЕТЬЕМ ТРИМЕСТРЕ ГЕСТАЦИИ НА ДЕФОРМИРУЮЩИЕ СВОЙСТВА ЭРИТРОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ Российский патент 2015 года по МПК G01N33/52 

1. Цель исследования - выявить, что обострение цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации приводит к снижению содержания в эритроцитах АТФ, формированию актина, понижая их деформабельность.

2. Изобретение относится к медицине, а именно к прогнозу состояния деформабельности эритроцитов периферической крови под влиянием цитомегаловирусной инфекции, что угрожает развитием тканевой гипоксии.

3. Раскрытие изобретения

Нормальное обеспечение тканей кислородом во многом зависит от проникновения эритроцитов к клеткам через узкие просветы капилляров, испытывая при этом деформабельность своего тела [2]. Деформабельность эритроцитов регулируется через белок актин, формирование которого зависит от АТФ [2]. Проникновение в эритроцит возбудителя ЦМВИ подавляет синтез АТФ, от чего снижается содержание в нем количества актина, обеспечивающего подвижность скелетных белков, что влечет за собой нарушение деформабельности эритроцита. Снижение деформабельности эритроцитов приводит к недостаточному проникновению их через узкие тканевые капилляры к клеткам органов, вызывая формирование в организме тканевой гипоксии [3, 5].

4. Новая техническая задача

Цитомегаловирусные белки, внедряясь через мембрану эритроцитов, оказывают подавляющее влияние на синтез АТФ, от которого зависит формирование актина, белка, обеспечивающего двигательную функцию скелетных белков эритроцита. В результате снижается деформабельность эритроцитов, способность их проникать по мелким капиллярам к клеткам тканей, что создает угрозу формирования тканевой гипоксии.

5. В доступной литературе аналогов по данному вопросу не отмечено.

6. Осуществление изобретения

6.1. Исследования проводились на базе акушерского отделения ФГБУ «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» СО РАМН. Обследовано 20 беременных на третьем триместре гестации с обострением цитомегаловирусной инфекции с титром 1:1600. Контролем служили 15 беременных, не болевших цитомегаловирусной инфекцией в период гестации. У беременных симптоматически цитомегаловирусная инфекция проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз - обострение цитомегаловирусной инфекции устанавливался при комплексном исследовании периферической крови на наличие IgM или четырехкратного и более нарастания титра антител IgG в парных сыворотках в динамике через 10 дней, индекса авидности более 65%, а также ДНК цитомегаловируса. Исследования проводились с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в Российской Федерации, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г. Верификация цитомегаловируса, определение типоспецифических антител класса IgM и IgG, индекса авидности осуществлялись методами иммуноферментного анализа на микропланшетном ридере «Stat-Fax-2100» с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), выявление ДНК цитомегаловируса методами ПНР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

Содержание АТФ в эритроцитах проводилось по методу Виноградовой И.А., Багрянцевой С.Ю. и Дервиз Г.В. [1]. Уровень содержания актина в мембранах эритроцитов выполнялось методом вертикального одномерного диск-электрофореза в градиентном (10%) полиакриламидном геле в присутствии 0,1% раствора додецилсульфата натрия по методике U. Laemmli [4] на аппарате «Вio Doc-Analize» (Германия). Деформабельность эритроцитов определялась по формуле, разработанной М.Т. Луценко [3].

7. В процессе исследования были получены следующие результаты.

При обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации до титра антител 1:1600 в эритроцитах периферической крови снижался уровень АТФ до 0,40±0,02 мкмоль/мл (контроль - 0,90±0,05 мкмоль/мл). Методом диск-электрофореза отмечалось снижение в эритроцитах содержания актина до 8,24±0,09% (контроль - 9,30±0,08%). Снижение синтеза актина уменьшает деформабельность эритроцитов до 0,04±0,0002 усл. ед. (контроль - 0,22±0,003 усл. ед.). Снижение деформабельности эритроцитов приводит к нарушению их проходимости через узкие капилляры тканевых систем и создает угрозу формирования тканевой гипоксии.

Источники информации

1. Виноградова И.А., Багрянцева С.Ю., Дервиз Г.В. Метод одновременного определения 2,3-ДФГ и АТФ в эритроцитах // Лабораторное дело, 1980, №7, с.424-426.

2. Зинчук В.В. Методика измерения деформабельности эритроцитов // Здравоохранение Белоруссии, 1989, №12, С.93-98.

3. Луценко М.Т. Способ оценки нарушения деформируемости эритроцитов в периферической крови беременных при обострении в третьем триместре гестации герпес-вирусной инфекции. Патент 2463597. Зарегистрирован в Государственном реестре изобретений РФ 10.10.2012. Опубликован в Бюл. «Изобретения и полезные модели», №28, 10.10.12.

4. Маурер Г. Диск-электрофорез. М.: 1971, 154 с.

5. Kikuchi Y., Da Q.W., Fujino Т. Variation in red cell deformability and possible consequences for oxygen transport to tissue // Microvascul. Res. 1994. Vol.47, №2. P.222-231.

Изобретение относится к области медицины и может найти применение для оценки действия цитомегаловирусной инфекции (ЦМВИ) на деформабельность эритроцитов в период гестации. Сущность способа: в третьем триместре гестации определяют титр антител к ЦМВИ, содержание аденозинтрифосфата, содержание актина в эритроцитах. При обострении ЦМВИ до титра антител 1:1600, снижении содержания АТФ до 0,40±0,02 мкмоль/л, уменьшении содержания актина в эритроцитах до 8,24±0,09% при контроле 9,30±0,08%, оценивают деформабельность эритроцитов до 0,04±0,0002 усл. ед., что создает угрозу формирования тканевой гипоксии в организме беременной. Снижение деформабельности эритроцитов приводит к нарушению их проходимости через узкие капилляры тканевых систем, что создает угрозу формирования тканевой гипоксии.

Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на деформабельность эритроцитов периферической крови беременных в третьем триместре гестации, характеризующийся тем, что в третьем триместре гестации определяют титр антител к цитомегаловирусу, содержание аденозинтрифосфата, содержание актина в эритроцитах, и при обострении цитомегаловируса до титра антител 1:1600, снижении содержания аденозинтрифосфата до 0,40±0,02 мкмоль/л, уменьшении содержания актина в эритроцитах до 8,24±0,09% при контроле 9,30±0,08%, оценивают деформабельность эритроцитов до 0,04±0,0002 усл. ед., что создает угрозу формирования тканевой гипоксии в организме беременной.