СПОСОБ ВОССТАНОВЛЕНИЯ СЕЛЕЗЕНКИ ПОСЛЕ ЛУЧЕВОЙ НАГРУЗКИ Российский патент 2015 года по МПК G09B23/28 A61K35/44 A61P43/00 

Способ восстановления селезенки после лучевой нагрузки

Изобретение относится к экспериментальной медицине, а именно к разработке способов лечения лучевой болезни, и может быть использовано для восстановления основных морфометрических показателей селезенки после воздействия ионизирующего излучения (лучевой нагрузки).

Восстановление регенерации селезенки обеспечивается применением препаратов, повышающих регенераторный потенциал лимфоидных клеток. Типичным представителем препаратов, оказывающих стимулирующее действие на процессы регенерации, является препарат деринат (водный раствор дезоксирибонуклеата натрия). Деринат представляет собой натриевую соль ДНК.

Применение препаратов данной группы сопряжено с побочными эффектами и противопоказаниями. Так после инъекций водного раствора дезоксирибонуклеата натрия через 1,5-3 ч возникает выраженная гипогликемия (Ю.Ф. Крылов, Е.Г. Лобанова. Регистр лекарственных средств №12; стр. 303; 2005 г.).

Следующим направлением в терапии лучевых поражений гемопоэза является проведение заместительной терапии (трансплантации костного мозга) [Дж. Снелл, Ж. Доссе, С. Нэтенсон // Совместимость тканей. Москва, МИР, 1979. С. 290-294.].

Недостатком данного метода терапии является развитие реакции «трансплантат против хозяина», отторжение трансплантата, а также инфекции.

Наиболее близким является способ стимулирования колониеобразования кроветворных клеток-предшественников в селезенке при облучении животных путем введения дезоксирибонуклеиновой кислоты, выделенной из молоки рыб. Препарат вводят до или после облучения ежедневно в дозе 40-60 мкг/мышь в течение 5-7 дней. При этом последнюю дозу препарата до облучения или первую дозу после облучения вводят за 1-2 часа соответственно до- или после облучения (RU. Патент №2230559, МПК A61K 31/70, А61Р 7/06, А61Р 7/00, опубл. 20.06.2004 г.).

Данный способ обеспечивает колониеобразование кроветворных клеток в селезенке при устранении побочного действия, однако он недостаточно эффективен для восстановления селезенки, т.к. введение ДНК не сопряжено с направленной миграцией в наиболее поврежденные ткани.

Задачей данного изобретения является разработка новой технологии восстановления гемопоэтической функции селезенки.

Технический результат, который будет достигнут от использования данного изобретения, заключается в повышении гемопоэтической функции селезенки.

Технический результат достигается тем, что в способе восстановления селезенки после лучевой нагрузки лабораторным мышам через час после облучения проводят внутривенную аллогенную трансплантацию мультипотентных мезенхиальных стромальных клеток (ММСК) и гемопоэтических стволовых клеток (ГСК), полученных из плаценты самок-мышей при сроке гестации 14 дней, при этом ММСК вводят в дозе 6,5 млн клеток/кг, а ГСК - в дозе 400 тыс. клеток/кг.

Сущность изобретения заключается в применении впервые для восстановления основных морфометрических показателей селезенки сочетанной трансплантации клеток: ММСК и ГСК, выделенных из плаценты самок-мышей при сроке гестации 14 дней.

Количественное соотношение ММСК (6,5 млн клеток/кг) и ГСК (400 тыс. клеток/кг) позволяет эффективно восстанавливать гемопоэтическую функцию селезенки.

3

Из анализа научно-технической и патентной литературы сочетанной трансплантации клеток: ММСК и ГСК, выделенных из плаценты самок-мышей при сроке гестации 14 дней в заявленном количественном соотношении, приводящей к эффективному восстанавливлению гемопоэтической функции селезенки, нами не выявлено, что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого технического решения критериям «новизна» и «изобретательский уровень».

Изобретение осуществляется следующим образом.

Материалы и методы

Общая характеристика лабораторных животных, использованных в исследованиях

Эксперименты выполнены на 20 белых лабораторных мышах-самцах возраста 3-4 месяца, массой 20-25 г. Эксперименты по получению культуры ММСК и ГСК из плаценты выполнены на 5 лабораторных животных мышах-самках возраста 3-4 месяца, массой 20-25 г, срок гестации 14 дней. Животные содержались в стандартных условиях лабораторного вивария, предусмотренных «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных», утвержденных Приказом МЗ СССР №755 от 12.08.1977 г. и Приказом МЗ СССР №1179 от 10.10.1983 «Об утверждении нормативов затрат кормов для лабораторных животных в учреждениях здравоохранения». Манипуляции с экспериментальными животными выполнялись в соответствии с положениями Хельсинской декларации о гуманном отношении к животным, методическими рекомендациями по их выведению из опыта и эвтаназии.

На 7-е сутки мышей умерщвляли декапитацией, извлекали селезенки и фиксировали их в жидкости Буэна (насыщенный раствор пикриновой кислоты в воде - уксусная кислота - 40% формалин в соотношении 15:15:1). После фиксации в течение суток селезенки переносили в 70%-ный раствор этанола и подсчитывали колонии. Подсчет производили с использованием инвертированного микроскопа UNICO. Среднее количество выделенных эндогенных-гемопоэтических колоний при применении сочетанной трансплантации ММСК и ГСК составило 30,2±1,1, при применении физиологического раствора - 8,7±1,3.

Изучалось воздействие ионизирующего излучения дозой 4,0 Гр на лабораторных животных зрелого возраста, были выделены опытная и контрольная группы.

Животным опытной группы внутривенно вводилась суспензия ММСК и ГСК соответственно в дозе 6,5 млн клеток/кг и 400 тыс. клеток/кг, контрольной группе вводили 0,9% раствор NaCl - 0,2 мл внутривенно. Внутривенные введения осуществлялись через 1 час после облучения однократно в указанных выше дозах. Забой животных осуществлялся на 7-е сутки после облучения (Таблица 1).

Методы статистической обработки полученных результатов

Для каждого ряда значений показателя вычисляли среднюю арифметическую, стандартную ошибку среднего. Достоверность отличий между подгруппами оценивали с помощью t - критерия Стьюдента. Различия считались достоверными при p<0,05.

Количество эндогенных гемопоэтических колоний по заявляемому способу и по прототипу приведены в Таблице 2.

Как видно из анализа данной таблицы, количество эндогенных гемопоэтических колоний селезенки по сравнению с прототипом увеличивается на 47,3%.

Изобретение относится к экспериментальной медицине, в частности разработке способов лечения лучевой болезни. Способ осуществляют путем проведения лабораторным мышам через час после облучения внутривенной аллогенной трансплантации мультипотентных мезенхиальных стромальных клеток (ММСК) и гемопоэтических стволовых клеток (ГСК). Последние получают из плаценты самок-мышей при сроке гестации 14 дней. При этом ММСК вводят в дозе 6,5 млн клеток/кг, а ГСК - в дозе 400 тыс. клеток/кг. Изобретение позволяет расширить арсенал средств, способных обеспечить регенераторный потенциал тканей селезенки, а также повысить регенерацию основных морфометрических показателей селезенки после воздействия лучевой нагрузки. 2 табл.

Способ восстановления селезенки после лучевой нагрузки, отличающийся тем, что лабораторным мышам через час после облучения проводят внутривенную аллогенную трансплантацию мультипотентных мезенхиальных стромальных клеток (ММСК) и гемопоэтических стволовых клеток (ГСК), полученных из плаценты самок-мышей при сроке гестации 14 дней, при этом ММСК вводят в дозе 6,5 млн клеток/кг, а ГСК - в дозе 400 тыс. клеток/кг.