СПОСОБ ОЗДОРОВЛЕНИЯ ОТ ВИРУСОВ РАСТЕНИЙ МАЛИНЫ, ВЫРАЩИВАЕМЫХ in vitro Российский патент 2015 года по МПК A01G7/04 A01G1/00 A01H1/04 

Изобретение относится к сельскому хозяйству и может быть использовано для оздоровления от вирусов растений малины, выращиваемых in vitro.

Известен способ оздоровления от вирусов растений, выращиваемых in vitro (патент РФ №2211111, Способ оздоровления от вирусов растений, выращиваемых in vitro. М.кл. A01G 7/04, А01С 1/00, опубл. 20.06.2004 г.), включающий воздействие на них электромагнитным облучением импульсами магнитной индукции с амплитудным значением 0,05 Тл в диапазоне частот от 6,4 до 12,8 Гц, числом импульсов от 1280 до 2560 и синхронным подсвечиванием растений инфракрасным и газоразрядным ксеноновым излучателями.

Недостатком этого способа является необходимость дополнительного использования инфракрасного и газоразрядного ксеноновых излучателей, что приводит к повышению энергоемкости и снижению надежности при выполнении данного способа. К тому же данный способ был апробирован только на растениях малино-ежевичного гибрида сорта Краснодарская.

Наиболее близким техническим решением к заявляемому является способ оздоровления от вирусов плодовых культур, выращиваемых in vitro, в котором обработку высаженных на питательную среду эксплантов проводят периодической последовательностью взаимно разнонаправленных в одной плоскости импульсов магнитной индукции с частотой 0,8-3,0 Гц, числом импульсов от 160 до 600 и амплитудным значением 0,02-0,03 Тл, при этом проводят не менее 6 обработок с интервалом между ними в 7 дней (патент РФ №2310318, Способ оздоровления от вирусов плодовых культур, выращиваемых in vitro. М.кл. A01G 7/04, опубл. 20.11.2007 г. - прототип).

Недостатком этого способа является его недостаточная эффективность в отношении наиболее вредоносного вируса малины - кустистой карликовости.

Задачей, на решение которой направлено изобретение, является повышение эффективности оздоровления от вирусов растений малины, выращиваемых in vitro.

Поставленная задача решается тем, что в способе оздоровления от вирусов растений малины, выращиваемых in vitro, включающем заготовку эксплантов вегетативных частей растений, высадку их на питательную среду и шестикратную обработку периодической последовательностью разнонаправленных импульсов магнитной индукции, новым является то, что обработку эксплантов проводят через каждые 48 часов импульсами со временем нарастания 0,25 мс и экспоненциальным спадом в течение 3 мс в направлении, перпендикулярном оси эксплантов, при непрерывном линейном нарастании частоты импульсов в диапазоне от 3,2 до 51,2 Гц и квазилинейном изменении амплитудных значений импульсов от 15 до 5 мТл, далее - импульсами с непрерывным линейным спадом частоты в диапазоне от 51,2 до 3,2 Гц и изменении амплитудных значений импульсов от 15 до 5 мТл в течение 8 минут для каждого частотного диапазона соответственно.

Технический результат выражается в том, что при оздоровлении по предложенному способу увеличивается выход здоровых растений, снижаются энергозатраты и себестоимость получаемых растений.

Отличительными признаками предлагаемого способа по сравнению с прототипом является то, что обработку эксплантов проводят через каждые 48 часов импульсами со временем нарастания 0,25 мс и экспоненциальным спадом в течение 3 мс в направлении, перпендикулярном оси эксплантов, при непрерывном линейном нарастании частоты импульсов в диапазоне от 3,2 до 51,2 Гц и квазилинейном изменении амплитудных значений импульсов от 15 до 5 мТл, далее - импульсами с непрерывным линейным спадом частоты в диапазоне от 51,2 до 3,2 Гц и изменении амплитудных значений импульсов от 15 до 5 мТл в течение 8 минут для каждого частотного диапазона соответственно.

Это сочетание оптимизированных параметров воздействия обеспечивает более эффективное оздоровление малины от вирусов.

Проведенный анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации и выявление источников, содержащих сведения об аналогах заявленного изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил источник, характеризующийся признаками, тождественными существенным признакам заявленного изобретения. Определение из перечня выявленных аналогов прототипа, как наиболее близкого по совокупности признаков аналога, позволило установить совокупность существенных по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату отличительных признаков в заявленном способе, изложенных в формуле изобретения.

Следовательно, заявленное изобретение соответствует условию «новизна».

Результаты проверки соответствия заявленного изобретения условию «изобретательский уровень» показали, что заявленное изобретение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, а является результатом исследований и творческого труда авторов изобретения.

Предложенное изобретение не основано на изменении количественных признаков, представлении таких признаков во взаимосвязи либо изменении ее вида.

Следовательно, заявленное изобретение соответствует условию «изобретательский уровень».

Способ осуществляют следующим образом.

Пример 1. С целью оздоровления малины от вируса кустистой карликовости (RBDV) брали экспланты сортов Арбат и Малаховка, зараженные в сильной степени данным вирусом, величиной 10-12 мм, высаживали их на питательную среду Мурасиге и Скуга (1962), дополненную 6-бензиламинопурином в концентрации 1,0 мг/л, агар-агаром 6 г/л, сахарозой 25 г/л. После высадки на питательную среду экспланты помещали внутрь индуктора (соленоида) и с помощью генератора магнитных импульсов (Стимулятора магнитно-импульсного СМИ-5) шестикратно через каждые 48 часов обрабатывали периодической последовательностью взаимно разнонаправленных импульсов магнитной индукции со временем нарастания 0,25 мс и экспоненциальным спадом в течение 3 мс в направлении, перпендикулярном оси эксплантов, при непрерывном линейном нарастании частоты импульсов в диапазоне от 3,2 до 51,2 Гц и квазилинейном изменении амплитудных значений импульсов от 15 до 5 мТл, далее - импульсами с непрерывным линейным спадом частоты в диапазоне от 51,2 до 3,2 Гц и изменении амплитудных значений импульсов от 15 до 5 мТл в течение 8 минут для каждого частотного диапазона соответственно.

Спустя 2 месяца после обработки экспланты извлекали из сосудов и тестировали методом иммуноферментного анализа (ИФА), используя его сэндвич-вариант по методике M. Clark, A. Adams (1977). Использовали набор для ИФА фирмы Neogen (Великобритания). Иммуноглобулины растворяли в покрывающем буфере и наносили по 100 мкл в каждую лунку микроплаты, затем инкубировали при температуре +4°C в течение 4 ч. После инкубации осуществляли 3- кратную промывку лунок и наносили тестируемые образцы, гомогенизированные в экстрагирующем буфере в соотношении 1:15, по 100 мкл, после чего инкубировали 15 ч при температуре +4°C. Затем микроплаты 4-кратно промывали промывающим буфером и наносили конъюгат по 100 мкл; микроплаты ставили на инкубацию на 2 ч при температуре 37°C. Позже микроплаты 3-кратно промывали, растворяли в 10 мл субстратного буфера 10 мг 4-нитрофенилфосфата и наносили данный раствор субстрата по 100 мкл в каждую лунку, инкубировали 1-2 ч при температуре +20 …+25°C и измеряли результаты на спектрофотометре Statfax при длине волн 405 и 630 нм. Оптическая плотность продукта ферментативной реакции прямо пропорциональна концентрации вируса. В качестве отрицательного контроля брали сок тестируемого растения, заведомо свободного от определяемого вируса. Оптическую плотность тестируемого образца сравнивали путем деления с оптической плотностью сероотрицательного контроля и устанавливали наличие вируса: в тестируемых пробах реакция считается положительной (указывающей на присутствие вируса), если отношение оптической плотности образца к отрицательному контролю более 2,0.

Подсчитывали число здоровых растений и определяли процент здоровых растений к общему числу протестированных растений.

Результаты показали, что в среднем по 2 сортам малины предложенный способ с непрерывным линейным нарастанием и спадом частот 3,2-51,2-3,2 Гц обеспечивал увеличение выхода свободных от вируса кустистой карликовости малины растений на 42% и снижение индекса зараженности на 17% по сравнению с прототипом (табл.1).

Другие варианты МИО: 2 - только с нарастанием частоты импульсов от 3,2 до 51,2 Гц и 3 - только со снижением частоты импульсов от 51,2 до 3,2 Гц оказались менее эффективными режимами в отношении оздоровления растений малины от вируса кустистой карликовости.

Пример 2. С целью оздоровления малины от вируса кольцевой пятнистости (RpRSV) брали экспланты сорта Геракл, зараженные в сильной степени данным вирусом, а способ осуществляли по примеру 1.

Результаты показали, что при оздоровлении малины сорта Геракл от вируса кольцевой пятнистости МИО предложенный способ обеспечил увеличение выхода здоровых растений до 50% и снижение индекса зараженности на 12% по сравнению с прототипом (табл.2).

Таким образом, обработка эксплантов по предлагаемому способу дает положительный эффект в сравнении с прототипом в отношении оздоровления малины от вирусов.

Изобретение относится к области сельского хозяйства и селекции, в частности к оздоровлению от вирусов растений малины, выращиваемых in vitro. Способ включает заготовку эксплантов вегетативных частей растений, высадку их на питательную среду и шестикратную обработку периодической последовательностью разнонаправленных импульсов магнитной индукции. При этом обработку эксплантов проводят через каждые 48 часов импульсами со временем нарастания 0,25 мс и экспоненциальным спадом в течение 3 мс в направлении, перпендикулярном оси эксплантов, при непрерывном линейном нарастании частоты импульсов в диапазоне от 3,2 до 51,2 Гц и квазилинейном изменении амплитудных значений импульсов от 15 до 5 мТл. Далее обработку проводят импульсами с непрерывным линейным спадом частоты в диапазоне от 51,2 до 3,2 Гц и изменении амплитудных значений импульсов от 15 до 5 мТл в течение 8 минут для каждого частотного диапазона соответственно. Способ позволяет повысить эффективность оздоровления от вирусов растений малины, выращиваемых in vitro. 2 табл., 2 пр.

Способ оздоровления от вирусов растений малины, выращиваемых in vitro, включающий заготовку эксплантов вегетативных частей растений, высадку их на питательную среду и шестикратную обработку периодической последовательностью разнонаправленных импульсов магнитной индукции, отличающийся тем, что обработку эксплантов проводят через каждые 48 часов импульсами со временем нарастания 0,25 мс и экспоненциальным спадом в течение 3 мс в направлении, перпендикулярном оси эксплантов, при непрерывном линейном нарастании частоты импульсов в диапазоне от 3,2 до 51,2 Гц и квазилинейном изменении амплитудных значений импульсов от 15 до 5 мТл, далее - импульсами с непрерывным линейным спадом частоты в диапазоне от 51,2 до 3,2 Гц и изменении амплитудных значений импульсов от 15 до 5 мТл в течение 8 минут для каждого частотного диапазона соответственно.