БИОМАРКЕР ДЛЯ БОЛЕЗНИ АЛЬЦГЕЙМЕРА ИЛИ УМЕРЕННОГО КОГНИТИВНОГО РАССТРОЙСТВА Российский патент 2015 года по МПК G01N33/50 G01N33/68 G01N33/92 G01N33/15 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

[0001] Настоящее изобретение относится к биомаркеру для болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства. Более конкретно, настоящее изобретение относится к способу оценки эффекта терапевтического средства-кандидата на болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство, способу облегчения диагностики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства и способу диагностирования болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0002] Биомаркер очень полезен для диагностирования и контроля прогрессирования заболевания и важен для скрининга пациентов, контроля побочных эффектов, облегчения выбора подходящего лечения и разработки нового лекарственного средства. При болезни Альцгеймера Aβ (бета-амилоид) 1-42 и фосфорилированный тау-белок в спинномозговой жидкости в настоящее время считают наиболее полезными биомаркерами (непатентная литература 1 и 2).

ПЕРЕЧЕНЬ ЛИТЕРАТУРЫ

Непатентная литература

[0003] Непатентная литература 1: Ibach et al., "Cerebrospinal fluid tau and beta-amyloid in Alzheimer patients, disease controls and an age-matched random sample", Neurobiol. Aging., 2006; vol. 27 (no. 9): p.1202-1211.

Непатентная литература 2: Bouwman et al., "CSF biomarker levels in early and late onset Alzheimer's disease", Neurobiol. Aging., 2009; vol. 30 (no. 12): p.1895-1901.

Непатентная литература 3: Koelsch et al. "Alterations of cholesterol precursor levels in Alzheimer's disease", Biochim. Biophys. Acta., 2010; vol. 1801 (no. 8): p.945-950.

Непатентная литература 4: Guentert et al., "Plasma Gelsolin is Decreased and Correlates with Rate of Decline in Alzheimer's Disease", J. Alzheimer's. Dis., 2010; vol. 21 (no. 2): p.585-596.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ

Техническая проблема

[0004] Однако для вышеупомянутых биомаркеров требуется применение спинномозговой жидкости и, в частности, забор спинномозговой жидкости каждый раз, когда наблюдают зависящее от времени изменение патологии Альцгеймера, что налагает огромную нагрузку на пациента, и поэтому потребовался малоинвазивный биомаркер с использованием крови или т.п.

Решение проблемы

[0005] Десмостерол представляет собой предшественник холестерина. Полагают, что при болезни Альцгеймера происходит нарушение метаболизма холестерина, и документально подтверждено, что уровень десмостерола в спинномозговой жидкости пациентов с болезнью Альцгеймера ниже такового у здоровых пожилых людей, тогда как уровень десмостерола в плазме остается неизмененным (непатентная литература 3). Авторы настоящего изобретения обнаружили, в противоречии с этим открытием, что уровень десмостерола в плазме пациентов с болезнью Альцгеймера ниже такового у здоровых пожилых людей, и десмостерол в плазме можно применять в качестве биомаркера для болезни Альцгеймера. Также авторы настоящего изобретения обнаружили, что десмостерол отдельно позволяет диагностировать умеренное когнитивное расстройство, проявляющееся умеренной когнитивной дисфункцией, что является доклинической стадией болезни Альцгеймера.

[0006] Более того, авторы настоящего изобретения обнаружили, что при применении в качестве биомаркера комбинация десмостерола и бета-амилоида в крови делает возможной более точную диагностику болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, нежели когда в качестве биомаркера применяют только десмостерол в крови.

[0007] Более того, авторы настоящего изобретения обнаружили, что при применении в качестве биомаркера комбинация десмостерола и гельсолина в крови или комбинация десмостерола, бета-амилоида и гельсолина в крови делает возможной более точную диагностику болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, нежели когда в качестве биомаркера применяют только десмостерол в крови. Известно, что уровень гельсолина в плазме у пациентов с болезнью Альцгеймера является низким (не патентная литература 4).

[0008] В частности, настоящее изобретение предусматривает следующее [1]-[28].

[1] Способ оценки эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола в крови отличного от человека животного;

этап введения кандидата отличному от человека животному;

этап измерения уровня десмостерола в крови отличного от человека животного после введения кандидата; и

этап получения показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови отличного от человека животного после введения кандидата выше уровня до введения кандидата.

[2] Способ оценки эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола в крови первого отличного от человека животного;

этап введения кандидата второму отличному от человека животному;

этап измерения уровня десмостерола в крови второго отличного от человека животного после введения кандидата; и

этап получения показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови второго отличного от человека животного после введения кандидата выше уровня десмостерола в крови первого отличного от человека животного, которому кандидат не вводят.

[3] Способ оценки эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола в образце крови субъекта до введения кандидата;

этап измерения уровня десмостерола в образце крови субъекта после введения кандидата; и

этап получения показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта после введения кандидата выше уровня десмостерола в крови до введения кандидата.

[4] Способ облегчения диагностики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола в образце крови субъекта; и

этап получения показателя возможного наличия болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения.

[5] Способ диагностирования болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола в крови субъекта; и

этап идентификации болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения.

[6] Способ выбора пациента, который может получить пользу от терапевтического эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола в образце крови субъекта; и

этап получения показателя необходимости введения пациенту терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения.

[7] Способ прогнозирования терапевтического эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола в образце крови субъекта; и

этап получения показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения.

[8] Способ оценки эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола и уровня бета-амилоида в крови отличного от человека животного;

этап введения кандидата отличному от человека животному;

этап измерения уровня десмостерола и уровня бета-амилоида в крови отличного от человека животного после введения кандидата; и

этап получения показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови отличного от человека животного после введения кандидата выше уровня до введения кандидата, и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови отличного от человека животного после введения кандидата выше такового до введения кандидата.

[9] Способ оценки эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола и уровня бета-амилоида в крови первого отличного от человека животного;

этап введения кандидата второму отличному от человека животному;

этап измерения уровня десмостерола и уровня бета-амилоида в крови второго отличного от человека животного после введения кандидата; и

этап получения показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови второго отличного от человека животного после введения кандидата выше уровня десмостерола в крови первого отличного от человека животного, которому кандидат не вводят, и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови второго отличного от человека животного после введения кандидата выше Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови первого отличного от человека животного, которому кандидат не вводят.

[10] Способ оценки эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола и уровня бета-амилоида в образце крови субъекта до введения кандидата;

этап измерения уровня десмостерола и уровня бета-амилоида в образце крови субъекта после введения кандидата; и

этап получения показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта после введения кандидата выше уровня десмостерола в крови до введения кандидата и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта после введения кандидата выше такового до введения кандидата.

[11] Способ облегчения диагностики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола и уровня бета-амилоида в образце крови субъекта; и

этап получения показателя возможного наличия болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонного значения.

[12] Способ диагностирования болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола и уровня бета-амилоида в крови субъекта; и

этап идентификации болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонного значения.

[13] Способ выбора пациента, который может получить пользу от терапевтического эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола и уровня бета-амилоида в образце крови субъекта; и

этап получения показателя необходимости введения пациенту терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонного значения.

[14] Способ прогнозирования терапевтического эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола и уровня бета-амилоида в образце крови субъекта; и

этап получения показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонного значения.

[15] Способ оценки эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола, уровня бета-амилоида и уровня гельсолина в крови отличного от человека животного;

этап введения кандидата отличному от человека животному;

этап измерения уровня десмостерола, уровня бета-амилоида и уровня гельсолина в крови отличного от человека животного после введения кандидата; и

этап получения показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови отличного от человека животного после введения кандидата выше уровня десмостерола в крови до введения кандидата, Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови отличного от человека животного после введения кандидата выше такового до введения кандидата и уровень гельсолина в крови отличного от человека животного после введения кандидата выше уровня гельсолина в крови после введения кандидата.

[16] Способ оценки эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола, уровня бета-амилоида и уровня гельсолина в крови первого отличного от человека животного;

этап введения кандидата второму отличному от человека животному;

этап измерения уровня десмостерола, уровня бета-амилоида и уровня гельсолина в крови второго отличного от человека животного после введения кандидата; и

этап получения показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови второго отличного от человека животного после введения кандидата выше уровня десмостерола в крови первого отличного от человека животного, которому кандидат не вводят, Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови второго отличного от человека животного после введения кандидата выше Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови первого отличного от человека животного, которому кандидат не вводят, и уровень гельсолина в крови второго отличного от человека животного после введения кандидата выше уровня гельсолина в крови первого отличного от человека животного, которому кандидат не вводят.

[17] Способ оценки эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола, уровня бета-амилоида и уровня гельсолина в образце крови субъекта до введения кандидата,

этап измерения уровня десмостерола, уровня бета-амилоида и уровня гельсолина в образце крови субъекта после введения кандидата,

этап получения показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта после введения кандидата выше уровня десмостерола до введения кандидата, Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта после введения кандидата выше такового до введения кандидата и уровень гельсолина в крови субъекта после введения кандидата выше уровня гельсолина в крови до введения кандидата.

[18] Способ облегчения диагностики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола, уровня бета-амилоида и уровня гельсолина в образце крови субъекта; и

этап получения показателя возможного наличия болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения, Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонного значения и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения.

[19] Способ диагностирования болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола, уровня бета-амилоида и уровня гельсолина в крови субъекта; и

этап идентификации болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения, Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонного значения и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения.

[20] Способ выбора пациента, который может получить пользу от терапевтического эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола, уровня бета-амилоида и уровня гельсолина в образце крови субъекта; и

этап получения показателя необходимости введения пациенту терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения, Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонного значения и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения.

[21] Способ прогнозирования терапевтического эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола, уровня бета-амилоида и уровня гельсолина в образце крови субъекта; и

этап получения показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения, Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонного значения и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения.

[22] Способ оценки эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола и уровня гельсолина в крови отличного от человека животного;

этап введения кандидата отличному от человека животному;

этап измерения уровня десмостерола и уровня гельсолина в крови отличного от человека животного после введения кандидата; и

этап получения показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови отличного от человека животного после введения кандидата выше уровня десмостерола в крови до введения кандидата и уровень гельсолина в крови отличного от человека животного после введения кандидата выше уровня гельсолина в крови до введения кандидата.

[23] Способ оценки эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола и уровня гельсолина в крови первого отличного от человека животного;

этап введения кандидата второму отличному от человека животному;

этап измерения уровня десмостерола и уровня гельсолина в крови второго отличного от человека животного после введения кандидата; и

этап получения показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови второго отличного от человека животного после введения кандидата выше уровня десмостерола в крови первого отличного от человека животного, которому кандидат не вводят, и уровень гельсолина в крови второго отличного от человека животного после введения кандидата выше уровня гельсолина в крови первого отличного от человека животного, которому кандидат не вводят.

[24] Способ оценки эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола и уровня гельсолина в образце крови субъекта до введения кандидата;

этап измерения уровня десмостерола и уровня гельсолина в образце крови субъекта после введения кандидата; и

этап получения показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта после введения кандидата выше уровня десмостерола в крови до введения кандидата и уровень гельсолина в крови субъекта после введения кандидата выше уровня гельсолина в крови до введения кандидата.

[25] Способ облегчения диагностики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола и уровня гельсолина в образце крови субъекта; и

этап получения показателя возможного наличия болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения.

[26] Способ диагностирования болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола и уровня гельсолина в крови субъекта; и

этап идентификации болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения.

[27] Способ выбора пациента, который может получить пользу от терапевтического эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола и уровня гельсолина в образце крови субъекта; и

этап получения показателя необходимости введения пациенту терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения.

[28] Способ прогнозирования терапевтического эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:

этап измерения уровня десмостерола и уровня гельсолина в образце крови субъекта; и

этап получения показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения.

ПОЛЕЗНЫЕ ЭФФЕКТЫ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0009] Применяя уровень десмостерола в крови или подобное в качестве показателя, можно точно диагностировать прогрессирование болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, также можно точно оценить эффект терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, также возможно выбрать пациента, который может получить пользу от терапевтического эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, и, более того, можно прогнозировать терапевтический эффект терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства. Десмостерол и подобное по настоящему изобретению являются биомаркерами в крови, и поэтому можно точно диагностировать болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство без забора спинномозговой жидкости.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0010] Фиг.1 представляет собой диаграмму, на которой показаны характеристические кривые десмостерола, Aβx-42/Aβx-40 и их комбинации у здоровых пожилых людей и у пациентов с болезнью Альцгеймера.

Фиг.2 представляет собой диаграмму, на которой показаны характеристические кривые десмостерола, Aβx-42/Aβx-40 и их комбинации у здоровых пожилых людей и у пациентов с умеренным когнитивным расстройством.

Фиг.3 представляет собой диаграмму, на которой показаны характеристические кривые десмостерола/холестерина, Aβx-42/Aβx-40, гельсолина и их комбинации у здоровых пожилых людей и у пациентов с болезнью Альцгеймера.

Фиг.4 представляет собой диаграмму, на которой показаны характеристические кривые десмостерола/холестерина, Aβx-42/Aβx-40, гельсолина и их комбинации у здоровых пожилых людей и у пациентов с умеренным когнитивным расстройством.

Фиг.5 представляет собой диаграмму, на которой показаны характеристические кривые десмостерола/холестерина, гельсолина и их комбинации у здоровых пожилых людей и у пациентов с болезнью Альцгеймера.

Фиг.6 представляет собой диаграмму, на которой показаны характеристические кривые десмостерола/холестерина, гельсолина и их комбинации у здоровых пожилых людей и у пациентов с умеренным когнитивным расстройством.

Фиг.7 представляет собой диаграмму, на которой показаны уровни десмостерола у здоровых пожилых людей и у пациентов с умеренным когнитивным расстройством. На диаграмме жирная черта обозначает среднее значение. Кратность изменения у пациентов с умеренным когнитивным расстройством относительно здоровых пожилых людей составляет 0,7368.

Фиг.8 представляет собой диаграмму, на которой показаны характеристические кривые десмостерола у здоровых пожилых людей и у пациентов с умеренным когнитивным расстройством.

ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ

[0011] Способ оценки эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению направлен на отличное от человека животное или на человека. Предпочтительно, чтобы отличное от человека животное являлось млекопитающим. Предпочтительно, чтобы отличное от человека животное было модельным животным с болезнью Альцгеймера или умеренным когнитивным расстройством. Примеры модельного животного с болезнью Альцгеймера или умеренным когнитивным расстройством включают животное с повышенным продуцированием бета-амилоида путем модификации белка-предшественника амилоида (APP) или пресенилина 2. Более конкретно, пример включает Tg2576, генетически модифицированную мышь, сверхэкспрессирующую APP. Предпочтительно, чтобы пациентом с болезнью Альцгеймера или умеренным когнитивным расстройством являлся человек.

[0012] Эффект кандидата можно оценить, если до и после введения кандидата измерить уровень десмостерола в крови одного и того же индивидуума, отличного от человека животного или человека, и уровни сравнить.

[0013] Уровень десмостерола в крови, используемый в данном документе, можно измерить с помощью жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии (LC/MS). Более конкретно, его можно измерить согласно описанным в примерах условиям. Уровнем десмостерола в крови может быть концентрация десмостерола или десмостерола/холестерина, что представляет собой отношение десмостерола к холестерину, при этом концентрация десмостерола является предпочтительной. Также уровень десмостерола в крови можно измерить с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) или газовой хроматографии/масс-спектрометрии (GC-MS). Уровнем десмостерола в крови предпочтительно является уровень в плазме.

[0014] Эффективность лекарственного средства-кандидата можно оценить на основе показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови после введения кандидата выше уровня десмостерола в крови до введения кандидата.

[0015] Дополнительно, применяя различных индивидуумов отличных от человека животных, можно оценить эффект кандидата путем измерения уровней десмостерола в крови одного или некоторого числа индивидуумов в одной группе без введения кандидата (контрольная группа), измерения уровней десмостерола в крови одного или некоторого числа индивидуумов другой группы после введения кандидата (группа с введенным кандидатом) и сравнения уровней в этих группах. В этом случае эффективность лекарственного средства-кандидата можно оценить на основе показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови индивидуумов из группы с введенным кандидатом выше уровня десмостерола в крови индивидуумов из контрольной группы.

[0016] Способ облегчения диагностики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению предусматривает показатель для диагностики путем измерения уровня десмостерола в образце крови субъекта с подозрением на болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство и его сравнения с эталонным значением. Более конкретно, способ по настоящему изобретению предусматривает показатель возможного наличия болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения. Эталонное значение уровня десмостерола в крови можно определить со ссылкой на значения у пациента с точно диагностированной болезнью Альцгеймера или умеренным когнитивным расстройством и у здорового человека.

[0017] С помощью способа диагностирования болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению выполняют идентификацию путем измерения уровня десмостерола у субъекта с подозрением на болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство и его сравнения с эталонным значением. Более конкретно, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения, то у субъекта идентифицируют наличие болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства. Эталонное значение уровня десмостерола в крови является таким, как описано выше.

[0018] С помощью способа выбора пациента, который может получить пользу от терапевтического эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению, выполняют идентификацию путем измерения уровня десмостерола в крови субъекта, у которого диагностировали болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство, и его сравнения с эталонным значением. Более конкретно, выбор можно осуществить на основе показателя необходимости введения пациенту терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения. Эталонное значение уровня десмостерола в крови является таким, как описано выше.

[0019] С помощью способа прогнозирования терапевтического эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению выполняют идентификацию путем измерения уровня десмостерола в крови субъекта, у которого диагностировали болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство, и его сравнения с эталонным значением. Более конкретно, прогноз можно сделать на основе показателя наличия у кандидата потенциальной эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения. Эталонное значение уровня десмостерола в крови является таким, как описано выше.

[0020] Терапевтическое средство-кандидат для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению особым образом не ограничен и является предпочтительно модулятором метаболического пути холестерина или модулятором на основе гипотезы Aβ, более предпочтительно ингибитором β-секретазы, ингибитором γ-секретазы, модулятором γ-секретазы, антителом к Aβ, антителом к Aβ-олигомеру и т.п.

[0021] В вышеприведенных способах в качестве биомаркера можно применять уровень только десмостерола в крови или можно применять в комбинации с другими биомаркерами. Можно выполнить более точную оценку или подобное при комбинации уровня десмостерола в крови с другими биомаркерами. Поэтому, предпочтительна, в частности, комбинация с уровнем бета-амилоида в крови, комбинация с уровнем гельсолина в крови или комбинация с уровнем бета-амилоида и уровнем гельсолина в крови, которая делает возможной существенно более точную оценку или подобное, что должно быть выполнено. Ниже в данном документе подробно описаны варианты осуществления с применением комбинации с этими биомаркерами.

[0022] Описан способ, в котором применяют уровень десмостерола и уровень бета-амилоида в крови в качестве биомаркеров.

[0023] Способ оценки эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению направлен на отличное от человека животное или на человека. Подробности описаны в данном документе выше.

[0024] Эффект кандидата можно оценить, если до и после введения кандидата измерить уровень десмостерола и уровень бета-амилоида в крови у одного и того же индивидуума, отличного от человека животного или человека, и уровни сравнить.

[0025] Способ измерения уровня десмостерола в крови является таким, как описано выше.

[0026] Уровень бета-амилоида в крови можно измерить, например, с помощью известных способов, таких как ELISA или LC/MS. Желательно измерять бета-амилоид как Aβx-40, так и Aβx-42. Aβx-40 означает Aβ1-40 и пептид, частично удаленный с N-конца, и Aβx-42 означает Aβ1-42 и пептид, частично удаленный с N-конца. Уровнем бета-амилоида в крови может быть концентрация Aβx-42 в крови или может быть Aβx-42/Aβx-40, что является отношением Aβx-42 к Aβx-40, при этом Aβx-42/Aβx-40 является предпочтительным. Уровнем бета-амилоида в крови предпочтительно является уровень в плазме.

[0027] Эффективность лекарственного средства-кандидата можно оценить на основе показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови после введения кандидата выше уровня десмостерола в крови до введения кандидата и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови после введения кандидата выше такового до введения кандидата. Aβx-42/Aβx-40 в крови означает отношение уровня Aβx-42 в крови к уровню Aβx-40 в крови.

[0028] Также, применяя разных индивидуумов отличных от человека животных, можно оценить эффект кандидата путем измерения уровней десмостерола и уровней бета-амилоида в крови одного или некоторого числа индивидуумов в одной группе без введения кандидата (контрольная группа), измерения уровней десмостерола и уровней бета-амилоида в крови одного или некоторого числа индивидуумов другой группы после введения кандидата (группа с введенным кандидатом) и сравнения уровней этих групп. В этом случае эффективность лекарственного средства-кандидата можно оценить на основе показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови индивидуумов из группы с введенным кандидатом выше уровня в крови индивидуумов из контрольной группы и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови индивидуумов из группы с введенным кандидатом выше такового в крови индивидуумов из контрольной группы.

[0029] Способ облегчения диагностики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению предусматривает показатель для диагностики путем измерения уровня десмостерола и уровня бета-амилоида в образце крови субъекта с подозрением на болезнь Альцгеймера и его сравнения с эталонным значением. Более конкретно, способ по настоящему изобретению предусматривает показатель возможного наличия болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонного значения. Эталонное значение уровня десмостерола в крови и эталонное значение Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови можно определить со ссылкой на значение у пациента с точно диагностированной болезнью Альцгеймера или умеренным когнитивным расстройством.

[0030] С помощью способа диагностирования болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению выполняют идентификацию путем измерения уровня десмостерола и уровня бета-амилоида в крови субъекта с подозрением на болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство и их сравнения с эталонными значениями. Более конкретно, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонного значения, то у субъекта идентифицируют наличие болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства. Эталонное значение уровня десмостерола в крови и эталонное значение Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови являются такими, как описано выше.

[0031] С помощью способа выбора пациента, который может получить пользу от терапевтического эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению, выполняют идентификацию путем измерения уровня десмостерола и уровня бета-амилоида в крови субъекта, у которого диагностировали болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство, и их сравнения с эталонными значениями. Более конкретно, выбор можно осуществить на основе показателя необходимости введения пациенту терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонного значения. Эталонное значение уровня десмостерола в крови и эталонное значение Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови являются такими, как описано выше.

[0032] С помощью способа прогнозирования терапевтического эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению выполняют идентификацию путем измерения уровня десмостерола и уровня бета-амилоида в крови субъекта, у которого диагностировали болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство, и их сравнения с эталонными значениями. Более конкретно, прогноз можно сделать на основе показателя наличия у кандидата потенциальной эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонного значения. Эталонное значение уровня десмостерола в крови и эталонное значение Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови являются такими, как описано выше.

[0033] Терапевтическое средство-кандидат для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению особым образом не ограничен и является предпочтительно таким, как описано выше.

[0034] Описан способ, в котором применяют уровень десмостерола, уровень бета-амилоида и уровень гельсолина в крови в качестве биомаркеров.

[0035] Способ оценки эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению направлен на отличное от человека животное или на человека. Подробности описаны в данном документе выше.

[0036] Эффект кандидата можно оценить, если до и после введения кандидата измерить уровень десмостерола, уровень бета-амилоида и уровень гельсолина в крови у одного и того же индивидуума, отличного от человека животного или человека, и уровни сравнить.

[0037] Способ измерения уровня десмостерола и уровня бета-амилоида в крови является таким, как описано выше.

[0038] Уровень гельсолина в крови можно измерить, например, с помощью известных способов, таких как ELISA. Уровнем гельсолина в крови предпочтительно является уровень в плазме.

[0039] Эффективность лекарственного средства-кандидата можно оценить на основе показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови после введения кандидата выше уровня десмостерола в крови до введения кандидата, Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови после введения кандидата выше такового до введения кандидата и уровень гельсолина в крови после введения кандидата выше уровня гельсолина в крови до введения кандидата.

[0040] Также, применяя разных индивидуумов отличных от человека животных, можно оценить эффект кандидата путем измерения уровней десмостерола, уровней бета-амилоида и уровней гельсолина в крови одного или некоторого числа индивидуумов в одной группе без введения кандидата (контрольная группа), измерения уровней десмостерола, уровней бета-амилоида и уровней гельсолина в крови одного или некоторого числа индивидуумов другой группы после введения кандидата (группа с введенным кандидатом) и сравнения уровней этих групп. В этом случае эффективность лекарственного средства-кандидата можно оценить на основе показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови индивидуумов из группы с введенным кандидатом выше уровня в крови индивидуумов из контрольной группы, Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови индивидуумов из группы с введенным кандидатом выше такового в крови индивидуумов из контрольной группы и уровень гельсолина в крови индивидуумов из группы с введенным кандидатом выше уровня в крови индивидуумов из контрольной группы.

[0041] Способ облегчения диагностики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению предусматривает показатель для диагностики путем измерения уровня десмостерола, уровня бета-амилоида и уровня гельсолина в образце крови субъекта с подозрением на болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство и их сравнения с эталонными значениями. Более конкретно, способ по настоящему изобретению предусматривает показатель возможного наличия болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения, Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонного значения и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения. Эталонное значение уровня десмостерола в крови, и эталонное значение уровня Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови, и эталонное значение гельсолина в крови можно определить со ссылкой на значения у пациента с точно диагностированной болезнью Альцгеймера или умеренным когнитивным расстройством.

[0042] С помощью способа диагностирования болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению выполняют идентификацию путем измерения уровня десмостерола в крови, уровня бета-амилоида и уровня гельсолина в крови субъекта с подозрением на болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство и их сравнения с эталонными значениями. Более конкретно, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения, Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонного значения, и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения, то у субъекта идентифицируют наличие болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства. Эталонное значение уровня десмостерола в крови, эталонное значение Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови и эталонное значение гельсолина в крови являются такими, как описано выше.

[0043] С помощью способа выбора пациента, который может получить пользу от терапевтического эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению, выполняют идентификацию путем измерения десмостерола в крови, уровня бета-амилоида и уровня гельсолина в крови субъекта, у которого диагностировали болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство, и их сравнения с эталонными значениями. Более конкретно, выбор можно осуществить на основе показателя необходимости введения пациенту терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения, Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонного значения и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения. Эталонное значение уровня десмостерола в крови, эталонное значение Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови и эталонное значение уровня гельсолина в крови являются такими, как описано выше.

[0044] С помощью способа прогнозирования терапевтического эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению выполняют идентификацию путем измерения десмостерола, уровня бета-амилоида и уровня гельсолина в крови субъекта, у которого диагностировали болезнь Альцгеймера, и их сравнения с эталонными значениями. Более конкретно, прогноз можно сделать на основе показателя наличия у кандидата потенциальной эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения, Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонного значения и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения. Эталонное значение уровня десмостерола в крови, эталонное значение Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови и эталонное значение уровня гельсолина в крови являются такими, как описано выше.

[0045] Терапевтическое средство-кандидат для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению особым образом не ограничен и является предпочтительно таким, как описано выше.

[0046] Описан способ, в котором применяют уровень десмостерола и уровень гельсолина в крови в качестве биомаркеров.

[0047] Способ оценки эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению направлен на отличное от человека животное или на человека. Подробности описаны в данном документе выше.

[0048] Эффект кандидата можно оценить, если до и после введения кандидата измерить уровень десмостерола и уровень гельсолина в крови у одного и того же индивидуума, отличного от человека животного или человека, и уровни сравнить.

[0049] Способ измерения уровня десмостерола, уровня бета-амилоида и уровня гельсолина в крови является таким, как описано выше.

[0050] Эффективность лекарственного средства-кандидата можно оценить на основе показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови после введения кандидата выше уровня десмостерола в крови до введения кандидата и уровень гельсолина в крови после введения кандидата выше уровня гельсолина в крови до введения кандидата.

[0051] Также, применяя разных индивидуумов отличных от человека животных, можно оценить эффект кандидата путем измерения уровней десмостерола и уровней гельсолина в крови одного или некоторого числа индивидуумов в одной группе без введения кандидата (контрольная группа), измерения уровней десмостерола и уровней гельсолина в крови одного или некоторого числа индивидуумов другой группы после введения кандидата (группа с введенным кандидатом) и сравнения уровней этих групп. В этом случае эффективность лекарственного средства-кандидата можно оценить на основе показателя наличия у кандидата потенциала эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови индивидуумов из группы с введенным кандидатом выше уровня в крови индивидуумов из контрольной группы и уровень гельсолина в крови индивидуумов из группы с введенным кандидатом выше уровня в крови индивидуумов из контрольной группы.

[0052] Способ облегчения диагностики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению предусматривает показатель для диагностики путем измерения уровня десмостерола и уровня гельсолина в образце крови субъекта с подозрением на болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство и их сравнения с эталонными значениями. Более конкретно, способ по настоящему изобретению предусматривает показатель возможного наличия болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения, и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения. Эталонное значение уровня десмостерола в крови и эталонное значение гельсолина в крови можно определить со ссылкой на значения у пациента с точно диагностированной болезнью Альцгеймера или умеренным когнитивным расстройством.

[0053] С помощью способа диагностирования болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению выполняют идентификацию путем измерения уровня десмостерола в крови и уровня гельсолина в крови субъекта с подозрением на болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство и их сравнения с эталонными значениями. Более конкретно, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения, то у субъекта идентифицируют наличие болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства. Эталонное значение уровня десмостерола в крови и эталонное значение уровня гельсолина в крови являются такими, как описано выше.

[0054] С помощью способа выбора пациента, который может получить пользу от терапевтического эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению, выполняют идентификацию путем измерения уровня десмостерола в крови и уровня гельсолина в крови субъекта, у которого диагностировали болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство, и их сравнения с эталонными значениями. Более конкретно, выбор можно осуществить на основе показателя необходимости введения пациенту терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения. Эталонное значение уровня десмостерола в крови и эталонное значение уровня гельсолина в крови являются такими, как описано выше.

[0055] С помощью способа прогнозирования терапевтического эффекта терапевтического средства-кандидата для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению выполняют идентификацию путем измерения уровня десмостерола и уровня гельсолина в крови субъекта, у которого диагностировали болезнь Альцгеймера, и их сравнения с эталонными значениями. Более конкретно, прогноз можно сделать на основе показателя наличия у кандидата потенциальной эффективности при лечении болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения. Эталонное значение уровня десмостерола в крови и эталонное значение уровня гельсолина в крови являются такими, как описано выше.

[0056] Терапевтическое средство-кандидат для лечения болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства по настоящему изобретению особым образом не ограничен и является предпочтительно таким, как описано выше.

ПРИМЕРЫ

[0057] Пример 1. Измерение уровней десмостерола в крови здоровых пожилых людей и пациентов с болезнью Альцгеймера

Образец

В качестве образцов применяли плазму здоровых пожилых людей (10 человек, находящихся под наблюдением) и пациентов с болезнью Альцгеймера (10 человек, находящихся под наблюдением).

[0058] Измерение десмостерола

К 25 мкл плазмы добавляли в качестве внутренних стандартов 100 мкл 500 нг/мл десмостерола-d6 (приобретенного у Avanti Polar Lipids, Inc.) и 100 мкл 200 мкг/мл холестерина-d7 (приобретенного у KANTO CHEMICAL CO., INC.), также туда добавляли 100 мкл 50% водного раствора гидроксида калия и инкубировали при 70°C в течение 60 минут. Затем туда добавляли 2 мл гексана и 0,5 мл фосфатного буферного раствора (pH 6,8), перемешивали и центрифугировали, и собирали слой гексана. Операцию экстрагирования повторяли дважды. После объединения полученных слоев гексана растворитель сушили путем выпаривания с применением газообразного азота. Осадок растворяли в этаноле, и раствор подвергали жидкостной хроматографии/масс-спектрометрии с химической ионизацией при атмосферном давлении (LC/APCI-MS).

[0059] Применяемым устройством для LC/APCI-MS была система LC-20AD (производства Shimadzu Corporation), оснащенная автоматическим пробоотборником SIL-20AC, термостатом колонки CTO-20AC и квадрупольным масс-спектрометром LCMS-2010EV. Температуру колонки устанавливали на 50°C, применяя в качестве колонки колонку YMC-Pack Pro C18 RS (приобретенную у YMC Co., Ltd.) с внутренним диаметром 4,6 мм и длиной 250 мм. В качестве подвижной фазы применяли смешанный растворитель из воды и метанола (скорость потока 1 мл/минута). Более конкретно, применяли раствор A (вода:метанол=50:50) и раствор B (метанол), при этом B составлял 85% в течение 0-45 минут, 100% в течение 45-55 минут, и 85% в течение 55-70 минут.

[0060] MS анализ проводили в режиме контроля заданных ионов (SIM) с применением в качестве ионов контроля m/z (отношение массы к заряду) 369,3, 376,3, 367,3 и 373,3 (соответствующее холестерину, холестерину-d7, десмостеролу и десмостеролу-d6, соответственно). Концентрацию каждого образца рассчитывали на основе градуировочной кривой субъекта, подлежащего измерению.

[0061] Результаты показаны в нижеследующих таблицах 1 и 2. Обнаружили, что уровни десмостерола в плазме пациентов с болезнью Альцгеймера ниже уровня здоровых пожилых людей.

[0062]

Таблица 1 Здоровые пожилые люди Пол Возраст Десмостерол (нг/мл) Ж 63 931 M 72 865 Ж 66 880 M 68 886 M 71 854 Ж 60 1261 M 61 500 M 69 795 Ж 74 621 Ж 71 889 Среднее 67,5 848

[0063]

Таблица 2 Пациенты с болезнью Альцгеймера Пол Возраст Десмостерол (нг/мл) M 80 367 M 70 519 M 77 367 M 84 590 Ж 86 284 Ж 70 337 Ж 75 427 Ж 71 692 M 74 322 Ж 90 433 Среднее 77,7 434

[0064] Пример 2. Измерение уровней десмостерола и уровней бета-амилоида в крови здоровых пожилых людей и пациентов с болезнью Альцгеймера

Образец

В качестве образцов применяли плазму здоровых пожилых людей (10 человек, находящихся под наблюдением) и пациентов с болезнью Альцгеймера (10 человек, находящихся под наблюдением).

[0065] Измерение десмостерола

Измерение проводили тем же способом, как и в примере 1.

[0066] Измерение Aβx-40 и Aβx-42

Концентрации Aβx-40 и Aβx-42 в крови измеряли с применением набора WAKO Aβx-40 ELISA (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) и набора WAKO Aβx-42 ELISA высокой чувствительности (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) согласно руководствам из наборов.

[0067] Результаты показаны в нижеследующих таблицах 3 и 4.

[0068]

Таблица 3 Здоровые пожилые люди Пол Возраст Десмостерол (нг/мл) x-40 (pM) x-42 (pM) x-42/x-40 Ж 63 931 88 6,7 0,076 M 72 865 77 7,7 0,101 Ж 66 880 61 7,3 0,120 M 68 886 92 8,9 0,096 M 71 854 98 8,8 0,090 Ж 60 1261 67 7,2 0,107 M 61 500 94 8,5 0,091 M 69 795 61 5,9 0,097 Ж 74 621 64 5,5 0,086 Ж 71 889 53 5,1 0,097 Среднее 67,5 848 75,5 7,2 0,096

[0069]

Таблица 4 Пациенты с болезнью Альцгеймера Пол Возраст Десмостерол (нг/мл) x-40 (pM) x-42 (pM) x-42/x-40 M 80 367 96 8,7 0,090 M 70 519 99 7,7 0,078 M 77 367 88 5,3 0,060 M 84 590 88 5,3 0,060 Ж 86 284 99 8,2 0,083 Ж 70 337 55 4,3 0,078 Ж 75 427 78 6,0 0,076 Ж 71 692 34 1,7 0,049 M 74 322 87 7,6 0,088 Ж 90 433 84 7,2 0,085 Среднее 77,7 434 80,9 6,2 0,075

[0070] Статистический анализ

Для оценки точности диагностики каждого измеренного значения и их комбинаций применяли характеристическую кривую с применением вышеприведенных данных. Для каждого из десмостерола и Aβx-42/Aβx-40 строили характеристическую кривую с применением ROC, основного пакета для R. Для комбинации десмостерола и Aβx-42/Aβx-40 применяли модель машинного обучения, называемую SVM (метод опорных векторов) (R пакет e1071). Оценку проводили путем случайного выбора в качестве набора обучающих примеров 10 образцов из общего количества 20 образцов, состоящего из 10 образцов из группы здоровых пожилых людей и 10 образцов из группы пациентов с болезнью Альцгеймера, при этом оставшиеся 10 образов являлись набором тестовых примеров. Кроме того, с применением пакета ROCR строили характеристические кривые результатов прогноза данных испытания (фиг.1). Отдельно у десмостерола AUC составляла 0,96, у Aβx-42/Aβx-40 AUC составляла 0,91 и у комбинации десмостерола и Aβx-42/Aβx-40 AUC составляла 1.

[0071] Пример 3. Измерение уровней десмостерола и уровней бета-амилоида в крови здоровых пожилых людей и пациентов с умеренным когнитивным расстройством

Образец

В качестве образцов применяли плазму здоровых пожилых людей (42 человек, находящихся под наблюдением) и пациентов с умеренным когнитивным расстройством (26 человек, находящихся под наблюдением).

[0072] Измерение десмостерола

Измерение провели тем же способом, как и в примере 1.

[0073] Измерение Aβx-40 и Aβx-42

Измерение провели тем же способом, как и в примере 2.

[0074] Статистический анализ

Для оценки точности диагностики каждого измеренного значения и их комбинаций применяли, как в примере 2, характеристическую кривую с применением вышеприведенных данных. Оценку проводили путем случайного выбора в качестве набора обучающих примеров 34 образцов из общего количества 68 образцов, состоящего из 42 образцов из группы здоровых пожилых людей и 26 образцов из группы пациентов с умеренным когнитивным расстройством, при этом оставшиеся 34 образца являлись набором тестовых примеров. Кроме того, с применением пакета ROCR строили характеристические кривые результатов прогноза данных испытания (фиг.2). Отдельно у десмостерола AUC составляла 0,71, у Aβx-42/Aβx-40 AUC составляла 0,84 и у комбинации десмостерола и Aβx-42/Aβx-40 AUC составляла 0,92.

[0075] Пример 4. Измерение уровней десмостерола, уровней бета-амилоида и уровней гельсолина в крови здоровых пожилых людей, пациентов с болезнью Альцгеймера и пациентов с умеренным когнитивным расстройством

Образец

В качестве образцов применяли плазму здоровых пожилых людей (37 человек, находящихся под наблюдением), пациентов с болезнью Альцгеймера (39 человек, находящихся под наблюдением) и пациентов с умеренным когнитивным расстройством (26 человек, находящихся под наблюдением).

[0076] Измерение десмостерола

Измерение провели тем же способом, как и в примере 1.

[0077] Измерение Aβx-40 и Aβx-42

Измерение провели тем же способом, как и в примере 2.

[0078] Измерение гельсолина

Концентрацию гельсолина в крови измеряли с применением набора ELISA для определения гельсолина у людей (USCN Life Science Inc.) согласно руководству из набора.

[0079] Статистический анализ

Для оценки точности диагностики каждого измеренного значения и их комбинаций применяли, как в примере 2, характеристическую кривую с применением вышеприведенных данных. Оценку проводили путем случайного выбора в качестве набора обучающих примеров 38 образцов из общего количества 76 образцов, состоящего из 37 образцов из группы здоровых пожилых людей и 39 образцов из группы пациентов с болезнью Альцгеймера, при этом оставшиеся 38 образцов являлись набором тестовых примеров. С применением пакета ROCR строили характеристические кривые результатов прогноза данных испытания (фиг.3). У десмостерола/холестерина AUC составляла 0,80, у Aβx-42/Aβx-40 AUC составляла 0,88, у гельсолина AUC составляла 0,88 и у комбинации трех AUC составляла 0,98. Когда специфичность составляла 100%, комбинация трех имела чувствительность 90%.

[0080] Также оценку проводили путем случайного выбора в качестве набора обучающих примеров 32 образцов из общего количества 63 образцов, состоящего из 37 образцов из группы здоровых пожилых людей и 26 образцов из группы пациентов с умеренным когнитивным расстройством, при этом оставшиеся 31 образец являлись набором тестовых примеров. С применением пакета ROCR строили характеристические кривые результатов прогноза данных испытания (фиг.4). У десмостерола/холестерина AUC составляла 0,71, у Aβx-42/Aβx-40 AUC составляла 0,81, у гельсолина AUC составляла 0,80 и у комбинации трех AUC составляла 0,86. Когда специфичность составляла 85%, комбинация трех имела чувствительность 85%.

[0081] Пример 5. Измерение уровней десмостерола и уровней гельсолина в крови здоровых пожилых людей, пациентов с болезнью Альцгеймера и пациентов с умеренным когнитивным расстройством

Образец

В качестве образцов применяли плазму здоровых пожилых людей (42 человек, находящихся под наблюдением), пациентов с болезнью Альцгеймера (41 человека, находящихся под наблюдением) и пациентов с умеренным когнитивным расстройством (26 человек, находящихся под наблюдением).

[0082] Измерение десмостерола

Измерение провели тем же способом, как и в примере 1.

[0083] Измерение гельсолина

Измерение провели тем же способом, как и в примере 4.

[0084] Статистический анализ

Для оценки точности диагностики каждого измеренного значения и их комбинаций применяли, как в примере 2, характеристическую кривую с применением вышеприведенных данных. Оценку проводили путем случайного выбора в качестве набора обучающих примеров 42 образцов из общего количества 83 образца, состоящего из 42 образцов из группы здоровых пожилых людей и 41 образца из группы пациентов с болезнью Альцгеймера, при этом оставшиеся 41 образец являлись набором тестовых примеров. С применением пакета ROCR строили характеристические кривые результатов прогноза данных испытания (фиг.5). У десмостерола/холестерина AUC составляла 0,80, у гельсолина AUC составляла 0,88 и у комбинации обоих AUC составляла 0,96.

[0085] Также оценку проводили путем случайного выбора в качестве набора обучающих примеров 34 образцов из общего количества 68 образцов, состоящего из 42 образцов из группы здоровых пожилых людей и 26 образцов из группы пациентов с умеренным когнитивным расстройством, при этом оставшиеся 34 образца являлись набором тестовых примеров. С применением пакета ROCR строили характеристические кривые результатов прогноза данных испытания (фиг.6). У десмостерола/холестерина AUC составляла 0,71, у гельсолина AUC составляла 0,80 и у комбинации обоих AUC составляла 0,82.

[0086] Пример 6. Измерение уровней десмостерола в крови здоровых пожилых людей и пациентов с умеренным когнитивным расстройством

Образец

В качестве образцов применяли плазму здоровых пожилых людей (42 человек, находящихся под наблюдением) и пациентов с умеренным когнитивным расстройством (26 человек, находящихся под наблюдением).

[0087] Измерение десмостерола

Измерение проводили тем же способом, как и в примере 1. Уровни десмостерола в крови здоровых пожилых людей и пациентов с умеренным когнитивным расстройством показаны на фиг.7. Средний уровень десмостерола в плазме здоровых пожилых людей составлял 1046 нг/мл, и средний уровень десмостерола в плазме пациентов с умеренным когнитивным расстройством составлял 770 нг/мл. Обнаружили существенное различие между обеими группами (p<0,01; t-критерий).

[0088] Статистический анализ

Для оценки точности диагностики применяли, как в примере 2, характеристическую кривую с применением вышеприведенных данных. Оценку проводили путем случайного выбора в качестве набора обучающих примеров 34 образцов из общего количества 68 образцов, состоящего из 42 образцов из группы здоровых пожилых людей и 26 образцов из группы пациентов с умеренным когнитивным расстройством, при этом оставшиеся 34 образца являлись набором тестовых примеров. С применением пакета ROCR строили характеристические кривые результатов прогноза данных испытания (фиг.8). AUC составляла 0,72.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства. Сущность способа состоит в том, что способ включает измерение в крови десмостерола, бета-амилоида, гельсолина. При уровне десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения, или при уровне десмостерола и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 в крови субъекта ниже эталонных значений, или при уровне десмостерола и Aβx-42 или Aβx-42/Aβx-40 и уровне гельсолина в крови субъекта ниже эталонных значений, или при уровне десмостерола и гельсолина в крови ниже эталонных значений диагностируют болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство. Использование заявленного способа позволяет эффективно диагностировать болезнь Альцгеймера или умеренное когнитивное расстройство. 4 н.п. ф-лы, 8 ил., 4 табл., 6 пр.

1. Способ диагностирования болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:
этап измерения уровня десмостерола в крови субъекта; и
этап диагностирования болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения.

2. Способ диагностирования болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:
этап измерения уровня десмостерола и уровня бета-амилоида в крови субъекта; и
этап диагностирования болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения и Аβx-42 или Аβх-42/Аβх-40 в крови субъекта ниже эталонного значения.

3. Способ диагностирования болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:
этап измерения уровня десмостерола, уровня бета-амилоида и уровня гельсолина в крови субъекта; и
этап диагностирования болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения, Аβх-42 или Аβх-42/Аβх-40 в крови субъекта ниже эталонного значения и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения.

4. Способ диагностирования болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, включающий:
этап измерения уровня десмостерола и уровня гельсолина в крови субъекта; и
этап диагностирования болезни Альцгеймера или умеренного когнитивного расстройства, если уровень десмостерола в крови субъекта ниже эталонного значения и уровень гельсолина в крови субъекта ниже эталонного значения.