СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ КОМБИНАЦИЕЙ РОЗУВАСТАТИНА И ТИОКТОВОЙ КИСЛОТЫ ПРИ ГИПОЭСТРОГЕН-L-NAME-ИНДУЦИРОВАННОМ ДЕФИЦИТЕ ОКСИДА АЗОТА Российский патент 2015 года по МПК G09B23/28 A61K31/495 A61K31/381 A61P9/08 

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной кардиофармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции.

Известен способ коррекции эндотелиальной дисфункции с помощью розувастатина, относящегося к статинам, описанный Е.И. Красильниковой, Е.М. Нифонтовым, Е.Г. Сергеевой, Т.В. Антоновой, А.А. Жлоба, О.В. Галкиной, М.А. Романовой «Показатели адгезионной дисфункции эндотелия и факторы иммунного воспаления у больных гипертонической болезнью в сочетании с ишемической болезнью сердца: динамика на фоне терапии Крестором». Артериальная гипертензия - 2009.- Т.15.- №3.- с.268-274, который заключается в пероральном приеме этого препарата у больных для коррекции эндотелиальной дисфункции.

Основным недостатком известного способа является более узкая патогенетическая направленность действия розувастатина при эндотелиальной дисфункции, связанная с его плейотропными эффектами, в частности снижением уровня провоспалительного цитокина - интерлейкина-6, который ассоциируется с развитием эндотелиальной дисфункции, в то время как одна из причин - повышенная биодеградация оксида азота в результате перекисного окисления остается некомпенсированной. Кроме того, в используемой модели гипоэстроген-L-NAME идуцированного дефицита NO развитие эндотелиальной дисфункции связано не только с повышенной биодеградацией, но и с уменьшением биодоступности оксида азота в результате повышения окислительного стресса на фоне гипоэстрогении. Установлено, что у женщин в период менопаузы имеется множество факторов, которые могут играть важную роль в стимуляции окислительного стресса. Одним из таких факторов является активность ренина в плазме (АРП) и, соответственно, активность ренин-ангиотензиновой системы (РАС). В исследованиях James и сотр., в которых АРП измерялась в динамике на протяжении 9 лет у мужчин и женщин, уровни АРП были выше у женщин после менопаузы, чем до менопаузы (James GD, Sealey JE, Muller F et al. Renin Relationship to Sex, Race and Age in Normotensive Population. J Hypertension 1986; 4(Suppl 5): S387-S389). Ангиотензин-2, вводимый как в высоких (Rajagopalan S, Kerry S, Munzel T et al. Angiotensin ll-mediated hypertension in the ratincreases vascular superoxide production via membrane NADH/NADPH oxidase activation. Contribution to alterations of vasomotor tone. J Clin Invest 1996; 97: 1916-1923), так и в физиологических дозах (Reckelhoff JF, Zhang H, Srivastava К et ai. Subpressor doses of angiotensin II increases-plasma F2-isoprostanes in rats. Hypertension 2000; 35: 476-479), способен стимулировать окислительный стресс, о чем свидетельствует повышение плазменных уровней Р2-изопростанов. Кроме того, исследования показали, что Р2-изопростан, помимо того, что он сам является почечным вазоконстриктором (Yura T, Fukunaga M, Kahn R et al. Free-radical-generated F2-isoprostane stimulates cell-proliferation and endothelin-1 expression in endothelial cells. Kidney Int 1999; 56: 471-478), усиливает сосудосуживающее действие АТ2 (Sametz W, Grobuschek T, Hammer-Kogler S et al. Influence of Isoprostanes on Vasoconstrictor Effects of Noradrenaline and Angiotensin II. Eur J Pharm 1999; 378:47-55). Оба вещества - АТ2 и эндотелин - повышают синтез супероксида посредством стимуляции субъединиц НАДФ (Н) оксидазы (Sametz W, Grobuschek T, Hammer-Kogler S et al. Influence of Isoprostanes on Vasoconstrictor Effects of Noradrenaline and Angiotensin II. Eur J Pharm 1999; 378:47-55). Супероксид соединяется с оксидом азота (N0), что приводит к подавлению его биологической активности (т. е. вазодилатации) (Sametz W, Grobuschek T, Hammer-Kogler S et al. Influence of Isoprostanes on Vasoconstrictor Effects of Noradrenaline and Angiotensin II. Eur J Pharm 1999; 378:47-55), в связи с чем уменьшение биодоступности NO способно привести к вазоконстрикции и увеличению уровня АД. Кроме того, о повышении активности окислительного стресса, о чем свидетельствуют высокие уровни не только Р2-изопростана, но и малондиальдегида в плазме (маркеры окислительного стресса) (Helmersson J, Mattsson P, Basu S. Prostaglandin F (2alpha) metabolite and F2-isoprostane excretion in migraine. Clin Sci (Lond) 2002; 102:39-43), (Signorelli SS, Neri S, Sciacchitano S et al. Duration of menopause and behavior of mal-ondialdehyde, lipids, lipoproteins and carotid wall artery intima-media thickness. Maturitas 2001; 39: 39-42).

Следовательно, монотерапия эндотелиальной дисфункции розувастатином рассматривается как недостаточная, так как не воздействует на звенья патогенеза эндотелиальной дисфункции, связанные с активацией окислительного стресса, и обуславливает поиск более эффективных способов фармакотерапии, одним из которых является сочетание розувастатина с антиоксидантом.

Наиболее близким к заявленному решению является способ коррекции эндотелиальной дисфункции при L-NAME - индуцированном дефиците оксида азота, включающий моделирование эндотелиальной дисфункции ежедневным в течение 7 суток внутрибрюшинным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира крысам-самцам линии Wistar в дозе 25 мг/кг и одновременное проведение коррекции дисфункции комбинацией статина и антиоксиданта (RU №2438188 С1, публ. 27.12.2011).

Основным недостатком способа является отсутствие у резвератрола действия, улучшающего ангионевральный кровоток, являющегося одним из механизмов эндотелиопротективного действия.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является способ коррекции эндотелиальной дисфункции, включающий использование розувастатина, относящегося к статинам, и тиоктовой кислоты, обладающей антиоксидантной активностью.

Технический результат достигается тем, что моделирование эндотелиальной дисфункции ежедневным в течение 7 суток внутрибрюшинным введением L-нитро-аргинин-метилового эфира крысам-самкам линии Wistar в дозе 25 мг/кг осуществляют с одновременным проведением коррекции дисфункции комбинацией статина и антиоксиданта, причем при моделировании эндотелиальной дисфункции дополнительно в течение 6 недель формируют гипоэстрогенное состояние путем проведения билатеральной овариэктомии, а в качестве статина используют розувастатин, который вводят внутрижелудочно однократно в сутки в дозе 0,85 мг/кг, а в качестве антиоксиданта используют тиоктовую кислоту, которую вводят совместно с розувастатином в дозе 50 мг/кг, оценивая при этом степень коррекции эндотелиальной дисфункции по соотношению эндотелийзависимой и эндотелийнезависимой вазодилатации.

Дополнительное введение тиоктовой кислоты приводит к активизации коррекции эндотелиальной дисфункции, так как она является антиоксидантом и предотвращает биодеградацию оксида азота в сосудистом эндотелии свободными радикалами.

СПОСОБ ОСУЩЕСТВЛЯЕТСЯ СЛЕДУЮЩИМ ОБРАЗОМ

Опыты проводят на самках белых крыс массой 200-250 г линии Wistar в возрасте 3,5 месяца. Для моделирования эндотелиальной дисфункции крыс наркотизировали хлоралгидратом (300 мг/кг) и проводили билатеральную овариэктомию. Для этого в асептических условиях вскрывали переднюю брюшную стенку, перевязывали трубный и брюшинный отделы яичников, используя атравматический шовный материал, после чего производили эксцизию последних. Рана послойно ушивалась. На 43 день (через 6 недель после проведения операции) внутрибрюшинно вводился ингибитор NO-синтазы N-нитро-L-аргинин метиловый эфир (L-NAME, Sigma) один раз в сутки в дозе 25 мг/кг в объеме 1 мл/кг в течение 7 дней (n=10 животных). Животным интактной группы вводится физиологический раствор NaCl в том же объеме (n=10 животных). Тиоктовая кислота и розувастатин, а также их комбинация вводятся ежедневно внутрижелудочно (через зонд) в дозах 50 мг/кг/сут и 0,85 мг/кг/сут соответственно в течение 7 дней одновременно с L-NAME.

На 8 сутки под наркозом (хлоралгидрат 300 мг/кг и золетил 150 мг/кг, внутрибрюшинно) животное брали в эксперимент и на первом этапе оценивали артериальное давление и реакции артериального давления на эндотелийзависимую (ацетилхолин в дозе 40 мкг/кг) и эндотелийнезависимую (нитропруссид в дозе 30 мкг/кг) вазодилатацию посредством введения в сонную артерию катетера. Фармакологические агенты вводили болюсно в правую бедренную вену.

Регистрировали систолическое артериальное давление (САД), диастолическое артериальное давление (ДАД) и частоту сердечных сокращений (ЧСС) с помощью датчика TSD104A и аппаратно-программного комплекса MP150, производства Biopac System, Inc., США.

Для оценки степени развития эндотелиальной дисфункции у экспериментальных животных и ее коррекции исследуемыми препаратами произведен расчет коэффициента эндотелиальной дисфункции (КЭД):

$$КЭД=\frac{S_{АДНП}}{S_{АД\text{ АХ}}},$$

где КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции; S_{АД НП} - площадь треугольника над кривой восстановления АД при проведении функциональной пробы с введением нитропруссида натрия, S_{АД АХ} - площадь треугольника над кривой восстановления АД при проведении функциональной пробы с введением ацетилхолина в дозе 40 мкг/кг (патент RU №2301015 от 20.06.2007 г., бюлл. №17).

При статистической обработке данных рассчитывается среднее значение, величина стандартного отклонения. Различия считаются достоверными при p<0,05.

ПРИМЕР КОНКРЕТНОГО ВЫПОЛНЕНИЯ

Блокада NO-синтазы, вызванная 7-дневным введением L-NAME крысам, приводила к нарушению взаимоотношений вазодилатирующих и вазоконстрикторных механизмов регуляции сосудистого тонуса, о чем свидетельствуют результаты сосудистых проб на эндотелийзависимое (ацетилхолин) и эндотелийнезависимое (нитропруссид натрия) расслабление сосудов и увеличение КЭД с 0,8±0,1 у интактных животных до 4,6±0,7 (р<0,05).

В группе животных, где на фоне введения ингибитора NO-синтазы L-NAME вводился только розувастатин, это отношение соответствовало значению 1,7±0,2, а в группе с дополнительным введением к розувастатину тиоктовой кислоты - 1,4±0,3, что меньше, чем в группе животных с введением L-NAME.

Артериальное давление у интактных животных составляло: систолическое (САД) - 128,1±6,0 мм рт.ст., диастолическое (ДАД) - 95,7±4,0 мм рт.ст. При введении L-NAME на фоне овариэктомии происходило увеличение артериального давления до 169,9±7,3 мм рт.ст. и 123,2±7,5 мм рт.ст. соответственно.

Введение розувастатина на фоне гипоэстрогении и L-NAME снижало артериальное давление до 151,2±6,2 мм рт.ст. и 113,8±3,3 мм рт.ст. соответственно (р<0,05), а введение комбинации розувастатина и тиоктовой кислоты приводило к большему снижению артериального давления, которое составило 135,5±2,9 мм рт.ст., ДАД - 97,6±7,1 мм рт.ст. соответственно (р<0,05).

Динамика показателей систолического (САД), диастолического (ДАД) артериального давления, коэффициента эндотелиальной дисфункции в экспериментальных группах животных приведена ниже в таблице 1.

Таблица 1

Показатель
Группа САД,
мм рт.ст. ДАД,
мм рт.ст. КЭД,
отн.ед. Интактные 128,1±6,0 95,7±4,0 0,8±0,1 Овариэктомия+L-NAME 169,9±7,3* 123,2±7,5* 4,6±0,7* Овариэктомия+L-NAME+
розувастатин 151,2±6,2* 113,8±3,3* 1,7±0,2** Овариэктомия+L-NAME+ розувастатин+тиоктовая кислота 135,5±2,9* 97,6±7,1* 1,4±0,3**

Примечание: КЭД - коэффициент эндотелиальной дисфункции; * - р<0,05 в сравнении с группой интактных; ** - р<0,05 в сравнении с группой L-NAME.

Кроме того, результаты исследований поясняются графическими изображениями, на которых отображена динамика показателей систолического (САД), диастолического (ДАД) артериального давления, коэффициента эндотелиальной дисфункции в экспериментальных группах животных.

Таким образом, полученные результаты позволяют констатировать активизацию фармакологической коррекции эндотелиальной дисфункции розувастатином при сочетанном его применении с тиоктовой кислотой, так как она является антиоксидантом и предотвращает биодеградацию оксида азота в сосудистом эндотелии свободными радикалами.

Изобретение относится к медицине, в частности к экспериментальной фармакологии, и может быть использовано для коррекции эндотелиальной дисфункции при гипоэстрогенемии. Способ включает моделирование дисфункции путем проведения билатеральной овариэктомии крысам-самкам линии Wistar. На 43 день после операции проводят ежедневное в течение 7 суток внутрибрюшинное введение L-нитро-аргинин-метилового эфира (L-NAME) в дозе 25 мг/кг. Коррекцию индуцированной дисфункции проводят путем ежедневного внутрижелудочного введения розувастатина в дозе 0,85 мг/кг и тиоктовой кислоты в дозе 50 мг/кг на протяжении 7 дней, совпадающих с введением крысам L-NAME. Способ обеспечивает активизацию коррекции эндотелиальной дисфункции при гипоэстрогенемии. 1 табл., 1 пр.

Способ коррекции эндотелиальной дисфункции при гипоэстроген-L-NAME-индуцированном дефиците оксида азота, включающий моделирование дисфункции путем проведения билатеральной овариэктомии крысам-самкам линии Wistar и на 43 день после операции ежедневное в течение 7 суток внутрибрюшинное введение L-нитро-аргинин-метилового эфира в дозе 25 мг/кг и проведение коррекции дисфункции путем ежедневного внутрижелудочного введения розувастатина в дозе 0,85 мг/кг и тиоктовой кислоты в дозе 50 мг/кг на протяжении 7 дней, совпадающих с введением крысам L-NAME.