СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ УРОВНЯ РАБОТОСПОСОБНОСТИ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Российский патент 2016 года по МПК G09B23/28 A61K31/17 A61P43/00 

Изобретение относится медицине, а именно к экспериментальной фармакологии.

Известно применение в эксперименте и медицинской практике препарата бемитила как актопротекторного средства в различных тестах (см. Актопротекторы. http://doping.net.ru/bulanovl8.htm).

На сегодняшний день это соединение является устаревшим.

Известен также способ повышения уровня работоспособности лабораторных животных в эксперименте, включающий ввод в качестве актопротектора химического соединения (см RU № 2371175, A61K31/185, 2009). При этом как химическое соединение используют 6-диизопропиламинометил-2,3-дигидрокверцетин, C₂₂H₂₇NO₇ (НК-2).

Недостаток этого способа - используемое соединение не способно, в силу своей химической структуры, вступать в конкурентное взаимодействие с мочевой кислотой и мочевиной, образующимися в условиях повышенной физической нагрузки организма.

Задачей изобретения является обеспечение возможности повышения уровня работоспособности лабораторных животных в условиях повышенной физической нагрузки организма.

Технический результат заключается в обеспечении возможности повышения уровня работоспособности лабораторных животных в условиях повышенной физической нагрузки организма в связи с тем, что используемое соединение способно вступать в конкурентное взаимодействие с мочевой кислотой и мочевиной, образующимися в условиях повышенной физической нагрузки организма. При этом расширяется арсенал средств для повышения физической работоспособности у лабораторных животных в эксперименте с дальнейшей перспективой внедрения данных соединений в медицинскую и/или спортивную деятельность.

Для решения поставленной задачи способ повышения уровня работоспособности лабораторных животных в эксперименте, включающий ввод в качестве актопротектора химического соединения, отличается тем, что в качестве актопротектора используют N-дифенилфосфорил-N'-алкил (С₆ -С₁₀)мочевин со структурной формулой Ph₂P(O)NHC(O)NHCH₂CH=CH₂ и брутто-формулой C₁₆H₁₇N₂O₂P, причем названное химическое соединение вводят перорально в дозе 10 мг/кг веса животного за 20-40 мин до проведения тестов. Кроме того, тесты включают тест Порсолта и вертикальный экран-сетку.

Сопоставительный анализ признаков заявленного решения с признаками прототипа и аналогов свидетельствует о соответствии заявленного решения критерию "новизна".

Признаки отличительной части формулы изобретения обеспечивают решение комплекса функциональных задач.

Признак, указывающий на то, что «используют N-дифенилфосфорил-N'-алкил(С₆ -С₁₀)мочевин», обеспечивает способность для используемого соединения вступать в конкурентное взаимодействие с мочевой кислотой и мочевиной, образующимися в условиях повышенной физической нагрузки организма.

Признаки, указывающие на то, что используют соединение «со структурной формулой Ph₂P(O)NHC(O)NHCH₂CH=CH₂ и брутто-формулой C₁₆H₁₇N₂O₂P», уточняют, какой из гомологов упомянутого соединения необходимо использовать.

Признаки, указывающие, что «названное химическое соединение вводят перорально в дозе 10 мг/кг веса животного за 20-40 мин до проведения тестов», уточняют дозировку препарата и временные параметры его ввода, обеспечивающие достоверное снятие характеристик «работы» препарата.

Признаки, указывающие что «тесты включают тест Порсолта и вертикальный экран-сетку» конкретизируют сущность тестов.

Соединение, используемое в качестве актопротектора, получено путём химического синтеза в лаборатории фосфорорганических соединений Института элементоорганических соединений им. А.Н. Несмеянова РАН (ФГБУН ИНЭОС РАН) и подробно представлено в описании патента RU № 2296768.

Получение N-дифенилфосфорил-N'-алкил(С₆ -С₁₀)мочевин протекает по следующей схеме:

Сначала дифенилхлорфосфин, окисляют хлористым сульфурилом в четыреххлористом углероде при 20-25°С, что приводит к получению хлорангидрида дифенилфосфиновой кислоты; в последующем растворитель и другие летучие компоненты реакционной смеси удаляют в вакууме. Затем в тот же реактор последовательно добавляют растворитель - ацетонитрил, 2,5 мол.% безводного хлористого магния, являющегося катализатором, и циановокислый натрий; после часового перемешивания при комнатной температуре к реакционной массе, содержащей образовавшийся дифенилфосфорилизоцианат в растворе ацетонитрила, добавляют соответствующий первичный амин. После перемешивания в течение одного часа при комнатной температуре реакционную смесь разлагают водой, осадок целевой N-дифенилфосфорил-N'-алкил(С₆-С₁₀)мочевины отфильтровывают, промывают и сушат на воздухе. Причем, предварительно дифенилхлорфосфин окисляют хлористым сульфурилом при температуре 20-25°С в среде четыреххлористого углерода для получения исходного хлорангидрида дифенилфосфиновой кислоты, причем взаимодействие этого хлорангидрида с циановокислым натрием проводят при комнатной температуре (20-25°С), а в качестве растворителя при взаимодействии дифенилфосфорилизоцианата с н-алкиламинами используют ацетонитрил. В качестве исходных соединений использовались технический дифенилхлорфосфин (CAS Index [1079-66-9], фирма Acros, 95%), хлористый сульфурил (CAS Index [7791-25-5], фирма Acros, 98,5%), безводный хлористый магний (CAS Index [7786-30-3], фирма Aldrich, 98%), циановокислый натрий (CAS Index [917-61-3], фирма Aldrich, 96%), н-гексиламин (CAS Index [111-26-2], фирма Acros, 99%), н-гептиламин (CAS Index [111-68-2], фирма Acros, 99+%), н-октиламин (CAS Index [111-86-4], фирма Acros, 99+%), н-нониламин (CAS Index [112-20-9], фирма Acros, 98%), н-дециламин (CAS Index [2016-57-1], фирма Aldrich, 98%). В качестве растворителей использовали отечественные четыреххлористый углерод (ГОСТ 20288-74) и ацетонитрил [ТУ 6-09-3534-87 (1-4 изм.)].

Животные из подопытной группы были разделены на пять подгрупп, которым актопротектор вводился в дозах, соответственно, 2,5 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг и 20 мг/кг веса животного в утренние часы, за 20-40 минут до эксперимента в виде раствора внутрижелудочно через зонд в течение пяти дней до тестирования.

Контрольной группой служили животные, получавшие эквиобъёмное количество раствора-плацебо.

При применении актопротектора у подопытных животных, тестируемых в тесте Порсолта, достоверно изменялось значение регистрируемого параметра (время иммобильности) по сравнению с контрольной группой при дозах от 10 мг/кг и 15 мг/кг. В таблице 1 представлены средние величины показателей за все дни тестирования.

Показатель иммобильности у подопытной группы, получавшей актопротектор, достоверно (р<0,05) снижается по сравнению с контрольной группой в дозировках 10 мг/кг и 15 мг/кг. Таким образом, актопротектор в указанных дозах повышает работоспособность в тесте Порсолта, так как снижение времени иммобильности свидетельствует о снижении физической утомляемости животных в данном эксперименте.

При применении актопротектора у подопытных животных, тестируемых на вертикальном экране-сетке, изменялись показатели работоспособности - времени удержания - по сравнению с контрольными особями (таблица 2).

Длительность удержания у крыс, получавших актопротектор, достоверно (р<0,05) отличается от контрольной группы только при дозировке 10 мг/кг. Актопротектор при такой дозировке (10 мг/кг) увеличивает время удержания у животных, следовательно, изучаемый препарат обладает способностью положительно влиять на метаболические процессы организма, обеспечивающие его динамическую, кинетическую и статическую деятельность.

Пример 1

Проводилось тестирование по изучению изменения работоспособности у мышей, получавших актопротектор в дозах 2,5 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг и 20 мг/кг в тесте Порсолта (таблица 1). В результате наблюдения выяснилось, что в дозах 2,5, 5 и 20 мг/кг актопротектора достоверно значимой разницы не обнаружено (р>0,05). Показатель иммобильности у подопытных групп, которым вводили исследуемое соединение в дозах 10 мг/кг и 15 мг/кг, достоверно (р<0,05) снизился по сравнению с контрольным значением.

Таблица 1

Группы Время иммобильности, (сек) Контрольная 64,32±7,18 Актопротектор (2,5 мг/кг) 53,21±9,01 Актопротектор (5 мг/кг) 56,80±6,74 Актопротектор (10 мг/кг) 43,24±5,74* Актопротектор (15 мг/кг) 40,18±6,31* Актопротектор (20 мг/кг) 59,11±8,44

* - значения показателя при р<0,05

Пример 2

Проводилось тестирование по изучению изменения работоспособности у мышей, получавших актопротектор в дозах 2,5 мг/кг, 5 мг/кг, 10 мг/кг, 15 мг/кг и 20 мг/кг на вертикальном экране-сетке.

Длительность удержания у крыс, которым вводили исследуемое соединение в дозе 10 мг/кг, достоверно (р<0,05) возросла по сравнению с контрольной группой в 1,8 раза (таблица 2). В экспериментальных группах, получавших соединение в дозах 2,5, 5, 15 и 20 мг/кг, данный показатель в сравнении с контрольным значением не имел достоверно значимой разницы.

Таблица 2

Группы Время удержания, (сек) Контрольная 42,10±9,16 Актопротектор (2,5 мг/кг) 46,31±7,82 Актопротектор (5 мг/кг) 54,18±9,33 Актопротектор (10 мг/кг) 76,31±6,42* Актопротектор (15 мг/кг) 58,95±8,94 Актопротектор (20 мг/кг) 59,22±7,58

* - значения показателя при р<0,05

Изобретение относится медицине, а именно к экспериментальной фармакологии, и касается выявления и изучения средств для повышения физической работоспособности у лабораторных животных в эксперименте. Способ включает введение животному актопротектора, в качестве которого используют N-дифенилфосфорил-N′-алкил(С₆-С₁₀)мочевин со структурной формулой Ph₂P(О)NHC(О)NHCH₂CH=CH₂ и брутто-формулой C₁₆H₁₇N₂O₂P. Соединение вводят в виде раствора внутрижелудочно через зонд в дозе 10-15 мг/кг веса животного за 20-40 минут до проведения теста Порсолта и теста на вертикальном экране-сетке. Способ обеспечивает повышение уровня работоспособности лабораторных животных в условиях повышенной физической нагрузки, что может позволить в дальнейшем использовать указанное соединение в медицинской и/или спортивной практике. 1 з.п. ф-лы, 2 табл., 2 пр.

1. Способ повышения уровня работоспособности лабораторных животных в эксперименте, включающий введение в качестве актопротектора химического соединения, отличающийся тем, что в качестве актопротектора используют N-дифенилфосфорил-N′-алкил(С₆-С₁₀)мочевин со структурной формулой Ph₂P(О)NHC(О)NHCH₂CH=CH₂ и брутто-формулой C₁₆H₁₇N₂O₂P, причем названное химическое соединение вводят в виде раствора внутрижелудочно через зонд в дозе 10-15 мг/кг веса животного за 20-40 мин до проведения тестов.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что тесты включают тест Порсолта и вертикальный экран-сетку.