Способ экспресс-диагностики хронического алкоголизма при тяжелых сочетанных травмах Российский патент 2017 года по МПК G01N33/50 

Изобретение относится к способам экспресс-диагностики хронического алкоголизма и может быть использовано в медицине, а именно в лабораторной диагностике и в травматологии для cito-диагностики хронической алкогольной зависимости и предрасположенности к алкогольному психозу у лиц, получивших тяжелую сочетанную травму.

В настоящее время в России, как и во всем мире, не уменьшается бремя травматизма. Среди лиц, получивших травму, от 30 до 60%, по разным данным, находятся в состоянии алкогольного опьянения. Однако не всегда есть возможность выяснить, насколько это опьянение является эпизодичным, или пациент страдает алкогольной зависимостью. Если имеет место алкогольная зависимость и травма получена на фоне многодневного запоя, то у пострадавшего имеется высокий риск развития алкогольного психоза. Кроме того, затруднено анестезиологическое обеспечение, высокий риск присоединения нозокомиальной пневмонии, ослаблена функция печени; и возможны другие соматические неблагоприятные последствия алкоголизации, которые усложнят репарацию и реабилитацию после травмы, и могут явиться причиной летального исхода даже при оптимальной травматологической помощи. Существует необходимость быстрой диагностики возможной алкогольной зависимости у пострадавшего, что поможет скорректировать лечебную тактику и предотвратить ряд осложнений.

Известны способы диагностики алкогольной зависимости, из которых самым надежным методом является анамнестический, который неприменим у пациента, который находится в бессознательном состоянии. Известны различные вербальные тесты, например AUDIT с чувствительностью (Se) 87%, специфичностью (Sp) 88% (Seale J.P. et al., 2006), опросник CAGE (Se 62%; Tuunanen M. et al., 2007). Ориентированный на отдельные нозологические формы на основе критериев DSM-IV индекс тяжести болезненного пристрастия - ASI (Se 85%, Sp 80%; Rikoon S.H. et al., 2006; McLellan A.T. et al., 1980). Можно отметить и такой инструментарий, как скрининговый тест злоупотребления психоактивными веществами (DAST), предложен Skinner Н.А. (1982), профиль пристрастия Модели (MAP, Marsden J. et al., 1998). Входят в эту кагорту и тест быстрого скрининга проблемного употребления наркотиков и алкоголя (DAP), опросник для тонкого скрининга злоупотребления психоактивными веществами (SASSI), индекс лечения опиоидной зависимости (OTI; Darke S. et al., 1992), оценка реабилитационного потенциала, тест изменения вкусовых ощущений (Невидимова Т.И., Семке В.Я., Бохан Н.А., 2003). Эти тесты неприменимы у пациента с тяжелой травмой по той же причине.

Известны лабораторные биохимические методики для выявления алкогольной зависимости, которые по данным S.H. Rikoon (2006) обладают чувствительностью между 10% для АЛТ и 52% ГГТ, 56% ACT. Наиболее заметный результат дает оценка (Se 100%; Sp 95%) содержания эстерифицированных этилом жирных кислот (FAEE) в волосах испытуемых, и данный тест может применяться для оценки тяжелой формы алкогольной зависимости (Wurst F.M. et al. 2004). Возможно определение (Se 100%, Sp 95%) ассоциированного ацетальдегида крови (WBAA), который применяется для мониторинга абстиненции (Bean P. et al., 2001).

Основной недостаток таких способов диагностики - необходимость дорогостоящего оборудования, трудоемкость и длительность получения результатов анализа.

Известен способ диагностики алкоголизма (авторское свидетельство СССР №1169619, МПК А61В 10/00, опубл. 30.07.1985 г.) путем биохимического исследования крови, отличающийся тем, что, с целью ускорения и повышения точности способа, пациенту дают алкоголь в дозе не менее 0,4 г/кг массы, через 2-8 ч определяют содержание метилового спирта и при его концентрации 0,01% и выше диагностируют алкоголизм.

Однако данный способ нельзя использовать для диагностики хронического алкоголизма пациентов с тяжелыми сочетанными травмами и, тем более, в бессознательном состоянии. Кроме того, анализ проводят с использованием газового хроматографа, который отсутствует в обычной биохимической лаборатории.

Наиболее близким аналогом (прототипом) является способ диагностики алкоголизма (авторское свидетельство СССР №1805386, МПК G01N 33/48, опубл. 30.03.1993 г.). Целью изобретения является упрощение способа. Для этого у обследуемого утром до приема пищи получают 20-40 мл венозной крови, изолируют из нее лимфоциты и определяют скорость окисления ацетона данными клетками. Если величина этого показателя превышает нормальные значения в 5,6 раз или более, диагностируют алкоголизм. Способ весьма прост и доступен, а точность диагностики с его помощью не уступает точности известных способов.

Однако данный способ не позволяет отличить бытовой алкоголизм от хронической алкогольной зависимости и, таким образом, предрасположенности к алкогольному психозу. Кроме того, данный способ требует использование полярографа, который не всегда имеется в стандартной биохимической лаборатории, что усложняет проведение экспресс-диагностики.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является упрощение средств реализации экспресс-диагностики, обеспечения возможности диагностировать хроническую алкогольную зависимость и, таким образом, предрасположенность к алкогольному психозу по морфологическим изменениям клеток лимфоцитов (их спонтанному апоптозу).

Указанный технический результат достигается тем, что в способе экспресс-диагностики хронического алкоголизма при тяжелых сочетанных травмах путем анализа венозной крови пострадавшего, согласно изобретению, венозную кровь предварительно кондиционируют, мазки крови окрашивают по Романовскому-Гимзе, проводят морфологический анализ с использованием светового микроскопа при увеличении в 1000 раз, просматривая тысячу клеток лейкоцитов, и учитывают (в ‰) измененные нейтрофилы (Нф), которые дифференцируют по характерным морфологическим признакам: апоптозные - по уменьшению размеров, по конденсированной цитоплазме, по уплотненному бесструктурному хроматину, часто разделенному на несколько округлых телец, и при уровне спонтанного апоптоза лимфоцитов не менее 5% диагностируют хроническую алкогольную зависимость, длительное алкогольное потребление, предшествующее травме, и высокий риск развития алкогольного психоза.

Апоптоз - форма гибели клетки, проявляющаяся в уменьшении ее размера, конденсации и фрагментации хроматина, уплотнении наружной и цитоплазматической мембран без выхода содержимого клетки в окружающую среду.

Способ экспресс-диагностики хронического алкоголизма при тяжелых сочетанных травмах осуществляется следующим образом.

У пострадавшего производится забор крови из вены при поступлении в клинику. Мазки крови окрашиваются по Романовскому-Гимзе после предварительного кондиционирования венозной крови. Для оценки апоптоза используется световая микроскопия, поскольку результаты морфологического анализа хорошо коррелируют с данными других методов оценки апоптоза [Маянский Н.А., 2000]. Посредством световой микроскопии окрашенных мазков из кондиционированной венозной крови определяют уровень апоптотически измененных нейтрофилов. На увеличении ×1000 просматривают тысячу клеток и учитывают (в ‰) измененные Нф, которые дифференцируют по характерным морфологическим признакам: апоптозные - по уменьшению размеров, по конденсированной цитоплазме, по уплотненному бесструктурному хроматину, часто разделенному на несколько округлых телец [Нестеренко А.Н., 2007; Fialkow L., 2006]. При уровне спонтанного апоптоза лимфоцитов не менее 5% диагностируется алкогольная зависимость, длительное алкогольное потребление, предшествующее травме, и высокий риск развития алкогольного психоза.

Описываемый способ позволяет повысить эффективность диагностики алкогольной зависимости у пациента с тяжелой сочетанной травмой.

Пример конкретного выполнения способа. Диагностические характеристики предлагаемого способа cito-диагностики алкогольной зависимости и возможного алкогольного психоза получены, исходя из результатов обследования пострадавших с сочетанными черепно-мозговыми и скелетными травмами, всего 58 чел., из них 30 чел. - в состоянии алкогольной интоксикации и с признаками алкогольной зависимости, который был подтвержден в дальнейшем катамнестически (1 группа), и 28 чел. - без признаков алкоголизма и алкогольной интоксикации (2 группа). Все пациенты были мужского пола, возраст от 31 до 57 лет, в среднем 41,52±1,25 года. У всех пострадавших состояние было квалифицировано как средней степени тяжести. Забор крови проводился при поступлении пациентов в клинику, до оперативного или консервативного лечения и до назначения фармакотерапии. В качестве контрольной группы использовались образцы крови 22 соматически и психически здоровых лиц, соответствующие по полу и возрасту обследуемой группе пациентов, не имеющих хронических заболеваний и не состоящих на диспансерном учете, без признаков перенесенных острых инфекционных заболеваний на момент обследования.

Уровень спонтанного апоптоза лимфоцитов в мазках, приготовленных сразу после взятия крови, у пострадавших с признаками алкоголизма (1 гр.) достоверно отличался от значений, наблюдаемых у пострадавших без признаков алкоголизма (2 гр.). Цитологический анализ мазков крови показал, что у лиц 1 группы уровень спонтанного апоптоза лимфоцитов составляет 5,6±0,7%, (в контрольной группе здоровых лиц 0,9±0,2%, у лиц 2 группы 2,4±0,4%, р<0,001). Индекс реализации апоптоза лимфоцитов, т.е. доля клеток с морфологическими признаками апоптоза в процентах от общего числа клеток, экспрессирующих рецепторы готовности к апоптозу у больных алкоголизмом, достоверно выше нормы (16,8±2,4%, в контроле - 7,7±1,6%, р>0,05). У лиц 1 группы выявлено повышение экспрессии рецептора CD95 (16,9±0,3%, во 2 гр. - 11,6±0,3%, р<0,05). Причем для экспресс-диагностики алкогольных проблем у пациента и настороженности в отношении развития алкогольного психоза достаточно определения уровня спонтанного апоптоза лимфоцитов, не менее 5% от общего числа клеток.

Таким образом, достижение заявляемого технического результата подтверждено в описании примера конкретного выполнения способа. Применение данного способа позволит быстро и недорого диагностировать хроническую алкогольную зависимость, предвидеть возможные осложнения и обосновать план лечения. Способ не требует сложных и дорогостоящих приборов для диагностики, а обычный световой микроскоп имеется в любой стандартной биохимической медицинской лаборатории.

Изобретение относится к медицине и предназначено для cito-диагностики хронической алкогольной зависимости и предрасположенности к алкогольному психозу у лиц, получивших тяжелую сочетанную травму. Венозную кровь предварительно кондиционируют, мазки крови окрашивают по Романовскому-Гимзе, проводят морфологический анализ с использованием светового микроскопа при увеличении в 1000 раз, просматривая тысячу клеток лейкоцитов, и учитывают (в ‰) измененные нейтрофилы (Нф), которые дифференцируют по характерным морфологическим признакам. При уровне спонтанного апоптоза лимфоцитов не менее 5% диагностируют хроническую алкогольную зависимость, длительное алкогольное потребление, предшествующее травме, и высокий риск развития алкогольного психоза. Способ позволяет упростить экспресс-диагностику, обеспечить возможность диагностировать хроническую алкогольную зависимость и предрасположенность к алкогольному психозу. 1 з.п. ф-лы, 1 пр.

1. Способ экспресс-диагностики хронического алкоголизма при тяжелых сочетанных травмах путем анализа венозной крови пострадавшего, отличающийся тем, что венозную кровь предварительно кондиционируют, мазки крови окрашивают по Романовскому-Гимзе, проводят морфологический анализ, просматривая тысячу клеток лейкоцитов, и учитывают (в ) измененные нейтрофилы (Нф), которые дифференцируют по характерным морфологическим признакам: апоптозные - по уменьшению размеров, по конденсированной цитоплазме, по уплотненному бесструктурному хроматину, часто разделенному на несколько округлых телец, и при уровне апоптоза лимфоцитов не менее 5% диагностируют хроническую алкогольную зависимость, длительное алкогольное потребление, предшествующее травме, и высокий риск развития алкогольного психоза.

2. Способ экспресс-диагностики по п. 1, отличающийся тем, что морфологический анализ клеток лейкоцитов проводят с использованием светового микроскопа при увеличении в 1000 раз.