СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОДЕИНА Российский патент 2017 года по МПК G01N21/64 

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для определения содержания кодеина в различных объектах, в том числе в фармацевтических препаратах и биологических жидкостях.

Для определения кодеина широко используются молекулярно-спектроскопические методы, такие как: спектрофотометрия, твердофазная спектрофотометрия, спектроскопия диффузного отражения, люминесценция.

Известен способ определения кодеина в сложных смесях в виде ионного ассоциата с реактивом Драгендорфа [RU №2523408, G01N 33/15, G01N 30/90, опубл. 20.07.2014 г.], который предусматривает разделение компонентов смеси методом тонкослойной хроматографии, обработку хроматограммы реактивом Драгендорфа и измерение интенсивности окраски ионного ассоциата кодеина с реактивом Драгендорфа методом спектроскопии диффузного отражения при длине волны 520 нм. Содержание кодеина определяют по градуировочному графику, построенному в аналогичных условиях.

Недостатком способа является относительно высокий предел обнаружения (9 мкг/мл), сложность методики, связанная с необходимостью разделения компонентов анализируемой смеси.

Известен способ определения кодеина, основанный на тушении люминесценции комплекса тербия (III) с 2-окси-4-гидроксихинолин-3-карбоновой кислотой кодеином фосфатом в водном растворе при рН 8,0 [Duerkop, Α., Aleksandrova, D, Scripinets, Y., Yegorova, Α., Vityukova, E. Sensitive terbium probes for luminescent determination of both alkaline phosphatase and codeine phosphate // Annals of the New York Academy of Sciences 2008. V. 1130. P. 172-178], предусматривающий растворение кодеинсодержащего препарата в дистиллированной воде, фильтрование, добавление хлорида тербия (III), 2-окси-4-гидроксихинолин-3-карбоновой кислоты, буферной смеси до рН 8,0. Интенсивность люминесценции регистрируют при длине волны 545 нм.

К недостаткам способа можно отнести относительно высокий предел обнаружения (0,12 мкг/мл).

Наиболее близким к предлагаемому решению по технической сущности и достигнутым результатам является способ люминесцентного определения кодеина в сложных смесях [Немихин В.В., Качин С.В., Шахворостова Т.С. Изучение спектролюминесцентных свойств кодеина с целью его определения в некоторых лекарственных препаратах // Журнал Сибирского федерального университета. Серия: Химия. 2012. Т. 5, №3. С. 289-295].

Способ предусматривает разделение компонентов смеси методом тонкослойной хроматографии, элюирование зоны кодеина 5 мл 0.1 Μ серной кислоты и измерение интенсивности люминесценции кодеина при 345 нм. Недостатками способа является высокий предел обнаружения кодеина(3 мкг/мл).

Техническим результатом изобретения является снижение предела обнаружения содержания кодеина в сложных смесях.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе определения кодеина, включающем отделение кодеина от сопутствующих компонентов сложной смеси, переведение его в раствор и измерение интенсивности люминесценции, новым является то, что в качестве компонента для образования ионного ассоциата используют эозин, образующийся ионный ассоциат экстрагируют толулом и измеряют интенсивность люминесценции ионного ассоциата кодеина и эозина при длине волны 550 нм.

Сущность способа заключается в том, что образующийся ионный ассоциат кодеина с эозином количественно экстрагируется толуолом из водного раствора. Спектр люминесценции ионного ассоциата представляет собой широкую полосу с максимумом при 550 нм. Максимальная интенсивность люминесценции достигается при экстракции ионного ассоциата из водного раствора с рН 7.5-9.0 и концентрации эозина 0.02-0.05 мг/мл. Данные представлены в таблицах 1 и 2. Изменение рН раствора и концентрации эозина от оптимального значения приводит к увеличению предела обнаружения. Максимальная интенсивность люминесценции экстракта сохраняется в течение 24 часов. Интенсивность люминесценции пропорционально возрастает с увеличением концентрации кодеина в растворе.

Способ осуществляют следующим образом:

- в делительную воронку вносят 10 мл водного раствора, содержащего 1,5-20 нг/мл кодеина, прибавляют 2 мл фосфатной буферной смеси, 4 мл водного раствор эозина (0,03 мг/мл) и 10 мл толуола;

- содержимое делительной воронки перемешивают в течение 10 мин;

- водную фазу отбрасывают, в делительную воронку вносят 10 мл буферной смеси и встряхивают еще 5 минут (для удаления избыточного эозина, перешедшего в органическую фазу);

- органическую фазу переносят в кварцевую кювету и измеряют интенсивность люминесценции при 550 нм.

Предел обнаружения кодеина, рассчитанный по 3s-критерию, составляет 0,4 нг/мл, что в 7500 раз меньше предела обнаружения, достигаемого по методике-прототипу. Градуировочный график линеен в диапазоне 1,5-20 нг/мл.

Способ определения кодеина иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1 (прототип).

Раствор, содержащий кодеин (40 мкг/мл) в этаноле, наносят на хроматографическую пластинку, пробу подсушивают на воздухе, затем переносят в камеру, насыщенную парами растворителей (ацетон-хлороформ-аммиак 24:12:1), и хроматографируют до прохождения фронта растворителя на 10 см от линии старта.

Затем пластинку вынимают из камеры, высушивают на воздухе, вырезают зону, относящуюся к кодеину, переносят в колбу, обрабатывают 5 мл 0.1 Μ раствора серной кислоты, раствор фильтруют, переносят в кювету и измеряют интенсивность люминесценции при 345 нм.

Содержание кодеина находят по градуировочному графику.

Найдено 42±3 мкг/мл.

Пример 2 (предлагаемый способ).

В делительную воронку вносят водный раствор, содержащий 5 нг/мл кодеина, добавляют 2 мл фосфатной буферной смеси до рН 8.0, 4 мл водного раствора эозина (0,03 мг/мл) и 10 мл толуола. Содержимое делительной воронки перемешивают в течение 10 минут, водную фазу отбрасывают, в делительную воронку вносят 10 мл буферной смеси и перемешивают 5 мин для удаления избытка эозина. Органическую фазу переносят в кварцевую кювету и измеряют интенсивность люминесценции при 550 нм.

Содержание кодеина находят по градуировочному графику. Найдено 4,9±0,3 нг/мл.

Способ характеризуется высокой чувствительностью и позволяет в 7500 раз снизить предел обнаружения кодеина, по сравнению с протопипом.

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для определения содержания кодеина в различных объектах, в том числе в фармацевтических препаратах и биологических жидкостях. Сущность способа заключается в том, что образующийся ионный ассоциат кодеина с эозином количественно экстрагируется толуолом из водного раствора. Спектр люминесценции ионного ассоциата представляет собой широкую полосу с максимумом при 550 нм. Максимальная интенсивность люминесценции достигается при экстракции ионного ассоциата из водного раствора с рН 7.5-.9.0 и концентрации эозина 0.02-0.05 мг/мл. Способ позволяет более чем в 7500 раз снизить предел обнаружения кодеина. Техническим результатом изобретения является снижение предела обнаружения содержания кодеина в сложных смесях. 2 табл.

Способ определения кодеина, включающий отделение кодеина от сопутствующих компонентов сложной смеси, переведение его в раствор и измерение интенсивности люминесценции, отличающийся тем, что в качестве компонента для образования ионного ассоциата используют эозин, образующийся ионный ассоциат экстрагируют толулом и измеряют интенсивность люминесценции ионного ассоциата кодеина и эозина при длине волны 550 нм.