СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭТИОНАМИДА Российский патент 1995 года по МПК G01N21/78 

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам количественного определения этионамида-2-этил-4-тиокарбаноил-4-пиридина экстракционно-фотометрическим методом, и может быть применено в фармацевтическом анализе для количественного определения препарата в субстанции, в лекарственных формах и в объектах биологического происхождения.

Известен способ определения этионамида [1] по реакции с глиоксиматом никеля и роданидом калия. Недостатком его является низкая чувствительность и невысокая точность определения.

Наиболее близким к изобретению является способ количественного определения этионамида фотометрическим методом с применением 0,1%-ного пентацианоаминоферроата натрия (ПЦАФ) [2], в котором анализируемая проба растворяется в метаноле и обрабатывается ПЦАФ. Окрашенная смесь фотометрируется при длине волны 550 нм.

Недостатком способа является низкая чувствительность, применение труднодоступного, токсического и летучего растворителя метанола, а также то, что способ не позволяет определять этионамид в биологических жидкостях.

Целью изобретения является повышение точности и чувствительности определения этионамида, а также расширение области применения.

Цель достигается тем, что в способе количественного определения этионамида путем растворения анализируемой пробы в воде, обработки полученного раствора цветореагентом в присутствии универсального буферного раствора с последующей экстракцией хлороформом и фотометрированием в количестве цветореагента используя 0,04%-ный водный раствор количественного фиолетового антрахинонового красителя, обработку им проводят в присутствии универсального буферного раствора при рН 2,5 при соотношении пробы, буферного раствора цветореагента и хлороформа 1:7:2:10 и фотометрируют при длине волны 590 нм водный слой.

Способ осуществляют следующим образом.

Для количественного определения этионамида используется стандартный водный раствор, содержащий в 1 мл 0,15 мг этого препарата. В качестве реагента используется 0,04% -ный водный раствор кислотного фиолетового антрахинонового красителя 1-окси-9,10-антрахинон-4-амино (мета-толил-сульфокислоты) [2] , в кислой среде с этионамидом образующий окрашенный ионный ассоциат, который в той же среды извлекается хлороформом. Для создания определенного рН среды используется универсальная буферная смесь. В хлороформной вытяжке, при обработке раствором щелочи, происходит разрушение ионного ассоциата этионамида и красителя. В щелочной раствор переходит освободившийся краситель, количество которого эквивалентно количеству вступившего с ним во взаимодействие этионамида.

Данные о выборе оптимальных условий количественного определения этионамида представлены в табл. 1, 2.

Из результатов, приведенных в табл. 1, следует, что ионный ассоциат этионамида и реагента в наибольших количествах экстрагируется хлороформом при рН 2,0-3,0. В дальнейших исследованиях использовался раствор универсальной буферной смеси с рН 2,5.

Из данных, приведенных в табл. 2, следует, что для полного образования ионного ассоциата между этионамидом и реагентом необходимо прибавить 1,8-2,2 мл 0,04% -ного раствора кислотного фиолетового антрахинонового красителя. В дальнейших исследованиях прибавляли по 2 мл 0,04%-ного раствора указанного реагента.

Было установлено, что для достижения оптимальных условий количественного определения этионамида, основанного на взаимодействии препарата с кислотным фиолетовым антрахиноновым красителем, необходимо брать 1-2 мл раствора этионамида, содержащего в этом объеме от 0,03 до 0,15 мг этого препарата, 7 мл раствора универсальной буферной смеси с рН 2,5, 2 мл 0,04%-ного раствора реагента и 10 мл хлороформа.

На чертеже показан график зависимости оптической плотности исследуемого раствора от количества в нем этионамида, где по горизонтали отложено количество этионамида С, а по вертикали - значение оптической плотности D.

П р и м е р 1. Определение этионамида в субстанции.

В делительную воронку вносят 1 мл водного раствора этионамида (от 0,03 до 0,15 мг в пробе), прибавляют 7 мл универсальной буферной смеси с рН 2,5, 2 мл 0,04% -ного водного раствора реагента и 10 мл хлороформа. Смесь взбалтывают в течение 3 мин, затем оставляют для разделения фаз на 10 мин. После разделения фаз хлороформный слой переносят в делительную воронку, содержащую 12 мл 0,2 н. раствора гидроксида натрия и встряхивают 10-15 с. После отстаивания фаз отделяют окрашенный щелочной раствор и оптическую плотность окрашенного щелочного раствора измеряют с помощью фотоэлектроколориметра (при использовании светофильтра, который имеет эффективную длину волны 590 ±10 нм, кювета 20 мм). В качестве раствора сравнения берут 0,2 н. раствор гидроксида натрия.

Построение калибровочного графика. В делительные воронки вносят по 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0 мл стандартного раствора этионамида, в 10 мл которого содержится 0,15 мг препарата. Затем во все делительные воронки прибавляют раствор УБС (рН 2,5) до 8 мл, по 2 мл 0,04%-ного раствора реагента, по 10 мл хлороформа и поступают, как указано выше. Используя полученные значения оптической плотности (табл. 3), строят калибровочный график (см. чертеж). Подчиняемость закону Бугера-Ламберта-Бера наблюдается в пределах концентраций этионамида от 0,03 до 0,15 мг/мл.

Используя калибровочный график, определяют количество анализируемого препарата. Этот метод можно применять для количественного определения этионамида как в субстанции, так и в драже.

П р и м е р 2. Количественное определение этионамида в драже по 0,25.

Для количественного определения этионамида в драже брали драже, взвешивали (точная навеска) и измельчали. Из измельченного драже брали 0,02 (точная навеска), количественно переносили в мерную колбу емкостью 100 мл, растворяли и доводили до метки универсальной буферной смесью рН 2,5. Для анализа брали 1 мл этого раствора, добавляли 7 мл универсальной буферной смеси и 2 мл 0,04%-ного раствора реагента. Далее поступали аналогично примеру 1.

Расчет концентрации этионамида в драже можно производить не только по калибровочному графику, но и по следующей формуле:
a_x= , где D_o - оптическая плотность стандартного раствора;
D_x - оптическая плотность исследуемого образца;
а_о - содержание этионамида в 1 мл стандартного раствора.

Приготовление стандартного раствора.

0,015 мг субстанции этионамида помещают в мерную колбу достоинством 100 мл и растворяют в 50 мл дистиллированной воды, доводят объем раствора водой до метки. Для анализа берут 1 мл стандартного раствора.

Оценка количественного определения этионамида в субстанции и драже представлена в табл. 4.

П р и м е р 3. Определение этионамида в биологическом материале.

К 100 г мелкоизмельченной печени трупа было добавлено 20 мг этионамида и оставлено на сутки при периодическом перемешивании. Исследуемый препарат из печени трехкратно изолировали водой, подкисленной щавелевой кислотой до рН 2,0. Объединенные вытяжки фильтровали через 4-5 слоев марли и центрифугировали. Этионамид из вытяжек экстрагировали хлороформом из щелочной среды (рН 8,0-9,0). Сухие остатки из кислых и из щелочных вытяжек после отгонки хлороформа растворяли в 100 мл универсальной буферной смеси (рН 2,5). Для количественного определения брали 1-2 мл этого раствора и далее поступали, как указано в примере 1. После определения оптической плотности количество выделенного этионамида из биологического материала рассчитывают по калибровочному графику. Примеси, выделенные совместно с этионамидом из биологического материала, не вступают во взаимодействие с реагентом и не мешают определению этионамида, выделенного из биологического материала.

Сущность изобретения: способ экстракционно-фотометрического определения заключается в образовании ионного ассоциата этионамида и кислотного фиолетового антрахинонового красителя, его экстракции хлороформом из кислой среды, разрушении раствором щелочи и последующем измерении оптической плотности освободившегося красителя, количественно эквивалентного количеству этионамида. Прямолинейная зависимость между оптической плотностью исследуемого раствора и количеством препарата находится в пределах 30 - 150 мкг/мл. 1 ил., 4 табл.

СПОСОБ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭТИОНАМИДА путем растворения анализируемой пробы в воде, обработки полученного раствора цветореагентом в присутствии универсального буферного раствора с последующей экстракцией хлороформом и фотометрированием, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и чувствительности определения и расширения области применения способа, в качестве цветореагента используют 0,04%-ный водный раствор кислотного фиолетового антрахинонового красителя, обработку им проводят в присутствии универсального буферного раствора при pH 2,5 при соотношении пробы, буферного раствора, цветореагента и хлороформа 1 : 7 : 2 : 10 и фотометрируют при длине волны 590 нм водный слой.