СРЕДСТВО, ПРОЯВЛЯЮЩЕЕ СИСТЕМНЫЙ ГЕМОСТАТИЧЕСКИЙ ЭФФЕКТ Российский патент 2017 года по МПК A61K31/185 A61P7/04 

Предлагаемое изобретение относится к фармацевтической химии, фармакологии и медицине, может быть использовано для создания лекарственных препаратов, обладающих системным гемостатическим эффектом.

В качестве системных гемостатических средств известны разрешенные к клиническому применению препараты химической природы: транексамовая кислота, аминокапроновая кислота [Procoagulant Therapy for Bleeding Associated with Acquired Bleeding Disorders - Adult - Inpatient Clinical Practice Guideline (2015), http://www.uwhealth.org/files/uwhealth/docs/anticoagulation/Procoagulant_Guideline.pdf].

В качестве прототипа и препарата сравнения взят этамзилат (диэтиламмониевая соль 2,5-диоксибензолсульфоната), который используется в клинике как гемостатическое средство, эффект которого обусловлен проагрегантной активностью [Государственный реестр лекарственных средств / Официальное издание. - М.: Медицина, 2004. -Т.2. - С. 1749-1751].

Задачей изобретения является расширение арсенала биологически активных веществ, в том числе обладающих системным гемостатическим эффектом.

Технический результат - получение биологически активного вещества, проявляющего системный гемостатический эффект.

Сущность изобретения: Применение бис(2-аминоэтан-1-сульфоната) кальция (соединение I) формулы:

в качестве средства, проявляющего системный гемостатический эффект. Синтез соединения бис(2-аминоэтан-1-сульфоната) кальция осуществляется по методике [Magnesium taurate and other mineral taurates / Mark F. McCarty патент US 5582839; Заявл. 18.04.1995; Опубл. 10.12.1996]. Прецедентов по изучению его влияния на систему гемостаза и использованию данного соединения в качестве гемостатического средства при кровотечении, в т.ч. экспериментального, не было.

Влияние соединения I на спонтанную и индуцированную агрегацию тромбоцитов.

Исследование влияния на агрегацию тромбоцитов проводили по методу Born на агрегометре «Thromlite-1006А» (Россия) и лазерном анализаторе агрегации тромбоцитов «Биола 230LA» (ООО НПФ «БИОЛА», Россия) в условиях in vitro на крови здоровых доноров-мужчин [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.]. Средний возраст доноров составил 21±1,9 года. Определение проагрегантной активности соединения I и этамзилата начинали с концентрации 2⋅10^-3 моль/л. В качестве индукторов агрегации использовали аденозиндифосфат (АДФ) в концентрации 20 мкг/мл и коллаген в концентрации 5 мг/мл производства "Технология-Стандарт" (Россия, г. Барнаул). Способность исследуемых веществ индуцировать спонтанную агрегацию оценивали по степени усиления агрегации тромбоцитов при их предварительной инкубации в обогащенной тромбоцитами плазме до ввода индуктора.

Оценка системной гемостатической активности.

Экспериментальную оценку специфической системной гемостатической активности в условиях in vivo осуществляли на половозрелых крысах-самцах массой от 190 до 220 г. Препараты в эквимолярных дозах вводили внутрибрюшинно за 1 час до моделирования паренхиматозного кровотечения. Затем под эфирным наркозом проводили срединную лапаротомию, выводили в рану переднюю поверхность печени. С использованием специального ограничителя проводилась резекция печени (для одинакового объема, формы и размеров). Образовавшаяся рана представляла собой эллипс площадью 2,5 см² и глубиной 0,3 см. Раневую поверхность плотно осушали марлевой салфеткой до наступления окончательного гемостаза. Во время вмешательства отмечали время остановки кровотечения и объем кровопотери. Величину кровопотери определяли гравиметрическим методом путем взвешивания пропитанного кровью марлевого материала на электронных весах [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Часть первая. - М.: Гриф и К, 2012. - 944 с.]. Обработка результатов.

Результаты исследования обработаны с применением статистического пакета Statistica 10.0 (StatSoft Inc, США). Проверку на нормальность распределения фактических данных выполняли с помощью критерия Шапиро-Уилка. Для описания групп использованы медиана и межквартильный интервал. Дисперсионный анализ проводили с помощью критерия Краскела-Уоллиса. Критический уровень значимости р для статистических критериев принимали равным 0,05.

По результатам исследования влияния соединения I и этамзилата на агрегацию тромбоцитов установлено, что введение 2⋅10^-3 моль/л соединения I приводит к усилению агрегации тромбоцитов в среднем на 5,5% относительно контроля для АДФ и коллагена, что превышает показатели препарата сравнения на 45,6% и 39,2% соответственно. При изучении зависимости «доза-эффект» установлено, что в концентрации 5⋅10^-4 моль/л соединения I агрегация тромбоцитов усиливалась в среднем на 2,2% для обоих индукторов. В данной концентрации проагрегантная активность этамзилата не регистрируется (табл. 1).

По результатам исследования установлено, что при предварительной инкубации препарата сравнения отмечалась спонтанная агрегация тромбоцитов, характеризующаяся четкой зависимостью эффекта от концентрации (табл. 1). Данный эффект отсутствовал при исследовании соединения I. Таким образом, заявляемое соединение I, проявляя исключительно проагрегантную активность, в момент индуцированной агрегации оказывают более избирательное действие на активированные тромбоциты в отличие от препарата сравнения, основной эффект которого приходится на интактные тромбоциты, тем самым потенциально повышая риск тромбообразования с одной стороны и оставаясь неэффективным в момент потенциального кровотечения с другой [Schulte J., Osborne J., Benson J.W. et al. Developmental outcome of the use of etamsylate for prevention of periventricular haemorrhage in a randomised controlled trial. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 2005, Jan; 90(1): F31-5].

Результаты исследования системной гемостатической активности на модели паренхиматозного кровотечения у крыс демонстрируют эффективное снижение времени кровотечения и объема кровопотери при внутрибрюшинном введении соединения I (табл. 2).

Таким образом, соединение I проявляет более эффективное гемостатическое действие за счет проагрегантной активности по сравнению с этамзилатом.

Примечание: Представлены медиана и межквартильный интервал.

р - уровень статистической значимости различий признаков групп этамзилата и соединения I.

Примечание: Представлены медиана и межквартильный интервал.

Р₁ - уровень статистической значимости различий признаков в сравнении с контрольной группой; р₂ - уровень статистической значимости различий признаков групп, получавших этамзилат и соединение I.

Изобретение относится к фармацевтической химии, фармакологии и медицине. Предложено применение бис(2-аминоэтан-1-сульфоната) кальция в качестве средства, проявляющего системный гемостатический эффект. Технический результат: использование изобретения расширяет арсенал биологически активных веществ, в том числе обладающих системным гемостатическим эффектом; при этом соединение проявляло эффективное гемостатическое действие за счёт проагрегантной активности по сравнению с этамзилатом. 2 табл.

Применение бис(2-аминоэтан-1-сульфоната) кальция в качестве средства, проявляющего системный гемостатический эффект.