СОЛИ [3-МЕТИЛ-1-Н-ПРОПИЛ-7-(1,1-ДИОКСОТИЕТАНИЛ-3)КСАНТИНИЛ-8-ТИО]УКСУСНОЙ КИСЛОТЫ, ПРОЯВЛЯЮЩИЕ ПРОАГРЕГАНТНУЮ АКТИВНОСТЬ Российский патент 2012 года по МПК C07D473/02 A61K31/522 A61P7/02 

Изобретение относится к медицине, а именно к фармацевтической химии и фармакологии, и может быть использовано для создания новых лекарственных средств, обладающих проагрегантной активностью.

Прототипом и препаратом сравнения является этамзилат (диэтиламмониевая соль 2,5-диоксибензолсульфоната), который используется в клинике как гемостатическое средство, оказывающее ангиопротекторное и проагрегантное действие (Государственный реестр лекарственных средств / Официальное издание. - М.: Медицина, 2004. - Т.2. - С.1749-1751).

Задачей изобретения является расширение арсенала биологически активных веществ, проявляющих проагрегантную активность.

Технический результат - получение веществ, проявляющих проагрегантную активность.

Сущность изобретения: соли [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты (Ia, б) формулы

где В⁺=H₃N⁺-СН₂ , N₃H⁺ .

проявляющие проагрегантную активность.

Заявляемые соединения синтезировали следующим образом.

Соединения Ia, б синтезируют из [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты (Синтез тиетансодержащих (3-метил-1-н-пропилксантинил-8-тио)уксусных кислот / Ф.А.Халиуллин, Р.А.Губаева, Ю.В.Шабалина // Баш. хим. ж. - 2009. - Т.16, №4. - С.93-94) в 1 стадию. При взаимодействии [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты с бензиламином или циклогексиламином в ацетоне образуется бензиламмониевая или циклогексиламмониевая соль [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты соответственно.

Пример 1. Синтез соединения Ia.

К раствору 1,21 г (3 ммоль) [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты в 50 мл ацетона добавляют 0,42 г (3,9 ммоль) бензиламина. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают ацетоном, сушат. Получают 1,15 г (75%) соединения Ia. Т.пл. 239-240°С (из этанола).

Элементный анализ.

Найдено, %: С 49,5 Н 5,3 N 13,7 - C₂₁H₂₇N₅O₆S₂

Вычислено, %: С 49,6 Н 5,5 N 13,9

Спектр ЯМР ¹H (DMSO-d₆), δ, м.д.: 0,82 (3Н, т, J 7,2 Гц, СН₃), 1,46-1,58 (2Н, м, 1-CCH₂), 3,37 (3Н, с, 3-СН₃), 3,75-3,82 (4Н, м, SCH₂ и 1-СН₂), 3,97 (2Н, с, NCH₂), 4,41-4,51 (2Н, м, S(CH)₂), 4,94-5,04 (2Н, м, S(CH)₂), 5,48-5,61 (1Н, м, 7-СН), 7,37-7,40 (5Н, уш.с, С₆Н₅).

Заявляемое соединение представляет собой белое кристаллическое вещество, растворимое в воде, диметилформамиде, при нагревании в этаноле.

Пример 2. Синтез соединения Iб.

К раствору 1,21 г (3 ммоль) [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты в 50 мл ацетона добавляют 0,39 г (3,9 ммоль) циклогексиламина. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают ацетоном, сушат. Получают 1,32 г (88%) соединения Iб. Т.пл. 226-228°С (из диоксана).

Элементный анализ.

Найдено, %: С 47,9 Н 6,2 N 14,0 - C₂₀H₃₁N₅O₆S₂

Вычислено, %: С 47,6 Н 6,0 N 14,2

Спектр ЯМР ¹Н (DMSO-d₆), δ, м.д.: 0,83 (3Н, т, J 7,4 Гц, СН₃), 1,09-1,29 (6Н, м, (СН₂)₃), 1,47-1,59 (2Н, м, 1-ССН₂), 1,61-1,69 (2Н, м, CH₂) 1,79-1,88 (2Н, м, СН₂), 2,88-2,97 (1H, м, NCH), 3,38 (3Н, с, 3-СН₃), 3,72-3,83 (4Н, м, SCH₂ и 1-CH₂), 4,43-4,50 (2Н, м, S(CH)₂), 4,95-5,04 (2Н, м, S(CH)₂), 5,48-5,62 (1H, м, 7-СН).

Заявляемое соединение представляет собой белое кристаллическое вещество, растворимое в воде, диметилформамиде, при нагревании в этаноле.

Проагрегантная активность и спонтанная агрегация.

Проагрегантную активность заявляемых соединений изучали in vitro по методу Воrn (Born G.V.R. Aggregation of blood platelets by adenosine di-phosphate and its reversal / G.V.R. Born // Nature. - 1962. - Vol.194, №4832. - P.924-929) на агрегометре “Thromlite-1006А” с использованием донорской крови человека. Метод основан на регистрации изменения оптической плотности богатой тромбоцитами плазмы до и после введения индуктора агрегации тромбоцитов. В качестве индуктора агрегации использовали аденозиндифосфат (АДФ) в концентрации 20 мкг/мл, который вводили после предварительной инкубации вещества в обогащенной тромбоцитами плазме. В качестве препарата сравнения использовали «Этамзилат», производства ОАО «Биохимик», Россия.

Способность заявляемых соединений индуцировать спонтанную агрегацию оценивали по степени усиления агрегации тромбоцитов при предварительной инкубации вещества в обогащенной тромбоцитами плазме до ввода индуктора.

Пример 3. Проагрегантная активность.

Влияние соединений Ia, б на АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов оценивали по степени усиления агрегации при предварительной инкубации вещества в обогащенной тромбоцитами плазме (табл.1). По результатам исследования установлено, что введение 2·10^-3 моль/л соединения Ia в кювету агрегометра за 5 минут до АДФ приводит к усилению агрегации тромбоцитов в среднем на 9,9% относительно контроля, соединения Iб - на 8,5%, что превышает показатели препарата сравнения в 3 и 2 раза соответственно. При изучении зависимости эффекта от концентрации установлено, что в концентрациях 10^-3 моль/л соединений Ia и Iб агрегация тромбоцитов усиливалась в среднем на 7,2% и 5,1%, в концентрациях 5·10^-4 моль/л - на 3,1% и 2,3% соответственно. В последней концентрации этамзилат не проявляет активности.

Пример 4. Спонтанная агрегация.

Способность соединений Ia и Iб индуцировать спонтанную агрегацию оценивали по степени усиления агрегации при предварительной 5 минутной инкубации вещества в обогащенной тромбоцитами плазме до ввода индуктора. По результатам исследования установлено, что при предварительной инкубации препарата сравнения отмечалась спонтанная агрегация тромбоцитов, характеризующаяся четкой зависимостью эффекта от концентрации (табл.1). Данный эффект отсутствовал при исследовании соединений Ia и Iб. Таким образом, заявляемые соединения (Ia, б), проявляя исключительно проагрегантную активность, в момент индуцированной агрегации оказывают более избирательное действие на активированные тромбоциты в отличие от препарата сравнения, основной эффект которого приходится на интактные тромбоциты, тем самым потенциально повышая риск тромбообразования с одной стороны и оставаясь неэффективным в момент потенциального кровотечения с другой (Schulte J., Osborne J., Benson J.W. et al. Developmental outcome of the use of etamsylate for prevention of periventricular haemorrhage in a randomised controlled trial. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed. 2005, Jan; 90(1): F31-5).

Таким образом, представленные химические соединения (Ia, б) проявляют большую проагрегантную активность, чем этамзилат.

Таблица 1 Влияние заявляемых соединений и препарата сравнения на АДФ-индуцированную агрегацию тромбоцитов Соединение Концентрация, моль/л n Спонтанная агрегация, % к контролю Усиление АДФ-индуцированной агрегации тромбоцитов, % к контролю   2·10^-3 7 - 9,9±2,3^*,** Ia 10^-3 7 - 7,2±1,7^∗,∗∗   5·10^-4 7 - 3,1±1,4^∗   2·10^-3 7 - 8,5±2,1^∗,∗∗ Iб 10^-3 7 - 5,1±1,9^∗   5·10^-4 7 - 2,3±1,2^∗   2·10^-3 7 22,1±3,4^∗ 3,7±1,2^∗ этамзилат 10^-3 7 10,2±2,9^∗ 4,2±1,4^∗   5·10^-4 7 2,9±1,5^∗ - Примечание: ^∗ - р<0,05; ^∗∗ - отличие от препарата сравнения достоверно (р=0,005).

Изобретение относится бензиламмониевой и циклогексиламмониевой соли [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты формулы

где В⁺=H₃N⁺-СН₂ , N₃H⁺ .

Технический результат - получены и описаны новые соединения, которые могут найти применение в медицине в качестве проагрегантных средств. 3 з.п. ф-лы, 1 табл., 4 пр.

1. Соли [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты общей формулы

2. Соединение по п.1, представляющее собой бензиламмониевую соль [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты.

3. Соединение по п.1, представляющее собой циклогексиламмониевую соль [3-метил-1-н-пропил-7-(1,1-диоксотиетанил-3)ксантинил-8-тио]уксусной кислоты.

4. Соединения по п.1, проявляющие проагрегантную активность.