N'-ПИРИДИН-4-ИЛМЕТИЛЕН-2-[6-МЕТИЛ-4-(ТИЕТАН-3-ИЛОКСИ)ПИРИМИДИН-2-ИЛТИО]АЦЕТОГИДРАЗИД, ОБЛАДАЮЩИЙ АНТИАГРЕГАЦИОННОЙ И АНТИКОАГУЛЯЦИОННОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 2024 года по МПК C07D409/12 A61K31/506 A61P7/02 

Предлагаемое изобретение относится к органической химии и медицине, а именно к новому соединению – N'-пиридин-4-илметилен-2-[6- метил-4-(тиетан-3-илокси)пиримидин-2-илтио]ацетогидразиду, обладающему антиагрегационной и антикоагуляционной активностью.

Наиболее близким аналогом изобретения, проявляющим атиагрегационную и антикоагуляционную активность, является пиперидиниевая соль 2-[(1-изобутил-3-метил-7-(1,1-диоксотиетанил- 3)ксантин-8-ил)тио]уксусной кислоты [Синтез солей 2-[(1-изобутил-3- метил-7-(1,1-диоксотиетанил- 3)ксантин-8-ил)тио]уксусной кислоты и их биологическая активность / Ж. К. Маматов, Г. А. Тимирханова, Л. И. Баширова [и др.] // Медицинский вестник Башкортостана. – 2021. – Т. 16,

№ 1(91). – С. 46-52].

Задачей изобретения является расширение арсенала биологически активных веществ, обладающих антиагрегационной и антикоагуляционной активностью.

Технический результат – получение биологически активного вещества с высокой антиагрегационной и антикоагуляционной активностью.

Сущность изобретения: N'-пиридин-4-илметилен-2-[6-метил-4- (тиетан-3-илокси)пиримидин-2-илтио]ацетогидразид формулы (I):

обладающий антиагрегационной и антикоагуляционной активностью.

Указанное соединение и его свойства в литературе не описаны. Заявляемое соединение синтезируют взаимодействием гидразида 2-

[6-метил-4-(тиетан-3-илокси)пиримидин-2-илтио]уксусной кислоты с изоникотиновым альдегидом.

Эксперименты в условиях in vitro выполнены на крови здоровых доноров-мужчин в возрасте 18-24 лет. Общее количество доноров составило 16 человек. Забор крови для исследования соединений в отношении системы гемостаза проводился из кубитальной вены с использованием систем вакуумного забора крови BD Vacutainer^® (Becton Dickinson and Company, США). В качестве стабилизатора венозной крови использовался 3,8% раствор цитрата натрия в соотношении 9:1. Все тесты проводились на обогащенной и обедненной тромбоцитами плазмах. Образцы богатой тромбоцитами плазмы получали центрифугированием цитратной крови при 1000 об/мин в течение 10 минут, бестромбоцитарной плазмы - при 3000 об/мин в течение 20 минут. В работе использовалась центрифуга ОПН-3.02 (ОАО ТНК «ДАСТАН», Киргизия).

Результаты исследования обработаны с применением статистического пакета Statistica 10,0 (StatSoft Inc, США). Проверку на нормальность распределения фактических данных выполняли с помощью критерия Шапиро-Уилка. Выявлено, что вид распределения полученных данных отличается от нормального, поэтому при дальнейшей работе использовались непараметрические методы. Данные представлены в виде медианы, 25 и 75 процентилей. Дисперсионный анализ проводили с помощью критерия Краскела-Уоллиса. Критический уровень значимости р для статистических критериев принимали равным 0,05.

Пример 1.

Синтез заявляемого соединения.

0,3 г (0,001 моль) гидразида 2-[6-метил-4-(тиетан-3- илокси)пиримидин-2-илтио]уксусной кислоты растворяют в 6 мл этилового спирта, добавляют 0,134 г (0,0012 моль) изоникотинового

альдегида, кипятят в течение часа. Охлаждают, осадок отфильтровывают, промывают спиртом, сушат. Получают 0,2г (53,26%) продукта, очищают кристаллизацией из этанола. Тразл. = 175^оC.

Спектр ЯМР 1Н (500 МГц, DMSO-d6), δ, м.д.: 2,35 (с, 3H, 6-CH₃); 3,25-3,3 [м, 2Н, S(CH)₂]; 3,39-3,44 [м, 2Н, S(CH)₂]; 3,95 (Z),4,4 (E) (с, 2Н,

SCH₂СО); 5,63-5,71 (E), 5,72-5,8 (Z) (м, 1Н, OCH_тиетан); 6,45 (E), 6,47 (Z) (c,

1H, 5-H); 11,9 (E), 11,95 (Z) (уш. с, 2Н, СОNH); 7,65 (E),7,6 (Z) (д, 2Н^3,5_аром)

J 5,6 Гц; 8,05(E), 8,25(Z) (с, N=CH), 8,6 (E, Z) (д, 2Н^2,6_аром) J 5,5 Гц.

Спектр ЯМР 13С (75,5 МГц, DMSO-d6), δ, м.д.: 169,1 (E, Z) (6-СН₃); 23,66 (E, Z) (⁶C-CH₃); 33,15 (Z), 34,05 (E) (2-SCH₂CO); 169,91 (Z); 170,17 (E)

(2-SCH₂CO); 102,32 (E),102,59 (Z) (⁵CH); 167,5 (E),167,54 (Z) (⁴C); 69,63 (Z),

69,77 (E) (OC³); 35,14 (Z),35,27 (E) (SC^2,4тиет); 121,19 (E), 121,43(Z) (²C);

23,66 (Z, E) (N=C(CH₃));141,49 (Z), 141,78 (E) (N=C), 121,0 (E, Z) (СН^3,5_аром),

151,0 (E, Z) (СН^2,6_аром).

Элементный анализ.

Найдено, %: C, 51.18; H, 4.56; N, 18.65; S, 17.08– C₁₆H₁₇N₅O₂S₂

Вычислено, %: C, 51.15; H, 4.57; N, 18.60; S, 17.1.

Заявляемое соединение представляет собой светло-желтый кристаллический порошок, нерастворимый в воде, спирте, этилацетате, хлороформе, малорастворимый в диметилформамиде, диметилсульфоксиде.

Пример 2.

Антиагрегационная активность.

Исследование влияния на агрегацию тромбоцитов проводили по методу Born (Born G.G.V.Nature (London).-1962 .-V.194.) на агрегометре

«АТ-02» (НПФ «Медтех», Россия). В качестве препарата сравнения использовали ацетилсалициловую кислоту («Ацетилсалициловая кислота», Фармацевтическая фабрика Шандонг Ксинхуа Фармасьютикал Ко., ЛТД, Китай). Определение антиагрегационной активности проводили в конечной концентрации 10^-3 моль/л. В качестве индукторов агрегации

использовали аденозиндифосфат (АДФ) в концентрации 20 мкг/мл и коллаген в концентрации 5 мг/мл производства «Технология-Стандарт» (Россия).

Проводили оценку максимальной амплитуды агрегации, скорости агрегации, время достижения максимальной амплитуды и дезагрегацию в присутствии изучаемых соединений при агрегации тромбоцитов, индуцированной АДФ. Результаты исследования приведены в таблице.

Таблица

Результаты исследования на систему гемостаза в условиях in vitro

Соединение Латентный период, % к контролю Максимальная амплитуда, % к контролю Скорость агрегации, % к контролю Время достижения МА, % к контролю АПТВ,
% к контролю I +10,3
(9,1-13,5) -12,4
(10,5-14,7) -16,1
(15,3-19,2) +21,1
(18,4-22,5) +7,8
(7,2-9,1) Ацетилсалициловая кислота -2,1
(1,1–2,6) -13,7
(10,8-16,4) -10,5
(7,6-12,3) +10,5
(8,7-13,4) - Гепарин
натрия - - - +20,3
(19,7-21,4)

Примечание: *р≤0.05 - в сравнении с контролем; #р≤0.05 - в сравнении с ацетилсалициловой кислотой; р<0.05 - в сравнении с гепарином натрия. n=6.

Установлено, что соединение I проявляет антиагрегационный эффект, сравнимый по влиянию на максимальную амплитуду агрегации с ацетилсалициловой кислотой, статистически значимо уменьшает скорость агрегации тромбоцитов по сравнению с контролем.

Пример 3.

Антикоагуляционная активность.

Определение антикоагуляционной активности проводили клоттинговыми тестами на турбидиметрическом гемокоагулометре Solar

CGL 2110 (ЗАО «СОЛАР», Россия). В качестве препарата сравнения использовали «Гепарин натрия» (ОАО «Синтез», Россия). Определение антикоагуляционной активности исследуемых веществ и препарата сравнения проводили в концентрации 5×10^-4 г/мл. В работе использовались реактивы производства «Технология-Стандарт» (г. Барнаул, Россия).

Согласно данным, приведенным в таблице, соединение I демонстрирует антикоагуляционную активность, характеризующуюся увеличением показателя внутреннего пути свертывания крови – активированное парциальное тромбопластиновое время (АПТВ). Гепарин натрия пролонгирует АПТВ на 20,3%, а медиана удлинения АПТВ для соединения I составляет 7,8%.

Изобретение относится к органической химии и медицине, а именно к N'-пиридин-4-илметилен-2-[6-метил-4-(тиетан-3-илокси)пиримидин-2-илтио]ацетогидразиду формулы . Технический результат заключается в получении биологически активного вещества с высокой антиагрегационной и антикоагуляционной активностью. 2 з.п. ф-лы, 1 табл., 3 пр.

1. N'-пиридин-4-илметилен-2-[6-метил-4-(тиетан-3-илокси)пиримидин-2-илтио]ацетогидразид формулы

.

2. Соединение по п. 1, обладающее антиагрегационной активностью.

3. Соединение по п. 1, обладающее антикоагуляционной активностью.