КОМБИНАЦИЯ ФУЛЬВОВОЙ КИСЛОТЫ И АНТИБИОТИКА ДЛЯ ПОДАВЛЕНИЯ РОСТА БАКТЕРИЙ, РЕЗИСТЕНТНЫХ К МНОЖЕСТВУ ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ, ИЛИ ЛЕЧЕНИЯ ИНФЕКЦИЙ, ВЫЗВАННЫХ ИМИ Российский патент 2018 года по МПК A61K31/352 A61K45/06 A61P31/04 

Предпосылки создания настоящего изобретения

В настоящем изобретении предлагается фульвовая кислота в качестве активного ингредиента для применения при лечении инфекций, вызванных бактериями, резистентными к множеству лекарственных средств, или подавления их роста, прежде всего бактерий NDM-1, продуцирующих карбапенемазу, или резистентных бактерий, продуцирующих β-лактамазу расширенного спектра действия (ESBL). Кроме того, в настоящем изобретении предлагается фульвовая кислота в комбинации с одним или более антибиотиками, которые относятся к классу карбапенемов или полимиксиновых антибиотиков, в качестве активного ингредиента для применения при лечении инфекций, вызванных бактериями, резистентными к множеству лекарственных средств, прежде всего бактериями NDM-1, продуцирующими карбапенемазу.

Фульвовая кислота представляет собой фракцию из гуминовых веществ, которые образуются в процессе разложения растительных и животных остатков в окружающей среде (MacCarthy и др. (1985)), которая растворяется в воде при любом значении pH. Указанные вещества также обычно характеризуются меньшим размером молекул и меньшей молекулярной массой, и их препараты характеризуются меньшей интенсивностью окрашивания по сравнению с препаратами гуминовых кислот, которые также присутствуют в гуминовых веществах.

Обычно фульвовые кислоты получают из битуминозного угля в ходе контролируемого "мокрого" сжигания (Bergh и др. (1997)). Указанные фульвовые кислоты также называют оксифульвовыми кислотами. Один из таких способов получения фульвовых кислот из угля описан в патенте US 4912256.

Указанные фульвовые кислоты использовали для лечения воспалений, угрей, экземы, а также бактериальных, грибковых и вирусных инфекций, описанных в заявке WO 00/19999. Кроме того, в патентах US 4999202 и US 5204368 описаны композиции, содержащие фульвовую кислоту, ее соль или производное, характеризующиеся бактериостатическими или бактерицидными свойствами, которые пригодны для использования в качестве дезинфицирующих средств.

Однако препараты фульвовых кислот, полученные при окислении угля, содержат тяжелые металлы, включая алюминий, ртуть, кадмий, хром и свинец в высоких концентрациях, которые, как известно, являются вредными для человека, и следует исключить их присутствие в фармацевтических составах. В заявке WO 2007/125492 описана композиция, содержащая фульвовую кислоту, полученная из углеводного сырья методом мокрого сжигания, и способ получения указанной композиции. В результате применения углеводного сырья в качестве исходного материала препараты фульвовой кислоты, полученные указанным способом, характеризуются низким содержанием указанных вредных элементов. Указанная композиция считается пригодной для применения в фармацевтике.

Краткое описание сущности изобретения

В одном объекте настоящего изобретения предлагается фульвовая кислота или ее соль, сложный эфир или производное в качестве активного ингредиента для применения при лечении инфекций, вызванных бактериями, резистентными к множеству лекарственных средств, или подавления их роста.

Прежде всего бактериями, резистентными к множеству лекарственных средств, являются NDM-1 положительные бактерии, продуцирующие карбапенемазу, или резистентные бактерии, продуцирующие β-лактамазу расширенного спектра действия (ESBL). Бактериями, резистентными к множеству лекарственных средств, являются, например, грамотрицательные бактерии, включая, но не ограничиваясь только ими, Klebsiella pneumoniae или Escherichia coli.

В другом объекте настоящего изобретения предлагается комбинация, содержащая фульвовую кислоту или ее соль, сложный эфир или производное в качестве активного ингредиента, с одним или более антибиотиками, которые относятся к классу карбапенемов или полимиксиновых антибиотиков, для применения при лечении инфекций, вызванных бактериями, резистентными к множеству лекарственных средств.

Прежде всего бактериями, резистентными к множеству лекарственных средств, являются NDM-1 положительные бактерии, продуцирующие карбапенемазу. Бактериями, резистентными к множеству лекарственных средств, являются, например, грам-отрицательные бактерии, включая, но не ограничиваясь только ими, Klebsiella pneumoniae.

Предпочтительно карбапенем выбирают из группы, включающей: меропенем, эртапенем, дорипенем, панипенем/бетамипрон и биапенем.

Предпочтительно полимиксиновый антибиотик выбирают из группы, включающей: сульфат колистина и колистиметат натрия (колистин метансульфонат натрия, колистин сульфометат натрия).

Препараты фульвовой кислоты или ее соли, сложного эфира или производного могут характеризоваться любым значением pH от кислотного до щелочного, но обычно характеризуются значением pH от кислотного до нейтрального. Фульвовая кислота может существовать в виде буферного раствора с пригодным значением pH. Предпочтительно фульвовая кислота существует или в форме кислоты, или в форме соли, например, соли калия.

Предпочтительной фульвовой кислотой является фульвовая кислота, полученная из углеводного сырья (CHD-FA), как описано в заявке WO 2007/125492. Фульвовая кислота, описанная в указанной заявке, характеризуется молекулярной массой не более 20000 Да и низким содержанием таких элементов, как алюминий, ртуть, кадмий, хром и свинец, и является безопасной для применения в фармацевтике для лечения человека и животных. Предпочтительно содержание указанных элементов не превышает 20 част./млн. Фульвовую кислоту можно получать из углевода, такого как сахарид. Предпочтительным сахаридом является сахароза, глюкоза или фруктоза.

Фульвовую кислоту или ее соль, сложный эфир или производное или комбинацию можно переработать в лекарственную форму, прежде всего в такую, как жидкая лекарственная форма, таблетка, капсула, крем, гель или другие лекарственные формы, известные специалисту в данной области техники.

В еще одном объекте настоящего изобретения предлагается применение фульвовой кислоты или ее соли, сложного эфира или производного или комбинации по изобретению для получения фармацевтической композиции, предназначенной для применения в способе лечения инфекций, вызванных бактериями, резистентными к множеству лекарственных средств, или подавления их роста у субъекта, при этом способ заключается в том, что субъекту вводят фульвовую кислоту или ее соль, сложный эфир или производное или комбинацию.

В другом объекте настоящего изобретения предлагается способ лечения инфекций, вызванных бактериями, резистентными к множеству лекарственных средств, их уничтожения или подавления их роста, который заключается в применении фульвовой кислоты или ее соли, сложного эфира или производного, или комбинации по изобретению.

Прежде всего способ лечения инфекций, вызванных бактериями, резистентными к множеству лекарственных средств, их уничтожения или подавления их роста у субъекта, заключается в том, что субъекту вводят эффективное количество фульвовой кислоты или ее соли, сложного эфира или производного или комбинации по изобретению.

Субъектом может быть человек или животное.

Прежде всего бактериями, резистентными к множеству лекарственных средств, являются NDM-1 положительные бактерии, продуцирующие карбапенемазу, или резистентные бактерии, продуцирующие β-лактамазу расширенного спектра действия (ESBL). Бактериями, резистентными к множеству лекарственных средств, являются, например, грамотрицательные бактерии, включая, но не ограничиваясь только ими, Klebsiella pneumoniae или Escherichia coli.

Способ введения может включать пероральные, внутривенные, местные или любые другие пригодные для введения формы.

Краткое описание фигур

На фиг.1 представлены усредненные показатели тяжести поражения тканей бедра после инфицирования бактериями К. pneumoniae (АТСС ВАА2146, NDM-1*) для всех лечебных групп.

На фиг.2 представлена скеттерограмма тяжести поражения тканей бедра после инфицирования бактериями К pneumoniae (АТСС ВАА2146, NDM-1*) для всех лечебных групп.

Описание предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения

В настоящем изобретении описана фульвовая кислота в качестве активного ингредиента для применения при лечении инфекций, вызванных бактериями, резистентными к множеству лекарственных средств, прежде всего "бактериями NDM-1", продуцирующими карбапенемазу, или резистентными бактериями, продуцирующими β-лактамазу расширенного спектра действия (ESBL). Кроме того, в настоящем изобретении описана фульвовая кислота в комбинации с одним или более антибиотиками, которые относятся к классу карбапенемов или полимиксиновых антибиотиков, в качестве активного ингредиента для применения при лечении инфекций, вызванных бактериями, резистентными к множеству лекарственных средств, прежде всего бактериями NDM-1, продуцирующими карбапенемазу.

Металло-бета-лактамаза-1 Нью-Дели (или NDM-1) впервые была обнаружена в изоляте Klebsiella pneumoniae в 2008 г. Однако позднее этот фермент был обнаружен в бактериях во всем мире, включая Индию, Пакистан, Великобританию, Северную Америку, Японию и Бразилию. В основном указанный фермент продуцируется грамотрицательными бактериями, такими как Escherichia coli, Acinetobacter и Klebsiella, но ген NDM-1 может распространяться за счет горизонтального переноса генов между различными штаммами бактерий, тем самым повышая распространение резистентных инфекций. Грамотрицательные бактерии прежде всего обмениваются фрагментами ДНК случайным образом и таким образом фактор резистентности, например, такой как NDM-1, может широко распространяться в популяции грамотрицательных бактерий.

β-Лактамазы расширенного спектра действия представляют собой β-лактамазы, которые гидролизуют расширенный спектр цефалоспоринов, например, такие как цефотаксим, цефтриаксон, цефтазидим и окси-иминомонобактам-азтреонам, при этом все они содержат в качестве боковой цепи окси-иминогруппу.

NDM-1 представляет собой фермент, который придает бактериям резистентность к действию широкого круга бета-лактамных антибиотиков, например, антибиотиков, относящихся к семейству карбапенемов. Примеры карбапенемов включают меропенем, эртапенем, дорипенем, панипенем/бетамипрон и биапенем. К сожалению, указанные антибиотики в настоящее время являются основными лекарственными средствами, которые применяют для лечения резистентных к антибиотикам бактериальных инфекций, и таким образом указанный ген резистентности вызывает глубокое беспокойство. Белок NDM-1 относится к обширному семейству бета-лактамазных ферментов, а именно к карбапенемазам, при этом инфекции, вызываемые бактериями, которые продуцируют карбапенемазы, с трудом поддаются лечению в связи с тем, что практически не существует новых соединений, которые могут подавлять указанные бактерии, резистентные к множеству лекарственных средств. Более того, с целью исключения развития генерализованной резистентности, а также в связи с тем, что карбапенемы обычно характеризуются низкой пероральной биодоступностью, их вводят избирательно внутривенно (в/в) в условиях стационара.

В качестве альтернативы карбапенемам, успешно используемым против бактерий, резистентных к множеству лекарственных средств и продуцирующих карбапенемазу, можно использовать такой антибиотик, как колистин. Колистин (или полимиксин Е) представляет собой антибиотик, продуцируемый некоторыми штаммами Bacillus polymyxa var. colistinus. Указанный антибиотик используют также в качестве крайней меры лечения инфекций, вызываемых бактериями, резистентными к множеству лекарственных средств, такими как Klebsiella, Pseudomonas aeruginosa и Acinetobacter, но, к сожалению, идентифицированы штаммы бактерий, резистентные также и к колистину. Кроме того, колистин не всасывается в желудочно-кишечном тракте, и поэтому его следует вводить внутривенно. Более того, его введение сопровождается осложнениями.

Таким образом, существует насущная необходимость в альтернативном эффективном агенте для перорального применения.

Использованное в данном контексте сокращение CHD-FA обозначает фульвовую кислоту, описанную в настоящем изобретении и полученную способом, описанным в заявке WO 2007/125492.

В первом исследовании, описанном в данном контексте, была проведена оценка антибактериальной эффективности фульвовой кислоты в отношении ряда штаммов бактерий, резистентных к множеству лекарственных средств.

Во втором исследовании была проведена оценка антибактериальной эффективности фульвовой кислоты в комбинации с антибиотиками, относящимися к семейству карбапенемов, в отношении штамма бактерий NDM-1, резистентного к множеству лекарственных средств.

Следует понимать, что следующие примеры приводятся только для иллюстрации настоящего изобретения и никоим образом не ограничивают его объем.

Пример 1

Антибактериальная активность фульвовой кислоты в отношении бактерий, резистентных к множеству лекарственных средств

Краткое содержание

Оценку эффективности проводили in vitro, определяя антибактериальную активность CHD-FA в отношении энтеробактерий (Enterobactenaceae), резистентных к множеству лекарственных средств. После получения активный ингредиент (CHD-FA) хранили в темноте при комнатной температуре.

Методы

а) Штаммы

Тесты на восприимчивость к лекарственным средствам проводили с использованием ряда штаммов энтеробактерий, резистентных к множеству лекарственных средств. Подробная информация об использованных штаммах приводится в таблице 1.

б) Размораживание и рост штаммов микроорганизмов

Все штаммы после длительного хранения при -80°C размораживали и культивировани в планшетах на агаре Cled (цистин-лактоза-электролит-недостаточный). Затем планшеты инкубировали на воздухе при 35-37°C в течение 24 ч. Если после визуальной оценки колонии соответствовали требованиям чистоты и характеристикам колоний данного штамма микроорганизма, то изоляты признавались пригодными для использования.

в) Получение инокулята

Инокулят (посевную культуру) каждого штамма получали следующим образом: собирали клетки из 5-10 индивидуальных колоний, сформировавшихся в культуральных планшетах, а затем клетки суспендировали в 3 мл стерильного физиологического раствора. Инокулят ресуспендировали за счет интенсивного перемешивания в смесителе Vortex в течение 15 с. Затем мутность препаратов доводили до стандартного значения №0,5 по тесту McFarland (1-5×10⁶ КОЕ/мл). Затем инокулят разбавляли бульоном Мюллера-Хинтона, который используют для определения минимальной ингибирующей концентрации (МИК), при этом в каждой лунке планшета конечная концентрация инокулята составляла 2-8×10⁵ КОЕ/мл.

г) Условия определения МИК

МИК определяли в бульоне Мюллера-Хинтона, как описано в соответствующих рекомендациях CLSI (Институт клинических и лабораторных стандартов).

Стадия 1

Добавление исследуемого препарата

а. В качестве исходного раствора использовали 4% раствор. Затем указанный раствор разбавляли соответствующей средой (бульон Мюллера-Хинтона), при этом получали 2% раствор, т.е. раствор с максимальной начальной концентрацией, используемой в испытаниях. Кроме того, для сравнения результатов теста использовали контроль для каждого штамма. Диапазон конечных концентраций для контроля (ципрофлоксацин) составлял 0,03-16 мг/мл. В каждую лунку столбцов 2-12 вносили по 100 мкл бульона Мюллера-Хинтона. В каждую лунку столбца 1 вносили по 200 мкл раствора исследуемого соединения (4%).

б. Из лунок столбца 1 многоканальным дозатором (коэффициент вариации ±2%) переносили по 100 мкл раствора в лунки столбца 2, таким образом разбавляя раствор в 2 раза. Затем раствор из лунок столбца 2 переносили дозатором по 100 мкл в лунки столбца 3 и т.д. вплоть до столбца 10, из которого последние 100 мкл отбрасывали. Ряд 11 использовали в качестве положительного контроля (лекарственное средство или исследуемые соединения не добавляли, но добавляли бактериальные штаммы), ряд 12 использовали в качестве отрицательного контроля (лекарственное средство или исследуемые соединения не добавляли, а также микроорганизмы не добавляли).

Стадия 2

Добавление бактериальных штаммов

В соответствующие лунки вносили по 100 мкл суспензии соответствующего инокулята, разведенного в бульоне Мюллера-Хинтона. В результате конечный объем в лунке составлял 200 мкл (100 мкл разбавленного соединения или разбавителей +100 мкл инокулята или только бульона).

Стадия 3

Инкубация планшетов

Все планшеты инкубировали в темноте на воздухе при 35-37°C в течение 18-24 ч.

Стадия 4

Анализ планшетов

Визуальный анализ или (если возможно) спектрофотометрический анализ (450 нм) планшетов осуществляли через 20 ч или 72 ч после внесения инокулята. В качестве конечных параметров определяли степень ингибирования в %: 50%>, 80%> и 100%> (или конечные параметры оценивали после визуального анализа согласно рекомендациям CLSI).

Результаты

Значения МИК, полученные по результатам визуального контроля Гингибирование 50%, 80% и 100%)

Только соединение CHD-FA проявляло эффективность в отношении штаммов К. Pneumoniae, положительных в отношении NDM-1-, КРС- и ESBL, а также Е. coli, резистентных к множеству лекарственных средств, при этом, как следует из данных, представленных в таблице 2, МИК для соединения CHD-FA, при которой наблюдается 100% ингибирование, составляет только 0,06-0,12%.

Указанное соединение проявляет эффективность по сравнению с ципрофлоксацином, который не эффективен ни в отношении NDM-1-, ни в отношении КРС-положительных штаммов К. Pneumoniae, и МИК которого составляет более 16 мкг/мл.

Только соединение CHD-FA проявляло эффективность в отношении ESBL-положительных штаммов К. Pneumoniae и Е. Coli на уровне ципрофлоксацина.

Выводы

Соединение CHD-FA характеризуется высокой эффективностью в отношении грамотрицательных бактерий, резистентных к множеству лекарственных средств, включая NDM-1 положительные штаммы, при этом 100% ингибирование всех микроорганизмов наблюдается при концентрации CHD-FA ≤0,12%.

Пример 2

Эффективность соединения CHD-FA в отдельности или в комбинации с карбапенемовым антибиотиком в модели инфицирования бедра мыши бактериями К. Pneumoniae

Методы

а) Нормативные документы

Все эксперименты на животных проводили в соответствии с действующим законодательством Великобритании (UK Home Office Licence), с разрешения местной комиссии по этике. Все эксперименты проводились техническим персоналом, который прошел курс обучения (часть 1, 2 и 3) при отделе персональных разрешений на проведение работ местного представительства (Home Office), и имеет действующее персональное разрешение на проведение соответствующих работ.

б) Мыши

Мышей, не инфицированных специфической патогенной микрофлорой, использованных в данном исследовании, получали на фирме Charles River UK. В работе использовали линию мышей CD1, которая представляет собой хорошо охарактеризованную линию беспородных мышей. В центр Euprotec (Ltd.) поступали мыши с массой тела 16-18 г и проходили акклиматизацию в течение 7 сут (требуемая масса тела животных перед началом экспериментов должна составлять 22-25 г).

в) Условия содержания животных

Мышей содержали в стерильных индивидуальных вентилируемых клетках для мышей, при этом все время воздух подвергали стерилизации с использованием фильтров НЕРА (http://www.tecniplast.it/ assets/panorama/Panorama30.pdf)- Мыши имели свободный доступ к воде и корму (стерильные), дно клетки было покрыто стерильной осиновой стружкой (замену осуществляли через каждые 3-4 сут или по мере необходимости). В помещении поддерживали температуру 22°C±1°C, относительная влажность воздуха составляла 50-60%, максимальный уровень фонового шума составлял 56 дБ. Мышей содержали в 12-часовом циклическом режиме (12 ч свет/12 ч темнота с фазами "рассвет"/"закат".

г) Инокулят Klebsiella pneumoniae

Во всех экспериментах использовали штамм Klebsiella pneumoniae АТСС ВАА2146 NDM-1⁺ (bla_ndm).

План исследования

а) Размер экспериментальной группы

В указанных исследованиях каждая экспериментальная лечебная группа включала 6 мышей.

б) Подавление иммунного ответа

У мышей вызывали временную нейтропению за счет подавления иммунного ответа после введения циклофосфамина в дозе 150 мг/кг за 4 сут до инфицирования и 100 мг/кг за 1 сут до инфицирования в виде внутрибрюшинной инъекции. Указанный режим подавления иммунного ответа приводит к развитию нейтропении через 24 ч после введения указанного соединения, которая наблюдается в течение всего эксперимента.

в) Инфицирование

Через 24 ч после введения второй инъекции соединения для подавления иммунного ответа мышей инфицировали, вводя внутримышечно в обе боковые мышцы бедра суспензию К. pneumoniae (2,5×10 КОЕ/бедро мыши).

г) Антибактериальная терапия

Антибактериальную терапию начинали через 2 ч после инфицирования (см. таблицу 3), и вводили исследуемое соединение два раза в сутки (интервал между введениями составлял ровно 12 ч). Значение pH аликвоты 4%-ного исходного раствора CHD-FA доводили до 5, используя 10М раствор гидроксида натрия, затем ее разбавляли 0,9% раствором хлорида натрия в соотношении 1:2 или 1:8, при этом соответственно получали 2% (200 мг/кг) и 0,5% (50 мг/кг) раствор CHD-FA, предназначенный для введения.

Колистин разбавляли в 0,9% растворе хлорида натрия, при этом получали раствор для введения с концентрацией 4 мг/мл (40 мг/кг). Меропенем разбавляли в 0,9% растворе хлорида натрия, при этом получали раствор для введения с концентрацией 3 мг/мл (30 мг/кг). В качестве носителя использовали 0,9% раствор хлорида натрия. После разбавления суспензии перемешивали на мешалке Vortex до полного растворения.

Соединение CHD-FA вводили через желудочный зонд, а колистин, меропенем и носитель вводили внутривенно (в/в) в дозе 10 мл/кг (каждой мыши вводили ~ 0,25 мл/доза).

д) Конечные параметры

Через 24 ч после инфицирования оценивали клиническое состояние всех животных, а затем их умерщвляли гуманным способом. Массу тела животного определяли до отделения обоих бедер, которые затем взвешивали каждое в отдельности. Образцы индивидуальных тканей бедра гомогенизировали в охлажденном на ледяной бане стерильном фосфатно-солевом буферном растворе. Затем гомогенизаты тканей бедра культивировали на агаре Cled (ЦЛЭН) и инкубировали при 37°C в течение 24 ч, а затем ежедневно подсчитывали число колоний.

е) Статистический анализ

Количественную оценку тяжести поражении тканей бедра для соединения CHD-FA проводили с использованием критерия Крускала-Уоллиса, скорректированного для множественного сравнения, и сравнивали с данными, полученными при лечении колистином, меропенемом и носителем в режиме монотерапии, а также комбинациями колистин/CHD-FA и меропенем/CHD-FA.

Результаты

а) Эффективность in vivo

В контрольной группе (тяжелая форма инфекции, животным вводили носитель и мышей инфицировали бактериями в количестве ~11 log 10 КОЕ/г) через 24 ч успешно формировалась модель тяжелой формы инфекции бедра бактериями К. pneumoniae. У мышей, которым вводили носитель, наблюдалось инфицирование средней тяжести. Лечение с использованием всех исследуемых соединений характеризовалось хорошей переносимостью в ходе испытаний, при этом отрицательные эффекты не наблюдались.

Данные количественной оценки тяжести поражения тканей бедра указывают на то, что во всех лечебных группах наблюдается статистически значимое снижение тяжести поражения тканей бедра по сравнению с мышами, которым вводили только носитель (снижение 1,48-3,3 log10, P<0,0001 для всех лечебных групп, за исключением группы животных, которым вводили колистин (40 мг/кг)+CHD-FA (2%), Р=0,0102 (программное обеспечение StatsDirect, анализ с использованием критерия Крускала-Уоллиса, все попарные сравнения (критерий Коновера-Инмана)).

Следует отметить, что лечение соединением CHD-FA в режиме монотерапии при введении 2% и 0,5% растворов (200 и 50 мг/кг) наблюдалась равная эффективность снижения тяжести поражения по сравнению с колистином (40 мг/кг) или меропенемом (30 мг/кг).

Наибольшее снижение тяжести поражения (инфицирования) тканей бедра наблюдалось в лечебной группе, где проводили комбинированное лечение: меропенем (30 мг/кг)+CHD-FA (0,5%), в/в+п/о 2 раза в сут (снижение 3,3 log10, Р<0,0001).

Снижение тяжести поражения после лечения CHD-FA (0,5% и 2% перорально 2 раза в сут) статистически не отличалось от снижения при лечении колистином (40 мг/кг, внутривенно 2 раза в сут) или меропенемом (30 мг/кг, внутривенно 2 раза в сут) в режиме монотерапии. Однако полученные данные свидетельствуют о том, что значительное повышение эффективности наблюдается в случае введения CHD-FA (5%) в комбинации с меропенемом, а не при введении в отдельности (P=0,0008).

Ниже представлена эффективность исследуемых соединений по сравнению с носителем (контрольная группа) в порядке убывания:

1. меропенем (30 мг/кг)+CHD-FA (0,5%), в/в+п/о, 2 раза в сут (снижение 3,3 log10, Р<0,0001),

2. CHD-FA (2%), п/о 2, раза в сут (снижение 2,31 log10, Р<0,0001),

3. CHD-FA (0,5%), п/о, 2 раза в сут (снижение 2,28 log10, Р<0,0001),

4. колистин (40 мг/кг) в/в, 2 раза в сут (снижение 2,27 log10, Р<0,0001),

5. колистин (40 мг/кг)+CHD-FA (0,5%), в/в+п/о, 2 раза в сут (снижение 2,21 log10, Р<0,0001),

6. меропенем (30 мг/кг)+CHD-FA (2%), в/в+п/о, 2 раза в сут (снижение 2,20 log10, Р<0,0001),

7. колистин (40 мг/кг)+CHD-FA (2%), в/в+п/о, 2 раза в сут (снижение 2,20 log10, Р<0,0102) и

8. меропенем (30 мг/кг), в/в, 2 раза в сут (снижение 1,74 log10, P<0,0001). В таблице 4 представлены данные по инфицированию тканей бедра леченных и нелеченных мышей.

На фиг. 1 представлены усредненные показатели тяжести поражения тканей бедра после инфицирования бактериями К. pneumoniae (АТСС ВАА2146, NDM-1*) для всех лечебных групп. На фиг. 2 представлена скеттерограмма тяжести поражения тканей бедра после инфицирования бактериями К. pneumoniae (АТСС ВАА2146, NDM-1*) для всех лечебных групп. Средняя геометрическая величина тяжести поражения для каждой лечебной группы представлена горизонтальной чертой. В верхней части скеттерограммы над каждым столбцом приведено снижение (log 10) тяжести поражения в этой лечебной группе по сравнению с контрольной группой (носитель).

Выводы

Цель исследования заключалась в оценке эффективности введения соединения CHD-FA в режиме монотерапии или в режиме комбинированной терапии в комбинации с колистином или меропенемом в модели инфекции тканей бедра мышей с нейтропенией, при этом инфекцию вызывали при введении штамма Klebsiella pneumoniae, резистентного к множеству лекарственных средств (бактерии Нью-Дели или NDM-1, положительные в отношении металло-бета-лактамазы-1). Эффективность определяли по тяжести поражения тканей бедра после завершения эксперимента. Лечение начинали через 2 ч после инфицирования, при этом исследуемые соединения вводили два раза в сутки строго через 12 ч. Через 24 ч после инфицирования животных умерщвляли.

В группе животных, которым вводили только носитель, через 24 ч у мышей наблюдается тяжелая форма инфекционного поражения тканей бедра, вызванная Klebsiella pneumoniae. Однако несмотря на такой высокий уровень инфицирования, ни одна из мышей не погибла до конца исследования, при этом наблюдались признаки инфекционного поражения средней тяжести (локальная болезненная чувствительность).

Данные количественной оценки тяжести поражения тканей бедра указывают на то, что во всех лечебных группах наблюдается статистически значимое снижение тяжести поражения тканей бедра по сравнению с мышами, которым вводили только носитель.

Важно отметить, что лечение соединением CHD-FA в режиме монотерапии при введении 2% и 0,5% (0,2 и 0,05 мг/кг) растворов в отношении снижения тяжести поражения тканей характеризуется такой же эффективностью, как лечение колистином (40 мг/кг) или меропенемом (30 мг/кг).

Наибольшее снижение тяжести поражения тканей бедра наблюдалось в лечебной группе, где проводили лечение с использованием комбинации меропенема (30 мг/кг)+CHD-FA (0,5%), при этом следует обратить внимание на тот факт, что соединение CHD-FA проявляет эффективность не только при лечении в режиме монотерапии, но также повышает эффективность лечения с использованием современных лекарственных средств, при этом наблюдается синергетический эффект.

Заключение

Лечение соединением CHD-FA в режиме монотерапии или в режиме комбинированной терапии в комбинации с колистином или меропенемом характеризуется высокой антибактериальной эффективностью в отношении Klebsiella pneumoniae, резистентной к множеству лекарственных средств, в модели локального инфекционного поражения бедра. Комбинированная терапия с использованием меропенема (30 мг/кг)+CHD-FA (50 мг/кг) характеризуется более высокой эффективностью по сравнению с лечением в режиме монотерапии, при введении аналогичной дозы CHD-FA, меропенема или колистина каждого в отдельности.

Литература

1. Bergh J.J., Cronje I. J., Dekker J., Dekker T.G., Gerritsma L.M. и Mienie L.J. Non-catalytic oxidation of water-slurried coal with oxygen: identification of fulvic acids and acute toxicity. Fuel 76, 149-154 (1997).

2. MacCarthy P., Clapp C.E., Malcolm R.L., Bioom P.R. Hurnic substances in soil and crop sciences: selected readings. Материалы симпозиума International Humic Substances Society, Soil Science Society of America, American Society of Agronomy and Crop Science Society of America, Чикаго, Иллинойс, 2 декабря 1985 г.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к комбинации для лечения инфекций, вызванных грамотрицательными бактериями, положительными в отношении NDM-1, продуцирующими карбапенемазу. Комбинация включает фульвовую кислоту или ее соль в качестве активного ингредиента и меропенем. Изобретение обеспечивает повышение эффективности лечения, при этом наблюдается синергетический эффект фульвовой кислоты и меропенема. 5 з.п. ф-лы, 2 ил., 5 табл., 2 пр.

1. Комбинация для лечения инфекций, вызванных грамотрицательными бактериями, положительными в отношении NDM-1, продуцирующими карбапенемазу, включающая фульвовую кислоту или ее соль в качестве активного ингредиента и меропенем.

2. Комбинация по п. 1, где грамотрицательными бактериями являются Klebsiella pneumoniae или Escherichia coli.

3. Комбинация по п. 1, где фульвовая кислота или ее соль характеризуется pH в диапазоне от кислотного до нейтрального.

4. Комбинация по п. 1, где фульвовой кислотой является фульвовая кислота, полученная из углеводного сырья (CHD-FA).

5. Комбинация по п. 1, переработанная в лекарственную форму.

6. Комбинация по п. 5, где лекарственной формой является раствор, таблетка, капсула, крем, гель или другие лекарственные формы, известные специалисту в данной области техники.