Способ инактивации возбудителя кампилобактериоза крупного рогатого скота Российский патент 2018 года по МПК A61K39/02 C12N1/02 C12N1/20 

Изобретение относится к биотехнологии, иммунологии, микробиологии и ветеринарии и может быть использовано в биотехнологии при производстве инактивированной вакцины против кампилобактериоза КРС.

Известен способ инактивации возбудителя Campylobacter fetus subspecies fetus с использованием формалина в качестве инактиватора в концентрации 0,5% к биомассе возбудителя [«Современные проблемы профилактики и терапии заразных болезней сельскохозяйственных животных и птиц», Огородникова, Гришина, Горовенко, Киселева, Иванова. Опыт сравнительного изучения иммуногенности противокампилобактериозных вакцин на морских свинках, Ленинград, 1984, МСХ СССР ЛВИ, сборник научных трудов, стр. 58-59].

Недостатком известного инактиватора (формалина) является токсические свойства, провоцирующие аллергические и воспалительные реакции в организме животного. Кроме того, требует защиты дыхательных путей и кожных покровов специалиста при работе с ним.

Техническим результатом изобретения является использование инактиватора тeотропина (http://www.findpatent.ru/patent/212/2123337.html) в биотехнологии при производстве инактивированной вакцины против кампилобактериоза КРС.

Технический результат достигается тем, что в качестве инактивирующего вещества для Campylobacter fetus subspecies fetus использовался тиотропин при следующем соотношении компонентов, масс. %:

суспензия клеток кампилобактера серогруппы fetus subspecies fetus в культуральной среде с концентрацией 2×10¹⁰ КОЕ*/см³ (культура возбудителя Campylobacter fetus subspecies fetus) - 0,5%;

0,9%-ный раствор NaCl - 99,2%;

теотропин (химическое название вещества – тетраметилендиэтилентетраамин, эмпирическая формула вещества – C₈H₁₆N₄ ) - 0,3%.

Технологический процесс включает отдельные стадии выделения и накопления производственного штамма Campylobacter fetus subspecies fetus и соединения накопленной культуры кампилобактера с инактивирующим его агентом в оптимальном соотношении.

Производственный штамм Campylobacter fetus sbsp. fetus (суспензия клеток с концентрацией 2×10¹⁰ КОЕ^*/см³. Концентрацию микробных клеток определяют при помощи стандарта мутности ГИСК им. Л.А. Тарасевича), выделяют, поддерживают и культивируют на среде ПЖА в микроаэробных условиях в термостате при 37°С в течение 2 суток. После проверяют принадлежность возбудителя по его культурально-морфологическим и биохимическим свойствам.

Накопление колоний возбудителя осуществляют путем пересева возбудителя с ПЖА на фабричную питательную среду Himedia для поддержки и культивирования возбудителей кампилобактериоза и культивированием возбудителя на указанной среде в микроаэробных условиях в термостате при 37°С в течение 2 суток. Смыв колоний возбудителя со среды проводится стерильным 0,9%-ным раствором натрия хлорида в стерильные флаконы по 100 мл.

Опыт по инактивации проводится с теотропином (0,3 гр. сухого вещества на 100 мл биомассы), в качестве контроля берется формалин (0,5 мл 100%-ного раствора). Инактивация проходит в бескислородных условиях при 37°С в течение 2 суток.

Контроль инактивации осуществляют путем посева экспериментальной массы на ПЖА, а также микроскопией инактивированных клеток (табл. 1).

Установлено, что препарат тиотропин обеспечивает 100%-ную инактивацию штамма Campylobacter fetus subspecies fetus в концентрации от 0,3% по отношению к биомассе возбудителя (табл. 1).

Предложенный способ инактивации штамма кампилобактера крупного рогатого скота Campylobacter fetus subspecies fetus путем соединения с тeотропином показателен и эффективен, практически более прост, безопасен и целесообразен, чем инактивация соединениями формалина.

Для сравнения - для инактивации возбудителя формалином необходимо внести не менее 0,5% компонента относительно биомассы возбудителя Campylobacter fetus subspecies fetus, для 100%-ной инактивации штамма тиотропином хватает 0,3%-ной концентрации. Кроме того, стоит отметить, что теотропин не вызывает у человека раздражения дыхательных путей при переводе сухого его вещества в жидкое агрегатное состояние (не выделяет токсичных паров).

Изобретение может быть использовано в биотехнологии при производстве инактивированной вакцины против кампилобактериоза крупного рогатого скота. Предложенный способ инактивации может применяться в деятельности лабораторий и в научной сфере.

Изобретение относится к биотехнологии, иммунологии, микробиологии и ветеринарии и может быть использовано в биотехнологии при производстве инактивированной вакцины против кампилобактериоза КРС. Способ включает накопление колоний возбудителя кампилобактериоза КРС Campylobacter fetus subspecies fetus путем культивирования на питательной среде, смыв колоний возбудителя кампилобактериоза КРС Campylobacter fetus subspecies fetus 0,9%-ным раствором NaCl, инактивацию накопленной биомассы возбудителя кампилобактериоза КРС Campylobacter fetus subspecies fetus инактиватором и отличается тем, что в качестве инактиватора используют теотропин при следующем соотношении компонентов, масс. %: суспензия клеток кампилобактера серогруппы fetus subspecies fetus в культуральной среде с концентрацией 2×10¹⁰ КОЕ*/см³ (культура возбудителя кампилобактериоза КРС Campylobacter fetus subspecies fetus) 0,5%; 0,9%-ный раствор NaCl 99,2%; теотропин 0,3%. 1 табл.

Способ инактивации возбудителя кампилобактериоза крупного рогатого скота (КРС) Campylobacter fetus subspecies fetus, включающий накопление колоний возбудителя кампилобактериоза КРС Campylobacter fetus subspecies fetus путем культивирования на питательной среде, смыв колоний возбудителя кампилобактериоза КРС Campylobacter fetus subspecies fetus 0,9%-ным раствором NaCl, инактивацию накопленной биомассы возбудителя кампилобактериоза КРС Campylobacter fetus subspecies fetus инактиватором, отличающийся тем, что в качестве инактиватора используют теотропин при следующем соотношении компонентов, масс. %:

суспензия клеток кампилобактера серогруппы fetus subspecies fetus в культуральной среде с концентрацией 2×10¹⁰ КОЕ*/см³ (культура возбудителя кампилобактериоза КРС Campylobacter fetus subspecies fetus) 0,5% 0,9%-ный раствор NaCl 99,2% теотропин 0,3%