Композиция на основе интерферона I или III типа и гамма-D-глутаминил-L-триптофана для профилактики и лечения инфекционных заболеваний и иммунодефицитных состояний (варианты) Российский патент 2018 года по МПК A61K38/05 A61K38/21 A61K47/00 A61K9/20 

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к препаратам противоинфекционного, адаптогенного и иммуномодулирующего действия и может быть использована для профилактики и лечения инфекционных заболеваний, в частности вирусных заболеваний, и иммунодефицитных состояний.

Инфекционные заболевания продолжают оставаться одной из наиболее частых причин заболеваемости, а в тяжелых случаях - и смертности населения. Во многих случаях инфекционные заболевания сопровождаются развитием вторичных иммунодефицитных состояний, осложняющих течение инфекционного процесса.

Острые респираторные вирусные инфекции относятся к группе заболеваний, занимающих лидирующее положение по обращаемости за врачебной помощью, временной утрате трудоспособности, количеству потребляемых лекарств за период обострения среди детского и взрослого населения (Киселев О.И., 2004). По сведениям ВОЗ, каждый третий житель планеты ежегодно и более 25% больных ежедневно обращается за медицинской помощью по поводу ОРВИ. На эти заболевания приходится 98% потерь учебного времени и 70% рабочего времени (Чучалин А.Г., 1999; Шарипова Э.Р., 2007). Ежегодный экономический ущерб в России по причине ОРВИ и гриппа составляет более 10 миллиардов рублей (Гатич Р.З. и соавт., 2004; Волжанин В.М. и соавт., 2005).

Предпосылками для возникновения заболевания в ответ на внедрение респираторных вирусов является нарушение неспецифических и специфических защитных механизмов слизистых оболочек верхних дыхательных путей в виде местной сниженной или замедленной продукции интерферонов, снижение количества клеток цилиндрического эпителия, приводящее к замедлению мукоциллиарного транспорта, угнетение фагоцитарной активности полиморфноядерных лейкоцитов и мононуклеаров, снижение концентрации и активности лизоцима в назальном секрете, дефиците Т-лимфоцитов, преимущественно Тх, экспрессирующих поверхностные маркеры CD3, показателей гуморального иммунитета, в частности снижение IgA и sIgA. Кроме того, доказано, что респираторные вирусы (особенно ярко это свойство проявляется, к примеру, у вируса гриппа) способны индуцировать иммунодефицитные состояния в виде подавления функциональной активности Т-системы иммунитета, активности ЕК, снижения продукции клетками про- и противовоспалительных цитокинов. В связи с этим в последнее время большое внимание уделяется поиску средств с плейотропным характером биологической активности, обладающих воздействием на большинство респираторных вирусов, а также улучшающих состояние иммунной системы и повышение вследствие этого устойчивости организма к возбудителям ОРВИ. Таким условиям в определенной мере соответствует лечение иммунозаместительными и иммуностимулирующими препаратами.

Лечение многих других вирусных инфекций также требует пересмотра из-за неудовлетворительной эффективности. За последние годы противовирусная терапия хронического гепатита С (ХГС) существенно изменилась: от монотерапии интерфероном-α2b до комбинированной терапии пегилированным интерфероном в сочетании с рибавирином. Появление данной комбинированной формы терапии позволило повысить частоту устойчивого вирусного ответа при лечении пациентов ХГС до 60%. В настоящее время, исходя из концепции о роли недостаточности клеточного иммунного ответа в персистенции вируса, обсуждаются и изучаются возможности использования в терапии ХГС, а также герпесвирусных и других вирусных инфекций препаратов, нормализующих иммунный статус организма. Изучение новых более эффективных средств противовирусной терапии является весьма актуальным.

Терапия вирусных инфекций интерферонами достаточно широко распространена и используется в разных областях клинической медицины для лечения острых и хронических гепатитов В и С, герпесвирусных инфекций, в т.ч. цитомегаловирусной инфекции (ЦМВ), инфекций, вызываемых вирусом Эпштейна-Барра (ВЭБ), папилломатоза, кондиллом; для коррекции вторичных иммунодефицитных состояний с вирусным инфекционным синдромом и т.д. (Нестерова И.В., 2002).

Интерфероны I и III типа (или ИФН-альфа и ИФН-лямбда) проявляют 4 основных биологических свойства:

1. Прямое противовирусное действие за счет блокирования транскрипции.

2. Подавление пролиферации клеток, нужное для предотвращения распространения вируса.

3. Активация функций НК клеток, обладающих способностью лизировать инфицированные вирусом клетки организма.

4. Усиление экспрессии молекул главного комплекса гистосовместимости I класса, нужное для увеличения эффективности представления вирусных антигенов инфицированными клетками цитотоксическим Т-лимфоцитам. Это приводит к активации специфического распознавания инфицированных вирусом клеток Т-лимфоцитами - первого этапа лизиса вирус-инфицированных клеток-мишеней.

В результате помимо прямого антивирусного действия активируются механизмы как врожденного (НК клетки), так и приобретенного (Т-лимфоциты) иммунитета. В связи с этим все ИФН I и III типа кроме противовирусной активности обладают также иммунорегуляторным действием.

Особенностью интерферонов-альфа является стойкость к нагреванию до 65°С и воздействию кислот (до рН2) (De Maeyer et al., 1998). Из группы белков интерферона альфа (12 типов, подтипы IFN-α2a, IFN-α2b, IFN-α2c) альфа-2b интерферон наиболее предпочтителен для использования в композиции, так как эта форма ИФН вызывает минимальный рост титра нейтрализующих антиинтерфероновых аутоантител при длительных либо повторных курсах лечения, обеспечивая достижение длительного терапевтического эффекта ИФН.

Известно использование в качестве препарата, воздействующего на иммунную систему, медицинского препарата Бестим, содержащего действующее вещество - дипептид гамма-D-глутаминил-L-триптофан, полученный методом химического синтеза и очищенный до гомогенности с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.

По данным изучения специфической активности, механизм действия препарата Бестим заключается в индукции дифференцировки предшественников Т-лимфоцитов с преимущественной стимуляцией образования Т-хелперов 1 типа, усилении пролиферации лимфоцитов, увеличении синтеза интерлейкина-2 и экспрессии рецепторов ИЛ-2, а также стимуляции антителообразования (Пигарева и др., 2000).

Препарат прошел полный цикл доклинических исследований. Судя по результатам испытаний, препарат обладает иммуностимулирующим действием в дозах от 0,00001 мг до 0,01 мг на кг массы тела, т.е. оказывает свой эффект в чрезвычайно низких концентрациях, не обладает токсическим действием даже в дозах, превышающих терапевтическую в миллион раз. Бестим выпускается в лекарственной форме: ампулы лиофилизированного вещества по 0,1 мг. Разовая доза составляет 0,1 мг (0,001 мг/кг). Лечение препаратом проводится в виде курса из 5-10 инъекций.

Известно применение данного препарата для лечения аллергических заболеваний (заявки на изобретение РФ №98101162, №2007118237), а также для лечения туберкулеза легких (Патенты РФ на изобретение №2229892, №2450820) и гнойно-воспалительных заболеваний кожи (Патент РФ на изобретение №2423976) путем введения препарата парентерально, перорально либо интратрахеально в разных дозировках, в зависимости от заболевания и методов лечения.

Так же известно применение комбинации Бестима и провоспалительных цитокинов: рекомбинантного ИФН-гамма (ингарон) - при первичной иммунизации, и рекомбинантного ИЛ-2 (ронколейкин) - при вторичной иммунизации, в качестве препарата, воздействующего на иммунную систему, как способ повышения иммуногенности антигенов В. pseudomallei при экспериментальном мелиоидозе (Патент РФ на изобретение №2483752). При этом иммуногенные и протективные свойства антигенов существенно возрастали при включении в схему иммунизации цитокинов и активатора клеточного иммунитета Бестима.

Композиции, где действующим началом являются интерферон I типа или интерферон III типа и синтетический иммуномодулятор гамма-D-глутаминил-L-триптофан, зарегистрированный в РФ под торговой маркой Бестим, в том числе в лекарственных формах, неизвестны.

Технический результат от создания данного изобретения в первую очередь заключается в расширении арсенала противоинфекционных, в том числе противовирусных, и иммуностимулирующих средств.

Технический результат от использования новой композиции на основе интерферонов I или III типа с гамма-D-глутаминил-L-триптофаном выражается в усилении иммунного ответа на введение интерферонового агента при небольших затратах. Указанный технический результат достигается за счет того, что гамма-D-глутаминил-L-триптофан является высокоактивным иммуностимулятором, причем действует в низких концентрациях, что позволяет использовать его в малый количествах и при этом получать усиленный эффект от интерферонотерапии.

Кроме того, технический результат выражается в получении активной смеси, за счет того, что γ-D-Glu-L-Trp является нереактогенным иммуномодулирующим агентом, что позволит сохранить активность каждого компонента, компоненты не вступают во взаимодействие и, как следствие, активность каждого компонента сохраняется.

Помимо этого, технический результат выражается в увеличении срока хранения композиции. Технический результат достигается тем, что препарат гамма-D-глутаминил-L-триптофана - Бестим - обладает хорошей толерантностью конечной формы и длительным сроком хранения.

Технический результат от использования настоящего изобретения выражается в увеличении эффективности профилактики и терапии и уменьшении побочных эффектов. Указанный технический результат достигается тем, что используют индивидуальный подход к пациенту, а именно обеспечивают максимально эффективную для пациента концентрацию каждого агента, при лечении - на каждом этапе лечения, препарат доставляют в наиболее эффективной для усваивания компонентов и сохранения их активности лекарственной форме.

Сущность изобретения

Заявленная группа изобретений относится к объектам одного вида одинакового назначения, обеспечивающим получение одного и того же технического результата (варианты).

Целью настоящего изобретения является разработка нового препарата для лечения и профилактики инфекционных, в том числе вирусных, заболеваний и иммунодефицитных состояний, применимого в клинической практике.

Цель изобретения достигается путем создания композиции в различных лекарственных формах (инъекции, капли, аэрозоль, спрей, порошок для ингаляций, таблетки, таблетки для рассасывания, мазь, гель, свечи, микрогранулы), где действующим началом является естественный противовирусный цитокин - любой интерферон I или III типа (например, интерферон альфа, либо интерферон лямбда, соответственно) и синтетический иммуномодулятор гамма-D-глутаминил-L-триптофан, зарегистрированный в РФ под торговой маркой Бестим, применение полученных композиций для лечения или профилактики инфекционных, в первую очередь вирусных, заболеваний и иммунодефицитных состояний осуществляется с использованием индивидуального подхода в каждом случае.

Подтверждение эффективности полученных композиций на основе ИФН I или III типа и гамма-D-глутаминил-L-триптофана в различных лекарственных формах (комбинированного препарата) осуществляли с использованием рекомбинантного альфа-2b-интерферона, производимого по патенту РФ №2294372, и препарата Бестим.

Возможность осуществления изобретения в указанных формах в медицине подтверждается следующими примерами.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1. Сравнение биологической активности комбинированного препарата ИФН альфа и Бестима, полученного по примеру 1 с препаратом ИФН альфа 2b в тесте противовирусной активности по примеру 2.

Фиг. 2. Риноцитограмма слизистой оболочки пациента, страдающего острым гнойным риносинуситом. Окрашивание по способу Романовского-Гимзе, увеличение 1000х: а - микроорганизмы, б - нейтрофильные гранулоциты, в - деструкция эпителиальных клеток.

Фиг. 3. Риноцитограмма слизистой оболочки пациента с острым гнойным риносинуситом через 5 дней после лечения. Окрашивание по способу Романовского-Гимзе, увеличение 1000х: а - эпителиальные клетки, б - нейтрофильные гранулоциты.

Пример 1. Получение вариантов комбинированного препарата для парентерального и местного применения

При создании лекарственных форм композиции выявлено, что варьирование содержания компонентов целевой добавки в пределах определенного диапазона позволяет добиться сравнимых результатов, при этом выявлено оптимальное соотношение компонентов для каждой лекарственной формы.

1.1 Получение комбинированного препарата для инъекционного и капельного применения

Композиция 1:

интерферон I или III типа 10 тыс. ME - 25 млн. ME

гамма-D-глутаминил-L-триптофан 0,01-10,0 мг

полиглюкин 0,5 (0,05-20,0) мг/мл

ЭДТА 0,001 (0,0001-0,1) М

твин-20 0,01 (0,01-5,5) % вес.

натрия фосфат двуосновный безводный 1,8 (0,9-8,0) мг/мл

натрия фосфат одноосновный моногидрат 1,3 (0,7-6,5) мг/мл

натрий хлористый 7,5 (0,5-7,5) мг/мл.

1.2 Получение комбинированного препарата для применения в виде жидкого аэрозоля или спрея

Композиция 2

интерферон альфа 2b 10 тыс.ME - 10 млн ME

гамма-D-глутаминил-L-триптофан 0,01-10,0 мг

полиглюкин 0,5 (0,05-20,0) мг/мл

ЭДТА 0,001 (0,0001-0,1) М

твин-20 0,01 (0,01-5,5)%

альфа-токоферол 1×10^-6 (1×10^-4-1×10^-7)М

натрия фосфат двуосновный безводный 1,8 (0,9-8,0) мг/мл

натрия фосфат одноосновный моногидрат 1,3 (0,7-6,5) мг/мл

натрий хлористый 7,5 (0,5-7,5) мг/мл

бензалконий хлорид 0,005 (0,001-0,04) %

азот остальное

1.3 Получение комбинированного препарата для применения в виде порошка для ингаляций

Композиция 3

интерферон альфа 2b 10 тыс. ME - 10 млн ME

гамма-D-глутаминил-L-триптофан 0,01-10,0 мг

1.4 Получение комбинированного препарата в виде лиофилизированной таблетки для проглатывания либо для сублингвального применения

Композиция 4

интерферон I или III типа (интерферон альфа 2b) 10 тыс. ME - 10 млн ME

гамма-D-глутаминил-L-триптофан 0.01-10,0 мг

сахароза 8 (0,5-20,0) %

желатин 2 (0,2-10,0)%

соевая мука 1 (0,1-10,0) %

полиглюкин 1 (0,1-10,0)%

аскорбиновая кислота 0,5 (0,05-5) %

порошок какао 1 (0,1-10)%.

1.5 Получение комбинированного препарата для применения в виде мази или геля

Универсальная основа, состоящая из

- двух активных компонентов, интерферона I или III типа и гамма-D-глутаминил-L-триптофана,

- смешанной мицеллярно-гелевой основы, содержащей на выбор polyethylen glycol monostearate, macrogol stearate 8-40, polyoxuethylen esters, polyoxuethylen 8-40 stearate, Myrj 45-52, полиоксил - 8-40 стеараты, Криллы №10-50, вазелиновое масло, вазелин,

- вспомогательных добавок из нанокластеров серебра, альфа токоферола, бензалконий хлорида, твин-20, твин-80, аскорбиновой кислоты, натрия фосфата двуосновного, натрия фосфата одноосновного

- водосодержащего растворителя

при следующем соотношении ингредиентов (% вес):

Композиция 5:

Активные компоненты - интерферон I или III типа (интерферон альфа 2b) 10 тыс. ME - 10 млн ME, гамма-D-глутаминил-L-триптофан 0,01-10,0 мг

мицеллярно-гелевая основа - смесь Myrj 45-52 15-40%, вазелиновое масло 10-20%,

вспомогательная добавка - бензалконий хлорид 0,005 (0,003-0,007) %

остальное - вода

Композиция 6 - композиция 5, отличающиеся тем, что в составе мицеллярно-гелевой основы содержит дополнительно 5-15% вазелина, а содержание вазелинового масла - 3-10%.

Композиции 7, 8 - композиции 5, 6, соответственно, отличающиеся тем, что в качестве вспомогательной добавки содержат нанокластеры нульвалентного серебра размером 2-40 нм 0,003-0,007%.

Композиции 9, 10 - композиции 5, 6, соответственно, отличающиеся тем, что в качестве вспомогательной добавки содержат альфа токоферол 5×10^-7-3×10^-6 М.

Композиции 11, 12 - композиции 5, 6, соответственно, отличающиеся тем, что в качестве вспомогательной добавки содержат аскорбиновую кислоту 0,5 (0,5-2,0) %.

Композиции 13, 14 - композиции 5, 6, соответственно, отличающиеся тем, что в качестве вспомогательных добавок содержат натрия фосфат двуосновный безводный 0,7-6,0 мг/мл и натрия фосфат одноосновный моногидрат 0,5-4,5 мг/мл

Композиции 15, 16 - композиции 5, 6, соответственно, отличающиеся тем, что в качестве вспомогательной добавки содержат твин-20 0,2-3,0%.

Композиции 17, 18 - композиции 5, 6, соответственно, отличающиеся тем, что в качестве вспомогательной добавки содержат твин-80 0,2-3,0%.

1.6 Получение комбинированного препарата для применения в виде суппозиториев

Гидрофильные суппозитории, состоящие из

- двух активных компонентов, интерферона I или III типа и гамма-D-глутаминил-L-триптофана,

- смешанной мицеллярно-гелевой основы, содержащей на выбор polyethylen glycol monostearate, macrogol stearate 8-100, polyoxuethylen esters, polyoxuethylen 8-100 stearate, Myrj 45-52, полиоксил - 8-40 стеараты, Криллы №10-50, вазелиновое масло, вазелин,

- вспомогательных добавок из нанокластеров серебра, токоферола ацетата, бензалконий хлорида, твин-20, твин-80, аскорбиновой кислоты, натрия фосфата двуосновного, натрия фосфата одноосновного

- водосодержащего растворителя

при следующем соотношении ингредиентов (% вес):

Композиция 19:

Активные компоненты - интерферон I или III типа (интерферон альфа 2b) 10 тыс. ME - 10 млн ME, гамма-D-глутаминил-L-триптофан 0,01-10,0 мг

мицеллярно-гелевая основа - смесь Myrj 45-52 70-90%, вазелиновое масло 0.3-3%, вазелин 1-6%

вспомогательная добавка - бензалконий хлорид 0,01-0,04%

остальное - вода

Композиция 20 - композиция 19, отличающаяся тем, что в качестве мицеллярно-гелевой основы содержит Witepsol HI5.

Композиция 21 - композиции 20, отличающаяся тем, что в качестве мицеллярно-гелевой основы содержит смесь PEG 400 15-25%, PEG 6000 55-65%.

Композиции 22-24, - композиции 19-21, соответственно, отличающиеся тем, что в качестве вспомогательной добавки содержат нанокластеры нульвалентного серебра размером 2-40 нм 0,003-0,010%.

Композиции 25-27 - композиции 19-21, соответственно, отличающиеся тем, что в качестве вспомогательной добавки содержат токоферола ацетат 3-7%.

Композиции 28-30 - композиции 19-21, соответственно, отличающиеся тем, что в качестве вспомогательной добавки содержат аскорбиновую кислоту 1-2%.

Композиции 31-33 - композиции 19-21, соответственно, отличающиеся тем, что в качестве вспомогательных добавок содержат натрия фосфат двуосновный безводный 0,9-8,0 мг/мл и натрия фосфат одноосновный моногидрат 0,7-6,5 мг/мл.

Композиции 34-36 - композиции 19-21, соответственно, отличающиеся тем, что в качестве вспомогательной добавки содержат твин-20 0,35-5,5%.

Композиции 37-39 - композиции 19-21, соответственно, отличающиеся тем, что в качестве вспомогательной добавки содержат твин-80 0,35-5,5%.

1.7 Получение комбинированного препарата для применения в виде микрогранул

Гидрофобные микрогранулы, состоящие из

- двух активных компонентов, интерферона I или III типа и гамма-D-глутаминил-L-триптофана,

- вспомогательных добавок из полиглюкина, ЭДТА, альфа токоферола, бензалконий хлорида, твин-20, твин-80, натрия фосфата двуосновный, натрия фосфата одноосновного

- биодеградируемого полимера - поли-D,L-лактид-ко-гликолида либо этилового эфира поли-D,L-лактид-ко-гликолида для пролонгирования эффекта действия интерферона и гамма-D-глутаминил-L-триптофана

при следующем соотношении ингредиентов (% вес):

Композиция 40:

Активные компоненты - интерферон I или III типа (интерферон альфа 2b) 10 тыс. ME - 30 млн ME, гамма-D-глутаминил-L-триптофан 0,01-10,0 мг

Вспомогательная добавка -

полиглюкин 0,5 (0,05-20,0) мг

ЭДТА 0,4-2,0 мг

твин-20 0,1-0,5 мг

альфа-токоферол 0,001-0,005 мг.

натрия фосфат двуосновный безводный 1,8 (0,9-8,0) мг

натрия фосфат одноосновный моногидрат 1,3 (0,7-6,5) мг

натрий хлористый 7,5 (0,5-5,0) мг

бензалконий хлорид - 0,05 (0,005-0,5) мг

азот

биодеградируемый полимер - поли-D,L-лактид-ко-гликолид 1,0-1,5 г

Композиция 41 - композиция 40, отличающаяся тем, что в качестве биодеградируемого полимера содержит этиловый эфир поли-D,L-лактид-ко-гликолида.

Композиции 42, 43 - композиции 40, 41, соответственно, отличающиеся тем, что в качестве вспомогательной добавки содержат токоферола ацетата 3-7% вес.

Композиции 44, 45 - композиции 40, 41, соответственно, отличающиеся тем, что в качестве вспомогательной добавки содержат натрия фосфат двуосновный безводный 0,9-8,0 мг и натрия фосфат одноосновный моногидрат 0,7-6,5 мг.

Композиции 46, 47 - композиции 40, 41, соответственно, отличающиеся тем, что в качестве вспомогательной добавки содержат твин-20 0,55-5,5 мг.

Композиции 48, 49 - композиции 40, 41, соответственно, отличающиеся тем, что в качестве вспомогательной добавки содержат твин-80 0,55-5,5 мг.

Пример 2. Оценка противовирусной активности комбинированного препарата

Проведено сравнение активности комбинированного препарата интерферона (ИФН) альфа 2b и гамма-D-глутаминил-L-триптофана (Бестима), в жидкой лекарственной форме (Композиция 1), полученного по примеру 1.1., in vitro в тесте противовирусной активности с препаратом ИФН-альфа.

Тестирование активности проводили на клеточной линии L-41, чувствительной к вирусу везикулярного стоматита. Клетки L-41 выращивали в 96-луночных плоскодонных культуральных платах до монослоя. Далее из лунок удаляли супернатант и вносили по 100 мкл последовательных разведений исследуемых препаратов. После 18-часовой инкубации супернатанты удаляли и в лунки вносили вирус везикулярного стоматита (50,000 PFU) в 200 мкл среды. Через 24 часа супернатанты удаляли и клетки окрашивали раствором кристалл-виолета (0,5% в 20% метаноле) в течение 5 минут.Затем платы промывали проточной водой и высушивали. Окрашенные клетки лизировали буфером, содержащим 2% SDS и 5% глицерина в дистиллированной воде (по 100 мкл/лун) в течение 10-15 минут на шейкере. Оптическую плотность измеряли при длине волны 595 нм на планшетном ридере Victor² (Perkin-Elmer). Далее строили графики зависимости оптической плотности от концентрации препаратов. Результаты представлены на Фиг 1.

Оба исследуемых препарата продемонстрировали практически идентичную противовирусную активность, таким образом, сочетание Бестима с ИФН альфа не снижает биологическую противовирусную активность ИФН при совместном использовании. Аналогичный вывод был сделан при изучении совместного применения интерферона лямбда и Бестима.

Пример 3. Изучение клинической эффективности комбинированного инъекционного препарата при хроническом гепатите С (генотип 1).

Целью исследования было изучение клинической эффективности комбинированного инъекционного препарата ИФН и Бестима (композиция 1), полученного по примеру 1.1., при лечении больных хроническим вирусным гепатитом С (ХВГС).

В исследование были включены 20 больных ХВГС с первым генотипом вируса.

Схема терапии: комбинированный препарат, полученный согласно примеру 1.1. (ИФН, 3 млн. ME + Бестим, 0,1 мг), внутримышечно три раза в неделю в течение 24 недель. Срок наблюдения после окончания курса терапии - 6 месяцев.

По окончании терапии были отмечены нормализация АЛТ и отсутствие РНК вируса гепатита С в сыворотке крови у 12 больных (60%). По данным литературы при монотерапии ПегИнтроном ответ составлял 39% (Lindsay K.L. et al, 2001). Эффективность терапии Бестимом в сочетании с ИФН была выше у больных с низкой вирусной нагрузкой до лечения (<2×10⁶ копий в мл). Через 48 недель после начала терапии обнаружено отсутствие РНК вируса гепатита С в сыворотке крови у 20% больных (при монотерапии ПегИнтроном - 14%).

Лечение с использованием комбинированного препарата ИФН + Бестим приводило к существенным изменениям в иммунном статусе больных: на сроках 25 и 48 недель наблюдали увеличение уровней продукции ИЛ-2 и ИФН-гамма и соотношения продукции ИФН-гамма/ИЛ-4. У ответивших на лечение больных происходило увеличение числа CD8⁺ Т-лимфоцитов периферической крови.

В течение всего периода лечения побочные эффекты не были выявлены.

Пример 4. Изучение клинической эффективности комбинированного таблетированного препарата при гнойном риносинусите.

Пациентка 36 лет, жалобы на головную боль, гнойные выделения из носа, затруднение носового дыхания. Больна в течение недели. Лечилась самостоятельно домашними средствами без эффекта. Слизистая полости носа гиперемирована, отечная, в среднем носовом ходе обильное гнойное отделяемое. При пункции верхнечелюстных разух - жидкий гной в объеме 4 мл. В риноцитограмме отмечали увеличенное количество нейтрофилов, деструкцию эпителиальных клеток (СПД-1,21, ИЦК-0,34), множество нефагоцитированных микроорганизмов (Фиг. 2).

Диагноз: двусторонний острый гнойный риносинусит.

Назначено лечение: подъязычные таблетки ИФН, 1 млн. ME + Бестим, 0,1 мг, полученные согласно примеру 1.4 (композиция 4), по 1 таб. 2 раза в день, сосудосуживающие капли в нос, антибактериальная терапия.

Через 2 дня после лечения пациентка отметила уменьшение гнойного отделяемого из носа, улучшение носового дыхания.

Через 5 дней после проведенного лечения жалоб не предъявляла, при пункции верхнечелюстных пазух промывная жидкость была чистая. В риноцитограммах количество нейтрофилов значительно уменьшилось, микроорганизмов в мазке не обнаружилось, процент деструктивных эпителиальных клеток значительно уменьшился (СПД-0,9, ИЦК-0,19) (Фиг. 3).

Пример 5. Изучение клинической эффективности комбинированного препарата при острой респираторной вирусной инфекции (ОРВИ) у взрослых (местное применение - капли в нос).

Под наблюдением находились больные с диагнозом ОРВИ средней степени тяжести в возрасте от 18 до 62 лет обоих полов. При проведении настоящего исследования учитывались следующие критерии включения: больные с диагнозом ОРВИ в остром периоде болезни (на 1-2 день от начала заболевания), средней степени тяжести, отсутствие осложнений. Диагноз ставили на основании комплексного клинико-анамнестического обследования, включая эпидемические (эпидемиологическая вспышка, семейные очаги, контакт с больными ОРВИ) данные, тщательный сбор анамнеза на предмет отсутствия хронической патологии ЛОР-органов в виде хронических аллергических реакций на лекарственные препараты, данных ЛОР-осмотра.

Критерии включения в исследование: интоксикация выражена умеренно, температура 37,5°-38,5°C, ринит, фарингит, сухой кашель. Пациенты жаловались на общую слабость, озноб, мышечные и суставные боли, головную боль, заложенность носа, выделения из носа серозно-слизистого характера, повышенное потоотделение, чувство инородного тела в ротоглотке, сухой кашель.

Три группы больных с одинаковыми диагнозами «ОРВИ» получали терапию с использованием различных препаратов в виде капель в нос, содержащих 1) ИФН альфа 2b, 1 млн. ME (группа 1), 2) Бестим, 0,1 мг (группа 2) и 3) ИФН альфа 2b, 1 млн. ME + Бестим, 0,1 мг, препарат получен согласно примеру 1.1., композиция 1 (группа 3), закапывали препараты в обе ноздри 2 раза в день. Обследование пациентов включало в себя измерение температуры тела, оценку динамических клинических признаков заболевания, общие лабораторные анализы. Степень проявления клинических симптомов приводилась в баллах. Оценку клинической эффективности исследуемых препаратов осуществляли на основании динамики наступления субъективного (исчезновения жалоб на недомогание, слабость, головной боли) и объективного улучшения (нормализации температуры, исчезновения катарального синдрома) состояния больных, отсутствия осложнений.

В Таблице 1 приведены сравнительные результаты лечения трех групп больных, свидетельствующие о том, что эффективность лечения комбинированным препаратом значительно выше, чем при использовании каждого из компонентов по отдельности. Так, на 5 день наблюдения средняя сумма баллов, указывающая на выраженность клинических симптомов, была ниже в группе больных, получавших комбинированный препарат ИФН альфа 2b + Бестим.

Пример 6. Изучение клинической эффективности комбинированного препарата при остром фарингите (местное применение - аэрозольный препарат).

Пациент, 27 лет, предъявлял жалобы на сильные боли в горле при глотании, стекание слизи по задней стенке глотки, недомогание, повышение температуры тела до субфебрильных цифр. При осмотре: задняя стенка глотки гиперемирована, покрыта слизистым налетом, увеличены лимфоидные гранулы и боковые валики.

Диагноз: острый фарингит.

Назначено: комбинированный аэрозольный препарат ИФН + Бестим, полученный согласно примеру 1.2 (композиция 2), 4 раза в день.

После назначения препарата сразу отметили улучшение общего состояния, значительно уменьшились боли в горле. Через сутки после лечения препаратом вновь ухудшилось общее состояние, появились боли в горле, но они не были столь интенсивными. На третьи сутки общее состояние по оценке больного было хорошее, боли в горле беспокоили только по утрам. На пятые сутки жалоб не предъявлял. При осмотре слизистая задней стенке глотки розовая, чистая, лимфоидные гранулы и боковые валики уменьшились в размере.

Пример 7. Изучение клинической эффективности комбинированного препарата при респираторной вирусной инфекции (ОРВИ) у взрослых (применение в форме ректальных свечей).

Пациент Д. предъявлял жалобы на затруднение носового дыхания, слизистые выделения из носа, чихание, недомогание, боли в мышцах, головную боль. Считает себя больным в течение пяти дней. Самостоятельно не лечился. Диагноз - ОРВИ, затяжное течение.

Назначен комбинированный препарат ИФН + Бестим в виде ректальных свечей, изготовленных согласно примеру 1.6 (композиция 19), 1 раз в день, в течение 3 дней.

В результате поведенного лечения пациент на 3 сутки отметил прекращение выделений из носа, значительное улучшение общего состояния. После проведенного лечения серозных и гнойных выделений из носа не отмечалось.

Таким образом, продемонстрирован хороший терапевтический эффект совместного применения рекомбинантного интерферона альфа 2b и синтетического иммуномодулятора гамма-D-глутаминил-L-триптофана (препарата Бестим), который оказался выше, чем таковой при монотерапии каждым агентом, в испытаниях с инфекционными заболеваниями и иммунодефицитными состояниями.

Использование естественного противовирусного цитокина из интерферонов I типа или интерферонов III типа возможно в составе комбинированного препарата в совокупности с гамма-D-глутаминил-L-триптофаном.

Использованные в испытаниях композиции показали клиническую эффективность. Описанные варианты композиций также будут иметь эффект, поскольку подобраны компоненты, которые не угнетают активность действующих агентов комбинированного препарата.

Ввиду того, что показан хороший противовирусный и иммуностимулирующий эффект препарата, он эффективен и в качестве профилактического средства, например, при контактировании с больным.

Список литературы

1. De Maeyer Е., De Maeyer-Guignard J., Int Rev Immunol. 1998, 17, p. 53-73

2. Волжанин B.M., Ковеленов А.Ю., Михальцов A.H. и др. Исследование эффективности виброакустического метода терапии для профилактики осложненного течения гриппа и других ОРЗ: методические рекомендации -- СПб.: Изд-во ВМА, 2005. 20 с.

3. Гатич Р.З., Колобухина Л.В., Исаева Е.И., Бурцева Е.И., Орлова Т.Г., Воронина Ф.В., Малиновская В.В. Эффективность Виферона при гриппе у взрослых больных. Русский медицинский журнал, 2004, Том 12, №14, С. 898-900.

4. Жукова Светлана Ивановна, Демьянова Ольга Борисовна, Авророва Ирина Владимировна, Занкович Александра Александровна, Алексеев Владимир Валерьевич, Храпова Наталья Петровна, Ротов Константин Александрович, Снатенков Евгений Александрович, Тихонов Сергей Николаевич, Ломова Лидия Васильевна. СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ИММУНОГЕННОСТИ АНТИГЕНОВ В. pseudomallei ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ МЕЛИОИДОЗЕ // Патент РФ №2483752, от 23.03.2012.

5. Заболотных Н.В., Иванова Л.А., Виноградова Т.И., Павлова М.В., Васильева С.Н., Васильева Г.Ю., Симбирцев А.С, Колобов А.А., Пигарева Н.В. СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ // Патент РФ №2229892 от 08.06.2001.

6. Ищенко Александр Митрофанович, Митрофанов Евгений Витальевич, Симбирцев Андрей Семенович, Соловьева Людмила Яковлевна, Мартюшин Сергей Васильевич, Родин Сергей Владимирович, Жахов Александр Владимирович, Полякова Елена Акимовна, Антипова Татьяна Олеговна, Протасов Евгений Александрович, Котов Александр Юрьевич, Трофимов Александр Викторович, Свентицкий Евгений Николаевич. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНОГО ИНТЕРФЕРОНА АЛЬФА-2b И ИНТЕРФЕРОНСОДЕРЖАЩИЙ ПРЕПАРАТ (ВАРИАНТЫ) // Патент РФ №2294372 от 16.06.2005.

7. Киселев О.И., Васильева И.А. Современные средства патогенетической и симптоматической терапии гриппа и ОРЗ. Русский медицинский журнал. - 2004. Т. 12, №2 (202). - С. 91-93.

8. Нестерова И.В. Иммуномодулирующая терапия при вирусных инфекциях. В Кн. «Справочник по иммунотерапии». - СПб. - Диалог, 2002, С. 250-286

9. Нестерова И.В., Колесникова Н.В., Ломтатидзе Л.В., Симбирцев А.С. СПОСОБ КОРРЕКЦИИ ДИСФУНКЦИЙ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ГРАНУЛОЦИТОВ // Заявка на изобретение РФ №98101162 от 06.01.1998

10. Павлова Екатерина Сергеевна, Васильева Люция Дмитриевна. СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ДЕСТРУКТИВНОГО ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ // Патент РФ №2450820 от 20.07.2010.

11. Пигарева Н.В., Симбирцев А.С., Колобов А.А., Калинина Н.М., Кауров О.А., Кетлинский С.А. Изучение иммуномодулирующей активности нового пептидного соединения бестима // Иммунология. - 2000. - №1. - С. 33-35

12. Симбирцев Андрей Семенович, Колобов Александр Александрович, Петров Александр Владимирович, Пигарева Наталья Васильевна, Оганезов Виктор Каренович, Сизякина Людмила Петровна, Чурютина Элла Витальевна. СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ // Заявка на изобретение РФ №2007118237, от 17.05.2007.

13. Чернышев Олег Борисович, Шатиль Михаил Александрович, Бубнова Наталья Алексеевна, Симбирцев Андрей Семенович, Колобов Александр Александрович, Петров Александр Владимирович. СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ С ГНОЙНО-ВОСПАЛИТЕЛЬНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ КОЖИ // Патент РФ №2423976, от 25.06.2009.

14. Чучалин А.Г. Инфекционные заболевания нижних дыхательных путей 1999. - №2. - С. 6-9.

15. Шарипова Э.Р. Интерлейкин-1β в иммунопатогенезе рецидивирующих гнойных риносинуситов: дис., Башкирский гос. мед. университет. Уфа, 2007. - 127 с.

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к препаратам противоинфекционного, адаптогенного и иммуномодулирующего действия, и может быть использована для профилактики и лечения инфекционных заболеваний, в частности вирусных заболеваний, и иммунодефицитных состояний. Предложена композиция в различных лекарственных формах (инъекции, капли, аэрозоль, спрей, порошок для ингаляций, таблетки, таблетки для рассасывания, мазь, гель, свечи, микрогранулы). Композиция на основе интерферона I или III типа 10 тыс. МЕ – 30 млн. МЕ и гамма-D-глутаминил-L-триптофана 0,01 – 10,0 мг для профилактики или лечения инфекционных заболеваний и иммунодефицитных состояний. Жидкая лекарственная форма композиции дополнительно содержит целевую добавку при следующем соотношении компонентов: интерферон I или III типа 10 тыс. ME - 25 млн. ME, гамма-D-глутаминил-L-триптофан 0,01-10,0 мг, полиглюкин 0,05-20,0 мг/мл, ЭДТА 0,0001-0,1 М, твин-20 0,01-5,5 % вес., натрия фосфат двуосновный безводный 0,9-8,0 мг/мл, натрия фосфат одноосновный моногидрат 0,7-6,5 мг/мл, натрий хлористый 0,5-7,5 мг/мл. Также изобретение касается способа лечения или профилактики инфекционных, в первую очередь вирусных, заболеваний и иммунодефицитных состояний путем введения композиции или лекарственной формы композиции. Использование изобретения расширяет арсенал противоинфекционных, в том числе противовирусных, и иммуностимулирующих средств, способствует усилению иммунного ответа на введение интерферонового агента при небольших затратах, обеспечивает получение смеси с активными агентами, увеличение срока хранения композиции, увеличение эффективности профилактики и терапии и уменьшение побочных эффектов. 3 н. и 11 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл., 7 пр.

1. Композиция на основе интерферона I или III типа в количестве 10 тыс. МЕ – 30 млн. МЕ и гамма-D-глутаминил-L-триптофана 0,01–10,0 мг для профилактики или лечения инфекционных заболеваний и иммунодефицитных состояний.

2. Жидкая лекарственная форма композиции по п. 1, характеризующаяся тем, что дополнительно содержит целевую добавку при следующем соотношении компонентов:

интерферон I или III типа 10 тыс. ME - 25 млн. ME,

гамма-D-глутаминил-L-триптофан 0,01-10,0 мг,

полиглюкин 0,05-20,0 мг/мл,

ЭДТА 0,0001-0,1 М,

Твин-20 0,01-5,5 вес. %,

натрия фосфат двуосновный безводный 0,9-8,0 мг/мл,

натрия фосфат одноосновный моногидрат 0,7-6,5 мг/мл,

натрий хлористый 0,5-7,5 мг/мл.

3. Жидкая лекарственная форма по п. 2, характеризующаяся тем, что применяется для инъекций.

4. Жидкая лекарственная форма по п. 2, характеризующаяся тем, что применяется в виде капель.

5. Жидкая лекарственная форма по п. 2, отличающаяся тем, что содержит интерферон I или III типа в количестве от 10 тыс. ME до 10 млн ME, дополнительно содержит альфа-токоферол в количестве 1×10^-4-1×10^-7 М, бензалконий хлорид в количестве 0,001-0,04 вес. % и азот для применения в виде жидкого аэрозоля или спрея.

6. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что применяется в лиофилизированной лекарственной форме в виде порошка для ингаляций при следующем соотношении компонентов:

интерферон I или III типа 10 тыс. ME - 10 млн. ME,

гамма-D-глутаминил-L-триптофан 0,01-10,0 мг.

7. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что дополнительно содержит целевую добавку и применяется в лиофилизированной лекарственной форме при следующем соотношении компонентов, вес. %:

интерферон I или III типа 10 тыс. ME - 10 млн. ME,

гамма-D-глутаминил-L-триптофан 0,01-10,0 мг,

сахароза 0,5-20,0 %,

желатин 0,2-10,0 %,

соевая мука 0,1-10,0 %,

полиглюкин 0,1-10,0 %,

аскорбиновая кислота 0,05-5 %,

порошок какао 0,1-10 %.

8. Композиция по п. 7, характеризующаяся тем, что применяется в виде таблетки для проглатывания.

9. Композиция по п. 7, характеризующаяся тем, что используется в виде таблетки для сублингвального применения.

10. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что дополнительно содержит смешанную мицеллярно-гелевую основу - 2-3 компонента из polyethylen glycol monostearate, vacrogol stearate 8-40, polyoxuethylen esters, polyoxuethylen 8-40 stearate, Myrj 45-52, полиоксил 8-40 стеарата, Крилл №10-50, Witepsol H15, PEG 400, PEG 6000 вазелинового масла, вазелина, вспомогательную добавку - 1-2 компонента из нанокластеров серебра, альфа-токоферола, токоферола ацетата, бензалконий хлорида, Твин-20, Твин-80, аскорбиновой кислоты, натрия фосфата двуосновного, натрия фосфата одноосновного и водосодержащий растворитель.

11. Композиция по п. 10, характеризующаяся тем, что применяется в лекарственной форме мази или геля при следующем соотношении ингредиентов, вес. %:

интерферон I или III типа 10 тыс. ME - 10 млн. ME,

гамма-D-глутаминил-L-триптофан 0,01-10,0 мг,

от 1 до 3 компонентов из Myrj 45-52 15-40%, вазелинового масла 3-20%, вазелина 5-15%,

от 1 до 3 компонентов из бензалконий хлорида 0,003-0,007%, нанокластеров нульвалентного серебра размером 2-40 нм 0,003-0,007%, альфа-токоферола 5×10^-7-3×10^-6 М, аскорбиновой кислоты 0,5-2,0%, натрия фосфата двуосновного безводного 0,7-6,0 мг/мл, натрия фосфата одноосновного моногидрата 0,5-4,5 мг/мл, Твин-20 0,2-3,0%, Твин-80 0,2-3,0%.

12. Композиция по п. 10, характеризующаяся тем, что применяется в лекарственной форме суппозиториев при следующем соотношении ингредиентов, вес. %:

интерферон I или III типа 10 тыс. ME - 10 млн. ME,

гамма-D-глутаминил-L-триптофан 0,01-10,0 мг,

от 1 до 3 компонентов из Myrj 45-52 70-90%, вазелинового масла 0,3-3%, вазелина 1-6%, Witepsol H15, PEG 400 15-25%, PEG 6000 55-65%;

от 1 до 3 компонентов из бензалконий хлорида 0,01-0,04%, нанокластеров нульвалентного серебра размером 2-40 нм 0,003-0,010%, токоферола ацетата 3-7%, аскорбиновой кислоты 1-2%, натрия фосфата двуосновного безводного 0,9-8,0 мг/мл, натрия фосфата одноосновного моногидрата 0,7-6,5 мг/мл, Твин-20 0,35-5,5%, Твин-80 0,35-5,5%.

13. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что дополнительно содержит целевую добавку и применяется в лекарственной форме микрогранул при следующем соотношении ингредиентов:

интерферон 1 или III типа 10 тыс. ME - 30 млн. ME

гамма-D-глутаминил-L-триптофан 0,01-10,0 мг

от 1 до 9 компонентов из полиглюкина 0,05-20,0 мг, ЭДТА 0,4-2,0 мг, Твин-20 0,1-0,5 мг либо 0,55-5,5 мг, Твин-80 0,55-5,5 мг, альфа-токоферола 0,001-0,005 мг, натрия фосфата двуосновного безводного 0,9-8,0 мг, натрия фосфата одноосновного моногидрата 0,7-6,5 мг, натрия хлористого 0,5-5,0 мг, бензалконий хлорида 0,005-0,5 мг, токоферола ацетата 3-7 вес. %, азота биодеградируемый полимер на основе поли-D,L-лактид-ко-гликолида - 1,0-1,5 г.

14. Способ профилактики или лечения инфекционных заболеваний и иммунодефицитных состояний, заключающийся во введении композиции по п. 1 в лекарственной форме, охарактеризованной в одном из пп. 2-13.