Данная заявка испрашивает приоритет предварительных заявок на патент США 61/722537 (подана 5 ноября 2012 года) и 61/852309 (подана 15 марта 2013 года), обе эти заявки полностью включены в настоящую заявку путем ссылки.
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение в основном относится к применению химических соединений для лечения различных расстройств, заболеваний и патологических состояний, и в частности к применению замещенных производных индол-5-ола для изменения активности протеинкиназ и для лечения протеинкиназоопосредованных заболеваний.
Уровень техники изобретения
Протеинкиназы образуют большое семейство структурно родственных ферментов, которые отвечают за регуляцию различных процессов передачи сигнала в клетке. Протеинкиназы, содержащие сходный каталитический домен из 250-300 аминокислот, катализируют фосфорилирование белковых субстратов-мишеней.
Киназы могут быть подразделены на семейства в зависимости от субстратов, которые они фосфорилируют (например, белок-тирозин, белок-серин/треонин, липиды и т.д.). Фосфорилирование тирозина является центральным событием в регуляции различных биологических процессов, таких как пролиферация, миграция, дифференциация и выживание клеток. Некоторые семейства рецепторных и не рецепторных тирозинкиназ регулируют эти события, катализируя перенос фосфата от АТФ на остаток тирозина специфичных клеточных белков-мишеней. Были идентифицированы мотивы последовательности, которые в основном соответствуют каждому из этих киназных семейств (Hanks et al., FASEB J., (1995), 9, 576-596; Knighton et al., Science, (1991), 253, 407-414; Garcia-Bustos et al., EMBO J., (1994), 13:2352-2361). Примеры киназ в семействе протеинкиназ включают в себя без ограничений abl, Akt, bcr-abl, Blk, Brk, Btk, c-kit, c-Met, c-src, c-fms, CDK1, CDK2, CDK3, CDK4, CDK5, CDK6, CDK7, CDK8, CDK9, CDK10, cRaf1, CSF1R, CSK, EGFR, ErbB2, ErbB3, ErbB4, Erk, Fak, fes, FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4, FGFR5, Fgr, flt-1, Fps, Frk, Fyn, Hck, IGF-1R, INS-R, Jak, KDR, Lck, Lyn, MEK, p38, PDGFR, PIK, PKC, PYK2, ros, Tie, Tie-2, TRK, Yes и Zap70.
Исследования показали, что протеинкиназам принадлежит центральная роль в регуляции и поддержании широкого круга клеточных процессов и клеточных функций. Например, киназная активность действует как молекулярные переключатели, регулирующие пролиферацию, активацию и/или дифференциацию клеток. Неконтролируемая или избыточная киназная активность наблюдается при многих болезненных состояниях, включая доброкачественные и злокачественные нарушения пролиферации, а также заболевания, возникающие в результате неадекватной активации иммунной системы (аутоиммунные нарушения), отторжения аллотрансплантата и реакции «трансплантат против хозяина».
Имеются сообщения о том, что многие заболевания связаны с патологическими клеточными реакциями, запускаемыми событиями, в которых принимают участие протеинкиназы. Эти заболевания включают в себя аутоиммунные заболевания, воспалительные заболевания, заболевания костей, метаболические заболевания, неврологические и нейродегенеративные заболевания, рак, сердечно-сосудистые заболевания, аллергию и астму, болезнь Альцгеймера и гормональные заболевания. Кроме того, рецепторные протеинкиназы, специфичные для эндотелиальных клеток, такие как VEGF-2 и Tie-2, опосредуют процесс ангиогенеза и вовлечены в поддержание и прогрессирование раковых опухолей и других заболеваний, связанных с неконтролируемой васкуляризацией. Таким образом, в области медицинской химии прилагаются значительные усилия для поиска ингибиторов протеинкиназ, которые являлись бы эффективными терапевтическими агентами.
Многие виды рака характеризуются нарушением сигнальных путей в клетке, что приводит к неконтролируемому росту и пролиферации раковых клеток. Рецепторные тирозинкиназы (РТК) играют ключевую роль в этих сигнальных путях, передавая внеклеточные молекулярные сигналы в цитоплазму и/или ядро клетки. РТК представляют собой трансмембранные белки, которые, как правило, включают в себя внеклеточный лигандсвязывающий домен, трансмембранный домен и каталитический цитоплазматический тирозинкиназный домен. Считается, что связывание лиганда с внеклеточной частью вызывает димеризацию, приводящую к трансфосфорилированию и активации внутриклеточного тирозинкиназного домена (Schlessinger et al. Neuron 1992; 9:383-391).
Учитывая отсутствие доступных в настоящее время вариантов лечения для большинства состояний, связанных с протеинкиназами, по-прежнему существует большая потребность в новых терапевтических агентах, ингибирующих эти белковые мишени.
Сущность изобретения
Таким образом, целью настоящего изобретения является создание противоопухолевого агента, содержащего замещенные производные индол-5-ола, описанные формулой (I), его фармацевтически приемлемых препаратов, способов получения новых соединений и композиций для применения этих соединений. Соединения и композиции, содержащие соединения формулы (I), применимы для лечения различных заболеваний.
Описанная здесь комбинированная терапия может быть обеспечена путем получения замещенных производных индол-5-ола формулы (I) и другого терапевтического агента в виде отдельных фармацевтических препаратов с последующим их введением пациенту одновременно, полуодновременно, раздельно или через постоянные интервалы времени.
Настоящее изобретение относится к способам применения определенных химических соединений, таких как ингибиторы киназ, для лечения различных заболеваний, расстройств и патологий, например, рака и сосудистых расстройств, таких как инфаркт миокарда (ИМ), инсульт или ишемия. Помимо блокирования активности других рецепторных и не рецепторных киназ, триазиновые соединения, описанные в настоящем изобретении, могут блокировать ферментную активность некоторых из многочисленных представителей семейства киназ Aurora. Такие химические соединения могут быть эффективны при лечении заболеваний, где нарушения затрагивают подвижность клеток, адгезию и протекание клеточного цикла, а также заболеваний, связанных с условиями гипоксии, остеопорозом и состояниями, возникающим в результате или связанным с повышением проницаемости кровеносных сосудов, воспалительным или респираторным дистрессом, опухолевым ростом, инвазией, ангиогенезом, метастазированием и апоптозом.
Краткое описание чертежей
На Фиг. 1 изображена киназоингибирующая активность NTW-3475 в отношении широкого круга киназ, участвующих в патогенезе широкого круга заболеваний.
На Фиг. 2 изображена киназоингибирующая активность NTW-3475 в отношении широкого круга мутантных киназ.
На Фиг. 3 изображена антипролиферативная активность NTW-3475 in vitro.
На Фиг. 4 изображено изменение массы тела животного в ксенотрансплантатном исследовании лечения острого миелоидного лейкоза (ОМЛ) при помощи NTW-3475 (изменение массы тела является маркером общей токсичности).
На Фиг. 5 изображена кривая размера опухоли для NTW-3475 в исследовании ОМЛ, показывающая противоопухолевую активность.
На Фиг. 6 изображена относительная противоопухолевая активность NTW-3475, выраженная в размере опухоли у животного, получавшего NTW-3475, по отношению к размеру опухоли ОМЛ у животного, получавшего только агенты отрицательного контроля.
На Фиг. 7 изображено изменение массы тела животного в ксенотрансплантатном исследовании применения NTW-3475 для лечения хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ).
На Фиг. 8 изображена кривая зависимости размера опухоли от времени для получавших NTW-3475 и контрольных мышей в ксенотрансплантатном исследовании карциномы поджелудочной железы.
На Фиг. 9 изображено изменение массы тела животного в ксенотрансплантатном исследовании NTW-3475 (маркер общей токсичности).
На Фиг. 10 изображена относительная антипролиферативная активность NTW-3475, выраженная в размере опухоли у животного, получавшего лечение, по отношению к размеру опухоли у животного, получавшего NTW-3475 или контрольный агент.
На Фиг. 11 изображена относительная антипролиферативная активность NTW-3475, выраженная в размере опухолей у животных, получавших NTW-3475, по отношению к размеру опухоли у животных, получавших только контрольный агент.
На Фиг. 12 изображена кривая массы тела животных, получавших NTW-3475, в исследовании его применения для лечения карциномы щитовидной железы.
На Фиг. 13 изображена кривая зависимости размера опухоли от времени для получавших NTW-3475 животных с привитой утром карциномой щитовидной железы, показывающая противоопухолевую активность.
На Фиг. 14 изображено изменение массы животных, имеющих ксенотрансплантат, получавших NTW-3475 отдельно, или в комбинации со связанным с наночастицами альбумина паклитакселом (Abraxane®), в исследовании карциномы эндометрия на ксенотрансплантатной модели.
На Фиг. 15 изображены кривая размера опухоли при применении NTW-3475 отдельно, или в комбинации с Abraxane® в этом исследовании карциномы эндометрия.
На Фиг. 16 изображена относительная антипролиферативная активность NTW-3475 и Abraxane®, выраженная в размере опухоли у животных, получавших лечение, по отношению к размеру опухоли у мышей, получавших контрольный агент, в этом исследовании на модели карциномы эндометрия.
На Фиг. 17 изображено изменение массы животных (маркер общей токсичности), имеющих карциному поджелудочной железы, в ходе проведения им комбинированной терапии Abraxane®-NTW-3475, на ксенотрансплантатной модели.
На Фиг. 18 изображена кривая размера опухоли для NTW-3475 и связанного с наночастицами альбумина паклитаксела Abraxane® при их применении для лечения карциномы поджелудочной железы на ксенотрансплантатной модели.
На Фиг. 19 изображен % эксперимент/контроль для NTW-3475 и Abraxane® в комбинированной терапии при использовании ксенотрансплантатной модели карциномы поджелудочной железы.
На Фиг. 20 обобщены данные об активности NTW-3475 in vitro.
На Фиг. 21 обобщены данные о фармакологии NTW-3475 in vivo (ксенотрансплантаты).
На Фиг. 22 изображена киназоингибирующая активность NTW-3456 в отношении широкого круга киназ, участвующих в патогенезе широкого круга разновидностей рака.
На Фиг. 23 изображена киназоингибирующая активность NTW-3475 в отношении широкого круга мутантных киназ.
На Фиг. 24 изображена киназоингибирующая активность NTW-3456 в отношении мутантных abl киназ.
На Фиг. 25 изображена антипролиферативная активность NTW-3456 in vitro.
На Фиг. 26 изображены примеры антипролиферативной и ингибирующей фосфорилирование активности NTW-3456.
На Фиг. 27 изображено изменение массы тела с течением времени для массы тела животных, имеющих ксенотрансплантатный ОМЛ, при их лечении NTW-3456 (маркер общей токсичности).
На Фиг. 28 изображена кривая размера опухоли для получавших NTW-3456 животных, показывающая его противоопухолевую активность в модельной системе ОМЛ.
На Фиг. 29 изображена противоопухолевая активность NTW-3456, выраженная в размере опухоли у животного, получавшего лечение, по отношению к размеру опухоли у животного, не получавшего лечения.
На Фиг. 30 изображено изменение массы тела с течением времени для массы тела животных, имеющих ксенотрансплантатный ОМЛ, при их лечении NTW-3456 (маркер общей токсичности).
На Фиг. 31 изображена кривая размера опухоли для получавших NTW-3456 животных, показывающая его противоопухолевую активность в модельной системе ОМЛ.
На Фиг. 32 изображена противоопухолевая активность NTW-3456, выраженная в размере опухоли у животного, получавшего лечение, по отношению к размеру опухоли у животного, не получавшего лечения (Фигуры 27-29 и 30-32 относятся к отдельным экспериментам).
На Фиг. 33 показана корреляция между концентрацией в плазме крови и ингибированием pFlt3 у мышей с ТКИН, имеющих острый миелоидный лейкоз человека MV4-11, после однократного перорального введения 50 мг/кг NTW-3456.
На Фиг. 34 изображена кривая размера опухоли для получавших NTW-3456 животных, показывающая его противоопухолевую активность в модельной системе ХМЛ.
На Фиг. 35 изображена противоопухолевая активность NTW-3456, выраженная в размере опухоли у животного, получавшего лечение, по отношению к размеру опухоли у животного, не получавшего лечения, в модели ХМЛ.
На Фиг. 36 изображено изменение массы тела с течением времени для массы тела животных, получавших NTW-3456, (маркер общей токсичности) в модельной системе карциномы щитовидной железы.
На Фиг. 37 изображена кривая размера опухоли для получавших NTW-3456 животных, показывающая его противоопухолевую активность в модельной системе карциномы щитовидной железы.
На Фиг. 38 изображена противоопухолевая активность NTW-3456, выраженная в размере опухоли у животных, получавших лечение, по отношению к размеру опухоли у животных, не получавших лечения, в модельной системе карциномы щитовидной железы.
На Фиг. 39 изображено изменение массы тела с течением времени для массы тела животных, получавших NTW-3456, (маркер общей токсичности) в модельной системе карциномы эндометрия.
На Фиг. 40 изображена кривая размера опухоли для получавших NTW-3456 животных, показывающая его противоопухолевую активность в модельной системе карциномы эндометрия.
На Фиг. 41 изображена противоопухолевая активность NTW-3456, выраженная в размере опухоли у животных, получавших лечение, по отношению к размеру опухоли у животных, не получавших лечения, в модельной системе карциномы эндометрия.
На Фиг. 42 изображено изменение массы тела с течением времени для массы тела животных, получавших NTW-3456, (маркер общей токсичности) в модельной системе карциномы поджелудочной железы.
На Фиг. 43 изображена кривая размера опухоли для получавших NTW-3456 животных, показывающая его противоопухолевую активность в модельной системе карциномы поджелудочной железы.
На Фиг. 44 изображена противоопухолевая активность NTW-3456, выраженная в размере опухоли у животных, получавших лечение, по отношению к размеру опухоли у животных, не получавших лечения, в модельной системе карциномы поджелудочной железы.
На Фиг. 45 изображено изменение массы тела с течением времени для массы тела имеющих опухоль животных, получавших только NTW-3456 или NTW-3456 совместно с Abraxane®, (маркер общей токсичности) в модельной системе карциномы поджелудочной железы MiaPaCa-2.
На Фиг. 46 изображена кривая размера опухоли для животных, получавших только NTW-3456 или NTW-3456 совместно с Abraxane®, показывающая его противоопухолевую активность в модельной системе карциномы поджелудочной железы MiaPaCa-2.
На Фиг. 47 изображена противоопухолевая активность только NTW-3456 или NTW-3456 в комбинации с Abraxane®, выраженная в размере опухоли у животных, получавших лечение, по отношению к размеру опухоли у животных, не получавших лечения, в модельной системе карциномы поджелудочной железы MiaPaCa-2.
На Фиг. 48 изображено изменение массы тела с течением времени для массы тела имеющих опухоль животных, получавших только NTW-3456 или NTW-3456 совместно с Abraxane®, (маркер общей токсичности) в модельной системе карциномы поджелудочной железы Panc-1.
На Фиг. 49 изображена кривая размера опухоли для животных, получавших только NTW-3456 или NTW-3456 совместно с Abraxane®, показывающая его противоопухолевую активность в модельной системе карциномы поджелудочной железы Panc-1.
На Фиг. 50 обобщены данные о фармакологии NTW-3456 in vivo.
На Фиг. 51 показано влияние NTW-3456 на передачу сигнала в клетках MiaPaCa-2 и клетках BxPC3.
На Фиг. 52 показано влияние NTW-3475 на передачу сигнала в клетках MiaPaCa-2 и клетках BxPC3.
На Фиг. 53 обобщены данные об ингибирующей активности NTW-3456 и NTW-3475.
На Фиг. 54 изображена ингибирующая активность NTW-3456 в отношении роста клеток K562.
На Фиг. 55 изображено ингибирующее действие NTW-3456 на pCr1 в клетках K562.
На Фиг. 56 изображено ингибирующее действие NTW-3456 на индукцию каспазы 3/7 в клетках K562.
На Фиг. 57 обобщены данные об ингибирующей активности NTW-3456.
На Фиг. 58 показана кривая зависимости ингибирования FGFR1-FGFR-4 от дозы NTW-3456 в клетках BaF3.
На Фиг. 59 обобщены данные об ингибирующем действии NTW-3456 на рецепторы фактора роста фибробластов.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к химическим соединениям, имеющим общую формулу (I):
,
или к их фармацевтически приемлемым солям, где:
Z1, Z2, Z3 и Z4 независимо представляют собой H, или как описано ниже;
R выбран из:
(i) водорода, амино, алкиламино;
(ii) C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила;
(iii) K-Ar.
Ar представляет собой гетероарил или арил, каждый из которых замещен от 0 до 4 заместителями, независимо выбранными из:
(1) галогена, гидрокси, амино, амида, циано, -СООН, -SO2NH2, оксо, нитро и алкоксикарбонила; и
(2) C1-C6 алкила, С1-С6 алкокси, C3-C10 циклоалкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, C2-C6 алканоила, С1-С6 галогеналкила, C1-C6 галогеналкокси, моно- и ди-(C1-С6 алкил)амино, С1-С6 алкилсульфонила, моно- и ди-(C1-C6 алкил)сульфонамидо и моно- и ди-(C1-C6 алкил)аминокарбонила; фенил(C0-C4)алкила и (4-7-членный гетероцикл)C0-C4алкила, каждый из которых замещен от 0 до 4 вторичными заместителями, независимо выбранными из галогена, гидрокси, циано, оксо, имино, C1-C4 алкила, С1-С4 алкокси и С1-С4 галогеналкила;
K выбран из
a) О, S, SO, SO2;
b) (CH2)m, m=0-3, -O(СН2)p, p=1-3, -S(CH2)p, p=1-3, -N(CH2)p, p=1-3, -(CH2)pO, p=1-3;
c) NR1,
R1 представляет собой водород, алкил, циклоалкил, алкенил, алкинил, алкилтио, арил, арилалкил.
(iv) групп формулы (Ia):
,
где:
R2 представляет собой водород, C1-C4 алкил, оксо;
X представляет собой CH, когда R3 представляет собой водород; или X-R3 представляет собой O; или X представляет собой N, R3 представляет собой водород, C1-C6 алкил, C2-C6 алкенил, C2-C6 алкинил, C3-C10 арил или гетероарил, (C3-C7-циклоалкил)C1-C4алкил, С1-С6 галогеналкил, С1-С6 алкокси, С1-С6 алкилтио, С2-С6 алканоил, С1-С6 алкоксикарбонил, С2-С6 алканоилокси, моно- и ди-(С3-С8 циклоалкил)аминоС0-С4алкил, (4-7-членный гетероцикл)C0-C4алкил, С1-С6 алкилсульфонил, моно- и ди-(С1-С6 алкил)сульфонамидо и моно- и ди-(С1-С6 алкил)аминокарбонил, каждый из которых замещен от 0 до 4 заместителями, независимо выбранными из галогена, гидрокси, циано, амино, -COOH и оксо.
R11 и R12 собой независимо выбраны из водорода, F, Cl, Br, CN, C1-C4 алкила, C1-C6 алкокси.
R13, R14 и R15 независимо выбраны из водорода, C1-C4 алкила, C2-C6 алкенила, CF3, CF2H, CFH2, C2-C6 алкинила, C3-C10 арила или гетероарила, С1-С6 алкокси, С1-С6 алкилтио, С2-С6 алканоила, С1-С6 алкоксикарбонила, C2-C6 алканоилокси.
Кольцо A выбрано из группы, состоящей из:
Rx и Ry независимо выбраны из T-R4, или Rx и -Ry вместе со своими промежуточными атомами образуют ненасыщенное или частично ненасыщенное 5-7-членное конденсированное кольцо, имеющее от 0 до 3 кольцевых гетероатомов, выбранных из кислорода, серы или азота, где любой замещаемый атом углерода в указанном конденсированном кольце, образованном Rx и Ry, замещается оксо или T-R4, и любой замещаемый атом азота в указанном кольце, образованном Rx и Ry, замещается R5;
T представляет собой валентную связь или C1-4 алкилиденовую цепь;
R4 выбран из -R6, -галогено, -OR6, -C(=O)R6, -CO2R6, -COCOR6, -COCH2COR6, -NO2, -CN, -S(O)R6, -S(O)2R6, -SR6, -N(R5)2, -CON(R7)2, -SO2N(R7)2, -OC(=O)R6, -N(R7)COR6, -N(R7)CO2(необязательно замещенной C1-6 алифатической группы), -N(R5)N(R5)2, -C=NN(R5)2, -C=N-OR6, -N(R7)CON(R7)2, -N(R7)SO2N(R7)2, -N(R4)SO2R6 или -OC(=O)N(R7)2;
каждый R6 независимо выбран из водорода или необязательно замещенной группы, выбранной из C1-6 алифатической группы, C1-6 арила, гетероарильного кольца, состоящего из 5-10 атомов, или гетероциклического кольца, имеющего 5-10 атомов;
каждый R5 независимо выбран из -R7, -COR7, -CO2(C1-6 алифатической группы), -CON(R7)2 или -SO2R7, или два R5 одного и того же атома азота вместе образуют 5-8-членное гетероциклическое или гетероарильное кольцо;
каждый R7 независимо выбран из водорода или необязательно замещенной C1-6 алифатической группы, или два R7 одного и того же атома азота вместе с азотом образуют 5-8-членное гетероциклическое или гетероарильное кольцо;
R8 выбран из -R6, -галогено, -OR6, -C(=O)R6, -CO2R6, -COCOR6, -NO2, -CN, -SO2R6, -SR6, -N(R4)2, -CON(R5)2, -SO2N(R5)2, -OC(=O)R6, -N(R5)COR6, -N-(R5)CO2(необязательно замещенной C1-6 алифатической группы), -N(R5)N(R5)2, -C=NN(R5)2, -C=N-OR6, -N(R5)CON(R5)2, -N(R5)SO2N(R5)2, -N(R5)SO2R6 или -OC(=O)N(R5)2.
Rx и Ry (в положениях Z3 и Z4, соответственно) могут вместе образовывать конденсированное кольцо, формируя бициклическую кольцевую систему, содержащую Кольцо A. В альтернативном варианте R и Z2 также могут вместе образовывать конденсированное кольцо, формируя бициклическую кольцевую систему, содержащую Кольцо A. Предпочтительные Rx/Ry и R/Z2 кольца включают в себя 5-, 6- или 7-членное ненасыщенное или частично ненасыщенное кольцо, имеющее от 0 до 2 гетероатомов, где указанные Rx/Ry и R/Z2 кольца являются необязательно замещенными. Примеры систем Кольца A представлены ниже химическими соединениями от I-1 до I-26, где Z1-Z4 представляют собой азот или C(R8).
Предпочтительные бициклические системы Кольца A включают в себя I-1, I-2, I-3, I-4, I-5, I-6, I-7, I-8, I-14, I-15, I-16, I-17, I-19, I-23 и I-24, более предпочтительно I-1, I-2, I-3, I-5, I-8, I-14, I-15, I-16, I-17, I-19, I-23 и I-24, и наиболее предпочтительно I-1, I-14, I-16 и I-19.
В моноциклической системе Кольца A предпочтительные группы Rx, если они присутствуют, включают в себя водород, алкил- или диалкиламино, ацетамидо или C1-4 алифатическую группу, такую как метил, этил, циклопропил, изопропил или трет-бутил. Предпочтительные группы Ry, если они присутствуют, включают в себя T-R4, где T представляет собой валентную связь или метилен, и R4 представляет собой -R6, -N(R5)2 или -OR6. Примеры предпочтительных групп Ry включают в себя 2-пиридил, 4-пиридил, пиперидинил, метил, этил, циклопропил, изопропил, трет-бутил, алкил- или диалкиламино, ацетамидо, необязательно замещенный фенил, такой как фенил или галогензамещенный фенил, и метоксиметил.
В бициклической системе Кольца A, кольцо, образованное Rx и Ry, может быть замещенным или незамещенным. Подходящие заместители включают в себя -R6, -галогено, -OR6, -C(=O)R6, -CO2R6, -COCOR6, -NO2, -CN, -S(O)R6, -SO2R6, -SR6, -N(R5)2, -CON(R5)2, -SO2N(R5)2, -OC(=O)R6, -N(R4)COR6, -N-(R5)CO2(необязательно замещенную C1-6 алифатическую группу), -N(R5)N(R5)2, -C=NN(R5)2, -C=N-OR6, -N(R5)CON(R5)2, -N(R5)SO2N(R5)2, -N(R5)SO2R6 или -OC(=O)N(R5)2, где R и R5 такие, как описано выше. Предпочтительные заместители кольца Rx/Ry включают в себя -галогено, -R6, -OR6, -COR6, -CO2R6, -CON(R5)2, -CN или -N(R5)2, где R6 представляет собой водород или необязательно замещенную C1-6 алифатическую группу.
Вариант осуществления изобретения, который является особенно предпочтительным для лечения киназоопосредованных заболеваний, относится к соединениям, имеющим структурные формулы IIa, IIb и IIc:
,
или к их фармацевтически приемлемому производному или пролекарству, где:
R выбран из:
(i) водорода, амино, алкиламино;
(ii) C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила;
(iii) K-Ar.
Ar представляет собой гетероарил или арил, каждый из которых замещен от 0 до 4 заместителями, независимо выбранными из:
(1) галогена, гидрокси, амино, амида, циано, -СООН, -SO2NH2, оксо, нитро и алкоксикарбонила; и
(2) C1-C6 алкила, С1-С6 алкокси, C3-C10 циклоалкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, C2-C6 алканоила, С1-С6 галогеналкила, C1-C6 галогеналкокси, моно- и ди-(C1-С6 алкил)амино, С1-С6 алкилсульфонила, моно- и ди-(C1-C6 алкил)сульфонамидо и моно- и ди-(C1-C6 алкил)аминокарбонила; фенил(C0-C4)алкила и (4-7-членный гетероцикл)C0-C4алкила, каждый из которых замещен от 0 до 4 вторичными заместителями, независимо выбранными из галогена, гидрокси, циано, оксо, имино, C1-C4 алкила, С1-С4 алкокси и С1-С4 галогеналкила.
K выбран из
a) О, S, SO, SO2;
b) (CH2)m, m=0-3, -O(СН2)p, p=1-3, -S(CH2)p, p=1-3, -N(CH2)p, p=1-3, -(CH2)pO, p=1-3;
c) NR1,
R1 представляет собой водород, алкил, циклоалкил, алкенил, алкинил, алкилтио, арил, арилалкил.
(iv) групп формулы (Ia):
,
где:
R2 представляет собой водород, C1-C4 алкил, оксо;
X представляет собой CH, когда R3 представляет собой водород; или X-R3 представляет собой O; или X представляет собой N, R3 представляет собой водород, C1-C6 алкил, C2-C6 алкенил, C2-C6 алкинил, C3-C10 арил или гетероарил, (C3-C7-циклоалкил)C1-C4алкил, С1-С6 галогеналкил, С1-С6 алкокси, С1-С6 алкилтио, С2-С6 алканоил, С1-С6 алкоксикарбонил, С2-С6 алканоилокси, моно- и ди-(С3-С8 циклоалкил)аминоС0-С4алкил, (4-7-членный гетероцикл)C0-C4алкил, С1-С6 алкилсульфонил, моно- и ди-(С1-С6 алкил)сульфонамидо и моно- и ди-(С1-С6 алкил)аминокарбонил, каждый из которых замещен от 0 до 4 заместителями, независимо выбранными из галогена, гидрокси, циано, амино, -COOH и оксо.
Het выбран из любого гетероцикла, который замещен от 0 до 4 заместителями, независимо выбранными из:
(i) C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила;
(ii) галогена, гидрокси, амино, амида, циано, -COOH, -SO2NH2, оксо, нитро и аклкоксикарбонила;
(iii) арила.
Заместители в индоле являются следующими:
R11 и R12 независимо выбраны из водорода, F, Cl, Br, CN, C1-C4 алкила, C1-C6 алкокси.
R13, R14 и R15 независимо выбраны из водорода, C1-C4 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, C3-C10 арила или гетероарила, С1-С6 алкокси, С1-С6 алкилтио, С2-С6 алканоила, С1-С6 алкоксикарбонила, C2-C6 алканоилокси.
Предпочтительные группы R, имеющие структурные формулы (I), перечислены ниже:
Предпочтительные группы Het, имеющие структурные формулы (II), перечислены ниже, где заместителем могут быть конкретные указанные здесь заместители, или могут быть один или несколько заместителей, как указано выше:
R’ выбран из:
(i) водорода;
(ii) C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила;
(iii) арила, который может иметь 1-4 оптических заместителя;
(iv) -C(=O)R6 (R6 описан ниже).
Предпочтительные замещенные индольные группы, имеющие структурные формулы (I), перечислены ниже:
Варианты осуществления настоящего изобретения включают в себя:
В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к способу получения соединений по настоящему изобретению. Соединения по настоящему изобретению, как правило, могут быть получены с использованием в качестве исходного материала 4,6-дихлор-2-метилсульфонилпиримидина или 2,4,6-трихлорпиримидина или 4,6-дихлор-2-(метилтио)пиримидина. Соединение (I) может содержать различные стереоизомеры, геометрические изомеры, таутомерные изомеры и тому подобное. Все возможные изомеры и их смеси включены в настоящее изобретение, и их соотношение в смеси специально не ограничивается.
Соединения производные пиримидина, имеющие формулы (IIa, IIb и IIc), в настоящем изобретении могут быть синтезированы из коммерчески доступных предшественников по известным протоколам. В качестве примера, путь синтеза, аналогичный тому, который показан на любой из следующих Схем, может быть использован вместе со способами синтеза, известными в области синтетической органической химии, или их вариантами, которые могут быть подобраны специалистами в данной области техники. Каждая переменная в следующих схемах относится к группе, соответствующей описанию приведенных здесь соединений.
В следующих ниже Схемах термин «восстановление» относится к процессу восстановления нитрогруппы в аминогруппу, или процессу превращения сложноэфирной группы в спирт. Восстановление нитрогруппы может быть осуществлено несколькими способами, известными специалистам в области органического синтеза, включая без ограничений каталитическую гидрогенизацию, восстановление SnCl2 и восстановление дихлоридом титана. В следующих ниже Схемах термин «гидролиз» относится к реакции субстрата или реактанта с водой. В частности, термин «гидролиз» относится к превращению сложноэфирной или нитритной группы в карбоновую кислоту. Этот процесс можно катализировать при помощи различных кислот или оснований, хорошо известных специалистам в области органического синтеза.
Химические соединения, имеющие Структурные формулы (IIa, IIb и IIc), могут быть получены при помощи известных химических реакций и методик. Следующие основные способы получения представлены, чтобы помочь специалисту в области синтеза ингибиторов, при этом более подробные примеры приводятся в экспериментальной части, описывающей рабочие примеры.
Пропенил-пиразол амин, имеющий структурную формулу (III), не является коммерчески доступным. Он может быть получен несколькими описанными ранее способами (см., например, предварительную заявку на патент США №61/555738).
Предшественники замещенного индол-5-ола, имеющие структурную формулу (IV), могут быть приобретены у поставщиков или синтезированы из коммерчески доступных предшественников по известным протоколам (WO 2004/009542, P33-38; Journal of Medicinal Chemistry, 2006, Vol 49, No. 7, P2143-2146; Org. Lett. Vol 10, No 12, 2008, P 2369-2372; WO 00/47212, P245-250; WO 2009036055 A1, P57).
В частности, о предшественнике 4-7-d-фториндол-5-ол, имеющем структурную формулу (IVa), не сообщалось ранее, и он может быть получен таким же способом.
Например, как показано на Схеме 1, предшественник (IV) может быть получен из коммерчески доступных исходных материалов в несколько этапов. Также для получения этого химического соединения могут быть использованы различные пути синтеза.
Получение соединений, имеющих структурные формулы (IIa, IIb и IIc), в настоящем изобретении может быть осуществлено способами, известными из уровня техники.
Как показано на Схеме 2, производное пиримидина (IIa) может быть синтезировано при помощи реакции 2,4,6-трихлорпиримидина или 4,6-дихлор-2-(метилсульфонил)пиримидина с рядом замещенных индол-5-олов с получением промежуточного соединения b дихлорпиримидина, которое может реагировать с получением монохлор-промежуточного соединения c. Удаление последнего атома хлора RH может быть осуществлено путем повышения температуры, с получением конечного соединения (IIa). Эту реакцию можно проводить поэтапно или в одном реакторе. Альтернативная последовательность реакций может быть использована для получения производных пиримидина. Таким же способом могут быть синтезированы Соединения IIb и IIc.
Реакцию предпочтительно проводят в присутствии инертного растворителя. Нет никаких специальных ограничений, касающихся природы используемого растворителя, при условии, что он не оказывает отрицательного влияния на реакцию или на участвующие в ней реагенты, и что он способен растворять реагенты, по меньшей мере, в определенной степени. Примеры подходящих растворителей включают в себя алифатические углеводороды, такие как гексан, гептан, лигроин и петролейный эфир; ароматические углеводороды, такие как бензол, толуол и ксилол; галогенированные углеводороды, особенно ароматические и алифатические углеводороды, такие как метиленхлорид, хлороформ, четыреххлористый углерод, дихлорэтан, хлорбензол и дихлорбензолы; сложные эфиры, такие как этилформиат, этилацетат, пропилацетат, бутилацетат и диэтилкарбонат; простые эфиры, такие как диэтиловый эфир, диизопропиловый эфир, тетрагидрофуран, диоксан, диметоксиэтан и диметиловый эфир диэтиленгликоля; кетоны, такие как ацетон, метилэтилкетон, метилизобутилкетон, изофорон и циклогексанон; нитросоединения, которые могут представлять собой нитроалканы или нитроарены, такие как нитроэтан и нитробензол; нитрилы, такие как ацетонитрил и изобутиронитрил; амиды, которые могут представлять собой амиды жирных кислот, такие как формамид, диметилформамид, диметилацетамид и гексаметилфосфорный триамид; и сульфоксиды, такие как диметилсульфоксид и сульфолан.
Реакция может протекать в широком диапазоне температур, и точная температура реакции не критична для настоящего изобретения. В основном, авторы настоящего изобретения установили, что удобно проводить реакцию при температуре от -50°C до 100°C.
Настоящее изобретение относится к композициям веществ, которые представляют собой композиции одного или нескольких лекарственных средств и фармацевтически приемлемого носителя. В этой связи, настоящее изобретение относится к композиции для введения млекопитающему субъекту, которая может включать в себя соединение формулы I или его фармацевтически приемлемые соли.
Фармацевтически приемлемые соли химических соединений по настоящему изобретению включают в себя соли фармацевтически приемлемых неорганических и органических кислот и оснований. Примеры подходящих кислотных солей включают в себя ацетат, адипат, альгинат, аспартат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, бутират, цитрат, камфорат, камфорсульфонат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, этансульфонат, формиат, фумарат, глюкогептаноат, глицерофосфат, гликолят, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидройодид, 2-гидроксиэтансульфонат, лактат, малеат, малонат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, оксалат, пальмоат, пектинат, персульфат, 3-фенилпропионат, фосфат, пикрат, пивалат, пропионат, салицилат, сукцинат, сульфат, тартрат, тиоцианат, тозилат и ундеканоат. Другие кислоты, такие как щавелевая кислота, которые сами по себе не являются фармацевтически приемлемыми, могут быть использованы для получения солей, используемых в качестве промежуточных соединений при получении соединений по настоящему изобретению и их фармацевтически приемлемых кислотно-аддитивных солей.
Соли, полученные из соответствующих оснований, включают в себя соли щелочных металлов (например, натрия и калия), щелочноземельных металлов (например, магния), аммония и N+(C1-4алкил)4. Настоящее изобретение также предусматривает кватернизацию любой основной азотсодержащей группы раскрытых здесь химических соединений. При помощи такой кватернизации могут быть получены водо- или маслорастворимые или диспергируемые продукты.
Композиции по настоящему изобретению могут быть введены перорально, парентерально, путем ингаляции в виде спрея, местно, ректально, назально, трансбуккально, вагинально или через имплантированный резервуар. Используемый здесь термин «парентеральный» включает в себя подкожные, внутривенные, внутримышечные, внутрисуставные, внутрисиновиальные, внутригрудинные, интратекальные, внутрипеченочные, внутриочаговые и внутричерепные инъекции или вливания. Предпочтительно, композиции вводят перорально, внутрибрюшинно или внутривенно.
Фармацевтически приемлемые композиции по настоящему изобретению могут вводиться перорально в виде любой лекарственной формы, подходящей для перорального введения, включая без ограничений капсулы, таблетки, пастилки, настойки, суспензии, сиропы, капсулы-имплантаты, жевательные резинки, водные суспензии или растворы.
Пероральные композиции могут содержать дополнительные ингредиенты, такие как связующее вещество, такое как микрокристаллическая целлюлоза, трагакантовая камедь или желатин; вспомогательное вещество, такое как крахмал или лактоза, дезинтегрирующий агент, такой как альгиновая кислота, кукурузный крахмал и тому подобное; скользящее вещество, такое как стеарат магния; глидант, такой как коллоидный диоксид кремния; и подсластитель, такой сахароза или сахарин, или ароматизатор, такой как мята перечная, метилсалицилат или апельсиновый ароматизатор. Когда единица дозирования лекарственной формы представляет собой капсулу, она может дополнительно содержать жидкий носитель, такой как жидкое масло. Другие единицы дозирования лекарственной формы могут содержать другие различные материалы, модифицирующие физическую форму единицы дозирования, такие как, например, покрытие. Таким образом, таблетки или пилюли могут быть покрыты сахаром, шеллаком или другими агентами для энтеросолюбильного покрытия. Сироп может содержать, помимо активных ингредиентов, сахарозу в качестве подсластителя и некоторые консерванты, красители и ароматизаторы. Материалы, используемые для получения этих различных композиций, должны быть фармацевтически или ветеринарно чистыми и нетоксичными в используемых количествах.
Для целей парентерального терапевтического введения активный ингредиент может быть включен в раствор или суспензию. Растворы или суспензии также могут включать в себя следующие компоненты: стерильный разбавитель, такой как вода для инъекций, физиологический раствор, нелетучие масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; антибактериальные агенты, такие как бензиловый спирт или метилпарабены; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатирующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота; буферы, такие как ацетаты, цитраты или фосфаты, и агенты для регулирования тоничности, такие как хлорид натрия или декстроза. Препарат для парентерального введения может быть заключен в ампулы, одноразовые шприцы или содержащие много доз флаконы, изготовленные из стекла или пластика.
Фармацевтические формы, пригодные для инъекционного применения, включают в себя стерильные растворы, дисперсии, эмульсии и стерильные порошки. Конечная форма должна быть стабильной в условиях производства и хранения. Кроме того, конечная фармацевтическая форма должна быть защищена от контаминации и, таким образом, должна быть способной ингибировать рост микроорганизмов, таких как бактерии или грибы. Может вводиться однократная внутривенная или внутрибрюшинная доза. Кроме того, могут использоваться медленное длительное вливание или многократные кратковременные вливания в течение суток, как правило, продолжительностью от 1 до 8 дней. Чередующиеся каждодневное введение дозы или введение дозы один раз в несколько дней также могут применяться.
Стерильные инъекционные растворы могут быть получены путем включения соединения в необходимом количестве в один или несколько подходящих растворителей, в которые при необходимости могут быть добавлены другие ингредиенты, перечисленные выше или известные специалистам в данной области техники. Стерильные инъекционные растворы могут быть получены путем включения химического соединения в необходимом количестве в подходящий растворитель при необходимости с различными другими ингредиентами. За этим могут следовать процедуры стерилизации, такие как фильтрация. Как правило, дисперсии получают путем введения соединения в стерильный сосуд, который также содержит диспергирующую среду и другие необходимые ингредиенты, как указано выше. В случае стерильного порошка предпочтительные способы включают в себя вакуумную сушку или лиофилизацию, во время которых добавляют любые необходимые ингредиенты.
Подходящие фармацевтические носители включают в себя стерильную воду; физиологический раствор, декстрозу; раствор декстрозы в воде или физиологическом растворе; продукты конденсации касторового масла и этиленоксида, содержащие от примерно 30 до примерно 35 моль этиленоксида на моль касторового масла; жидкую кислоту; низшие алканолы; масла, такие как кукурузное масло; арахисовое масло, кунжутное масло и тому подобное, с эмульгаторами, такими как моно- или диглицериды жирной кислоты или фосфатид, например, лецитин, и тому подобное; гликоли; полиалкиленгликоли; водные среды в присутствии суспендирующего агента, например, карбоксиметилцеллюлоза натрия; альгинат натрия; поливинилпирролидон; и тому подобное, отдельно или с подходящими диспергирующими агентами, такими как лецитин; полиоксиэтилена стеарат; и тому подобное. Носитель также может содержать адъюванты, такие как консерванты, стабилизаторы, увлажнители, эмульгаторы и тому подобное, вместе с усилителем всасывания. Во всех случаях конечная форма, как было отмечено, должна быть стерильной и также должна быть способной легко проходить через инъекционное устройство, такое как полая игла. Необходимая вязкость может обеспечиваться и поддерживается путем правильного выбора растворителей или вспомогательных веществ. Кроме того, могут применяться использование молекулярных или мелкодисперсных покрытий, таких как лецитин, правильный выбор размера частиц в дисперсиях, или использование материалов с поверхностно-активными свойствами.
В соответствии с настоящим изобретением предложены композиции, содержащие производные триазина, и способы, пригодные для in vivo доставки производных триазина в форме наночастиц, которые подходят для любого из вышеуказанных путей введения.
В патентах США №№5916596, 6506405 и 6537579 описано получение наночастиц из биосовместимых полимеров, таких как альбумин. Таким образом, в соответствии с настоящим изобретением предложены способы получения наночастиц настоящего изобретения методом испарения растворителя из эмульсии типа «масло в воде», полученной в условиях высокой силы сдвига (например, таких как обработка ультразвуком, гомогенизация под высоким давлением или тому подобное).
Альтернативно, фармацевтически приемлемые композиции по настоящему изобретению могут вводиться в виде суппозиториев для ректального введения. Они могут быть получены путем смешивания агента с подходящим нераздражающим вспомогательным веществом, которое является твердым при комнатной температуре, но жидким при ректальной температуре, и таким образом будет плавиться в прямой кишке с высвобождением лекарственного вещества. Такие материалы включают в себя масло какао, пчелиный воск и полиэтиленгликоли.
Фармацевтически приемлемые композиции по настоящему изобретению также могут вводиться местно, особенно в тех случаях, когда лечение направлено на участки или органы, легко доступные для местного применения, включая заболевания глаз, кожи или нижних отделов кишечника. Подходящие препараты для местного применения легко могут быть получены для каждого из этих участков или органов.
Местное применение для нижних отделов кишечника может осуществляться в виде препарата в форме ректального суппозитория (см. выше) или в виде подходящего препарата для клизмы. Местные трансдермальные пластыри также могут применяться.
Для местного применения фармацевтически приемлемые композиции могут быть приготовлены в виде подходящей мази, содержащей активный компонент, суспендированный или растворенный в одном или нескольких носителях. Носители для местного введения соединений по настоящему изобретению включают в себя без ограничений минеральное масло, жидкий вазелин, белый вазелин, пропиленгликоль, полиоксиэтилен, полиоксипропилен, эмульгирующий воск и воду. В другом варианте фармацевтически приемлемые композиции могут быть приготовлены в виде подходящего лосьона или крема, содержащего активные компоненты, суспендированные или растворенные в одном или нескольких фармацевтически приемлемых носителях. Подходящие носители включают в себя без ограничений минеральное масло, сорбитанмоностеарат, полисорбат 60, воск цетиловых эфиров, цетеариловый спирт, 2-октилдодеканол, бензиловый спирт и воду.
Для офтальмологического применения фармацевтически приемлемые композиции могут быть приготовлены в виде тонкодисперсных суспензий в изотоническом стерильном физиологическом растворе с доведенным значением pH или предпочтительно в виде растворов в изотоническом стерильном физиологическом растворе с доведенным значением pH, содержащих или не содержащих консервант, такой как хлорид бензалкония. В другом варианте для офтальмологического применения фармацевтически приемлемые композиции могут быть приготовлены в виде мази, такой как вазелин.
Фармацевтически приемлемые композиции по настоящему изобретению также могут вводиться в виде интраназального аэрозоля или ингаляции. Такие композиции получают способами, хорошо известными в области приготовления фармацевтических препаратов, и они могут быть получены в форме растворов в физиологическом растворе с использованием бензилового спирта или других подходящих консервантов, стимуляторов абсорбции для повышения биодоступности, фторуглеродов и/или других стандартных солюбилизирующих или диспергирующих агентов.
Наиболее предпочтительно, фармацевтически приемлемые композиции по настоящему изобретению представляют собой композиции для перорального введения.
В соответствии с настоящим изобретением соединения по настоящему изобретению могут применяться для лечения заболеваний, связанных с клеточной пролиферацией или гиперпролиферацией, таких как различные виды рака, которые включают в себя без ограничений опухоли носовой полости, придаточных пазух носа, носоглотки, полости рта, ротоглотки, гортани, гортаноглотки, слюнных желез, и параганглиомы. Соединения по настоящему изобретению также могут применяться для лечения рака печени и желчных протоков (в особенности гепатоцеллюлярной карциномы), рака кишечника, в особенности колоректального рака, рака яичников, мелкоклеточного и немелкоклеточного рака легкого, рака молочной железы, сарком (включая фибросаркому, злокачественную фиброзную гистиоцитому, эмбриональную рабдомиосаркому, лейомиосаркому, нейрофибросаркому, остеосаркому, синовиальную саркому, липосаркому и альвеолярную саркому мягких тканей), новообразований центральной нервной системы (в частности, рака головного мозга) и лимфом (включая лимфому Ходжкина, лимфоплазмацитоидную лимфому, фолликулярную лимфому, лимфому лимфоидной ткани слизистых оболочек, лимфому из клеток мантийной зоны, B-клеточную крупноклеточную лимфому, лимфому Беркитта и T-клеточную анапластическую крупноклеточную лимфому).
Соединения и способы по настоящему изобретению при самостоятельном применении или при применении в комбинации с другими агентами (например, химиотерапевтическими агентами или белковыми терапевтическими агентами, описанными ниже) также могут применяться для лечения различных патологий, включая без ограничений, например, инсульт, сердечно-сосудистое заболевание, инфаркт миокарда, застойную сердечную недостаточность, кардиомиопатию, миокардит, ишемическую болезнь сердца, коронарную недостаточность, кардиогенный шок, васкулярный шок, легочную гипертензию, отек легких (в том числе кардиогенный отек легких), плевральный выпот, ревматоидный артрит, диабетическую ретинопатию, пигментный ретинит, ретинопатию, включая диабетическую ретинопатию и ретинопатию недоношенных, воспалительные заболевания, рестеноз, астму, острый респираторный дистресс-синдром взрослых (РДСВ), волчанку, транссудацию, защиту от ишемического или реперфузионного повреждения, такого как ишемическое или реперфузионное повреждение, полученное во время трансплантации органов, индукцию трансплантационной толерантности; ишемическое или реперфузионное повреждение после ангиопластики; артриты (такие как, ревматоидный артрит, псориатический артрит или остеоартрит); рассеянный склероз; воспалительное заболевание кишечника, включая неспецифический язвенный колит и болезнь Крона; волчанку (системную красную волчанку); реакцию «трансплантат против хозяина»; опосредованные T-клетками аллергические заболевания, включая контактную гиперчувствительность, гиперчувствительность замедленного типа и глютензависимую энтеропатию (целиакию); диабет 1 типа; псориаз; контактный дерматит (включая сумаховый дерматит); тиреоидит Хашимото; синдром Шегрена; аутоиммунный гипертиреоз, такой как болезнь Грейвса; болезнь Аддисона (аутоиммунное заболевание надпочечников); аутоиммунное полигландулярное заболевание (также известное как аутоиммунный полигландулярный синдром); аутоиммунную алопецию; пернициозную анемию; витилиго; аутоиммунный гипопитуитаризм; синдром Гийена-Барре; другие аутоиммунные заболевания; различные виды рака, в том числе те, при которых имеет место активация или сверхэкспрессия киназ семейства Src, такие как карциномы толстой кишки и тимома, или виды рака, при которых киназная активность способствует росту или выживанию опухоли; гломерулонефрит, сывороточную болезнь; крапивницу; аллергические заболевания, такие как респираторные аллергии (астма, сенная лихорадка, аллергический ринит) или кожные аллергии; фунгоидный микоз; острые воспалительные реакции (такие как острый респираторный дистресс-синдром взрослых и ишемическо-реперфузионное повреждение); дерматомиозит; гнездную алопецию; стойкую солнечную эритему; экзему; болезнь Бехчета; ладонно-подошвенный пустулез; гангренозную приодермию; синдром Сезари; атопический дерматит; системную склеродермию; ограниченную склеродермию; периферическую ишемию конечностей и ишемическую болезнь конечностей; заболевания костей, такие как остеопороз, остеомаляция, гиперпаратиреоз, болезнь Педжета и почечная остеодистрофия; синдромы транссудации, включая синдромы транссудации, вызванные химиотерапией или иммуномодуляторами, такими как IL-2; повреждение или травму спинного мозга и головного мозга; глаукому; заболевания сетчатки, включая дегенерацию желтого пятна; витреоретинальное заболевание; панкреатит; васкулит, включая ангиит, болезнь Кавасаки, облитерирующий тромбангиит, гранулематоз Вегенера и болезнь Бехчета; склеродермию; преэклампсию; талассемию; саркому Капоши; болезнь Гиппеля Линдау и тому подобное.
В соответствии с настоящим изобретением соединения по настоящему изобретению могут применяться для лечения заболеваний, связанных с нежелательной клеточной пролиферацией или гиперпролиферацией, включая выявление млекопитающего, страдающего указанным заболеванием или состоянием, и введение указанному больному млекопитающему композиции, содержащей соединение формулы 1, где данное заболевание или состояние связано с киназой.
В соответствии с настоящим изобретением соединения по настоящему изобретению могут применяться для лечения заболеваний, связанных с нежелательной клеточной пролиферацией или гиперпролиферацией, включая выявление млекопитающего, страдающего указанным заболеванием или состоянием, и введение указанному больному млекопитающему композиции, содержащей соединение формулы 1, где данное заболевание или состояние связано с тирозинкиназой.
В соответствии с настоящим изобретением соединения по настоящему изобретению могут применяться для лечения заболеваний, связанных с нежелательной клеточной пролиферацией или гиперпролиферацией, включая выявление млекопитающего, страдающего указанным заболеванием или состоянием, и введение указанному больному млекопитающему композиции, содержащей соединение формулы 1, где данное заболевание или состояние связано с киназой, которая является серинкиназой или треонинкиназой.
В соответствии с настоящим изобретением соединения по настоящему изобретению могут применяться для лечения заболеваний, связанных с нежелательной клеточной пролиферацией или гиперпролиферацией, включая выявление млекопитающего, страдающего указанным заболеванием или состоянием, и введение указанному больному млекопитающему композиции, содержащей соединение формулы 1, где данное заболевание или состояние связано с киназой, которая является киназой семейства Src.
Настоящее изобретение также относится к способам лечения млекопитающего, страдающего вышеуказанными заболеваниями или состояниями. Количество соединений по настоящему изобретению, которое может быть объединено с материалами-носителями для получения композиции в виде разовой лекарственной дозы, будет изменяться в зависимости от получающего лечения организма и конкретного способа введения. Предпочтительно, рецептуры композиций должны быть составлены таким образом, чтобы пациенту, получающему эти композиции, могла быть введена доза ингибитора величиной от 0,01 до 100 мг на килограмм массы тела в сутки.
В одном аспекте соединения по настоящему изобретению вводятся в комбинации с химиотерапевтическим агентом, противовоспалительным агентом, антигистаминными препаратами, иммуномодулятором, терапевтическим антителом или ингибитором протеинкиназы, например, ингибитором тирозинкиназы, субъекту, нуждающемуся в таком лечении.
Способ включает в себя введение одного или нескольких соединений по настоящему изобретению больному млекопитающему. Способ может дополнительно включать в себя введение второго активного агента, такого как цитотоксический агент, включая алкилирующие агенты, факторы некроза опухоли, интеркаляторы, ингибиторы микротубулина и ингибиторы топоизомеразы. Второй активный агент может совместно вводиться в составе той же композиции или в составе второй композиции. Примеры подходящих вторых активных агентов включают в себя без ограничений цитотоксическое лекарственное средство, такое как активицин; акларубицин; акозадола гидрохлорид; акронин; адозелезин; альдеслейкин; алтретамин; амбомицин; аметантрона ацетат; аминоглутетимид; амсакрин; анастрозол; антрамицин; аспарагиназа; асперлин; азацитидин; азатепа; азотомицин; батимастат; бензодепа; бикалутамид; бисантрен гидрохлорид; биснафида димезилат; бизелезин; блеомицина сульфат; бреквинар натрия; бропиримин; бусульфан; кактиномицин; калустерон; карацемид; карбетимер; карбоплатин; кармустин; карубицина гидрохлорид; карзелезин; цедефингол; хлорамбуцил; циролемицин; цисплатин; кладрибин; криснатола мезилат; циклофосфамид; цитарабин; дакарбазин; дактиномицин; даунорубицин гидрохлорид; децитабин; дексормаплатин; дезагуанин; дезагуанина мезилат; диазиквон; доцетаксел; доксорубицин; доксорубицина гидрохлорид; дролоксифен; дролоксифена цитрат; дромостанолона пропионат; даузомицин; эдатрексат; эфломитина гидрохлорид; элсамитруцин; энлоплатин; энпромат; эпипропидин; эпирубицина гидрохлорид; эрбулозол; эзорубицина гидрохлорид; эстрамустин; эстрамустина натрия фосфат; этанидозол; этиодизированное масло 131; этопозид; этопозида фосфат; этоприн; фадрозола гидрохлорид; фазарабин; фенретинид; флоксуридин; флударабина фосфат; фторурацил; флуроцитабин; фосквидон; фостриецин натрия; гемцитабин; гемцитабина гидрохлорид; золото Au 198; гидроксимочевину; идарубицина гидрохлорид; ифосфамид; илмофозин; интерферон альфа-2a; интерферон альфа-2b; интерферон альфа-n1; интерферон альфа-n3; интерферон бета-Ia; интерферон гамма-Ib; ипроплатин; иринотекана гидрохлорид; ланреотида ацетат; лектрозол; лейпролида ацетат; лиарозола гидрохлорид; лометаксол натрия; ломустин; лозоксантрона гидрохлорид; мазопрокол; майтанзин; мехлорэтамина гидрохлорид; мегестрола ацетат; меленгестрола ацетат; мелфалан; меногарил; меркаптопурин; метотрексат; метотрексат натрия; метоприн; метуредепа; митиндомид; митокарцин; митокромин; митогиллин; митомалцин; митомицин; митоспер; митотан; митоксантрона гидрохлорид; микофеноловая кислота; нокодазол; ногаламицин; ормаплатин; оксисуран; паклитаксел; пегаспаргаза; пелиомицин; пентамустин; пепломицина сульфат; перфосфамид; пипоброман; пипосульфан; пироксантрона гидрохлорид; пликамицин; пломестан; порфимер натрия; порфиромицин; преднимустин; прокарбазина гидрохлорид; пуромицин; пуромицина гидрохлорид; пиразофурин; рибоприн; роглетимид; сафингол; сафингола гидрохлорид; семустин; симтразен; спарфосат натрия; спарсомицин; спирогермания гидрохлорид; спиромустин; спироплатин; стрептонигрин; стрептозоцин; хлорид стронция Sr 89; сулофенур; тализомицин; таксан; таксоид; текогалан натрия; тегафур; телоксантрона гидрохлорид; темопорфин; тенипозид; тероксирон; тестолактон; тиамиприн; тиогуанин; тиотепа; тиазофурин; тирапазамин; топотекана гидрохлорид; торемифена цитрат; трестолона ацетат; трицирибина фосфат; триметрексат; триметрексата глюкуронат; трипторелин; тубулозола гидрохлорид; иприт урацила; уредепа; вапреотид; вертепорфин; винбластина сульфат; винкристина сульфат; виндезин; виндезина сульфат; винепидина сульфат; винглицината сульфат; винлеурозина сульфат; винорелбина тартрат; винрозидина сульфат; винзолидина сульфат; ворозол; зениплатин; зиностатин и зорубицина гидрохлорид.
В соответствии с настоящим изобретением соединения и композиции могут применяться в субтоксических количествах в комбинации с другими агентами для достижения высокой избирательной активности при лечении неопухолевых заболеваний, таких как заболевания сердца, инсульт и нейродегенеративные заболевания (Whitesell et al., Curr Cancer Drug Targets (2003), 3(5), 349-58).
Примеры терапевтических агентов, которые могут вводиться в комбинации с соединениями по настоящему изобретению, включают в себя ингибиторы EGFR, такие как гефитиниб, эрлотиниб и цетуксимаб. Ингибиторы Her2 включают в себя канертиниб, EB-569 и GW-572016. Также включенными являются ингибиторы Src, дазатиниб, а также Касодекс (бикалютамид), тамоксифен, ингибиторы киназы MEK-1, ингибиторы MARK киназы, ингибиторы PI3 и ингибиторы PDGF, такие как иматиниб, ингибиторы Hsp90, такие как 17-AAG и 17-DMAG. Также включенными являются антиангиогенные и антиваскулярные агенты, которые путем нарушения кровоснабжения солидных опухолей заставляют раковые клетки переходить в состояние покоя, лишая их питания. Кастрация, которая также делает непролиферативными андрогензависимые карциномы, также может применяться. Также включенными являются ингибиторы IGF1R, ингибиторы нерецепторных и рецепторных тирозинкиназ и ингибиторы интегрина.
Фармацевтическая композиция и способ по настоящему изобретению также могут комбинироваться с другими белковыми терапевтическими агентами, такими как цитокины, иммуномодулирующие агенты и антитела. Используемый здесь термин «цитокин» включает в себя хемокины, интерлейкины, лимфокины, монокины, колониестимулирующие факторы и белки, ассоциированные с рецепторами, а также их функциональные фрагменты. Используемый здесь термин «функциональный фрагмент» относится к полипептиду или пептиду, обладающему биологической функцией или активностью, которая идентифицируется путем определенного функционального анализа. Цитокины включают в себя эндотелиальный моноцит-активирующий пептид II (EMAP-II), гранулоцитарно-макрофагальный КСФ (ГМ-КСФ), гранулоцитарный КСФ (Г-КСФ), макрофагальный КСФ (М-КСФ), IL-1, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-12 и IL-13, интерфероны и тому подобное, которые связаны с конкретными биологическими, морфологическими или фенотипическими изменениями в клетке или в клеточном механизме.
Другие терапевтические агенты для комбинированной терапии включают в себя циклоспорины (например, циклоспорин A), CTLA4-Ig, антитела, такие как ICAM-3, анти-рецептор IL-2 (анти-Tac), анти-CD45RB, анти-CD2, анти-CD3 (OKT-3), анти-CD4, анти-CD80, анти-CD86, агенты, блокирующие взаимодействие между CD40 и gp39, такие как антитела, специфичные по отношению к CD40 и по отношению к gpn39 (т.е. CD154), слитые белки, полученные из CD40 и gp39 (CD40Ig и CD8gp39), ингибиторы, такие как ингибиторы функции фактора ядерной транслокации NF-κB, такие как дезоксиспергуалин (DSG), ингибиторы биосинтеза холестерина, такие как ингибиторы ГМГ-КоА редуктазы (ловастатин и симвастатин), нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП), такие как ибупрофен, и ингибиторы циклооксигеназы, такие как рофекоксиб, стероиды, такие как преднизон или дексаметазон, соединения золота, антипролиферативные агенты, такие как метотрексат, FK-506 (такролимус, програф), мофетила микофенолат, цитотоксические препараты, такие как азатиоприн и циклофосфамид, ингибиторы ФНО-α, такие как тенидап, анти-ФНО антитела или растворимый рецептор ФНО, и рапамицин (Сиролимус или Рапамун) или их производные.
Когда другие терапевтические агенты используются в комбинации с соединениями по настоящему изобретению, они могут использоваться, например, в количествах, рекомендованных в Настольном справочнике врача (НСВ), или иначе определенных средним специалистом в данной области техники.
Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим одно или несколько раскрытых здесь соединений в виде фармацевтически приемлемых солей, гидратов, сольватов, кристаллических форм и их отдельных стереоизомеров (например, диастереомеров, энантиомеров) в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем. Они включают в себя без ограничений композиции, в которых соединения по настоящему изобретению находятся в нейтральной или солевой форме.
Термин «фармацевтически приемлемые соли» включает в себя кислотно-аддитивные соли (образованные свободными аминогруппами белка) и соли, которые образованы неорганическими кислотами, такими как, например, соляная или фосфорная кислота, или такими органическими кислотами, как уксусная, щавелевая, винная, миндальная и тому подобные кислоты. Соли, образованные свободными карбоксильными группами, также могут быть получены из неорганических оснований, таких как, например, гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или железа, и таких органических оснований, как изопропиламин, триметиламин, гистидин, прокаин и тому подобное.
«Соли» представляют собой химические соединения двух ионизируемых компонентов (например, при растворении в воде), одного кислотного и другого основного по отношению друг к другу. Находясь в форме соли, лекарственное средство может выступать в роли или кислотного, или основного компонента.
«Фармацевтически приемлемые соли» включают в себя любые соли, образованные соединением, где такая соль является безопасной для животного при приеме внутрь (например, нетоксичной для человека при пероральном приеме). Примеры таких солей, которые могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением, включают в себя без ограничений 2-гидроксиэтансульфонат, 2-нафталинсульфонат, 3-гидрокси-2-нафтоат, 3-фенилпропионат, ацетат, адипат, альгинат, амсонат, аспартат, бензолсульфонат, бензоат, безилат, бикарбонат, бисульфат, битартрат, борат, бутират, кальция эдетат, камфорат, камфорсульфонат, камсилат, карбонат, цитрат, клавуланат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, эдетат, эдисилат, эстолат, эзилат, этансульфонат, фумарат, глюцептат, глюкогептаноат, глюконат, глутамат, глицерофосфат, гликоллиларсанилат, гемисульфат, гептаноат, гексафторфосфат, гексаноат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидробромид, гидрохлорид, гидройодид, гидроксинафтоат, йодид, изотионат, лактат, лактобионат, лаурат, лаурилсульфонат, малат, малеат, манделат, мезилат, метансульфонат, метилбромид, метилнитрат, метилсульфат, мукат, нафтилат, напсилат, никотинат, нитрат, аммониевую соль N-метилглюкамина, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, пантотенат, пектинат, персульфат, фосфат, фосфателдифосфат, пикрат, пивалат, полигалактуронат, пропионат, п-толуолсульфонат, сахарат, салицилат, стеарат, субацетат, сукцинат, сульфат, сульфосалицилат, сурамат, таннат, тартрат, теоклат, тиоцианат, тозилат, триэтиодид, ундеканоат и валерат и тому подобное (см., также S.M. Berge et al., Pharmaceutical Salts, J. Pharm. Scis., 1977, 66: 1-18; P.L. Gould, Salt selection for basic drugs, Int'l J. Pharms. 1986, 33: 201-17.).
«Сольваты» представляют собой композиции, которые в процессе кристаллизации химического соединения из раствора захватывают молекулы растворителя в формирующуюся кристаллическую решетку.
«Гидраты» представляют собой сольваты, где растворителем является вода.
«Кристаллические» формы представляют собой твердые композиции, в которых образующие композицию молекулы упакованы в повторяющуюся решетчатую структуру. Когда для композиций, образованных одними и теми же молекулами, возможно более одной конфигурации решетчатой структуры, различные композиции называют «полиморфы».
«Диастереомеры» представляют собой стереоизомеры, которые не относятся друг к другу как объект и его зеркальное отражение, но все-таки различаются расположением в трехмерном пространстве относительно одного тетраэдрального атома углерода, находящегося в sp3-гибридизации.
«Энантиомер» представляет собой один из двух стереоизомеров, которые являются зеркальным отображением друг друга, но не являются совместимыми в пространстве (не идентичны).
«Фармацевтически приемлемый носитель» представляет собой любое вспомогательное вещество, которое не является токсичным и способствует осуществлению лекарственным средством своих функций (см. также Rowe RC et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 5th ed., 2006).
Примеры
Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим любые одно или несколько из раскрытых здесь соединений в виде фармацевтически приемлемых солей, гидратов, сольватов, кристаллических форм и их отдельных стереоизомеров (например, диастереомеров, энантиомеров) в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем. Они включают в себя без ограничений композиции, в которых соединения по настоящему изобретению находятся в нейтральной или солевой форме.
Термин «фармацевтически приемлемые соли» включает в себя кислотно-аддитивные соли (образованные свободными аминогруппами белка) и соли, которые образованы неорганическими кислотами, такими как, например, соляная или фосфорная кислота, или такими органическими кислотами, как уксусная, щавелевая, винная, миндальная и тому подобные кислоты. Соли, образованные свободными карбоксильными группами, также могут быть получены из неорганических оснований, таких как, например, гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или железа, и таких органических оснований, как изопропиламин, триметиламин, гистидин, прокаин и тому подобное.
«Соли» представляют собой химические соединения двух ионизируемых компонентов (например, при растворении в воде), одного кислотного и другого основного по отношению друг к другу. Находясь в форме соли, лекарственное средство может выступать в роли или кислотного, или основного компонента.
«Фармацевтически приемлемые соли» включают в себя любые соли, образованные химическим соединением, где такая соль является безопасной для животного при приеме внутрь (например, нетоксичной для человека при пероральном приеме). Примеры таких солей, которые могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением, включают в себя без ограничений 2-гидроксиэтансульфонат, 2-нафталинсульфонат, 3-гидрокси-2-нафтоат, 3-фенилпропионат, ацетат, адипат, альгинат, амсонат, аспартат, бензолсульфонат, бензоат, безилата, бикарбонат, бисульфат, битартрат, борат, бутират, кальция эдетат, камфорат, камфорсульфонат, камсилат, карбонат, цитрат, клавуланат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, эдетат, эдисилат, эстолат, эзилат, этансульфонат, фумарат, глюцептат, глюкогептаноат, глюконат, глутамат, глицерофосфат, гликоллиларсанилат, гемисульфат, гептаноат, гексафторфосфат, гексаноат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидробромид, гидрохлорид, гидройодид, гидроксинафтоат, йодид, изотионат, лактат, лактобионат, лаурат, лаурилсульфонат, малат, малеат, манделат, мезилат, метансульфонат, метилбромид, метилнитрат, метилсульфат, мукат, нафтилат, напсилат, никотинат, нитрат, аммониевую соль N-метилглюкамина, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, пантотенат, пектинат, персульфат, фосфат, фосфатедилфосфат, пикрат, пивалат, полигалактуронат, пропионат, п-толуолсульфонат, сахарат, салицилат, стеарат, субацетат, сукцинат, сульфат, сульфосалицилат, сурамат, таннат, тартрат, теоклат, тиоцианат, тозилат, триэтиодид, ундеканоат и валерат и тому подобное (см., также S.M. Berge et al., Pharmaceutical Salts, J. Pharm. Scis., 1977, 66: 1-18; P.L. Gould, Salt selection for basic drugs, Int'l J. Pharms. 1986, 33: 201-17.).
«Сольваты» представляют собой композиции, которые в процессе кристаллизации химического соединения из раствора захватывают молекулы растворителя в формирующуюся кристаллическую решетку.
«Гидраты» представляют собой сольваты, где растворителем является вода.
«Кристаллические» формы представляют собой твердые композиции, в которых образующие композицию молекулы упакованы в повторяющуюся решетчатую структуру. Когда для композиций, образованных одними и теми же молекулами, возможно более одной конфигурации решетчатой структуры, различные композиции называют «полиморфы».
«Диастереомеры» представляют собой стереоизомеры, которые не относятся друг к другу как объект и его зеркальное отражение, но все-таки различаются расположением в трехмерном пространстве относительно одного тетраэдрального атома углерода, находящегося в sp3-гибридизации.
«Энантиомер» представляет собой один из двух стереоизомеров, которые являются зеркальным отображением друг друга, но не являются совместимыми в пространстве (не идентичны).
«Фармацевтически приемлемый носитель» представляет собой любое вспомогательное вещество, которое не является токсичным и способствует осуществлению лекарственным средством своих функций (см. также Rowe RC et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 5th ed., 2006).
Следующие примеры приведены для дополнительной иллюстрации настоящего изобретения, но, естественно, они не должны рассматриваться как каким-либо образом ограничивающие его объем.
Все эксперименты проводили в безводных условиях (т.е. использовали безводные растворители) в атмосфере аргона, кроме отдельно указанных случаев, используя высушенный в сушильном шкафу аппарат и используя стандартные методы обращения с чувствительными к воздушной среде материалами. Водные растворы бикарбоната натрия (NaHCO3) и хлорида натрия (солевой раствор) были насыщенными.
Аналитическую тонкослойную хроматографию (ТСХ) проводили в пластинах силикагеля Kiesel 60 F254 (Merck) с визуализацией в ультрафиолете и/или при помощи погружения в анисовый альдегид, перманганат калия или фосфорномолибденовую кислоту.
Спектры ЯМР: 1H спектры ядерного магнитного резонанса получали при 400 МГц. Данные представлены следующим образом: химический сдвиг, кратность (с = синглет, д = дублет, т = триплет, кв. = квартет, квин. = квинтет, дд = двойной дублет, м = мультиплет, уш.с = широкий синглет), константа взаимодействия (Дж/Гц) и интегрирование. Константы взаимодействия получали и рассчитывали непосредственно из спектров, и они являются нескорректированными.
Масс-спектры низкого разрешения: Использовали электрораспылительную ионизацию (ЭРИ+). Выявляли протонированный исходный ион (M+H) или исходный натриевый ион (M+Na) или фрагмент самой большой массы. Аналитический градиент состоял из 10% ацетонитрила в воде с постепенным увеличением до 100% ацетонитрила в течение 5 минут, если не указано иное.
Высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) использовали для анализа чистоты производных триазина. ВЭЖХ проводили на колонке Phenomenex Synergi Polar-RP, 4 мкм, 80 A, 150×4,6 мм, используя хроматограф Shimadzu, оснащенный детектором с фотодиодной матрицей SPD-M10A. Подвижная фаза A представляла собой воду, и подвижная фаза B представляла собой ацетонитрил с градиентом от 20% до 80% B в течение 60 минут и повторным уравновешиванием при A/B (80:20) в течение 10 минут. УФ-детекцию проводили при длине волны 220 и 54 нм.
В 250-мл колбу помещали трет-бутоксид калия (5,75 г, 51,26 ммоль) и тетрагидрофуран (50 мл). Полученную суспензию охлаждали до 5-10°C перед добавлением этилацетоацетата (6,67 г, 51,26 ммоль). Скорость добавления регулировали таким образом, чтобы внутренняя температура реактора не превышала 15°C. Полученная смесь становилась однородной и приобретала бледно-желтый цвет. После завершения добавления, реакционную смесь охлаждали до 0°C и затем добавляли 2,3,4,6-тетрафторнитробензол (5,00 г, 25,63 ммоль) в тетрагидрофуране (20 мл). После завершения добавления полученную коричневую реакционную смесь перемешивали при температуре примерно 0°C (на ледяной бане) в течение 30 мин. Медленно добавляли 1Н НСl, в результате чего коричневый раствор становился прозрачным желтым раствором. Значение pH водной фазы составляло 6. Смесь экстрагировали этилацетатом (3х), объединенные органические экстракты промывали солевым раствором (50 мл) и концентрировали в вакууме с получением оранжевого масла.
Масло, полученное выше, помещали в 250-мл круглодонную колбу и растворяли в ледяной уксусной кислоте (25 мл). Затем добавляли серную кислоту (конц., 15 мл) и наблюдали бурное выделение газа в дополнение к незначительному выделению тепла. Производили перемешивание, и реакционную смесь нагревали при температуре 70°C в течение 7 ч, после чего ТСХ анализ показал 100% конверсии. Реакционную смесь охлаждали до температуры от 15°C до 20°C и добавляли этилацетат (200 мл) с последующим добавлением воды (100 мл). Насыщенный раствор NaOH в воде медленно добавляли, чтобы довести значение pH до ~7. Смесь экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Объединенные органические экстракты промывали солевым раствором. Коричневые органические экстракты концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного соединения в виде коричневого масла.
Неочищенный продукт очищали при помощи колоночной хроматографии (силикагель, 0-30% этилацетат в гексане) с получением желаемого соединения 3,00 г (выход 50%, 1). Другим компонентом являлся изомер (побочный продукт, 1,00 г, 16%) 1H ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 8,01 (ддд, J=17,3 Гц, J=10,4 Гц, J=6,7 Гц, 1H), 4,15 (д, J=1,7 Гц, 2H), 2,24 (с, 3H).
Смесь химического соединения 1 (2,82 г, 12,10 ммоль) и карбоната калия (1,83 г, 13,30 ммоль) в метаноле (50 мл) нагревали при температуре 35°C в течение 1,5 ч. При помощи ТСХ проводили проверку расходования исходного материала. Затем реакционную смесь охлаждали и концентрировали в вакууме для удаления большей части метанола. Остаток разбавляли этилацетатом (100 мл) и водой. Смесь нейтрализовали 2Н НСl до значения pH 4-5. Смесь экстрагировали смесью этилацетат/гексан (95/5, 3×100 мл). Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали с получением желтого твердого вещества (2) 2,90 г (выход 98%), которое непосредственно использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки. 1H ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 7,47 (дд, J=12,7 Гц, J=7,4 Гц, 1H), 4,07 (д, J=1,96 Гц, 2H), 3,95 (с, 3H), 2,20 (с, 3H).
Способ 1: Смесь 1-(2,5-дифтор-3-метокси-6-нитрофенил)-пропан-2-она (соединение 2) из предыдущей стадии реакции и хлорида пиридиния (5 экв.) перемешивали при температуре 175°C в течение 120 мин. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли 1Н НСl и этилацетатом и фильтровали. Фильтрат промывали солевым раствором (2х), сушили и концентрировали в вакууме с получением химического соединения 3 из 1-(2,5-дифтор-3-метокси-6-нитрофенил)-пропан-2-она в виде розового твердого вещества, которое использовали без дальнейшей очистки на следующей стадии реакции.
Способ 2: Смесь химического соединения 1 (33,0 г, 141,5 ммоль), NaOAc (134.8 г, 7,5 экв.) и диметилформамида (450 мл) перемешивали при температуре 65°C в течение 12 ч. Растворитель выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный остаток растворяли в воде (800 мл) и EtOAc (200 мл). Смесь экстрагировали EtOAc (2×400 мл). Органическую фазу дополнительно промывали солевым раствором (1×150 мл), сушили над Na2SO4 и концентрировали с получением соединения 3 (40 г). Неочищенный остаток использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.
К раствору дитионита натрия (15,91 г, 91,36 ммоль) в воде (150 мл) по каплям добавляли раствор соединения 2 (2,80 г, 1 1,42 ммоль) в диоксане (17 мл) при комнатной температуре. После добавления смесь перемешивали при комнатной температуре до тех пор, пока ТСХ анализ не показал отсутствие исходного материала (в течение ночи). После завершения образовавшееся белое твердое вещество собирали путем фильтрации и промывали водой (3×15 мл), твердое вещество сушили под вакуумом в течение ночи с получением желаемого продукта 4 в виде белого твердого вещества (820 мг, выход 36%). Это химическое соединение непосредственно использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки. 1H ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,41 (уш., 1H), 6,82 (дд, J=12,1 Гц, J=6,2 Гц, 1H), 6,17 (с, 1H), 3,77 (с, 3H), 2,34 (с, 3H); ЭРИ-МС: расчет. для (C10H9F2NO) 197, обнаружено 198 (MH+).
Способ 1: К холодному раствору химического соединения 4 (350 мг, 1,78 ммоль) в дихлорметане (25 мл) добавляли раствор трибромида бора (1Н в ДХМ, 6,00 мл, 6,00 ммоль) при температуре -78°C. Смесь медленно нагревали до комнатной температуры и перемешивали примерно 1 ч. ТСХ анализ показал завершение реакции. Смесь выливали на лед и добавляли насыщенный NaHCO3. Смесь экстрагировали ДХМ (3X). Органическую фазу промывали солевым раствором, сушили (Na2SO4) и концентрировали с получением коричневого твердого вещества 5 (281 мг, выход 86%), которое использовали непосредственно на следующей стадии реакции без дополнительной очистки 1H ЯМР (ДМСО-d6, 400 МГц) δ 11,25 (с, 1H), 9,05 (с, 1H), 6,47 (дд, J=11,7 Гц, J=6,4 Гц, 1H), 6,10 (с, 1H), 2,32 (с, 3H).
Способ 2: Соединение 3 (9,09 г, 39,33 ммоль) добавляли в круглодонную колбу. Добавляли воду (200 мл), и желтую суспензию перемешивали при комнатной температуре. Дитионит натрия (53 г, 304,42 ммоль) добавляли несколькими порциями, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре, пока ТСХ анализ не показал отсутствие исходного материала. После завершения реакции реакционную смесь охлаждали до 0°C, и коричневатый твердый продукт собирали путем вакуумной фильтрации. Влажный продукт сушили под высоким вакуумом с получением соединения 5 4,7-дифтор-2-метил-1H-индол-5-ол (3,80 г), которое характеризуют таким же 1H ЯМР спектром, как вещество в Способе 1.
К раствору 4,4-дихлор-2-метилсульфонил пиримидина (5,0 г, 25,6 ммоль) в ДМФА (20,0 мл) добавляли раствор 3-амино-5-циклопропил пиразола (3,5 г, 28,2 ммоль) и ДИПЭА (4,9 мл, 28,2 ммоль) в ДМФА (5,0 мл) при комнатной температуре. Добавляли йодид натрия (4,2 г, 28,2 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение ночи при температуре 60°C. Затем добавляли воду, и твердое вещество собирали фильтрованием. Фильтрат дважды экстрагировали EtOAc. Объединенные органические фазы сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток представлял собой химическое соединение 10 в виде светло-желтого твердого вещества (6,2 мг, выход 96%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,14 (уш.с, 1H, NH), 10,16 (уш.с, 1H, NH), 3,31 (с, 1H), 2,46 (с, 3H, CH3), 1,88-1,84 (м, 1H, CH), 0,92-0,64 (м, 4H, Ar-H).
К раствору 6-хлор-N-(5-циклопропил-1Н-пиразол-3-ил)-2- (метилтио)пиримидин-4-амина (6,0 г, 23,8 ммоль) в МеОН (160,0 мл) частями добавляли раствор оксона (33,7 г, 54,8 ммоль) в воде (140,0 мл) в течение 20 мин при температуре 0°C. Реакционную смесь перемешивали при этой температуре в течение 30 минут при комнатной температуре в течение ночи. Затем смесь фильтровали, и твердое вещество повторно суспендировали в насыщенном растворе NaHCO3 в воде. Смесь фильтровали, и твердое вещество промывали водой, диэтиловым эфиром. Твердые вещество представло собой химическое соединение 11 в виде светло-желтого твердого вещества (5,6 г, выход 75%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,33 (уш.с, 1H, NH), 10,93 (уш.с, 1H, NH), 3,34 (с, 3H, CH3), 1,93-1,89 (м, 1H, CH), 0,96-0,68 (м, 4H, Ar-H).
Раствор 4,6-дихлор-2-метилсульфонилпиримидина (6,87 г, 30,27 ммоль) и 2-метил-4-фтор-1-H-индол-5-ола (5,00 г, 30,27 ммоль) в ТГФ (100 мл) охлаждали до -70°C смесью сухой лед/изопропанол. Суспензию трет-бутоксида калия (4,25 г, 37,84 ммоль) в ТГФ (50 мл) по каплям добавляли в реакционную смесь. Температуру смеси поддерживали ниже -50°C. После добавления, реакционную смесь перемешивали при температуре -70°C в течение 1,5 ч, затем нагревали до комнатной температуры в течение 1,5 ч. ТСХ анализом подтверждали, что оба исходных материала были израсходованы. Добавляли насыщенный раствор хлорида аммония в воде и смесь три раза экстрагировали смесью этилацетат/гексан (80/20). Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Неочищенный продукт элюировали из пластины силикагеля 20% раствором этилацетата в гексане. Собранную фракцию концентрировали с получением желаемого продукта в виде светло-желтого твердого вещества (QW660) (7,51 г, выход 79%). Это твердое вещество непосредственно использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.
Способ 1: (из Примера 7): К раствору 6-хлор-N-(5-циклопропил-1H-пиразол-3-ил)-2-(метилсульфонил)пиримидин-4-амина (0,8 г, 2,55 ммоль) в tBuOH (50 мл) добавляли 4-фтор-2-метил-1H-индол-5-ол (0,46 г, 2,80 ммоль) и KOtBu (0,32 г, 2,20 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при температуре 50°C в течение ночи. После охлаждения реакционную смесь разбавляли ДХМ и промывали насыщенным раствором NaHCO3. Водную фазу два раза экстрагировали смесью ДХМ/изопропанол (4:1). Объединенные органические фазы сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали при помощи флэш-системы Teledyne-Isco, используя CH2Cl2/MeOH с содержанием метанола в дихлорметане от 0 до 5%, с получением соединения 12 в виде светло-желтого твердого вещества (0,86 г, выход 85%).
Способ 2: (из Примера 8):
Раствор 6-хлор-N-(5-циклопропил-1Н-пиразол-3-ил)-2-((4-фтор-2-метил-1H-индол-5-ил)окси)пиримидин-4-амина (100 мг, 0,25 ммоль) и 1-метилпиперазина (0,70 мл, 6,25 ммоль) в изопропаноле (2 мл) нагревали до температуры 90°C в течение ночи в запаянной пробирке. После охлаждения реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и промывали насыщенным раствором NaHCO3. Водную фазу экстрагировали смесью дихлорметан/изопропанол (4:1). Объединенные органические фазы сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали при помощи флэш-системы Teledyne-Isco, используя CH2Cl2/MeOH с содержанием метанола в дихлорметане от 0 до 10%, с получением соединения 10 в виде светло-желтого твердого вещества (63 мг, выход 54%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,73 (уш.с, 1H, NH), 11,21 (уш.с, H, NH), 9,21 (уш.с, 1H, NH), 7,09-6,08 (м, 4H, Ar-H), 5,25 (уш.с, 1H, Ar-H), 3,42 (м, 4H, 2CH2), 2,39 (с, 3H, CH3), 2,35 (м, 4H, 2CH2), 2,20 (с, 3H, CH3), 1,49 (м, 1H, CH), 0,69-0,13 (м, 4H, Ar-H); ЭРИ-МС: расчет. для (C24H27FN8O) 462, обнаружено 463 (M-H+). ВЭЖХ: время удерживания: 13,47 мин, чистота: 100%.
Примеры 11-45
По той же методике, как в Примере 10, из химического соединения 9 также были получены соединения 11-45, которые были охарактеризованы при помощи ЖХ-МС.
К раствору N-(5-циклопропил-пиразол-3-ил)-2-((4-фтор-2-метил-1H-индол-5-ил)окси)-6-(пиперазин-l-ил)пиримидин-4-амина (50 мг, 0,11 ммоль) в изопропаноле (1 мл) добавляли 1-фтор-2-йодэтан (0,02 мл, 0,22 ммоль) и K2CO3 (76 мг, 055 ммоль) и нагревали до температуры 75°C в течение ночи в запаянной пробирке. После охлаждения реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и промывали насыщенным раствором NaHCO3. Водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические фазы сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали при помощи флэш-системы Teledyne-Isco, используя CH2Cl2/MeOH с содержанием метанола в дихлорметане от 0 до 10%, с получением соединения 45 в виде светло-желтого твердого вещества (20 мг, выход 36%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,72 (уш.с, 1H, NH), 11,21 (уш.с, H, NH), 9,21 (уш.с, 1H, NH), 7,10-6,04 (м, 4H, Ar-H), 5,25 (уш.с, 1H, Ar-H), 4,63-2,38 (м, 15H), 1,51 (м, 1H, CH), 0,69-0,11 (м, 4H, Ar-H); ЭРИ-МС: расчет. для (C25H28F2N8O) 494, обнаружено 495 (M+H+). ВЭЖХ: время удерживания: 15,02 мин, чистота: 86%.
К раствору 6-хлор-N-(5-циклопропил-пиразол-3-ил)-2-((4-фтор-2-метил-индол-5-ил)окси)пиримидин-4-амина (0,100 г, 0,143 ммоль), 1-N-бок-4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-3,6-дигидро-2H-пиридина (0,058 г, 0,188 ммоль), и тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,026 г, 0,025 ммоль) в диметоксиэтане (2 мл) в атмосфере аргона добавляли водный 2М раствор Na2CO3 (0,276 мл, 0,552 ммоль). Смеси дегазировали током аргона в течение 3 мин, затем нагревали до температуры 90°C в течение 24 ч в запаянной пробирке. Охлажденные смеси гасили 1Н NaOH и экстрагировали смесью дихлорметан/изопропанол (8:2). Объединенные органические фазы сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Остаток очищали при помощи флэш-хроматографии в силикагеле, используя смесь CH2Cl2:MeOH (9:1), с получением соединения 46 (0,036 мг, выход 53%) в виде светло-желтого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,85 (уш.с, 1H), 11,24 (с, 1H), 9,92 (уш.с, 1H), 7,10 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,86 (м, 1H), 6,76 (уш.с, 1H), 6,53 (уш.с, 1H), 6,18 (с, 1H), 5,25 (уш.с, 1H), 4,02 (м, 2H), 3,50 (м, 2H), 2,38 (уш.с, 5H), 1,41 (уш.с, 10H), 0,65 (м, 2H), -0,02 (м, 2H). ЭРИ-МС: расчет. для C29H32FN7O3: 545, обнаружено 546 (M+H).
Соединение 46 (0,035 г, 0,062 ммоль) растворяли в 20% растворе трифторметилуксусной кислоты в дихлорметане (5 мл) и перемешивали в течение 3 ч. Затем смесь нейтрализовали 1Н водн. NaOH и экстрагировали смесью дихлорметан/изопропанол (8:2). Объединенные органические фазы сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме с получением соединения 47 (0,038 г, выход 59%) в виде светло-желтого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,84 (уш.с, 1H), 11,23 (с, 1H), 9,84 (уш.с, 1H), 7,09 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,86 (м, 1H), 6,80 (уш.с, 1H), 6,51 (уш.с, 1H), 6,18 (с, 1H), 5,27 (уш.с, 1H), 3,37 (м, 2H), 2,87 (м, 2H), 2,38 (с, 3H), 2,24 (м, 2H), 1,44 (м, 1H), 1,22 (м, 1H), 1,02 (д, 1H, J=6,0 Гц), 0,65 (м, 2H), 0,01 (м, 2H). ЭРИ-МС: расчет. для C24H24FN7O: 445, обнаружено 446 (M+H).
N-(5-Циклопропил-пиразол-3-ил)-2-((4-фтор-2-метил-индол-5-ил)окси)-6-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-4-амин (0,040 г, 0,090 ммоль), 1-бром-2-фторэтан (0,031 г, 0,180 ммоль) и K2CO3 (0,062 г, 0,449 ммоль) растворяли в смеси растворителей ТГФ/СН3CN (4 мл/4 мл). Запаянную пробирку перемешивали 20 ч при температуре 75°C, и после охлаждения растворитель удаляли до минимума. Неочищенный продукт распределяли между смесью ДХМ/изопропанол (8:2) и водой. Органические фазы промывали насыщенным раствором NaHCO3, сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Остаток очищали при помощи флэш-хроматографии в силикагеле, используя смесь CH2Cl2:MeOH (9:1), с получением соединения 48 (0,036 мг, выход 83%) в виде светло-желтого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,83 (уш.с, 1H), 11,24 (с, 1H), 9,87 (уш.с, 1H), 7,10 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,86 (м, 1H), 6,75 (уш.с, 1H), 6,18 (с, 1H), 5,24 (уш.с, 1H), 4,63 (м, 1H), 4,53 (м, 1H), 3,46 (м, 1H), 3,40 (м, 1H), 3,21 (м, 2H), 2,78 (м, 1H), 2,71 (м, 3H), 2,37 (м, 5H), 1,43 (м, 1H), 0,65 (м, 2H), -0,03 (м, 2H). ЭРИ-МС: расчет. для C26H27FN2O: 491, обнаружено 492 (M+H).
К раствору N-(5-циклопропил-1H-пиразол-3-ил)-2-((4-фтор-2-метил-1H-индол-5-ил)окси)-6-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-4-амина (0,025 г, 0,056 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) добавляли формальдегид (37% в воде, 0,911 г, 0,112 ммоль) и перемешивали в течение 10 мин. Затем добавляли триацетоксиборгидрид натрия (0,024 г, 0,112 ммоль) и продолжали перемешивание в течение 20 ч. Смеси гасили насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали смесью дихлорметан/изопропанол (8:2). Объединенные органические фазы сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Остаток очищали при помощи флэш-хроматографии в силикагеле, используя смесь CH2Cl2:MeOH (8:2), с получением соединения 50 (0,025 мг, выход 96%) в виде светло-желтого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,82 (уш.с, 1H), 11,23 (с, 1H), 9,85 (уш.с, 1H), 7,09 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,84 (м, 1H), 6,75 (м, 1H), 6,18 (с, 1H), 5,23 (м, 1H), 4,06 (м, 1H), 3,15 (м, 3H), 3,05 (м, 2H), 2,55 (м, 2H), 2,37 (м, 5H), 2,27 (с, 3H). ЭРИ-МС: расчет. для C25H26FN7O: 459, обнаружено 460 (M+H).
К суспензии 4,6-дихлор-2-метилсульфанилпиримидина (390 мг, 2,00 ммоль) в ДМФА (3,0 мл) добавляли раствор (E)-5-(проп-1-ен-1-ил)-1H-пиразол-3-амина (271 мг, 2,20 ммоль) и ДИПЭА (0,42 мл, 2,40 ммоль) в ДМФА (2,0 мл) при комнатной температуре, с последующим добавлением йодида натрия (330 мг, 2,20 ммоль). После добавления смесь перемешивали при температуре 50°C в течение ночи. При помощи ТСХ проводили проверку расходования исходного материала. Смесь выливают в воду (~50 мл), и твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой, гексаном. Желаемый продукт (50) получали в виде желтого твердого вещества после сушки на вакуумном линии (286 мг, выход 51%). Продукт использовали непосредственно на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.
К холодному раствору соединения 50 (280 мг, 1,00 ммоль) в метаноле (6 мл) добавляли суспензию оксана (1500 мг, 2,44 ммоль) при температуре 0°C. После добавления смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 0,5 часов, затем при комнатной температуре в течение 1 часа. При помощи ТСХ проводили проверку расходования исходного материала. В реакционную смесь добавляли воду. Смесь три раза экстрагировали этилацетатом. Объединенную органическую фазу промывают солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Неочищенный продукт очищали на колонке (0-5% метанола в ДХМ). Собранную фракцию концентрировали с получением желаемого продукта в виде грязно-белого твердого вещества (51) (30 мг, выход 9,5%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,55 (уш., 1H), 10,98 (уш., 1H), 8,00-6,00 (м, 4H), 3,38 (с, 3H), 1,90 (уш., 3H); ЭРИ-МС: расчет. для (C11H12ClN5O2S): 313, обнаружено 314 (MH+).
Способ 1: К суспензии 6-хлор-N-(5-пропенил-1H-пиразол-3-ил)-2-(метилсульфонил)пиримидин-4-амина (51) (200 мг, 0,63 ммоль) и 2-метил-4-фтор-1-H-индол-5-ола (110 мг, 0,67 ммоль) в трет-BuOH (15,0 мл) добавляли трет-BuOK (79 мг, 0,70 ммоль) при комнатной температуре. После добавления смесь перемешивали при температуре 55°C в течение 16 часов. При помощи ТСХ проводили проверку расходования исходного материала. В реакционную смесь добавляли воду. Смесь три раза экстрагировали смесью ДХМ/изопропанол (90/10). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором, сушат над сульфатом натрия и концентрировали. Неочищенный продукт очищали на колонке (0-10% метанол в ДХМ). Собранную фракцию концентрировали с получением желаемого продукта в виде розового твердого вещества (52) (163 мг, выход 64%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,15 (уш., 1H), 11,35 (уш., 1H), 10,35 (уш., 1H), 7,14 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,90 (т, J=8,0 Гц, 1H), 6,40 (уш., 1H), 6,22 (с, 1H), 5,70-5,10 (м, 3H), 2,40 (с, 3H), 1,78 (уш., 3H); ЭРИ-МС: расчет. для (C19H16ClFN6O): 398, обнаружено 399 (MH+).
Способ 2: Раствор соединения 8 (5,00 г, 16,02 ммоль), (E)-5-(проп-1-ен-1-ил)-1H-пиразол-3-амина (3,45 г, 28,03 ммоль), йодида натрия (3,60 г, 24,03 ммоль) и ДИПЭА (4,20 мл, 24,03 ммоль) в ДМФА (50 мл) перемешивали при температуре 65°C в течение 48 часов. При помощи ТСХ проводили проверку расходования исходного материала. Смесь выливали в воду (500 мл) и охлаждали на льду. Твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой и гексаном. Остаток растворяли в смеси дихлорметан/метанол. Раствор концентрировали до минимального количества растворителя. Твердое вещество собирали фильтрованием, промывали метанолом с получением желтого твердого вещества (52) (3,88 г, выход 61%). Маточную жидкость восстанавливали. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6). 1H NMR (400 MГц, ДМСО-d6) δ 12,15 (уш., 1H), 11,35 (уш., 1H), 10,35 (уш., 1H), 7,14 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,90 (т, J=8,0 Гц, 1H), 6,40 (уш., 1H), 6,22 (с, 1H), 5,70-5,10 (м, 3H), 2,40 (с, 3H). ЭРИ-МС: расчет. для (C19H16ClFN6O): 398, обнаружено 399 (MH+).
Раствор соединения 52 (1,50 г, 3,76 ммоль), 1-метилпиперазина (2,83 г, 28,21 ммоль) и ДИПЭА (1,64 мл, 9,40 ммоль) в изопропаноле (20,0 мл) и ацетонитриле (5,0 мл) перемешивали при температуре 85°C в течение 2 суток. При помощи ТСХ проводили проверку расходования исходного материала. Реакционную смесь концентрировали и добавляли воду. Смесь три раза экстрагировали смесью ДХМ/изопропанол (10/1). Комбинированную органическую фазу промывали бикарбонатом натрия, солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Неочищенный продукт очищали путем кристаллизации из метанола (~10 мл). Светло-желтое твердое вещество собирали путем фильтрования, промывали с холодным МеОН (1x) с получением соединения 53 (1,10 г, выход 63%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,80 (уш., 1H), 11,19 (уш., 1H), 9,30 (уш., 1H), 7,03 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,78 (т, J=8,0 Гц, 1H), 6,14 (с, 1H), 5,80-5,60 (м, 2H), 5,47 (с, 1H), 5,20 (уш., 1H), 3,40 (уш., 4H), 2,43 (3H, наблюдали с пиком растворителя), 2,34 (с, 3H), 2,27 (уш., 4H), 1,65 (д, J=6,0 Гц, 3H); ЭРИ-МС: расчет. для (C24H27FN8O): 462, обнаружено 463 (MH+).
Примеры 54-73
По той же методике, как в Примере 53, из соединения 52 также были получены соединения 54-73, которые были охарактеризованы при помощи ЖХ-МС.
Раствор соединения 68 (50 мг, 0,1 ммоль), 1-фтор-2-йодэтана (40,72 мг, 0,23 ммоль) и карбоната калия (77 мг, 0,56 ммоль) в смеси ацетонитрил/ТГФ (3,0 мл/3,0 мл) перемешивали при температуре 75°C в течение 3 суток. При помощи ТСХ проводили проверку расходования исходного материала. Растворители удаляли и добавляли воду. Смесь три раза экстрагировали смесью ДХМ/изопропанол (9/1). Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Неочищенный продукт очищали на колонке (0-10% метанол в ДХМ). Собранную фракцию концентрировали с получением желаемого продукта в виде грязно-белого твердого вещества (74) (25 мг, выход 45%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,80 (уш., 1H), 11,24 (уш., 1H), 9,30 (уш., 1H), 7,09 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,83 (т, J=8,0 Гц, 1H), 6,19 (с, 1H), 5,80-5,00 (м, 4H), 4,49 (м, 2H), 3,40 (уш., 4H), 2,69 (м, 2H), 2,38 (м, 4H), 1,68 (д, J=6,8 Гц, 3H), 1,10 (с, 3H); ЭРИ-МС: расчет. для (C25H28F2N8O): 494, обнаружено 495 (MH+).
К раствору (E)-6-хлор-2-((4-фтор-2-метил-1H-индол-5-ил)окси)-N-(5-(проп-1-ен-1-ил)-1H-пиразол-3-ил)пиримидин-4-амина (0,075 г, 0,188 ммоль), 1-N-бок-4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-3,6-дигидро-2H-пиридина (0,093 г, 0,301 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,019 г, 0,019 ммоль) в диметоксиэтане (4 мл) в атмосфере аргона добавляли водный 2М Na2CO3 (0,206 мл, 0,414 ммоль). Смесь дегазировали током аргона в течение 3 мин, затем ее нагревали до 90°C в течение 24 ч в запаянной пробирке. Охлажденную смесь гасили 1Н NaOH и экстрагировали смесью дихлорметан/изопропанол (8:2). Объединенные органические фазы сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Затем остаток растворяли в 20% растворе трифторметилуксусной кислоты в дихлорметане (5 мл) и перемешивали в течение 3 ч. Реакцию нейтрализовали 1Н водным раствором NaOH и экстрагировали смесью дихлорметан/изопропанол (8:2). Объединенные органические слои фазы сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме с получением соединения 75 (0,036 г, выход 44%) в виде желтого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,02 (уш.с, 1H), 11,29 (с, 1H), 9,98 (уш.с, 1H), 7,11 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,87 (м, 1H), 6,83 (уш.с, 1H), 6,52 (уш.с, 1H), 6,20 (с, 1H), 5,66 (м, 1H), 5,56 (уш.с, 1H), 5,25 (м, 1H), 3,50 (с, 1H), 3,43 (м, 2H), 2,92 (м, 2H), 2,41 (с, 3H), 2,28 (м, 2H), 1,69 (дд, 3H, J=5,2, 1,2 Гц). ЭРИ-МС: расчет. для C24H24FN7O: 445, обнаружено 446 (M+H).
Раствор 5-((4,6-дихлорпиримидин-2-ил)окси)-4-фтор-2-метил-1H-индола (0,5 г, 1,60 ммоль), 5-метилтиазол-2-амина (0,22 г, 1,92 ммоль), йодида натрия (0,29 г, 1,92 ммоль) и ДИПЭА (0,39 мл, 1,92 ммоль) в ДМФА (16,0 мл) перемешивали при температуре 70°C в течение ночи. Смесь медленно добавляли к ледяной воде (10,0 мл). Смесь охлаждали на ледяной бане, и твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой и гексаном с получением соединения 77 в виде тускло-белого твердого вещества (0,59 г, выход 95%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,34 (уш.с, 1H), 9,81 (уш.с, H), 8,70 (уш.с, 1H), 7,22 (м, 1H), 7,14 (м, 1H), 6,97 (м, 1H), 6,25 (м, 1H), 2,40 (с, 3H), 2,02 (с, 3H); ЭРИ-МС: расчет. для (C17H13ClFN5OS) 389, обнаружено 390 (M-H)+.
Смесь N-(6-хлор-2-((4-фтор-2-метил-индол-5-ил)окси)пиримидин-4-ил)-5-метилтиазол-2-амина (0,1 г, 0,26 ммоль), 1-метилпиперазина (32 мг, 1,25 ммоль), Pd(OAc)2 (8,2 мг, 0,036 ммоль) и K2CO3 (0,57 г, 4,10 ммоль) в ТГФ (1,5 мл) и ДМФА (1,0 мл) нагревали в микроволновой печи в течение 1,5 ч при температуре 60°C. Реакционную смесь охлаждали и добавляли воду. Полученную смесь экстрагировали EtOAc, и объединенные экстракты промывали солевым раствором, сушили над безводным Na2SO4 и затем концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт очищали при помощи флэш-системы Teledyne-Isco, используя CH2Cl2/MeOH с содержанием метанола в дихлорметане от 0 до 20%, с получением соединения 77 в виде коричневатого твердого вещества (20 мг, выход 17%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,27 (уш.с, 1H), 9,48 (уш.с, H), 7,35 (уш.с, 1H), 7,15-7,00 (м, 2H), 6,85 (м, 1H), 6,22 (м, 1H), 3,45 (м, 4H), 2,41 (с, 3H), 2,32 (м, 4H), 2,18 (с, 3H), 1,95 (с,3H); ЭРИ-МС: расчет. для (C22H24FN7OS) 453, обнаружено 454 (M-H)+.
По той же методике, как в Примере 77, из соединения 76 также было получено химическое соединение 78, которое было охарактеризовано при помощи ЖХ-МС.
Раствор 4,6-дихлор-2-метилсульфонилпиримидина (3,72 г, 16,38 ммоль) и 2-метил-4,7-ди-фтор-1-H-индол-5-ола (3,00 г, 16,38 ммоль) в ТГФ (100 мл) охлаждали до температуры -78°C смесью сухой лед/ацетон. Суспензию трет-бутоксида калия (2,30 г, 20,47 ммоль) в ТГФ (50 мл) добавляли по каплям к реакционной смеси. Температуру смеси поддерживали ниже -50°C. После добавления реакционную смесь перемешивали при температуре -78°C в течение 1 ч, затем нагревали до комнатной температуры в течение 1 ч. ТСХ анализом подтверждали, что оба исходных материала были израсходованы. Добавляли насыщенный раствор хлорида аммония в воде и смесь три раза экстрагировали смесью этилацетат/гексан (80/20). Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Неочищенный продукт элюировали из пластины силикагеля, 15% раствором этилацетата в гексане. Собранную фракцию концентрировали с получением желаемого продукта в виде светло-желтого твердого вещества (79) (4,20 г, выход 78%). Это твердое вещество непосредственно использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки.
К раствору 6-хлор-N-(5-циклопропил-1Н-пиразол-3-ил)-2-(метилсульфонил)пиримидин-4-амина (0,7 г, 2,23 ммоль) в tBuOH (50 мл) добавляли 4,7-дифтор-2-метил-1H-индол-5-ол (0,45 г, 2,45 ммоль) и KOtBu (0,28 г, 2,45 ммоль) при комнатной температуре. Реакционную смесь перемешивали при температуре 50°C в течение двух суток. После охлаждения реакционную смесь разбавляли ДХМ и промывали насыщенным раствором NaHCO3. Водную фазу два раза экстрагировали смесью ДХМ/изопропанол (4:1). Объединенные органические фазы сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали при помощи флэш-системы Teledyne-Isco, используя CH2Cl2/MeOH с содержанием метанола в дихлорметане от 0 до 5%, с получением соединения 80 в виде светло-желтого твердого вещества (0,49 г, 53%).
Соединение 80 также может быть получено при помощи реакции соединения 79 с 3-циклопропил-1H-пиразол-5-амином, по той же методике, как описано в Примере 53 (Способ 2).
Раствор 6-хлор-N-(5-циклопропил-1Н-пиразол-3-ил)-2-((4,7-дифтор-2-метил-индол-5-ил)окси)пиримидин-4-амина (80 мг, 0,20 ммоль) и 1-метилпиперазина (0,56 мл, 5,00 ммоль) в изопропаноле (1 мл) нагревали до температуры 90°C в течение ночи в запаянной пробирке. После охлаждения реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и промывали насыщенным раствором NaHCO3. Водную фазу экстрагировали смесью дихлорметан/изопропанол (4:1). Объединенные органические фазы сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Полученный неочищенный продукт очищали при помощи флэш-системы Teledyne-Isco, используя CH2Cl2/MeOH с содержанием метанола в дихлорметане от 0 до 10%, с получением соединения 81 в виде светло-желтого твердого вещества (33 мг, выход 36%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,76 (уш.с, 1H, NH), 11,70 (уш.с, H, NH), 9,26 (уш.с, 1H, NH), 6,86-5,97 (м, 3H, Ar-H), 5,26 (уш.с, 1H, Ar-H), 3,43 (м, 4H, 2CH2), 2,40 (с, 3H, CH3), 2,35 (м, 4H, 2CH2), 2,20 (с, 3H, CH3), 1,49 (м, 1H, CH), 0,71-0,09 (м, 4H, Ar-H); ЭРИ-МС: расчет. для (C24H26F2N8O) 480, обнаружено 481 (M-H)+. ВЭЖХ: время удерживания: 14,84 мин, чистота: 100%.
Примеры 82-85
По той же методике, как в Примере 81, из химического соединения 80 также были получены химические соединения 82-85, которые были охарактеризованы при помощи ЖХ-МС.
Раствор соединения 79 (4,20 г, 12,72 ммоль), (E)-5-(проп-1-ен-1-ил)-1H-пиразол-3-амина (2,82 г, 22,90 ммоль), иодида натрия (2,86 г, 19,08 ммоль) и ДИПЭА (3,33 мл, 19,08 ммоль) в ДМФА (35 мл) перемешивали при температуре 65°C в течение 48 часов. При помощи ТСХ проводили проверку расходования исходного материала. Смесь охлаждали на льду, и твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой и гексаном. Твердое вещество растворяли в смеси дихлорметан/метанол. Раствор концентрировали до минимального количества растворителей. Твердое вещество собирали фильтрованием, промывали метанолом с получением желтого твердого вещества (1,90 г). Маточную жидкость очищали на колонке. Целевые фракции собирали, концентрировали и фильтровали с получением светло-желтого твердого вещества (0,82 г). Объединенное твердое вещество (86) использовали для следующей стадии реакции (2,72 г, выход 51%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,15 (уш., 1H), 11,80 (уш., 1H), 10,40 (уш., 1H), 6,95 (дд, J=10,8 Гц, J=5,6 Гц, 1H), 6,40 (уш., 1H), 6,22 (с, 1H), 5,70-5,10 (м, 3H), 2,40 (с, 3H), 1,78 (уш., 3H); ЭРИ-МС: расчет. для (C19H15ClF2N6O) 416, обнаружено 417 (MH+).
Альтернативно, соединение 86 также может быть получено при помощи реакции 6-хлор-N-(5-пропенил-1H-пиразол-3-ил)-2-(метилсульфонил)пиримидин-4-амина и 2-метил-4,7-дифтор-1-H- индол-5-ола по ранее описанному протоколу.
Раствор соединения 86 (45 мг, 0,1 ммоль), 1-метилпиперазина (270 мг, 2,70 ммоль) и ДИПЭА (0,10 мл, 0,54 ммоль) в изопропаноле (3,0 мл) и ацетонитриле (1,0 мл) перемешивали при температуре 85°C в течение 3 суток. При помощи ТСХ проводили проверку расходования исходного материала. Добавляли разбавленный раствор бикарбоната натрия и смесь три раза экстрагировали ДХМ. Объединенные органические фазы промывали солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Неочищенный продукт очищали на колонке (0-15% метанол в ДХМ). Собранную фракцию концентрировали с получением желаемого продукта в виде грязно-белого твердого вещества (87) (33 мг, выход 66%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,90 (уш., 1H), 11,71 (уш., 1H), 9,30 (уш., 1H), 6,85 (дд, J=10,8 Гц, J=5,6 Гц, 1H), 6,29 (с, 1H), 5,80-5,00 (м, 4H), 3,40 (уш., 4H), 2,40 (м, 7H), 2,18 (с, 3H), 1,68 (д, J=6,8 Гц, 3H); ЭРИ-МС: расчет. для (C24H26F2N8O) 480, обнаружено 481 (MH+).
Примеры 88-99
По той же методике, как в Примере 87, из соединения 86 также были получены соединения 88-99, которые были охарактеризованы при помощи ЖХ-МС.
К раствору (E)-6-хлор-2-((4,7-дифтор-2-метил-индол-5-ил)окси)-N-(5-(проп-1-ен-1-ил)-1H-пиразол-3-ил)пиримидин-4-амина (0,075 г, 0,179 ммоль), 1-N-бок-4-(4,4,5,5-тетраметил-[1,3,2]диоксаборолан-2-ил)-3,6-дигидро-2Н-пиридина (0,089 г, 0,287 ммоль) и тетракис(трифенилфосфин)палладия(0) (0,018 г, 0,018 ммоль) в диметоксиэтане (4 мл) в атмосфере аргона добавляли водный 2М раствор Na2CO3 (0,197 мл, 0,396 ммоль). Смеси дегазировали током аргона в течение 3 мин, затем нагревали до температуры 90°C в течение 24 ч в запаянной пробирке. Охлажденные смеси гасили 1Н NaOH и экстрагировали смесью дихлорметан/изопропанол (8:2). Объединенные органические фазы сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Затем остаток растворяли в 20% растворе трифторметилуксусной кислоты в дихлорметане (5 мл) и перемешивали в течение 3 ч. Реакцию нейтрализовали 1Н водным раствором NaOH и экстрагировали смесью дихлорметан/изопропанол (8:2) смеси. Объединенные органические фазы сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме с получением соединения 100 (0,041 г, выход 49%) в виде желтого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,08 (уш.с, 1H), 11,77 (с, 1H), 10,04 (уш.с, 1H), 6,89 (кв., 1H, J=5,6 Гц), 6,84 (м, 1H), 6,52 (уш.с, 1H), 6,32 (с, 1H), 5,70 (м, 1H), 5,59 (уш.с, 1H), 5,26 (м, 1H), 3,49 (с, 1H), 3,45 (м, 2H), 2,94 (м, 2H), 2,42 (с, 3H), 2,30 (м, 2H), 1,71 (дд, 3H, J=5,2, 1,2 Гц). ЭРИ-МС: расчет. для C24H23F2N7O: 463, обнаружено 464 (M+H).
К раствору (Е)-2 -((4,7-дифтор-2-метил-индол-5-ил)окси)-N-(5-(проп-1-ен-1-ил)-1H-пиразол-3-ил)-6-(1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил)пиримидин-4-амина (0,022 г, 0,048 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) добавляли формальдегид (37% в воде, 0,012 г, 0,142 ммоль) и перемешивали в течение 10 мин. Затем с добавляли триацетоксиборгидрид натрия (0,030 г, 0,142 ммоль) и продолжали перемешивание в течение 20 ч. Смеси гасили насыщенным раствором NaHCO3 и экстрагировали смесью дихлорметан/изопропанол (8:2). Объединенные органические фазы сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Остаток очищали при помощи флэш-хроматографии на силикагеле, используя смесь CH2Cl2:MeOH (8:2), с получением соединения 101 (0,020 г, выход 87%) в виде светло-желтого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,08 (уш.с, 1H), 11,77 (с, 1H), 10,03 (уш.с, 1H), 7,09 (м, 1H), 6,79 (м, 1H), 6,52 (м, 1H), 6,32 (с, 1H), 5,67 (м, 1H), 5,57 (м, 1H), 5,24 (м, 1H), 3,06 (м, 2H), 2,56 (м, 2H), 2,42 (с, 3H), 2,40 (м, 2H0, 2,28 (с, 3H), 1,71 (дд, 3H, J=6,8, 1,2 Гц). ЭРИ-МС: расчет. для C25H25F2N7O: 477, обнаружено 478 (M+H).
К суспензии 6-хлор-N-(5-этил-1H-пиразол-3-ил)-2-(метилсульфонил)пиримидин-4-амина (700 мг, 2,43 ммоль) и 2-метил-4,7-дифтор-1H-индол-5-ола (499 мг, 2,72 ммоль) в трет-BuOH (50,0 мл) добавляли трет-BuOK (33 мг, 2,92 ммоль) при комнатной температуре. После добавления смесь перемешивали при температуре 55°C в течение 16 часов. При помощи ТСХ проводили проверку расходования исходного материала. К реакционной смеси добавляли воду. Смесь три раза экстрагировали смесью ДХМ/изопропанол (90/10). Объединенные органические фазы промывали солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Неочищенный продукт очищали на колонке (0-10% метанол в ДХМ). Собранную фракцию концентрировали с получением желаемого продукта в виде розового твердого вещества (102) (435 мг, выход 46%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) 11,80 (уш., 1H), 11,77 (уш., 1H), 10,30 (уш., 1H), 6,95 (дд, J=10,8 Гц, J=5,6 Гц, 1H), 6,40 (уш., 1H), 6,32 (с, 1H), 5,25 (уш., 1H), 2,40 (с, 3H), 1,78 (с, 3H); ЭРИ-МС: расчет. для (C17H13ClF2N6O) 390, обнаружено 391 (MH+).
Раствор соединения 102 (50 мг, 0,13 ммоль), 1-этилпиперазина (365 мг, 3,20 ммоль) и ДИПЭА (0,1 мл, 1 0,64 ммоль) в изопропаноле (2,5 мл) перемешивали при температуре 85°C в течение 3 суток. При помощи ТСХ проводили проверку расходования исходного материала. Добавляли разбавленный раствор бикарбоната натрия и смесь три раза экстрагировали ДХМ. Объединенные органические фазы промывали солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Неочищенный продукт очищали на колонке (0-15% метанол в ДХМ). Собранную фракцию концентрировали с получением желаемого продукта в виде желтоватого твердого вещества (103) (45 мг, выход 75%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,65 (уш., 2H), 9,20 (уш., 1H), 6,82 (дд, J=10,8 Гц, J=5,6 Гц, 1H), 6,27 (с, 1H), 6,07 (уш., 1H), 5,35 (с, 1H), 3,40 (уш., 4H), 2,31 (м, 9H), 1,95 (с, 3H), 1,00 (т, J=7,2 Гц, 3H); ЭРИ-МС: расчет. для (C23H26ClF2N8O) 468, обнаружено 469 (MH+).
Примеры 104-109
По той же методике, как в Примере 103, из соединения 102 также были получены соединения 104-109, которые были охарактеризованы при помощи ЖХ-МС.
Раствор 4,6-дихлор-2-метилсульфонилпиримидина (938 мг, 4,13 ммоль) и 2-метил-4-хлор-1-H-индол-5-ола (750 мг, 4,13 ммоль) в ТГФ (20 мл) охлаждали до температуры -78°C смесью сухой лед/ацетон. Суспензию трет-бутоксида калия (510 мг, 4,54 ммоль) в ТГФ (10 мл) по каплям добавляли к реакционной смеси. Температуру смеси поддерживали ниже -50°C. После добавления реакционную смесь перемешивали при температуре -78°C в течение 1 ч, затем нагревали до комнатной температуры в течение 1,5 ч. ТСХ анализом подтверждали, что оба исходных материала были израсходованы. Добавляли насыщенный раствор хлорида аммония в воде и смесь три раза экстрагировали смесью этилацетат/гексан (95/5). Объединенную органическую фазу промывали солевым раствором, сушили над сульфатом натрия и концентрировали. Неочищенный продукт элюировали из пластины силикагеля 20% раствором этилацетата в гексане. Собранную фракцию концентрировали с получением желаемого продукта в виде светло-желтого твердого вещества (110) (900 мг, выход 66%). Твердое вещество непосредственно использовали на следующей стадии реакции без дополнительной очистки. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,42 (с, 1H), 7,75 (с, 1H), 7,30 (д, J=8,4 Гц, 1H), 7,00 (д, J=8,4 Гц, 1H), 6,21 (с, 1H), 2,41 (с, 3H); ЭРИ-МС: расчет. для (C13H8Cl3N3O) 326, обнаружено 327 (MH+).
Раствор 5-((4,6-дихлорпиримидин-2-ил)окси)-4-хлор-2-метил-1H-индола (0,85 г, 2,59 ммоль), (E)-5-(проп-1-ен-1-ил)-1Н-пиразол-3-амина (0,48 г, 3,89 ммоль), иодида натрия (0,58 г, 3,89 ммоль) и ДИПЭА (0,68 мл, 3,89 ммоль) в ДМФА (10,0 мл) перемешивали при температуре 70°C в течение 2 суток. Смесь медленно добавляли к воде (200,0 мл). Смесь охлаждали на ледяной бане, и твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой и гексаном. Твердое вещество растворяли в смеси CH2Cl2/MeOH и концентрировали. Полученный неочищенный продукт очищали при помощи флэш-системы Teledyne-Isco, используя CH2Cl2/MeOH с содержанием метанола в дихлорметане от 0 до 5%, с получением соединения 111 в виде светло-желтого твердого вещества (? г, выход ?%) 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,13 (уш.с, 1H, NH), 11,42 (уш.с, H, NH), 10,38 (уш.с, 1H, NH), 7,32-5,17 (м, 7H, 5Ar-H, 2CH), 2,44 (с, 3H, CH3), 1,71 (д, 3H, CH3); ЭРИ-МС: расчет. для (C19H16Cl2N6O) 415, обнаружено 416 (M+H)+.
Раствор (E)-6-хлор-2-((4-хлор-2-метил-индол-5-ил)окси)-N-(5-(проп-1-ен-1-ил)-1H-пиразол-3-ил)пиримидин-4-амина (50 мг, 0,12 ммоль) и 1-метилпиперазина (0,067 мл, 0,60 ммоль) в изопропаноле (1,0 мл) нагревали до температуры 85°C в течение ночи. После охлаждения реакционную смесь разбавляли дихлорметаном и промывали водой. Водную фазу экстрагировали дихлорметаном. Объединенные органические фазы сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали. Полученный неочищенный продукт очищали при помощи флэш-системы Teledyne-Isco, используя CH2Cl2/MeOH с содержанием метанола в дихлорметане от 0 до 10%, с получением соединения 112 в виде белого твердого вещества (25 мг, выход 43%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,88 (уш.с, 1H, NH), 11,31 (уш.с, H, NH), 9,32 (уш.с, 1H, NH), 7,27-5,34 (м, 7H, 5Ar-H, 2CH), 3,44 (м, 4H, 2CH2), 2,43-2,35 (м, 7H, 2CH2, CH3), 2,21 (с, 3H, CH3), 1,71 (д, 3H, CH3); ЭРИ-МС: расчет. для (C24H27ClN8O) 478, обнаружено 479 (M+H)+. ВЭЖХ: время удерживания: 15,70 мин, чистота: 92%.
Примеры 113-116
По той же методике, как в Примере 112, из соединения 111 также были получены соединения 113-116, которые были охарактеризованы при помощи ЖХ-МС.
К холодной (0°C) суспензии гидрида натрия (60%, 1,54 г, 38,5 ммоль) в ДМФА (20 мл) медленно добавляли раствор 5-((4,6-дихлорпиримидин-2-ил)окси)-4-фтор-2-метил-1H-индола (соединение 8, 6,00 г, 19,2 ммоль) и йодметана (5,46 г, 38,5 ммоль) в ДМФА (28 мл). Реакционную смесь перемешивали при температуре 0°C в течение 2 часов. При помощи ТСХ проводили проверку расходования исходного материала. Смесь частями выливали в холодную воду, и помещали контейнер на ледяную баню. Белое твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой и гексаном. После дополнительной сушки на вакуумном линии получали 6,03 г белого твердого вещества (117) (выход 96%). Дальнейшую очистку не проводили. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 7,76 (с, 1H), 7,26 (д, J=8,8 Гц, 1H), 7,03 (т, J=8,0 Гц, 1H) 6,34 (с, 1H), 3,69 (с, 3H), 2,41 (с, 3H); ЭРИ-МС: расчет. для (C14H10Cl2FN3O) 325, обнаружено 326 (MH+).
Раствор 5-((4,6-дихлорпиримидин-2-ил)окси)-4-фтор-1,2-диметил-1H-индола (соединение 117, 2,68 г, 8,22 ммоль), (E)-5-(проп-1-ен-1-ил)-1H-пиразол-3-амина (1,77 г, 14,38 ммоль), йодида натрия (1,85 г, 12,33 ммоль) и ДИПЭА (2,15 мл, 12,33 ммоль) в ДМФА (80 мл) перемешивали при температуре 65°C в течение 24 часов. При помощи ТСХ проводили проверку расходования исходного материала. Смесь выливали в воду (500 мл) и охлаждали на льду. Твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой и гексаном. Твердое вещество растворяли в смеси дихлорметан/метанол. Раствор концентрировали до минимального количества растворителей. Твердое вещество собирали фильтрованием, промывали метанолом с получением желтого твердого вещества (118) (2,27 г, выход 67%). Маточную жидкость восстанавливали. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6). 1H ЯМР (400 MГц, ДМСО-d6) δ 12,15 (уш., 1H), 10,35 (уш., 1H), 7,14 (м, 1H), 6,90 (м, 1H), 6,40 (уш., 1H), 6,22 (с, 1H), 5,70-5,10 (м, 3H), 3,80 (уш., 3H) 2,40 (с, 3H), 1,78 (уш., 3H); ЭРИ-МС: расчет. для (C20H18ClFN6O) 412, обнаружено 413 (MH+).
По той же методике, как в Примере 120, в тех же условиях при помощи реакции соединения 119 с 3-циклопропилпиразол-5-амином, получали продукт 119. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,15 (уш., 1H), 10,35 (уш., 1H), 7,14 (м, 1H), 7,00 (м, 1H), 6,50 (уш., 1H), 6,22 (с, 1H), 5,00 (уш., 1H), 3,80 (с, 3H) 2,40 (с, 3H), 1,50 (уш., 1H), 1,20 (уш., 2H), 0,80 (уш., 2H); ЭРИ-МС: расчет. для (C20H18ClFN6O) 412, обнаружено 413 (MH+).
Раствор соединения 118 (150 мг, 0,36 ммоль), 1-метилпиперазина (181 мг, 1,81 ммоль) и ДИПЭА (0,13 мл, 0,73 ммоль) в ДМСО (3,5 мл) перемешивали при температуре 75°C в течение 3 суток. При помощи ТСХ проводили проверку расходования исходного материала. Реакционную смесь выливали в разбавленный раствор бикарбоната натрия в воде (~1%) и охлаждали на ледяной бане. Твердое вещество собирали фильтрованием, промывали водой и гексаном с получением светло-коричневого твердого вещества массой 161 мг. Неочищенный продукт обрабатывали МеОН, фильтровали и промывали МеОН, получая соединение 120 в виде светло-желтого твердого вещества (82 мг, выход 47%). 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,92 (уш., 1H), 9,31 (уш., 1H), 7,20 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,92 (т, J=8,0 Гц, 1H), 6,28 (с, 1H), 5,80-5,60 (м, 4H), 3,70 (с, 3H), 3,42 (уш., 4H), 2,42 (с, 3H), 2,34 (м, 4H), 2,19 (с, 3H), 1,67 (д, J=6,0 Гц, 3H); ЭРИ-МС: расчет. для (C25H29FN8O) 476, обнаружено 477 (MH+).
Из соединения 118, по той же методике, как описано в Примере 120, получали соединение 121. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,92 (уш., 1H), 9,38 (уш., 1H), 7,23 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,92 (т, J=8,0 Гц, 1H), 6,28 (с, 1H), 5,80-5,60 (м, 4H), 3,70 (с, 3H), 3,60 (уш., 4H), 3,40 (м, 4H), 2,42 (с, 3H), 1,67 (д, J=6,0 Гц, 3H); ЭРИ-МС: расчет. для (C24H26FN7O2) 463, обнаружено 464 (MH+).
Из соединения 119, по той же методике, как описано в Примере 120, получали соединение 122. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,92 (уш., 1H), 9,31 (уш., 1H), 7,30 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,92 (т, J=8,0 Гц, 1H), 6,28 (с, 1H), 6,00 (уш., 1H), 5,15 (уш., 1H), 3,78 (с, 3H), 3,70 (уш., 4H), 2,80 (м, 4H), 2,57-2,42 (с, с, 6H), 1,80 (уш., 1H), 0,85 (уш., 2H), 0,00 (уш., 2H); ЭРИ-МС: расчет. для (C25H29FN8O) 476, обнаружено 477 (MH+).
Из соединения 119, по той же методике, как описано в Примере 120, получали соединение 123. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,92 (уш., 1H), 9,31 (уш., 1H), 7,22 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,92 (т, J=8,0 Гц, 1H), 6,27 (с, 1H), 5,90 (уш., 1H), 5,15 (уш., 1H), 3,68 (с, 3H), 3,60 (уш., 4H), 3,40 (м, 4H), 2,39 (с, 3H), 1,60 (уш., 1H), 0,85 (уш., 2H), 0,00 (уш., 2H); ЭРИ-МС: расчет. для (C24H26FN7O2) 463, обнаружено 464 (MH+).
К раствору 5-((4,6-дихлорпиримидин-2-ил)окси)-4-фтор-2-метил-1H-индола (0,109 г, 0,349 ммоль), 5-циклопропил-N-метил-1H-пиразол-3-амина (0,088 г, 0,641 ммоль) и диизопропилэтиламина (0,124 г, 0,961 ммоль) в безводном диметилформамиде (9 мл) в атмосфере аргона добавляли йодид натрия (0,106 г, 0,705 ммоль). Смесь нагревали до температуры 85°C в течение ночи (16 ч). После охлаждения растворитель удаляли при помощи вакуума, а затем повторно растворяли в смеси дихлорметан/изопропанол (8:2) (50 мл) и промывали насыщенным раствором NaHCO3. Объединенные органические фазы сушат над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Остаток очищали при помощи флэш-хроматографии на силикагеле, используя смесь CH2Cl2:MeOH (95:5), с получением соединения 124 (0,110 г, выход 77%) в виде светло-желтого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 12,37 (уш.с, 1H), 11,27 (с, 1H), 7,93 (с, 2H), 7,09 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,89 (м, 1H), 6,68 (с, 1H), 6,21 (с, 1H), 5,77 (уш.с, 1H), 3,24 (с, 3H), 2,37 (с, 3H), 1,67 (м, 1H), 0,83 (м, 2H), 0,51 (м, 2H). ЭРИ-МС: расчет. для C20H18ClFN6O 412, обнаружено 413 (M+H).
Раствор 6-хлор-N-(5-циклопропил-пиразол-3-ил)-2-((4-фтор-2-метил-индол-5-ил)окси)-N-метилпиримидин-4-амина (0,105 г, 0,255 ммоль), 1-метилпиперазина (0,102 г, 1,021 ммоль) и ДИПЭА (0,099 г, 0,765 ммоль) в изопропаноле (1,0 мл) нагревали до температуры 80°C в течение 2 суток в запаянной пробирке. Охлажденную смесь экстрагировали смесью дихлорметан/изопропанол (8:2) и промывали насыщенным раствором NaHCO3. Объединенные органические фазы сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Остаток очищали при помощи флэш-хроматографии на силикагеле, используя смесь CH2Cl2:MeOH (95:5), с получением соединения 125 (0,083 г, выход 68%) в виде грязно-белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,62 (с, 1H), 10,81 (с, 1H), 6,70 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,47 (м, 1H), 5,81 (с, 1H), 5,49 (с, 1H), 5,25 (с, 1H), 3,04 (м, 4H), 2,84 (с, 3H), 2,00 (с, 3H), 1,93 (м, 4H), 1,81 (с, 3H), 1,16 (м, 1H), 0,38 (м, 2H), 0,006 (м, 2H). ЭРИ-МС: расчет. для C25H29FN8O 476, обнаружено 478 (M+H).
К раствору 5-((4,6-дихлорпиримидин-2-ил)окси)-4-фтор-2-метил-1H-индола (0,109 г, 0,349 ммоль), 5-циклопропил-1-метил-пиразол-3-амина (0,088 г, 0,641 ммоль) и диизопропилэтиламина (0,124 г, 0,961 ммоль) в безводном диметилформамиде (9 мл) в атмосфере аргона добавляли йодид натрия (0,106 г, 0,705 ммоль). Смесь нагревали до температуры 85°C в течение ночи (16 ч). После охлаждения растворитель удаляли в вакууме, а затем повторно растворяли в смеси дихлорметан/изопропанол (8:2) (50 мл) и промывали насыщенным раствором NaHCO3. Объединенные органические фазы сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Остаток очищали при помощи флэш-хроматографии на силикагеле, используя смесь CH2Cl2:MeOH (9:1), с получением соединения 126 (0,255 г, выход 97%) в виде грязно-белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,32 (с, 1H), 10,31 (уш.с, 1H), 7,12 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,89 (м, 1H), 6,48 (уш.с, 1H), 6,20 (с, 1H), 5,13 (уш.с, 1H), 3,59 (уш.с, 3H), 2,39 (с, 3H), 1,53 (м, 1H), 0,61 (м, 2H), -0,26 (м, 2H). ЭРИ-МС: расчет. для C20H18ClFN6O: 412, обнаружено 413 (M+H).
Раствор 6-хлор-N-(5-циклопропил-L-метил-пиразол-3-ил)-2-((4-фтор-2-метил-индол-5-ил)окси)пиримидин-4-амина (0,100 г, 0,242 ммоль), 1-метилпиперазина (0,097 г, 0,969 ммоль) и ДИПЭА (0,094 г, 0,727 ммоль) в изопропаноле (1,0 мл) нагревали до температуры 80°C в течение 2 суток в запаянной пробирке. Охлажденную смесь экстрагировали смесью дихлорметан/изопропанол (8:2) и промывали насыщенным раствором NaHCO3. Объединенные органические фазы сушили над безводным Na2SO4 и концентрировали в вакууме. Остаток очищали при помощи флэш-хроматографии на силикагеле, используя смесь CH2Cl2:MeOH (95:5), с получением соединения 127 (0,106 г, выход 92%) в виде светло-желтого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, ДМСО-d6) δ 11,32 (с, 1H), 9,35 (с, 1H), 7,18 (д, 1H, J=8,4 Гц), 6,93 (м, 1H), 6,28 (с, 1H), 5,98 (уш.с, 1H), 5,27 (с, 1H), 3,68 (с, 1H), 3,52 (м, 4H), 3,26 (дд, 3H, J=5,2, 0,4 Гц), 2,49 (с, 3H), 2,44 (м, 4H), 2,30 (с, 3H), 1,64 (м, 1H), 0,72 (м, 2H), 0,00 (м, 2H). ЭРИ-МС: расчет. для C25H29FN8O: 476, обнаружено 478 (M+H).
Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим любые одно или несколько из раскрытых здесь соединений в виде фармацевтически приемлемых солей, гидратов, сольватов, кристаллических форм и их отдельных стереоизомеров (например, диастереомеров, энантиомеров) в комбинации с фармацевтически приемлемым носителем. Они включают в себя без ограничений композиции, в которых соединения по настоящему изобретению находятся в нейтральной или солевой форме.
Термин «фармацевтически приемлемые соли» включает в себя кислотно-аддитивные соли (образованные свободными аминогруппами белка) и соли, которые образованы неорганическими кислотами, такими как, например, соляная или фосфорная кислота, или такими органическими кислотами, как уксусная, щавелевая, винная, миндальная и тому подобные кислоты. Соли, образованные свободными карбоксильными группами, также могут быть получены из неорганических оснований, таких как, например, гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или железа, и таких органических оснований, как изопропиламин, триметиламин, гистидин, прокаин и тому подобное.
«Соли» представляют собой химические соединения двух ионизируемых компонентов (например, при растворении в воде), одного кислотного и одного основного по отношению друг к другу. Находясь в форме соли, лекарственное средство может выступать в роли или кислотного, или основного компонента.
«Фармацевтически приемлемые соли» включают в себя любые соли, образованные соединением, где такая соль является безопасной для животного при приеме внутрь (например, нетоксичной для человека при пероральном приеме). Примеры таких солей, которые могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением, включают в себя без ограничений 2-гидроксиэтансульфонат, 2-нафталинсульфонат, 3-гидрокси-2-нафтоат, 3-фенилпропионат, ацетат, адипат, альгинат, амсонат, аспартат, бензолсульфонат, бензоат, безилат, бикарбонат, бисульфат, битартрат, борат, бутират, кальция эдетат, камфорат, камфорсульфонат, камсилат, карбонат, цитрат, клавуланат, циклопентанпропионат, диглюконат, додецилсульфат, эдетат, эдисилат, эстолат, эзилат, этансульфонат, фумарат, глюцептат, глюкогептаноат, глюконат, глутамат, глицерофосфат, гликоллиларсанилат, гемисульфат, гептаноат, гексафторфосфат, гексаноат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидробромид, гидрохлорид, гидройодид, гидроксинафтоат, йодид, изотионат, лактат, лактобионат, лаурат, лаурилсульфонат, малат, малеат, манделат, мезилат, метансульфонат, метилбромид, метилнитрат, метилсульфат, мукат, нафтилат, напсилат, никотинат, нитрат, аммониевую соль N-метилглюкамина, олеат, оксалат, пальмитат, памоат, пантотенат, пектинат, персульфат, фосфат, фосфатедилфосфат, пикрат, пивалат, полигалактуронат, пропионат, п-толуолсульфонат, сахарат, салицилат, стеарат, субацетат, сукцинат, сульфат, сульфосалицилат, сурамат, таннат, тартрат, теоклат, тиоцианат, тозилат, триэтиодид, ундеканоат и валерат и тому подобное (см., также S.M. Berge et al., Pharmaceutical Salts, J. Pharm. Scis., 1977, 66: 1-18; P.L. Gould, Salt selection for basic drugs, Int'l J. Pharms. 1986, 33: 201-17.).
«Сольваты» представляют собой композиции, которые в процессе кристаллизации химического соединения из раствора захватывают молекулы растворителя в формирующуюся кристаллическую решетку.
«Гидраты» представляют собой сольваты, где растворителем является вода.
«Кристаллические» формы представляют собой твердые композиции, в которых образующие композицию молекулы упакованы в повторяющуюся решетчатую структуру. Когда для композиций, образованных одними и теми же молекулами, возможно более одной конфигурации решетчатой структуры, различные композиции называют «полиморфы».
«Диастереомеры» представляют собой стереоизомеры, которые не относятся друг к другу как объект и его зеркальное отражение, но все-таки различаются расположением в трехмерном пространстве относительно одного тетраэдрального атома углерода, находящегося в sp3-гибридизации.
«Энантиомер» представляет собой один из двух стереоизомеров, которые являются зеркальным отображением друг друга, но не являются совместимыми в пространстве (не идентичны).
«Фармацевтически приемлемый носитель» представляет собой любое вспомогательное вещество, которое не является токсичным и способствует осуществлению лекарственным средством своих функций (см. также Rowe RC et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 5th ed., 2006).
Пример 128
В этом примере изучаются ингибирующие свойства соответствующих соединений по настоящему изобретению в отношении киназы c-Src, киназы Aurora-A, киназы Flt3, киназы Ret и киназы TrkA в анализе киназной активности (см. Daniele Fancelli et al, J. Med. Chem., 2006, 49 (24), pp 7247-7251). Протокол анализа с помощью набора KinaseProfiler™ (Millipore) использовали в этом исследовании киназоингибирующей активности новых соединений по настоящему изобретению. В этом исследовании буферная композиция имела следующий состав: 20 мМ MOPS, 1 мМ ЭДТА, 0,01% Brij-35, 5% глицерина, 0,1% β-меркаптоэтанола, 1 мг/мл БСА. Исследуемые химические соединения сначала растворяли в ДМСО в желаемой концентрации, а затем делали серию разведений буфером для анализа киназной активности. В конечном объеме реакционной смеси 25 мкл киназы Aurora-A(h) (5-10 мЕд) инкубировали с 8 мМ MOPS рН 7,0, 0,2 мМ ЭДТА, 200 мкΜ LRRASLG (Kemptide), 10 мМ ацетата Mg и [γ33Ρ-АТФ]. Реакцию инициировали добавлением смеси Mg АТФ. После инкубации в течение 40 минут при комнатной температуре, реакцию останавливали путем добавления 5 мкл 3% раствора фосфорной кислоты. Затем 10 мкл реакционной смеси наносили на фильтр P30 и три раза в течение 5 минут промывали 50 мМ фосфорной кислотой и один раз метанолом перед сушкой и измереним активности сцинтилляционным методом. Лунки, содержащие субстрат, но не содержащие киназу, и лунки, содержащие контрольный фосфопептид, использовали для установки 0% и 100% значений фосфорилирования, соответственно.
Набор для анализа киназной активности Kinase HotspotTM также использовали для изучения ИК50 химических соединений или % ингибирования (Reaction Biology Corp.). Ингибирующие значения ИК50 определяли путем титрования химического соединения при оптимальной концентрации киназы (ЭК50 киназы).
В Таблице 1 приведены репрезентативные данные для ингибирования киназы abl, киназы Aurora-A, киназы c-Src, киназы Flt3, киназы KDR и киназы Ret соединениями по настоящему изобретению при концентрации 1 мкМ.
Эти результаты показывают, что многочисленные варианты осуществления настоящего изобретения обладают превосходными киназоингибирующими свойствами в отношении широкого круга киназ.
Пример 129
Вариант осуществления настоящего изобретения, раскрытый в Примере 81 (также известный как соединение «NTW-3475»), продемонстрировал сильную ингибирующую активность в отношении всех киназ Примера 128 и был выбран для дальнейшего исследования.
Скрининговую панель линий опухолевых клеток человека NCI-60 DTP использовали для дальнейшей оценки биохимии NTW-3475 (см. Shoemaker: The NCI60 human tumour cell line anticancer drug screen, Nature Reviews Cancer 6, 813-823 (1 октября 2006)).
Влияние NTW-3475 на киназную активность было изучено для широкого круга киназ, и результаты показаны в Таблице 2.
Сводная таблица, Активность%
Концентрация АТФ: Km
Соединение NTW-3475 показало сильную киназоингибирующую активность в отношении широкого круга киназ, в том числе мутантных киназ, мутации в которых, как полагают, являются критическими для превращения клеток в раковые клетки, из которых они были выделены и протестированы, в частности мутантных киназ abl, для которых отсутсвуют известные ингибиторы (Фиг. 2).
Пример 130
Соединение NTW-3475 также проверялось на наличие у него антипролиферативного потенциала с использованием клеточных линий из панели, состоящей из 60 линий раковых клеток Национального института онкологии США.
Линии опухолевых клеток человека из раковой скрининговой панели выращивали на среде RPMI, содержащей 5% фетальной бычьей сыворотки и 2 мМ L-глутамина. Для типичного скринингового эксперимента клетки высевали в 96-луночные микропланшеты в 100 мкл среды с плотностью посева в диапазоне от 5000 до 40000 клеток на лунку, в зависимости от времени удвоения отдельных клеточных линий. После посева клеток микропланшеты инкубировали при температуре 37°C в атмосфере, содержащей 5% CO2 и 95% воздуха, и 100% относительной влажности в течение 24 часов до добавления исследуемого лекарственного вещества.
Через 24 часа два планшета каждой клеточной линии фиксировали in situ ТХУ, чтобы провести измерение размера клеточной популяции каждой клеточной линии в момент внесения лекарственного вещества (Tz). Исследуемые лекарственные вещества растворяли в диметилсульфоксиде в 400-кратной концентрации по отношению к желаемой максимальной исследуемой конечной концентрации и хранили в замороженном состоянии до момента использования. Во время добавления лекарственного вещества аликвоту замороженного концентрата оттаивали и разбавляли до 2-кратной концентрации по отношению к желаемой максимальной исследуемой конечной концентрации полной средой, содержащей 50 мкг/мл гентамицина. Делали четыре дополнительных 10-кратных или ½ log серийных разведения, чтобы в общей сложности получить пять концентраций лекарственого вещества плюс контроль. Аликвоты по 100 мкл этих различных разведений лекарственного вещества добавляли в соответствующие лунки микропланшета, уже содержащие 100 мкл среды, получая необходимые конечные концентрации лекарственного вещества.
После добавления лекарственного вещества планшеты инкубировали в течение дополнительных 48 часов при температуре 37°C в атмосфере, содержащей 5% CO2 и 95% воздуха, и 100% относительной влажности. Для прикрепившихся клеток анализ останавливали путем добавления холодной ТХУ. Клетки фиксировали in situ путем осторожного добавления 50 мкл холодной 50% (масса/объем) ТХУ (конечная концентрация ТХУ 10%) и инкубировали в течение 60 минут при температуре 4°C. Супернатант удаляли, и планшеты промывали пять раз водопроводной водой и сушили на воздухе. Раствор сульфородамина B (SRB) (100 мкл) с концентрацией 0,4% (масса/объем) в 1% уксусной кислоте добавляли в каждую лунку, и планшеты инкубировали в течение 10 минут при комнатной температуре. После окрашивания несвязавшийся краситель удаляли путем пятикратного промывания 1% уксусной кислотой, и планшеты сушили на воздухе. Связанный краситель затем солюбилизировали в 10 мМ Трис, и оптическую плотность определяли на автоматическом планшет-ридере при длине волны 515 нм. Для суспензии клеток методика была такой же, за исключением того, что анализ останавливали путем фиксации осевших на дно лунок клеток путем осторожного добавления 50 мкл 80% ТХУ (конечная концентрация ТХУ 16%). Проведя семь измерений оптической плотности [нулевой момент времени (Tz), рост в контроле (C), рост в эксперименте в присутствии лекарственного вещества в пяти концентрациях (Ti)], рассчитывали процент роста для каждого уровня концентрации лекарственного вещества. Процент ингибирования роста вычисляли по формуле:
[(Ti-Tz)/(C-Tz)]×100 - для концентраций, для которых Ti>/=Tz
[(Ti-Tz)/Tz]×100 - для концентраций, для которых Ti<Tz.
Три параметра эффекта дозы вычисляли для каждого исследуемого агента. Константу ингибирования роста на 50% (CI50) рассчитывали по формуле [(Ti-Tz)/(C-Tz)]×100=50, она представляет собой концентрацию лекарственного вещества, приводящую к уменьшению на 50% чистого увеличения количества белка (измеренного окрашиванием SRB) в контрольных клетках во время инкубации с лекарственным веществом.
Как показано на Фиг. 3, соединение NTW-3475 обладает сильной антипролиферативной активностью в, по меньшей мере, 13 из 16 изученных клеточных линий. Это антипролиферативное действие наблюдалось в ряде клеточных линий, включая клеточные линии хронического миелоидного лейкоза, острого миелоидного лейкоза, карцином щитовидной железы, эндометрия, желудка, молочной железы и поджелудочной железы.
Пример 131
В этом примере оценивали противоопухолевую активность соединения NTW-3475 с использованием ксенотрансплантатных мышиных ТКИН моделей лейкоза и ксенотрансплантатных моделей карцином эндометрия, поджелудочной железы и щитовидной железы на основе голых мышей. Использование соединения NTW-3475 в комбинированной терапии также изучали на мышиных ксенотрансплантатных моделях.
Целью первого исследования было оценить противоопухолевую активность нового ингибитора нескольких киназ NTW-3475 на ксенотрансплантатной мышиной модели острого миелоидного лейкоза (ОМЛ) человека MV411 у самок мышей с ТКИН.
Четыре или шесть животных случайным образом было отобрано в каждую группу исследования. Каждому животному подкожно вводили в левый и правый бок 0,1 мл клеточной суспензии с концентрацией 1,0×108 клеток MV411 на мл.
Каждое опытное или контрольное животное в течение двух циклов эксперимента, состоящих из 5 дней введения препарата и 2 дней перерыва, получало растворитель в качестве отрицательного контроля или 25, 50 мг/кг NTW-3475. Рост опухоли измеряли при помощи цифрового портативного штангенциркуля два раза в неделю (после появления опухоли) до первого введения препарата, и затем два-три раза в неделю до умерщвления. Животных взвешивали перед введением опухолевых клеток, перед введением препарата, два-три раза в неделю вместе с измерением роста опухоли, и перед умерщвлением.
Результаты показаны на Фиг. 4 (вес опухоли с течением времени), Фиг. 5 (размер опухоли с течением времени) и Фиг. 6 (отношение опыт/контроль в день 22). Эти результаты показывают, что соединение NTW-3475 обладает сильным противоопухолевым действием в отношении ОМЛ с минимальной потерей массы тела.
Целью второго исследования было оценить противоопухолевую активность нового ингибитора нескольких киназ NTW-3475 на ксенотрансплантатной мышиной модели хронического миелоидного лейкоза (ХМЛ) человека K562 у самок мышей с ТКИН.
От четырех до шести животных случайным образом было отобрано в группы исследования. Каждое животное взвешивали, и затем ему подкожно вводили в левый и правый бок 0,1 мл клеточной суспензии с концентрацией 8,0×107 клеток K562 на мл.
Каждое опытное или контрольное животное участвовало в двух циклах схемы лечения, состоящих из 5 дней введения препарата и 2 дней перерыва. Рост опухоли измеряли при помощи цифрового портативного штангенциркуля два раза в неделю (после появления опухоли) до первого введения препарата, и затем два-три раза в неделю до умерщвления. Животных взвешивали перед введением опухолевых клеток, перед введением препарата, два-три раза в неделю вместе с измерением роста опухоли, и перед умерщвлением. Результаты показаны на Фиг. 7 и 8. Эти результаты показывают, что соединение NTW-3475 обладает сильным противоопухолевым действием в отношении ОМЛ в этой модельной системе.
Целью третьего исследования было оценить противоопухолевую активность нового ингибитора нескольких киназ NTW-3475 на ксенотрансплантатной мышиной модели карциномы поджелудочной железы человека MIAPaCa-2 у мышей Faxn1.
Четырех животных случайным образом отбирали в группы исследования. Каждое животное взвешивали, и затем ему подкожно вводили в левый и правый бок 0,1 мл клеточной суспензии с концентрацией 5,0×107 клеток MIAPaCa-2 на мл.
Каждое опытное или контрольное животное участвовало в двух циклах схемы лечения, состоящих из 5 дней введения препарата и 2 дней перерыва, с растворителем, в качестве отрицательного контроля, 20 мг/кг препарата Abraxane в качестве положительного контроля, или 25, 50 мг/кг соединения NTW-3475. Рост опухоли измеряли при помощи цифрового портативного штангенциркуля два раза в неделю (после появления опухоли) до первого введения препарата, и затем два-три раза в неделю до умерщвления. Результаты показаны на Фиг. 9, 10 и 11. Эти результаты показывают, что соединение NTW-3475 обладает сильным противоопухолевым действием в отношении клеток карциномы поджелудочной железы в этой модельной системе.
Соединение NTW-3475 было аналогичным образом испытано, и показало, что оно обладает противоопухолевым действием в отношении ксенотрансплантатной модели карциномы щитовидной железы человека TT (Фиг. 12 и 13).
Соединение NTW-3475 было аналогичным образом испытано, и показало, что оно обладает противоопухолевым действием в отношении ксенотрансплантатной модели карциномы эндометрия человека AN3 (Фиг. 14, 15 и 16).
Соединение NTW-3475 было аналогичным образом испытано само по себе и в комбинации с Abraxane, и показало, что оно обладает противоопухолевым действием в отношении ксенотрансплантатной модели карциномы поджелудочной железы MIAPaCa-2 (Фиг. 17, 18 и 19).
В целом, исследования киназной активности, пролиферации и ксенотрансплантатных моделей показывают, что соединение NTW-3475 обладает высокой клеточной активностью и специфичностью действия (Фиг. 20), и соединение NTW-3475 обладает активностью in vivo против ОМЛ, ХМЛ, карцином щитовидной железы, эндометрия и некоторых карцином поджелудочной железы в ксенотрансплантатных модельных системах (Фиг. 21).
Пример 132
Вариант осуществления настоящего изобретения, раскрытый в Примере 87 (также известный как соединение «NTW-3456»), продемонстрировал сильное ингибирование всех киназ из Примера 128 и был выбран для дальнейшего исследования.
Первое исследование было спланировано таким образом, чтобы оценить влияние NTW-3456 на киназную активность.
Активность NTW-3456 в отношении широкого круга киназ показана на Фиг. 22-24, в том числе в отношении мутантных киназ, которые, как считается, играют большую роль в малигнизации новообразований (Фиг. 23 и 24). Кроме того, NTW-3456 ингибирует киназную активность в мутантах abl, для которых ранее не было известно ингибиторов, одобренных Управлением по контролю качества продуктов питания и лекарственных препаратов США. В частности, NTW-3456 ингибирует мутант 2T315I, для которого до NTW-3456 не было известно киназных ингибиторов.
Пример 133
Влияние соединения NTW-3456 на пролиферацию in vitro изучали при помощи скрининговой панели линий раковых клеток NCI-60 по протоколу, использованному для тестирования соединения NTW-3475.
Скрининговую панель линий опухолевых клеток человека NCI-60 DTP использовали для дальнейшей оценки биохимии NTW-3456 (см. Shoemaker: The NCI60 human tumour cell line anticancer drug screen, Nature Reviews Cancer 6, 813-823 (1 октября 2006)). Влияние NTW-3456 на киназную активность было изучено для широкого круга киназ и показано на Фиг. 25. В целом, NTW-3456 ингибирует как фосфорилирование, так и пролиферацию. Антипролиферативную активность NTW-3456 наблюдали в отношении клеточных линий ОМЛ, ХМЛ, карцином щитовидной железы, эндометрия, желудка, молочной железы и некоторых клеточных линий карциномы поджелудочной железы (Фиг. 26).
Пример 134
В этом примере изучали противоопухолевую активность соединения NTW-3456 с использованием ксенотрансплантатных модельных систем для ОМЛ, ХМЛ, карцином щитовидной железы, эндометрия и поджелудочной железы.
На Фигурах 27-32 показаны результаты влияния различных концентраций NTW-3456 на рост опухоли у ТКИН мышей, которые служили ксенотрансплантатной моделью ОМЛ, полученной с использованием клеток MV411. В этой модельной системе соединение NTW-3456 показало значительную противоопухолевую активность, особенно при более высоких дозах (Фиг. 29 и 32). В настоящем изобретении показана корреляция между ингибированием киназы pFLT3 и регулированием роста.
Мышам, имевшим развившиеся ксенотрансплантатные MV411 опухоли (объем опухоли около 150 мм3), перорально вводили соединение NTW-3456 в количестве 50 мг/кг. Через 0, 1, 2, 8, 16, 24 часа после введения дозы умерщвляли по три животных. Отбирали образцы крови, и плазму крови для ЖХ-МС анализа получали путем центрифугирования. Кроме того, отбирали опухоли, гомогенизировали их в лизирующем буфере и проводили иммунопреципитацию с анти-FLT3 антителами (Фиг. 33).
Кривая (закрашенные кружки) представляет собой график профилей концентрация в плазме - время для соединения NTW-3456 после перорального введения в количестве 50 мг/кг. Верхняя кривая (закрашенные треугольники) показывает ингибирование фосфорилирования FLT3 (pFLT3) соединением NTW-3456 после перорального введения 50 мг/кг NTW-3456 в указанное время.
Соединение NTW-3456 ингибирует фосфорилирование FLT3 in vivo времязависимым образом. Через 24 часа соединение NTW-3456 (7 нМ в плазме крови) все еще ингибирует более 60% фосфорилирования FLT3 в MV4-11 опухоли.
На Фигурах 34 и 35 показаны результаты влияния различных концентраций NTW-3456 на рост опухоли у ТКИН мышей, которые служили ксенотрансплантатной моделью ХМЛ, полученной с использованием клеток K562. В этой модельной системе соединение NTW-3456 показало значительную противоопухолевую активность, особенно при более высоких дозах (Фиг. 34).
На Фигурах 36-38 показаны результаты влияния различных концентраций NTW-3456 на рост опухоли у голых мышей, которые служили ксенотрансплантатной моделью карциномы щитовидной железы, полученной с использованием клеток TT. В этой модельной системе соединение NTW-3456 показало значительную противоопухолевую активность, особенно при более высоких дозах (Фиг. 38).
На Фигурах 39-41 показаны результаты влияния различных концентраций NTW-3456 на рост опухоли у голых мышей AN3, которые служили ксенотрансплантатной моделью карциномы эндометрия. В этой модельной системе соединение NTW-3456 показало значительную противоопухолевую активность, особенно при более высоких дозах (Фиг. 41).
На Фигурах 42-44 показаны результаты влияния различных концентраций NTW-3456 на рост опухоли у голых мышей, которые служили ксенотрансплантатной моделью карциномы поджелудочной железы, полученной с использованием клеток MIAPaCa-2. В этой модельной системе соединение NTW-3456 показало некоторую противоопухолевую активность в этой модели карциномы поджелудочной железы.
На Фигурах 45 и 46 показаны результаты влияния различных концентраций NTW-3456 с или без Abraxane на рост опухоли в модели карциномы поджелудочной железы MIAPaCa-2. В этой модельной системе соединение NTW-3456 показало значительную противоопухолевую активность, особенно при использовании в комбинации с Abraxane (Фиг. 47).
На Фигурах 48 и 49 показаны результаты влияния различных концентраций NTW-3456 с или без Abraxane на рост опухоли в модели карциномы поджелудочной железы Panc-1. В этой модельной системе соединение NTW-3456 показало значительную противоопухолевую активность, особенно при использовании в комбинации с Abraxane.
На Фигуре 50 обобщены данные о противоопухолевой активности соединения NTW-3456 в ксенотрансплантатных мышиных моделях. В целом, эти примеры демонстрируют высокую специфичную активность, наблюдаемую для соединения NTW-3456.
Пример 135
В этом примере изучалась биохимия NTW-3456 и NTW-3475 в клетках.
На Фигурах 51 и 52 показаны кривые дозовой зависимости для ингибирования пролиферации и pERK- и pAKt-опосредованной передачи сигнала в клетках MiaPaCa-2 и BaFC3 соединением NTW-3456, Нилотинибом, Понатинибом, Сунитинибом и Иматинибом. На Фигуре 53 обобщены эти данные.
На Фигуре 54 показаны кривые дозовой зависимости для ингибирования роста клеток K562 in vitro соединением NTW-3456, Нилотинибом, Понатинибом, Сунитинибом и Иматинибом. На Фигуре 55 показаны кривые дозовой зависимости для ингибирования активности киназы p-Crl в клетках K562 соединением NTW-3456, Нилотинибом, Понатинибом, Сунитинибом и Иматинибом. На Фигуре 56 показаны кривые дозовой зависимости для индукции активности каспазы 3/7 в клетках K562 соединением NTW-3456, Нилотинибом, Понатинибом, Сунитинибом и Иматинибом. На Фигуре 57 обобщены эти данные.
На Фигуре 58 показаны кривые дозовой зависимости для ингибирования киназной активности в клетках BaF3 соединением NTW-3456 для FGFR1, FGFR2, FGFR3 и FGFR4. На Фигуре 59 показаны значения ИК50 соединения для FGFR1, FGFR2, FGFR3 и FGFR4 в клетках BaF3. В целом, ингибирование пролиферации, pERK сигнального пути в клетках MIAPaCa-2 и BxPC3 соединением NTW-3475 (Фиг. 38) и соединением NTW-3456 (Фиг. 39) оказалось аналогичным. Кроме того, эти результаты свидетельствуют о корреляции между ингибированием роста и ингибированием передачи сигнала.
Все литературные источники, включая публикации, патентные заявки и патенты, цитированные здесь, полностью включены в настоящее изобретение путем ссылки в такой же степени, как если бы для каждого отдельного литературного источника было специально указано, что он включен в настоящее изобретение путем ссылки.
Использование терминов в единственном числе, а также с определениями «по меньшей мере, один» и аналогичными определениями в контексте описания настоящего изобретения (особенно в контексте следующей формулы изобретения) следует понимать как включающее в себя как форму единственного числа, так и форму множественного числа, если иное не указано в описании или явно не противоречит контексту. Использование термина «по меньшей мере, один» с последующим списком из одного или нескольких пунктов (например, «по меньшей мере один из A и B») следует понимать так, что имеется в виду один пункт, выбранный из перечисленных пунктов (A или B), или любая комбинация двух или более из перечисленных пунктов (A и B), если иное не указано в описании или явно не противоречит контексту. Термины «содержащий», «имеющий», «включающий в себя» и «обладающий» должны рассматриваться как неограничивающие термины (т.е. означающие «включающий в себя без ограничений»), если не указано иное. Предполагается, что указание в настоящем описании диапазонов значений является только кратким способом индивидуального указания каждого отдельного значения, находящегося внутри этого диапазона, если в описании не указано иное, и каждое отдельное значение включено в настоящее описание, как если бы оно было индивидуально в нем указано. Все описанные здесь способы могут осуществляться в любом подходящем порядке, если иное не указано в описании или явно не противоречит контексту. Использование любого и всех приведенных здесь примеров или указывающих на примеры выражений (например, «такой как») предназначено только для лучшего раскрытия настоящего изобретения и не накладывает ограничений на объем изобретения, если не указано иное. Ни один термин в настоящем описании не следует истолковывать как указывающий на любой незаявленный элемент, как на существенный для практического осуществления изобретения.
Здесь описаны предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения, в том числе лучший способ осуществления изобретения, известный его авторам. Изменения в этих предпочтительных вариантах осуществления изобретения могут стать очевидными для средних специалистов в данной области техники после прочтения приведенного выше описания. Авторы настоящего изобретения ожидают, что специалисты в данной области техники будут применять такие изменения по мере необходимости, а также авторы настоящего изобретения предполагают, что данное изобретение будет осуществляться иначе, чем конкретно описано здесь. Таким образом, настоящее изобретение включает в себя все модификации и эквиваленты объекта изобретения, охарактеризованного в прилагаемой здесь формуле изобретения в соответствии с действующим законодательством. Кроме того, любая комбинация вышеуказанных элементов во всех возможных вариантах включена в настоящее изобретение, если не указано иное или если иное явно не противоречит контексту.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРИМИДИНА В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ КИНАЗЫ И ИХ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ ПРИМЕНЕНИЯ | 2015 |
|
RU2701188C2 |
| ЗАМЕЩЕННЫЕ ПИРИМИДИНИЛПИРРОЛЫ, АКТИВНЫЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ КИНАЗЫ | 2012 |
|
RU2621732C2 |
| ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРАЗОЛОТРИАЗИНА И/ИЛИ ПИРАЗОЛОПИРИМИДИНА | 2019 |
|
RU2818563C2 |
| ИНГИБИТОРЫ РЕЦЕПТОРА ФАКТОРА РОСТА ФИБРОБЛАСТОВ | 2014 |
|
RU2704112C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРИМИДИНА В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ КИНАЗ И ИХ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ ПРИМЕНЕНИЯ | 2016 |
|
RU2718915C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ ИНДОЛА ИЛИ БЕНЗИМИДАЗОЛА ДЛЯ МОДУЛЯЦИИ IkB-КИНАЗЫ | 2003 |
|
RU2318820C2 |
| ИМИДЫ КАК ИНГИБИТОРЫ TNF-АЛЬФА | 1994 |
|
RU2174516C2 |
| НОВЫЕ КОНДЕНСИРОВАННЫЕ ПИРИМИДИНОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ДЛЯ ИНГИБИРОВАНИЯ ТИРОЗИНКИНАЗНОЙ АКТИВНОСТИ | 2011 |
|
RU2585177C2 |
| ИНГИБИТОРЫ ПРОТЕИНКИНАЗ, ИХ СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ И МЕДИЦИНСКОЕ ПРИМЕНЕНИЕ | 2016 |
|
RU2749437C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ ХИНОЛИНА В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ РЕЦЕПТОРНОЙ ТИРОЗИНКИНАЗЫ AXL/MER И CSF1R | 2019 |
|
RU2812631C2 |
Настоящее изобретение относится к новым соединениям формулы 1 и 2, которые обладают противоопухолевой активностью. Соединения могут быть использованы для лечения различных расстройств, заболеваний и патологических состояний, опосредованных активностью протеинкиназ, участвующих в патогенезе широкого круга разновидностей рака, например карциномы поджелудочной железы. Соединения соответствуют формуле 1 и 2
(1), 
(2)
Изобретение также относится к фармацевтической композиции, содержащей в эффективном количестве соединение 1 или 2, фармацевтически приемлемый носитель и, возможно, дополнительный терапевтический агент, представляющий собой паклитаксел. 3 н. и 1 з.п. ф-лы, 59 ил., 2 табл., 135 пр.
1. Соединение формулы (1)
2. Соединение формулы (2)
3. Фармацевтическая композиция, обладающая противоопухолевой активностью, содержащая в эффективном количестве соединение по п.1 или 2 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель.
4. Композиция по п.3, дополнительно содержащая дополнительный терапевтический агент, представляющий собой паклитаксел.
| US 2012172361 A1, 05.07.2012 | |||
| US 2004049032 A1, 11.03.2004 & EA 012869 B1, 30.12.2009 & EA 015990 B1, 30.01.2012 | |||
| Jonathan M | |||
| Elkins и др | |||
| Аппарат с мешалками для концентрации руд по методу всплывания | 1913 |
|
SU680A1 |
| US 0008013153 B2, 06.09.2011 | |||
| АЗОТСОДЕРЖАЩИЕ АРОМАТИЧЕСКИЕ ПРОИЗВОДНЫЕ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ, ИХ СОДЕРЖАЩАЯ, СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ И ПРИМЕНЕНИЕ | 2003 |
|
RU2310651C2 |
| RU 2015143657 A, 27.04.2017, приоритет 15.03.2013. | |||
