Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к производным хинолина, которые являются ингибиторами РТК (рецепторной тирозинкиназы) Axl/Mer и CSF1R (рецептора колониестимулирующего фактора 1). Эти соединения подходят для лечения нарушений, связанных, сопровождаемых, вызываемых и/или индуцированных рецепторной тирозинкиназой Axl/Mer и CSF1R, в частности, их гиперфункцией. Соединения подходят для лечения гиперпролиферативных нарушений, таких как рак, в частности, иммуносупрессивный рак (например, рак с угнетением врожденного иммунитета в микросреде опухоли (TME), рефрактерный рак и метастазы рака. Они также полезны при лечении воспалительных заболеваний и/или нейродегенеративных заболеваний.
Уровень техники
Рецепторная тирозинкиназа Axl/Mer (РТК Axl/Mer) относится к рецепторным тирозинкиназам ТАМ (тирозин, Axl, Mer). Для них характерно наличие внеклеточного домена, состоящего из двух иммуноглобулиноподобных доменов, за которыми следуют два домена, подобных фибтонектину типа 3. Активация Axl/Mer происходит с помощью его когнатного белкового лиганда, гена блокировки роста 6 (Gas6) и белка S (Pros1), соответственно.
Уже известно, что РТК Axl/Mer регулирует рост, дифференциацию и выживаемость клеток, но в последние годы РТК Axl/Mer стала перспективной мишенью для иммунотерапии рака, и, как известно, является регулятором иммунного гомеостаза. Направляемые своими когнатными лигандами Gas6 и Pros1, эти рецепторы обеспечивают прекращение воспаления путем подавления активации врожденных клеток, а также восстановления функции тканей за счет промотирования восстановления тканей и выведения апоптотических клеток в нормальном состоянии (Paolino M et al.,Cancers (Basel). 2016 Oct 21;8(10) pii: E97).
Однако в микросреде опухоли (TME) активация рецепторов Axl/Mer может привести к иммунной эвазии за счет фагоцитоза апоптотических клеток, управляемого РТК Axl/Mer, снижения иммунного ответа и последующего ингибирования прайминга Т-клеток (Zagórska A et al., Nat Immunol. 2014 Oct;15(10):920-8). Кроме того, РТК Axl/Mer принимают участие в модуляции цитокинового окружения опухоли для ограничения эффективного рекрутинга CD8+ Т-клеток и для поляризации макрофагов в направлении противовоспалительного состояния M2, что играет важную роль в усилении прогрессирования опухоли. (Akalu YT et al., Immunol Rev. 2017 Mar;276(1):165-177). Более того, ингибирование пути толл-подобных рецепторов (TLR) РТК Axl/Mer в дендритных клетках (ДК) запускает подавление популяции цитотоксических Т-клеток CD8+, что может повышать противоопухолевый иммунитет. Кроме того, сообщается, что активация семейства ТАМ отрицательно регулирует воспалительный ответ, опосредованный передачей сигналов TLR, за счет увеличения экспрессии SOCS1 и 3.
Также сообщается, что рецепторы Axl/Mer отрицательно регулируют активацию естественных клеток-киллеров через регулирование Cbl/b, а также подавляют продукцию ИФН-гамма-цитокинов активированными естественными клетками-киллерами. Соответственно, возможно ингибирование рецепторов Axl/Mer при помощи новых подходов к иммунотерапии для различных онкологических пациентов путем примирования иммунного ответа хозяина на инвазию опухолевых клеток (Davra V et al., Cancers (Basel). 2016 Nov 29;8(12). pii: E107).
Рецептор колониестимулирующего фактора 1 (CSF1R) также представляет собой рецепторную тирозинкиназу гомодимерного типа III на клеточной поверхности макрофагов и других клеток миелоидной линии, которая кодируется протоонкогеном c-fms. Активация CSF1R происходит путем связывания его лигандом. CSF1 и IL-34 (Hume DA et al., Blood. 2012 Feb 23; 119(8):1810-20).
Известно, что CSF1R регулирует дифференциацию миелоидных предшественников в гетерогенные популяции моноцитов, макрофагов, дендритных клеток (ДК) и остеокластов, резорбирующих костную ткань. Кроме того, активированный CSF1R участвует в обеспечении выживания, пролиферации, дифференциации и хемотаксиса дифференцированных макрофагов (Geissmann F et al., Science. 2010 Feb 5; 327(5966):656-61).
На основании роли CSF1R в иммунных клетках разрабатываются различные подходы для иммунотерапии и лечения рака, мишенью которых являются CSF1R или его лиганды, и в настоящее время они находятся на стадии клинических испытаний.
Раскрытие изобретения
Целью настоящего изобретения является предложение соединений и/или их фармацевтически приемлемых солей, которые можно использовать в качестве фармацевтически активных веществ, в частности, для лечения клеточно-пролиферативных заболеваний, например, рака, а также воспалительных заболеваний и/или нейродегенеративных заболеваний, а также композиций, содержащих по меньшей мере одно из таких соединений и/или их фармацевтически приемлемых солей в качестве фармацевтически активных ингредиентов.
В первом аспекте настоящее изобретение относится к соединению общей формулы I:
где
X1 независимо в каждом случае выбран из CR3 и N;
X2 независимо в каждом случае выбран из CR4 и N;
n независимо в каждом случае выбран из 0, 1 и 2;
А независимо в каждом случае выбран из любой структуры, указанной в следующей группе W;
R1 независимо в каждом случае выбран из группы, состоящей из водорода; C1-C6 алкила, C1-C6 алкила, замещенного одним или двумя OR5 и NR5R6; C3-C10 циклоалкила; C1-C4 галогеналкила; -(C=O)R5, любой из которых необязательно замещен;
R2 независимо в каждом случае выбран из группы, состоящей из C1-C6 алкила; C3-C10 циклоалкила; C1-C4 галогеналкила; -NR7R8; -OR8; любой из которых необязательно замещен;
R3 и R4 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из водорода; галогена; например, Cl или F; C1-C3 алкила; OR5; C1-C4 галогеналкила; любой из которых необязательно замещен;
R5 и R6 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из водорода; C1-C6 алкила; C3-C10 циклоалкила; C1-C4 галогеналкила; любой из которых необязательно замещен;
R7 независимо в каждом случае выбран из группы, состоящей из водорода; C1-C6 алкила; C1-C6 алкила, замещенного одним или двумя OR5 и NR5R6; C3-C10 циклоалкила, C1-C4 галогеналкила; любой из которых необязательно замещен;
R8 независимо в каждом случае выбран из группы, состоящей из водорода; -CH(CH3)2; -C(CH3)3; C3-C10 циклоалкила; С3-С10 гетероциклоалкила; C1-C4 галогеналкила; С1-С6 алкила, замещенного одним или двумя OR5 и NR5R6; и C1-C6 алкила, замещенного одним или двумя из С3-С10 циклоалкила, С3-С10 гетероциклоалкила и С1-С4 галогеналкила; любой из которых необязательно замещен;
Z1 в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из водорода; C1-C6 алкила; C1-C6 алкила, замещенного одним или двумя из (=O), CN, OR5 и NR5R6; C3-C10 циклоалкила; C3-C10 циклоалкила, замещенного одним или несколькими из галогена, OR7 и NR9R10; C3-C10 гетероциклоалкила; C3-C10 гетероциклоалкила, замещенного одним или несколькими из галогена, С1-С6 алкила, С3-С10 циклоалкила и С1-С4 галогеналкила; С1-С4 галогеналкила;
R9 и R10 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из водорода, C1-C6 алкила; C3-C10 циклоалкила; С1-С4 галогеналкила; любой из которых необязательно замещен;
R11 и R12 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из C1-C6 алкила; C3-C10 циклоалкила; С3-С10 гетероциклоалкила; C1-C4 галогеналкила; любой из которых необязательно замещен;
и их фармацевтически приемлемые соли.
В одном варианте соединение по настоящему изобретению имеет общую формулу II:
где
R1, R2, R3, R4, R11, R12, Z1, X1, X2 и n имеют значения, определенные выше; а также их фармацевтически приемлемые соли.
В одном варианте соединение по настоящему изобретению имеет общую формулу III:
где
R1, R2, R3, R4, Z1, X1, X2 и n имеют значения, определенные выше; а также их фармацевтически приемлемые соли,
где, предпочтительно,
R3 и R4 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из водорода; галогена, например, Cl или F; C1-C3 алкила, который необязательно замещен;
R8 независимо в каждом случае выбран из группы, состоящей из водорода; -CH(CH3)2; -C(CH3)3; C3-C10 циклоалкила; C1-C4 галогеналкила; С1-С6 алкила, замещенного одним или двумя OR5 и NR5R6; или C1-C6 алкила, замещенного одним или двумя из С3-С10 циклоалкила и С1-С4 галогеналкила; любой из которых необязательно замещен; и
Z1 в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из водорода; C1-C6 алкила; C1-C6 алкила, замещенного одним или двумя из OR5 и NR5R6; C3-C10 циклоалкила; C3-C10 циклоалкила, замещенного одним или несколькими из галогена, OR7 и NR9R10; C3-C10 гетероциклоалкила; C3-C10 гетероциклоалкила, замещенного одним или несколькими из галогена, С1-С6 алкила, С3-С10 циклоалкила и С1-С4 галогеналкила; С1-С4 галогеналкила; и их фармацевтически приемлемых солей.
В одном варианте соединение по настоящему изобретению имеет общую формулу IV:
где
R1, R2, R3, R4, Z1, Х2 и n имеют значения, определенные выше; и их фармацевтически приемлемые соли.
В одном варианте соединение по настоящему изобретению имеет общую формулу V:
где
R1, R2, R3, R4, Z1 и n имеют значения, определенные выше; и их фармацевтически приемлемые соли;
где, предпочтительно,
R3 и R4 представляют собой водород;
и их фармацевтически приемлемые соли.
В одном варианте n = 0 или 1, Z1 выбран из C1-C6 алкила, в частности, метила, этила, пропила или изопропила; C3-C10 циклоалкила, в частности, С3 циклоалкила; С3-С10 гетероциклоалкила; C1-C6 алкила, замещенного одним или двумя из OR5 и NR5R6; и их фармацевтически приемлемые соли.
В одном варианте R2 представляет собой OR8, где R8 выбран из -CH(CH3)2; -C(CH3)3; С1-С4 галогеналкила; C1-C6 алкила, замещенного одним или двумя из C3-C10 циклоалкила, C3-C10 гетероциклоалкила и C1-C4 галогеналкила; или C1-C6 алкила, замещенного C1-C4 галогеналкилом, в частности, одним из следующих: трифторметил, дифторметил, фторметил, трифторэтил, дифторэтил, фторэтил, трифторпропил, дифторпропил, фторпропил, трифторизопропил, дифторизопропил и фторизопропил, и их фармацевтически приемлемые соли.
В одном варианте n = 0 или 1, а Z1 выбран из C1-C6 алкила, в частности, метила, этила, пропила или изопропила; C3-C10 циклоалкила, в частности, С3 циклоалкила; С3-С10 гетероциклоалкила; C1-C6 алкила, замещенного одним или двумя из OR5 и NR5R6; где R5 и R6 в каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из водорода; C1-C6 алкила; C3-C10 циклоалкила; С1-С4 галогеналкила; каждый из которых необязательно замещен;
и
R2 представляет собой OR8, где R8 выбран из -CH(CH3)2; -C(CH3)3; С1-С4 галогеналкила; C1-C6 алкила, замещенного одним или двумя из C3-C10 циклоалкила, C3-C10 гетероциклоалкила и C1-C4 галогеналкила; или C1-C6 алкила, замещенного C1-C4 галогеналкилом, в частности, одним из следующих: трифторметил, дифторметил, фторметил, трифторэтил, дифторэтил, фторэтил, трифторпропил, дифторпропил, фторпропил, трифторизопропил, дифторизопропил и фторизопропил,
и их фармацевтически приемлемые соли.
В одном варианте R2 представляет собой OR8, где R8 выбран из С1-С4 галогеналкила, в частности, одного из следующих: трифторметил, дифторметил, фторметил, трифторэтил, дифторэтил, фторэтил, трифторпропил, дифторпропил, фторпропил, трифторизопропил, дифторизопропил и фторизопропил; или С1-С6 алкила, замещенного С1-С4 галогеналкилом, в частности, одним из следующих: трифторметил, дифторметил, фторметил, трифторэтил, дифторэтил, фторэтил, трифторпропил, дифторпропил, фторпропил, трифторизопропил, дифторизопропил и фторизопропил.
В одном варианте n = 0 или 1; и Z1 выбран из метила; этила; пропила; изопропила; C3 циклоалкила; C4 циклоалкила; и C5 циклоалкила.
В одном варианте n = 0 или 1; Z1 выбран из метила; этила; пропила; изопропила; C3 циклоалкила; C4 циклоалкила; и C5 циклоалкила; и
R2 представляет собой OR8; где R8 выбран из С1-С4 галогеналкила, в частности, одного из следующих: трифторметил, дифторметил, фторметил, трифторэтил, дифторэтил, фторэтил, трифторпропил, дифторпропил, фторпропил, трифторизопропил, дифторизопропил и фторизопропил; или С1-С6 алкила, замещенного С1-С4 галогеналкилом, в частности, одним из следующих: трифторметил, дифторметил, фторметил, трифторэтил, дифторэтил, фторэтил, трифторпропил, дифторпропил, фторпропил, трифторизопропил, дифторизопропил и фторизопропил.
В одном варианте соединение по настоящему изобретению имеет одну из структур, показанных ниже:
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к композиции, содержащей по меньшей мере одно соединение по настоящему изобретению вместе с по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым носителем, наполнителем и/или разбавителем.
В одном варианте композиция по настоящему изобретению дополнительно содержит по меньшей мере один другой фармацевтически активный агент.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к применению соединения по настоящему изобретению или композиции по настоящему изобретению в качестве фармацевтически активного агента, предпочтительно к применению для лечения нарушения.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к применению соединения по настоящему изобретению или композиции по настоящему изобретению для лечения нарушения, связанного, сопровождаемого, вызываемого или индуцируемого рецепторной тирозинкиназой Axl/Mer и CSF1R, в частности, связанного, сопровождаемого, вызываемого Axl/Mer и CSF1R (рецептором колониестимулирующего фактора-1), предпочтительно связанного, сопровождаемого, вызываемого гиперфункцией указанного Axl/Mer и гиперфункцией указанного CSF1R.
В одном варианте указанное нарушение выбрано из гиперпролиферативных нарушений, воспалительных нарушений и нейродегенеративных нарушений.
В одном варианте указанным гиперпролиферативным нарушением является рак, предпочтительно выбранный из следующих: аденокарцинома, невринома слухового нерва, острый лимфобластный лейкоз, острый миелоидный лейкоз, адренокортикальная карцинома, СПИД-ассоциированные типы рака, СПИД-ассоциированная лимфома, рак анального канала, рак аппендикса, астроцитомы, атипичная тератоидная / рабдоидная опухоль, карцинома амплулярного отдела толстой кишки, базальноклеточная карцинома, рак желчных протоков, рак мочевого пузыря, рак костей, остеосаркома и злокачественная фиброзная гистиоцитома, глиома ствола головного мозга, опухоль головного мозга, атипичная тератоидная / рабдоидная опухоль центральной нервной системы, краниофарингиома, эпендимобластома, эпендимома, медуллобластома, медуллоэпителиома, паренхимальные опухоли шишковидной железы промежуточной дифференциации, супратенториальные примитивные нейроэктодермальные опухоли и пинеобластома, опухоли головного и спинного мозга, рак молочной железы, опухоли мочевых протоков, лимфома Беркитта, карциноидная опухоль, хориоидальная меланома, рак желудочно-кишечного тракта, первичная лимфома центральной нервной системы, рак шейки матки, рак тела матки, хордома, хронический лимфоцитарный лейкоз, хронический миелогенный лейкоз, хронические миелопролиферативные нарушения, рак толстой кишки, колоректальный рак, кожная Т-клеточная лимфома, десмоидная опухоль, фунгоидная гранулема, рак эндометрия, рак пищевода, эстезионейробластома, семейство опухолей саркомы Юинга, внечерепная эмбрионально-клеточная опухоль, внегонадная эмбрионально-клеточная опухоль, внепеченочный рак желчных протоков, опухоли уха, внутриглазная меланома, ретинобластома, рак желчного пузыря, рак желудка, карциноидная опухоль желудочно-кишечного тракта, стромальная опухоль желудочно-кишечного тракта, стромальная клеточная опухоль желудочно-кишечного тракта, гинекологические опухоли, эмбрионально-клеточная опухоль яичников, гестационная трофобластическая опухоль, глиома, карциономы желчного пузыря, волосатоклеточный лейкоз, рак головы и шеи, рак сердца, гепатоцеллюлярный рак, гистиоцитоз, подглоточный рак, неоплазии кроветворной системы, инсулинома (опухоли поджелудочной железы внутренней секреции), почечно-клеточный рак, рак почек, лангергансоклеточный гистиоцитоз, рак гортани, лейкемия, рак губы и полости рта, рак печени, рак легких, немелкоклеточный рак легких, опухоли тонкого кишечника, мелкоклеточный рак легких, лимфома Ходжкина, не-ходжкинская лимфома, первичная лимфома центральной нервной системы, макроглобулинемия, злокачественная фиброзная гистиоцитома кости и остеосаркома, меланома, карцинома клеток Меркеля, мезотелиома, метастатический плоскоклеточный рак шеи неизвестной первичной локализации, плоскоклеточные карциномы, синдромы множественной эндокринной неоплазии, миелодиспластические синдромы, миелодиспластические / миелопролиферативные новообразования, миелоидный лейкоз, множественная миелома, миелопролиферативные нарушения, рак полости носа и околоносовых пазух, рак носоглотки, нейробластома, рак полости рта, рак ротоглотки, остеосаркома и злокачественная фиброзная гистиоцитома кости, рак яичников, эпителиальный рак яичников, пограничная опухоль яичника, олигодендроглиома, плазмоцитомы, рак поджелудочной железы, папилломатоз, рак паращитовидной железы, рак полового члена, фарингеальный рак, опухоль гипофиза, плазмоклеточное новообразование/ множественная миелома, плевролегочная бластома, рак предстательной железы, рак прямой кишки, почечно-клеточный рак, переходно-клеточный рак, рак дыхательных путей, рабдомиосаркома, рак слюнных желез, саркома, рак яичек, саркома Юинга, саркома Капоши, саркома матки, немеланомный рак кожи, меланомный рак кожи, карционома кожи, рак тонкого кишечника, саркома мягких тканей, плоскоклеточная карцинома, плоскоклеточный рак шеи, рак желудка, опухоли мягких тканей, рак яичка, рак горла, тимома и карцинома вилочковой железы, рак щитовидной железы, переходно-клеточный рак почечной лоханки и мочеточника, трофобластическая опухоль, рак яичка, гестационный рак, урологические опухоли, рак мочеточника и почечной лоханки, рак уретры, уротелиальная карцинома, рак матки, рак влагалища, рак вульвы, макроглобулинемия Вальденстрема и опухоль Вильмса, опухоли, вызывающие выпоты в потенциальных полостях тела, плевральные выпоты, перикардиальные выпоты, брюшинный выпот, также называемый асцит, гигантоклеточная опухоль (GCT), гигантоклеточная опухоль кости, пигментный виллезонодулярный синовит (PVNS), теносиновиальная гигантоклеточная опухоль (TGCT), теносиновиальная гигантоклеточная опухоль сухожильного влагалища (TGCT-TS).
В одном варианте указанное воспалительное нарушение выбрано из следующих: остеоартрит, синдром воспаленного кишечника, отторжение трансплантата, системная красная волчанка, язвенный колит, болезнь Крона, хроническая обструктивная болезнь легких, эмфизема, синдром Кавасаки, гемофагоцитарный синдром (синдром активации макрофагов), мультицентрический ретикулогистиоцитоз, атеросклероз, первичный прогрессирующий рассеянный склероз, сахарный диабет I типа, сахарный диабет II типа, инсулинорезистентность, гипергликемия, ожирение, липолиз, гиперэозинофилия, остеопороз, повышенный риск перелома, болезнь Паджета, гиперкальциемия, остеолиз, опосредованный инфекцией (например, остеомиелит), расположенный около предстательной железы или опосредованный продуктами износа остеолиз, эндометриоз, воспалительная боль, хроническая боль и боль в костях.
В одном варианте указанное нейродегенеративное нарушение выбрано из следующих: деменция Бинсвангера, прозэнцефалия, микроцефалия, церебральный паралич, врожденная гидроцефалия, брюшная водянка, прогрессирующий надъядерный паралич, глаукома, болезнь Вильсона, болезнь Альцгеймера и другие деменции, болезнь Паркинсона (БП) и связанные с БП расстройства, мультиинфарктная деменция, лобно-височная деменция, псевдодеменция, прионная болезнь, болезни двигательных нейронов, болезнь Хантингтона, спиноцеребеллярная атаксия и спинальная мышечная атрофия.
В одном варианте указанное применение осуществляют в сочетании с другим фармацевтически активным лекарственным средством или терапией, в частности, лучевой терапией, химиотерапевтическими лекарственными средствами, таргетными лекарственными средствами и лекарственными средствами - ингибиторами иммунных контрольных точек.
В еще одном аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания, выбранного из гиперпролиферативных нарушений, воспалительных нарушений и/или нейродегенеративных нарушений, включающему введение соединения по настоящему изобретению или композиции по настоящему изобретению пациенту, нуждающемуся в таком лечении.
Настоящее изобретение также относится к применению соединения или композиции по настоящему изобретению, как определено выше, для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания, связанного, сопровождаемого или вызываемого Axl/Mer и CSF1R. Настоящее изобретение также относится к способу лечения заболевания, связанного, сопровождаемого, вызываемого и/или индуцируемого Axl/Mer и CSF1R, при этом указанный способ включает в себя введение соединения по настоящему изобретению пациенту, нуждающемуся в таком лечении. В одном варианте заболеванием, связанным, сопровождающимся, вызываемым и/или индуцируемым Axl/Mer и CSF1R, является заболевание, выбранное из гиперпролиферативных нарушений, воспалительных нарушений и нейродегенеративных нарушений, которые дополнительно определены выше.
Без намерения связывать себя какой-либо теорией, авторы настоящего изобретения считают, что соединения по настоящему изобретению являются эффективными ингибиторами Axl/Mer и CSF1R и, таким образом, подходят для лечения нарушений, связанных, сопровождаемых, вызываемых Axl/Mer и CSF1R, в частности, их гиперфункцией, и тем самым соединения по настоящему изобретению влияют на следующие процессы по отдельности или в совокупности: выживание клеток, пролиферацию, аутофагию, гомеостаз гладких мышц сосудов, миграцию, адгезию, ангиогенез, агрегацию тромбоцитов, стабилизацию тромбов, эритропоэз, выживаемость олигодендроцитов, функцию остеокластов, врожденный иммунитет, воспаление, фагоцитоз апоптотических клеток и/или дифференцирование естественных клеток-киллеров.
Соединения по настоящему изобретению могут ингибировать пролиферацию клеток и, таким образом, подходят для лечения и/или профилактики гиперпролиферативных нарушений, индуцированных Axl/Mer и CSF1R, в частности, выбранных из группы, включающей в себя рак, в частности, иммуносупрессивный рак и трудно поддающийся лечению рак, и метастазы первичной опухоли. В предпочтительном варианте изобретения нарушения, индуцированные Axl/Mer и CSF1R, связаны со сверхэкспрессией и/или гиперактивностью Axl/Mer и CSF1R, например, повышенной степенью аутофосфорилирования по сравнению с нормальной тканью. Гиперпролиферативным нарушением может быть рак, предпочтительно один из следующих видов рака: рак молочной железы, рак толстой кишки, рак предстательной железы, рак легких, рак желудка, рак яичников, рак эндометрия, рак почек, гепатоцеллюлярный рак, рак щитовидной железы, рак матки, рак пищевода, плоскоклеточный рак, лейкемия, остеосаркома, меланома, глиобластома и нейробластома. В особенно предпочтительном варианте нарушения выбраны из следующих: рак молочной железы, глиобластома, рак почек, немелкоклеточный рак легких (НМРЛ) и меланома.
В особенно предпочтительном варианте нарушения выбраны из следующих: рак молочной железы, глиобластома, рак почек, немелкоклеточный рак легкого (НМРЛ) и меланома. Примерами нарушений, связанных, сопровождаемых, вызываемых и/или индуцируемых гиперфункцией Axl/Mer и CSF1R, являются острый лимфобластный лейкоз, острый миелоидный лейкоз, адренокортикальная карцинома, СПИД-ассоциированные типы рака, СПИД-ассоциированная лимфома, рак анального канала, рак аппендикса, астроцитомы, атипичная тератоидная / рабдоидная опухоль, базальноклеточная карцинома, рак желчных протоков, рак мочевого пузыря, рак костей, остеосаркома и злокачественная фиброзная гистиоцитома, глиома ствола головного мозга, опухоль головного мозга, атипичная тератоидная / рабдоидная опухоль центральной нервной системы, астроцитомы, краниофарингиома, эпендимобластома, эпендимома, медуллобластома, медуллоэпителиома, паренхимальные опухоли шишковидной железы промежуточной дифференциации, супратенториальные примитивные нейроэктодермальные опухоли и пинеобластома, опухоли головного и спинного мозга, рак молочной железы, опухоли бронхов, лимфома Беркитта, карциноидная опухоль, рак желудочно-кишечного тракта, лимфома центральной нервной системы (ЦНС), рак шейки матки, хордома, хронический лимфоцитарный лейкоз, хронический миелогенный лейкоз, хронические миелопролиферативные нарушения, рак толстой кишки, колоректальный рак, краниофарингиома, кожная Т-клеточная лимфома, фунгоидная гранулема, синдром Сезари, рак эндометрия, эпендимобластома, эпендимома, рак пищевода, эстезионейробластома, семейство опухолей саркомы Юинга, внечерепная эмбрионально-клеточная опухоль, внегонадная эмбрионально-клеточная опухоль, внепеченочный рак желчных протоков, внутриглазная меланома, ретинобластома, рак желчного пузыря, рак желудка, карциноидная опухоль желудочно-кишечного тракта, опухоль желудочно-кишечного тракта (GIST), стромальная клеточная опухоль желудочно-кишечного тракта, внечерепная эмбрионально-клеточная опухоль, внегонадная эмбрионально-клеточная опухоль, эмбрионально-клеточная опухоль яичников, гестационная трофобластическая опухоль, глиома, волосатоклеточный лейкоз, рак головы и шеи, рак сердца, гепатоцеллюлярный рак (печени), гистиоцитоз, лимфома Ходжкина, подглоточный рак, внутриглазная меланома, инсулинома (опухоли поджелудочной железы внутренней секреции), саркома Капоши, почечно-клеточный рак, рак почек, лангергансоклеточный гистиоцитоз, рак гортани, острый лимфобластный лейкоз, острый миелоидный лейкоз, хронический лимфоцитарный лейкоз, хронический миелогенный лейкоз, лейкемия, рак губы и полости рта, рак печени, рак легких, немелкоклеточный рак легких, мелкоклеточный рак легких, СПИД-ассоциированная лимфома, лимфома Беркитта, кожная Т-клеточная лимфома, лимфома Ходжкина, не-ходжкинская лимфома, первичная лимфома центральной нервной системы, макроглобулинемия, злокачественная фиброзная гистиоцитома кости и остеосаркома, медуллобластома, медуллоэпителиома, меланома, внутриглазная меланома (глаза), карцинома клеток Меркеля, мезотелиома, метастатический плоскоклеточный рак шеи неизвестной первичной локализации, рак рта, синдромы множественной эндокринной неоплазии, множественная миелома/ плазмоклеточное новообразование, миелодиспластические синдромы, миелодиспластические / миелопролиферативные новообразования, миелогенный лейкоз, миелоидный лейкоз, миелома (множественная), миелопролиферативные нарушения, рак полости носа и околоносовых пазух, рак носоглотки, нейробластома, не-ходжкинская лимфома, немелкоклеточный рак легких, рак ротоглотки, рак полости рта, рак ротоглотки, остеосаркома и злокачественная фиброзная гистиоцитома кости, рак яичников, эпителиальный рак яичников, эмбрионально-клеточная опухоль яичников, пограничная опухоль яичника, рак поджелудочной железы, папилломатоз, рак паращитовидной железы, рак полового члена, фарингеальный рак, пинеобластома и супратенториальные примитивные нейроэктодермальные опухоли, опухоль гипофиза, плазмоклеточное новообразование/ множественная миелома, плевролегочная бластома, беременность и рак молочной железы, рак предстательной железы, рак прямой кишки, почечно-клеточный рак (почки), переходно-клеточный рак, рак дыхательных путей, ретинобластома, рабдомиосаркома, рак слюнных желез, саркома, саркома Юинга, саркома Капоши, саркома матки, немеланомный рак кожи, меланомный рак кожи, карционома кожи, мелкоклеточный рак легких, рак тонкого кишечника, саркома мягких тканей, плоскоклеточная карцинома, плоскоклеточный рак шеи, рак желудка, супратенториальные примитивные нейроэктодермальные опухоли, Т-клеточная лимфома, рак яичка, рак горла, тимома и карцинома вилочковой железы, рак щитовидной железы, переходно-клеточный рак почечной лоханки и мочеточника, трофобластическая опухоль, гестационный рак, рак мочеточника и почечной лоханки, переходно-клеточный рак, рак уретры, рак матки, рак эндометрия, саркома матки, рак влагалища, рак вульвы, макроглобулинемия Вальденстрема и опухоль Вильмса.
Соединения по настоящему изобретению представляют собой эффективные ингибиторы Axl/Mer и CSF1R. Соединения по настоящему изобретению подходят для применения в качестве фармацевтически активного агента, который подходит для лечения нарушений, связанных, сопровождаемых, вызываемых Axl/Mer и CSF1R, в частности, их гиперфункцией. Таким образом, соединения по настоящему изобретению подходят для лечения нарушений, индуцируемых Axl/Mer и CSF1R.
Без намерения связывать себя какой-либо теорией, авторы настоящего изобретения считают, что CSF1 представляет собой еще один хемокин, который, как представляется, является перспективной мишенью для ингибирования воздействия ТАМ на прогрессирование опухоли. CSF1 является мощным хемоаттрактантом и считается наиболее важным фактором роста, регулирующим дифференциацию моноцитов в макрофаги. Таким образом, авторы настоящего изобретения считают, что ингибирование передачи сигналов CSF1R в TAM, принимающих участие в промоции опухолей, представляет собой привлекательную стратегию для устранения или реполяризации этих клеток, и такое ингибирование представляет собой возможность новой иммунотерапии для пациентов с раком.
Аналогичным образом, без намерения связывать себя какой-либо теорией, авторы настоящего изобретения считают, что блокада CSF1/CSF1R не только снижает количество ТАМ, но также перепрограммирует оставшиеся ТАМ на поддержку презентации антигена и стимулирование активации Т-клеток в микросреде опухоли. Это, в свою очередь, приводит к уменьшению иммуносупрессии и усилению интерфероновых ответов, что сдерживает прогрессирование опухоли (Zhu Yet al., Cancer Res. 2014 Sep 15;74(18):5057-69).
В заключение: ожидается, что двойное ингибирование CSF1R и РТК Axl/Mer обеспечит сильную противораковую эффективность за счет иммуномодуляции с использованием отдельных сигнальных путей для иммунных клеток. В настоящем изобретении предложены соединения, которые обладают способностью двойного ингибирования CSF1R и РТК Axl/Mer. Кроме того, они могут быть использованы в качестве фармацевтически активных агентов, имеющих большое значение, особенно для лечения рака путем модуляции иммунной системы.
При использовании в настоящем описании термин «необязательно замещенный» означает, что атом водорода, если он присутствует и присоединен к атому-элементу в группе, или несколько таких атомов водорода могут быть заменены подходящей группой, такой как галоген, включая фтор, хлор, C1-C3 алкил, C1-C3 галогеналкил, например, CH2F, CHF2, CF3, CH2CF3, метилгидроксил, гидроксил, COOMe, C(O)H, COOH, алкокси, в частности, С1-С3 алкокси, например, OMe, или OCF3;
В одном варианте настоящее изобретение также относится к фармацевтически приемлемым солям соединений по настоящему изобретению.
Настоящее изобретение также относится к комбинациям соединений по настоящему изобретению с другим противораковым средством.
Комбинация соединения по настоящему изобретению с другим противораковым средством улучшает противораковый эффект. Например, комбинации с другими противораковыми средствами могут восстанавливать чувствительность клеточных линий, которые приобрели резистентность к другим противораковым средствам, и комбинации с другими ингибиторами иммунных контрольных точек, а также с радиацией, также характеризуются синергетической эффективностью. В качестве примеров средств, с которыми можно комбинировать соединения по настоящему изобретению, можно назвать цитотоксические препараты (актиномицин, полностью транс-ретиноевая кислота, азацитидин, азатиоприн, блеомицин, бортезомиб, карбоплатин, капецитабин, цисплатин, хлорамбуцил, циклофосфамид, цитарабин, даунорубицин, доцетаксел, доксифлуридин, доксорубицин, эпирубицин, эпотилон, этопозид, фторурацил, гемцитабин, гидроксимочевина, идарубицин, иматиниб, иринотекан, мехлорэтамин, меркаптопурин, метотрексат, митоксантрон, оксалиплатин, паклитаксел, пеметрексед, тенипозид, тиогуанин, топотекан, валрубицин, вемурафениб, винбластин, винкристин, виндесин, винорелбин), препараты направленного действия (бевацизумаб, ритуксимаб, ипилимумаб, бортезомиб, иматиниб, селициклиб, адо-трастузумаб, афатиниб, алдеслейкин, акситиниб, белиностат, бевацизумаб, бортезомиб, босутиниб, брентуксимаб ведотин, кабозантиниб, канакинумаб, карфилзомиб, церитиниб, цетуксимаб, кризотиниб, дабрафениб, дазатиниб, эрлотиниб, эверолимус, гефитиниб, ибритумомаб тиуксетан, ибрутиниб, иделалисиб, иматиниб, лапатиниб, ленватиниб, нилотиниб, обинутузумаб, офатумумаб, олапариб, палбоциклиб, панитумумаб, панобиностат, пазопаниб, пертузумаб, понатиниб, рамуцирумаб, регорафениб, ритуксимаб, ромидепсин, руксолитиниб, силтуксимаб, сипулеуцел-Т, сорафениб, темсиролимус, тоцилизумаб, тофацитиниб, тоситумомаб, траметиниб, трастузумаб, вандетаниб, вемурафениб, висмодегиб, вориностат, зив-афлиберцепт), препараты ингибиторов иммунных контрольных точек (ипилимумаб, ниволумаб, пембролизумаб, атезолизумаб, авелумаб, бевацизумаб, тремелимумаб).
Другие комбинации могут также или вместо этого включать в себя сочетание нескольких соединений по настоящему изобретению. Они также предусмотрены в рамках комбинаций по настоящему изобретению и входят в них.
Осуществление изобретения
Термин «алкил» означает одновалентный насыщенный алифатический углеводородный радикал с прямой, разветвленной или циклической цепью, с количеством атомов углерода в определенном диапазоне. Таким образом, например, «C1-C6-алкил» означает любой из гексилалкильных и пентилалкильных изомеров, а также н-, изо-, втор- и трет-бутил, н- и изопропил, циклический пропил, этил и метил.
Термин «алкенил» означает одновалентный алифатический углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, с одной двойной связью углерод-углерод и с количеством атомов углерода в определенном диапазоне. Таким образом, например, «С2-С6-алкенил» означает все гексенильные и пентенильные изомеры, а также 1-бутенил, 2-бутенил, 3-бутенил, изобутенил, 1-пропенил, 2-пропенил и этенил (или винил).
Термин «циклоалкил», сам по себе или в сочетании с любым другим термином, означает группу, такую как необязательно замещенный или незамещенный циклический углеводород, имеющую от трех до восьми атомов углерода, если не определено иное. Таким образом, например, «C3-C8 циклоалкил» означает циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и циклооктил.
Термин «галогеналкил» означает алкильную группу, определенную в настоящем описании, которая замещена по меньшей мере одним галогеном. Примеры «галогеналкильных» групп с прямой или разветвленной цепью, используемых в настоящем изобретении, включают в себя, помимо прочего, метил, этил, пропил, изопропил, н-бутил и трет-бутил, независимо замещенные одним или несколькими галогенами. Следует понимать, что термин «галогеналкил» включает в себя такие заместители, как -CHF2, -CF3, -CH2-CH2-F, -CH2-CF3 и т.п. Более конкретно, термин «С1-С4 галогеналкил» включает в себя, помимо прочего, фторметил, дифторметил, трифторметил, фторэтил, дифторэтил, трифторэтил, фторпропил, дифторпропил, трифторпропил, фторизопропил, дифторизопропил, трифторизопропил, фторбутил, дифторбутил, трифторбутил, при этом «бутил» включает в себя все изомеры бутила, т.е., н-бутил, изобутил, втор-бутил и трет-бутил; и соответствующие хлоралкилы любого из вышеперечисленных соединений, а также C1-C4 алкилы, в которых более чем один водород замещен галогеном (F, Cl, Br и/или I).
Термин «гетероалкил» означает алкильную группу, в которой один или несколько атомов углерода заменены гетероатомом, таким как O, N или S. Например, если атом углерода алкильной группы, которая присоединена к исходной молекуле, заменен гетероатомом (например, O, N или S), полученные гетероалкильные группы представляют собой, соответственно, алкоксигруппу (например, -OCH3 и т.д.), амин (например, -NHCH3, -N(CH3)2 и т.д.) или тиоалкильную группу (например, -SCH3 и т.д.). Если неконцевой атом углерода алкильной группы, которая не присоединена к исходной молекуле, заменен гетероатомом (например, O, N или S), полученные гетероалкильные группы представляют собой, соответственно, алкиловый эфир (например, -CH2CH2-O-CH3 и т.д.), алкиламин (например, -CH2NHCH3, -CH2N(CH3)2 и т.д.) или тиоалкиловый эфир (например, -CH2-S-CH3).
Термин «галоген» означает фтор, хлор, бром или йод.
При использовании в настоящем описании термин «фенил» означает необязательно замещенную или незамещенную фенильную группу.
При использовании в настоящем описании термин «бензил» означает необязательно замещенную или незамещенную бензильную группу.
Термин «гетероарил» означает (i) необязательно замещенные 5- и 6-членные гетероароматические кольца и (ii) необязательно замещенные 9- и 10-членные системы бициклических конденсированных колец, в которых по крайней мере одно кольцо является ароматическим, при этом гетероароматическое кольцо или система бициклических конденсированных колец содержит от 1 до 4 гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S, при этом каждый N необязательно имеет форму оксида, и каждый S в неароматическом кольце необязательно представляет собой S(O) или S(O)2. К подходящим 5- и 6-членным гетероароматическим кольцам относятся, например, пиридил, пирролил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, триазинил, тиенил, фуранил, имидазолил, пиразолил, триазолил, тетразолил, оксазолил, изооксазолил, оксадиазолил, тиазолил, изотиазолил и тиадиазолил. К подходящим 9- и 10-членным системам гетеробициклических конденсированных колец относятся, например, бензофуранил, индолил, индазолил, нафтиридинил, изобензофуранил, бензопиперидинил, бензизоксазолил, бензоксазолил, хроменил, хинолинил, изохинолинил, циннолинил, хиназолинил, тетрагидрохинолинил, тетрагидроизохинолинил, изоиндолил, бензодиоксолил, бензофурил, имидазо [1,2-a] пиридинил, бензотриазолил, дигидроиндолил, дигидроизоиндолил, индазолил, индолинил, изоиндолинил, хиноксалинил, хиназолинил, 2,3-дигидробензофуранил и 2,3-дигидробензо-1,4-диоксинил.
Термин «гетероциклил» или «гетероциклоалкил», в частности, «С3-С10 гетероциклоалкил», означает (i) необязательно замещенные 3-10-членные, насыщенные и ненасыщенные, но неароматические моноциклические кольца, содержащие по меньшей мере один атом углерода и от 1 до 4 гетероатомов, (ii) необязательно замещенные системы бициклических колец, содержащие от 1 до 6 гетероатомов, и (iii) необязательно замещенные системы трициклических колец, при этом каждое кольцо в (ii) или (iii) независимо, слито или соединено мостиком с другим кольцом или кольцами, и каждое кольцо является насыщенным или ненасыщенным, но неароматическим, и при этом каждый гетероатом в (i), (ii) и (iii) независимо выбран из N, O и S, при этом каждый N необязательно имеет форму оксида, и каждый S необязательно окислен до S(O) или S(O)2. К подходящим 3-10-членным насыщенным гетероциклоалкилам относятся, например, азетидинил, пиперидинил, морфолинил, тиоморфолинил, тиазолидинил, изотиазолидинил, оксазолидинил, изоксазолидинил, пирролидинил, имидазолидинил, пиперазинил, тетрагидрофуранил, тетрагидротиенил, пиразолидинил, гексагидропиримидинил, тиазинанил, тиазепанил, азепанил, диазепанил, тетрагидропиранил, тетрагидротиопиранил, диоксанил и азациклооктил. Подходящие ненасыщенные гетероциклические кольца включают в себя кольца, которые соответствуют насыщенным гетероциклическим кольцам, перечисленным в предложении выше, в которых одинарная связь заменена двойной связью. Следует понимать, что указанные кольца и системы колец, подходящие для использования в настоящем изобретении, не ограничиваются кольцами и системами колец, перечисленными в этом и предыдущих абзацах. Данные кольца и системы колец приведены исключительно в качестве примеров.
Фармацевтические композиции
Фармацевтически приемлемые соли
Примерами фармацевтически приемлемых аддитивных солей являются, помимо прочего, нетоксичные аддитивные соли неорганических и органических кислот, например, ацетат, полученный из уксусной кислоты, аконат, полученный из аконитовой кислоты, аскорбат, полученный из аскорбиновой кислоты, бензолсульфонат, полученный из бензолсульфоновой кислоты, бензоат, полученный из бензойной кислоты, циннамат, полученный из коричной кислоты, цитрат, полученный из лимонной кислоты, эмбонат, полученный из эмбоновой кислоты, энантат, полученный из энантовой кислоты, формиат, полученный из муравьиной кислоты, фумарат, полученный из фумаровой кислоты, глутамат, полученный из глутаминовой кислоты, гликолат, полученный из гликолевой кислоты, гидрохлорид, полученный из соляной кислоты, гидробромид, полученный из бромистоводородной кислоты, лактат, полученный из молочной кислоты, малеат, полученный из малеиновой кислоты, малонат, полученный из малоновой кислоты, манделат, полученный из миндальной кислоты, метансульфонат, полученный из метансульфоновой кислоты, нафталин-2-сульфонат, полученный из нафталин-2-сульфоновой кислоты, нитрат, полученный из азотной кислоты, перхлорат, полученный из перхлорной кислоты, фосфат, полученный из фосфорной кислоты, фталат, полученный из фталевой кислоты, салицилат, полученный из салициловой кислоты, сорбат, полученный из сорбиновой кислоты, стеарат, полученный из стеариновой кислоты, сукцинат, полученный из янтарной кислоты, сульфат, полученный из серной кислоты, тартрат, полученный из винной кислоты, толуол-п-сульфонат, полученный из п-толуолсульфоновой кислоты, и т.п. Такие соли могут быть получены способами, хорошо известными и описанными в данной области техники.
Другие кислоты, такие как щавелевая кислота, которые могут не рассматриваться как фармацевтически приемлемые, могут быть полезны в получении солей как промежуточные продукты при получении химического соединения по изобретению и его фармацевтически приемлемой аддитивной соли.
В еще одном варианте соединения по изобретению используют в их соответствующей форме свободного основания по настоящему изобретению.
Соли металлов химического соединения по изобретению включают в себя соли щелочных металлов, такие как натриевая соль химического соединения по изобретению, содержащая карбоксильную группу.
Химические соединения по изобретению могут быть представлены в несольватированной или сольватированной формах вместе с фармацевтически приемлемым растворителем (растворителями), таким как вода, этанол и т.п. Сольватированные формы также могут включать в себя такие гидратированные формы, как моногидрат, дигидрат, полугидрат, тригидрат, тетрагидрат и т.д. В общем, для целей настоящего изобретения сольватированные формы считаются эквивалентными несольватированным формам.
Введение и лекарственная форма
Изготовление лекарственных средств, содержащих соединения по настоящему изобретению, их активные метаболиты или изомеры и соли по настоящему изобретению, и их использование можно осуществлять хорошо известными фармацевтическими способами.
Хотя соединения по изобретению, которые могут быть использованы по изобретению для применения в лечении, можно вводить в форме необработанного химического соединения, предпочтительно вводить активный ингредиент, необязательно в форме физиологически приемлемой соли в фармацевтической композиции вместе с одним или несколькими адъювантами, наполнителями, носителями, буферами, разбавителями и/или другими обычными фармацевтическими вспомогательными веществами. Такие соли соединений по изобретению могут быть безводными или сольватированными.
В предпочтительном варианте изобретение относится к лекарственным средствам, содержащим соединение, которое может быть использовано по изобретению, или его фармацевтически приемлемую соль или производное, вместе с одним или несколькими фармацевтически приемлемыми носителями для них и, необязательно, другими терапевтическими и/или профилактическими ингредиентами. Носитель (носители) должен быть «приемлемым» в том смысле, что он совместим с другими ингредиентами лекарственной формы и не вреден для получающего его лица.
Лекарственное средство по изобретению может быть лекарственным средством, подходящим для перорального, ректального, бронхиального, назального, местного, буккального, сублингвального, трансдермального, вагинального или парентерального (включая кожную, подкожную, внутримышечную, внутрибрюшинную, внутривенную, внутриартериальную, внутримозговую, внутриглазную инъекцию или инфузию) введения или в форме, подходящей для введения путем ингаляции или инсуффляции, включая введение порошков и жидких аэрозолей, или при помощи систем с замедленным высвобождением. Подходящие примеры систем с замедленным высвобождением включают в себя полупроницаемые матрицы твердых гидрофобных полимеров, содержащие соединение по изобретению, при этом матрицы могут быть выполнены в форме формованных изделий, например, пленок или микрокапсул.
Соединения, которые могут быть использованы по изобретению, вместе с обычным адъювантом, носителем или разбавителем, таким образом, могут быть помещены в форму лекарственного средства и его унифицированные дозы. Такие формы включают в себя твердые вещества и, в частности, таблетки, наполненные капсулы, формы порошка и гранул, а также жидкости, в частности, водные или неводные растворы, суспензии, эмульсии, эликсиры и капсулы, наполненные ими, для перорального применения, суппозитории для ректального введения и стерильные растворы для инъекций для парентерального применения. Такое лекарственное средство и формы его унифицированной дозы могут содержать обычные ингредиенты в обычных пропорциях с дополнительными активными соединениями или действующими началами или без них, и такие формы унифицированных доз могут содержать любое подходящее эффективное количество активного ингредиента, соответствующее предполагаемому используемому диапазону суточных доз.
Соединения, которые могут быть использованы по изобретению, можно вводить в различных пероральных и парентеральных дозированных формах. Для специалистов в данной области техники будет очевидно, что следующие дозированные формы могут содержать в качестве активного компонента либо соединение (соединения), которое может быть использовано по изобретению, либо фармацевтически приемлемую соль соединения (соединений), которое может быть использовано по изобретению.
Для получения лекарственного средства из соединения, которое может быть использовано по изобретению, фармацевтически приемлемые носители могут быть твердыми или жидкими. Препараты в твердой форме включают в себя порошки, таблетки, драже, капсулы, крахмальные облатки, суппозитории и диспергируемые гранулы. Твердым носителем может быть одно или несколько веществ, которые также могут действовать как разбавители, ароматизаторы, солюбилизаторы, смазывающие вещества, суспендирующие агенты, связующие агенты, консерванты, вещества для улучшения распадаемости таблеток или материал для инкапсулирования.
В порошках носителем является мелкодисперсное твердое вещество, которое смешано с мелкодисперсным активным компонентом. В таблетках активный компонент смешан с носителем, имеющим необходимую связывающую способность, в подходящих пропорциях и прессован до желаемой формы и размера. Подходящими носителями являются карбонат магния, стеарат магния, тальк, сахар, лактоза, пектин, декстрин, крахмал, желатин, трагакант, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натрия, легкоплавкий воск, масло какао и т.п. Термин «препарат» включает в себя лекарственную форму активного соединения с материалом для инкапсулирования в качестве носителя, образующего капсулу, в которой активный компонент, с носителями или без них, окружен носителем, который, таким образом, связан с ним. Аналогичным образом включены крахмальные облатки и пастилки для рассасывания. Таблетки, порошки, капсулы, драже, крахмальные облатки и таблетки для рассасывания можно использовать в качестве твердых форм, подходящих для перорального введения.
Для приготовления суппозиториев легкоплавкий воск, такой как смесь глицеридов жирных кислот или масло какао, сначала расплавляют и гомогенно распределяют в нем активный компонент, например, путем перемешивания. Затем расплавленную гомогенную смесь выливают в формы подходящего размера, оставляют для охлаждения и, таким образом, затвердения. Композиции, подходящие для вагинального введения, могут быть представлены в виде пессариев, тампонов, кремов, гелей, паст, пенок или спреев, содержащих дополнительно к активному ингредиенту такие носители, которые известны в данной области техники как подходящие. Жидкие препараты включают в себя растворы, суспензии и эмульсии, например, водные или водно-пропиленгликолевые растворы. Например, жидкие препараты для парентеральной инъекции могут быть выполнены в виде растворов в водном растворе полиэтиленгликоля.
Таким образом, химические соединения по настоящему изобретению могут быть приготовлены для парентерального введения (например, путем инъекции, например, болюсной инъекции или непрерывной инфузии) и могут быть представлены в форме унифицированной дозы в ампулах, предварительно заполненных шприцах, инфузии малого объема или в многодозных контейнерах с добавлением консерванта. Композиции могут быть выполнены в таких формах, как суспензии, растворы или эмульсии в масляных или водных носителях, и могут содержать препаратообразующие вещества, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. В альтернативном варианте активный ингредиент может быть использован в форме порошка, полученного путем асептического выделения стерильного твердого вещества или лиофилизации из раствора, для смешивания с подходящим носителем, например, стерильной апирогенной водой, перед использованием.
Водные растворы, подходящие для перорального применения, могут быть приготовлены путем растворения активного компонента в воде и добавления подходящих красителей, ароматизаторов, стабилизаторов и загустителей, при желании. Водные суспензии, подходящие для перорального применения, могут быть получены путем диспергирования тонкоизмельченного активного компонента в воде с вязким материалом, таким как натуральные или синтетические камеди, смолы, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза натрия или другие хорошо известные суспендирующие агенты.
Также включены препараты в твердой форме, которые незадолго до использования необходимо преобразовать в препараты в жидкой форме для перорального введения. Такие жидкие формы включают в себя растворы, суспензии и эмульсии. Такие препараты могут содержать, дополнительно к активному компоненту, красители, ароматизаторы, стабилизаторы, буферы, искусственные и натуральные подсластители, диспергаторы, загустители, солюбилизирующие агенты и т.п.
В одном варианте настоящего изобретения лекарственное средство применяют местно или системно или сочетают оба способа.
Для введения соединения по настоящему изобретению в одном варианте могут быть введены в лекарственной форме, содержащей от 0,001% до 70% по весу соединения, предпочтительно от 0,01% до 70% по весу соединения, еще более предпочтительно от 0,1% до 70% по весу соединения. В одном варианте подходящее количество вводимого соединения находится в диапазоне от 0,01 мг/кг веса тела до 1 г/кг веса тела.
Подходящие для введения композиции также включают в себя таблетки для рассасывания, содержащие действующее вещество в ароматизированной основе, как правило, сахарозе и акации или трагаканте; пастилки, содержащие действующее вещество в инертной основе, такой как желатин и глицерин или сахароза и акация; и ополаскиватели для полости рта, содержащие действующее вещество в подходящем жидком носителе.
Растворы или суспензии наносят напрямую в полость носа обычными средствами, например, с помощью капельницы, пипетки или пульверизатора. Композиции могут быть представлены в однодозовой или многодозовой форме. В последнем случае использования капельницы или пипетки пациент может осуществлять нанесение путем введения соответствующего заранее определенного объема раствора или суспензии. В случае пульверизатора введение можно осуществлять, например, с помощью дозирующего распыляющего насоса.
Введение в дыхательные пути также может быть выполнено с помощью аэрозольной лекарственной формы, в которой активный ингредиент находится в герметичной упаковке с подходящим распыляющим средством, таким как хлорфторуглерод (ХФУ), например, дихлордифторметан, трихлорфторметан или дихлортетрафторэтан, диоксид углерода или другой подходящий газ. В целях удобства аэрозоль может также содержать поверхностно-активное вещество, такое как лецитин. Дозу лекарственного средства можно контролировать с помощью дозирующего клапана.
В альтернативном варианте активные ингредиенты могут быть представлены в форме сухого порошка, например, порошковой смеси соединения на подходящей порошковой основе, такой как лактоза, крахмал, производные крахмала, такие как гидроксипропилметил целлюлоза и поливинилпирролидон (ПВП). В целях удобства порошковый носитель будет образовывать гель в носовой полости. Порошковая композиция может быть представлена в форме унифицированной дозы, например, в капсулах или картриджах, например, из желатина, или в блистерных упаковках, из которых порошок можно вводить с помощью ингалятора.
В композициях, предназначенных для введения в дыхательные пути, в том числе композициях для интраназального введения, частицы соединения, как правило, будут иметь небольшой размер, например, порядка 5 микрон или меньше. Такой размер частиц может быть получен способами, известными в данной области техники, например микронизацией.
При желании могут быть использованы композиции, адаптированные для замедленного высвобождения активного ингредиента.
Фармацевтические препараты предпочтительно находятся в формах унифицированной дозы. В такой форме препарат подразделяется на унифицированные дозы, содержащие соответствующие количества активного компонента. Форма унифицированной дозы может представлять собой упакованный препарат, при этом упаковка содержит дискретные количества препарата, такие как упакованные таблетки, капсулы и порошки во флаконах или ампулах. Кроме того, форма унифицированной дозы может представлять собой капсулу, таблетку, крахмальную облатку или таблетку для рассасывания, или в упакованной форме может находиться соответствующее количество любой из этих форм. Предпочтительными композициями являются таблетки или капсулы для перорального введения и жидкости для внутривенного введения и непрерывной инфузии.
Дополнительные сведения о методах получения лекарственных форм и введения указаны в последнем издании Remington's Pharmaceutical Sciences (Maack Publishing Co. Easton, Pa.).
Далее изобретение проиллюстрировано следующими фигурами, таблицами и Примерами, которые приведены для иллюстрации изобретения, но не для ограничения настоящего изобретения.
Таблицы
Далее приведены ссылки на фигуры и таблицы, на которых:
В таблице 1 показаны данные об активности в анализе связывания Axl, Mer и CSF1R для выбранных соединений по изобретению. Ингибирование указано как Kd со следующими значениями: A = Kd менее 0,1 мкМ; B = Kd более 0,1 мкМ, но менее 0,5 мкМ; C = Kd более 0,5 мкМ. «н.о.» = не определено.
В таблице 2 показаны данные об активности в анализе связывания CSF1R для выбранных соединений по изобретению. Ингибирование указано как относительное ингибирование в процентах («Процент (%)») и с помощью следующих дополнительных условных обозначений, классифицирующих значения ингибирования по различным категориям («Диапазон»): A = ≥ 80% ингибирования; 80% ингибирования > B ≥ 50% ингибирования; 50% ингибирования > C.
В таблице 3 показаны данные об активности в иммуноферментном анализе клеточного Axl (H1299) для выбранных соединений по изобретению. Ингибирование указано как IC50 со следующими значениями: A = IC50 менее 0,5 мкМ; B = IC50 более или равно 0,5 мкМ, но менее 1,0 мкМ; C = IC50 более или равно 1,0 мкМ.
В таблице 4 показаны данные об активности в иммуноферментном анализе клеточного CSF1R (THP-1) для выбранных соединений по изобретению. Ингибирование указано как IC50 со следующими значениями: A = IC50 менее 0,5 мкМ; B = IC50 более или равно 0,5 мкМ, но менее 1,0 мкМ; C = IC50 более или равно 1,0 мкМ.
В таблице 5 показаны данные об активности CSF1R в анализе жизнеспособности клеточного M-NFS-60; ингибирование CSF1R указано как IC50 со следующими значениями: A: IC50 ≥ 1,0 мкМ; В: 1,0 мкМ ≤ IC50 < 10 мкМ; С: IC50 ≥ 10 мкМ.
В таблице 6 показаны данные об активности Axl, Mer и CSF1R в анализе жизнеспособности клеточного BaF3; ингибирование указано как IC50 со следующими значениями: A: IC50 ≥ 1,0 мкМ; В: 1,0 мкМ ≤ IC50 < 10 мкМ; С: IC50 ≥ 10 мкМ.
В таблице 7 представлены данные сравнения выбранных соединений по настоящему изобретению (обозначены двумя звездочками **) с выбранными соединениями из публикации WO 2016/166250 (обозначены одной звездочкой *) на предмет связывающей активности (Axl и Mer) и клеточной активности (путем иммуносорбентного ферментного анализа Axl H1299).
В таблице 8 приведены соединения 1-179 с точки зрения их структур и соответствующих характеристик.
На фигурах 1 и 2 показаны сравнительные данные соединения 4 по настоящему изобретению (обозначено двумя звездочками ** и ромбиком) с соединением 27 из публикации WO2016/166250 (обозначено одной звездочкой * и незамкнутым квадратиком) на мышиных моделях EMT-6 and MV4-11; EMT-6 использована для измерения тройного ингибирования Axl, Mer и CSF1R. MV4-11 использована для измерения ингибирования Axl.
Примеры
Далее изобретение будет дополнительно описано со ссылкой на следующие примеры, которые приведены для иллюстрации, но не для ограничения объема изобретения.
Пример 1 Анализ связывания киназы для Axl и Mer
Принцип анализа связывания
Анализы связывания киназы LanthaScreen® Eu проводили в «Life Technologies» с учетом спецификаций производителя для каждой указанной киназы.
Схематически, принцип этого анализа основан на связывании и вытеснении метки, маркированной Alexa Fluor 647, на исследуемую киназу. Связывание метки с киназой выявляют с помощью маркированного европием антитела к метке. При одновременном связывании метки и антитела с киназой возникает сигнал резонансного переноса энергии флуоресценции (FRET). Связывание ингибитора с киназой конкурирует за связывание с меткой, что приводит к потере сигнала FRET.
Протокол анализа связывания для Axl и Mer
Выбранное соединение разбавили ДМСО с получением исходного раствора соединения. Исходный раствор соединения последовательно разбавляли ДМСО в восемь этапов. Каждый разбавленный раствор соединения в ДМСО разводили в киназном буфере. Затем приготовили четыре вида рабочего раствора. Первый рабочий раствор с меткой состоит из метки 236 и киназного буфера. Второй рабочий раствор с Axl, Mer, Tyro3 или Met/антителом к GST содержит одну из киназ Axl и Mer или антитело к GST (= антитело к глутатион-S-трансферазе) в киназном буфере. Третий рабочий раствор с антителом к GST приготовили из антитела к GST и киназного буфера. Последний рабочий раствор с ДМСО получили добавлением ДМСО к киназному буферу до конечной концентрации 3%. Каждый из четырех видов рабочих растворов отдельно добавили в планшет, на котором выполняли анализ, и затем инкубировали в течение 1 часа при комнатной температуре. После инкубации на планшете, на котором выполняли анализ, измерили сигнал FRET при помощи EnVision («Perkin Elmer») с помощью программы LanthaHTRF-Assay. Оценку данных выполняли в программе Quattro Workflow. Значения Kd (равновесной константы диссоциации) рассчитывали относительно контрольных лунок с носителем (ДМСО).
В таблице 1 приведены результаты, полученные для анализов связывания киназ AXL и Mer.
Пример 2: Анализ связывания киназы для CSF1R
Принцип анализа связывания
Метод анализа KINOMEscan™ основан на анализе конкурентного связывания, в рамках которого выполняют количественное измерение способности соединения конкурировать с иммобилизованным лигандом, направленным на активный сайт. Анализ выполняют путем объединения трех компонентов: киназы, меченной ДНК; иммобилизованного лиганда; и тестируемого соединения. Способность тестируемого соединения конкурировать с иммобилизованным лигандом измеряют при помощи количественной ПЦР ДНК-метки.
Протокол анализа связывания для CSF1R
E. coli выращивали до логарифмической фазы, инфицировали фагом Т7 и инкубировали при встряхивании при 32°C до лизиса. Лизаты центрифугировали и отфильтровали для удаления остатков клеток. Оставшиеся киназы были продуцированы в клетках HEK-293, и впоследствии на них нанесли ДНК-метку для детектирования количественной ПЦР. Покрытые стрептавидином магнитные микроносители обрабатывали биотинилированными низкомолекулярными лигандами в течение 30 минут при комнатной температуре для получения аффинных смол для анализов киназы. Обработанные лигандом микроносители блокировали избыточным количеством биотина и промывали блокирующим буфером (SeaBlock («Pierce»), 1% бычий сывороточный альбумин, 0,05% Полисорбат 20 («Tween»), 1 мМ ДТТ) для удаления несвязанного лиганда и уменьшения неспецифического связывания. Реакции связывания собирали путем объединения киназ, обработанных лигандом аффинных микроносителей и испытуемых соединений в 1х буфере связывания (20% SeaBlock, 0,17X физиологический раствор с фосфатным буфером, 0,05% Полисорбат 20 («Tween»), 6 мМ ДТТ). Тестируемые соединения приготовили в виде 111Х исходных растворов в 100% ДМСО. Значения Kd определяли при помощи серии 11-точечных 3-кратных разведений соединения с тремя контрольными точками ДМСО. Все соединения для измерений значений Kd распределяли путем акустического переноса (бесконтактного дозирования) в 100% ДМСО. Затем соединения разбавляли непосредственно в пробах таким образом, чтобы конечная концентрация ДМСО была равна 0,9%. В случае % ингибирования испытуемые соединения приготовили в виде 40Х исходного раствора в 100% ДМСО и напрямую разбавили в пробе. Все реакции проводили в полипропиленовом 384-луночном планшете. Конечный объем каждой реакции составлял 0,02 мл. Планшеты, на которых выполняли анализ, инкубировали при комнатной температуре при встряхивании в течение 1 часа, и аффинные микроносители промывали промывочным буфером (1x физиологический раствор с фосфатным буфером, 0,05% Полисорбат 20). Затем микроносители ресуспендировали в элюирующем буфере (1x физиологический раствор с фосфатным буфером, 0,05% Полисорбат 20, 0,5 мкМ небиотинилированный аффинный лиганд) и инкубировали при комнатной температуре при встряхивании в течение 30 минут. Концентрацию киназы в элюатах измерили с помощью количественной ПЦР.
Результаты анализа активности связывания киназы CSF1R показаны в таблицах 1 (Kd) и 2 (процент ингибирования при концентрации испытуемого соединения 0,1 мкМ).
Анализ данных
Константы связывания (Kd) рассчитывали по стандартной кривой «доза-ответ» с помощью уравнения Хилла:
Угловой коэффициент Хилла был установлен на -1.
Кривые аппроксимировали при помощи нелинейного метода наименьших квадратов с использованием алгоритма Левенберга-Марквардта.
% ингибирования связывания рассчитывали следующим образом:
- отрицательный контроль = ДМСО (100% контроль)
- положительный контроль = контрольное соединение (0% контроль)
Пример 3: Анализ ингибирования клеточного Axl
Принцип анализа клеточного Axl
Axl экспрессируется в некоторых из злокачественных раковых клеток; в частности, клетка H1299 эндогенно экспрессирует Axl; и при индуцировании лигандом Axl, Ga6, может наблюдаться повышенное фосфорилирование Axl (p-Axl).
Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) с использованием клеток H1299
Клетки H1299 должны быть слиты на 40-80% в колбе для культивирования клеток. Затем клетки промывали фосфатно-солевым буфером Дюльбекко и трипсинизировали. После центрифугирования сгусток клеток повторно суспендировали в предварительно нагретой питательной среде (RPMI1640, 10% эмбриональной бычьей сыворотки), и клетки разделяли пипетированием 6 раз вверх и вниз серологической пипеткой объемом 10 мл. Суспензию клеток разбавили до конечной концентрации 1,25 х 105 клеток/мл. Затем в планшет добавили клеточную суспензию в объеме 80 мкл/лунку. Планшеты с клетками инкубировали при 37°С/5% CO2 в течение ночи. Соединения растворяли в ДМСО до 10 мМ и хранили в шкафу в атмосфере азота. Приготовили планшет с исходными соединениями, где концентрация эталонных соединений начинается с 0,50 мМ (5 мкл + 95 мкл ДМСО), концентрация тестируемых соединений начинается с 1,5 мМ (6 мкл + 34 мкл ДМСО); затем выполняли серию 3-кратных разведений (10 доз) соединений. Затем разбавляли соединения средой в среднем планшете (2 мкл соединений + 198 мкл среды). Переносили 20 мкл разбавленных соединений из среднего планшета в планшет с клетками. Планшеты с клетками инкубировали при 37°С/5% CO2 в течение 24 часов. Добавляли 25 мкл Gas6 человека (1000 нг/мл) в 96-луночный планшет; конечная концентрация Gas6 человека составляла 200 нг/мл. Планшеты инкубировали при 37°С/5% CO2 в течение 1 часа. Удаляли среду и промывали клетки один раз ледяным 1X физиологическим раствором с фосфатным буфером в объеме 300 мкл/лунку. Затем удаляли физиологический раствор с фосфатным буфером и добавляли в 96-луночный планшет ледяной 1X буфер для лизиса клеток в объеме 100 мкл/лунка. Планшет встряхивали в течение 40 минут при температуре 4°С. Затем планшеты можно хранить при -20°C. После нагревания полосок микролунок до комнатной температуры отламывают необходимое количество микролунок. Микролунки помещают в держатель для полосок микролунок. Неиспользованные микролунки необходимо немедленно герметично упаковать и хранить при 4°C. Добавляли 60 мкл клеточного лизата в соответствующую лунку. Герметично приклеивали герметизирующую ленту и плотно прижимали к верхней части микролунок. Планшет инкубировали при 37°С в течение 2 часов. Осторожно снимали ленту и промывали лунки 5 раз 1Х промывочным буфером, по 300 мкл на каждую лунку. В каждую лунку добавляли 100 мкл восстановленного Детекторного антитела (зеленого цвета). Герметично приклеивали герметизирующую ленту и планшет инкубировали при 37°С в течение 1 часа. Процедуру промывки повторяли. В каждую лунку добавляли 100 мкл восстановленного вторичного антитела, связанного с пероксидазой хрена. Герметично приклеивали герметизирующую ленту и планшет инкубировали при 37°С в течение 30 минут. Процедуру промывки повторяли. В каждую лунку добавляли 100 мкл субстрата ТМБ. Герметично приклеивали герметизирующую ленту и планшет инкубировали при 37°С в течение 15 минут. В каждую лунку добавляли 100 мкл останавливающего раствора. Осторожно встряхивали несколько секунд. Определяли поглощающую способность на длине волны 450 нм в течение 30 минут после добавления останавливающего раствора. Расчеты и формулы: Для анализа данных с помощью программного обеспечения XL Fit используют следующие расчеты и формулы: Аппроксимацию кривой выполнили с помощью сигмоидальной модели «доза-ответ» (модель Fit, 205). Данные указаны в таблице 3 (приведена ниже).
Пример 4: Анализ ингибирования клеточного CSF1R
Принцип клеточного анализа CSF1R
Нормальный протоонкоген c-fms кодирует рецептор фактора роста макрофагов (M-CSF, также называемый CSF1), участвующий в росте, выживании и дифференцировке по линии моноциты-макрофаги. Клетки THP-1 действуют как модель моноцитов человека. Это подтверждает, что повышенное фосфорилирование CSF1R (p-CSF1R) может наблюдаться при индуцировании CSF1 - лигандом CSF1R. Клетки M-NFS-60 представляют собой линию миелоидных клеток мыши, которая демонстрирует CSF1-зависимую пролиферацию, т.е. для ее роста необходим CSF1.
Твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA) с использованием клеток THP-1
Количество клеток THP-1 в колбе для культивирования клеток необходимо поддерживать на уровне 5х105 - 1х106 клеток/мл. После центрифугирования надосадочную жидкость отсасывали. Сгусток клеток повторно суспендировали в предварительно нагретой питательной среде (RPMI1640, 10% эмбриональной бычьей сыворотки, 0,05 мМ 2-меркаптоэтанола), и клетки разделяли пипетированием 6 раз вверх и вниз серологической пипеткой объемом 10 мл. Суспензию клеток необходимо разбавить до конечной концентрации 2 х 105 клеток в 80 мкл предварительно нагретой питательной средой. Во все лунки планшетов добавляли 80 мкл клеточной суспензии. Планшеты с клетками инкубировали при 37°С/5% CO2. Соединение растворяли в 100% ДМСО с получением 10 мМ исходных растворов (аликвоты хранят в шкафу в атмосфере азота). 10 мМ растворов соединений разбавляли в 2 раза в 100% ДМСО с получением 5 мМ растворов (10 мкл + 10 мкл ДМСО), затем выполняли 3-кратное последовательное разведение (10 мкл + 20 мкл ДМСО) на 10 доз. Для эталонных соединений: 10 мМ растворов соединений разбавляли в 20 раз в 100% ДМСО с получением 0,5 мМ растворов (2 мкл + 38 мкл ДМСО), затем выполняли 3-кратное последовательное разведение (10 мкл + 20 мкл ДМСО) на 10 доз. Переносили 2 мкл разбавленных соединений в 198 мкл среды с получением раствора с концентрацией 50 мкМ в верхней точке для соединений и 5 мкМ для эталонных соединений. Затем переносили 20 мкл раствора соединения в планшет, на котором выполняли анализ (дублирующие лунки). Планшет инкубировали при 37°С/5% CO2 в течение 24 часов. Конечная концентрация ДМСО во всех лунках составляла 0,2%. Восстанавливали M-CSF человека в концентрации 50 мкг/мл в стерильной воде. (Аликвоты хранят при -80°C). M-CSF человека разводят свежей средой в пропорции 1:1000 до 50 нг/мл. После обработки соединений в течение 24 часов переносили 25 мкл разведенного M-CSF человека (50 нг/мл) в планшет, на котором выполняют анализ клеток, в соответствии с картой планшета. Конечная концентрация M-CSF человека во всех лунках составляла 10 нг/мл. Планшеты инкубировали при 37°С/5% CO2 в течение 5 минут. Вначале готовили соответствующее количество полного лизирующего буфера (100 мкл/лунка) и хранили на льду. После 5 минут стимуляции M-CSF человека планшеты промывали один раз 300 мкл ледяного физиологического раствора с фосфатным буфером. Затем в каждую лунку добавляли 100 мкл лизирующего буфера. Планшет встряхивали в течение 40 минут при температуре 4°С. Теперь планшеты можно хранить при -20°C. После нагревания полосок микролунок до комнатной температуры отламывали необходимое количество микролунок. Микролунки помещали в держатель для полосок микролунок. Неиспользованные микролунки необходимо немедленно снова герметично упаковать и хранить при 4°C. Добавляют 90 мкл клеточного лизата в соответствующую лунку. Герметично приклеивали герметизирующую ленту и плотно прижимали к верхней части микролунок. Инкубировали планшет 2 часа при температуре 37°С. Осторожно снимали ленту и промывали лунки 4 раза 1-х промывочным буфером, по 200 мкл каждый раз на каждую лунку. В каждую лунку добавляли 100 мкл восстановленного Детекторного антитела (зеленого цвета). Герметично приклеивали герметизирующую ленту и планшет инкубировали при 37°С в течение 1 часа. Процедуру промывки повторяли. В каждую лунку добавляли 100 мкл восстановленного вторичного антитела, связанного с пероксидазой хрена. Герметично приклеивали герметизирующую ленту и планшет инкубировали при 37°С в течение 30 минут. Процедуру промывки повторяли. В каждую лунку добавляли 100 мкл субстрата ТМБ. Герметично приклеивали герметизирующую ленту и планшет инкубировали в течение 10 минут при 37°С или в течение 30 минут при 25°С. Расчеты и формулы: Для анализа данных с помощью программного обеспечения XL Fit использовалит следующие расчеты и формулы: Аппроксимацию кривой выполнили с помощью сигмоидальной модели «доза-ответ» (модель Fit, 205). Данные указаны в таблице 4 (приведена ниже).
Анализ Cell Titer-Glo (CTG) с использованием клеток M-NFS-60
Клетки M-NFS-60 культивировали в среде RPMI-1640, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки, 0,05 мМ 2-меркаптоэтанола, пенициллин (100 ед/мл)/стрептомицин (100 мг/мл), и с добавлением 62 нг/мл рекомбинантного M-CSF человека при 37°C/5% CO2. Аликвоты клеток высеяли в 96-луночный планшет (2 × 105 клеток в 100 мкл/лунка), затем инкубировали при 37°C/5% CO2 в течение 1 часа. Соединение растворяли в 100% ДМСО с получением 10 мМ исходных растворов (аликвоты хранили в шкафу в атмосфере азота). 10 мМ растворов соединений разводили в 2 раза в 100% ДМСО с получением 5 мМ растворов (10 мкл + 10 мкл ДМСО), затем выполняли 3-кратное последовательное разведение (10 мкл + 20 мкл ДМСО) на 10 доз. Для эталонных соединений: 10 мМ растворов соединений разводили в 20 раз в 100% ДМСО с получением 0,5 мМ растворов (2 мкл + 38 мкл ДМСО), затем выполняют 3-кратное последовательное разведение (10 мкл + 20 мкл ДМСО) на 8 доз. 96-луночный планшет доводили до комнатной температуры в течение 30 минут. В каждую лунку добавили 50 мкл реагента CellTiter-Glo® и перемешивали в течение 2 минут на орбитальном встряхивателе для запуска лизиса клеток. 96-луночный планшет инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут для стабилизации люминесцентного сигнала. Люминесцентный сигнал измерили на длине волны 700 нм при помощи планшет-ридера EnVison. Расчеты и формулы: Для анализа данных с помощью программного обеспечения XL Fit использовали следующие расчеты и формулы: Аппроксимацию кривой выполнили с помощью сигмоидальной модели «доза-ответ» (модель Fit, 205). Данные указаны в таблице 5 (приведена ниже).
Пример 5: Ингибирование клеточных Axl, Mer и CSF1R, измеренное при помощи анализа жизнеспособности BaF3
Принцип клеточного анализа BaF3
В этой системе IL-3-зависимые клетки Ba/F3 модифицированы для экспрессии активированной рекомбинантной киназы (в настоящем случае Axl, Mer и CSF1R). После удаления IL-3 выживание и пролиферация модифицированных клеток зависят от активности рекомбинантной киназы. Ингибирование такой киназы (киназ) при помощи испытуемых соединений снижает выживаемость и пролиферацию клеток.
Протокол клеточного анализа BaF3
Клеточные линии выдерживали в питательной среде (ПС), состоящей из RPMI 1640 с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки. Клетки в логарифмической фазе роста собрали и 5000 клеток распределили в каждую лунку 384-луночного планшета в 50 мкл питательной среды. В исходные клетки (или экспериментальные анализы, если указано) дополнительно добавили 2 нг/мл IL-3 для поддержания роста и выживания клеток. В соответствующие лунки (в двух параллельных анализах) добавили пятьдесят нанолитров указанного эталонного стандарта или экспериментального соединения и клетки культивировали в течение 48 часов при 37°C/5% CO2. Жизнеспособность определяли добавлением 10 мкл Cell Titer Glo и измерением люминесценции, которая указана в относительных световых единицах (ОСЕ), измеряемых в импульсах в секунду. Для анализа данных с помощью программного обеспечения GraphPad Prism используовали следующие расчеты и формулы: Аппроксимацию кривой выполнили с помощью кривых «доза-ответ» - ингибирование. Данные указаны в таблице 6 (приведена ниже).
Пример 6: Сравнение выбранных соединений по настоящему изобретению с выбранными соединениями по публикации WO 2016/166250 с точки зрения связывающей активности (Axl и Mer) и клеточной активности.
В таблице 7 показано превосходство соединений 4, 10, 16 и 92 по настоящему изобретению (обозначены двумя звездочками **) по сравнению со структурно аналогичными соединениями 27, 64, 22 и 48, соответственно, из публикации WO 2016/166250 (обозначены одной звездочкой *) на предмет связывающей активности с Axl и Mer и клеточной активности путем иммуносорбентного ферментного анализа H1299. Данные взяты из таблиц 1, 2 и 3 и дополнительно указаны ниже в таблице 7.
Пример 7: Модели на мышах EMT-6 и MV4-11
a) Модель на мышах EMT-6
Сингенная модель
Также было показано, что Axl/Mer конститутивно и индуцируемо экспрессируются на множестве иммунных клеток, в частности, на дендритных клетках (ДК) и макрофагах, которые действуют как отрицательная обратная связь для балансирования передачи провоспалительных сигналов. В случае CSF1R, CSF1R опосредует онкогенез в иммунных к опухоли микросредах и экспрессируется на опухолевых макрофагах миелоидных клеток (ТАМ); повышенный уровень CSF1 в сыворотке, повышенное количество TAM в опухолях и высокая экспрессия тканевого CSF1 и/или CSF1R связаны с плохим прогнозом у пациентов с различными видами рака. Мышиные модели сингенных опухолей широко используют для демонстрации активности новых противораковых иммунотерапий. Сингенная модель ЕМТ-6 содержит значительно большее количество миелоидных клеток, а также более высокий процент ТАМ. Таким образом, ЕМТ-6 является подходящей моделью для оценки эффективности противоопухолевых иммунопрепаратов за счет изменения в иммунных клетках-мишенях.
Протокол лечения модели сингенной опухоли EMT-6
Мышам BALB/c (самки 6-8 недель, «Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd.») подкожно инокулировали в верхнюю часть правого бока опухолевые клетки ЕМТ-6 (1 × 106) в 0,1 мл физиологического раствора с фосфатным буфером для развития опухоли. Для исследования лечение начали на 6 день после инокуляции опухоли, мышам ежедневно вводили перорально дозы каждого испытуемого соединения или носителя. Объемы опухоли измеряли каждые 3 дня при помощи цифрового штангенциркуля и рассчитывали по формуле: V = 0,5a × b2, где a и b - длинный и короткий диаметры опухоли в мм, соответственно. Вес тела измеряли каждые 3 дня. Все процедуры, связанные с обращением с животными, уходом и лечением в ходе исследования, выполняли в соответствии с руководством, утвержденным Ведомственным комитетом по уходу и использованию животных (IACUC) «WuXi AppTec» в соответствии с руководством Ассоциации по оценке и аккредитации ухода за лабораторными животными (AAALAC). Во время рутинного контроля животных ежедневно проверяли на наличие какого-либо влияния роста опухоли и лечения на нормальное поведение, например, подвижность, потребление пищи и воды (только путем визуального осмотра), прибавку/потерю массы тела (массу тела измеряли три раза в неделю), тусклые глаза/шерсть и любые другие аномальные эффекты, указанные в протоколе. Смерть и наблюдаемые клинические признаки регистрировали на основе количества животных в каждой подгруппе. Данные представлены на фигуре 1 в качестве примера для соединения 4 по настоящему изобретению по сравнению со структурно аналогичным соединением 27 из публикации WO 2016/166250, и эти данные показывают, что соединения по настоящему изобретению замедляют рост опухоли в значительно большей мере, чем другие соединения или носитель.
b) Модель на мышах MV4-11
Модель ксенотрансплантата
Высокая экспрессия Axl или Gas6 у пациентов с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ) является прогнозом неблагоприятного исхода в плане выживаемости. Клетки ОМЛ запускают экспрессию и секрецию лиганда Axl Gas6 стромальными клетками костного мозга (BMDSC). Gas6, в свою очередь, опосредует пролиферацию, выживание и химиорезистентность клеток ОМЛ, экспрессирующих Axl. Эта паракринная ось Gas6/Axl между клетками ОМЛ и BMDSC создает хемопротекторную нишу для опухолевых клеток, которая может быть устранена при помощи подходов, мишенью которых является Axl. Ось Axl/Gas6 промотирует пролиферацию лейкозных клеток и поддерживает химиорезистентность.
Протокол лечения модели ксенотрансплантатной опухоли MV4-11
Голым мышам BALB/c (самки 6-8 недель, «Shanghai SIPPR/BK Laboratory Animal Co., LTD.») подкожно инокулировали в верхную часть правого бока опухолевые клетки MV4-11 (1 × 107) в 0,1 мл физиологического раствора с фосфатным буфером + матригель (1:1) для развития опухоли. Для исследования лечение начали на 10 день после инокуляции опухоли, мышам ежедневно вводили перорально дозы каждого испытуемого соединения или носителя. Объемы опухоли измеряли каждые 3 дня при помощи цифрового штангенциркуля и рассчитывали по формуле: V = 0,5a × b2, где a и b - длинный и короткий диаметры опухоли в мм, соответственно. Вес тела измеряли каждые 3 дня. Все процедуры, связанные с обращением с животными, уходом и лечением в ходе исследования, выполняли в соответствии с руководством, утвержденным Ведомственным комитетом по уходу и использованию животных (IACUC) «WuXi AppTec» в соответствии с руководством Ассоциации по оценке и аккредитации ухода за лабораторными животными (AAALAC). Во время рутинного контроля животных ежедневно проверяли на наличие какого-либо влияния роста опухоли и лечения на нормальное поведение, например, подвижность, потребление пищи и воды (только путем визуального осмотра), прибавку/потерю массы тела (массу тела измеряли три раза в неделю), тусклые глаза/шерсть и любые другие аномальные эффекты, указанные в протоколе. Смерть и наблюдаемые клинические признаки регистрировали на основе количества животных в каждой подгруппе. Данные представлены на фигуре 2 в качестве примера для соединения 4 по настоящему изобретению по сравнению со структурно аналогичным соединением 27 из публикации WO 2016/166250, и эти данные показывают, что соединения по настоящему изобретению замедляют рост опухоли в существенно большей мере, чем другие соединения или носитель.
Данные для EMT-6 и MV4-11 показаны на фигурах 1 (исследование эффективности сингенной модели EMT-6) и 2 (исследование эффективности модели ксенотрансплантата MV4-11).
Пример 8: Получение производных диметоксихинолинового общего каркаса
Представленные соединения подвергали дериватизации в соответствии со способами, описанными ниже (Схемы 1-21). Полученные производные исследовали на связывание киназ, клеточную активность и активность in vivo с использованием анализов, описанных выше (примеры 1-7), результаты которых приведены в таблицах 1-7 и на фигурах 1 и 2. Синтезированные соединения 1-179 приведены в таблице 8 ниже.
Схема 1 - Общий механизм синтеза I
Общая процедура для синтеза C1
Способ получения соединений C1 показан на Схеме 1. Реакцию A1 и B1 проводят в присутствии HATU (O-(7-азабензотриазол-1-ил)-N,N,N',N'-тетраметилурония гексафторфосфат), ТЭА в ДМФА с получением C1. В альтернативном варианте реакцию A1 и B1 проводят в присутствии EDCI (1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид) в пиридине с получением C1.
Схема 2 - общий механизм синтеза для соединения 4
Общая процедура для синтеза A3
К HCl (3 M, 180 мл) медленно добавляли соединение A2 (20,0 г, 53,1 ммоль) при 10°C, затем смесь охладили до 0°C и добавили раствор NaNO2 (11,8 г, 55,8 ммоль) в воде (50 мл), смесь приобрела вид коричневого раствора (раствора А). К смеси этил 4-хлор-3-оксобутаноата (28,2 г, 170 ммоль) и NaOAc (66,1 г, 812 ммоль) в H2O (2000 мл)/EtOH (500 мл) добавляли по капле раствор А при температуре 0-5°С. Затем смесь перемешивали при 10°С в течение 1 часа. Желтый порошок выпал в осадок из реакционной смеси. Это явление показало, что реакция прошла, и ЖХ/МС показала 80% желаемого значения МС. Смесь отфильтровали, осадок на фильтре промывали водой (500 мл) и высушивали в высоком вакууме с получением 35,0 г соединения А3 (выход: 72,2%) в виде желтого порошка.
Общая процедура для синтеза A4
К раствору соединения А3 (35,0 г, 117,17 ммоль) в абсолютном EtOH (300 мл) добавили KOAc (23,0 г, 234 ммоль). Смесь нагревали для противотока при 78,3°С в течение 6 часов. Реакционная смесь представляла собой желтый раствор. ЖХ/МС показала 86,7% желаемого значения МС. Смесь охладили до комнатной температуры.Большую часть EtOH удалили при пониженном давлении, осадок распределили между EtOAc (800 мл) и H2O (800 мл).Водную фазу экстрагировали EtOH (800 мл). Объединенный органический экстракт промывали рассолом (900 мл х 2), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением 27,0 г соединения А4 (выход: 87,9%) в виде желтого порошка.
Общая процедура для синтеза A5
К раствору соединения А4 (10,0 г, 38,1 ммоль) в ДМФА (100 мл) добавили NaH (3,05 г, 76,3 ммоль, 60% дисперсия в минеральном масле) при температуре 0°C, затем смесь перемешивали при 20°C в течение 30 минут, затем к смеси добавили CF3CH2OTf (17,7 г, 76,3 ммоль) и реакционную смесь нагревали до 60°C в течение 2,5 часа. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Смесь охладили до комнатной температуры, разбавили водой (1000 мл), экстрагировали EtOAc (1000 мл x 3). Объединенный экстракт промывали рассолом (1500 мл х 2), высушивали над безводным Na2SO4 и отфильтровали, затем выпаривали при пониженном давлении с получением 46,0 г (неочищенного, содержащего небольшое количество ДМФА) соединения А5 в виде желтого смолянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A6
К смеси соединения А5 (40,0 г, 116 ммоль) в MeCN (400 мл) добавили CAN (191 г, 349 ммоль) в H2O (200 мл) при температуре 0°С, затем смесь оставили нагреться до 20°С и перемешивали при 20°С в течение 17 часов. ТСХ (ПЭ/EtOAc = 1/2) показала, что реакция завершилась. Смесь экстрагировали EtOAc (500 мл x 3), объединенные экстракты промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 (800 мл х 3), органическую фазу высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали, фильтрат выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили при помощи системы Combi flash (ПЭ/EtOAc = от 4/1 до 2/1) с получением 7,60 г (выход: 27,5%) соединения А6 в виде желтого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза A7
К раствору соединения А6 (9,15 г, 38,4 ммоль), D1-2 (7,18 мг, 42,3 ммоль) в MeCN (100 мл) добавили Cs2CO3 (31,3 г, 96,1 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 25°C в течение 17 часов с получением желтой суспензии. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь отфильтровали. Остаток на фильтре промывали EtOAc (300 мл). Фильтрат распределили между EtOAc (300 мл) и водой (400 мл). Органическую фазу промывали рассолом (400 мл х 2) и высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного остатка. Остаток очистили при помощи системы Combi flash (ПЭ/EtOAc = от 1:0 до 3:1) с получением 4,3 г нежелательного изомера (выход: 40%) (менее полярного) в виде желтого маслянистого вещества и 4,9 г соединения A7 (выход: 46%) (более полярного) в виде желтого смолянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A8
К раствору соединения А7 (4,9 г, 17,5 ммоль) в MeOH (33 мл) добавили NaOH (2,10 г, 52,5 ммоль) в H2O (8 мл). Реакционную смесь перемешивали при 20°C в течение 2 часов с получением желтого раствора. ТСХ показала, что реакция завершилась. Большую часть MeOH удалили при пониженном давлении. Реакционную смесь довели до pH = 4 добавлением водного раствора HCl (1 M). Смесь экстрагировали ДХМ (110 мл х 3). Органические слои промывали рассолом (150 мл), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением 4,41 г соединения А8 (выход: 100%) в виде желтого смолянистого вещества.
Общая процедура для синтеза 4
К раствору соединения А8 (4,41 г, 17,5 ммоль), EDCI (5,03 г, 26,2 ммоль) в пиридине (40 мл) добавили соединение B1-1 (5,30 г, 17,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 25°C в течение 17 часов с получением желтого раствора. ЖХ/МС показала, что исходный материал не был израсходован полностью. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток распределили между ДХМ (400 мл) и H2O (300 мл). Органический слой промывали H2O (200 мл х 2), рассолом (200 мл), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением желтого смолянистого вещества. Неочищенный продукт очистили при помощи системы Combi Flash (EtOAc: ПЭ = от 0:1 до 1:0), и элюент выпаривали при пониженном давлении с получением грязно-белого смолянистого вещества. Затем остаток растворяли в MeCN (30 мл) и H2O (33 мл) и лиофилизировали с получением 5,23 г соединения 7 (выход: 55%, чистота: 98,5%) в виде белого порошка.
Схема 3 - общий синтез для соединения 1
Общая процедура для синтеза A9
К смеси соединения А6 (1,00 г, 4,20 ммоль), Cs2CO3 (3,42 г, 10,5 ммоль) в ДМФА (10 мл) добавили D1-2 (524 мг, 3,36 ммоль). Смесь перемешивали при 15°C в течение 2 часов с получением желтой смеси. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Смесь распределили между EtOAc (50 мл) и H2O (50 мл). Водную фазу экстрагировали EtOAc (50 мл). Объединенный органический экстракт промывали рассолом (50 мл х 2), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта в виде желтого маслянистого вещества. Остаток очистили при помощи системы Combi flash (ПЭ: ЭА = от 1:0 до 3:1) с получением A9 (240 мг, выход 21,5%, более полярного, желаемого продукта) в виде желтого смолянистого вещества. ЖХ/МС (время удерживания = 1,080 минуты) показала желаемое значение МС.
Общая процедура для синтеза A10
К раствору соединения А9 (240 мг, 0,902 ммоль) в ДХМ (3 мл) добавили 1,3-дибром-5,5-диметилимидазолидин-2,4-дион (155 мг, 0,541 ммоль). Смесь перемешивали при 15°C в течение 12 часов, ЖХ/МС показала, что исходный материал остался, и добавили Br2 (200 мкл), начав при температуре 15°C, в течение 12 часов с получением желтой смеси. ТСХ показала, что реакция завершилась. Смесь разделили между ДХМ (50 мл) и насыщенным бикарбонатом натрия (30 мл), высушивали над безводным Na2SO4 и отфильтровали, затем выпаривали при пониженном давлении с получением соединения А10 (300 мг, выход 96,4%) в виде желтого порошка. ЖХ/МС (время удерживания = 1,243 минуты) показала желаемое значение МС.
Общая процедура для синтеза A11
К смеси соединения A10 (300 мг, 0,869 ммоль), Cs2CO3 (708 мг, 2,17 ммоль) в диоксане (3 мл) и H2O (1 мл) добавили 2,4,6-триметил-1,3,5,2,4,6-триоксатриборинан (327 мг, 2,61 ммоль), Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2 (71 мг, 0,0869 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре 80°С в течение 12 часов в атмосфере N2 с получением черной смеси. ЖХ/МС (время удерживания = 1,186 минуты) показала, что реакция завершилась. Смесь охладили до комнатной температуры и распределили между ДХМ (30 мл) и водой (20 мл). Водную фазу экстрагировали ДХМ (30 мл). Объединенные органические экстракты промывали рассолом (50 мл х 2), выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта в виде коричневого маслянистого вещества, которое очистили при помощи системы Combi flash (ПЭ/ЭА = от 1/0 до 3/1) с получением соединения А11 (53 мг, выход: 21,8%) в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A12
К раствору соединения А11 (50 мг, 0,178 ммоль) в EtOH (1 мл) добавили раствор NaOH (7,14 мг, 0,178 ммоль) в H2O (1 мл). Смесь перемешивали при 15°C в течение 2 часов с получением коричневой суспензии. ТСХ показала, что реакция завершилась. Смесь выпаривали при пониженном давлении для удаления EtOH. Водную фазу разбавили водой (30 мл), подкислили HCl (3 M) до pH = 4-5 и лиофилизировали с получением A12 (46 мг, неочищенного) в виде желтого смолянистого вещества, которое использовали на следующем этапе.
Общая процедура для синтеза 1
К смеси соединения А12 (45 мг, 178 ммоль), HATU (92,5 мг, 0,243 ммоль) в ДМФА (1 мл) добавили B1-1 (48,2 мг, 0,162 ммоль), ТЭА (45 мкл) в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 60°C в течение 12 часов с получением желтой смеси. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Смесь охладили до температуры и влили в воду (10 мл). Желтое твердое вещество выпало в осадок из смеси. Смесь отфильтровали и осадок на фильтре промывали водой (5 мл) с получением неочищенного продукта в виде коричневого твердого вещества, который очистили с помощью препаративной ТСХ (ДХМ/метанол = 10/1) и лиофилизировали с получением соединения 1 (42,9 мг, выход: 49,3%, чистота: 99,1%) в виде желтого порошка.
Схема 4 - Общий синтез для соединения 3
Общая процедура для синтеза A13
1-я партия:
К раствору A6 (200 мг, 0,840 ммоль), D1-3 (216 мг, 2,52 ммоль), пиридина (79,7 мг, 1,01 ммоль) и 4-диметиламинопиридина (308 мг, 2,52 ммоль) в диоксане (5 мл) добавили Cu(OAc)2 (229 мг, 1,26 ммоль), смесь перемешивали при 100°C в течение 17 часов на воздухе. ЖХ/МС неочищенного вещества (время удерживания: 1,490 мин, 1,636 мин) показала, что реакция завершилась.
2-я партия:
К раствору A6 (500 мг, 2,10 ммоль), D1-3 (541 мг, 6,30 ммоль), пиридина (199 мг, 2,52 ммоль) и 4-диметиламинопиридина (770 мг, 6,30 ммоль) в диоксане (10 мл) добавили Cu(OAc)2 (572 мг, 3,15 ммоль), смесь перемешивали при 100°C в течение 17 часов на воздухе. ЖХ/МС неочищенного вещества и ТСХ (ПЭ/EtOAc = 3/1) показали, что реакция завершилась.
Смесь каждой партии объединили и влили в воду (100 мл), экстрагировали ЭА (50 мл x 3), объединенные экстракты промывали водным раствором NH3·H2O (50 мл x 3, 14%) и рассолом, высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали, фильтрат выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили с помощью системы Combi flash с получением 510 мг соединения А13 (общий выход: 20%) в виде желтого смолянистого вещества и 320 мг А13-1 в виде белого порошка.
Общая процедура для синтеза A14
1-я партия:
К смеси соединения А13 (100 мг, 0,359 ммоль, 1 экв.) в ДХМ (5 мл) добавили Br2 (57 мл, 0,36 мл, 1 экв.), смесь перемешивали при 15°C в течение 17 часов с получением коричневого раствора. ЖХ/МС неочищенного вещества (время удерживания: 0,977 мин) показала, что реакция не завершилась, затем к указанной выше смеси добавили дополнительно Br2 (104 мг), полученную смесь перемешивали при 15°C в течение 24 часов с получением коричневого раствора. ТСХ (ПЭ/EtOAc = 3/1) показала, что реакция завершилась.
2-я партия:
К раствору А13 (410 мг, 1,47 ммоль) в ДХМ (5 мл) добавили Br2 (236 мг, 1,47 мл), смесь перемешивали при 15°C в течение 17 часов с получением коричневого раствора. ТСХ (планшет 1, ПЭ/EtOAc = 3/1) показала, что реакция не завершилась, затем к указанной выше смеси добавили Br2 (500 мг), смесь перемешивали при 30°C в течение 1 часа, ТСХ (планшет 2, ПЭ/EtOAc = 3/1) показала, что реакция завершилась.
Смесь двух объединенных партий вылили в ДХМ (50 мл) и промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 (50 мл x3), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали, фильтрат выпаривали при пониженном давлении с получением остатка, остаток очистили при помощи системы Combi flash (ПЭ/EtOAc = от 10/1 до 2/1) с получением 450 мг (выход: 86%) A14 в виде белого порошка.
Общая процедура для синтеза A15
К раствору соединения А14 (450 мг, 1,26 ммоль), Е1 (1,37 г, 3,78 ммоль) и LiCl (53 мг, 1,3 ммоль) в ДМФА (5 мл) добавили Pd(dppf)Cl2 (184 мг, 0,252 ммоль), смесь продували N2 три раза и перемешивали при 100°C в течение 17 часов с получением коричневой суспензии. ЖХ/МС неочищенного вещества (время удерживания: 1,233 минуты) и ТСХ (ПЭ/EtOAc = 3/1) показали, что реакция завершилась, затем смесь обработали водным раствором HCl (10 мл, 1 М) с получением коричневой суспензии, ТСХ (ПЭ/EtOAc = 3/1) и ЖХ/МС показали, что реакция завершилась. Значение pH смеси довели до 8 добавлением насыщенного водного раствора NaHCO3, экстрагировали EtOAc (30 мл x 3), объединенные экстракты промывали рассолом (50 мл), высушивали над безводным Na2SO3, отфильтровали, фильтрат выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили при помощи системы Combi flash (ПЭ/EtOAc = 10/1) с получением 100 мг (выход: 26%) соединения А15 в виде желтого порошка.
Общая процедура для синтеза A16
К раствору А15 (100 мг, 0,327 ммоль) в EtOAc (3 мл) добавили NaOH (26 мг, 0,65 мл) в H2O (1 мл), смесь перемешивали при 15°C в течение 3 часов с получением желтого порошка. ТСХ (EtOAc) показала, что реакция завершилась. Значение pH смеси довели до 5, смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка, остаток высушивали в вакууме. Затем неочищенное соединение обработали водным раствором NaOH (1M, 20 мл) для очистки от соли Na, затем экстрагировали EtOAc (10 мл x 2) для удаления примесей, значение pH водной фазы довели до 5 добавлением водного раствора HCl (3M), экстрагировали ДХМ (30 мл х 3), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали, фильтрат выпаривали при пониженном давлении с получением 60 мг (выход: 63%) A16 в виде белого порошка.
Общая процедура для синтеза 3
К раствору соединения А16 (60 мг, 0,21 ммоль), В1-1 (61 мг, 0,21 ммоль) и ТЭА (104 мг, 1,03 ммоль) в ДХМ (1 мл) добавили HATU (156 мг, 0,411 мл), смесь перемешивали при 15°C в течение 17 часов с получением суспензии. ЖХ/МС и ВЭЖХ неочищенного продукта показали, что реакция прошла успешно. Смесь отфильтровали, осадок на фильтре промывали ацетонитрилом (2 мл) с получением продукта (около: 60 мг, протонный ЯМР: содержащего ДМФА (7%). Продукт лиофилизировали с получением 36 мг (выход: 31%) соединения 3 в виде белого порошка.
Схема 5 - общий синтез для соединения 6
Общая процедура для синтеза A17
Смесь A4 (10,0 г, 38,0 ммоль) и Cs2CO3 (24,8 г, 76,3 ммоль) в ДМФА (20 мл) перемешивали при 25°C в течение 30 минут. К полученной смеси добавляли E2 (9,38 г, 76,3 ммоль, 7,2 мл). Смесь перемешивали при 25°C в течение 16 часов с получением коричневой смеси. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Смесь распределили между EtOAc (200 мл) и H2O (200 мл). Водную фазу экстрагировали EtOAc (200 мл х 2). Объединенный органический экстракт промывали рассолом (500 мл х 2), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением соединения А17 (10,50 г, выход: 90,5%) в виде коричневого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза A18
К раствору соединения А17 (10,5 г, 34,5 ммоль) в MeCN (100 мл) добавили раствор CAN (56,7 г, 104 ммоль) в H2O (100 мл) при температуре 0°С. Смесь перемешивали при 25°C в течение 16 часов с получением коричневого раствора. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. К смеси добавили EtOAc (500 мл) и насыщенный раствор NaHCO3 (500 мл). Смесь отфильтровали. Фильтрат разделили. Водную фазу экстрагировали EtOAc (500 мл х 2). Объединенный органический экстракт промывали рассолом (800 мл х 2), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка, который очистили с помощью системы Combi flash (ПЭ/EtOAc = от 1/0 до 4/1) с получением соединения А18 (2,40 г, выход: 22,2%, ЖХ/МС: 63,2%) в виде темно-желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A19
К смеси соединения А18 (1,00 г, 5,04 ммоль) и Cs2CO3 (3,29 г, 10,1 ммоль) в ДМФА (10 мл) добавили D1-2 (944 мг, 6,05 ммоль, 0,48 мл). Смесь перемешивали при 20°C в течение 4 часов с получением коричневой смеси. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Смесь охладили до комнатной температуры. Смесь распределили между EtOAc (30 мл) и H2O (30 мл). Водную фазу экстрагировали EtOAc (30 мл х 2). Объединенный органический экстракт промывали рассолом (80 мл х 3), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка, который очистили при помощи системы Combi flash (элюент: ПЭ/EtOAc = 3/1) с получением соединения А19 (300 мг, выход: 26,4%, более полярного) и А19-1 (450 мг, выход: 39,4%, менее полярного) в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A20
К смеси соединения А19 (300 мг, 1,33 ммоль) в EtOH (8 мл) и H2O (4 мл) добавили NaOH (159 мг, 3,98 ммоль). Смесь перемешивали при 15°С в течение 2 часов. ЖХ/МС показала, что соединение 2 осталось. Смесь перемешивали в течение еще 1 часа с получением желтого раствора. ТСХ (элюент: EtOAc) показала, что реакция завершилась. Большую часть этанола удалили при пониженном давлении. Водный раствор разбавили H2O (5 мл) и довели до рН = 3-4 с использованием HCl (2 M, водный), затем экстрагировали при помощи ДХМ (10 мл x 3). Органический экстракт высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением А20 (230 мг, выход: 87,5%) в виде желтого смолянистого вещества.
Общая процедура для синтеза 6
К раствору А20 (240 мг, 1,21 ммоль) и В1-1 (300 мг, 1,01 ммоль) в ДМФА (6 мл) добавили HATU (575 мг, 1,51 ммоль) и ТЭА (306 мг, 3,03 ммоль, 0,42 мл). Смесь перемешивали при 15°С в течение 17 часов. ЖХ/МС показала, что реакция не завершилась. Смесь нагрели до 60°С и перемешивали еще в течение 3 часов. ЖХ/МС показала, что реакция не завершилась. Смесь перемешивали при 60°C в течение еще 17 часов с образованием коричневой смеси. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Смесь распределили между EtOAc (20 мл) и H2O (20 мл). Водную фазу экстрагировали EtOAc (20 мл х 2). Объединенный органический экстракт промывали рассолом (50 мл х 3), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка, который очистили при помощи системы Combi flash (элюент: ПЭ/EtOAc = от 1/1 до 7/3) и лиофилизировали с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт дополнительно очистили препаративной ТСХ (элюент: ПЭ/EtOAc = 1/9) с получением 50 мг продукта, который по-прежнему содержал примесь из ЖХ/МС. Н-ЯМР показал, что продукт был чистым. Затем образец дополнительно очистили препаративной ВЭЖХ (0,05% NH4HCO3). Большую часть ацетонитрила удалили лиофилизацией с получением соединения 6 (25,4 мг, выход: 5,3%, ЖХ/МС: 100%) в виде белого порошка.
Схема 6 - Общий синтез для соединения 15
Общая процедура для синтеза
A21
К смеси A4 (25 г, 95,3 ммоль) в ДМФА (150 мл) добавляли Cs2CO3 (77,7 г, 238 ммоль), E3 (25 г, 185 ммоль, 18,8 мл). Смесь перемешивали при 25°C в течение 17 часов с получением коричневой смеси. ЖХ/МС показала, что реакция не завершилась, и к указанной выше смеси добавили еще 10 г E3, смесь перемешивали при 25°C в течение 3 часов. ЖХ/МС (время удерживания = 1,622 минуты) показала, что реакция завершилась. Смесь отфильтровали, осадок на фильтре промывали EtOAc (500 мл), фильтрат промывали водой (400 мл), водную фазу экстрагировали EtOAc (150 мл x 2), объединенные экстракты промывали водой (500 мл х 3), рассолом (500 мл), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением А21 (18 г, 40,9 ммоль) в виде коричневого маслянистого вещества. Неочищенный продукт использовали для следующего этапа без очистки.
Общая процедура для синтеза A22
К смеси соединения А21 (18 г, 56,9 ммоль) в MeCN (150 мл) добавили CAN (93,6 г, 170 ммоль, 85,1 мл) в H2O (150 мл) при температуре 0-5°С. Смесь перемешивали при 25°C в течение 17 часов с получением коричневой смеси. ЖХ/МС (время удерживания = 1,244 минуты) показала, что реакция завершилась. Смесь разделили между EtOAc (300 мл) и водой (300 мл), водную фазу экстрагировали EtOAc (150 мл х 2), объединенные экстракты промывали насыщенным NaHCO3 (500 мл х 3), рассолом (500 мл), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта, который очистили при помощи системы Combi flash (ПЭ/ЭА = от 10:1 до 2:1) с получением А22 (1,4 г, неочищенного) в виде коричневого смолянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A23
К раствору соединения А22 (1,2 г, 5,71 ммоль), D1-1 (1,46 г, 8,56 ммоль) в ДМФА (15 мл) добавили Cs2CO3 (3,72 г, 11,4 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере N2 при 20°C в течение 17 часов с получением желтой суспензии. ЖХ/МС (время удерживания = 1,526 минуты) показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь распределили между EtOAc (300 мл) и H2O (500 мл). Отделенную водную фазу экстрагировали EtOAc (100 мл). Объединенные органические слои промывали H2O (200 мл х 2), рассолом (100 мл), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили при помощи системы Combi flash (петролейный эфир/этилацетат = от 1/0 до 3/1) с получением 310 мг (выход: 19,4%, чистота: 90%, более полярного) А23 в виде коричневого маслянистого вещества и 450 мг (выход: 29,8%, чистота: 99,7%, менее полярного) А23-1 в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A24
К раствору соединения А23 (310 мг, 1,23 ммоль) в MeOH (3 мл) добавили раствор NaOH (147 мг, 3,69 ммоль) в H2O (4 мл). Реакционную смесь перемешивали при 20°C в течение 2 часов с получением желтого раствора. ТСХ показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь довели до pH = 5 добавлением водного раствора HCl (1 M). Смесь экстрагировали EtOAc (100 мл х 2). Органические слои промывали рассолом (60 мл), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением 300 мг (неочищенного) А24 в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A25
К раствору соединения А24 (150 мг, 0,669 ммоль), B1-1 (199 мг, 0,669 ммоль) в пиридине (3 мл) добавили EDCI (192 мг, 1,00 ммоль) в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали в атмосфере N2 при 20°C в течение 17 часов с получением желтой смеси. ЖХ/МС (время удерживания = 1,459 минуты) показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь распределили между EtOAc (100 мл) и водой (100 мл). Водную фазу экстрагировали EtOAc (60 мл х 3). Объединенные экстракты промывали 0,5 M водным раствором NaOH (70 мл), H2O (70 мл), 0,5 M водным раствором HCl (70 мл), H2O (70 мл), рассолом (60 мл), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением 170 мг (выход: 50,5%) А25 в виде желтого смолянистого вещества.
Общая процедура для синтеза 15
К раствору соединения А25 (170 мг, 0,338 ммоль) в ТГФ (3 мл) добавили раствор NMO (N-Оксид N-метилморфолина) (79 мг, 0,675 ммоль), OsO4 (26 мг, 0,101 ммоль) в H2O (2 мл). Реакционную смесь перемешивали при 20°C в течение 17 часов с получением желтой смеси. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. К реакционной смеси добавили раствор Na2SO3 (400 мл) в H2O (4 мл) и перемешивали при 25°C в течение 20 минут. После фильтрации фильтрат распределили между EtOAc (100 мл) и H2O (20 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (50 мл х 2). Объединенные органические слои промывали H2O (40 мл х 2), рассолом (40 мл), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. После очистки препаративной ВЭЖХ (0,01% NH4HCO3) элюент лиофилизировали с получением 47,9 мг (выход: 26,4%, чистота: 100%) соединения 15 в виде белого порошка.
Схема 7 - Общий синтез для соединения 17 и 19
Общая процедура для синтеза A26
К раствору А6 (0,4 г, 1,68 ммоль, 1 экв.) в CH3CN (20 мл) добавили Cs2CO3 (821 мг, 2,52 ммоль, 1,5 экв.) и D1-4 (186 мг, 2,02 ммоль, 1,2 экв.). Полученную смесь перемешивали при 15°C в течение 16 часов с получением желтой суспензии. ЖХ/МС и ТСХ (ПЭ/EtOAc = 1/1) показали, что реакция завершилась. Реакционную смесь погасили добавлением H2O (50 мл) и экстрагировали EtOAc (50 мл x 2). Объединенные органические слои промывали рассолом (10 мл х 2), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили с помощью колоночной хроматографии (SiO2, петролейный эфир/EtOAc = 1/1) с получением соединения А26 (184 мг, выход 37,2%) в виде белого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза A27
К раствору А26 (184 мг, 0,625 ммоль, 1 экв.) в MeOH (12 мл) и H2O (2 мл) добавили NaOH (75 мг, 1,88 ммоль, 3 экв.). Полученную смесь перемешивали при 15°C в течение 2 часов с получением желтого раствора. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка, затем разбавили H2O (10 мл) и экстрагировали EtOAc (10 мл). Водные слои довели до pH = 4 добавлением 0,5 М HCl (5 мл), затем выпаривали при пониженном давлении с получением A27 (300 мг, неочищенного, содержит много соли NaCl) в виде белого твердого вещества. Продукт использовали для следующего этапа напрямую без дополнительной очистки.
Общая процедура для синтеза 19
К раствору соединения В1-1 (160 мг, 0,538 ммоль, 1 экв.) в пиридине (3 мл) добавили А27 (158 мг, 0,592 ммоль, 1,1 экв.) и EDCI (155 мг, 0,807 ммоль, 1,5 экв.). Полученную смесь перемешивали при 15°C в течение 16 часов с получением желтого раствора. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась и образовался желаемый продукт. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. К остатку добавили H2O (20 мл) и экстрагировали EtOAc (20 мл x 2). Объединенные органические слои промывали рассолом (10 мл х 2), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка, который очистили с помощью колоночной хроматографии (SiO2, ПЭ/EtOAc = 0/1) с получением соединения 19 (185 мг, выход 63%) в виде белого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза 17
К раствору 19 (185 мг, 0,339 ммоль, 1 экв.) в метаноле (5 мл) добавили NaBH4 (25,7 мг, 0,678 мл, 2 экв.) одной порцией, полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 часа с получением бесцветного раствора. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь погасили добавлением H2O (1 мл) и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Затем остаток разбавили H2O (20 мл) и экстрагировали EtOAc (20 мл x 2). Объединенные органические слои промывали рассолом (10 мл х 2), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток растворили в CH3CN (2 мл) и H2O (5 мл), затем лиофилизировали с получением продукта. H-ЯМР и ВЭЖХ показали, что продукт содержит примеси, затем неочищенный продукт дополнительно очистили препаративной ВЭЖХ (колонка: Waters Xbridge 150*255, подвижная фаза: [вода (0,05% гидроксид аммиака по объему)-ацетонитрил];B%: 40%-75%, 7 мин). Фракцию выпаривали и лиофилизировали с получением соединения 17 (89,9 мг, выход 48,4%, чистота 100%) в виде белого твердого вещества.
Схема 8 - Общий синтез для соединения 63
Общая процедура для синтеза A28
Смесь D1-5 (2,55 г, 10,1 ммоль, 564 мкл, 1,20 экв.), A6 (2,00 г, 8,40 ммоль, 1,00 экв.) и Cs2CO3 (5,47 г, 16,80 ммоль, 2,00 экв.) в диоксане (17,0 мл) нагревали до 100°C в течение 12 часов. ЖХ/МС (A28: время удерживания = 1,24 мин) показала, что соединение A6 было полностью израсходовано и был обнаружен один основной пик с желаемым отношением массы к заряду. Смесь концентрировали и фильтрат концентрировали. Остаток очистили при помощи колоночной хроматографии (SiO2, петролейный эфир/этилацетат = от 3/1 до 1/1) (ТСХ: петролейный эфир / этилацетат = 1/1, A28: коэффициент удерживания = 0,35). Получили соединение А28 (1,8 г, 4,55 ммоль, выход 54,2%) в виде желтого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза A29
К раствору соединения A28 (1,80 г, 4,55 ммоль, 1 экв.) в MeOH (12,6 мл) добавили по капле раствор NaOH (364 мг, 9,11 ммоль, 2,0 экв.) в H2O (3,60 мл) при температуре 15~25°С. Смесь перемешивали при температуре 15~25°С в течение 12 часов. ТСХ (петролейный эфир / этилацетат = 1/1, A28: коэффициент удерживания = 0,35, A29: коэффициент удерживания = 0,01) показала, что соединение A28 израсходовано полностью. Смесь концентрировали. Значение pH остатка довели до 5 ~ 6 добавлением 4М HCl (15,0 мл). Реакционную смесь разбавили ДХМ и изопропиловым спиртом (3/1, 20 мл х 4). Объединенные органические слои высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали. Получили соединение А29 (1,39 г, 3,78 ммоль, выход 83,1%) в виде желтого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза A30
К раствору соединения А29 (200 мг, 544 мкмоль, 1 экв.) и соединения В1-1 (165 мг, 555 мкмоль, 1,02 экв.) в пиридине (5 об.) добавили EDCI (156 мг, 816 мкмоль, 1,50 экв.). Смесь перемешивали при температуре 15~25°С в течение 12 часов в атмосфере N2. ЖХ/МС (A30: время удерживания = 1,04 мин) показала, что соединение A29 было полностью израсходовано и был обнаружен один основной пик с желаемым отношением массы к заряду. Реакционную смесь выпаривали. Соединение A30 (200 мг, 309 мкмоль, выход 56,8%) получили в виде коричневого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза 63
Раствор по формуле А30 (1,00 экв.) в HCl/MeOH (50 мл) перемешивали при температуре 15°C в течение 2 часов. ЖХ/МС показала, что соединение A30 было полностью израсходовано и был обнаружен один основной пик с желаемым отношением массы к заряду. Смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Неочищенный продукт очистили обращенно-фазовой ВЭЖХ (условия 0,1% HCl) (ВЭЖХ). Соединение 63 (168 мг, выход 92,4%, чистота 99,2%) получили в виде желтого твердого вещества.
Схема 9 - Общий синтез для соединения 23
Общая процедура для синтеза A32
К смеси А31 (10 г, 63,7 ммоль, 1 экв.) в EtOH (150 мл) медленно добавляли SOCl2 (8,33 г, 70,0 ммоль, 5,08 мл, 1,1 экв.) при 20°С (комнатной температуре) и полученную смесь перемешивали при 20°C в течение 48 часов с получением бесцветного раствора. Реакцию не контролировали при помощи ТСХ или ЖХ/МС, поскольку это обычная реакция. Смесь непосредственно концентрировали, затем повторно упаривали со 100 мл толуола с получением A32 (12,4 г, неочищенного) в виде белого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза A33
К смеси соединения A32 (12,4 г, 66,9 ммоль, 1 экв.) и K2CO3 (23,1 г, 167 ммоль, 2,5 экв.) в MeCN (120 мл) добавили D1-1 (28,5 г, 167 ммоль, 16,4 мл, 2,5 экв.) и полученную смесь нагревали до 60-70°C в течение 16 часов с получением белой смеси. ТСХ показала образование двух новых пятен. Смесь распределили между EtOAc (100 мл) и H2O (100 мл). Водную фазу экстрагировали EtOAc (100 мл х 2). Объединенный органический экстракт высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта. Остаток очистили при помощи системы Combi flash (ПЭ/EtOAc = от 1/0 до 4/1 и до 3/1) с получением А33 (9,5 г, выход: 62,4%) в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A34
К раствору соединения А33 (2 г, 8,8 ммоль, 1 экв.) в MeOH (20 мл) добавили Pd/C (200 мг, чистота 10%) в атмосфере N2. Суспензию дегазировали под вакуумом и несколько раз продували H2. Смесь перемешивали в атмосфере H2 (15 фунтов на кв. дюйм) при 15°C в течение 3 часов с получением черной суспензии. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь отфильтровали через целитовую прокладку и фильтрат концентрировали с получением соединения A34 (1,55 г, выход 88,8%, чистота 99,4%) в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A35
К раствору А34 (200 мг, 1,01 ммоль, 1 экв.) в CH3CN (10 мл) добавили 2,2,2-трифторэтилтрифторметансульфонат (353 мг, 1,52 ммоль, 1,5 экв.), K2CO3 (308 мг, 2,23 ммоль, 2,2 экв.) и Et3N (154 мг, 1,52 ммоль, 0,2 мл, 1,5 экв.). Полученную смесь нагревали до 90°C (на масляной бане) и перемешивали в течение 4 часов с получением желтой суспензии. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась, ТСХ (ПЭ:EtOAc = 3:1) показала, что осталась часть исходного материала, образовалось одно новое пятно. Реакционную смесь погасили добавлением H2O (30 мл) и экстрагировали EtOAc (30 мл x 2). Объединенные органические слои промывали рассолом (10 мл х 2), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили с помощью колоночной хроматографии (SiO2, петролейный эфир:EtOAc = 3:1) с получением соединения А35 (110 мг, выход 38,9%) в виде белого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза A36
К раствору А35 (110 мг, 0,394 ммоль, 1 экв.) в MeOH (8 мл) и H2O (2 мл) добавили NaOH (78,8 мг, 1,97 ммоль, 5 экв.). Полученную смесь перемешивали при 15°C в течение 2 часов с получением бесцветного раствора. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь довели до pH ~ 4 добавлением 0,5 М HCl (30 мл) и перемешивали в течение 30 минут, затем концентрировали при пониженном давлении с получением соединения A36 (121 мг, неочищенного) в виде белого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза 23
К раствору соединения В1-1 (95 мг, 0,32 ммоль, 1 экв.) и А36 (88,3 мг, 0,35 ммоль, 1,1 экв.) в пиридине (2 мл) добавили EDCI (92 мг, 0,48 ммоль, 1,5 экв.). Полученную смесь перемешивали при 15°C в течение 16 часов с получением желтой суспензии. ЖХ/МС показала, что большая часть исходного материала была израсходована и образовался желаемый продукт. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка, затем разбавили H2O (20 мл) и экстрагировали EtOAc (20 мл х 2). Объединенные органические слои промывали рассолом (10 мл х 2), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили колоночной хроматографией (SiO2, ПЭ:EtOAc = 1:1) с получением продукта, который растворили в CH3CN (2 мл) и H2O (3 мл) и лиофилизировали с получением соединения 23 (56,5 мг, выход 33,3%, 100% чистота) в виде белого порошка.
Схема 10 - Общий синтез для соединения 34
Общая процедура для синтеза A37
К смеси соединения А32 (5,45 г, 29,4 ммоль, 1 экв.) и 3,4-дигидро-2H-пирана (7,43 г, 88,3 ммоль, 8,07 мл, 3 экв.) в ТГФ (40 мл) добавили п-толуолсульфоновую кислоту (507 мг, 2,94 ммоль, 0,1 экв.). Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 16 часов с получением желтого раствора. ТСХ (ПЭ/EtOAc = 3/1) показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь погасили H2O (100 мл) и экстрагировали EtOAc (50 мл x 2). Органический слой промывали рассолом (20 мл х 3), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили колоночной хроматографией на силикагеле (SiO2, ПЭ/EtOAc = 3:1) с получением 7,01 г (выход: 88,4%) А37 в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A38
К раствору соединения А37 (7,01 г, 26,0 ммоль, 1 экв.) в MeOH (70 мл) добавили влажный Pd/C (1,5 г, чистота 10%, 50% в воде) в атмосфере N2. Суспензию дегазировали под вакуумом и несколько раз продували H2. Смесь перемешивали в атмосфере H2 (15 фунтов на кв. дюйм) при 25°C в течение 16 часов с получением черной суспензии. ТСХ (ПЭ/EtOAc = 2/1) показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь отфильтровали через целитовую прокладку и фильтрат выпаривали с получением 5,84 г (выход: 93,7%) А38 в виде пурпурного маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A39
К смеси A38 (4,20 г, 17,6 ммоль, 1 экв.) в дихлорэтане (25 мл) добавили тетрагидропиран-4-карбальдегид (2,20 г, 19,3 ммоль, 1,1 экв.), NaBH(OAc)3 (9,30 г, 43,9 ммоль, 2,5 экв.) и уксусную кислоту (1,05 г, 17,6 ммоль, 1,0 мл, 1 экв.). Полученную смесь перемешивали при 25°C в течение 17 часов с получением пурпурной суспензии. ТСХ (ПЭ/EtOAc = 2/1) показала, что реакция завершилась. Смесь выпаривали при пониженном давлении с получением 5,53 г (неочищенного) А39 в виде пурпурного смолянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A40
К раствору А39 (5,53 г, 16,4 ммоль, 1 экв.) в MeOH (50 мл) добавили полиформальдегид (2,46 г, 16,39 ммоль), HOAc (984 мг, 16,4 ммоль, 937 мкл, 1 экв.) и NaBH3CN (1,03 г, 16,4 ммоль, 1 экв.). Полученную смесь перемешивали при 25°C в течение 72 часов с получением светло-красного раствора. ТСХ (ПЭ/EtOAc = 1/1) показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток растворили в EtOAc (50 мл). К раствору добавили насыщенный Na2CO3 (40 мл). Водную фазу экстрагировали EtOAc (20 мл). Объединенный органический слой промывали рассолом (15 мл х 2), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением 5,38 г (неочищенного) А40 в виде коричневого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A41
К раствору соединения А40 (5,38 г, 15,3 ммоль, 1 экв.) в ДХМ (90 мл) добавили ТФУК (46,2 г, 405 ммоль, 30 мл, 26,5 экв.). Полученную смесь перемешивали при 25°C в течение 16 часов с получением коричневой смеси. ТСХ (ПЭ/EtOAc = 1/1) показала, что по-прежнему остается небольшое количество исходного материала. ЖХ/МС (время удерживания = 0,665 минуты) показала наличие 83% желаемого соединения МС. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении. Остаток растворили в EtOAc (50 мл). К раствору добавили насыщенный Na2CO3 (100 мл). Водную фазу экстрагировали EtOAc (30 мл). Объединенный органический экстракт промывали рассолом (20 мл х 3), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили при помощи системы Combi flash (ПЭ/EtOAc = 1/1) с получением 1,98 г (выход: 48,4%) А41 в виде коричневого смолянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A42
К раствору A41 (520 мг, 1,95 ммоль, 1 экв.) и D1-1 (827 мг, 4,86 ммоль, 475 мкл, 2,5 экв.) в MeCN (10 мл) добавили K2CO3 (672 мг, 4,86 ммоль, 2,5 экв.) при 25°C, затем смесь перемешивали при 60°C в течение 16 часов с получением не чисто-белой суспензии. ТСХ (ПЭ/EtOAc = 1/1) показала два новых пятна. ЖХ/МС (время удерживания = 0,711 минуты) показала, что реакция завершилась. Смесь выпаривали в вакууме и остаток погасили водой (30 мл). Полученный раствор экстрагировали EtOAc (20 мл х 3). Объединенные органические слои промывали рассолом (10 мл х 2), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали в вакууме с получением остатка. Остаток очистили при помощи системы Combi flash (ПЭ/EtOAc = от 3/1 до 2/1 до 1/1) с получением 280 мг (выход: 46,5%) А42 в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A43
К раствору А42 (280 мг, 0,905 ммоль, 1 экв.) в MeOH (4 мл) добавили NaOH (3 М, 603 мкл, 2 экв.) в H2O (0,6 мл), смесь перемешивали при 20°C в течение 18 часов с получением бесцветной смеси. ТСХ (ПЭ/EtOAc = 1/1) показала новое пятно. ЖХ/МС (время удерживания = 0,518 минуты) показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток погасили добавлением H2O (10 мл) и экстрагировали EtOAc (20 мл). Затем к этой водной фазе добавляли 2 Н хлористоводородной кислоты для доведения pH до 1 водным раствором HCl. Водную фазу экстрагировали ДХМ (10 мл х 8). Объединенные органические слои промывали рассолом (10 мл х 3), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали в вакууме с получением 90 мг (неочищенного) А43 в виде светло-желтого твердого вещества. ЖХ/МС показала чистоту 81%. Водная фаза все еще содержала продукт ЖХ/МС. Затем к водной фазе добавили толуол (10 мл х 5). Водную фазу выпаривали при пониженном давлении с получением 130 мг (неочищенного, содержащего соль NaCl) А43 в виде белого твердого вещества. ЖХ/МС показала 98% желаемого значения МС.
Общая процедура для синтеза 34
К раствору А43 (130 мг, 0,457 ммоль, 3 экв.) и В1-1 (45 мг, 0,15 ммоль, 1 экв.) в пиридине (1,5 мл) добавили EDCI (44 мг, 0,23 ммоль, 1,5 экв.). Полученную смесь перемешивали при 20°C в течение 16 часов с получением желтой смеси. TLC (EtOAc) показала наличие нового пятна. ЖХ/МС показала наличие 4,9% МС желаемого соединения. Смесь перемешивали при 20°С в течение еще 8 часов. Затем добавили дополнительный EDCI (44 мг, 0,23 ммоль, 1,5 экв.). Смесь перемешивали при 20°С в течение 48 часов. ЖХ/МС (время удерживания = 0,773 минуты) показала наличие 7,2% МС желаемого соединения. Смесь распределили между ДХМ (50 мл) и водой (30 мл). Водную фазу экстрагировали ДХМ (20 мл х 3). Объединенные экстракты промывали насыщенным рассолом (10 мл х 2), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили при помощи препаративной ТСХ (ПЭ/EtOAc = 1/1) / (ДХМ/метанол = 10/1) = 1/1] с получением соединения 34 (3,7 мг, выход: 4,2%, чистота: 97,5%) в виде белого порошка.
Схема 11 - Общий синтез для соединения 35
Общая процедура для синтеза B3
Суспензию Na (2,66 г, 116 ммоль, 3 экв.) в MeOH (40 мл) перемешивали при 25°C в течение 30 минут. Затем к указанной выше смеси добавили B2 (10 г, 38,6 ммоль, 1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 80°C в течение 17 часов с получением желтой суспензии. ТСХ показала, что исходный материал не был израсходован полностью. Смесь охладили до комнатной температуры. Смесь довели до рН 1-2 добавлением водного раствора HCl (4 М), экстрагировали EtOAc (200 мл х 2). Объединенный экстракт промывали рассолом (200 мл х 2), высушивали над безводным Na2SO4 и отфильтровали, затем выпаривали при пониженном давлении с получением соединения В3 (8,3 г, выход: 79%) в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза B4
К раствору соединения В3 (7,1 г, 26,2 ммоль, 1 экв.) и дифенилметанимин (5,7 г, 31,4 ммоль, 1,2 экв.) в толуоле (150 мл) добавили Pd2(dba)3 (599 мг, 0,655 ммоль, 0,025 экв.), BINAP (1,22 г, 1,96 ммоль, 0,075 экв.) и трет-бутоксид натрия (3,52 г, 36,7 ммоль, 1,4 экв.) в атмосфере N2. Полученную смесь нагревали до 90°C и перемешивали в течение 12 часов с получением красного раствора. ТСХ показала, что образовался желаемый продукт. Реакционную смесь погасили добавлением H2O (150 мл) и экстрагировали EtOAc (150 мл x 2). Объединенные органические слои промывали рассолом (50 мл х 2), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили колоночной хроматографией (SiO2, ПЭ/EtOAc = 20:1) с получением 6 г неочищенного продукта, который измельчили с ПЭ/EtOAc = 40 мл/2 мл с получением 4,65 г соединения В4 в виде светло-желтого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза B5
Раствор В4 (5,4 г, 14,5 ммоль, 1 экв.) в HCl/MeOH (4 М) (20 мл) перемешивали при 20°C в течение 30 минут с получением белой суспензии. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Затем реакционную смесь разбавили H2O (50 мл) и подщелачивали насыщенным раствором NaHCO3 до рН = ~9, экстрагировали EtOAc (50 мл). Объединенные органические слои промывали рассолом (10 мл), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили колоночной хроматографией (SiO2, ПЭ/EtOAc = 3/1) с получением В5 (2,5 г, выход: 83%) в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза B6
Смесь 2,2-диметил-1,3-диоксан-4,6-диона (1,83 г, 12,7 ммоль, 1,05 экв.) и диэтоксиметоксиэтана (1,97 г, 13,3 ммоль, 1,1 экв.) нагрели до 50°C и перемешивали в течение 1,5 часов. Затем к смеси добавили раствор В5 (2,5 г, 12,1 ммоль, 1 экв.) в метаноле (10 мл). Смесь перемешивали при 50°C в течение 1 часа с получением желтой суспензии. Смесь охладили до комнатной температуры и добавили этанол (20 мл). Полученную смесь перемешивали при 0°С в течение 30 минут. Наблюдали появление белого порошка. Смесь отфильтровали. Осадок на фильтре промывали EtOH (20 мл) и высушивали в высоком вакууме с получением 1,3 г в виде белого твердого вещества. Однако ЖХ/МС и H-ЯМР показали, что полученное соединение не является желаемым продуктом. Фильтрат экстрагировали EtOAc (50 мл). Объединенные органические слои промывали рассолом (20 мл), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили с помощью капиллярной кварцевой колонки (ПЭ/EtOAc = 3/1) с получением соединения B6 (550 мг, неочищенного) в виде желтого твердого вещества. H-ЯМР показал смесь желаемого продукта и B5.
Общая процедура для синтеза B7
Раствор соединения B6 (550 мг, 1,00 ммоль, 1 экв.) в теплоносителе Dowtherm A (4 мл) нагрели до 210°C и перемешивали в течение 1 часа в атмосфере N2 с получением коричневого раствора. ТСХ показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь охладили до комнатной температуры и погасили добавлением H2O (20 мл) и экстрагировали EtOAc (20 мл x 2). Объединенные органические слои промывали рассолом (10 мл х 2), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили колоночной хроматографией (SiO2, ДХМ:метанол = 10:1) с получением соединения В7 (30 мг, выход: 11%, чистота: 98%) в виде желтого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза B8
К раствору В7 (30 мг, 0,116 ммоль, 1 экв.) и 1,2-дифтор-4-нитробензола (18,4 мг, 0,116 ммоль, 1 экв.) в ДМФА (1 мл) добавили Cs2CO3 (56,6 мг, 0,174 ммоль, 1,5 экв.). Полученную смесь нагрели до 40°C и перемешивали в течение 2 часов с получением красного раствора. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь погасили добавлением H2O (20 мл) и экстрагировали EtOAc (20 мл x 2). Объединенные органические слои промывали рассолом (10 мл х 2), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили при помощи препаративной ТСХ (ПЭ:EtOAc = 1:1) с получением соединения В8 (30 мг, выход: 65%) в виде желтого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза B1-2
К раствору В8 (30 мг, 0,075 ммоль, 1 экв.) в EtOH (5 мл) добавили Pd/C (влажный) в 50% воды (20 мг, чистота 10%) в атмосфере N2. Суспензию дегазировали в вакууме и несколько раз продули H2. Смесь перемешивали в атмосфере H2 (15 фунтов на кв. дюйм) при 20°C в течение 12 часов с получением черной суспензии. ЖХ/МС и ТСХ показали, что часть исходного материала остается и образовалось одно новое пятно. Реакционную смесь отфильтровали и фильтрат выпаривали. Остаток очистили при помощи препаративной ТСХ (ПЭ:EtOAc = 1:1) с получением В1-2 (20 мг, выход: 72%, чистота: 100%) в виде не чисто-белого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза A44
К суспензии А18 (1,43 г, 7,21 ммоль, 1 экв.), K2CO3 (2,49 г, 18 ммоль, 2,5 экв.) в MeCN (143 мл) добавили D1-1 (3,07 г, 18 ммоль, 2,5 мл) при 25°С. Реакционную смесь перемешивали при 60°C в течение 17 часов с получением желтой суспензии. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь обработали после объединения с пилотной реакционной смесью из 100 мг A18. Реакционную смесь распределили между EtOAc (200 мл) и H2O (200 мл). Органический слой промывали рассолом (200 мл х 2), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением черного маслянистого вещества. Неочищенный продукт очистили при помощи системы Combi flash (EtOAc:ПЭ = от 0:1 до 1:4) с получением А44 (0,8 г, выход: 43%, чистота: 95%) в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A45
К раствору А44 (0,8 г, 3,33 ммоль, 1 экв.) в MeOH (10 мл) добавили NaOH (400 мг, 9,99 ммоль, 3 экв.) в H2O (3 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°C в течение 1,5 часов с получением желтого раствора. ЖХ/МС показала, что исходный материал не был израсходован полностью. Реакционную смесь перемешивали при 25°C в течение 17 часов с получением желтого раствора. ЖХ/МС показала, что исходный материал был израсходован полностью. рН реакционной смеси довели до значения 4 и экстрагировали EtOAc (200 мл). Органический слой промывали рассолом (150 мл), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением А45 (710 мг, неочищенного) в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза 35
К раствору соединения В1-2 (20 мг, 1 экв.) и А45 (17,3 мг, 0,081 ммоль, 1,5 экв.) в пиридине (0,5 мл) добавили EDCI (15,6 мг, 0,081 ммоль, 1,5 экв.). Полученную смесь перемешивали при 20°C в течение 12 часов с получением желтого раствора. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили при помощи препаративной ВЭЖХ (колонка: Waters Xbridge 150 * 50*10 мкм, подвижная фаза: [вода (0,05% гидроксид аммиака по объему)- ACN]; B%: 55%-85%, 7,8 минуты), затем выпаривали и лиофилизировали с получением соединения 35 (11,8 мг, выход: 38%, чистота: 100%) в виде белого порошка.
Схема 12 - Общий путь синтеза для соединения 44
Общая процедура для синтеза A46
Смесь D1-6 (831,50 мг, 5,04 ммоль, 1,20 экв.), A6 (1,00 г, 4,20 ммоль, 1,00 экв.) и Cs2CO3 (2,74 г, 8,40 ммоль, 2,00 экв.) в диоксане (8,5 мл) нагрели до 80°C в течение 12 часов. ТСХ (петролейный эфир / этилацетат = 1/1, A6: коэффициент удерживания = 0,42, A46: коэффициент удерживания = 0,36) показала, что соединение A6 израсходовано. Смесь выпаривали и фильтрат выпаривали. Остаток очистили при помощи колоночной хроматографии (SiO2, петролейный эфир /этилацетат = от 3/1 до 1/1) (ТСХ: петролейный эфир / этилацетат = 1/1, A46: коэффициент удерживания = 0,36). Получили соединение А46 (0,82 г, 2,54 ммоль, выход 60,60%) в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A47
К раствору соединения A46 (0,82 г, 2,54 ммоль, 1,00 экв.) в MeOH (5,7 мл) добавили по капле раствор NaOH (305 мг, 7,63 ммоль, 3,00 экв.) в H2O (1,64 мл) при 15~25°С. Смесь перемешивали при 15~25°С в течение 5 часов. ТСХ (петролейный эфир / этилацетат = 1/1, A46: коэффициент удерживания = 0,34, A47: коэффициент удерживания = 0,01) показала, что соединение A46 израсходовано полностью. Смесь выпаривали. Значение pH остатка довели до 5 ~ 6 добавлением 4М HCl (15,0 мл). Смесь экстрагировали раствором ДХМ и изопропилового спирта (3/1, 20 мл х 4). Объединенные органические слои высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали. Получили соединение А47 (0,68 г, 2,31 ммоль, выход 90,83%) в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза 44
К раствору А47 (0,15 г, 510 мкмоль, 1,00 экв.) в пиридине (5 мл) добавили EDCI (147 мг, 765 мкмоль, 1,50 экв.) и перемешивали в течение 15 минут. Затем в смесь добавили В1-1 (155 мг, 520 мкмоль, 1,02 экв.). Смесь перемешивали при 25°С в течение 12 часов. ЖХ/МС (44: время удерживания = 0,84 мин) показала, что соединение A47 было полностью израсходовано, и был обнаружен один основной пик с желаемым отношением массы к заряду. ВЭЖХ (ET24988-44-P1A, соединение 44: время удерживания = 2,55 мин) показала, что обнаружен один основной пик. Смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили обращенно-фазовой ВЭЖХ (условия 0,1% HCl). Соединение 44 (0,08 г, 134 мкмоль, выход 26,3%, чистота 96,2%) получили в виде желтого твердого вещества.
Схема 13 - Общий синтез для соединения 120
Общая процедура для синтеза D1-8
К суспензии Mg (67,1 г, 2,76 моль, 10 экв.) и I2 (701 мг, 2,76 ммоль, 0,01 экв.) в ТГФ (350 мл) медленно добавили 1,2-дибромэтан (259 г, 1,38 моль, 5,0 экв.) в ТГФ (1 л) медленно с такой скоростью, чтобы поддерживать внутреннюю температуру в диапазоне 40-55°C. После добавления по каплям добавили раствор D1-7 (50 г, 276 ммоль, 1 экв.) в ТГФ (375 мл). Реакционную смесь выдерживали при температуре 40-55°С в течение 16 часов. ТСХ (петролейный эфир / этилацетат = 2/1, D1-8: коэффициент удерживания = 0,27) показала, что соединение D1-7 израсходовано полностью и образовалось много новых пятен. Реакцию погасили медленным добавлением насыщенного раствора NH4Cl (3 л) при 0°С. Смесь экстрагировали и водную фазу экстрагировали ДХМ / i-PrOH (об./об. = 10/1, 2,5 л и 1 л). Объединенные органические слои высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали. Остаток очистили при помощи колоночной хроматографии (SiO2, петролейный эфир/этилацетат = от 10/1 до 3/1). D1-8 (14 г, 137 ммоль, выход 49,6%) получили в виде желтого маслянистого вещества, которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Общая процедура для синтеза D1-9
К раствору соединения D1-8 (7 г, 68,5 ммоль, 1,0 экв.) и ТЭА (20,8 г, 206 ммоль, 3,0 экв.) в ДХМ (60 мл) добавили MsCl (15,7 г, 137,1 ммоль, 2,0 экв.) медленно каплями при 0°C в течение 0,5 часа. Смесь перемешивали в течение 3 часов при 25°С. ТСХ (петролейный эфир / этилацетат = 2/1, ФМА, D1-8: коэффициент удерживания = 0,27) показала, что соединение D1-8 израсходовано полностью. Реакционную смесь погасили добавлением водного раствора NH4Cl (5 мл), экстрагировали CH2Cl2 (30 мл, 15 мл). Органические слои объединили и высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали. Остаток очистили при помощи колоночной хроматографии (SiO2, петролейный эфир / этилацетат = от 20/1 до 1/1). D1-9 (11,5 г, неочищенный) получили в виде красного маслянистого вещества, которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Общая процедура для синтеза A48
К раствору D1-9 (21,3 г, 89,43 ммоль, 1,0 экв.) и Cs2CO3 (87,42 г, 268,30 ммоль, 3,0 экв.) в диоксане (150 мл) добавили А6 (20,95 г, 116,26 ммоль, 1,3 экв.) при 15°С. Смесь перемешивали при 40°С в течение 3 часов. ТСХ (петролейный эфир / этилацетат = 1/1, A47: коэффициент удерживания = 0,3) показала, что соединение D1-9 израсходовано полностью. В реакционную смесь добавили воду (5 мл) и экстрагировали EtOAc (5 мл). Остаток очистили при помощи колоночной хроматографии (SiO2, петролейный эфир / этилацетат = от 20/1 до 3/1). А48 (15,2 г, неочищенный) получили в виде красного маслянистого вещества, которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Общая процедура для синтеза A49
К раствору А48 (15,5 г, 48,1 ммоль, 1,0 экв.) в MeOH (30 мл) и H2O (30 мл) добавили LiOH·H2O (6,05 г, 144 ммоль, 3 экв.) при 15°С. Смесь перемешивали при 15°С в течение 3 часов. ТСХ (петролейный эфир / этилацетат = 1/1, A47: коэффициент удерживания = 0,3) показала, что соединение A47 израсходовано полностью. Реакционную смесь выпаривали для удаления метанола. Значение pH довели 2~3 добавлением раствора HCl (1 M, 18 мл). Смесь экстрагировали ДХМ (100 мл). Органическую фазу высушивали над Na2SO4. Смесь выпаривали и фильтрат выпаривали с получением продукта. А49 (14 г, 47,6 ммоль, выход 98,9%) получили в виде светло-красного твердого вещества, которое использовали на следующем этапе без дополнительной очистки.
Общая процедура для синтеза 120
К раствору А49 (200 мг, 679 мкмоль, 1 экв.) в ДХМ (2 мл) добавили В1-3 (243 мг, 815 мкмоль, 1,2 экв.) и диизопропилэтиламин (175 мг, 1,36 ммоль, 2,0 экв.) при 25°С. К смеси добавили T3P (648 мг, 1,02 ммоль, чистота 50% в растворе EtOAc, 1,5 экв.) при 15°C. Смесь перемешивали при 25°С в течение 16 часов. ЖХ/МС (120: время удерживания = 1,01 мин) показала, что обнаружено 12,9% соединения 120. Смесь промывали водой (2 мл). Органическую фазу выпаривали с получением остатка. Остаток очистили при помощи препаративной ВЭЖХ (колонка: Waters Xbridge Prep OBD C18 150*40 мм*10 мкм, подвижная фаза: [вода (10 мМ NH4HCO3) -ACN]; B%: 30%-50%, 8 минут). Соединение 120 (40 мг, 68,7 мкмоль, выход 10,1%, чистота 98,6%) получили в виде не чисто-белого твердого вещества.
Схема 14 - Общий синтеза для соединения 115
Общая процедура для синтеза B10
Смесь B9 (500 мг, 2,24 ммоль, 1 экв.) и 3-фтор-4-нитрофенола (703 мг, 4,47 ммоль, 2 экв.) в хлорбензоле (10 мл) перемешивали при 131°C в течение 12 часов с получением не чисто-белой суспензии. ЖХ/МС (время удерживания = 1,045-1,107 минуты) показала наличие ~25% 545-1 и ~75% желаемого значения МС. Реакционную смесь отфильтровали, осадок фильтрата промывали толуолом (10 мл) и высушивали в вакууме с получением неочищенного соединения. Неочищенное соединение подщелачивали 10% водным раствором NaOH и суспензию перемешивали в течение 1 часа при комнатной температуре. Смесь отфильтровали, осадок на фильтре высушивали в высоком вакууме с получением соединения B10 (300 мг, выход 37,6%, чистота 96,5%) в виде желтого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза B1-4
К смеси В10 (300 мг, 0,871 ммоль, 1 экв.) и NH4Cl (466 мг, 8,71 ммоль, 10 экв.) в EtOH (10 мл) добавили Zn (570 мг, 8,71 ммоль, 10 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 20°C в течение 12 часов с получением черной смеси. ЖХ/МС (время удерживания = 0,997 минуты) показала, что реакция завершилась. Смесь отфильтровали и фильтрат выпаривали при пониженном давлении с получением соединения В1-4 (270 мг, выход 99%) в виде желтого твердого вещества. Неочищенный продукт использовали для следующего этапа без дополнительной очистки.
Общая процедура для синтеза 115
К раствору соединения А49 (1,00 экв.) и В1-4 (1,02 экв.) в пиридине (5 об.) добавили EDCI (1,50 экв.) при 15~25°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 15~25°С в течение 12 часов в атмосфере N2. ЖХ/МС показала, что соединение A49 было полностью израсходовано, и был обнаружен один основной пик с желаемым отношением массы к заряду. Смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Неочищенный продукт очистили при помощи обращенно-фазовой ВЭЖХ. Соединение 115 (128 мг, выход 60,7%, чистота 95,6%) получили в виде белого твердого вещества.
Схема 15 - Общий синтез для соединения 53
Общая процедура для синтеза A50
Смесь соединения А6 (3,00 г, 12,6 ммоль, 1,00 экв.), D1-10 (2,78 г, 15,1 ммоль, 1,74 мл, 1,20 экв.) и Cs2CO3 (8,21 г, 25,2 ммоль, 2,00 экв.) в диоксане (45 мл) нагревали до 30°C в течение 60 часов. ЖХ/МС (A49: время удерживания = 1,16 мин) показала, что соединение A6 было полностью израсходовано и было обнаружено желаемое значение МС. Смесь отфильтровали и фильтрат выпаривали. Остаток очистили при помощи колоночной хроматографии (SiO2, петролейный эфир /этилацетат = от 3/1 до 1/1) (ТСХ: петролейный эфир / этилацетат = 1/1, A49: коэффициент удерживания = 0,50). Получили соединение А50 (2,5 г, 8,50 ммоль, выход 67,4%) в виде желтого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза A51
К раствору А49 (2,5 г, 8,50 ммоль, 1 экв.) в MeOH (17,5 мл) и H2O (5 мл) добавили NaOH (1,02 г, 25,5 ммоль, 3 экв.). Смесь перемешивали при температуре 25°С в течение 4 часов. ТСХ (петролейный эфир / этилацетат = 3/1, A49: коэффициент удерживания = 0,30, A50: коэффициент удерживания = 0,00) показала, что А49 израсходован полностью и было обнаружено одно крупное новое пятно с большей полярностью. К реакционной смеси добавили этилацетат (20 мл) и H2O (10 мл) и перемешивали при 15~25°C в течение 10 минут. Смесь разделили. Значение pH водного слоя довели до 5~6 добавлением 4М HCl (10,0 мл). Смесь экстрагировали раствором ДХМ и изопропилового спирта (3/1, 30 мл х 4). Объединенные органические слои высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали. Получили соединение А51 (2 г, 7,51 ммоль, выход 88,4%) в виде светло-желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза B12
К раствору В11 (1 г, 4,87 ммоль, 1 экв.) и 1,2-дифтор-4-нитробензола (1,55 г, 9,75 ммоль, 1,08 мл, 2 экв.) в ДМСО (10 мл) добавили Cs2CO3 (3,18 г, 9,75 ммоль, 2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 12 часов с получением коричневой смеси. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Смесь оставили остыть до 20°С, разбавили EtOAc (100 мл), промывали водой (50 мл х 3) и рассолом (80 мл), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного соединения. Неочищенное соединение очистили флэш-хроматографией на силикагеле (ISCO®; 20 г колонка для отгона легких фракций SepaFlash® Silica Flash, элюент 10% ~ 50% ~ 100% градиент этилацетата / петролейного эфира при 30 мл/мин) с получением B12 (1 г, выход 59%, чистота 98,9%) в виде желтого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза B1-5
К раствору соединения В12 (1 г, 2,90 ммоль, 1 экв.) в MeOH (20 мл) добавили Pd/C (200 мг, чистота 10%, 50% H2O) в атмосфере N2. Суспензию дегазировали в вакууме и два раза продули H2. Смесь перемешивали в атмосфере H2 (15 фунтов на кв. дюйм) при температуре 20°C в течение 12 часов с получением черной смеси. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Смесь отфильтровали и фильтрат выпаривали при пониженном давлении с получением соединения В1-5 (560 мг, выход 61,3%) в виде не чисто-белого твердого вещества. Продукт использовали для следующего этапа без дополнительной очистки.
Общая процедура для синтеза 53
К раствору соединения А50 (1,00 экв.) и В1-5 (1,02 экв.) в пиридине (7 об.) добавили EDCI (1,50 экв.) при 15~25°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 15~25°С в течение 12 часов в атмосфере N2. ЖХ/МС показала, что соединение A51 было полностью израсходовано и был обнаружен один основной пик с желаемым отношением массы к заряду. Смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Неочищенный продукт очистили при помощи обращенно-фазовой ВЭЖХ. Соединение 53 (199 мг, выход 61,7%, чистота 98,3%) получили в виде желтого твердого вещества.
Схема 16 - Общий путь синтеза для соединения 58
Общая процедура для синтеза B13
К смеси В11 (500 мг, 2,44 ммоль, 1 экв.) и 1-фтор-2-метил-4-нитробензола (756 мг, 4,87 ммоль, 2 экв.) в ДМСО (5 мл) добавили Cs2CO3 (1,59 г, 4,87 ммоль, 2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 12 часов с получением черной смеси. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Смесь разбавили EtOAc (100 мл), промывали водой (30 мл х 3) и рассолом (30 мл), выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного соединения. Неочищенное соединение очищали флэш-хроматографией на силикагеле (ISCO®; 12 г, колонка для отгона легких фракций SepaFlash® Silica Flash, элюент 5% ~ 70% градиент этилацетата / петролейного эфира при 30 мл/мин) с получением B13 (190 мг, выход 22,4%, чистота 98%) в виде желтого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза B1-6
К смеси В13 (190 мг, 558,28 мкмоль, 1 экв.) в MeOH (10 мл) добавили Pd/C (38 мг, чистота 10%, 50% H2O) в атмосфере N2. Суспензию дегазировали в вакууме и два раза продували H2. Смесь перемешивали в атмосфере H2 (15 фунтов на кв. дюйм) при 20°C в течение 12 часов с получением черной смеси. ЖХ/МС (время удерживания = 0,670 минуты) показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь отфильтровали и фильтрат выпаривали при пониженном давлении с получением соединения В1-6 (150 мг, неочищенного) в виде желтого маслянистого вещества. Неочищенное соединение использовали для следующего этапа без дополнительной очистки.
Общая процедура для синтеза 58
К раствору соединения А51 (1,00 экв.) и В1-6 (1,02 экв.) в пиридине (7 об.) добавили EDCI (1,50 экв.) при 15~25°С в атмосфере N2. Смесь перемешивали при 15~25°С в течение 12 часов в атмосфере N2. ЖХ/МС показала, что соединение A51 было полностью израсходовано и был обнаружен один основной пик с желаемым отношением массы к заряду. Смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Неочищенный продукт очистили при помощи обращенно-фазовой ВЭЖХ. Соединение 58 (168 мг, выход 52,4%, чистота 98,2%) получили в виде белого твердого вещества.
Схема 17 - Общий синтез для соединения 176
Общая процедура для синтеза A53
К этанолу (25 мл) добавили Na (339,38 мг, 14,76 ммоль, 349,88 мкл, 1,1 экв.), после исчезновения Na в указанную выше смесь добавили диэтилпропандиоат (3,01 г, 18,79 ммоль, 2,84 мл, 1,4 экв.) и смесь перемешивали при 100°C в течение 30 минут. К реакционной смеси добавили раствор A52 (2,00 г, 13,42 ммоль, 1,50 мл, 1 экв.) в этаноле (10 мл) по каплям в течение 10 минут, затем смесь перемешивали в течение 17 часов. ТСХ показала, что было обнаружено одно крупное новое пятно с более низкой полярностью. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя. Остаток разбавили водой (50 мл) и экстрагировали EtOAc (50 мл * 2). Объединенные органические слои промывали HCl (1N) (25 мл * 2), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили при помощи флэш-хроматографии на силикагеле (элюент 0~20% градиент этилацетата/ петролейного эфира) с получением 2,6 г (выход: 84,87%) А53 в виде бесцветного маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A54
К раствору А53 (2,6 г, 11,39 ммоль, 1 экв.) в H2O (10 мл) и EtOH (10 мл) добавили KOH (2,56 г, 45,56 ммоль, 4 экв.) и смесь перемешивали при 15°С в течение 1,5 часов. ТСХ показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении для удаления растворителя. Остаток разбавили водой (20 мл) и довели рН до 3~5 добавлением HCl (1N), затем экстрагировали EtOAc (20 мл * 3). Объединенные органические слои промывали водным раствором NaCl (20 мл * 3), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением 1,7 г (выход: 86,69%) А54 в виде белого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза A55
Раствор А54 (1,7 г, 9,87 ммоль, 1 экв.) в НМП (2 мл) перемешивали при 110°C в течение 2 часов. ТСХ показала, что материал остается и было обнаружено одно крупное новое пятно с более низкой полярностью. Затем смесь нагревали до 120°C в течение 17 часов, и ТСХ показала, что материал все еще остается. Реакционную смесь разбавили водой (30 мл) и экстрагировали EtOAc (30 мл * 2). Объединенные органические слои промывали водным раствором NaCl (30 мл * 2), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением 1,01 г (выход: 79,81%) А55 в виде белого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза A56
К раствору А55 (1,01 г, 7,88 ммоль, 1 экв.) и 2,2-диметил-1,3-диозан-4,6-диона (1,25 г, 8,67 ммоль, 1,1 экв.) в ДХМ (15 мл) добавили ДМАП (1,44 г, 11,82 ммоль, 1,5 экв.), после охлаждения смеси до 0°C добавили EDCI (2,11 г, 11,03 ммоль, 1,4 экв.). Смесь перемешивали при температуре 15°С в течение 17 часов. ТСХ показала, что реакция завершилась и было обнаружено одно крупное новое пятно с более низкой полярностью. Смесь обработали 50 мл воды и экстрагировали EtOAc (50 мл x 2). Объединенный органический слой промывали 1N NaCl (20 мл х 2), высушивали над сульфатом магния и выпаривали при пониженном давлении с получением 1,9 г (выход: 94,82%) А56 в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A57
Раствор А56 (1,9 г, 7,47 ммоль, 1 экв.) в этаноле (40 мл) перемешивали при 80°C в течение 4 часов. ТСХ показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении с получением 1,47 г (выход: 99,23%) А57 в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A58
Раствор NaNO2 (767,36 мг, 11,12 ммоль, 1,5 экв.) в H2O (12 мл) добавили по капле в раствор А57 (1,47 г, 7,41 ммоль, 1 экв.) в CH3COOH (4 мл) и H2O (12 мл) при температуре 0°С. Реакционную смесь перемешивали при температуре 0°С в течение 2 часов и затем при 15°С в течение 2,5 часов. Затем в смесь добавили воду (10 мл) и смесь перемешивали в течение 17 часов. ТСХ показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь разбавили водой (10 мл) и экстрагировали EtOAc (30 мл * 2). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 (15 мл * 2), рассолом (15 мл * 2), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением 1,42 г (выход: 84,27%) А58 в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A59
К раствору соединения А58 (3,1 г, 13,64 ммоль, 1 экв.) в EtOH (50 мл) добавили влажный Pd/C (0,4 г) и концентрированный HCl (227,82 мг, 6,25 ммоль, 223,38 мкл). Суспензию дегазировали и 3 раза продули H2. Смесь перемешивали в атмосфере H2 (15 фунтов на кв. дюйм) при 40°C в течение 17 часов. ТСХ показала, что реакция завершилась. Суспензию отфильтровали через целитовую прокладку и прокладку промывали EtOH (10 мл х 3). Объединенные фильтраты выпаривали досуха с получением 3,3 г (выход: 96,87%, HCl) А59 в виде белого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза A60
К раствору А59 (1,00 г, 4,00 ммоль, 1 экв., HCl) в ДХМ (5 мл) добавили ТЭА (1,22 г, 12,01 ммоль, 1,67 мл, 3 экв.) и затем 4,4,4-трифторбутаноилхлорид (1,29 г, 8,01 ммоль, 2 экв.) каплями при температуре 0°C. После добавления смесь перемешивали при 20°C в течение 1 часа с получением желтой смеси. ТСХ показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь разбавили водой (50 мл) и экстрагировали EtOAc (50 мл * 2). Объединенные органические слои промывали насыщенным водным раствором NaHCO3 (20 мл * 2), NaCl (20 мл * 2), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили при помощи флэш-хроматографии на силикагеле (элюент 0~20% этилацетат/ петролейный эфир) с получением 0,32 г (выход: 23,69%) А60 в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A61
К раствору A60 (0,32 г, 948,62 мкмоль, 1 экв.) в ДХМ (10 мл) добавили PPh3 (497,62 мг, 1,90 ммоль, 2 экв.), I2 (481,53 мг, 1,90 ммоль, 382,17 мкл, 2 экв.) и ТЭА (383,96 мг, 3,79 ммоль, 528,15 мкл, 4 экв.). Смесь перемешивали при температуре 20°С в течение 2 часов. ТСХ показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь разбавили водой (20 мл) и экстрагировали EtOAc (10 мл * 3). Объединенные органические слои промывали водным раствором NaCl (10 мл * 3), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили при помощи флэш-хроматографии на силикагеле (колонка для отгона легких фракций с силикагелем, элюент 0~20% градиента этилацетата/петролейного эфира) с получением 0,22 г (выход: 72,63%) А61 в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A62
К раствору соединения А61 (0,29 г, 908,18 мкмоль, 1 экв.) в ТГФ (8 мл) и H2O (2 мл) добавили LiOH⋅H2O (57,17 мг, 1,36 ммоль, 1,5 экв.) и смесь перемешивали при 20°C в течение 17 часов с получением желтой смеси. Затем смесь перемешивали при температуре 50°С в течение еще 6 часов. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Остаток разбавили водой (20 мл), затем лиофилизировали с получением 0,325 г (неочищенного) A62 в виде белого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза 176
К раствору соединения А62 (0,15 г, неочищенного) в пиридине (2 мл) добавили В1-1 (153,11 мг, 514,99 мкмоль, 1 экв.) и EDCI (148,09 мг, 772,49 мкмоль, 1,5 экв.). Смесь перемешивали при 15°C в течение 17 часов с получением желтой смеси. ЖХ/МС показала, что было обнаружено 7% желаемого продукта. Реакционную смесь разбавили водой (30 мл) и экстрагировали EtOAc (10 мл * 3). Объединенные органические слои промывали водным раствором NaCl (10 мл * 3), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили при помощи препаративной ТСХ (ДХМ:MeOH = 20:1) с получением 5 мг (выход: 1,46%) соединения 176 в виде белого твердого вещества.
Схема 18 - Общий синтез для соединения 178
Общая процедура для синтеза A64
К смеси А63 (2 г, 9,17 ммоль, 1 экв.) в ДМФА (20 мл) добавили Cs2CO3 (7,47 г, 22,9 ммоль, 2,5 экв.) и 2,2,2-трифторэтил-трифторметансульфонат (4,26 г, 18,3 ммоль, 2 экв.) при 0°C, смесь перемешивали при 15°C в течение 1 часа с получением смеси светлого цвета. ЖХ/МС показала, что наблюдается желаемый продукт. Смесь влили в ледяную воду (30 мл). Водную фазу экстрагировали этилацетатом (20 мл х 3). Объединенные органические слои промывали рассолом (50 мл х 5), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали в вакууме с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очистили с помощью системы Combi flash (ПЭ/EtOAc = от 1/0 до 3/1) с получением соединения А63 (1,49 г, выход: 42,5%) в виде белого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза A65
К смеси соединения А64 (1,49 г, 3,90 ммоль, 1 экв.) и D1-3 (1,00 г, 11,70 ммоль, 3 экв.) в H2O (2 мл) и толуоле (20 мл) добавили K3PO4 (2,07 г, 9,75 ммоль, 2,5 экв.), PCy3 (109 мг, 390 мкмоль, 126 мкл, 0,1 экв.) и Pd(OAc)2 (87,5 мг, 390 мкмоль, 0,1 экв.), и смесь перемешивали при 80°C в атмосфере N2 в течение 5 часов с получением желтой смеси. ЖХ/МС показала, что наблюдается желаемый продукт. Смесь распределили между EtOAc (15 мл) и водой (10 мл). Водную фазу экстрагировали EtOAc (10 мл х 2). Объединенный органический экстракт промывали рассолом (10 мл), высушивали над Na2SO4, отфильтровали, выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очистили при помощи системы Combi flash (ПЭ/EtOAc = от 1/0 до 5/1 и до 3/1) с получением А65 (150 мг, выход: 11,2%) в виде желтого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза A66
К смеси соединения А65 (150 мг, 437 мкмоль, 1 экв.) в ТГФ (2 мл) и H2O (1 мл) добавили LiOH⋅H2O (36,6 мг, 874 мкмоль, 2 экв.) и смесь перемешивали при 15°C в течение 1 часа с получением желтой смеси. ЖХ/МС показала, что реагент был израсходован. Смесь подкислили 1N HCl до рН = 4-5 и затем распределили между ДХМ (15 мл) и водой (10 мл). Водную фазу экстрагировали ДХМ (10 мл х 2). Объединенный органический экстракт промывали рассолом (10 мл), высушивали над Na2SO4, отфильтровали, выпаривали при пониженном давлении с получением А66 (70 мг, выход: 61,3%) в виде желтого смолянистого вещества.
Общая процедура для синтеза 178
К смеси соединения А66 (70 мг, 268 мкмоль, 1 экв.) и В1-1 (71,7 мг, 241 мкмоль, 0,9 экв.) в пиридине (2 мл) добавили EDCI (102 мг, 535 мкмоль, 2 экв.) и смесь перемешивали при 15°C в течение 16 часов с получением желтой смеси. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Смесь выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очистили препаративной ВЭЖХ (Waters Xbridge BEH C18 100 * 25 мм * 5 мкм; подвижная фаза: [вода (0,05% гидроксид аммиака по объему)-ACN];B%: 45%-75%, 9,5 минуты) с получением соединения 178 (35,1 мг, выход 24,2%) в виде белого порошка.
Схема 19 - Общий синтез для соединения 179
Общая процедура для синтеза A68
К суспензии А67 (4 г, 25,3 ммоль, 1 экв.) и 2,2,3-трифторэтил-трифтометансульфоната (6,46 г, 27,8 ммоль, 1,1 экв.) в ДМФА (30 мл) добавили Cs2CO3 (12,4 г, 37,9 ммоль, 1,5 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 60-70°C в течение 16 часов с получением светло-желтой суспензии. ТСХ показала, что реакция завершилась. Смесь распределили между водой (100 мл) и EtOAc (100 мл). Органический слой промывали рассолом (100 мл х 3), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением А68 (6,1 г, неочищенного) в виде белого порошка.
Общая процедура для синтеза A69
К раствору соединения А68 (1 г, 4,16 ммоль, 1 экв.) в ТГФ (5 мл) добавили диизопропиламид лития (2 М, 2,29 мл, 1,1 экв.) при -78°С в атмосфере N2. Реакционную смесь перемешивали в течение 5 минут и добавили раствор I2 (1,16 г, 4,58 ммоль, 1,1 экв.) в ТГФ (5 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение еще 30 минут при -78°C, затем нагрели до 20°C и выдержали в течение 17 часов с получением желтой смеси. ЖХ/МС показала, что большая часть исходного материала по-прежнему остается. Смесь погасили водой (5 мл) и добавили 1N HCl (1 мл). Смесь распределили между EtOAc (80 мл) и H2O (80 мл). Органический слой промывали насыщенным рассолом (80 мл х 3), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили при помощи системы Combi flash (ПЭ/EtOAc = от 1/0 до 10/1) с получением А69 (70 мг, выход: 4,6%) в виде желтого смолянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A70
К раствору А69 (170 мг, 0,464 ммоль, 1 экв.) в ТГФ (3 мл) добавили LiOH (22 мг, 0,928 ммоль, 2 экв.) в H2O (1 мл). Реакционную смесь перемешивали при 20°C в течение 1,5 часов с получением желтой смеси. ЖХ/МС показала, что исходный материал не был израсходован полностью. Добавили LiOH (20 мг). Реакционную смесь перемешивали при 20°C в течение 17 часов с получением желтой смеси. ЖХ/МС показала, что исходный материал не был израсходован полностью. Добавили LiOH (20 мг). Реакционную смесь перемешивали при 40°C в течение 5 часов с получением желтой смеси. ТСХ показала, что реакция завершилась. Смесь довели до рН = 4 добавлением 1N HCl при 0-10°С, экстрагировали ДХМ (30 мл х 3). Объединенный органический слой высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением А70 (130 мг, выход: 79,5%) в виде желтого смолянистого вещества.
Общая процедура для синтеза C3
К смеси А70 (120 мг, 0,341 ммоль, 1 экв.) и В1-1 (101 мг, 0,341 ммоль, 1 экв.) в пиридине (2 мл) добавили EDCI (131 мг, 0,682 ммоль, 2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 20°C в течение 17 часов с получением желтой смеси. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток распределили между EtOAc (20 мл) и H2O (20 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (20 мл х 2). Объединенный органический слой промывали рассолом (30 мл), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением желтого смолянистого вещества. Неочищенный продукт очистили при помощи препаративной ТСХ (EtOAc/ПЭ = 1/3, затем ДХМ/метанол = 30:1] с получением С3 (150 мг, выход: 69,7%, чистота: 100%) в виде не чисто-белого порошка.
Общая процедура для синтеза 179
К смеси С3 (130 мг, 0,206 ммоль, 1 экв.), D1-3 (28 мг, 0,329 ммоль, 1,6 экв.), P(cy)3 (8 мг, 0,021 ммоль, 0,1 экв.) и K3PO4 (153 мг, 0,721 ммоль, 3,5 экв.) в толуоле (2 мл) и H2O (0,2 мл) добавили Pd(OAc)2 (5 мг, 0,021 ммоль, 0,1 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 2 часов в атмосфере N2 с получением желтой смеси. ЖХ/МС показала, что исходный материал не был израсходован полностью. Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 2 часов в атмосфере N2 с получением желтой смеси. ЖХ/МС показала, что исходный материал не был израсходован полностью. В реакционную смесь добавили циклопропилбороновую кислоту (30 мг) и K3PO4 (150 мг). Реакционную смесь перемешивали при 100°C в течение 1 часа в атмосфере N2 с получением желтой смеси. ЖХ/МС показала, что исходный материал не был израсходован полностью. Смесь распределили между EtOAc (30 мл) и H2O (30 мл). Водный слой экстрагировали EtOAc (20 мл х 2). Объединенный органический слой промывали рассолом (20 мл), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Неочищенный продукт очистили при помощи препаративной ТСХ (ДХМ/метанол = 40/1) с получением желтого смолянистого вещества. ЖХ/МС показала наличие примесей. Желтое смолянистое вещество очистили при помощи препаративной ВЭЖХ (колонка: Waters Xbridge C18 150*50мм* 10 мкм, подвижная фаза: [вода (0,04%NH3H2O+10 мМ NH4HCO3)-ACN]; B%: 50%-80%, 11 минут). ЖХ/МС показала наличие примесей. Элюент выпаривали при пониженном давлении с получением желтого маслянистого вещества. Маслянистое вещество очистили при помощи препаративной ТСХ (EtOAc/ПЭ = 1/2) с получением желтого смолянистого вещества. ЖХ/МС показала наличие примесей. Желтое смолянистое вещество очистили при помощи препаративной ВЭЖХ (колонка: Welch Xtimate C18 100*25мм*3 мкм; подвижная фаза: [вода (0,05% гидроксид аммиака по объему)-ACN];B%: 64%-64%, 12 минут). Элюент выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток разделили между MeCN (5 мл) и H2O (5 мл) и лиофилизировали с получением соединения 179 (12,2 мг, выход 10,9%, чистота 100%) в виде белого порошка.
Схема 20 - Общий механизм синтеза II
Общая процедура для синтеза A71
К раствору соединения А6 (10 г, 42,0 ммоль, 1 экв.) и 3,4-дигидро-2H-пирана (10,6 г, 126 ммоль, 11,5 мл, 3 экв.) в ТГФ (100 мл) добавили п-толуолсульфоновую кислоту (723 мг, 4,20 ммоль, 0,1 экв.). Полученную смесь перемешивали при 80°C в течение 3 часов с получением желтого раствора. ТСХ (ПЭ:EtOAc = 3:1) показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Реакционную смесь затем разбавили H2O (100 мл) и экстрагировали EtOAc (100 мл x 2). Объединенные органические слои промывали рассолом (60 мл х 2), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили с помощью колоночной хроматографии (SiO2, петролейный эфир:EtOAc = 3:1) с получением соединения А71 (13 г, выход: 94,6%, чистота: 98,5%) в виде желтого маслянистого вещества.
Общая процедура для синтеза A72
К раствору А71 (13 г, 40,3 ммоль, 1 экв.) в MeOH (60 мл) и ТГФ (60 мл) добавили NaOH (3 М, 40,3 мл, 3 экв.). Полученную смесь нагрели до 60°C и перемешивали в течение 1 часа с получением красного раствора. ЖХ/МС показала, что реакция завершилась. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Реакционную смесь разбавили H2O (50 мл) и экстрагировали EtOAc (100 мл x 2). рН водных слоев довели до ~5 и экстрагировали ДХМ (100 мл х 2), промывали рассолом (30 мл х 2), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением А72 (9,9 г, выход: 83,4%, чистота 100%) в виде желтого твердого вещества.
Общая процедура для синтеза C4
К смеси соединения А72 (8,28 г, 28,2 ммоль, 1,5 экв.), соединения В1-1 (5,58 г, 18,8 ммоль, 1 экв.) в пиридине (15 мл) добавили EDCI (7,20 г, 37,5 ммоль, 2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 20°C в течение 17 часов с получением желтой смеси. ЖХ/МС показала, что исходный материал не был израсходован полностью. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток распределили между EtOAc (200 мл) и H2O (200 мл). Органический слой промывали H2O (200 мл х 2), рассолом (200 мл), высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением желтого смолянистого вещества. Неочищенный продукт очистили при помощи системы Combi flash (EtOAc/ПЭ = от 0/1 до 7/2) с получением С4 (6,29 г, выход: 57%, чистота: 98%) в виде желтого смолянистого вещества.
Общая процедура для синтеза 16
К раствору соединения С4 (6,29 г, 11 ммоль, 1 экв.) в ДХМ (20 мл) добавили ТФУК (10 мл, 135 ммоль, 12,3 экв.) при 0°С. Реакционную смесь перемешивали при 20°C в течение 17 часов с получением желтого раствора. ЖХ/МС показала, что исходный материал не был израсходован полностью. Смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток растворили в ТГФ (20 мл). Добавили HCl (2 М, 11 мл, 2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 20°C в течение 2 часов с получением желтого раствора. ЖХ/МС показала, что исходный материал не был израсходован полностью. Добавили HCl (2 М, 11 мл, 2 экв.). Реакционную смесь перемешивали при 20°C в течение 2 часов с получением желтого раствора. ТСХ показала, что исходный материал не был израсходован полностью. Добавили ТГФ (25 мл) и HCl (2 М, 25 мл). Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 17 часов с получением желтого раствора. ЖХ/МС показала, что исходный материал не был израсходован полностью. Реакционную смесь перемешивали при 55°C в течение 1,5 часов с получением желтого раствора. ЖХ/МС показала, что исходный материал не был израсходован полностью. После фильтрации осадок на фильтре промывали H2O (10 мл x 2) и разделили между NaHCO3 (300 мл), ДХМ (300 мл), MeOH (50 мл). Водный слой экстрагировали ДХМ (300 мл). Объединенные органические слои высушивали над безводным Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением желтого порошка. Неочищенный продукт измельчили с EtOAc/ПЭ (1/1, 40мл) с получением соединения 16 (4,26 г, выход: 79%, чистота: 100%) в виде белого порошка.
Общая процедура для синтеза C2
Способ получения соединений по C2 показан на схеме 8. Реакцию соединения 16 и D1 проводят в присутствии Cs2CO3 в таком растворителе, как ДМФ или ацетонитрил, с получением C2. Кроме того, многие из алкильных реагентов D1 коммерчески доступны.
Схема 21 - Общий синтез для соединения 29
К раствору соединения 16 (20 мг, 0,409 ммоль, 1 экв.) и D1-11 (2,37 мг, 0,409 ммоль, 2,86 мкл, 1 экв.) в CH3CN (2 мл) добавили Cs2CO3 (20 мг, 0,613 ммоль, 1,5 экв.). Полученную смесь перемешивали при 20°C в течение 16 часов с получением желтого раствора. ТСХ (ПЭ:EtOAc = 0:1) показала, что остается небольшое количество исходного материала и образовался желаемый продукт. Реакционную смесь погасили добавлением H2O (5 мл) и экстрагировали EtOAc (5 мл). Объединенные органические слои промывали рассолом (3 мл), высушивали над Na2SO4, отфильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очистили ТСХ (ПЭ:EtOAc = 0:1), затем растворили в CH3CN (1 мл) и H2O (1 мл), лиофилизировали с получением соединения 29 (14 мг, выход 62,6%, 100% чистота) в виде белого порошка.
Список литературы
The Role of TAM Family Receptors in Immune Cell Function: Implications for Cancer Therapy. Paolino M, Penninger JM., Cancers (Basel). 2016 Oct 21;8(10). pii: E97.
Diversification of TAM receptor tyrosine kinase function. Zagórska A, Través PG, Lew ED, Dransfield I, Lemke G., Nat Immunol. 2014 Oct;15(10):920-8.
TAM receptor tyrosine kinases as emerging targets of innate immune checkpoint blockade for cancer therapy. Akalu YT, Rothlin CV, Ghosh S., Immunol Rev. 2017 Mar;276(1):165-177.
Ligand Activation of TAM Family Receptors-Implications for Tumor Biology and Therapeutic Response. Davra V, Kimani SG, Calianese D, Birge RB., Cancers (Basel). 2016 Nov 29;8(12). pii: E107.
Development of monocytes, macrophages, and dendritic cells. Geissmann F, Manz MG, Jung S, Sieweke MH, Merad M, Ley K., Science. 2010 Feb 5;327(5966):656-61.
CSF1/CSF1R blockade reprograms tumor-infiltrating macrophages and improves response to T-cell checkpoint immunotherapy in pancreatic cancer models. Zhu Y, Knolhoff BL, Meyer MA, Nywening TM, West BL, Luo J, Wang-Gillam A, Goedegebuure SP, Linehan DC, DeNardo DG., Cancer Res. 2014 Sep 15;74(18):5057-69.
Далее изобретение дополнительно на примерах описано при помощи таблиц 1-7, в которых приведены данные об активности выбранных соединений в анализах связывания примера 1-2 (таблицы 1-2), в клеточных иммуносорбентных ферментных анализах примеров 3-4 (таблицы 3 и 4), в анализах жизнеспособности клеток примеров 4 и 5 (таблицы 5 и 6) и данных сравнения примеров 6-7, таблицы 7, примера 8 и фигур 1 и 2; структура соединений 1-179, включая данные 1H -ЯМР, показана в таблице 8.
Таблица 1. Активность связывания киназы Axl, Mer и CSF1R (продолжение)
Таблица 1. Активность связывания киназы Axl, Mer и CSF1R (продолжение)
Таблица 1. Активность связывания киназы Axl, Mer и CSF1R (продолжение)
Таблица 1. Активность связывания киназы Axl, Mer и CSF1R (продолжение)
Таблица 2. Активность связывания киназы CSF1R (%, 0,1 мкМ)
C обозн. < 50 %
C обозн. < 50 %
C обозн. < 50 %
Таблица 3. Клеточная активность Axl по данным H1299 Elisa
C обозн. ≥1 мкM
C обозн. ≥1 мкM
C обозн. ≥1 мкM
C обозн. ≥1 мкM
C обозн. ≥1 мкM
C обозн. ≥1 мкM
C обозн. ≥10 мкM
C обозн. ≥10 мкM
C обозн. ≥10 мкM
C обозн. ≥10 мкM
(Kd, нM)
(Kd, нM)
(IC50, нM)
*: Соединения по WO2016/166250
**: Соединения по изобретению
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРАЗОЛОТРИАЗИНА И/ИЛИ ПИРАЗОЛОПИРИМИДИНА В КАЧЕСТВЕ СЕЛЕКТИВНОГО ИНГИБИТОРА ЦИКЛИНЗАВИСИМОЙ КИНАЗЫ | 2019 |
|
RU2809779C2 |
| ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ ПИРАЗОЛОТРИАЗИНА И/ИЛИ ПИРАЗОЛОПИРИМИДИНА | 2019 |
|
RU2818563C2 |
| ПРОИЗВОДНЫЕ АЗАИНДАЗОЛА ИЛИ ДИАЗАИНДАЗОЛА В КАЧЕСТВЕ МЕДИКАМЕНТА | 2012 |
|
RU2600976C2 |
| Ингибиторы ErbB/BTK | 2019 |
|
RU2764069C1 |
| ИНГИБИТОРЫ РЕЦЕПТОРОВ ERBB | 2019 |
|
RU2810215C2 |
| БИЦИКЛИЧЕСКИЕ АМИНЫ В КАЧЕСТВЕ НОВЫХ ИНГИБИТОРОВ JAK-КИНАЗЫ | 2018 |
|
RU2764980C2 |
| НОВЫЕ КОНЪЮГАТЫ АНТИТЕЛ И ИХ ПРИМЕНЕНИЯ | 2014 |
|
RU2684468C2 |
| НОВЫЕ 4-АМИНО-N-ГИДРОКСИБЕНЗАМИДЫ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ HDAC ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ РАКА | 2012 |
|
RU2591190C2 |
| ГЕТЕРОАРИЛЬНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ | 2010 |
|
RU2636584C2 |
| СУЛЬФОНАМИДНЫЕ ПЕРИ-ЗАМЕЩЕННЫЕ БИЦИКЛЫ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ОККЛЮЗИОННОГО ПОРАЖЕНИЯ АРТЕРИЙ | 2005 |
|
RU2403240C2 |
Изобретение относится к соединению, имеющему общую формулу I, где X1 независимо в каждом случае выбран из CR3 и N; X2 независимо в каждом случае выбран из CR4 и N; n независимо в каждом случае выбран из 0 и 1; А независимо в каждом случае выбран из любой структуры, приведенной в следующей группе W; R1 независимо в каждом случае выбран из группы, состоящей из водорода, С1-С6 алкила, -(C=О)R5; R2 представляет собой -OR8; R3 и R4 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из водорода, галогена, С1-С3 алкила, С1-С4 галогеналкила; R5 и R6 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из водорода, С1-С6 алкила, С3-С10 циклоалкила; R8 независимо в каждом случае представляет собой С1-С4 галогеналкил; Z1 в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из водорода, С1-С6 алкила, С1-С6 алкила, замещенного одним из OR5 и NR5R6, С3-С10 циклоалкила, С3-С10 гетероциклоалкила, содержащего 1 гетероатом, выбранный из О и N; R11 и R12 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из С1-С6 алкила, С1-С4 галогеналкила, и его фармакологически приемлемым солям. Изобретение также относится к фармацевтической композиции на основе указанного соединения. Технический результат: получено новое соединение и фармацевтическая композиция на его основе, которые могут найти применение в медицине для лечения нарушения, опосредованного рецепторной тирозинкиназой Axl/Mer и CSF1R, а именно для лечения миелоидного лейкоза, рака груди и немелкоклеточного рака лёгких. 5 н. и 14 з.п. ф-лы, 8 табл., 8 пр., 2 ил.
1. Соединение, имеющее общую формулу I
где X1 независимо в каждом случае выбран из CR3 и N;
X2 независимо в каждом случае выбран из CR4 и N;
n независимо в каждом случае выбран из 0 и 1;
А независимо в каждом случае выбран из любой структуры, приведенной в следующей группе W:
Группа W
Группа W
Группа W
R1 независимо в каждом случае выбран из группы, состоящей из водорода, С1-С6 алкила, -(C=О)R5;
R2 представляет собой -OR8;
R3 и R4 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из водорода, галогена, С1-С3 алкила, С1-С4 галогеналкила;
R5 и R6 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из водорода, С1-С6 алкила, С3-С10 циклоалкила;
R8 независимо в каждом случае представляет собой С1-С4 галогеналкил;
Z1 в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из водорода, С1-С6 алкила, С1-С6 алкила, замещенного одним из OR5 и NR5R6, С3-С10 циклоалкила, С3-С10 гетероциклоалкила, содержащего 1 гетероатом, выбранный из О и N;
R11 и R12 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из С1-С6 алкила, С1-С4 галогеналкила,
и их фармацевтически приемлемые соли.
2. Соединение по п. 1, имеющее общую формулу II
где R1, R2, R3, R4, R11, R12, Z1, X1, X2 и n имеют значения, определенные в п. 1, и их фармацевтически приемлемые соли.
3. Соединение по любому из пп. 1 и 2, имеющее общую формулу III
где R1, R2, R3, R4, Z1, X1, X2 и n имеют значения, определенные в п. 1, и их фармацевтически приемлемые соли.
4. Соединение по п. 3, в котором R3 и R4 независимо в каждом случае выбраны из группы, состоящей из водорода, галогена, С1-С3 алкила;
R8 независимо в каждом случае представляет собой С1-С4 галогеналкил; и
Z1 в каждом случае независимо выбран из группы, состоящей из водорода, С1-С6 алкила, С1-С6 алкила, замещенного одним из OR5 и NR5R6, С3-С10 циклоалкила, С3-С10 гетероциклоалкила, содержащего 1 гетероатом, выбранный из О и N,
и их фармацевтически приемлемые соли.
5. Соединение по любому из пп. 1-4, имеющее общую формулу IV
где R1, R2, R3, R4, Z1, X2 и n имеют значения, определенные в любом из пп. 1-4,
и их фармацевтически приемлемые соли.
6. Соединение по любому из пп. 1-5, имеющее общую формулу V
где R1, R2, R3, R4, Z1 и n имеют значения, определенные в любом из пп. 1-4, и их фармацевтически приемлемые соли.
7. Соединение по п. 6, в котором R3 и R4 представляют собой водород, и их фармацевтически приемлемые соли.
8. Соединение по любому из пп. 1-7, в котором n=0 или 1, a Z1 выбран из С1-С6 алкила, С3-С10 циклоалкила, С3-С10 гетероциклоалкила, содержащего 1 гетероатом, выбранный из О и N, С1-С6 алкила, замещенного одним из OR5 и NR5R6, и их фармацевтически приемлемые соли.
9. Соединение по п. 8, в котором n=0 или 1, a Z1 выбран из метила, этила, пропила или изопропила, С3-С10 циклоалкила, С3-С10 гетероциклоалкила, содержащего 1 гетероатом, выбранный из О и N, С1-С6 алкила, замещенного одним из OR5 и NR5R6, где R5 и R6 в каждом случае независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, С1-С6 алкила, С3-С10 циклоалкила; и
R2 представляет собой OR8, где R8 представляет собой С1-С4 галогеналкил,
и их фармацевтически приемлемые соли.
10. Соединение по любому из предшествующих пунктов, в котором
R2 представляет собой OR8, где R8 выбран из трифторметила, дифторметила, фторметила, трифторэтила, дифторэтила, фторэтила, трифторпропила, дифторпропила, фторпропила, трифторизопропила, дифторизопропила и фторизопропила.
11. Соединение по любому из предшествующих пунктов, в котором n=0 или 1, a Z1 выбран из метила, этила, пропила, изопропила, С3 циклоалкила, С4 циклоалкила и С5 циклоалкила.
12. Соединение по п. 9, в котором n=0 или 1; Z1 выбран из метила, этила, пропила, изопропила, С3 циклоалкила, С4 циклоалкила и С5 циклоалкила; и
R2 представляет собой OR8, где R8 выбран из трифторметила, дифторметила, фторметила, трифторэтила, дифторэтила, фторэтила, трифторпропила, дифторпропила, фторпропила, трифторизопропила, дифторизопропила и фторизопропила.
13. Соединение по п. 1, имеющее одну из структур, приведенных ниже:
14. Фармацевтическая композиция для лечения нарушения, связанного, сопровождаемого, вызванного или индуцированного рецепторной тирозинкиназой Axl/Mer и CSF1R, где нарушение представляет собой гиперпролиферативное нарушение, выбранное из острого миелоидного лейкоза, рака груди и немелкоклеточного рака легких, содержащая по меньшей мере одно соединение по любому из пп. 1-13 вместе с по меньшей мере одним фармацевтически приемлемым носителем, вспомогательным веществом и/или разбавителем.
15. Фармацевтическая композиция по п. 14, дополнительно содержащая по меньшей мере один другой фармацевтически активный агент.
16. Применение соединения по любому из пп. 1-13 в качестве фармацевтически активного агента для лечения гиперпролиферативного нарушения, связанного, сопровождаемого, вызванного или индуцированного рецепторной тирозинкиназой Axl/Mer и CSF1R, где гиперпролиферативное нарушение выбрано из острого миелоидного лейкоза, рака груди и немелкоклеточного рака легких.
17. Применение соединения по любому из пп. 1-13 при лечении нарушения, связанного, сопровождаемого, вызванного или индуцированного рецепторной тирозинкиназой Axl/Mer и CSF1R, где нарушение представляет собой гиперпролиферативное нарушение, выбранное из острого миелоидного лейкоза, рака груди и немелкоклеточного рака легких.
18. Применение по любому из пп. 16, 17, в котором указанное применение сочетают с другим фармацевтически активным лекарственным средством или терапией, в частности лучевой терапией, химиотерапевтическими лекарственными средствами, таргетными лекарственными средствами и лекарственными средствами - ингибиторами иммунных контрольных точек.
19. Способ лечения гиперпролиферативного нарушения, выбранного из острого миелоидного лейкоза, рака груди и немелкоклеточного рака легких, включающий в себя введение соединения по любому из пп. 1-13 или композиции по любому из пп. 14, 15 пациенту, нуждающемуся в таком лечении.
| WO 2016166250 A1, 20.10.2016 | |||
| WO 2012028332 A1, 08.03.2012 | |||
| SAMUEL H | |||
| MYERS ET AL | |||
| "AXL inhibitors in cancer: A medicinal chemistry perspective", Journal of Medicinal Chemistry, 2015, Vol | |||
| Устройство для охлаждения водою паров жидкостей, кипящих выше воды, в применении к разделению смесей жидкостей при перегонке с дефлегматором | 1915 |
|
SU59A1 |
| Топка с несколькими решетками для твердого топлива | 1918 |
|
SU8A1 |
| ПРИСПОСОБЛЕНИЕ ДЛЯ ПРОМЫВКИ СТРУЕЙ ВОДЫ КОВШЕЙ ЧЕРПАКОВЫХ ЗЕМЛЕЧЕРПАТЕЛЬНЫХ МАШИН | 1923 |
|
SU3593A1 |
| ХИНОЛИЛ-СОДЕРЖАЩЕЕ СОЕДИНЕНИЕ ГИДРОКСАМОВОЙ КИСЛОТЫ, СПОСОБ ЕГО ПОЛУЧЕНИЯ, А ТАКЖЕ ПРИМЕНЕНИЕ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ЗАБОЛЕВАНИЙ, ВЫЗВАННЫХ АНОМАЛЬНОЙ АКТИВНОСТЬЮ ПРОТЕИНКИНАЗЫ И/ИЛИ ГИСТОНДЕАЦЕТИЛАЗЫ | 2011 |
|
RU2573633C2 |
