ЛИОФИЛИЗИРОВАННЫЕ ПРЕПАРАТЫ БЕНДАМУСТИНА ГИДРОХЛОРИДА Российский патент 2019 года по МПК A61K9/19 A61K31/41 A61K31/4184 A61K31/02 A61K47/00 A61P35/02 

Настоящее изобретение относится к новым лиофилизированным препаратам бендамустина гидрохлорида и, в частности, к лиофилизированным препаратам бендамустина гидрохлорида, полученным из водных растворов, не содержащих органических растворителей, имеющим определяемую ВЭЖХ анализом чистоту более 99%.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Бендамустина гидрохлорид представляет собой активный ингредиент, который применяется в лечении хронического лимфоцитарного лейкоза и неходжкинской лимфомы, чья химическая структура представлена следующей Структурной формулой I

Этот лекарственный препарат относится к классу хлорметина и действует как противоопухолевый агент, благодаря активной части молекулы, состоящей из бис-хлорэтиламиногруппы, которая в физиологических условиях путем внутреннего замещения одного из двух атомов хлора аминоазота образует обладающую высокой реакционной способностью электрофильную структуру азиридинового типа, которая способна эффективно взаимодействовать с азотистыми основаниями нуклеиновых кислот, вызывая серьезные изменения в клеточной репликации и репарации, которые приводят к апоптозу.

Этот активный ингредиент является коммерчески доступным в виде лиофилизированного порошка под торговым наименованием Treanda® в США и Levact® в Европе с дозировкой 25 мг и 100 мг.

Синтез бендамустина впервые был описан в работе W. Ozegowski, D. Krebs, Journal Fur Praktische Chemie, 4 (20) 178-186 (1963).

В Патенте ГДР DD159289 содержится указание на то, что лиофилизация бендамустина из водного раствора или из водного раствора, содержащего хлорид натрия, приводит к получению чрезвычайно гигроскопичного лиофилизированного продукта, характеризующегося выраженной деградацией активного ингредиента (от 5% до 10%). Кроме того, в этом документе указано, что после восстановления лиофилизированного из воды продукта образуются микрочастицы, способствующие нестабильности системы. В этом документе указано, что способом преодоления являющейся недостатком гигроскопичности лиофилизированного продукта, по всей видимости, является добавление в лиофилизируемую смесь маннита; однако сообщается, что такое добавление не решает проблемы значительного разложения активного ингредиента и образования микрочастиц после восстановления.

В работе B. Maas, C. Huber, I. Kramer, Pharmazie, 49 (10), 775-777 (1994) приводятся данные, подтверждающие нестабильное поведение бендамустина в водном растворе: водный раствор бендамустина гидрохлорида с концентрацией 0,25 мг/мл имеет 10% деградации активного ингредиента после хранения в течение 4,2 часов при комнатной температуре. Такая нестабильность увеличивается с повышением температуры: при температуре 4°С время, необходимое для того чтобы потери бендамустина гидрохлорида в растворе составили 10% от его начального количества (t₉₀), составляет 119,5 часов, в то время как при температуре 23°С, t₉₀ составляет только 9,2 часа. В этой работе также описывается механизм образования основного продукта деградации бендамустина в воде, именуемого HP1, который образуется в соответствии с механизмом, показанном на следующей Схеме 1.

В этой же работе также описано ингибирующее действие, оказываемое хлоридом натрия на деградацию активного ингредиента в водном растворе.

В Международной патентной заявке WO2006076620 описан препарат лиофилизированных продуктов бендамустина, полученных с использованием смесей воды и органических растворителей, таких как т-бутанол, этанол, н-пропанол, н-бутанол, изопропанол, метанол, ацетон, этилацетат, диметилкарбонат, ацетонитрил, дихлорметан, метилэтилкетон, метилизобутилкетон, 1-пентанол, метилацетат, тетрахлорид углерода, диметилсульфоксид, гексафторацетон, хлорбутанол, диметилсульфон, уксусная кислота и циклогексан. В этом документе приводятся данные, согласно которым использование органических растворителей и воды в значительной степени способствует стабилизации активного ингредиента и получению лиофилизированного продукта с низким содержанием примесей, особенно примеси HP1. Однако в этом документе не приводится каких-либо данных об остаточном содержании растворителей, остающихся в продуктах после лиофилизации. Кроме того, использование органического растворителя в подлежащей лиофилизации смеси обязательно предполагает использование соответствующих лиофилизаторов, способных работать с органическими растворителями с последующим увеличением производственных издержек.

В документе WO2006076620 не рекомендуется проводить лиофилизацию бендамустина гидрохлорида из одной воды. Кроме того, в этом документе раскрыто получение раствора бендамустина гидрохлорида (15 мг/мл) и маннита (25,5 мг/мл) в чистой воде, охлажденного до 5°С (страница 28, строка 7 и таблица 1). Относительно этого раствора сообщается, что после 6 часов хранения в нем происходит образование осадка, свидетельствующее о низкой растворимости бендамустина гидрохлорида в воде.

Кроме того, при анализе образцов этого раствора при помощи ВЭЖХ через 0, 3, 6, 24 часа (страница 30, строки 16-20 и таблица 3; страница 43, строки 4-9) было обнаружено, что бендамустин быстро разлагается в воде, образуя в основном продукт деградации HP1. В частности, во время =0 процентное содержание HP1 составляет 0,6%, через 3 часа оно увеличивается до 0,86%, а спустя 6 часов оно достигает 3,81%.

В указанном документе также отмечается (страница 44, строки 22-24), что, по меньшей мере, 134 мг маннита на флакон следует использовать для 100 мг дозы активного ингредиента, чтобы получить хорошо сформированные лиофилизированные продукты, устойчивые к растрескиванию, без каких-либо различий, наблюдаемых, когда маннит используется в количестве до 200 мг на флакон.

Однако большие количества маннита в лиофилизируемом флаконе увеличивают вероятность растрескивания флакона во время лиофилизации в результате неконтролируемых фазовых переходов маннита (см., например, «Mechanistic studies of glass breakage for frozen formulations. I and II. Vial breakage caused by crystallizable excipient mannitol» in J. Pharm. Sci. Technol. 2007 Nov-Dec; 61 (6): 441-51 and 452-60). Возможность того, что флакон с цитотоксичным активным ингредиентом может лопнуть во время лиофилизации, представляет собой особенно нежелательную проблему с точки зрения безопасности.

В заявке на патент CN101836962 раскрыт процесс лиофилизации бендамустина гидрохлорида из растворов с использованием воды в качестве единственного растворителя. Способ, описанный в этой патентной заявке, включает в себя сначала растворение активного ингредиента и вспомогательного вещества при температуре от 30°С до 50°С, затем охлаждение этой смеси до температуры 0-10°С, доведение значения pH до 2,0-3,0, обработку активированным углем, фильтрование, заполнение флаконов и лиофилизацию. Обработка активного ингредиента в теплых условиях на первых стадиях процесса неизбежно вызывает деградацию указанного активного ингредиента, что подтверждается данными, приведенными в указанной патентной заявке, где лиофилизированный продукт, полученный раскрытым способом, имел общее содержание примесей 1,85%. Кроме того, в примерах, приведенных в указанной патентной заявке, не указаны концентрации и время, необходимые для получения описанных лиофилизированных продуктов.

В заявке на патент CN101966158 раскрыт способ получения лиофилизированных препаратов бендамустина гидрохлорида, в котором не используются органические растворители. Растворение вспомогательных веществ и активного ингредиента осуществляется при температуре от 0 до 20°С при концентрации активного ингредиента от 1 мг/мл до 100 мг/мл, значение pH доводили до 1,5-4,5, раствор фильтровали для удаления пирогенов, заливали во флаконы и лиофилизировали. В этом документе отсутствует информация о чистоте получаемых лиофилизированных продуктов, и сообщается только об их анализе на содержание активного ингредиента без подробного описания результатов указанного анализа. Данные, приведенные в этом документе, показывают полное отсутствие корреляции между анализом полученных лиофилизированных продуктов и температурой, при которой они были получены. Это противоречит тому, что известно из литературы о стабильности бендамустина в воде (см. вышеупомянутую работу Pharmazie 1994): стабильность бендамустина в воде тем выше, чем ниже температура, при которой он храниться.

В Международной патентной заявке WO2012103226 раскрыта лиофилизация бендамустина гидрохлорида с использованием смесей растворителей, таких как ацетон и ацетонитрил, и вода; из этих смесей получали лиофилизированные продукты с высокой чистотой (в которых содержание HP1 не превышало 0,24%), стабильных при температуре 25°С и 40°С, по меньшей мере, в течение 3 месяцев, которые можно было восстановить в течение примерно 1 минуты.

Однако в этом документе также не приводится количество органического растворителя, которое присутствует в виде остаточного количества растворителя в лиофилизированном продукте, а также в этом случае использование органического растворителя в смеси, подлежащей лиофилизации, требует подходящего оборудования с более высокими производственными издержками по сравнению с использованием лиофилизаторов, приспособленных для работы только с водой.

Коммерческие продукты Levact® и Treanda® предположительно получают путем лиофилизации из смесей органических растворителей и воды при помощи одного из способов, известных из литературы, так как анализ таких продуктов, проведенный заявителем, показал присутствие остаточных количеств органических растворителей.

Таким образом, все еще существует потребность в разработке легко внедряемого в промышленное производство способа лиофилизации бендамустина гидрохлорида при низких издержках, при помощи которого можно получать лиофилизированный продукт с низким содержанием примесей, который может быть восстановлен в течение одной минуты, который не содержит органических растворителей, который является стабильным в течение времени, и который обладает незначительным риском растрескивания флакона во время лиофилизации.

ЦЕЛЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Авторами настоящего изобретения неожиданно было обнаружено, что бендамустина гидрохлорид может быть лиофилизирован из одной только воды без необходимости добавления органических растворителей при помощи безопасного масштабируемого промышленного способа, и полученный препарат сохраняет при этом процентное содержание продуктов деградации менее 1%.

Таким образом, целью настоящего изобретения является безопасный промышленный способ получения лиофилизированных продуктов бендамустина гидрохлорида из растворов, содержащих в качестве единственного растворителя воду, имеющим определяемую ВЭЖХ анализом чистоту более 99%.

Другой целью настоящего изобретения являются лиофилизированные препараты бендамустина гидрохлорида с чистотой >99%, не содержащие остаточных количеств органических растворителей, полученные способом настоящего изобретения.

Являющийся целью настоящего изобретения способ позволяет выполнять все необходимые стадии для получения предназначенного для лиофилизации раствора (смешивание, растворение, стерильная фильтрация и распределение по флаконам) без одновременного образования продуктов деградации в количестве, превышающем 1%, в частности, не превышающем 0,5%, и для дальнейшего получения лиофилизированного продукта, который восстанавливается за несколько минут без образования нерастворимого материала.

Именно этот результат является неожиданным в свете предшествующего уровня техники, который однозначно не рекомендует специалисту в данной области техники предпринимать любые попытки лиофилизации бендамустина гидрохлорида без использования органических растворителей, так как продукт легко разлагается при растворении в чистой воде. Кроме того, способ, описанный в настоящей патентной заявке, представляет собой основу для особенно предпочтительного промышленного способа, так как он не предполагает использование какого-либо органического растворителя, чем уменьшает риски растрескивания флаконов в результате неконтролируемой кристаллизации маннита во время лиофилизации, и позволяет получать лиофилизированный продукт, имеющий определяемую ВЭЖХ анализом чистоту более 99%.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В противоположность информации, содержащейся в предшествующем уровне техники, авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что бендамустина гидрохлорида может быть лиофилизирован из растворов, содержащих в качестве единственного растворителя воду, без образования примесей, являющихся результатом деградации, в количестве более 1%. Такой результат достигается за счет использования специальной схемы приготовления на стадиях предварительной лиофилизации и смешивания активного ингредиента с вспомогательными веществами и водой, и благодаря использованию уменьшенных количеств маннита по сравнению с предшествующим уровнем техники.

В частности, температура на различных стадиях приготовления лиофилизируемого раствора и концентрации активного ингредиента и вспомогательных веществ должны строго контролироваться. Фактически, даже если с одной стороны более высокая температура повышает растворимость активного ингредиента, с другой стороны она вызывает его ускоренную деградацию с последующим образованием значительных количеств побочных продуктов.

Таким образом, являющийся целью настоящего изобретения способ лиофилизации включает в себя на первой стадии растворение бендамустина гидрохлорида в воде в концентрации от 15 до 4 мг/мл при температуре от 0°С до 15°С.

Как правило, полное растворение достигается через 5-10 минут при указанной температуре.

Полученный раствор бендамустина гидрохлорида добавляют в водный раствор остальных вспомогательных веществ с концентрацией от 15 до 10 мг/мл, предварительно охлажденный при температуре от -5 до +5.

Альтернативно, способ предусматривает предварительное приготовление водного раствора вспомогательных веществ в концентрации от 8,5 до 3 мг/мл, выдерживание его при температуре от 0°С до 5°С и добавление бендамустина гидрохлорида в количестве, достаточном для получения конечной концентрации активного ингредиента в растворе от 5,5 до 2,0 мг/мл.

Полученные растворы для последующей лиофилизации, содержащие активный ингредиент в концентрации от 5,5 до 3,0 мг/мл и вспомогательные вещества в концентрации от 8,5 до 3,0 мг/мл, выдерживают при температуре, не превышающей 5°С, предпочтительно от 0°С до 4°С, и поддерживают высокую степень чистоты, выше 99%, в течение, по меньшей мере трех часов, для выполнения всех стадий, предшествующих процессу лиофилизации, таких как, например, стерильная фильтрация раствора, заполнение флаконов и помещение их в лиофилизатор перед охлаждением, также при приготовлении в промышленном масштабе.

Являющийся целью настоящего изобретения способ также не требует доведения значения pH на любой из своих стадий, и не предусматривает обработку активированным углем.

Вспомогательные вещества, которые используются для приготовления водного раствора, добавляемого в водный раствор бендамустина гидрохлорида, в соответствии с являющимся целью настоящего изобретения способом лиофилизации, представляют собой вспомогательные вещества, обычно используемые для приготовления лиофилизированных продуктов.

В частности, используются такие объемообразующие агенты, как маннит, лактоза, сахароза и их смеси.

Маннит является особенно предпочтительным. Еще более предпочтительным является, чтобы массовое количество маннита составляло примерно 120% от массы бендамустина гидрохлорида.

Являющийся целью настоящего изобретения лиофилизированный продукт бендамустина гидрохлорида может также содержать стабилизирующее количество NaCl.

Когда NaCl присутствует, он добавляется в водный раствор вспомогательных веществ и стабилизирует подлежащий лиофилизации раствор, который получается после добавления водного раствора бендамустина гидрохлорида в надлежащим образом охлажденный водный раствор вспомогательных веществ.

Для эффективной стабилизации концентрация NaCl в подлежащем лиофилизации раствора предпочтительно составляет от 0,1% до 0,5% (масса/объем).

Последующая лиофилизация предназначенного для лиофилизации раствора, полученного способом настоящего изобретения, позволяет получить лиофилизированный бендамустина гидрохлорид с чистотой >99%, не содержащий остаточных количеств органических растворителей, дополнительным преимуществом которого является то, что при его получении могут использоваться меньшие количества маннита, что существенно уменьшает проблемы безопасности, связанные со случайным растрескиванием флаконов во время лиофилизации.

В настоящем контексте отсутствие остаточных количеств органических растворителей в лиофилизированном продукте означает, что содержание остаточных количеств органических растворителей составляет от 0 м.д. до 10 м.д.

Для специалиста в данной области техники является очевидным, что степень чистоты активного ингредиента в лиофилизированных продуктах зависит от степени чистоты используемого сырья.

Конкретно в случае бендамустина степень чистоты в частности зависит от используемого способа лиофилизации, что обусловлено присущей его молекуле нестабильностью в воде. При использовании в качестве исходного активного ингредиента бендамустина гидрохлорида со степенью чистоты выше 99%, степень чистоты бендамустина гидрохлорида в лиофилизированном продукте настоящего изобретения, оцененная при помощи ВЭЖХ, остается практически неизменной.

Предпочтительно, лиофилизированный продукт, полученный из водного раствора способом настоящего изобретения, имеет чистоту выше 99,5%.

Кроме того, лиофилизированные продукты, полученные способом настоящего изобретения, могут быть восстановлены менее чем за одну минуту с образованием прозрачных и бесцветных растворов, пригодных для инъекционных препаратов. Такие лиофилизированные продукты также являются стабильными в стандартных условиях ускоренного испытания на стабильность.

Для того чтобы лучше проиллюстрировать настоящее изобретение, не ограничивая его, далее приводятся следующие примеры.

Описание чертежей:

Фигура 1: ПРД продукта, полученного в Примере 2.

Фигура 2: ПРД продукта, полученного в Примере 3.

Фигура 3: ПРД продукта, полученного в Примере 6.

Фигура 4: ПРД продукта, полученного в Примере 7.

Фигура 5: ПРД продукта, полученного в Примере 9.

Фигура 6: ПРД продукта, полученного в Примере 10.

Фигура 7: ПРД продукта, полученного в Примере 13.

Фигура 8: Примеси бендамустина.

Пример 1

Метод ВЭЖХ для определения чистоты растворов бендамустина гидрохлорида

Рабочие условия

Прибор: ВЭЖХ-хроматограф SHIMADZU LC-10AD или эквивалент
• УФ-детектор: SPD 10AVP или эквивалент
• автодозатор: SIL-ADVP или эквивалент Длина волны: 254 нм Колонка: Kinetex 2,6 мкл XB-C18
• длина: 150 мм
• В.Д.: 4,6 мм
• размер частиц 2,6 мкм
• (Phenomenex, Часть. N.OOF-4496-Eo или эквивалент) Инъекция: 3 мкл Температура колонки: 35°С±1°С Температура дозатора: Комнатная температура Скорость потока: 1,2±0,2 мл/мин Подвижная фаза Элюэнт A: 0,1% CF₃CO₂H в воде
Элюэнт B: 0,1% CF₃CO₂H в ацетонитриле
Градиентный режим Время анализа: 20 минут

Элюент A: 0,1% CF₃CO₂H в воде для ВЭЖХ

Элюент B: 0,1% CF₃CO₂H в ацетонитриле для градиента

Разбавитель: ДМСО

Холостая проба: в качестве холостой пробы используется разбавитель

Программа градиента

Программа градиента Время (мин) Элюент A (об.%) Элюент B (об.%) 0 95 5 5 95 5 40 20 80 41 95 5 50 (завершение анализа) 95 5

Приготовление образцов:

Растворы перед лиофилизацией.

850 мкл разбавителя отбирали при помощи 1000 мкл калиброванной микропипетки и переносили в 2 мл флакон для ВЭЖХ. 150 мкл раствора образца отбирали при помощи 200 мкл калиброванной микропипетки и переносили в тот же флакон. Смесь перемешивали в течение нескольких секунд.

Образец бендамустина HCl АФИ.

3-5 мг бендамустина HCl АФИ взвешивали в 8 мл стеклянном флаконе с завинчивающейся крышкой. В этот же флакон добавляли 5 мл разбавителя. Смесь перемешивали до растворения.

Образец лиофилизированного бендамустина HCl (без NaCl).

5-8 мг лиофилизированного бендамустина HCl взвешивали в 8 мл стеклянном флаконе с завинчивающейся крышкой. В этот же флакон добавляли 5 мл разбавителя. Смесь перемешивали до растворения.

Образец лиофилизированного бендамустина HCl (с NaCl).

8-12 мг бендамустина HCl взвешивали в 8 мл стеклянном флаконе с завинчивающейся крышкой. В этот же флакон добавляли 5 мл разбавителя. Смесь перемешивали до растворения.

Вычисление чистоты

Процентное содержание каждой известной и неизвестной примеси рассчитывали как процентную площадь с использованием следующей формулы (пики в холостой пробе и пики с площадью <0,05% игнорировали).

где:

A_xc: площадь пика примеси в образце

A_tot: общая площадь пиков хроматограммы.

и

Чистота (A%) = 100-Σ_iПрим(i)

Пик, соответствующий бендамустину, элюировали через 28 минут ±2.

Пример 2

Получение лиофилизированного препарата бендамустина гидрохлорида из чистой воды с хлоридом натрия

Количество на флакон Соотношение Маннит:АФИ АФИ 100 мг 1,7 Маннит 170 мг NaCl 90 мг Объем раствора для лиофилизации 30 мл

В 25 мл колбу помещали 170,0 мг маннита, 90 мг хлорида натрия и 15 мл воды MilliQ. Эту смесь перемешивали до полного растворения твердых веществ и охлаждали до температуры от -1°С до 2°С. В другую 25 мл колбу вносили 15 мл воды MilliQ и после охлаждения до 4°С добавляли 100 мг бендамустина гидрохлорида (BND-HCl). Примерно через 30 секунд наблюдали полное растворение твердого вещества. Затем этот раствор бендамустина добавляли в первый раствор, содержащий вспомогательные вещества, и объединенный растворы, температуру которых поддерживали в диапазоне от -1°С до 2°С, фильтровали через фильтр с размером пор 0,22 мкм и выдерживали при температуре от -1°С до 2°С в течение 3 часов, проверяя каждый час чистоту смеси при помощи ВЭЖХ, так как описано в Примере 1.

Полученные результаты приведены в следующей таблице:

Время HP1 (Площадь %) BND-HCl (Площадь %) 0 0,17% 99,83% 1ч 0,20% 99,80% 2ч 0,24% 99,76% 3ч 0,27% 99,73%

В конце процесса раствор замораживали при температуре -20°С и лиофилизировали в лиофилизаторе Alpha 1-4 LSC (Christ) при следующих условиях:

Время (часы) T полки (°С) T воздуха (°С) Давление (мбар) Основная сушка 64 -14 <-45°С 0,1 Финальная сушка 24 25 <-45°С 0,1

Полученный лиофилизированный продукт анализировали на чистоту при помощи ВЭЖХ и ПРД анализа. Для ПРД анализа (порошковая рентгеновская дифракция) использовали условия эксперимента, указанные ниже:

Тип прибора: X'Pert PRO PANalytical Тип измерения: Одно сканирование Длина волны измерения: CuKα1 Материал анода: Cu Напряжение рентгеновской трубки: 40 Мощность рентгеновской трубки (мА): 40 Тип движения образца: Вращение Время вращения образца (с): 1,0 Толщина фильтра (мм): 0,020 Материал фильтра: Ni Название детектора: X'Celerator Тип детектора: Детектор RTMS Ось сканирования: Гонио Диапазон сканирования (°): 3,0000-39,9987 Ширина диапазона измерения (°): 0,0167 Кол-во точек: 2214 Режим сканирования: Непрерывный Время счета (с): 12,700 Специальное программное обеспечение: X'Pert Data Collector vs. 2.2d Программное обеспечение для управления прибором: XPERT-PRO vs. 1.9B Температура: Комнатная температура

Чистота по данным ВЭЖХ анализа составила 99,64% с HP1=0,36%, данные ПРД анализа приведены на Фигуре 1.

Лиофилизированный продукт, восстановленный 40 мл воды для получения инъекционных растворов, образовал прозрачный и бесцветный раствор в течение 1 минуты.

Пример 3

Получение лиофилизированного препарата бендамустина гидрохлорида из чистой воды без хлорида натрия (концентрация АФИ в растворе для лиофилизации составляет 3,33 мг/мл)

Количество на флакон Соотношение Маннит:АФИ АФИ 100 мг 1,7 Маннит 170 мг NaCl - Объем раствора для лиофилизации 30 мл

В 50 мл колбу помещали 170,0 мг маннита и 30 мл воды MilliQ. Эту смесь перемешивали до полного растворения твердого вещества и охлаждали до температуры 4°С. Затем добавляли 100 мг бендамустина гидрохлорида. Примерно через 30 секунд наблюдали полное растворение твердого вещества. Этот раствор охлаждали до температуры от -1°С до 2°С, фильтровали через фильтр с размером пор 0,22 мкм и выдерживали при температуре от -1°С до 2°С в течение 3 часов, проверяя каждый час чистоту смеси при помощи ВЭЖХ, так как описано в Примере 1.

Полученные результаты приведены в следующей Таблице:

Время HP1 (Площадь %) BND-HCl (Площадь %) 0 0,17% 99,83% 1 ч 0,28% 99,72% 2 ч 0,32% 99,68% 3 ч 0,38% 99,62%

В конце процесса раствор замораживали при температуре -20°С и лиофилизировали в условиях, указанных в Примере 2.

Определение чистоты полученного лиофилизированного продукта проводили при помощи ВЭЖХ анализа (см. Пример 1) и ПРД анализа.

Чистота по данным ВЭЖХ анализа составила 99,51% с HP1 = 0,49%, данные ПРД анализа приведены на Фигуре 2.

Лиофилизированный продукт, восстановленный 40 мл воды для получения инъекционных растворов, образовал прозрачный и бесцветный раствор в течение 1 минуты.

Пример 4

Стабильность предназначенных для лиофилизации растворов бендамустина гидрохлорида

В Таблице 2 приведены данные об изменении чистоты с течением времени для смесей, полученных, как описано в предыдущих примерах, выраженные в виде значений образования только примеси HP1, так как только она одна образуется в поддающихся обнаружению количествах. Было установлено, что две другие известные основные примеси бендамустин димер трихлорид и сложный этиловый эфир бендамустина не присутствуют в поддающихся обнаружению количествах, даже если используемый способ ВЭЖХ анализа также валидизирован для их определения.

Все препараты, указанные в Таблице 2, были получены путем растворения бендамустина гидрохлорида (имеющего чистоту по данным ВЭЖХ анализа 99,82% и содержание HP1=0,14%) в указанном количестве воды MilliQ при температуре 12-14°С, выдерживания этой смеси в течение 5-10 минут в этих условиях для обеспечения полного растворения и добавления этого раствора в раствор маннита и NaCl, предварительно охлажденный до 4°С. Затем полученный раствор выдерживали при температуре 4°С, проводя мониторинг изменения чистоты с течением времени при помощи ВЭЖХ анализа.

Таблица 2: Предварительные данные по получению и стабильности растворов бендамустина гидрохлорида в воде, перед лиофилизацией.

Раствор A Раствор BND-HCl Раствор вспомогательного вещества BND-HCl 100 мг Маннит 170 мг H₂O 10 мл NaCl 100 мг H₂O 10 мл (концентрация NaCl 0,5% в 20 мл)

Стабильность Время Примесь HP1 (площадь %) Бендамустин (площадь %) 0 0,17 99,83 1 ч 0,22 99,78 2 ч 0,24 99,76 Внешний вид смеси через 2 часа: осадок

Раствор B Раствор BND-HCl Раствор вспомогательного вещества BND-HCl 100 мг Маннит 170 мг H₂O 10 мл NaCl 220 мг H₂O 20 мл (концентрация NaCl 0,75% в 30 мл)

Стабильность Время Примесь HP1 (площадь %) Бендамустин (площадь %) 0 0,13 99,83 1 ч 0,26 99,78 2 ч 0,39 99,76 Внешний вид смеси через 2 часа: сильная опалесценция

Раствор C Раствор BND-HCl Раствор вспомогательного вещества BND-HCl 100 мг Маннит 170 мг H₂O 10 мл NaCl 120 мг H₂O 20 мл (концентрация NaCl 0,4% в 30 мл)

Стабильность Время Примесь HP1 (площадь %) Бендамустин (площадь %) 0 0,13 99,83 1 ч 0,26 99,78 2 ч 0,39 99,76 Внешний вид смеси через 2 часа: слабая опалесценция

Раствор D Раствор BND-HCl Раствор вспомогательного вещества BND-HCl 100 мг Маннит 170 мг H₂O 10 мл NaCl 90 мг H₂O 20 мл (концентрация NaCl 0,3% в 30 мл)

Стабильность Время Примесь HP1 (площадь %) Бендамустин (площадь %) 0 0,12 99,83 1 ч 0,16 99,78 2 ч 0,24 99,76 Внешний вид смеси через 2 часа: прозрачная

Пример 5

Получение лиофилизированного препарата бендамустина гидрохлорида из чистой воды без хлорида натрия (концентрация АФИ в растворе для лиофилизации составляет 5 мг/мл)

Количество на флакон Соотношение Маннит:АФИ АФИ 100 мг 1,7 Маннит 170 мг NaCl - Объем раствора для лиофилизации 20 мл

В 100 мл колбу помещали 340,0 мг маннита и 40 мл воды MilliQ. Эту смесь перемешивали до полного растворения твердого вещества и охлаждали до температуры 4°С. Затем добавляли 200 мг бендамустина гидрохлорида (имеющего чистоту 99,8% и содержание примеси HP1 0,11%). Примерно через 5 минут наблюдали полное растворение твердого вещества. Этот раствор охлаждали до температуры от -1°С до 2°С, и выдерживали при этой температуре в течение 2 часов после чего фильтровали через фильтр с размером пор 0,22 мкм, замораживали при температуре -20°С и лиофилизировали в условиях, указанных в Примере 2. Таким образом получали лиофилизированный продукт, имеющий содержание воды, определенное по методу Карла Фишера, 2,30%, чистоту, определенную при помощи ВЭЖХ анализа, 99,6% и содержание примеси HP1 0,29%.

Пример 6

Получение партии флаконов, содержащих 25 мг активного ингредиента

Количество на флакон Соотношение Маннит:АФИ АФИ 25 мг 1,7 Маннит 42,5 мг NaCl - Объем раствора для лиофилизации 7,5 мл

В 2-литровый реактор, оснащенный термокриостатом и механической мешалкой, охлажденный до температуры 0°С и покрытый алюминиевым листом для защиты раствора от света, загружали раствор, содержащий 5,66 г маннита, растворенных в 1 л воды для инъекций. После того как раствор достигал теплового равновесия при температуре 0-2°С, в него добавляли 3,34 г бендамустина гидрохлорида (имеющего чистоту 99,8% и содержание примеси HP1 0,11%). Полное растворение твердого вещества наблюдали примерно через 30 секунд. Смесь перемешивали при температуре 0-2°С в течение 2 часов, затем фильтровали и загружали в систему заполнения флаконов. В каждый из 100 флаконов 20H из темного стекла заливали 7,5 мл этого раствора, флаконы предварительно закрывали резиновыми пробками для лиофилизации и загружали в контейнер, чтобы затем перенести в лиофилизатор Mini Lyo SMH 45 (Usifroid) с полками, заранее охлажденными до температуры 3°С.

Описание цикла лиофилизации приводится в следующей таблице:

Полки цикла лиофилизации T Значение температуры (°С) Значение времени (мин) Загрузка на предварительно охлажденные полки +3°С В течение загрузки флаконов Замораживание (охлаждение полок) -45°С 96 Замораживание (поддержание температуры полок) -45°С 180 Медленное нагревание (нагревание полок) (0,5°/мин) -10°С 70 Медленное нагревание (поддержание температуры полок) -10°С 180 Медленное охлаждение (охлаждение полок) (0,5°/мин) -45°С 70 Медленное охлаждение (поддержание температуры полок) -45°С 240 Сублимация (нагревание полок) -20°С 250 Сублимация (поддержание температуры полок) -20°С 1440 Значение давления в сублимационной камере: 100 микробар Десорбция (нагревание полок) +25°С 225 Десорбция (поддержание температуры полок) +25°С 2160 Значение давления в камере для закупорки пробок: 700±50 мбар

В конце цикла лиофилизации флаконы выгружали, и некоторые из них анализировали на содержание воды и чистоту лиофилизированного продукта, определяемую методом ВЭЖХ. Полученные данные приведены в следующей таблице.

HP1 Чистота бендамустина Содержание воды (по Карлу Фишеру) Флакон № 5 0,68% 99,25% 0,48% Флакон № 10 0,60% 99,28% 0,62% Флакон № 28 0,56% 99,36% 0,39% Флакон № 46 0,50% 99,39% 0,46% Флакон № 64 0,46% 99,43% 0,58% Флакон № 82 0,47% 99,39% 0,49% Флакон № 108 0,49% 99,43% 0,55% Флакон № 118 0,48% 99,44% 0,88%

Количества примесей димер трихлорид и сложный этиловый эфир, определяемых методом ВЭЖХ (см. Пример 1), который имел предел обнаружения 0,02% и предел дискретизации 0,03% для каждой из вышеупомянутых примесей, были не поддающимися обнаружению. Для определения содержания остаточных количеств растворителей флакон лиофилизированного продукта анализировали при помощи HSGC (газовая хроматография в свободном пространстве над продуктом).

Анализ показал, что лиофилизированный продукт не содержал поддающихся обнаружению остаточных количеств растворителей. Предел обнаружения используемого метода составлял 10 м.д.

Данные ПРД анализа лиофилизированного продукта флакона приведены на Фигуре 3.

Некоторые из полученных флаконов восстанавливали при комнатной температуре различными количествами воды для инъекций, наблюдая полное растворение за время, указанное в следующей таблице.

Объем добавленной воды для инъекционных растворов (мл) Время полного растворения (сек) Внешний вид восстановленного раствора 10 60 Прозрачный и бесцветный 5 120 Прозрачный и бесцветный 3,75 150 Прозрачный и бесцветный 2,5 180 Прозрачный и бесцветный

Флакон № 3 в течение месяца хранили при следующих постоянных условиях: температура - 25°С, относительная влажность - 60%, и повторно анализировали после месяца хранения в таких условиях, получая следующий результат:

HP1 Чистота бендамустина Флакон № 3 0,63% 99,28%

Флакон № 4 в течение месяца хранили при следующих постоянных условиях: температура - 40°С, относительная влажность - 75%, и повторно анализировали после месяца хранения в таких условиях, получая следующий результат:

HP1 Чистота бендамустина Флакон № 4 0,63% 99,17%

Пример 7

Получение партии флаконов, содержащих 100 мг активного ингредиента

Количество на флакон Соотношение Маннит:АФИ АФИ 100 мг 1,7 Маннит 170 мг NaCl - Объем раствора для лиофилизации 30 мл

В 2-литровый реактор, оснащенный термокриостатом и механической мешалкой, охлажденный до температуры 0°С и покрытый алюминиевым листом для защиты раствора от света, загружали раствор, содержащий 10,2 г маннита, растворенных в 1,8 л воды для инъекций. После того как раствор достигал теплового равновесия при температуре 0-2°С, в него добавляли 6,03 г бендамустина гидрохлорида (имеющего чистоту 99,8% и содержание примеси HP1 0,11%). Полное растворение твердого вещества наблюдали примерно через 30 секунд. Смесь перемешивали при температуре 0-2°С в течение 2 часов, затем фильтровали и загружали в систему заполнения флаконов. В каждый из 60 флаконов 50H из темного стекла заливали 30 мл этого раствора, флаконы предварительно закрывали резиновыми пробками для лиофилизации и загружали в контейнер, чтобы затем перенести в лиофилизатор Mini Lyo SMH 45 (Usifroid) с полками, заранее охлажденными до температуры 3°С.

Описание цикла лиофилизации приводится в следующей таблице:

Полки цикла лиофилизации T Значение температуры (°С) Значение времени (мин) Загрузка на предварительно охлажденные полки +3°С В течение загрузки флаконов Замораживание (охлаждение полок) -45°С 48 Замораживание (поддержание температуры полок) -45°С 300 Медленное нагревание (нагревание полок) (0,5°/мин)
-10°С 70 Медленное нагревание (поддержание температуры полок) -10°С 180 Медленное охлаждение (охлаждение полок) (0,5°/мин)
-45°С 70 Медленное охлаждение (поддержание температуры полок) -45°С 240 Сублимация (нагревание полок) -20°С 250 Сублимация (поддержание температуры полок) -20°С 5760 Значение давления в сублимационной камере: 100 микробар Десорбция (нагревание полок) +25°С 225 Десорбция (поддержание температуры полок) +25°С 2450 Значение давления в камере для закупорки пробок: 700±50 мбар

В конце цикла лиофилизации флаконы выгружали, и некоторые из них анализировали на содержание воды и чистоту лиофилизированного продукта, определяемую методом ВЭЖХ (см. Пример 1). Полученные данные приведены в следующей таблице.

HP1 Чистота бендамустина Содержание воды (по Карлу Фишеру) Флакон № 7 0,56% 99,38% 0,48% Флакон № 13 0,49% 99,45% 0,62% Флакон № 19 0,56% 99,39% 0,39% Флакон № 25 0,55% 99,39% 0,46% Флакон № 33 0,50% 99,45% 0,58% Флакон № 44 0,48% 99,48% 0,49%

Количества примесей димер трихлорид и сложный этиловый эфир, определяемых методом ВЭЖХ, который имел предел обнаружения 0,02% и предел дискретизации 0,03% для каждой из вышеупомянутых примесей, были не поддающимися обнаружению.

Для определения содержания остаточных количеств растворителей флакон лиофилизированного продукта анализировали при помощи HSGC (газовая хроматография в свободном пространстве над продуктом).

Анализ показал, что лиофилизированный продукт не содержал поддающихся обнаружению остаточных количеств растворителей. Предел обнаружения используемого метода составлял 10 м.д.

Данные ПРД анализа лиофилизированного продукта флакона приведены на Фигуре 4.

Некоторые из полученных флаконов восстанавливали при комнатной температуре различными количествами воды для инъекций, наблюдая полное растворение за время, указанное в следующей таблице.

Объем добавленной воды для инъекционных растворов (мл) Время полного растворения (сек) Внешний вид восстановленного раствора 40 60 Прозрачный и бесцветный 20 120 Прозрачный и бесцветный 15 150 Прозрачный и бесцветный 10 180 Прозрачный и бесцветный

Флакон № 35 в течение месяца хранили при следующих постоянных условиях: температура - 25°С, относительная влажность - 60%, и повторно анализировали после месяца хранения в таких условиях, получая следующий результат:

HP1 Чистота бендамустина Флакон № 35 0,46% 99,47%

Флакон № 34 в течение месяца хранили при следующих постоянных условиях: температура - 40°С, относительная влажность - 75%, и повторно анализировали после месяца хранения в таких условиях, получая следующий результат:

HP1 Чистота бендамустина Флакон № 34 0,50% 99,42%

Пример 8

Получение лиофилизированного препарата бендамустина гидрохлорида из чистой воды без хлорида натрия

Количество на флакон Соотношение Маннит:АФИ АФИ 100 мг 1,2 Маннит 120 мг NaCl - Объем раствора для лиофилизации 20 мл

В 100 мл колбу помещали 240,0 мг маннита и 40 мл воды MilliQ. Эту смесь перемешивали до полного растворения твердого вещества и охлаждали до температуры 4°С. Затем добавляли 200 мг бендамустина гидрохлорида (имеющего чистоту 99,8% и содержание примеси HP1 0,11%). Примерно через 5 минут наблюдали полное растворение твердого вещества. Этот раствор охлаждали до температуры от -1°С до 2°С, и выдерживали при этой температуре в течение 3 часов после чего фильтровали через фильтр с размером пор 0,22 мкм, замораживали при температуре -20°С и лиофилизировали в условиях, указанных в Примере 2. Таким образом получали лиофилизированный продукт, имеющий содержание воды, определенное по методу Карла Фишера, 2,30%, чистоту, определенную при помощи ВЭЖХ анализа, 99,6% и содержание примеси HP1 0,35%.

Часть этого лиофилизированного продукта массой 22 мг восстанавливали 2 мл воды для инъекций (концентрация АФИ = 5 мг/мл), наблюдая полное растворение продукта в течение одной минуты после добавления растворителя.

Вторую часть этого лиофилизированного продукта массой 22 мг восстанавливали 4 мл воды для инъекций (концентрация АФИ = 2,5 мг/мл), наблюдая полное растворение продукта в течение одной минуты после добавления растворителя.

Пример 9

Получение партии флаконов, содержащих 100 мг активного ингредиента

Количество на флакон Соотношение Маннит:АФИ АФИ 100 мг 1,2 Маннит 120 мг NaCl - Объем раствора для лиофилизации 20 мл

В 2-литровый реактор, оснащенный термокриостатом и механической мешалкой, охлажденный до температуры 0°С и покрытый алюминиевым листом для защиты раствора от света, загружали раствор, содержащий 7,2 г маннита, растворенных в 1,2 л воды для инъекций. После того как раствор достигал теплового равновесия при температуре 0-2°С, в него добавляли 6,03 г бендамустина гидрохлорида (имеющего чистоту 99,8% и содержание примеси HP1 0,11%). Полное растворение твердого вещества происходило примерно через 30 секунд. Смесь перемешивали при температуре 0-2°С в течение 2 часов, затем фильтровали и загружали в систему заполнения флаконов. В каждый из 60 флаконов 50H из темного стекла заливали 20 мл этого раствора, флаконы предварительно закрывали резиновыми пробками для лиофилизации и загружали в контейнер, чтобы затем перенести в лиофилизатор Mini Lyo SMH 45 (Usifroid) с полками, заранее охлажденными до температуры 3°С.

Описание цикла лиофилизации приводится в следующей таблице:

Полки цикла лиофилизации T Значение температуры (°С) Значение времени (мин) Загрузка на предварительно охлажденные полки +3°С В течение загрузки флаконов Замораживание (охлаждение полок) -45°С 48 Замораживание (поддержание температуры полок) -45°С 300 Медленное нагревание (нагревание полок) (0,5°/мин)
-10°С 70 Медленное нагревание (поддержание температуры полок) -10°С 180 Медленное охлаждение (охлаждение полок) (0,5°/мин)
-45°С 70 Медленное охлаждение (поддержание температуры полок) -45°С 240 Сублимация (нагревание полок) -20°С 250 Сублимация (поддержание температуры полок) -20°С 5760 Значение давления в сублимационной камере: 100 микробар Десорбция (нагревание полок) +25°С 225 Десорбция (поддержание температуры полок) +25°С 2450 Значение давления в камере для закупорки пробок: 700±50 мбар

В конце цикла лиофилизации флаконы выгружали, и некоторые из них анализировали на содержание воды и чистоту лиофилизированного продукта, определяемую методом ВЭЖХ. Полученные данные приведены в следующей таблице.

HP1 Чистота бендамустина Содержание воды (по Карлу Фишеру) Флакон № 4 0,52% 99,37% 0,54% Флакон № 10 0,49% 99,40% 0,47% Флакон № 20 0,48% 99,43% 0,40% Флакон № 30 0,46% 99,44% 0,35% Флакон № 40 0,46% 99,45% 0,40%

Количества примесей димер трихлорид и сложный этиловый эфир, определяемых методом ВЭЖХ (см. Пример 1), который имел предел обнаружения 0,02% и предел дискретизации 0,03% для каждой из вышеупомянутых примесей, были не поддающимися обнаружению.

Для определения содержания остаточных количеств растворителей флакон лиофилизированного продукта анализировали при помощи HSGC (газовая хроматография в свободном пространстве над продуктом).

Анализ показал, что лиофилизированный продукт не содержал поддающихся обнаружению остаточных количеств растворителей. Предел обнаружения используемого метода составлял 10 м.д.

Данные ПРД анализа лиофилизированного продукта флакона приведены на Фигуре 5.

Некоторые из полученных флаконов восстанавливали при комнатной температуре различными количествами воды для инъекций, наблюдая полное растворение за время, указанное в следующей таблице.

Объем добавленной воды для инъекционных растворов (мл) Время полного растворения (сек) Внешний вид восстановленного раствора 40 60 Прозрачный и бесцветный 20 120 Прозрачный и бесцветный 15 150 Прозрачный и бесцветный 10 180 Прозрачный и бесцветный

Пример 10

Получение промышленной партии флаконов, содержащих 100 мг активного ингредиента

Количество на флакон Соотношение Маннит:АФИ АФИ 100 мг 1,2 Маннит 120 мг NaCl - Объем раствора для лиофилизации 20 мл

1800 янтарных флаконов объемом 50 мл обрабатывали в стерилизаторе туннельного типа, чтобы подготовить для заполнения. В емкость для предварительного растворения, оснащенную рубашкой охлаждения, загружали 21 кг воды для инъекций. Воду доводили до температуры 0-2°С, добавляли 216 г маннита для инъекционных препаратов и перемешивали эту смесь в течение 10 минут до полного растворения. Затем из стеклянного контейнера добавляли 180 г бендамустина гидрохлорида, делая промывание контейнера 2×700 и 1×600 мл воды для инъекций, выдержанной при температуре 2°С. Содержимое емкости для предварительного растворения переносили в емкость для растворения при помощи перистальтического насоса, промывая емкость для предварительного растворения 3 литрами воды для инъекций. Конечную массу смеси, содержащейся в емкости для растворения, доводили до 36,07 кг путем добавления воды для инъекций, выдержанной при температуре 2°С. Смесь перемешивали при температуре 0-2°С до полного растворения продукта (примерно 30 минут). Проверяли внешний вид раствора, затем раствор фильтровали через фильтр для стерилизации Millipak 200 с размером пор 0,22 микрона. Фильтрованный раствор переносили в коллектор, оснащенный рубашкой охлаждения с циркулирующим жидким хладагентом, для поддержания температуры раствора 0-2°С. Часть раствора отбирали для проверки на отсутствие бактериальной контаминации и пирогенов. Раствор переносили из коллектора на линию распределения, где при помощи калиброванных дозирующих игл в каждый флакон заливали по 20 мл раствора. Каждые 15 минут проверяли массу раствора, содержащегося в каждом флаконе. Каждый флакон автоматически снабжали пробкой и перемещали в зону загрузки контейнеров для лиофилизации, где он располагался в соответствующем порядке. После заполнения каждого контейнера его помещали в лиофилизатор с полками, имеющими температуру 2°С. После завершения загрузки всех контейнеров в каждый контейнер помещали температурные датчики, лиофилизатор закрывали и запускали последовательность цикла лиофилизации, состоящего из следующих фаз.

Фаза Температура полок Время (ч) Загрузка полок +2°С - Замораживание -45°С 1:40 Поддержание температуры -45°С 3:00 Медленное нагревание -10°С 1:20 Медленное нагревание -10°С 3:00 Медленное охлаждение -45°С 1:16 Медленное охлаждение -45°С 3:00 Сублимация -20°С 4:10 Сублимация -20°С 48:00 Десорбция +25°С 3:45 Десорбция +25°С 12:00 Десорбция +35°С 0:10 Десорбция +35°С 10:00 Десорбция +25°С 0:10 Десорбция +25°С 12:00

В конце процесса все флаконы закрывали, герметично закупоривали и собирали в специальные контейнеры для хранения.

Пять образцов флаконов из разных контейнеров отбирали для анализа на содержание воды и чистоту, определяемую методом ВЭЖХ (см. Пример 1).

Полученные результаты были следующими:

HP1 Чистота бендамустина Содержание воды (по Карлу Фишеру) Флакон № 1 0,49 99,36 - Флакон № 2 0,48 99,37 - Флакон № 3 0,47 88,39 - Флакон № 4 - - 0,42% Флакон № 5 - - 0,41% Флакон № 6 - - 0,38%

Для определения содержания остаточных количеств растворителей флакон лиофилизированного продукта анализировали при помощи HSGC (газовая хроматография в свободном пространстве над продуктом).

Анализ показал, что лиофилизированный продукт не содержал поддающихся обнаружению остаточных количеств растворителей. Предел обнаружения используемого метода составлял 10 м.д.

Один из полученных флаконов восстанавливали при комнатной температуре 20 мл воды для инъекций, наблюдая полное растворение в течение 60 секунд.

Данные ПРД анализа содержимого флакона приведены на Фигуре 6.

Пример 11

Определение остаточного содержания растворителя в коммерческих продуктах Treanda® и Levact®

Три образца коммерческих продуктов Treanda® и Levact® анализировали при помощи HSGC (газовая хроматография в свободном пространстве над продуктом) для определения содержания в них остаточных количеств растворителя. Используемый метод был таким же, как метод, используемый в Примерах 6 и 7.

Полученные результаты приведены в следующей таблице:

Продукт Доза № партии t-BuOH (м.д.) EtOH (м.д.) Treanda® 100 мг TA31510 1800 - Levact® 100 мг 106662 - 253 Levact® 25 мг 99278 - 236

Пример 12

Анализ чистоты коммерческих образцов Treanda® и Levact®

Два флакона коммерческих продуктов Treanda® и Levact® анализировали при помощи ВЭЖХ для определения их чистоты, метод был таким же, как описано в Примере 1.

Результаты приведены в следующей таблице:

№ Партии Бендамустин Примесь HP1 Примесь димер трихлорид Примесь сложный этиловый эфир Levact® 25 мг 99278 98,15% 1,50% 0,20% 0,15% Levact® 100 мг 106662 98,83% 0,90% 0,18% 0,17% Treanda® 100 мг TA31510 99,24% 0,23% 0,17% 0,18%

Пример 13

Получение партии флаконов, содержащих 100 мг активного ингредиента

Количество на флакон Соотношение Маннит:АФИ АФИ 100 мг 1,0 Маннит 100 мг NaCl - Объем раствора для лиофилизации 20 мл

В 2-литровый реактор, оснащенный термокриостатом и механической мешалкой, охлажденный до температуры 0°С и покрытый алюминиевым листом для защиты раствора от света, загружали раствор, содержащий 6,0 г маннита, растворенных в 1,2 л воды для инъекций. После того как раствор достигал теплового равновесия при температуре 0-2°С, в него добавляли 6,03 г бендамустина гидрохлорида (имеющего чистоту 99,8% и содержание примеси HP1 0,11%). Полное растворение твердого вещества происходило примерно через 30 секунд. Смесь перемешивали при температуре 0-2°С в течение 2 часов, затем фильтровали и загружали в систему заполнения флаконов. В каждый из 60 флаконов 50H из темного стекла заливали 20 мл этого раствора, флаконы предварительно закрывали резиновыми пробками для лиофилизации и загружали в контейнер, чтобы затем перенести в лиофилизатор Mini Lyo SMH 45 (Usifroid) с полками, заранее охлажденными до температуры 3°С.

Описание цикла лиофилизации приводится в следующей таблице:

Полки цикла лиофилизации T Значение температуры (°С) Значение времени (мин) Загрузка на предварительно охлажденные полки +3°С В течение загрузки флаконов Замораживание (охлаждение полок) -45°С 48 Замораживание (поддержание температуры полок) -45°С 300 Медленное нагревание (нагревание полок) (0,5°/мин)
-10°С 70 Медленное нагревание (поддержание температуры полок) -10°С 180 Медленное охлаждение (охлаждение полок) (0,5°/мин)
-45°С 70 Медленное охлаждение (поддержание температуры полок) -45°С 240 Сублимация (нагревание полок) -20°С 250 Сублимация (поддержание температуры полок) -20°С 5760 Значение давления в сублимационной камере: 100 микробар Десорбция (нагревание полок) +25°С 225 Десорбция (поддержание температуры полок) +25°С 2450 Значение давления в камере для закупорки пробок: 700±50 мбар

В конце цикла лиофилизации флаконы закрывали, герметично закупоривали и выгружали, и некоторые из них анализировали на содержание воды и чистоту лиофилизированного продукта, определяемую методом ВЭЖХ. Полученные данные приведены в следующей таблице.

HP1 Чистота бендамустина Содержание воды (по Карлу Фишеру) Флакон № 5 0,52% 99,38% 0,55% Флакон № 11 0,47%

Количества примесей димер трихлорид и сложный этиловый эфир, определяемых методом ВЭЖХ (см. Пример 1), который имел предел обнаружения 0,02% и предел дискретизации 0,03% для каждой из вышеупомянутых примесей, были не поддающимися обнаружению.

Для определения содержания остаточных количеств растворителей флакон лиофилизированного продукта анализировали при помощи HSGC (газовая хроматография в свободном пространстве над продуктом).

Анализ показал, что лиофилизированный продукт не содержал поддающихся обнаружению остаточных количеств растворителей. Предел обнаружения используемого метода составлял 10 м.д.

Данные ПРД анализа лиофилизированного продукта флакона приведены на Фигуре 7.

Один флакон восстанавливали при комнатной температуре 20 мл воды для инъекций, наблюдая полное растворение в течение одной минуты.

Группа изобретений относится к химико-фармацевтической промышленности и представляет собой способ получения лиофилизированного препарата и сам препарат бендамустина гидрохлорида для лечения хронического лимфоцитарного лейкоза и неходжкинской лимфомы, лиофилизированный из водного раствора, содержащего маннит и не содержащего органических растворителей, где указанный бендамустина гидрохлорид имеет чистоту, определяемую ВЭЖХ анализом, выше 99% и где соотношение маннита и бендамустина гидрохлорида составляет от 4,25 до 0,545. Также изобретения включают прозрачный и бесцветный раствор, восстановленный водой для инъекций из указанного выше препарата. Группа изобретений позволяет получить препарат с минимальным разложением бендамустина, где количество примесей, связанных с разложением активного вещества, не будет превышать 1 %. К тому же, добавление меньшего количества маннита по сравнению с уровнем техники уменьшает риск растрескивания флаконов в результате неконтролируемой кристаллизации маннита. 5 н. и 5 з.п. ф-лы, 8 ил., 13 пр.

1. Лиофилизированный препарат бендамустина гидрохлорида для лечения хронического лимфоцитарного лейкоза и неходжкинской лимфомы, лиофилизированный из водного раствора, содержащего маннит и не содержащего органических растворителей, где указанный бендамустина гидрохлорид имеет чистоту, определяемую ВЭЖХ анализом, выше 99% и где соотношение маннита и бендамустина гидрохлорида составляет от 4,25 до 0,545.

2. Препарат по п.1, в котором бендамустина гидрохлорид имеет чистоту выше 99,5%.

3. Препарат по любому одному из пп.1 или 2, дополнительно содержащий NaCl.

4. Препарат по п.1, в котором массовое процентное содержание маннита составляет 120% от массы бендамустина гидрохлорида.

5. Прозрачный и бесцветный раствор, восстановленный водой для инъекций, полученный из препарата по любому из предшествующих пунктов, содержащий 5 мг/мл активного ингредиента.

6. Прозрачный и бесцветный раствор для лечения хронического лимфоцитарного лейкоза и неходжкинской лимфомы, восстановленный водой для инъекций, полученный из препарата по п. 1 или 2, содержащий 2,5 мг/мл активного ингредиента.

7. Способ получения лиофилизированных препаратов бендамустина для лечения хронического лимфоцитарного лейкоза и неходжкинской лимфомы по любому из предшествующих пунктов, включающий в себя стадию приготовления водного раствора маннита с концентрацией от 8,5 до 3 мг/мл, стадию растворения бендамустина гидрохлорида в водном растворе маннита при температуре от 0°С до +5°С, где конечная концентрация активного ингредиента в растворе до лиофилизации составляет от 5,5 до 2,0 мг/мл, и стадию лиофилизаци указанного раствора.

8. Способ по п.7, где водный раствор маннита содержит NaCl.

9. Способ по п.8, где концентрация NaCl в предназначенном для лиофилизации растворе составляет от 0,1% до 1% масса/объем.

10. Лиофилизированный препарат бендамустина гидрохлорида для лечения хронического лимфоцитарного лейкоза и неходжкинской лимфомы, полученный способом по любому из пп. 7-9, не содержащий остаточных количеств органических растворителей и имеющий чистоту, определяемую ВЭЖХ анализом, выше 99%.