СТИМУЛЯТОР РОСТА КЛЕТОК УГЛЕВОДОРОДОКИСЛЯЮЩИХ БАКТЕРИЙ RHODOCOCCUS ERYTHROPOLIS (ВАРИАНТЫ) Российский патент 2019 года по МПК C12N1/38 C12N1/20 C07C59/70 C07C215/40 C12R1/01 

Область техники

Изобретение относится к биотехнологической экологии, а именно, к защите окружающей среды биотехнологическими способами. Изобретение может быть использовано для разработки способов биоремедиации загрязненных нефтью и/или нефтепродуктами объектов окружающей среды (грунтов, водных поверхностей и других) с помощью углеводородокисляющих бактерий Rhodococcus erythropolis не только при высоких среднегодовых температурах южных регионов, но и при низких температурах, характерных для вод озера Байкал и арктических морей, а также воды и почв северных регионов.

Уровень техники

В настоящее время существует значительное количество методов, позволяющих снизить загрязнение окружающей среды [1, 2]. Наиболее перспективными являются биологические методы очистки от нефти и нефтепродуктов. Они основаны на использовании биопрепаратов, содержащих углеводородокисляющие микроорганизмы, либо направлены на активизацию метаболизма и увеличение скорости роста углеводородокисляющих микроорганизмов [1-9].

Многие месторождения нефти в мире, и особенно, в России расположены в северных регионах. В связи с этим большое внимание уделяется изучению процессов биоремедиации при низких положительных температурах. Это обстоятельство инициировало исследование и поиск психрофильных микроорганизмов-деструкторов нефти и нефтепродуктов [10], в том числе Rhodococcus erythropolis.

Известные формы биопрепаратов, используемые для очистки от нефти и нефтепродуктов, применяются обычно в виде водной суспензии микроорганизмов, или обезвоженной микробной биомассы, или иммобилизованных на твердом носителе микробных клеток. Это обстоятельство требует дополнительных питательных элементов в виде минеральных и органических удобрений. Питательные элементы либо дополнительно вносят в почву до или после внесения в почву биопрепаратов [11-13], либо формы препаратов уже содержат в своем составе минеральную добавку азота, фосфора, калия, либо органический субстрат - носитель [14-19].

Недостатками таких препаратов являются высокие затраты, вытекающие из дополнительной стоимости минеральных и органических удобрений, и из-за необходимых при этом дополнительных приемов обработки почвы, например, аэрации [11], значительно увеличивающие трудоемкость работ.

В естественных условиях процессы биодеградации протекают медленно, особенно в регионах с пониженной температурой. Для решения задачи активизации процессов жизнедеятельности углеводородокисляющих микроорганизмов наиболее рациональным представляется применение биологически активных соединений в качестве стимуляторов роста бактерий.

Стимуляция природной микрофлоры нефтезагрязненных объектов проводится путем улучшения аэрации, изменения водного и температурного режимов, условий азотного питания, внесения эмульгаторов [20, 21]. В некоторых случаях исследователи наблюдали не только улучшение очистки, но и обнаруживали негативное влияние некоторых компонентов при внесении их в нефтезагрязненную среду [22]. В качестве стимуляторов роста используют гуминовые препараты, органические отходы птицефабрик (куриный помет), спиртовую барду, водный экстракт из избыточных активных илов биологических очистных сооружений нефтехимических предприятий, суспендированное комплексное гуминовой удобрение, содержащие гуминовые и фульвиновые соединения), мелафен (меламиновая соль бис(оксиметил)фосфиновой кислоты) [23, 24].

Наиболее близким к предлагаемому, является техническое решение, в котором в качестве стимулятора роста клеток бактерий Escherichia coli предложена смесь водорастворимых солей органических кислот. В качестве анионов используются ацетат-анион, лактат-анион, сукцинат-анион или глутамат-анион. В качестве катионов используются металлы 1 или 2 групп Периодической системы Д.И. Менделеева или аммоний. Стимулятор обладает эффективным воздействием на клетки Е. coli и имеет стандартизированный состав [25].

Цель настоящего изобретения - создание доступных синтетических средств, обладающих ростстимулирующей активностью в отношении углеводородокисляющих микроорганизмов p. Rhodococcus при низких положительных температурах.

Раскрытие изобретения

Техническим результатом изобретения является увеличение скорости генерации углеводородокисляющих микроорганизмов Rhodococcus erythropolis, в том числе, при низких положительных температурах, с одновременным снижением негативного влияния на окружающую среду.

Технический результат достигается применением арилхалькогенилацетатов трис(2-гидроксиэтил)аммония общей формулы ArYCH₂CO₂^-⋅HN⁺(CH₂CH₂OH)₃ (А), где Ar = арил; Y=O(1), S(2), SO₂(3), синтезированных на основе биогенных алканоламинов (триэтаноламина) и биологически активных арилхалькогенилуксусных кислот в качестве биостимуляторов роста углеводородокисляющих бактерий Rhodococcus erythropolis. В качестве биостимуляторов роста углеводородокисляющих бактерий Rhodococcus erythropolis применяют в частности, соединения (1-3):

2-СН₃-C₆H₄OCH₂CO₂^-⋅HN⁺(CH₂CH₂OH)₃ (1) или

4-Cl-C₆H₄SCH₂CO^2-⋅HN⁺(CH₂CH₂OH)₃ (2) или

4-Cl-C₆H₄SO₂CH₂CO₂^-⋅HN⁺(CH₂CH₂OH)₃ (3).

Синтезированные авторами в Иркутском институте химии им. А.Е. Фаворского СО РАН соединения А имеют уникальное трициклическое "атрановое", точнее, "протатрановое", строение [26-33]:

Арилхалькогенилацетаты трис(2-гидроксиэтил)аммония - «протатраны» А

Соединения А представляют собой бесцветные низкоплавкие порошки или вязкие протонные алканоламмониевые ионные жидкости (ПАИЖ), устойчивые при хранении и хорошо растворимые в воде, в спирте и в других органических растворителях [26-33].

Обладая необычными физико-химическими свойствами некоторые ПАИЖ, состоящие из биологически активных катионов аммония и анионов протонных кислот могут быстрее, чем другие соединения, преодолевать клеточные мембраны. Предполагается, что столь успешный транспорт ПАИЖ обуславливается тем, что они проникают через мембрану в форме водородосвязанных комплексов. Это делает ионные пары и их агрегаты «нейтральнее», облегчая проникновение через модельную мембрану [34].

Среди соединений А выявлены нетоксичные (LD₅₀=1300-6000 мг/кг) вещества, перспективные для сельского хозяйства, медицины, клинической микробиологии и биотехнологии с антиоксидантным, иммунотропным, антиаллергенным, противораковым, антиметастатическим, защитным рост- и ферментстимулирующим действием [26-32, 35-37].

В качестве углеводородокисляющих микроорганизмов предложен штамм Rhodococcus erythropolis (№4-08) изолированный в лаборатории микробиологии углеводородов ЛИН СО РАН из битума в районе природного нефтепроявления на оз. Байкал [38].

Впервые установлено, что соединения 1-3 являются эффективными биостимуляторами роста Rhodococcus. Так, добавленные в культуральную среду соединения 1-3 при низкой температуре (10°С), в микроконцентрациях (10^-4-10^-8 мас. %), в зависимости от типа аниона, многократно (в 2-16 раз) увеличивают скорость генерации бактерий рода Rhodococcus.

Для наглядного восприятия изобретения прилагаем графический иллюстративный материал.

Краткое описание иллюстративного материала

Фиг. 1 - Показано влияние соединения 1 на скорость роста Rhodococcus erythropolis (No. 4-08)

Фиг. 2 - Показано влияние соединения 2 на скорость роста Rhodococcus erythropolis (No. 4-08)

Фиг. 3 - Показано влияние соединения 3 на скорость роста Rhodococcus erythropolis (No. 4-08)

Осуществление изобретения

Влияние арилхалькогенилацетатов трис(2-гидроксиэтил)аммония (А) общей формулы ArYCH₂CO₂^-⋅HN⁺(CH₂CH₂OH), синтезированных на основе биогенных алканоламинов (триэтаноламина) и биологически активных арилхалькогенилуксусных кислот, в частности, соединений (1-3):

2-СН₃-С₆Н₄ОСН₂СО₂^-⋅HN⁺(CH₂CH₂OH)₃ (1),

4-Cl-C₆H₄SCH₂CO₂^-⋅HN⁺(CH₂CH₂OH)₃ (2)

4-Cl-C₆H₄SO₂CH₂CO₂^-⋅HN⁺(CH₂CH₂OH)₃ (3)

на рост углеводородокисляющего штамма Rhodococcus erythropolis (№4-08), изолированного из битума в районе природного нефтепроявления на оз. Байкал, подтверждено рядом лабораторных испытаний.

Штамм Rhodococcus erythropolis (№4-08), выделен в чистую культуру из битумных образований, формирующихся в процессе разгрузки нефти на границе донные осадки - водная толща в районе естественного нефтепроявления, расположенного у м. Горевой Утес (Средний Байкал)

Штамм Rhodococcus erythropolis (№4-08) способен к росту при широком диапазоне температур (+4 - +37°С) и различной солености (3-5%). Обладает углеводородокисляющей активностью. З а 92 часа эксперимента при 22°С окисляет n-алканы С₁₂-С₂₉ на 60-100%. Углеводороды с длиной цепи С₂₃-С₂₉ утилизирует полностью. Потребление родококком гидрофобных углеводородных субстратов сопровождается синтезом поверхностно-активных соединений гликолипидной природы. В геноме выявлено наличие alk-генов (алкангидроксилаз), ответственных за деградацию широкого спектра n-алканов [39, 40].

В качестве контроля посевы микроорганизмов проводили на минеральную среду с нефтью без внесения соединений 1-3.

Для установления влияния арилхалькогенилацетатов трис(2-гидроксиэтил)аммония (1-3) на рост микроорганизмов культивирование проводили в минеральной среде следующего состава, г/л: KH₂PO₄, 1; K₂HPO4, 1; CaCl₂⋅2H₂O, 0.02; MgSO₄⋅7H₂O, 0.2; FeCl₃, 0.05; NH₄NO₃, 1; рН - 7.2. При культивировании в экспериментальные колбы (объем 250 мл) со 100 мл минеральной среды добавляли 50 мкл нефти, 1 мл суспензии штамма, предварительно подготовленной по стандарту мутности (до 10⁴ кл/мл), а также соединения 1-3 в концентрации от 0.0001% (10^-4 мас. %) до 0.00000001% (1(10^-8 мас. %).

Культивирование проводили в течение 7 суток при 10°С и постоянной аэрации с использованием орбитального шейкера (BioSan OS-20, Латвия). Эксперимент проведен в трех повторностях для каждого вещества, каждой концентрации и одного штамма микроорганизма, отнесенного к Rhodococcus erythropolis (№4-08). В качестве контроля посевы микроорганизмов проводили на минеральную среду с нефтью без внесения арилхалькогенилацетатов трис(2-гидроксиэтил)аммония (1-3).

Учет численности микроорганизмов проводили методом подсчета клеток на фиксированных окрашенных флуорохромным красителем 4,6-диамино-2-фенилиндол (ДАФИ) мазках с помощью эпифлуоресцентного микроскопа (Axiolmager Ml, Zeiss, Germany). Для приготовления препаратов к обезвоженному в серии растворов этанола образцу добавляли рабочий раствор красителя до конечной концентрации 0.5 мкг/мл, выдерживали 3 мин. Подсчет клеток микроорганизмов проводили прямым счетом в момент постановки эксперимента (исходное количество бактерий), затем на 1, 2, 3, 4, 7 сутки.

Возможности осуществления изобретения могут быть проиллюстрированы следующими примерами.

Пример 1

Общая методика синтеза арилхалькогенилацетатов трис(2-гидроксиэтил)аммония (1-3).

Раствор трис(2-гидроксиэтил)амина (триэтаноламина) и соответствующей арилхалькогенилуксусной кислоты в этиловом спирте (мольное соотношение 1:1) нагревали при 65°С 15-30 мин, выдерживали при 20-22°С в течение часа. Смесь выливали в диэтиловый эфир (абс.) и выдерживали 12 часов при 5-10°С. Осадок отфильтровывали, промывали эфиром и высушивали в вакууме. Получали бесцветные порошки, хорошо растворимые в воде и спирте.

Пример 2

Оценка влияния соединения 1

В условиях периодического культивирования в минеральной среде с нефтью без добавления соединений 1-3 (контроль) выявлено наличие довольно продолжительной (до 24 ч) лаг-фазы роста. Экспоненциальный рост Rhodococcus erythropolis начинается после 24 часов, при этом удельная скорость роста возрастает на порядок с 0.002 ч^-1 до 0.02 ч^-1. При внесении соединения 1 в концентрациях 10^-4-10^-6 мас. % на 1-е сутки культивирования лаг-фаза сокращается, скорость роста составляет от 0.007 до 0.03 ч^-1, соответственно. В дальнейшем, на 4 сутки культивирования, в присутствии соединения 1 в концентрации 10^-4-10^-6 мас. % при скорости роста 0.03 ч^-1 (время генерации - 20.6 ч) выявлено увеличение численности микроорганизмов в ~ 7-9 раз (Фиг. 1). В то время как в контроле на 4-е сутки скорость роста составляет 0.005 ч^-1, время генерации - 138 ч. Внесение 1 в более низких концентрациях (10^-7, 10^-8 мас. %.) значимого влияния на рост микроорганизма не оказывало (Фиг. 1).

Пример 3

Оценка влияния соединения 2

Влияние соединения 2 на скорость роста Rhodococcus erythropolis отмечено на третьи сутки (Фиг. 2). В данном случае наиболее эффективными оказались концентрации 10^-6-10^-8 мас. %, при которых отмечалось увеличение численности в 2-2.8 раза. При этом скорость роста составляла 0.06-0.07. ч^-1, что соответствует времени генерации равном 10 ч, в то время как в контроле μ=0.02 ч^-1, время генерации - 35 ч. Более высокие концентрации 10^-4-10^-5 мас. % приводили к торможению роста в сравнении с контролем.

Пример 4

Оценка влияния соединения 3

Наиболее эффективным биостимулятором оказалось соединение 3 в концентрации 10^-4 мас. %, при добавлении которого наблюдалось значимое влияние на ростовые характеристики (Фиг. 3). На 4-е сутки эксперимента численность бактерий увеличивалась в 16 раз. При этом скорость роста составляла 0.04 ч^-1, время генерации 16 ч. В то время как в контрольных образцах данные параметры составляли соответственно 0.01 ч^-1 и 38 ч. Более низкие или высокие концентрации этого вещества влияния на рост микроорганизмов не оказывали.

В результате проведенных исследований установлено, что арилхалькогенилацетаты трис(2-гидроксиэтил)аммония (1-3) являются эффективными биостимуляторами роста Rhodococcus erythropolis. Так, добавление в культуральную среду соединений 1-3 при низкой температуре (10°С), в микроконцентрациях (10^-4-10^-8 мас. %), в зависимости от концентрации и типа аниона многократно (до 16 раз) увеличивает скорость генерации бактерий Rhodococcus erythropolis.

Полученные результаты показывают перспективность применения арилхалькогенилацетатов трис(2-гидроксиэтил)аммония - «протатранов» А в качестве эффективных биостимуляторов роста, развития и активности бактерий-нефтедеструкторов Rhodococcus erythropolis. Высокая интенсивность роста и развития углеводородокисляющих бактерий Rhodococcus erythropolis достигаемая при воздействии на них синтезированных «протатранов», открывает возможности их применения в защите окружающей среды.

Преимуществом синтетических биостимуляторов 1-3 является их низкая стоимость, растворимость в воде, устойчивость при хранении, нетоксичность и эффективность в низких (1⋅10^-4 - 1⋅10^-8 % масс) концентрациях. Предлагаемые стимуляторы синтезированы из простых, доступных и недорогих исходных соединений (например, крезоксиуксусной кислоты и триэтаноламина). Обнаруженный эффект положительного влияния "протатрановых" соединений на увеличение скорости роста углеводородокисляющих микроорганизмов при низких положительных температурах может быть использован при разработке экологически безопасных и экономически выгодных способов восстановления объектов окружающей среды после их загрязнения нефтью.

Работа выполнена при финансовой поддержке темы государственного задания No. 0345-2016-0007, интеграционного проекта Иркутского научного центра СО РАН «Фундаментальные исследования и прорывные технологии...» и проекта РФФИ и Правительства Иркутской области №17-43-380006.

ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ

1. Rosa, A. Bioremediation process on Brazil Shoreline [Text] / A. Rosa, Triguis J.A. // Environ. Sci. Pollut. Res. - 2007. - V. 14. - P. 470-476.

2. Suitability of oil bioremediation in an Artie soil using surplus heating from an incineration facility [Text] / N. Couto [et al.] // Environ. Sci. Pollut. Res. - 2014. -V. 21.-P. 6221-6227.

3. Boronin, A.M. Bioremediation of land oil spills: diversity of microorganisms degrading oil hydrocarbons [Text] / A.M. Boronin, A.E. Filonov, LA. Kosheleva [et al.]. In: Brebbia C.A. (ed) Oil and hydrocarbon spills III: Modeling, Analysis and Control. - Boston: WIT Press, 2002. - P. 169-177.

4. Использование микроорганизмов в биотехнологии повышения нефтеизвлечения [Текст] / С.С. Беляев [и др.] // Микробиология. - 2004. - Т. 73. -№5. - С. 687-697.

5. Vogt, С.Bioremediation via in situ microbial degradation of organic pollutants [Text] / C. Vogt, H.H. Richnow //Adv. Biochem. Eng. Biotechnol. - 2014. -V. 142.-P. 123-146.

6. Scoma, A. Challenging oil bioremediation at deep-sea hydrostatic pressure [Text] / A. Scoma, M.M. Yakimov, N. Boon //Front. Microbiol. - 2016. - V. 7. - P. 1203.

7. Биогенное окисление высоковязкой нефти Ашальчинского месторождения и ее гетероорганических соединений [Текст] / Д.А. Филатов [и др.] //Нефтехимия. - 2017. - Т. 57. - №4. - С. 386 - 393.

8. Микроорганизмы низкотемпературных месторождений тяжелой нефти (Россия) и возможность их применения для вытеснения нефти [Текст] / Т.Н. Назина [и др.] //Микробиология. - 2017. - Т. 86. - №6. - С. 748-761.

9. Varjani, S.J. Critical review on biosurfactant analysis, purification and characterization using rhamnolipid as a model biosurfactant [Text] / S.J. Varjani, V.N. Upasani //Biores. Tecnol. - 2017. V. 232. - P. 389-397.

10. Стимуляция микробной деструкции нефти в почве путем внесения бактериальной ассоциации и минерального удобрения в лабораторных и полевых условиях [Текст] / И.А. Нечаева [и др.] // Биотехнология. - 2009. - 1. - С. 64-70.

11. Патент №2376084 РФ, МПК В09С 1/10; C12N 1/26; C12R 1/625; C12R 1/40; C12R 1/17; C12R 1/00. Способ восстановления почв и грунтов, загрязненных нефтью и нефтепродуктами, в том числе застарелых нефтяных загрязнений / Фердман В.М., Неваленова Т.В., Карева Е.С., Кузьмина Л.Ю., Мелентьев А.И.; Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственная фирма "Уральские промышленные технологии". - №2008140014/13; Заявл. 08.10.2008. Опубл. 20.12.2009. Бюл. №35.

12. Патент №2429089 РФ, МПК В09С 1/10; C12N 1/26. Способ очистки почвы от нефти и нефтепродуктов / Рогозина Е.А., Орлова Н.А., Свечина Р.М.; Федеральное государственное унитарное предприятие "Всероссийский нефтяной научно-исследовательский геологоразведочный институт". - №2010116532/21, Заявл. 26.04.2010. Опубл. 20.09.2011. Бюл. №26.

13. Патент №2378060 РФ, МПК В09С 1/10; C12N 1/26. Биопрепарат для очистки почв от загрязнений нефтью и нефтепродуктами, способ его получения и применения / Филонов А.Е., Кошелева И.А. и др.; Филонов А.Е., Шкидченко А.Н., Воронин A.M. - №2007125403/13. Заявл. 05.07.2007. Опубл. 10.01.2010. Бюл. №1.

14. Патент №2041172 РФ, МПК C02F 3/34; Е02В 15/04; C12N 1/20. Способ очистки почвы от нефти и нефтепродуктов / Белонин М.Д., Рогозина Е.А., Свечина Р.М.; Федеральное государственное унитарное предприятие "Всероссийский нефтяной научно-исследовательский геологоразведочный институт". -№93041475/13, Заявл. 25.08.1993. Опубл. 09.08.1995

15. Патент №2180276 РФ, МПК В09С 1/10; C12N 1/20; C12N 1/26; C12R 1/01. Олеофильный биопрепарат, используемый для очистки нефтезагрязненной почвы / Куюкина М.С., Ившина И.Б.; Институт экологии и генетики микроорганизмов УрО РАН. - №2001104629/13, Заявл. 10.02.2001. Опубл. 10.03.2002. Бюл. №7.

16. Патент №2390555 РФ, МПК C12N 1/26; C12Q 1/04. Питательная среда для выращивания углеводородокисляющих бактерий с повышенной деструктивной способностью / Погорельский И.П., Дробков В.И., Зиганшин Р.Ш.; Федеральное государственное учреждение "48 Центральный научно-исследовательский институт Министерства обороны Российской Федерации". - №2008141195/13, Заявл. 16.10.2008. Опубл. 27.05.2010. Бюл. №15.

17. Патент №2430892 РФ, МПК C02F 3/34; C12N 1/26 Бактериальный биопрепарат / Ботвинко И.В., Шпакова М.А. и др.; Ботвинко И.В. и Шпакова М.А. - №2010132730/10, Заявл. 05.08.2010. Опубл. 27.11.2010 Бюл. №33.

18. Патент №2565549 РФ, МПК В09С 1/10; B01J 20/16; C09K 17/40. Биопрепарат для биоремедиации нефтезагрязненных почв для климатических условий Крайнего Севера / Ерофеевская Л.А., Глязнецова Ю.С.; ОАО "Акционерная компания по транспорту нефти "Транснефть" (ОАО "АК "Транснефть"). - №2013155969/10, Заявл. 17.12.2013. Опубл. 27.06.2015. Бюл. №18.

19. Патент №2616398 РФ, МПК В09С 1/00. Биоремедиант для проведения рекультивации загрязненных нефтью и/или нефтепродуктами почв / Кардакова Т.С., Козьминых А.Н. и др.; ООО "БИО-МАРКЕТ". - №2015146815, Заявл. 29.10.2015. Опубл. 14.04.2017. Бюл. №11.

20. Wilkinson, S. Biodegradation of fuel oils and lubricants: soil and water bioremediation options [Text] / S. Wilkinson, S. Nicklin, J.L. Faul. In: Singh V.P., Stapleton R.D. (ed) Biotransformations: Bioremediation technology for health and environmental protection. - Amsterdam; London; New York; Oxford; Paris; Shannon; Tokyo: Elsevier Science, 2002. -P. 69-100.

21. Соколова, И.В. Интенсификация роста нефтеокисляющих микроорганизмов [Текст] / И.В. Соколова, И.В. Владимцева, О.В. Колотова, М.Е. Лыкова //Известия Тульского государственного университета. Серия «Экология и рациональное природопользование». - М.: Изд-во ТулГУ. - 2006. -№2. - С. 38-44.

22. Плешакова, Е.В. Получение нефтеокисляющего биопрепарата путем стимуляции аборигенной углеводородокисляющей микрофлоры [Текст] / Е.В. Плешакова, Н.Н. Позднякова, О.В. Турковская // Прикладная биохимия и микробиология. - 2005. - Т. 41. - №6. - С. 634-639.

23. Особенности процесса активации аборигенной микрофлоры для очистки почвы от экотоксикантов [Текст] / Г.Г. Ягафарова [и др.] //Вестник технологического университета. 2016. - Т. 19. - №11. - С. 205-207.

24. Влияние мелафена на микроорганизмы, входящие в состав активного ила очистных сооружений [Текст] / Е.О. Михайлова [и др.] //Вестник Казанского технологического университета. - 2011. - Т. 7. - С. 184 - 187.

25. Патент №2233875 РФ, МПК C12N 1/20; C12N 1/38; C12R 1/19. Стимулятор роста клеток бактерий Escherichia coli. / Вахитов Т.Я., Момот Е.Н. и Петров Л.Н.; Гос. научно-исслед. институт особо чистых биопрепаратов. -№2000129026/13, Заявл. 22.11.2000. Опубл. 10.08.2004. Бюл. №22.

26. Направленный синтез и иммуноактивные свойства 2-(гидроксиэтил)аммониевых солей 1-R-индол-3-ил-сульфанил(сульфонил)-алканкарбоновых кислот [Текст] / А.Н. Мирскова [и др.]// Известия АН. Сер. хим. - 2010. - №12. - С. 2181-2190.

27. Мирскова, А.Н. 2-Гидроксиэтиламмониевые соли органил-сульфанил(сульфонил)уксусных кислот - новые фармакологически активные соединения [Текст] / А.Н. Мирскова, Р.Г. Мирсков, С.Н. Адамович, М.Г. Воронков // Хим. интерес, устойч. развития. - 2011. - №19. - С. 467-478.

28. The proton transfer and hydrogen bonding complexes of (2-hydroxyethyl)amines with acids: A theoretical study [Text] / N. N. Chipanina [et al.] // Comput. Theor. Chem. - 2012. - V. 985. - P. 36^5.

29. Adamovich, S.N. Synthesis and crystal structure of 1,4,10,13-tetraoxa-7,16-diazoniumcyclo-octadecane bis(4-chloro-2-methyl-phenoxyacetate) [Text] / S.N. Adamovich, A.N. Mirskova, R.G. Mirskov, Uwe Schilde // Chem. Cent. J. -

2011. -V. 5.-P. 23.

30. Mirskova, A.N. Reaction of pharmacological active tris-(2-hydroxyethyl)ammonium 4-chlorophenylsulfanylacetate with ZnCl2 or NiCl2: first conversion of a protic ionic liquid into metallated ionic liquid [Text] / A.N. Mirskova, S.N. Adamovich, R.G. Mirskov, Uwe Schilde // Chem. Cent. J. - 2013. -V. 7.-P. 34.

31. Мирскова, А.Н. Фармакологически активные соли и ионные жидкости на основе 2-гидроксиэтиламинов, арилхалькогенилуксусных кислот и эссенциальных металлов [Текст] / А.Н. Мирскова, С.Н. Адамович, Р.Г. Мирсков, М.Г. Воронков // Известия АН. Сер. хим. - 2014. - Т. 9. - С. 1869-1883.

32. Immunoactive ionic liquids based on 2-hydroxyethylamines and 1-R-indol-3-ylsulfanylacetic acids. Crystal and molecular structure of immunodepressant tris-(2-hydroxyethyl)ammonium indol-3-ylsulfanylacetate [Text] / A.N. Mirskova [et al.]// Open Chem. - 2015. - V. 13. - P. 149.

33. The NMR study of biologically active metallated alkanol ammoinium ionic liquids [Text] / LA. Ushakov [et al.]// J. Mol. Struct. - 2016. - V. 1103. - P. 125-131.

34. Stoimenovski, J. Enhanced membrane transport of pharmaceutically active protic ionic liquids. [Text] / J. Stoimenovski, D.R. MacFarlane // Chem. Commun. -2011.-V. 47.-P. 11429-11431.

35. Комплекс бис-2-(метилфеноксиацетат) цинка с трис-2(гидроксиэтил)амином активатор синтеза суммарной триптофанил-трнксинтетазы [Текст] / М.М. Расулов [и др.] // Доклады академии наук. - 2012. -Т. 444. - С. 219-223.

36. Патент №2623034 РФ, МПК A61K 31/205; А61Р 35/00; А61Р 35/04. Противоопухолевое средство / Адамович С.Н., Мирскова А.Н. и Колесникова О.П.; Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Иркутский институт химии им. А.Е. Фаворского Сибирского отделения Российской академии наук. -№2016131263, Заявл. 28.07.2016. Опубл. 21.06.2017. Бюл. №18

37. Патент №2642778 РФ, МПК C07D 209/30. Способ получения 1-R-индол-3-илсульфанилацетатов (2-гидроксиэтил)аммония / Мирскова А.Н., Адамович С.Н. и Мирсков Р.Г.; Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Иркутский институт химии им. А.Е. Фаворского Сибирского отделения Российской академии наук. - №2016112716, Заявл. 04.04.2016. Опубл. 26.01.2018. Бюл. №3.

38. Патент РФ 2511031, МПК C12N 1/20; C12N 1/38; C12Q 1/14; C12R 1/445. Способ ускоренного выращивания золотистого стафилококка для диагностики инфекций, связанных с оказанием медицинской помощи / Крюкова Н.Ф., Адамович С.Н., Анганова Е.В., Мирсков Р.Г., Мирскова А.Н.; Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Иркутский институт химии им. А.Е. Фаворского Сибирского отделения Российской академии наук; Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научный центр проблем здоровья семьи и репродукции человека" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук; Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Иркутская государственная медицинская академия последипломного образования" Министерства здравоохранения РФ -№2012158118/10, Заявл. 28.12.2012. Опубл. 10.04.2014. Бюл. №10.

39. Do oil-degrading Rhodococci contribute to the genesis of deep water bitumen mounds in Lake Baikal ? [Text] / A. Likhoshvay [et al.] // Geomicrobiol. J. -2013.-V. 30.-P. 209-213.

40. Likhoshvay, A. The complete alk sequences of Rhodococcus erythropolis from Lake Baikal [Text] / A. Likhoshvay, A. Lomakina, M. Grachev // Springer Plus a Springer Open Journal. - 2014. - V. 3. - №621. - P. 1-5

Изобретение относится к биотехнологии и экологии. Предложено применение арилхалькогенилацетатов трис(2-гидроксиэтил)аммония общей формулы ArYCH₂CO₂^-⋅HN⁺(CH₂CH₂OH)₃, где Ar = арил; Y=О (1), S (2), SO₂ (3), в частности соединений или или , в качестве биостимулятора роста углеводородокисляющих бактерий Rhodococcus erythropolis. Изобретение позволяет увеличить скорость генерации углеводородокисляющих бактерий Rhodococcus при использовании соединений 1-3 в микроконцентрации 10^-4 - 10^-8 мас. % и при температуре +10°С, характерной для почв северных регионов, а также вод арктических морей и озера Байкал. Изобретение может быть использовано при разработке ускоренных и экологически безопасных методов очистки и восстановления объектов окружающей среды после их загрязнения нефтью или нефтепродуктами. 3 ил, 4 пр.

Применение арилхалькогенилацетатов трис(2-гидроксиэтил)аммония формулы ArYCH₂CO₂^-⋅HN⁺(CH₂CH₂OH)₃, где Ar=арил; Y=O (1), S (2), SO₂ (3), синтезированных на основе биогенных алканоламинов (триэтаноламина) и биологически активных арилхалькогенилуксусных кислот, в качестве биостимулятора роста углеводородокисляющих бактерий Rhodococcus erythropolis, в частности соединений

или

или

.