ПИРИДАЗИНОНОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ В КАЧЕСТВЕ ИНГИБИТОРОВ ФОСФОИНОЗИТИД-3-КИНАЗ Российский патент 2019 года по МПК C07D487/04 C07D403/12 C07D473/34 A61K31/519 A61P11/00 A61P29/00 A61P37/00 

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к соединениям, ингибирующим фосфоинозитид-3-киназы (далее PI3K); в частности изобретение относится к пиридазиноновым производным, к способам получения таких соединений, к содержащим их фармацевтическим композициям и к их терапевтическому применению.

Соединения по изобретению являются ингибиторами активности или функции PI3K класса I и, более конкретно, они представляют собой ингибиторы активности или функции изоформ PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kδ и/или PI3Kγ PI3K класса I.

Таким образом, соединения по изобретению могут быть полезными в лечении множества расстройств, ассоциированных с механизмами, опосредованными ферментами PI3K, таких как респираторные заболевания, включающие астму, хроническое обструктивное заболевание легких (COPD) идиопатический фиброз легких (IPF) и кашель; аллергические заболевания, включающие аллергический ринит и атопический дерматит; аутоиммунные заболевания, включающие системную красную волчанку, ревматоидный артрит и рассеянный склероз; воспалительные расстройства, включающие воспалительное заболевание кишечника; сердечно-сосудистые заболевания, включающие тромбоз и атеросклероз; гемобластозы; муковисцидоз; нейродегенеративные заболевания, панкреатит; полиорганная недостаточность; заболевания почек; агрегация тромбоцитов; рак; подвижность сперматозоидов; трансплантация органов и, в частности, отторжение при трансплантации; отторжение трансплантата; повреждения легких; и боль, включая боль, ассоциированную с ревматоидным артритом или остеоартритом, боль в спине, общую воспалительную боль, постгерпетическую невралгию, диабетическую нейропатию, воспалительную нейропатическую боль, невралгию тройничного нерва и центральную боль.

Предшествующий уровень техники

В биохимии киназа представляет собой тип фермента, который переносит фосфатные группы от высокоэнергетических донорных молекул, таких как АТР (аденозинтрифосфат), на специфические субстраты, при этом процесс называется фосфорилированием. Конкретно, ферменты PI3K представляют собой липидные ферменты - киназы, которые могут фосфорилировать фосфоинозитиды (PI) по 3'-гидроксильной группе инозитольного кольца (Panayotou et al., Trends Cell Biol 2:358-60 (1992)). Хорошо известно, что PI, локализованные в плазматических мембранах, могут действовать в качестве вторичных мессенджеров в сигнальных каскадах посредством докинга белков, содержащих плекстрин-гомологичные (РН), FYVE, РХ и другие фосфолипид-связывающие домены (Vanhaesebroeck В et al., Annu. Rev. Biochem 70, 535-602, 2001; Katso R et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17, 615-675, 2001).

Следовательно, PI могут действовать в качестве вторичных мессенджеров во многих клеточных процессах, включая сигнальную трансдукцию, регуляцию переноса и транспорта через мембрану, формирование цитоскелета, выживание и гибель клеток, и многие другие функции.

PI могут быть соединены с липидным бислоем клеточной мембраны посредством двух жирных кислот, которые присоединены к цитозольному инозитольному кольцу через глицерин-фосфатный линкер. Инозитольное кольцо PI может быть фосфорилировано ферментами PI3K, что приводит к регуляции клеточного роста, выживания и пролиферации. По этой причине фосфорилирование PI ферментами PI3K является одним из наиболее важных событий сигнальной трансдукции, связанных с активацией поверхностных рецепторов клеток млекопитающих (Cantley LC, Science 296, 1655-7, 2002; Vanhaesebroeck В et al., Annu. Rev. Biochem 70, 535-602, 2001).

Ферменты PI3K разделены на три класса: PI3K класса I, PI3K класса II и PI3K класса III, на основании гомологии последовательностей, структуры, партнеров связывания, способа активации и субстратного предпочтения (Vanhaesebroeck В et al., Exp. Cell Res. 253(1), 239-54, 1999; и Leslie NR et al., Chem. Rev. 101(8), 2365-80, 2001).

PI3K класса I превращает фосфоинозитид-(4,5)-дифосфат (PI(4,5)P2) в фосфоинозитид-(3,4,5)-трифосфат (PI(3,4,5)P3), который функционирует как вторичный мессенджер. Сигнальный каскад, активируемый посредством повышения внутриклеточных уровней PI(3,4,5)P3 негативно регулируется посредством действия 5'-специфичных и 3'-специфичных фосфатаз (Vanhaesebroeck В et al., Trends Biochem. Sci. 22(7), 267-72, 1997; Katso R et al., Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 17, 615-75, 2001; и Toker A, Cell. Mol. Life Sci. 59(5), 761-79, 2002).

Ферменты PI3K класса II представляют собой совсем недавно идентифицированный класс PI3K, и их точная функция пока еще не ясна.

Ферменты PI3K класса III состоят из одного представителя семейства, который является структурно родственным ферментам PI3K класса I, и, как оказалось, играет важную роль в эндоцитозе и везикулярном транспорте. Однако, имеются свидетельства, демонстрирующие, что PI3K класса III могут иметь отношение к таким процессам в иммунных клетках, как фагоцитоз и передача сигналов через Toll-подобные рецепторы (TLR).

Ферменты PI3K класса I могут быть дополнительно разделены на класс IA и класс IB на основании механизмов их активации.

Подробнее, ферменты PI3K класса IA включают три близкородственных изоформы: PI3Kα, PI3Kβ и PI3Kδ, тогда как класс IB включает только изоформу PI3Kγ. Эти ферменты являются гетеродимерами, состоящими из каталитической субъединицы, известной как р110, с четырьмя типами: альфа (α), бета (β), дельта (δ) и гамма (γ) изоформ, конститутивно связанной с регуляторной субъединицей. Первые две изоформы р110 (α и β) экспрессируются повсеместно и участвуют в дифференциации и пролиферации клеток. Поэтому ферменты PI3Kα и PI3Kβ широко исследовались в качестве мишеней для разработки новых химиотерапевтических агентов.

В свою очередь, изоформы р110δ и р110γ экспрессируются главным образом в лейкоцитах и важны в активации иммунного ответа, например миграции лейкоцитов, активации В- и Т-клеток и дегрануляции тучных клеток. Поэтому изоформы PI3Kδ и PI3Kγ очень важны в воспалительных респираторных заболеваниях и раке.

На сегодняшний день производные ингибиторов ферментов PI3K, известные в данной области техники в общем случае могут ингибировать указанные изоформы (изоформы альфа α, бета β, дельта δ и гамма γ), и они могут воздействовать на отдельные роли, которые играют указанные конкретные изоформы в различных заболеваниях.

Следовательно, широко разрабатываются анализы специфической активности ингибиторов класса IA в отношении одной конкретной изоформы PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kδ и PI3Kγ по сравнению с другой, чтобы установить подходящий профиль лечения расстройств, ассоциированных с механизмами действия ферментов PI3K. Такие расстройства могут, например, включать респираторные заболевания, выбранные из идиопатического хронического кашля, кашлевой астмы, кашля, ассоциированного с опухолью органов грудной клетки или раком легкого, вирусного или поствирусного кашля, кашлевого синдрома верхних дыхательных путей (UACS) или кашля, вызванного отеканием слизи из носоглотки, или кашля, ассоциированного с гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью, как кислотной, так и некислотной, астмы, хронического бронхита, хронического обструктивного заболевания легких (COPD), интерстициального заболевания легких, идиопатического легочного фиброза (IPF), застойной сердечной недостаточности, саркоидоза, инфекций (таких как коклюш); вирусные инфекции, включающие вирусные инфекции дыхательных путей и вирусное обострение респираторных заболеваний, невирусные респираторные инфекции, включающие аспергиллез и лейшманиоз; аллергические заболевания, включающие аллергический ринит и атопический дерматит; аутоиммунные заболевания, включающие системную красную волчанку, ревматоидный артрит и рассеянный склероз; воспалительные расстройства, включающие воспалительное заболевание кишечника; сердечно-сосудистые заболевания, включающие тромбоз и атеросклероз; гемобластозы; нейродегенеративные заболевания; панкреатит; полиорганную недостаточность; заболевания почек; агрегацию тромбоцитов; рак; подвижность сперматозоидов; отторжение при трансплантации; отторжение трансплантата; повреждения легких; и боль, включая боль, ассоциированную с ревматоидным артритом или остеоартритом, боль в спине, общую воспалительную боль, постгерпетическую невралгию, диабетическую нейропатию, воспалительную нейропатическую боль (травма), невралгию тройничного нерва и центральную боль.

Принимая во внимание большое количество патологических ответов, опосредованных ферментами PI3K, остается необходимость в ингибиторах ферментов PI3K, которые могут быть полезными в лечении многих расстройств. Таким образом, настоящее изобретение относится к новым соединениям, являющимся ингибиторами изоформ PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kδ и PI3Kγ ферментов PI3K класса I, которые по вышеуказанным причинам часто могут иметь желательные терапевтические характеристики.

В частности, соединения по изобретению могут обладать гораздо большей селективностью в отношении δ-изоформы фермента PI3K, чем в отношении других изоформ того же фермента.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I)

где R₁, R₂, R₃, R₄, R₅, Су, Z, m, n и р являются такими, как представлено ниже в подробном описании изобретения, действующим в качестве ингибиторов фосфоинозитид-3-киназ, к способам их получения, к фармацевтическим композициям, содержащим их, либо самих по себе, либо в комбинации с одним или более чем одним активным ингредиентом, в смеси с одним или более чем одним фармацевтически приемлемым носителем.

В одном из аспектов изобретения предложено применение соединения по изобретению для изготовления лекарственного средства.

В еще одном аспекте изобретения предложено применение соединения по изобретению для изготовления лекарственного средства для предупреждения и/или лечения любого заболевания, характеризующегося повышенной активностью фермента фосфоинозитид-3-киназы (PI3K), и/или при котором желательно ингибирование активности PI3K, и в частности путем избирательного ингибирования дельта-изоформы или и дельта-, и гамма-изоформ фермента по сравнению с альфа- и бета-изоформами.

Кроме того, в изобретении предложен способ предупреждения и/или лечения любого заболевания, при котором желательно ингибирование фермента PI3K, где указанный способ включает введение пациенту, нуждающемуся в таком лечении, терапевтически эффективного количества соединения по изобретению.

В частности, соединения по изобретению сами по себе или в комбинации с другими активными ингредиентами могут быть введены для предупреждения и/или лечения заболевания дыхательных путей, характеризующегося воспалительной обструкцией дыхательных путей, такого как, например, кашель, астма, COPD и IPF.

Ингибиторы PI3K широко известны в данной области техники, и раскрыты, например, в "PI3Kδ and PI3Kγ as Targets for Autoimmune and Inflammatory Diseases", Timothy D. Cushing, Daniela P. Metz, Douglas A. Whittington, and Lawrence R. McGee; Journal of Medicinal Chemistry 2012 55 (20), 8559-8581. Кроме того, производные изокумаринов и индолизинов раскрыты в качестве ингибиторов PI3K в европейских заявках на патенты ЕР 13197986.6 и ЕР 14172764.4 от имени Chiesi Farmaceutici.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Данное изобретение относится к классу соединений, действующих в качестве ингибиторов фосфоинозитид-3-киназ (PI3K).

Указанный класс соединений ингибирует активность или функцию PI3K класса I, и более конкретно они представляют собой производные ингибиторов активности или функции изоформ PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kγ и/или PI3Kδ PI3K класса I. Соединения по изобретению имеют следующую формулу (I)

где

R₁ и R₄ могут быть одинаковыми или разными и независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, галогена, -CN, -(CH₂)_pNR₆R₇, (С₁-С₆)алкила, (С₁-С₆)галогеноалкила, (С₁-С₆)гидроксиалкила, (С₁-С₆)аминоалкила, (С₁-С₆)алканоила, (С₃-С₇)циклоалкила, (С₂-С₆)алкенила и (С₂-С₆)алкинила, арила, гетероарила и гетероциклоалкила, где указанный арил, гетероарил и гетероциклоалкил возможно и независимо замещен одной или более чем одной группой, выбранной из галогена, -ОН, -(CH₂)_pNR₆R₇, -CN, (С₁-С₆)алкила, (С₁-С₆)галогеноалкила, (С₁-С₆)гидроксиалкила, (С₂-С₆)алкенила, (С₂-С₆)алкинила, (С₂-С₆)гидроксиалкинила;

R₂ и R₃ могут быть одинаковыми или разными, и выбраны из группы, состоящей из: Н; (С₁-С₆)алкила; (С₁-С₆)галогеноалкила;

R₅ выбран из группы, состоящей из: -NR₆R₇, (С₁-С₆)алкила, (С₁-С₆)галогеноалкила, (С₁-С₆)гидроксиалкила, (С₁-С₆)аминоалкила, (С₁-С₆)алканоила, (С₃-С₇)циклоалкила, (С₅-С₇)циклоалкенила, (С₂-С₆)алкенила и (С₂-С₆)алкинила, арила, гетероарила и гетероциклоалкила; где указанный арил, гетероарил и гетероциклоалкил возможно и независимо замещены одной или более чем одной группой, выбранной из галогена, -ОН, -CN, (С₁-С₆)алкила, (C₁-С₆)галогеноалкила, (С₁-С₆)гидроксиалкила, (С₂-С₆)алкенила, (С₂-С₆)алкинила, (С₂-С₆)гидроксиалкинила;

Су представляет собой гетероарил, который может быть возможно и независимо замещен одной или более чем одной группой, выбранной из галогена, -ОН, -(CH₂)_pNR₆R₇; -CN, -CH=NOH, -C(O)NR₆R₇, -C(O)OR₆, (C₁-С₆)алкила, (С₁-С₆)галогеноалкила, (С₁-С₆)гидроксиалкила, (С₁-С₆)алканоила, (С₂-С₆)алкенила, (С₂-С₆)алкинила, (С₂-С₆)гидроксиалкинила, арила, гетероарила и гетероциклоалкила, где указанный арил, гетероарил и гетероциклоалкил могут быть возможно и независимо замещены одной или более чем одной группой, выбранной из -ОН, галогена, -CN, -S(O)₂NR₆R₇, -NR₆S(O)₂R₇, -NR₆R₇, (С₁-С₆)алкила, (С₁-С₆)галогеноалкила, (С₁-С₆)гидроксиалкила, (С₁-С₆)алкокси;

R₆, R₇ в каждом случае могут иметь одинаковые или разные значения и независимо выбраны из группы, состоящей из -Н и (С₁-С₆)алкила, (C₁-С₆)галогеноалкила, (С₁-С₆)гидроксиалкила, (С₁-С₆)аминоалкила, (С₁-С₆)алканоила и арил(С₁-С₆)алканоила, или, когда R₆ и R₇ оба соединены с атомом азота, они могут образовывать, взятые вместе с атомом азота, с которым они соединены, 4-6-членный гетероцикл, возможно содержащий один(ну) или более дополнительный гетероатом или гетероатомную группу, выбранную из О, S, N, NH;

Z, когда присутствует, представляет собой атом или группу, выбранную из -О-, -NH-, -С(О)-, -NHC(O)-, -C(O)NH-, -S-, -S(O)- и -S(O)₂-;

m равен нулю или 1;

n равен 1 или 2;

р равен нулю или представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 3;

или его фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ

При использовании здесь термин 'фармацевтически приемлемые соли" относится к производным соединений формулы (I), где исходное соединение соответствующим образом модифицировано посредством превращения какой-либо свободной кислотной или основной группы, если они присутствуют, в соответствующую соль присоединения какого-либо основания или кислоты, обычно предполагаемую фармацевтически приемлемой.

Таким образом, подходящие примеры указанных солей могут включать соли присоединения неорганических или органических кислот к основным остаткам, таким как аминогруппы, а также соли присоединения неорганических или органических оснований к кислотным остаткам, таким как карбоксильные группы.

Катионы неорганических оснований, которые могут быть подходящим образом использованы для получения солей по изобретению, могут содержать ионы щелочных или щелочноземельных металлов, таких как калий, натрий, кальций или магний, или даже аммониевые соли.

Соли, полученные путем взаимодействия соединения формулы (I), действующего в качестве основания, с неорганической или органической кислотой с образованием соли, включают, например, соли соляной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, метансульфоновой кислоты, толуолсульфоновой кислоты, камфорсульфоновой кислоты, уксусной кислоты, щавелевой кислоты, малеиновой кислоты, фумаровой кислоты, янтарной кислоты и лимонной кислоты.

Аналогично, соединения по изобретению, несущие кислотные или основные группы, могут подходящим образом, как сообщалось выше, образовывать соли с аминокислотами.

В описании настоящего изобретения, если не предложено иное, термин "галоген" или "атом галогена" включает фтор, хлор, бром и йод, предпочтительно хлор или фтор.

Термин "(С₁-С₆)алкил" относится к алкильным группам с прямой или разветвленной цепью, где количество входящих в состав атомов углерода находится в диапазоне от 1 до 6. Особенно предпочтительные алкильные группы представляют собой метил, этил, н-пропил, изопропил и трет-бутил.

Выражение "(С₁-С₆)галогеноалкил" относится к определенным выше группам "(С₁-С₆)алкил", где один или более чем один атом водорода заменен одним или более чем одним атомом галогена, которые могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга.

Таким образом, примеры указанных (С₁-С₆)галогеноалкильных групп могут включать галогенированные, полигалогенированные и полностью галогенированные алкильные группы, где в последнем случае все атомы водорода заменены на атомы галогена. Таким образом, предпочтительные примеры (С₁-С₆)галогеноалкильных групп могут быть представлены трифторметильными или дифторметильными группами.

По аналогии термины "(С₁-С₆)гидроксиалкил" или "(С₁-С₆)аминоалкил" относятся к определенным выше "(С₁-С₆)алкильным" группам, где один или более чем один атом водорода заменен одной или более чем одной гидрокси или аминогруппой соответственно.

Термин "(С₃-С₇)циклоалкил" относится к насыщенным циклическим углеводородным группам, содержащим от 3 до 7 кольцевых атомов углерода, таким как, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил.

Термин "(С₂-С₆)алкенил" относится к прямым или разветвленным углеродным цепям с одной или более чем одной двойной связью, конъюгированной или не конъюгированной, находящейся в цис- или транс-конфигурации, где количество атомов углерода составляет от 2 до 6.

Аналогично, термин "(С₅-С₇)циклоалкенил" относится к циклическим углеводородным группам, содержащим от 5 до 7 кольцевых атомов углерода и одну или две двойные связи.

Термин "(С₂-С₆)алкинил" относится к прямым или разветвленным углеродным цепям с одной или более чем одной тройной связью, где количество атомов углерода составляет от 2 до 6.

Аналогично, выражение "(С₂-С₆)гидроксиалкинил" относится к вышеуказанным алкинильным группировкам, где один или более чем один атом водорода заменен одной или более чем одной гидроксильной группой.

Выражение "арил" относится к моно, би- или три циклическим углеродным кольцевым системам, которые имеют от 6 до 20, предпочтительно от 6 до 15 кольцевых атомов, где по меньшей мере одно кольцо является ароматическим. Выражение "гетероарил" относится к моно-, би- или трициклическим кольцевым системам с 5-20, предпочтительно 5-15 кольцевыми атомами, в которых по меньшей мере одно кольцо является ароматическим и в которых по меньшей мере один кольцевой атом представляет собой гетероатом или гетероароматическую группу (например N, NH, S или О).

Примеры подходящих арильных или гетероарильных моноциклических кольцевых систем включают, например, фенильные, тиенильные, пирролильные, пиразолильные, имидазолильные, изоксазолильные, оксазолильные, изотиазолильные, тиазолильные, пиридинильные, пиримидинильные, пиразинильные, триазинильные, фуранильные группы и т.п.

Примеры подходящих арильных или гетероарильных бициклических кольцевых систем включают нафталенильные, бифенильные, пуринильные, птеридинильные, пиразолопиримидинильные, бензотриазолильные, хинолинильные, изохинолинильные, индолильные, изоиндолильные, бензотиофенильные, бензодиоксинильные, дигидробензодиоксинильные, инденильные, дигидроинденильные, дигидробензодиоксепинильные, бензооксазинильные группы и т.п.

Примеры подходящих арильных или гетероарильных трициклических кольцевых систем включают флуоренильные, а также бензоконденсированные производные вышеуказанных гетероарильных бициклических кольцевых систем.

Выражение "гетероциклоалкил" относится к насыщенным или частично ненасыщенным моноциклическим циклоалкильным группам, в которых по меньшей мере один кольцевой атом углерода заменен по меньшей мере одним гетероатомом или гетерогруппой (например N, NH, S или О). Особенно предпочтительный "(С₃-С₆)гетероциклоалкил" относится к моноциклическим циклоалкильным группам, которые имеют от 3 до 6 кольцевых атомов, в которых по меньшей мере один кольцевой атом углерода заменен по меньшей мере одним гетероатомом или гетерогруппой. Примеры (С₃-С₆)гетероциклоалкила представлены: пирролидинильными, имидазолидинильными, тиазолидинильными, пиперазинильными, пиперидинильными, морфолинильными, тиоморфолинильными, дигидро- или тетрагидропиридинильными, тетрагидропиранильными, пиранильными, 2Н- или 4Н-пиранильными, дигидро- или тетрагидрофуранильными, дигидроизоксазолильными группами и т.п.

Из всего вышесказанного специалисту в данной области техники ясно, что любая группа или заместитель, определенная сложным названием, как предполагается, сконструирована из группировок, от которых она происходит. Таким образом, в качестве примера, термин "арил (С₁-С₆)алкил" относится к любой (С₁-С₆)алкильной группе, определенной выше, дополнительно замещенной арильной группой или кольцом, определенными выше. Таким образом, подходящие примеры вышеуказанных арил(С₁-С₆)алкильных групп могут включать фенилметил, более известный как бензил, фенилэтил или фенилпропил.

Термин "(С₁-С₆)алканоил" относится к НС(О)- (т.е. к формилу) или к алкилкарбонильным группам (например (С₁-С₆)алкилС(О)-, где группа "алкил" имеет значения, приведенные выше). Таким образом, примеры (С₁-С₆)алканоила могут включать формил, ацетил, пропаноил, бутаноил, изобутирил и т.п.

Термин "(С₁-С₆)алкокси" относится к прямому или разветвленному углеводороду с 1-6 атомами углерода, присоединенному к остальной части молекулы посредством кислородного мостика (например алкилоксигрупп). Таким образом, подходящие примеры (С₁-С₆)алкоксигрупп могут включать метокси, этокси, н-пропокси, изопропокси, н-бутокси и т.п.

Термин "арил(С₁-С₆)алканоил" относится к вышеуказанным (C₁-С₆)алканоильным группам, где алкильная группировка дополнительно замещена арильной группой, где арил и алкил имеют значения, определенные выше. Примеры представлены бензоильными, фенилацетильными, фенилпропаноильными или фенилбутаноильными группами.

При использовании здесь, выражение "кольцевая система" относится к моно- или бициклическим, или трициклическим кольцевым системам, которые могут быть насыщенными, частично ненасыщенными или ненасыщенными, таким как арил, (С₃-С₇)циклоалкил, (С₃-С₆)гетероциклоалкил или гетероарил.

Термины "группа", "радикал", или "фрагмент", или "заместитель" являются синонимами, и, как предполагается, указывают на функциональные группы или фрагменты молекул, присоединяемые к связи или другим фрагментам или молекулам. Подразумевается, что пунктир ("-"), который не расположен между двумя группами или символами, представляет точку присоединения заместителя. При графическом представлении точки присоединения в циклической функциональной группе (например в формулах с I-1 по I-9) она указывается точкой ("•"), расположенной у одного из имеющихся кольцевых атомов, по которому функциональная группа присоединяется к связи или другому фрагменту молекул.

Группировка "оксо" представлена (О) в качестве альтернативы другому обычному представлению, например (=O). Таким образом, в отношении общей формулы, карбонильная группа здесь предпочтительно представлена как -С(О)- в качестве альтернативы другим обычным представлениям, таким как -СО-, -(СО)- или -С(=O)-. В общем, заключенная в скобки группа представляет собой боковую группу, не включенную в цепь, и скобки используются тогда, когда это считается полезным для того, чтобы помочь устранить неоднозначность линейных химических формул; например сульфонильная группа -SO₂- также может быть представлена как -S(O)₂-, чтобы устранить неоднозначность, например в отношении сульфиновой группы -S(O)O-.

Специалистам в данной области техники понятно, что соединения формулы (I) могут содержать один или более стереогенных центров, например как представлено в формуле (IA) при помощи атома углерода со звездочкой (*), где R₂ и R₃ имеют разные значения, и, следовательно, могут существовать в виде оптических стереоизомеров.

Когда соединения по изобретению имеют по меньшей мере один стереогенный центр, они могут, соответственно, существовать в виде энантиомеров. Когда соединения по изобретению имеют два и более стереогенных центра, они могут дополнительно существовать в виде диастереоизомеров. Следует понимать, что все такие отдельные энантиомеры, диастереоизомеры и их смеси в любом соотношении входят в объем настоящего изобретения. Абсолютную (R)- или (S)-конфигурацию атома углерода (*) определяют на основе номенклатуры Кана-Ингольда-Прелога в соответствии с правилами, основанными на старшинстве групп.

Атропоизомеры представляют собой стереоизомеры, полученные в результате затрудненного вращения вокруг одинарных связей, где барьер стерического напряжения для вращения слишком высок, чтобы позволить выделение конформеров (Bringmann G et al., Angew. Chemie Int. Ed. 44 (34), 5384-5427, 2005. doi:10.1002/anie.200462661).

Oki определил атропоизомеры как конформеры, которые превращаются друг в друга с периодом полупревращения более 1000 секунд при заданной температуре (Oki М, Topics in Stereochemistry 14, 1-82, 1983).

Атропоизомеры отличаются от других хиральных соединений тем, что во многих случаях они могут быть приведены в состояние равновесия термическим путем, тогда как при других формах хиральности обычно возможна только изомеризация химическим путем.

Разделение атропоизомеров возможно с помощью способов хирального разделения, таких как селективная кристаллизация. В атропо-энантиоселективном или атропоселективном синтезе один атропоизомер образуется за счет другого. Атропоселективный синтез может быть проведен с использованием хиральных вспомогательных реагентов, таких как катализатор Кори-Бакши-Шибата (CBS), ассиметрического катализатора на основе пролина, или при помощи подходов, основанных на термодинамическом равновесии, когда реакция изомеризации приводит к предпочтительному образованию одного атропоизомера по сравнению с другим.

Рацемические формы соединений формулы (I), а также отдельные атропоизомеры, если они присутствуют (по существу не содержащие свой соответствующий энантиомер) и смеси атропоизомеров, обогащенные стереоизомером, включены в объем настоящего изобретения.

В предпочтительном воплощении изобретение относится к соединениям формулы (I), как определено выше, где n=1, R₂ имеет такое же значение, как указано выше, за исключением Н, R₃ представляет собой Н, и хиральный атом углерода (*) имеет абсолютную (R)-конфигурацию.

В еще одном воплощении предпочтительной конфигурацией атома углерода (*) является (S)-конфигурация.

В предпочтительном воплощении соединения формулы (I) представлены в виде смесей энантиомеров или диастереоизомеров.

Понятно, что все предпочтительные группы или воплощения, описанные здесь ниже для соединений формулы (I), могут быть скомбинированы друг с другом и использоваться с необходимыми поправками.

Первая предпочтительная группа соединений представляет собой соединения формулы (I), где

R₂ выбран из H и (С₁-С₆)алкила;

R₃ представляет собой Н;

R₁, R₄, R₅, m, n, p, Z, и CY являются такими, как определено выше, или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

Более предпочтительная группа соединений представляет собой соединения формулы (I), где

R₂ выбран из Н и (С₁-С₆)алкила;

R₃ представляет собой Н;

Су представляет собой гетероарил, выбранный из группы, состоящей из (I-1)-(I-9), где (I-1) представляет собой 3Н-пурин-3-ил, (I-2) представляет собой 9Н-пурин-9-ил, (I-3) представляет собой 9Н-пурин-6-ил, (I-4) представляет собой 1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил, (I-5) представляет собой 6-оксо-5Н,6Н,7Н-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил, (I-6) представляет собой пиримидин-4-ил, (I-7) представляет собой пиримидин-2-ил, (I-8) представляет собой пиразин-2-ил, (I-9) представляет собой 1,3,5-триазин-2-ил; который может быть возможно и независимо замещен одной или более чем одной группой, выбранной из галогена, -ОН, -(CH₂)_pNR₆R₇; -CN, -CH=NOH, -C(O)NR₆R₇, -C(O)OR₆, (С₁-С₆)алкила, (С₁-С₆)галогеноалкила, (С₁-С₆)гидроксиалкила, (C₁-С₆)алканоила, (С₂-С₆)алкенила, (С₂-С₆)алкинила, (С₂-С₆)гидроксиалкинила, или группой, выбранной из арила, гетероарила и гетероциклоалкила, который может быть возможно и независимо замещен одной или более чем одной группой, выбранной из -ОН, галогена, -CN, -S(O)₂NR₆R₇, -NR₆S(O)₂R₇, -NR₆R₇, (С₁-С₆)алкила, (С₁-С₆)галогеноалкила, (С₁-С₆)гидроксиалкила, (С₁-С₆)алкокси; где все другие переменные являются такими, как определено выше;

или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

Первый класс предпочтительных соединений формулы (I) для применения в качестве лекарственного средства представляет собой соединения, где Су представляет собой 1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил, возможно и независимо замещенный одной или более чем одной группой, выбранной из галогена, -ОН, -(CH₂)_pNR₆R₇; -CN, -CH=NOH, -C(O)NR₆R₇, -C(O)OR₆, (С₁-С₆)алкила, (С₁-С₆)галогеноалкила, (С₁-С₆)гидроксиалкила, (С₁-С₆)алканоила, (С₂-С₆)алкенила, (С₂-С₆)алкинила, (С₂-С₆)гидроксиалкинила, или группой, выбранной из арила, гетероарила и гетероциклоалкила, который может быть возможно и независимо замещен одной или более чем одной группой, выбранной из -ОН, галогена, -CN, -S(O)₂NR₆R₇, -NR₆S(O)₂R₇, -NR₆R₇, (С₁-С₆)алкила, (С₁-С₆)галогеноалкила, (С₁-С₆)гидроксиалкила, (С₁-С₆)алкокси;

где m равен нулю, и все другие переменные являются такими, как определено выше;

или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

Еще одно предпочтительное воплощение в этом первом классе представлено соединениями формулы I, где

R₁ и R₄ могут быть одинаковыми или разными, и независимо выбраны из группы, состоящей из: Н, (С₃-С₇)циклоалкила, который представляет собой циклопентил, и арила, который представляет собой фенил;

R₂ выбран из Н и (С₁-С₆)алкила, который представляет собой метил;

R₃ представляет собой Н;

R₅ выбран из группы, состоящей из (С₁-С₆)алкила, который представляет собой метил, изопропил или трет-бутил, (С₃-С₇)циклоалкила, который представляет собой циклопропил, арила, который представляет собой фенил, гетероарила, который представляет собой пиридинил, и гетероциклоалкила, который представляет собой морфолинил;

Су представляет собой гетероарил, который представляет собой 1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил, возможно и независимо замещенный одной или более чем одной группой, выбранной из галогена, который представляет собой йод, -(CH₂)_pNR₆R₇, который представляет собой -NH₂, арила, который представляет собой фенил, гетероарила, который представляет собой пиридинил, где указанный арил и гетероарил могут быть возможно и независимо замещены одной или более чем одной группой, выбранной из -ОН и галогена, который представляет собой фтор;

где R₆ и R₇ представляют собой -Н;

m равен нулю;

n равен 1;

р в каждом случае независимо равен 0, или 1, или 2;

или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

Еще один класс предпочтительных соединений формулы (I) для применения в качестве лекарственного средства представляет собой соединения, где Су представляет собой (I-6), представляющий собой пиримидин-4-ил, возможно замещенный одной или более чем одной группой, выбранной из галогена, -ОН, -(CH₂)pNR₆R₇; -CN, -CH=NOH, -C(O)NR₆R₇, -C(O)OR₆, (С₁-С₆)алкила, (С₁-С₆)галогеноалкила, (С₁-С₆)гидроксиалкила, (C₁-С₆)алканоила, (С₂-С₆)алкенила, (С₂-С₆)алкинила, (С₂-С₆)гидроксиалкинила, или группой, выбранной из арила, гетероарила и гетероциклоалкила, который может быть возможно и независимо замещен одной или более чем одной группой, выбранной из -ОН, галогена, -CN, -S(O)₂NR₆R₇, -NR₆S(O)₂R₇, -NR₆R₇, (С₁-С₆)алкила, (С₁-С₆)галогеноалкила, (С₁-С₆)гидроксиалкила, (С₁-С₆)алкокси;

m равен 1, и все другие переменные являются такими, как определено выше;

или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

Еще одно предпочтительное воплощение в этом классе представлено соединениями формулы I, где

R₁ представляет собой арил, который представляет собой фенил, и R₄ представляет собой Н;

R₂ представляет собой (С₁-С₆)алкил, который представляет собой метил;

R₃ представляет собой Н;

R₅ выбран из группы, состоящей из (С₁-С₆)алкила, который представляет собой метил или изопропил, (С₃-С₇)циклоалкила, который представляет собой циклопропил, арила, который представляет собой фенил;

Су представляет собой (I-6), представляющий собой пиримидин-4-ил, замещенный -(CH₂)_pNR₆R₇, который представляет собой -NH₂, и -CN;

m равен 1;

R₆, R₇ представляют собой -Н;

Z представляет собой -NH-;

n равен 1;

р в каждом случае независимо представляет собой ноль или 1;

или его фармацевтически приемлемые соли или сольваты.

(I-1)-(I-9) могут быть графически представлены следующим образом:

Как объяснялось выше, при графическом представлении монорадикальный символ "•" расположен на одном из доступных кольцевых атомов, указывая, где функциональная группа присоединена к связи или другому фрагменту молекул. Последнее не ограничивает объем изобретения исключительно графически представленными структурами; данное изобретение включает также другую химически приемлемую локализацию точки присоединения в функциональной группе.

Примерами предпочтительных арильных, гетероарильных, гетероциклоалкильных групп являются фенильные, пиридинильные, тиазолильные и тетразолильные группы, особенно предпочтительными являются 3-фтор-5-гидроксифенил, 2-амино-1,3-тиазол-5-ил, 5-гидроксипиридин-3-ил, 1-метил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-4-ил; соответствующие структурам, приведенным ниже (инструмент преобразования названия в структуру CHEMAXON 6.0.4).

В соответствии с конкретными воплощениями в изобретении предложены соединения, перечисленные в нижеприведенной таблице, и их фармацевтически приемлемые соли.

Соединения формулы (I), включающие все соединения, перечисленные выше, могут быть в общем случае получены в соответствии со способом, приведенным в следующих ниже схемах с использованием общеизвестных способов.

Получение примеров

Экспериментальный способ 1

В соответствии с реакционной схемой 1, соединения формулы (Ia) могут быть получены путем взаимодействия промежуточного соединения формулы (II) и подходящего галогенида Су-Hal (III), где все переменные имеют значения, определенные выше, и Су-Hal представляет собой, например, 6-бромпурин, 4-амино-6-хлорпиримидин-5-карбонитрил. Типичную реакцию осуществляют в подходящем полярном растворителе, таком как t-BuOH, в присутствии основания, такого как DIPEA (N,N-диизопропилэтиламин), при подходящей температуре в диапазоне, например, от 80°С до 100°С. На данной схеме представлен путь синтеза для получения соединения из примеров 19, 20, 21, 22, 23, 24.

Реакционная схема 1

Экспериментальный способ 2

В соответствии с реакционной схемой 2, соединения формулы (IV) могут быть превращены в соединения формулы (V) путем взаимодействия с азотным нуклеофилом формулы (VI) в условиях реакции Мицунобу. Соединения формулы (V) затем превращали в соединения формулы (Ib), где все переменные имеют значение, определенное выше, путем реакции кросс-сочетания Сузуки с подходящей бороновой кислотой или сложным эфиром формулы (VII), где Het(aryl) обозначает любую замещающую группу, такую как арил, гетероарил.

Реакционная схема 2

Типичное сочетание Мицунобу осуществляют путем взаимодействия соединения формулы (IV) с азотным нуклеофилом (VI), таким как, например, 3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амин, в полярном апротонном растворителе, таком как THF (тетрагидрофуран), в присутствии диалкилазодикарбоксилата, такого как DIAD (диизопропилазодикарбоксилат), и триарилфосфина, такого как трифенилфосфин, при подходящей температуре, такой как, например, к.т. (комнатная температура). Типичные условия кросс-сочетания Сузуки включают взаимодействие соединения формулы (V) с подходящей бороновой кислотой или бороновым эфиром (VII), в присутствии Pd катализатора, такого как Pd(PPh₃)₄, с использованием основания, такого как водный бикарбонат натрия, в смеси полярных растворителей, таких как DME (1,2-диметоксиэтан) и ЕЮН, при подходящей температуре в диапазоне от к.т. до 80°С. Бороновая кислота и сложные эфиры формулы (VII) имеются в продаже. На этой схеме представлен путь синтеза для получения соединения из примеров 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18.

Получение промежуточных соединений

Экспериментальный способ 3

В соответствии с реакционной схемой 3, промежуточные соединения формулы (IV) могут быть превращены в промежуточные соединения формулы (II) путем получения азида (VIII) с последующим восстановлением в условиях Штаудингера.

Реакционная схема 3

Типичные условия реакции включают взаимодействие соединения формулы (IV) с дифенилфосфорилазидом в присутствии основания, такого как DBU (1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен), в полярном апротонном растворителе, таком как THF, при подходящей температуре, такой как к.т. Типичные условия восстановления Штаудингера включают взаимодействие соединения формулы (VIII) с триарилфосфином, таким как трифенилфосфин, в подходящем полярном апротонном растворителе, таком как THF, при подходящей температуре, такой как, например, к.т., затем с водой и перемешиванием при подходящей температуре, такой как, например, температура в диапазоне от 50°С до 60°С.

Экспериментальный способ 4

В соответствии с реакционной схемой 4, промежуточное соединение формулы (IVa), где R₂=Me, R₃, R₄=H и R₁=Ph, может быть получено из имеющегося в продаже промежуточного соединения (IXa), где R₄=H, и R₁=Ph, и Hal представляет собой бромид.

Реакционная схема 4

Промежуточное соединение формулы (IXa) может быть превращено в промежуточное соединение формулы (Ха) путем алкилирования алкилгалогенидом в присутствии основания или диметилформамиддиметилацеталем. Типичные условия алкилирования включают взаимодействие соединения формулы (IXa) с подходящим алкилгалогенидом [т.е. R₅(CH₂)_p-Hal] в присутствии основания, такого как карбонат калия, или с диметилформамиддиметилацеталем в полярном апротонном растворителе, таком как DMF (N,N-диметилформамид), при подходящей температуре, например при температуре в диапазоне от к.т. до 60°С. Промежуточное соединение формулы (Ха) может быть превращено в промежуточное соединение формулы (XIa) посредством катализируемой палладием реакции кросс-сочетания в условиях Стилле с трибутил(1-этоксивинил)оловом. Типичные условия реакции включают взаимодействие соединения формулы (Ха) с трибутил(1-этоксивинил)оловом в присутствии Pd катализатора, такого как бис(трифенилфосфин)палладия(II) дихлорид, в полярном апротонном растворителе, таком как толуол, при подходящей температуре, такой как, например, 110°С. Затем с промежуточного соединения (XIa) удаляли защиту с получением промежуточного соединения формулы (XIIa) путем обработки конц. HCl в полярном апротонном растворителе, таком как толуол, при подходящей температуре, например при к.т.(условия удаления защиты смотри в общих протоколах, приведенных в Greene's Protective Groups in Organic Synthesis, Peter G.M. Wuts, Theodora W. Greene; Wiley&Sons Editors, 4th Edition Dec. 2006. Эту стадию удаления защиты использовали для получения примера 45, 46 и 103). Наконец, промежуточное соединение формулы (XIa) может быть превращено в спирт (IVa). Типичные условия восстановления включают взаимодействие соединения формулы (XIIa) с восстановителем, таким как NaBH₄, в смеси полярных апротонных и протонных растворителей, таких как THF и МеОН, при подходящей температуре, например при к.т. Неочищенное вещество, полученное в результате восстановления соединения формулы (XIIa), частично окисляли подходящим окислителем, таким как CuCl₂, в полярном апротонном растворителе, таком как CH₃CN, при подходящей температуре, такой как 85°С, или натрий 3-нитробензолсульфонат в водном NaOH, при подходящей температуре, такой как нагревание до температуры дефлегмации.

Экспериментальный способ 5

В соответствии с реакционной схемой 5, промежуточное соединение формулы (XIIa), где R₂=Me, R₄=H и R₁=Ph, может быть альтернативно получено из имеющегося в продаже промежуточного соединения (IXa), где R₄=H, и R₁=Ph, и Hal представляет собой бромид.

Реакционная схема 5

Промежуточное соединение формулы (IXa) защищено при помощи подходящей защитной группы, такой как, например, ТНР. Типичные условия реакции включают взаимодействие соединения формулы (IXa) с 3,4-дигидро-2Н-пираном в присутствии кислоты, такой как пиридиния пара-толуолсульфонат, в подходящем растворителе, таком как THF, при подходящей температуре, например в диапазоне от 60°С до 90°С. Промежуточное соединение формулы (XIIIa) может быть превращено в промежуточное соединение формулы (XIVa) посредством катализируемой палладием реакции кросс-сочетания в условиях реакции Стилле с трибутил(1-этоксивинил)оловом. Типичные условия реакции включают взаимодействие соединения формулы (XIVa) с трибутил(1-этоксивинил)оловом в присутствии Pd катализатора, такого как бис(трифенилфосфин)палладия(II) дихлорид, в полярном апротонном растворителе, таком как толуол, при подходящей температуре, такой как, например, 110°С. Затем с промежуточного соединения (XIVa) удаляли защиту с получением промежуточного соединения формулы (XVa) путем обработки HCl. Типичные условия реакции включают взаимодействие соединения формулы (XVa) с водной 6 н. HCl при подходящей температуре, например при нагревании до температуры дефлегмации. Наконец, промежуточное соединение формулы (XVa) превращали в промежуточное соединение формулы (XIIa) посредством реакции алкилирования алкилгалогенидом или в реакции Чан-Лама с подходящей бороновой кислотой или сложным эфиром (VII). Типичные условия алкилирования включают взаимодействие соединения формулы (XVa) с подходящим алкилгалогенидом в присутствии основания, такого как карбонат калия, в полярном апротонном растворителе, таком как DMF, при подходящей температуре, например при к.т. Типичные условия реакции Чан-Лама включают взаимодействие соединения формулы (XVa) с подходящей бороновой кислотой (VII), такой как фенилбороновая кислота, в присутствии ацетата меди (II) и пиридина, в смеси полярных апротонных растворителей, таких как DCM (дихлорметан) и DMF, при подходящей температуре, например при к.т., на открытом воздухе.

Экспериментальный способ 6

В соответствии с реакционной схемой 6, промежуточное соединение формулы (IVb), где R₂=Me, R₁, R₃=H, может быть получено из имеющегося в продаже промежуточного соединения (XVI), где R₁=H.

Реакционная схема 6

Промежуточное соединение формулы (XVI) может быть превращено в соединение формулы (XVII) путем взаимодействия с подходящим реагентом Гриньяра. Типичные условия реакции включают взаимодействие соединения формулы (XVI) с подходящим арилмагния галогенидом или алкилмагния галогенидом, таким как фенилмагния бромид или циклопентилмагния хлорид, в полярном апротонном растворителе, таком как THF, при подходящей температуре, например при 0°С. Соединение формулы (XVI), где R₁=Н, может быть получено в соответствии со способом, указанном в патенте US 2005/0191238 А1. Соединение формулы (XVII) затем приводили во взаимодействие с трибутил(1-этоксивинил)оловом в условиях кросс-сочетания Стилле с получением промежуточного соединения формулы (XVIII). Типичные условия реакции включают взаимодействие соединения формулы (XVII) с трибутил(1-этоксивинил)оловом в присутствии Pd катализатора, такого как бис(трифенилфосфин)палладий(II) дихлорид, в полярном апротонном растворителе, таком как толуол, при подходящей температуре, например при 110°С. Соединение формулы (XVIII) может быть гидролизовано с получением промежуточного кетона формулы (XIX) с использованием HCl. Типичные условия реакции включают взаимодействие соединения формулы (XVIII) с конц. HCl в полярном апротонном растворителе, таком как толуол, при подходящей температуре, например при к.т. Промежуточные кетоны формулы (XIX) затем превращали в промежуточное соединение формулы (XVb), где R₂=Me, R₁=Н, при помощи TFA (трифторуксусной кислоты). Типичные условия реакции включают реакцию соединения формулы (XIX) с TFA при подходящей температуре, например при 120°С под действием микроволнового (MW) излучения. Промежуточное соединение формулы (XVb), где R₂=Me, R₁=Н, затем использовали в реакции алкилирования с алкилгалогенидом, или в реакции Чан-Лама с подходящей бороновой кислотой или сложным эфиром (VII) с получением промежуточного соединения (XIIb), где R₂=Me, R₁=Н. Типичные условия алкилирования включают взаимодействие соединения формулы (XVb) с подходящим алкилгалогенидом в присутствии основания, такого как карбонат калия, в полярном апротонном растворителе, таком как в DMF, при подходящей температуре, например в диапазоне от к.т. до 50°С. Типичные условия реакции Чан-Лама включают взаимодействие соединения формулы (XVb) с подходящей бороновой кислотой в присутствии ацетата меди (II) и пиридина, в смеси полярных апротонных растворителей, таких как DCM и DMF, при подходящей температуре, например при к.т., на открытом воздухе. Наконец, промежуточное соединение формулы (XIIb) может быть восстановлено с получением промежуточного соединения (IVb), где R₂=Me, R₁, R₃=Н. Типичные условия реакции включают реакцию соединения формулы (XIIb) с восстановителем, таким как NaBH₄, в смеси полярных апротонных и протонных растворителей, таких как THF и МеОН, при подходящей температуре, например в диапазоне от 0°С до к.т.

Экспериментальный способ 7

В соответствии с реакционной схемой 7 промежуточное соединение формулы (XIIb), где R₂=Me, R₁=H, может быть альтернативно получено из промежуточного соединения (XVII).

Реакционная схема 7

Промежуточное соединение формулы (XX) может быть получено путем удаления защиты с соединения формулы (XVII) в серной кислоте и азотной кислоте. Типичные условия реакции включают взаимодействие соединения формулы (XVII) с конц. H₂SO₄ и конц. HNO₃ при подходящей температуре, например при к.т. Промежуточное соединение (XX) может быть превращено в промежуточное соединение формулы (XXI) с алкилгалогенидом в присутствии основания. Типичные условия алкилирования включают взаимодействие соединения формулы (XX) с подходящим алкигалогенидом, таким как бензилбромид, в присутствии основания, такого как карбонат калия, в полярном апротонном растворителе, таком как DMF, при подходящей температуре, например при к.т. Это промежуточное соединение формулы (XXI) затем приводили в реакцию с трибутил(1-этоксивинил)оловом в условиях кросс-сочетания Стилле. Типичные условия реакции включают взаимодействие соединения формулы (XXI) с трибутил(1-этоксивинил)оловом в присутствии Pd катализатора, такого как бис(трифенилфосфин)палладия(II) дихлорид, в полярном апротонном растворителе, таком как толуол, при подходящей температуре, например при 110°С. Промежуточное соединение формулы (XIb) гидролизовали до кетона формулы (XIIb) при помощи HCl. Типичные условия реакции включают взаимодействие соединения формулы (XIb) с конц. HCl в полярном апротонном растворителе, таком как толуол, при подходящей температуре, например при к.т.

Экспериментальный способ 8

В соответствии с реакционной схемой 8, промежуточное соединение формулы (IVc), где R₁=R₃=R₄=Н, и R₂=Me, может быть получено из промежуточного соединения (IXc), где R₁=R₄=Н и Hal представляет собой йод.

Реакционная схема 8

Соединение формулы (Хс) может быть получено путем взаимодействия соединения формулы (IXc) в реакции алкилирования алкилгалогенидом [т.е. R₅(CH₂)_p-Hal], или в реакции Чан-Лама с подходящей бороновой кислотой или сложным эфиром (VII). Типичные условия алкилирования включают взаимодействие соединения формулы (IXc) с подходящим алкилгалогенидом, таким как бензилбромид, в присутствии основания, такого как карбонат калия, в полярном апротонном растворителе, таком как DMF, при подходящей температуре, например при к.т. Типичные условия реакции Чан-Лама включают взаимодействие соединения формулы (IXc) с подходящей бороновой кислотой или сложным эфиром (VII), таким как фенилбороновая кислота, в присутствии ацетата меди (II) и пиридина, в смеси полярных апротонных растворителей, таких как DCM и DMF, при подходящей температуре, например при к.т., на открытом воздухе. Соединение формулы (Хс), где R₁=R₄=Н, R₅=Me, Р=0, может быть получено в соответствии со способом, указанным в Tetrahedron, 2004, 60, 12177-12189. Соединение формулы (IXc), где R₁=R₄=Н и Hal представляет собой йод, может быть получено в соответствии со способом, указанным в Bioorg. Med. Chem. 2012, 20, 3880-3886. Промежуточное соединение формулы (Хс) затем приводили в реакцию с трибутил(1-этоксивинил)оловом в условиях кросс-сочетания Стилле. Типичные условия реакции включают взаимодействие соединения формулы (Хс) с трибутил(1-этоксивинил)оловом в присутствии Pd катализатора, такого как бис(трифенилфосфин)палладия(II) дихлорид, в полярном апротонном растворителе, таком как толуол, при подходящей температуре, например при 110°С. Промежуточное соединение формулы (XIc) гидролизовали до кетона формулы (XIIc) при помощи HCl. Типичные условия реакции включают взаимодействие соединения формулы (XIc) с конц. HCl в полярном апротонном растворителе, таком как толуол, при подходящей температуре, например при к.т. Наконец, промежуточное соединение формулы (XIIc) может быть превращено в спирт (IVc), где R₁=R₃=R₄=Н и R₂=Me. Типичные условия восстановления включают взаимодействие соединения формулы (XIIc) с восстановителем, таким как NaBH₄, в смеси полярных апротонных и протонных растворителей, таких как THF и МеОН, при подходящей температуре, например при к.т. Неочищенное вещество, полученное в результате восстановления соединения формулы (XIIc), частично окисляли подходящим окислителем, таким как CuCl₂, в полярном апротонном растворителе, таком как CH₃CN, при подходящей температуре, такой как 85°С, или натрий 3-нитробензолсульфонат в водном NaOH, при подходящей температуре, такой как нагревание до температуры дефлегмации.

Экспериментальный способ 9

В соответствии с реакционной схемой 9 промежуточное соединение формулы (IVd), где R₁, R₂, R₃, R₄=Н, может быть получено из промежуточного соединения (XXII), где R₁=R₄=Н.

Реакционная схема 9

Промежуточное соединение формулы (XXIII) может быть получено путем взаимодействия соединения формулы (XXII) в реакции алкилирования. Типичные условия алкилирования включают взаимодействие соединения формулы (XXII) с подходящим алкилгалогенидом, таким как бензилбромид, в присутствии основания, такого как карбонат калия, в полярном апротонном растворителе, таком как DMF, при подходящей температуре, например при к.т. Соединение формулы (XXII) может быть получено в соответствии со способом, указанным в патенте US 2009/111821 А1, 2009. Промежуточное соединение формулы (IVd) может быть получено путем восстановления соединения формулы (XXIII) с последующим окислением полученного неочищенного вещества. Типичные условия восстановления включают взаимодействие соединения формулы (XXIII) с восстановителем, таким как NaBH₄, в присутствии CaCl₂, в смеси полярных апротонных и протонных растворителей, таких как THF и МеОН, при подходящей температуре, например при к.т. Типичные условия окисления включают взаимодействие неочищенного вещества, полученного в результате восстановления соединения формулы (XXIII) окислительной системой, такой как CuCl₂ в полярном апротонном растворителе, таком как CH₃CN, при подходящей температуре, такой как 85°С.

Соединения по изобретению являются ингибиторами активности киназ, в частности активности PI3-киназы. В целом, соединения, которые являются ингибиторами PI3K, могут быть полезными в лечении многих расстройств, ассоциированных с механизмами действия ферментов PI3K.

В одном воплощении расстройства, которые можно лечить соединениями по настоящему изобретению, включают респираторные заболевания, выбранные из идиопатического хронического кашля, кашлевой астмы, кашля, ассоциированного с опухолью органов грудной клетки или раком легких, вирусного или поствирусного кашля, кашлевого синдрома верхних дыхательных путей (UACS) или кашля, вызванного отеканием слизи из носоглотки, или кашля, ассоциированного с гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью (как кислотным, так и некислотным рефлюксом), астмы, хронического бронхита, хронического обструктивного заболевания легких (COPD), интерстициального заболевания легких, (такого как идиопатический легочный фиброз (IPF)), застойной сердечной недостаточности, саркоидоза, инфекций (таких как коклюш); вирусные инфекции (включающие вирусные инфекции дыхательных путей и вирусное обострение респираторных заболеваний), невирусные респираторные инфекции, включающие аспергиллез и лейшманиоз; аллергические заболевания, включающие аллергический ринит и атопический дерматит; аутоиммунные заболевания, включающие ревматоидный артрит и рассеянный склероз; воспалительные расстройства, включающие воспалительное заболевание кишечника; сердечно-сосудистые заболевания, включающие тромбоз и атеросклероз; гемобластозы; нейродегенеративные заболевания; панкреатит; полиорганную недостаточность; заболевания почек; агрегацию тромбоцитов; рак; подвижность сперматозоидов; отторжение при трансплантации; отторжение трансплантата; повреждения легких; и боль, включающую боль, ассоциированную с ревматоидным артритом или остеоартритом, боль в спине, общую воспалительную боль, постгерпетическую невралгию, диабетическую нейропатию, воспалительную нейропатическую боль (травма), невралгию тройничного нерва и центральную боль.

В еще одном воплощении расстройство, которое можно лечить соединениями по настоящему изобретению, выбрано из группы, состоящей из идиопатического хронического кашля, кашлевой астмы, кашля, ассоциированного с опухолью органов грудной клетки или раком легких, вирусного или поствирусного кашля, кашлевого синдрома верхних дыхательных путей (UACS), кашля, вызванного отеканием слизи из носоглотки, кашля, вызванного гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью (как кислотным, так и некислотным рефлюксом), астмы, хронического бронхита, хронического обструктивного заболевания легких (COPD) и интерстициального заболевания легких (такого как идиопатический легочный фиброз (IPF)).

В еще одном воплощении расстройство выбрано из группы, состоящей из астмы, хронического обструктивного заболевания легких (COPD), идиопатического легочного фиброза (IPF), кашля и хронического кашля.

Способы лечения по изобретению включают введение безопасного и эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли пациенту, нуждающемуся в таком введении. При использовании здесь термин "безопасное и эффективное количество" в отношении соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, или другого фармацевтически активного агента означает количество соединения, достаточное для лечения состояния пациента, но достаточно низкое, чтобы избежать серьезных побочных эффектов, и, тем не менее, оно может быть обычным образом определено специалистом в данной области техники. Соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты могут быть введены однократно или в соответствии со схемой приема лекарственного средства, когда несколько доз вводят с различными интервалами в течение заданного периода времени. Типичные суточные дозы могут варьироваться в зависимости от конкретного выбранного пути введения.

В изобретении также предложены фармацевтические композиции соединений формулы (I) в смеси с одним или более чем одним фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом, например такими, как описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences Handbook, XVII Ed., Mack Pub., N.Y., U.S.A.

Введение соединений по настоящему изобретению и их фармацевтических композиций может быть осуществлено в соответствии с потребностями пациента, например перорально, интраназально, парентерально (подкожно, внутривенно, внутримышечно, интрастернально и посредством инфузии), посредством ингаляции, ректально, вагинально, местно, локально, трансдермально и путем введения в глаз.

Для введения соединений по изобретению могут быть использованы различные твердые пероральные лекарственные формы, включая такие твердые формы, как таблетки, желатиновые капсулы, капсулы, каплеты, гранулы, леденцы или нерасфасованные порошки. Соединения по настоящему изобретению могут быть введены сами по себе или в комбинации с различными фармацевтически приемлемыми носителями, разбавителями (такими как сахароза, маннит, лактоза, крахмалы) и известными эксципиентами, включающими суспендирующие агенты, солюбилизаторы, буферные агенты, связывающие вещества, разрыхлители, консерванты, красители, ароматизаторы, смазывающие вещества и т.п. При введении соединений по настоящему изобретению также полезны капсулы, таблетки и гели с высвобождением по времени.

Для введения соединений по изобретению также могут быть использованы различные жидкие пероральные лекарственные формы, включая водные и неводные растворы, эмульсии, суспензии, сиропы и эликсиры. Такие лекарственные формы также могут содержать подходящие известные инертные разбавители, такие как вода, и подходящие известные эксципиенты, такие как консерванты, увлажнители, подсластители, корригенты, а также агенты для эмульгирования и/или суспендирования соединений по изобретению. Соединения по настоящему изобретению можно инъецировать, например внутривенно, в форме изотонического стерильного раствора. Также возможны другие препараты.

Суппозитории для ректального введения соединений по изобретению могут быть приготовлены путем смешивания соединения с подходящим эксципиентом, таким как масло какао, салицилатами и полиэтиленгликолями.

Композиции для вагинального введения могут иметь форму крема, геля, пасты, пены или аэрозоля, содержащего, в дополнение к активному ингредиенту, такие подходящие носители, которые также известны.

Для местного введения фармацевтическая композиция может иметь форму кремов, мазей, линиментов, лосьонов, эмульсий, суспензий, гелей, растворов, паст, порошков, аэрозолей и капель, подходящих для введения на кожу, в глаза, в уши или нос. Местное введение может также включать трансдермальное введение с использованием таких средств, как трансдермальные пластыри.

Для лечения заболеваний дыхательных путей соединения по изобретению предпочтительно вводят путем ингаляции.

Ингаляционные препараты включают ингаляционные порошки, пропеллентсодержащие дозированные аэрозоли или не содержащие пропелленты ингаляционные композиции.

Для введения в виде безводного порошка могут быть использованы известные из предшествующего уровня техники однодозовые или многодозовые ингаляторы. В этом случае порошком могут быть наполнены желатиновые, полимерные или другие капсулы, картриджи или блистерные упаковки, или резервуар.

К порошкообразным соединениям по изобретению может быть добавлен разбавитель или носитель, обычно нетоксичный и химически инертный по отношению к соединениям по изобретению, например лактоза или любое другое вспомогательное вещество, подходящее для улучшения вдыхаемой фракции.

Ингаляционные аэрозоли, содержащие газ-пропеллент, такой как гидрофторалканы, могут содержать соединения по изобретению либо в виде раствора, либо в дисперсной форме. Композиции с использованием пропеллента могут также содержать другие ингредиенты, такие как сорастворители, стабилизаторы и возможно другие эксципиенты.

Не содержащие пропеллентов ингалируемые композиции, содержащие соединения по изобретению, могут находиться в форме растворов или суспензий в водной, спиртовой или водно-спиртовой среде, и они могут быть доставлены с помощью струйных или ультразвуковых небулайзеров, известных из предшествующего уровня техники, или с помощью небулайзеров мягкого тумана, таких как Respimat^®.

Соединения по изобретению могут быть введены в виде одного активного агента или в комбинации с другими фармацевтически активными ингредиентами, включающими ингредиенты, используемые в настоящее время для лечения респираторных расстройств, например с бетаг-агонистами, антимускариновыми агентами, кортикостероидами, ингибиторами митоген-активируемых киназ (МАР-киназы р38), ингибиторами эластазы нейтрофилов человека (HNE), ингибиторами фосфодиэстеразы 4 (PDE4), модуляторами лейкотриенов, нестероидными противовоспалительными агентами (NSAID) и регуляторами слизи.

Дозы соединений по изобретению зависят от множества факторов, включающих конкретное заболевание, которое лечат, тяжесть симптомов, путь введения, частоту приема, конкретное используемое соединение, эффективность, токсикологический профиль и фармакокинетический профиль соединения.

Преимущественно, соединения формулы (I) могут быть введены, например, в дозе, составляющей от 0,001 до 1000 мг/сутки, предпочтительно от 0,1 до 500 мг/сутки.

При введении соединений формулы (I) ингаляционным путем, их предпочтительно принимают в дозе, составляющей от 0,001 до 500 мг/сутки, предпочтительно от 0,1 до 200 мг/сутки.

Следующие примеры иллюстрируют изобретение.

ПОЛУЧЕНИЕ ПРОМЕЖУТОЧНЫХ СОЕДИНЕНИЙ И ПРИМЕРЫ

Химические названия соединений были образованы с использованием инструмента CHEMAXON 6.0.4.

Растворы обычных неорганических солей, используемые в обработках, представляют собой водные растворы.

Сокращения:

Общие детали эксперимента

Характеристика при помощи NMR (ядерный магнитный резонанс):

Спектры протонного магнитного резонанса (¹Н NMR) собирали с использованием дейтерированных растворителей (DMSO-d₆, CDCl₃) при 25°С на Agilent VNMRS-500, Agilent VNMRS-400 и Bruker Avance 400.

Химические сдвиги выражают в миллионных долях (млн^-1) в сторону слабого поля относительно тетраметилсилана (единицы δ). Мультиплетность указана следующим образом: (s) синглет, (d) дублет, (dd) двойной дублет, (ddd) тройной дублет, (t) триплет, (dt) двойной триплет, (q) квартет, (m) мультиплет, (br s) уширенный сигнал. Константы связывания J выражены в герцах (Гц).

Аналитические способы с использованием LC/UV/MS (жидкостная хроматография с ультрафиолетовым и масс-спектрометрическим детектированием)

LCMS могут быть зарегистрированы в следующих условиях: хроматограммы с использованием диодно-матричного детектора (DAD), масс-хроматограммы и масс-спектры могут быть получены на системе UPLC/PDA/MS Acquity™, присоединенной к одиночному квадрупольному масс-спектрометру Micromass ZQTM или Waters SQD, функционирующему в положительном и/или отрицательном режиме ионизации посредством электрораспыления (ES), и/или в системе Fractionlynx, используемой в аналитическом режиме, присоединенной к единичному квадруполю ZQTM, функционирующему в положительном и/или отрицательном режиме ионизации посредством ES.

Использовали два метода контроля качества, один из которых работал в условиях низкого рН, а другой работал в условиях высокого рН:

Способ А, условия низкого рН: колонка: Acquity CSH С18, 1,7 мкм, 2,1×50 мм, температура колонки составляла 40°С; растворитель А подвижной фазы представлял собой воду milliQ + 0,1% НСООН, растворитель В подвижной фазы представлял собой MeCN + 0,1% НСООН. Скорость потока составляла 1 мл/мин. Таблица градиента t=0 мин 97% А - 3% В, t=1,5 мин 0,1% А - 99,9% В, t=1,9 мин 0,1% А - 99,9% В и t=2 мин 97% А - 3% В. Диапазон УФ-детектирования составлял 210-350 нм и диапазон ES+/ES- составлял 100-000 а.е.м.

Способ В, условия низкого рН: колонка: Acquity UPLC ВЕН С18, 1,7 мкм, 50 мм × 2,1 мм, температура колонки составляла 40°С; растворитель А подвижной фазы представлял собой воду milliQ + 0,1% НСООН, растворитель В подвижной фазы представлял собой MeCN + 0,1% НСООН. Скорость потока составляла 1 мл/мин. Таблица градиента t=0 мин 97% А - 3% В, t=1,5 мин 0,1% А - 99,9% В, t=1,9 мин 0,1% А - 99,9% В и t=2 мин 97% А - 3% В. Диапазон УФ-детектирования составлял 210-350 нм и диапазон ES+/ES- составлял 100-1000 а.е.м.

Эксперимент, осуществляемый под действием микроволнового излучения, проводили с использованием системы Biotage Initiator 2.0.

Очистку посредством флэш-хроматографии осуществляли с использованием систем флэш-хроматографии Biotage Isolera или Biotage SP1, где оба прибора работали с картриджами Biotage KP-SIL и картриджами Biotage KP-NH, или осуществляли вручную с использованием предварительно заполненных картриджей на основе силикагеля для флэш-хроматографии Isolute или предварительно заполненных картриджей Varian Bond Elut.

Обращенно-фазовую флэш-хроматографию осуществляли на предварительно заполненных картриджах Biotage С18 SNAP или картриджах Varan Bond Elut С18.

Картриджи SPE-SCX представляют собой колонки для твердофазной экстракции, поставляемые Varian.

Многие их соединений, описанных в следующих ниже примерах, были получены из стереохимически чистых исходных веществ, например с 95% э.и. (энантиомерный избыток).

Если не указано иное, рассол относится к насыщенному водному раствору NaCl.

Когда получение исходных веществ не описано, они известны, имеются в продаже или могут быть легко получены с использованием стандартных способов.

Стереохимию соединений в примерах, когда она указана, устанавливали исходя из предположения, что абсолютная конфигурация различаемых стереогенных центров исходных веществ сохраняется в условиях любых последующих реакций.

В способах, которые следуют ниже, после каждого исходного вещества иногда приведена ссылка на номер соединения. Она дается исключительно в помощь специалисту в области химии. Исходное вещество необязательно может было получено из партии, на которую дана ссылка.

Когда сделана ссылка на применение "подобного" или "аналогичного" способа, как понятно специалистам в данной области техники, такой способ может включать незначительные изменения, например температуру реакции, количество реагента/растворителя, время реакции, условия обработки или условия хроматографической очистки

Промежуточное соединение А1: 2-бензил-5-бром-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-бром-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она (1,0 г, 3,98 ммоль) в DMF (20 мл) добавляли карбонат калия (0,661 г, 4,78 ммоль), затем бензилбромид (0,569 мл, 4,78 ммоль), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Смесь разбавляли EtOAc и промывали водой, а затем несколько раз рассолом. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и растворитель удаляли. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем SNAP (от циклогексана до смеси циклогексан:EtOAc = 80:20) с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого твердого вещества (1,212 г, 3,55 ммоль, выход 89%). MS/ESI⁺ 341,1-343,1 [МН]⁺, Rt = 1,19 мин (Способ А).

Промежуточное соединение А2: 5-бром-2-метил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Смесь 5-бром-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она (0,500 г, 1,99 ммоль) и N,N-диметилформамида диметилацеталя (0,397 мл, 2,978 ммоль) в DMF (20 мл) кипятили с обратным холодильником в течение 2 ч. Смесь разбавляли EtOAc и промывали водой, и затем несколько раз рассолом. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и растворитель удаляли. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:EtOAc = от 90:10 до 50:50) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,279 г, 1,05 ммоль, выход 53%). MS/ESI⁺ 265,0-267,0 [МН]⁺, Rt = 0,92 мин (Способ А).

Промежуточное соединение A3: 5-бром-6-фенил-2-(пропан-2-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-бром-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она (0,700 г, 2,788 ммоль) в DMF (12 мл) добавляли карбонат калия (0,462 г, 3,345 ммоль), а затем 2-бромпропан (0,314 мл, 3,345 ммоль), и полученную в результате смесь нагревали при 60°С в течение 2 ч. Смесь распределяли между EtOAc и водой, водную фазу экстрагировали EtOAc, и объединенные органические слои несколько раз промывали рассолом. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, и растворитель удаляли. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от циклогексана до смеси циклогексан:EtOAc = 85:15) с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (0,630 г, 2,149 ммоль, выход 77%). MS/ESI⁺ 293,1-295,1 [МН]⁺, Rt = 1,11 мин (Способ А).

Промежуточное соединение А4: 5-бром-2-(оксан-2-ил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Смесь 5-бром-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она (2,572 г, 10,24 ммоль), 3,4-дигидро-2Н-пирана (15 мл, 164,4 ммоль) и пиридиния пара-толуол сульфоната (0,489 г, 1,945 ммоль) в THF (12 мл) нагревали до температуры дефлегмации в течение 5 ч. Добавляли дополнительное количество 3,4-дигидро-2Н-пирана (7,5 мл, 82,2 ммоль) и реакционную смесь нагревали до температуры дефлегмации в течение ночи. Смесь концентрировали в вакууме, и остаток собирали с помощью EtOAc и промывали водным 2 н. гидроксидом натрия. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и концентрировали в вакууме. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:EtOAc = от 90:10 до 60:40) с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого масла (3,4 г, 10,15 ммоль, выход 99%). MS/ESI⁺ 335,1-337,1 [МН]⁺, Rt = 1,08 мин (Способ А).

Промежуточное соединение В1: 2-бензил-5-йодо-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-йодо-2,3-дигидропиридазин-3-она (полученного в соответствии со способом, описанным в Bioorg. Med. Chem. 2012, 20, 3880-3886) (0,500 г) в DMF (5 мл) добавляли карбонат калия (0,375 г, 2,71 ммоль), затем бензилбромид (0,323 мл, 2,71 ммоль), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. в течение 18 ч. Смесь разбавляли EtOAc и промывали водой, а затем несколько раз рассолом. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия и растворитель удаляли в вакууме. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от циклогексана до смеси циклогексан:EtOAc = 80:20) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,504 г, 1,61 ммоль). MS/ESI⁺ 312,8 [МН]⁺, Rt = 0,97 мин (Способ А).

Промежуточное соединение В2: 5-йодо-2-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-йодо-2,3-дигидропиридазин-3-она (полученного в соответствии со способом, представленным в Bioorg. Med. Chem. 2012, 20, 3880-3886) (0,500 г) в DCM (24 мл) и DMF (8 мл) добавляли ацетат меди (II) (0,822 г, 4,52 ммоль), фенилбороновую кислоту (0,331 г, 2,71 ммоль), пиридин (366 мкл, 4,52 ммоль) и активированные молекулярные сита 4Å (1,200 г), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. на открытом воздухе в течение 24 часов. Добавляли дополнительно фенилбороновую кислоту (0,331 г, 2,71 ммоль) и реакционную смесь перемешивали в течение еще 4 ч. Добавляли концентрированную водн. NH₄OH, летучие вещества удаляли при пониженном давлении и нерастворимые вещества отфильтровывали; неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:EtOAc = от 90:10 до 20:80) с получением указанного в заголовке соединения (0,513 г). MS/ESI⁺ 298,8 [МН]⁺, Rt = 0,88 мин (Способ А).

Промежуточное соединение С1: 2-трет-бутил-5-хлор-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 2-трет-бутил-4,5-дихлор-2,3-дигидропиридазин-3-она (полученного в соответствии со способом, представленным в патенте US 2005/0191238 А1) (2,00 г, 9,05 ммоль) в THF (35 мл), охлажденному при 0°С, добавляли 2М раствор PhMgCl в THF (5,65 мл, 11,3 ммоль), и полученную в результате смесь перемешивали при 0°С в течение 30 мин. При 0°С добавляли дополнительное количество 2М PhMgCl в THF (5,65 мл, 11,3 ммоль), и смесь перемешивали при той же самой температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь гасили при 0°С путем добавления по каплям водного 6М HCl (5 мл). Смесь экстрагировали AcOEt, и органическую фазу промывали водой и рассолом, и затем сушили над сульфатом натрия. Растворитель удаляли, и неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от циклогексана до смеси циклогексан:EtOAc = 95:5) с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого масла (1,190 г, 4,53 ммоль, выход 50%). MS/ESI⁺ 263,2 [МН]⁺, Rt = 1,25 мин (Способ А).

Промежуточное соединение С2: 2-трет-бутил-5-хлор-4-циклопентил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению С1, начиная с 2-трет-бутил-4,5-дихлор-2,3-дигидропиридазин-3-она (полученного в соответствии со способом, представленным в патенте US 2005/0191238 А1) (2,00 г, 9,05 ммоль) и 2,0 М циклопентилмагния хлорида в диэтиловом эфире (5,65 мл, 11,3 ммоль), перемешивали в течение 30 мин, и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от циклогексана до смеси циклогексан:EtOAc = 95:5) с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого масла (1,278 г, 5,03 ммоль, выход 56%). MS/ESI⁺ 255,2 [МН]⁺, Rt = 1,52 мин (Способ А).

Промежуточное соединение С3: 5-хлор-4-циклопентил-2,3-дигидропиридазин-3-он

2-трет-Бутил-5-хлор-4-циклопентил-2,3-дигидропиридазин-3-он С2 (1,126 г, 4,43 ммоль) растворяли в конц. H₂SO₄ (22,2 мл) и по каплям добавляли конц. HNO₃ (7,4 мл), поддерживая температуру ниже 30°С, и смесь перемешивали при к.т. в течение 1 ч. Затем смесь выливали в ледяную воду (20 мл), после чего осажденные кристаллы собирали посредством фильтрования, промывали водой и сушили при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения (0,632 г, 3,19 ммоль, выход 72%). MS/ESI⁺ 199,1 [МН]⁺, Rt = 0,93 мин (Способ А).

Промежуточное соединение С4: 2-6ензил-5-хлор-4-циклопентил-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-хлор-4-циклопентил-2,3-дигидропиридазин-3-она С3 (0,350 г, 1,76 ммоль) в DMF (12 мл) добавляли карбонат калия (0,293 г, 2,12 ммоль), а затем бензилбромид (0,252 мл, 2,12 ммоль), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. в течение 3 ч. Смесь распределяли между EtOAc и водой, и органическую фазу промывали несколько раз рассолом и сушили над сульфатом натрия. Растворитель удаляли и неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от циклогексана до смеси циклогексан:EtOAc = 80:20) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,389 г, 1,35 ммоль, выход 77%). MS/ESI⁺ 289,2 [MH]⁺, Rt = 1,39 мин (Способ А).

Промежуточное соединение D1: 2-бензил-5-(1-этоксиэтенил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 2-бензил-5-бром-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она А1 (1,212 г, 3,55 ммоль) в толуоле (15 мл) добавляли бис(трифенилфосфин)палладия(II) дихлорид (0,125 г, 0,17 ммоль), а затем трибутил(1-этоксивинил)олово (1,3 мл, 3,9 ммоль), и полученную в результате смесь нагревали до температуры дефлегмации в течение 2 ч. Смесь оставляли охлаждаться до к.т. и затем фильтровали через слой целита. Фильтрат упаривали досуха, и неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от циклогексана до смеси циклогексан:EtOAc = 60:40) с получением указанного в заголовке соединения (1,17 г, 3,52 ммоль, выход 99%). MS/ESI⁺ 333,2 [МН]⁺, Rt = 1,28 мин (Способ А).

Промежуточное соединение D2: 5-(1-этоксиэтенил)-2-метил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению D1, начиная с 5-бром-2-метил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она А2 (0,279 г, 1,05 ммоль), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:EtOAc = от 93:7 до 40:60) с получением указанного в заголовке соединения (0,264 г, 1,03 ммоль, выход 98%). MS/ESI⁺ 257,2 [МН]⁺, Rt = 1,01 мин (Способ А).

Промежуточное соединение D3: 5-(1-этоксиэтенил)-6-фенил-2-(пропан-2-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению D1, начиная с 5-бром-6-фенил-2-(пропан-2-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-она A3 (0,625 г, 2,132 ммоль), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от циклогексана до смеси циклогексан:EtOAc = 80:20); полученный продукт растворяли в EtOAc и энергично перемешивали с водным насыщ. KF в течение 15 мин. Фазы разделяли и органический слой упаривали досуха с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-коричневого твердого вещества (0,555 г, 1,952 ммоль, выход 91%). MS/ESI⁺ 285,2 [МН]⁺, Rt = 1,20 мин (Способ А).

Промежуточное соединение D4: 5-(1-этоксиэтенил)-2-(оксан-2-ил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению D1, начиная с 5-бром-2-(оксан-2-ил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она А4 (3,4 г, 10,15 ммоль), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:EtOAc = от 93:7 до 40:60) с получением указанного в заголовке соединения (3,308 г, 10,15 ммоль, количественный выход). MS/ESI⁺ 327.3 [MH]⁺, Rt = 1,16 мин (Способ А).

Промежуточное соединение D5: 2-бензил-5-(1-этоксиэтенил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению D1, начиная с 2-бензил-5-йодо-2,3-дигидропиридазин-3-она В1 (0,504 г, 1,61 ммоль), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:EtOAc = от 93:7 до 40:60) с получением указанного в заголовке соединения (0,372 г, 1,45 ммоль, выход 90%). MS/ESI⁺ 257,0 [МН]⁺, Rt = 1,04 мин (Способ А).

Промежуточное соединение D6: 5-(1-этоксиэтенил)-2-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению D1, начиная с 5-йодо-2-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она В2 (0,513 г), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:EtOAc = от 93:7 до 40:60) с получением указанного в заголовке соединения (0,374 г, 1,55 ммоль). MS/ESI⁺ 243,0 [МН]⁺, Rt = 0,98 мин (Способ А).

Промежуточное соединение D7: 5-(1-этоксиэтенил)-2-метил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению D1, начиная с 5-йодо-2-метил-2,3-дигидропиридазин-3-она (полученного в соответствии со способом, описанным в Tetrahedron, 2004, 60, 12177-12189) (0,904 г), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:EtOAc = от 93:7 до 40:60) с получением указанного в заголовке соединения (0,659 г, 3,66 ммоль). MS/ESI⁺ 181,1 [МН]⁺, Rt = 0,73 мин (Способ А).

Промежуточное соединение D8: 2-трет-бутил-5-(1-этоксиэтенил)-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

К дегазированному раствору 2-трет-бутил-5-хлор-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она С1 (1,190 г, 4,53 ммоль) в толуоле (20 мл), добавляли PdCl₂(PPh₃)₂ (0,159 г, 0,226 ммоль), а затем трибутил(1-этоксивинил)олово (1,683 мл, 4,98 ммоль), и полученную в результате смесь нагревали до температуры дефлегмации в течение ночи. Смесь оставляли охлаждаться до к.т, и затем фильтровали через слой целита. Фильтрат выпаривали досуха, и неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от циклогексана до смеси циклогексан:EtOAc = 95:5) с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого масла (1,074 г, 3,60 ммоль, выход 79%). MS/ESI⁺ 299,3 [MH]⁺, Rt = 1,29 мин (Способ А).

Промежуточное соединение D9: 2-бензил-4-циклопентил-5-(1-этоксиэтенил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению D8, начиная с 2-бензил-5-хлор-4-циклопентил-2,3-дигидропиридазин-3-она С4 (0,389 г, 1,35 ммоль), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от циклогексана до смеси циклогексан:EtOAc = 90:10) с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого масла (0,410 г, 1,26 ммоль, выход 94%). MS/ESI⁺ 325,3 [МН]⁺, Rt = 1,42 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Е1: 5-ацетил-2-бензил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 2-бензил-5-(1-этоксиэтенил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она D1 (1,17 г, 3,52 ммоль) в толуоле (15 мл) добавляли водную 37% HCl (0,75 мл), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. в течение 12 ч. Смесь экстрагировали DCM, органическую фазу сушили над сульфатом натрия и растворитель выпаривали с получением указанного в заголовке соединения (1,066 г, 3,5 ммоль, выход 99%). MS/ESI⁺ 305,2 [МН]⁺, Rt = 1,07 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Е2: 5-ацетил-2-метил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению Е1, начиная с 5-(1-этоксиэтенил)-2-метил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она D2 (0,264 г, 1,03 ммоль), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:EtOAc = от 90:10 до 20:80) с получением указанного в заголовке соединения (0,204 г, 0,894 ммоль, выход 87%). MS/ESI⁺ 229,1 [МН]⁺, Rt = 0,78 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Е3: 5-ацетил-6-фенил-2-(пропан-2-ил)-2.3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению Е1, начиная с 5-(1-этоксиэтенил)-6-фенил-2-(пропан-2-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-она D3 (0,515 г, 1,811 ммоль), перемешивали в течение 2 ч с получением указанного в заголовке соединения в виде бежевого твердого вещества (0,442 г, 1,724 ммоль, выход 95%). MS/ESI⁺ 257,2 [МН]⁺, Rt = 0,98 мин (Способ А).

Промежуточное соединение E4: 5-ацетил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Смесь 5-(1-этоксиэтенил)-2-(оксан-2-ил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она D4 (3,308 г, 10,15 ммоль) в водной 6 н. HCl (30 мл) нагревали до температуры дефлегмации в течение 2 ч. Смесь экстрагировали DCM, органический слой сушили над сульфатом натрия и растворитель выпаривали. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:EtOAc = от 90:10 до 20:80) с получением оранжевого твердого вещества, которое перекристаллизовывали из 2-пропанола с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (1,486 г, 6,9 ммоль, выход 68%). Маточный раствор восстанавливали с получением второй фракции указанного в заголовке соединения, которое использовали без какой-либо дополнительной очистки (0,771 г). MS/ESI⁺ 215,1 [МН]⁺, Rt = 0,67 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Е5: 5-ацетил-2-(циклопропилметил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-ацетил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е4 (0,300 г) в DMF (6 мл) добавляли карбонат калия (0,232 г, 1,68 ммоль), а затем (бромметил)циклопропан (0,163 мл, 1,68 ммоль), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Смесь разбавляли EtOAc, промывали водой и затем несколько раз рассолом. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, и растворитель удаляли в вакууме. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от циклогексана до смеси циклогексан:EtOAc = 60:40) с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого масла (0,212 г, 0,79 ммоль). MS/ESI⁺ 269,2 [МН]⁺, Rt = 0,99 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Е6: 5-ацетил-2,6-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-ацетил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е4 (0,214 г) в DCM (12 мл) и DMF (4 мл) добавляли ацетат меди (II) (0,363 г, 2 ммоль), фенилбороновую кислоту (0,146 г, 1,2 ммоль), пиридин (0,162 мл, 2 ммоль) и активированные 4Å молекулярные сита (1,200 г), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т.на открытом воздухе в течение 24 ч. Добавляли дополнительно фенилбороновую кислоту (0,146 г, 1,2 ммоль), и перемешивание продолжали в течение еще 4 ч. Добавляли концентрированный водный NH₄OH, растворители выпаривали в вакууме, и нерастворимые вещества отфильтровывали; неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:EtOAc = от 90:10 до 20:80) с получением указанного в заголовке соединения (0,290 г, 1 ммоль). MS/ESI⁺ 291,1 [МН]⁺, Rt = 1,01 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Е7: 5-ацетил-6-фенил-2-(пиридин-2-илметил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-ацетил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е4 (0,300 г) в DMF (3 мл) добавляли карбонат калия (0,518 г, 4,2 ммоль), а затем 2-(бромметил)пиридина бромгидрат (0,709 г, 2,8 ммоль), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. в течение 1 ч. Смесь разбавляли EtOAc и промывали водой и затем несколько раз рассолом. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, и растворитель удаляли в вакууме. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от смеси циклогексан:EtOAc = 80:20 до 100% EtOAc) с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого масла (0,268 г, 0,878 ммоль). MS/ESI⁺ 306,2 [МН]⁺, Rt = 0,77 мин (Способ А).

Промежуточное соединение E8: 5-ацетил-2-бензил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению Е1, начиная с 2-бензил-5-(1-этоксиэтенил)-2,3-дигидропиридазин-3-она D5 (0,372 г, 1,45 ммоль), с получением указанного в заголовке соединения (0,288 г, 1,26 ммоль, выход 87%). MS/ESI⁺ 229,0 [МН]⁺, Rt = 0,81 мин (Способ А).

Промежуточное соединение E9: 5-ацетил-2-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению Е1, начиная с 5-(1-этоксиэтенил)-2-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она D6 (0,374 г, 1,55 ммоль), с получением указанного в заголовке соединения (0,262 г, 1,22 ммоль, выход 79%). MS/ESI⁺ 214,9 [МН]⁺, Rt = 0,70 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Е10: 5-ацетил-2-метил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению Е1, начиная с 5-(1-этоксиэтенил)-2-метил-2,3-дигидропиридазин-3-она D7 (0,735 г, 4,08 ммоль), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:EtOAc = от 90:10 до 20:80) с получением указанного в заголовке соединения (0,544 г, 3,57 ммоль, выход 88%). MS/ESI⁺ 153,1 [МН]⁺, Rt = 0,42 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Е11: 5-ацетил-2-трет-бутил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению Е1, начиная с 2-трет-бутил-5-(1-этоксиэтенил)-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она D8 (1,074 г, 3,60 ммоль), перемешивали в течение 2 ч с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (0,847 г, 3,13 ммоль, выход 87%). MS/ESI⁺ 271,0 [МН]⁺, Rt = 1,10 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Е12: 5-ацетил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

5-Ацетил-2-трет-бутил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он Е11 (0,645 г, 2,386 ммоль) растворяли в TFA (16 мл), и полученную в результате смесь нагревали до температуры дефлегмации в течение ночи и затем нагревали под действием микроволнового (MB) излучения при 120°С в течение 8 ч. Летучие вещества удаляли в вакууме, и коричневый остаток растирали с EtOAc. Осадок собирали посредством фильтрования с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (0,275 г, 1,284 ммоль, выход 54%). MS/ESI⁺ 215,1 [МН]⁺, Rt = 0,65 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Е13: 5-ацетил-2-бензил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-ацетил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е12 (0,092 г, 0,429 ммоль) в DMF (3 мл) добавляли карбонат калия (0,071 г, 0,515 ммоль), а затем бензилбромид (0,061 мл, 0,515 ммоль), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. в течение 4 ч. Смесь распределяли между EtOAc и водой, и органическую фазу несколько раз промывали рассолом и сушили над сульфатом натрия. Растворитель удаляли, и неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от циклогексана до смеси циклогексан:EtOAc = 80:20) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,105 г, 0,345 ммоль, выход 80%). MS/ESI⁺ 305,2 [МН]⁺, Rt = 1,08 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Е14: 5-ацетил-2-метил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-ацетил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е12 (0,090 г, 0,42 ммоль) в DMF (3 мл) добавляли карбонат калия (0,069 г, 0,50 ммоль), а затем йодметан (0,063 мл, 1,01 ммоль), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. в течение 8 ч. Смесь распределяли между EtOAc и водой, органическую фазу экстрагировали EtOAc, и объединенные органические слои несколько раз промывали рассолом и сушили над сульфатом натрия. Растворитель удаляли, и неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от циклогексана до смеси циклогексан:EtOAc = 65:35) с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-оранжевого твердого вещества (0,075 г, 0,329 ммоль, выход 78%). MS/ESI⁺ 229,1 [МН]⁺, Rt = 0,75 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Е15: 5-ацетил-2,4-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-ацетил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е12 (0,092 г, 0,429 ммоль) в DCM (4,5 мл) и DMF (1,5 мл) добавляли ацетат меди (II) (0,156 г, 0,859 ммоль), фенилбороновую кислоту (0,063 г, 0,515 ммоль), пиридин (0,069 мл, 0,859 ммоль) и активированные 4Å молекулярные сита (0,228 г), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. на открытом воздухе в течение 24 ч. Смесь разбавляли DCM, и добавляли водный концентрированный NH₄OH. Смесь фильтровали через слой целита, и фильтрат выпаривали досуха. Остаток очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от циклогексана до смеси циклогексан:EtOAc = 80:20) с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (0,092 г, 0,317 ммоль, выход 74%). MS/ESI⁺ 291,2 [МН]⁺, Rt = 1,00 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Е16: 5-ацетил-2-[2-(морфолин-4-ил)этил]-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-ацетил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е12 (0,250 г, 1,17 ммоль) в DMF (7,5 мл) добавляли карбонат калия (0,388 г, 2,81 ммоль), а затем 4-(2-хлорэтил)морфолина хлоргидрат (0,260 г, 1,40 ммоль), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. в течение 7 ч и затем нагревали до 50°С в течение ночи. Смесь распределяли между EtOAc и водой, и органическую фазу несколько раз промывали рассолом и сушили над сульфатом натрия. Растворитель удаляли, и неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 95:5) с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого масла (0,380 г). MS/ESI⁺ 328,2 [МН]⁺, Rt = 0,40 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Е17: 5-ацетил-4-фенил-2-(пиридин-3-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-ацетил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е12 (0,150 г, 0,7 ммоль) в DCM (9 мл) и DMF (3 мл) добавляли ацетат меди (II) (0,254 г, 1,4 ммоль), 3-пиридинилбороновую кислоту (0,103 г, 0,84 ммоль), пиридин (0,11 мл, 1,4 ммоль) и активированные 4Å молекулярные сита (0,250 г), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. на открытом воздухе в течение 4 суток. Добавляли дополнительное количество ацетата меди (II) (0,150 г, 0,82 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение еще 72 ч. Смесь разбавляли DCM, и добавляли 7 н. NH₃ в МеОН до тех пор, пока раствор не менял свой цвет от зеленого до голубого. Смесь фильтровали через слой целита, и фильтрат выпаривали досуха. Остаток очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:EtOAc = от 70:30 до 40:60) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,141 г, 0,48 ммоль, выход 57%). MS/ESI⁺ 292,2 [МН]⁺, Rt = 0,77 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Е18: 5-ацетил-2-бензил-4-циклопентил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению Е1, начиная с 2-бензил-4-циклопентил-5-(1-этоксиэтенил)-2,3-дигидропиридазин-3-она D9 (0,410 г, 1,26 ммоль), перемешивали в течение 2 ч с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (0,361 г, 1,219 ммоль, выход 97%). MS/ESI⁺ 297,2 [МН]⁺, Rt = 1,18 мин (Способ А).

Промежуточное соединение F: этил-1-бензил-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-карбоксилат

К раствору этил-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-карбоксилата (полученного в соответствии со способом, описанным в патенте US 2009/111821 А1, 2009) (0,150 г, 0,89 ммоль) в DMF (5 мл) добавляли карбонат калия (0,149 г, 1,07 ммоль), а затем бензилбромид (0,127 мл, 1,07 ммоль), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Смесь разбавляли EtOAc и промывали водой и затем несколько раз рассолом. Органическую фазу сушили над сульфатом натрия, и растворитель удаляли в вакууме. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от циклогексана до смеси циклогексан:EtOAc = 80:20) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,201 г, 0,778 ммоль, выход 87%). MS/ESI⁺ 259,1 [МН]⁺, Rt = 0,98 мин (Способ А).

Промежуточное соединение G1: 2-бензил-5-(1-гидроксиэтил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-ацетил-2-бензил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е1 (1,066 г, 3,50 ммоль) в THF (5 мл) и МеОН (5 мл) добавляли NaBH4 (0,199 г, 5,25 ммоль), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Добавляли воду и смесь экстрагировали DCM; органический слой сушили над сульфатом натрия и растворитель выпаривали. Неочищенное вещество растворяли в CH₃CN (30 мл), добавляли CuCl₂ (0,961 г, 7,14 ммоль) и реакционную смесь кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Смесь затем выливали в лед и экстрагировали DCM; органическую фазу сушили над сульфатом натрия и растворитель выпаривали. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем SNAP (циклогексан:EtOAc = 1:1) с получением указанного в заголовке соединения (0,525 г, 1,71 ммоль, выход 49%). MS/ESI⁺ 307,2 [МН]⁺, RT = 0,97 мин (Способ А).

Промежуточное соединение G2: 5-(1-гидроксиэтил}-2-метил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению G1, начиная с 5-ацетил-2-метил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е2 (0,204 г, 0,894 ммоль) в THF (4 мл) и МеОН (1 мл), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage SNAP с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 98:2) с получением указанного в заголовке соединения (0,105 г, 0,456 ммоль, выход 51%). MS/ESI⁺ 231,1 [МН]⁺, RT = 0,69 мин (Способ А).

Промежуточное соединение G3: 5-(1-гидроксиэтил)-6-фенил-2-(пропан-2-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению G1, начиная с 5-ацетил-6-фенил-2-(пропан-2-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-она ЕЗ (0,440 г, 1,718 ммоль) в THF (5 мл) и МеОН (1 мл), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже с диоксидом кремния Biotage NH (от смеси циклогексан:EtOAc = 80:20 до 100% EtOAc) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,132 г, 0,511 ммоль, выход 30%). MS/ESI⁺ 259,0 [МН]⁺, RT = 0,86 мин (Способ А).

Промежуточное соединение G4: 2-(циклопропилметил)-5-(1-гидроксиэтил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению G1, начиная с 5-ацетил-2-(циклопропилметил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е5 (0,212 г, 0,79 ммоль) в THF (4 мл) и МеОН (1 мл), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 98:2) с получением указанного в заголовке соединения (0,178 г). MS/ESI⁺ 271,2 [МН]⁺, RT = 0,88 мин (Способ А).

Промежуточное соединение G5: 5-(1-гидроксиэтил)-2,6-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению G1, начиная с 5-ацетил-2,6-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е6 (0,370 г, 1,275 ммоль) в THF (8 мл) и МеОН (2 мл), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 98:2) с получением указанного в заголовке соединения (0,097 г, 0,33 ммоль, выход 26%). MS/ESI⁺ 293,2 [МН]⁺, RT = 0,90 мин (Способ А).

Промежуточное соединение G6: 5-(1-гидроксиэтил)-6-фенил-2-(пиридин-2-илметил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-ацетил-6-фенил-2-(пиридин-2-илметил)-2,3-

дигидропиридазин-3-она Е7 (0,268 г, 0,878 ммоль) в THF (4 мл) и МеОН (1 мл) добавляли NaBH₄ (0,050 г, 1,32 ммоль), и полученную в результате смесь перемешивали при к.т. в течение 2 ч. Добавляли воду, и смесь экстрагировали DCM; органическую фазу сушили над сульфатом натрия, и растворитель выпаривали. Неочищенное вещество суспендировали в водном 0,5М NaOH (15 мл), добавляли натрия 3-нитробензолсульфонат (0,190 г, 0,855 ммоль), и полученную в результате смесь кипятили с обратным холодильником в течение 1 ч. Смесь нейтрализовали водным 6 М HCl и экстрагировали DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом и сушили над сульфатом натрия; растворитель удаляли и неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:AcOEt = от 90:10 до 60:40) с получением указанного в заголовке соединения (0,041 г, 0,133 ммоль, выход 16%). MS/ESI⁺ 308,2 [МН]⁺, RT = 0,67 мин (Способ А).

Промежуточное соединение G7: 2-бензил-5-(1-гидроксиэтил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-ацетил-2-бензил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е8 (0,288 г, 1,26 ммоль) в THF (5 мл) и МеОН (0,5 мл), охлажденному при 0°С, добавляли NaBH₄ (0,062 г, 1,64 ммоль), и полученную в результате смесь оставляли нагреваться до к.т, перемешивая в течение 2 ч. Смесь гасили путем добавления водной 1 н. HCl, летучие вещества удаляли в вакууме, и остаток суспендировали в DCM/MeOH 1:1. Нерастворимые вещества отфильтровывали и растворитель удаляли с получением указанного в заголовке соединения (0,140 г). MS/ESI⁺ 231,0 [МН]⁺, RT = 0,69 мин (Способ А).

Промежуточное соединение G8: 5-(1-гидроксиэтил}-2-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению G7, начиная с 5-ацетил-2-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е9 (0,262 г, 1,22 ммоль), и дополнительно очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с диоксидом кремния (от смеси толуол:AcOEt = 90:10 до 100% EtOAc) с получением указанного в заголовке соединения (0,080 г, 0,37 ммоль, выход 30%). MS/ESI⁺ 216,9 [МН]⁺, RT = 0,59 мин (Способ А).

Промежуточное соединение G9: 5-(1-гидроксиэтил}-2-метил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению G1, начиная с 5-ацетил-2-метил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е10 (0,544 г, 3,57 ммоль) в THF (8 мл) и МеОН (2 мл), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage SNAP с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 98:2) с получением указанного в заголовке соединения (0,220 г, 1,428 ммоль, выход 40%). MS/ESI⁺ 155,1 [МН]⁺, RT = 0,37 мин (Способ А).

Промежуточное соединение G10: 2-трет-бутил-5-(1-гидроксиэтил)-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-ацетил-2-трет-бутил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е11 (0,200 г, 0,740 ммоль) в THF (5 мл) и МеОН (0,5 мл), охлажденному при 0°С, добавляли NaBH₄ (0,036 г, 0,962 ммоль) и полученную в результате смесь оставляли нагреваться до к.т., перемешивали в течение 2 ч. Смесь распределяли между DCM и водой, и водную фазу экстрагировали DCM. Объединенные органические слои промывали рассолом и сушили над сульфатом натрия. Растворитель удаляли с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (0,190 г, 0,698 ммоль, выход 94%). MS/ESI⁺ 273,0 [МН]⁺, RT = 0,93 мин (Способ А).

Промежуточное соединение G11: 2-бензил-5-(1-гидроксиэтил)-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению G10, начиная с 5-ацетил-2-бензил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е13 (0,103 г, 0,338 ммоль), перемешивали в течение 1 ч с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,090 г, 0,294 ммоль, выход 87%). MS/ESI⁺ 307,3 [МН]⁺, RT = 0,93 мин (Способ А).

Промежуточное соединение G12: 5-(1-гидроксиэтил}-2-метил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению G10, начиная с 5-ацетил-2-метил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е14 (0,073 г, 0,320 ммоль), перемешивали в течение 1 ч с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного аморфного вещества (0,066 г, 0,287 ммоль, выход 89%). MS/ESI⁺ 231,1 [MH]⁺, RT = 0,61 мин (Способ А).

Промежуточное соединение G13: 5-(1-гидроксиэтил)-2,4-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению G10, начиная с 5-ацетил-2,4-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е15 (0,090 г, 0,310 ммоль), перемешивали в течение 1 ч с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,089 г, 0,304 ммоль, выход 98%). MS/ESI⁺ 293,2 [МН]⁺, RT = 0,85 мин (Способ А).

Промежуточное соединение G14: 5-(1-гидроксиэтил}-2-[2-(морфолин-4-ил)этил1-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению G10, начиная с 5-ацетил-2-[2-(морфолин-4-ил)этил]-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е16 (0,380 г), перемешивали в течение 1 ч с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого масла (0,372 г). MS/ESI⁺ 330,3 [МН]⁺, RT = 0,36 мин (Способ А).

Промежуточное соединение G15: 5-(1-гидроксиэтил)-4-фенил-2-(пиридин-3-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению G10, начиная с 5-ацетил-4-фенил-2-(пиридин-3-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-она Е17 (0,141 г, 0,45 ммоль), перемешивали в течение 30 мин с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,121 г). MS/ESI⁺ 294,3 [МН]⁺, RT = 0,64 мин (Способ А).

Промежуточное соединение G16: 2-бензил-4-циклопентил-5-(1-гидроксиэтил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению G10, начиная с 5-ацетил-2-бензил-4-циклопентил-2,3-дигидропиридазин-3-она Е18 (0,361 г, 1,219 ммоль), перемешивали в течение 1 ч с получением указанного в заголовке соединения (0,358 г, 1,201 ммоль, выход 98%). MS/ESI⁺ 299,2 [МН]⁺, RT = 1,06 мин (Способ А).

Промежуточное соединение G17: 2-бензил-5-(гидроксиметил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

CaCl₂ (0,173 г, 1,55 ммоль) порциями добавляли к перемешиваемой охлажденной смеси этил-1-бензил-6-оксо-1,6-дигидропиридазин-4-карбоксилата F (0,201 г, 0,77 ммоль) и NaBH₄ (0,118 г, 3,11 ммоль) в THF (5 мл) и МеОН (5 мл), поддерживая температуру приблизительно 30°С. После перемешивания при к.т. в течение 2 ч смесь гасили водной 1 н. HCl и экстрагировали EtOAc; органическую фазу сушили над сульфатом натрия, и растворитель удаляли в вакууме. Неочищенное вещество растворяли в CH₃CN (10 мл), добавляли CuCl₂ (0,247 г, 1,83 ммоль), и полученную в результате смесь кипятили с обратным холодильником в течение ночи. Смесь выливали в лед и экстрагировали DCM; органическую фазу сушили над сульфатом натрия и растворитель выпаривали. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:EtOAc = 1:1) с получением указанного в заголовке соединения (0,030 г, 0,138 ммоль, выход 18%). MS/ESI⁺ 217,1 [МН]⁺, RT = 0,66 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Н1: 5-(1-азидоэтил}-2-бензил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

DPPA (0,281 мл, 1,305 ммоль), а затем DBU (0,195 мл, 1,305 ммоль) добавляли к раствору 2-бензил-5-(1-гидроксиэтил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она G1 (0,200 г, 0,652 ммоль) в THF (10 мл) в атмосфере азота, и смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Растворитель удаляли в вакууме, и остаток распределяли между EtOAc и водой. Водную фазу экстрагировали EtOAc, и объединенные органические слои промывали рассолом и сушили над сульфатом натрия. Растворитель удаляли, и неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage SNAP с силикагелем (циклогексан:EtOAc = от 90:10 до 60:40) с получением указанного в заголовке соединения (0,130 г, 0,39 ммоль, выход 60%). MS/ESI⁺ 333,2 [МН]⁺, RT = 1,18 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Н2: 5-(1-азидоэтил}-2-метил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению Н1, начиная с 5-(1-гидроксиэтил}-2-метил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она G2 (0,040 г, 0,17 ммоль), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:EtOAc = от 90:10 до 60:40) с получением указанного в заголовке соединения (0,036 г, 0,141 ммоль, выход 83%). MS/ESI⁺ 256,1 [МН]⁺, RT = 0,93 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Н3: 5-(1-азидоэтил)-6-фенил-2-(пропан-2-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению Н1, начиная с 5-(1-гидроксиэтил)-6-фенил-2-(пропан-2-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-она G3 (0,060 г, 0,232 ммоль); после перемешивания при к.т. в течение ночи добавляли дополнительное количество DPPA (2 экв.) и DBU (2 экв.), и смесь перемешивали при к.т. в течение еще 24 ч. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от циклогексана до циклогексан: EtOAc = 80:20) с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного масла (0,038 г, 0,134 ммоль, выход 58%). MS/ESI⁺ 284,2 [МН]⁺, RT = 1,11 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Н4: 5-(1-азидоэтил}-2-(циклопропилметил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению Н1, начиная с 2-(циклопропилметил)-5-(1-гидроксиэтил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она G4 (0,092 г), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:AcOEt = от 90:10 до 60:40) с получением указанного в заголовке соединения (0,061 г, 0,206 ммоль). MS/ESI⁺ 296,2 [МН]⁺, RT = 1,12 мин (Способ А).

Промежуточное соединение Н5: 5-(1-азидоэтил)-2,6-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению Н1, начиная с 5-(1-гидроксиэтил)-2,6-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-она G5 (0,047 г, 0,16 ммоль), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:AcOEt = от 90:10 до 60:40) с получением указанного в заголовке соединения (0,028 г, 0,088 ммоль, выход 55%). MS/ESI⁺ 318,2 [МН]⁺, RT = 1,13 мин (Способ А).

Промежуточное соединение I1: 5-(1-аминоэтил}-2-бензил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

PPh₃ (0,206 г, 0,78 ммоль) добавляли к раствору 5-(1-азидоэтил}-2-бензил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Н1 (0,130 г, 0,39 ммоль) в THF (5 мл) в атмосфере азота, и смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Добавляли воду (1 мл), и реакционную смесь нагревали при 60°С в течение 4 ч. Растворитель удаляли в вакууме, и остаток растворяли в МеОН и наносили на картридж SCX (2 г), промывая МеОН. Продукт элюировали 2 М NH₃ в МеОН, и летучие вещества удаляли при пониженном давлении с получением указанного в заголовке соединения в виде коричневого масла, которое использовали без какой-либо дополнительной очистки (0,112 г, 0,366 ммоль, выход 94%). MS/ESI⁺ 306,2 [МН]⁺, Rt = 0,61 мин (Способ А).

Промежуточное соединение I2: 5-(1-аминоэтил}-2-метил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению I1, начиная с 5-(1-азидоэтил}-2-метил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Н2 (0,036 г, 0,141 ммоль), с получением указанного в заголовке соединения в виде коричневого масла, которое использовали без какой-либо дополнительной очистки (0,0324 г, 0,141 ммоль, количественный выход). MS/ESI⁺ 230,2 [МН]⁺, Rt = 0,37 мин (Способ А).

Промежуточное соединение I3: 5-(1-аминоэтил)-6-фенил-2-(пропан-2-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению I1, начиная с 5-(1-азидоэтил)-6-фенил-2-(пропан-2-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-она Н3 (0,038 г, 0,134 ммоль), нагревая при 50°С в течение 4 ч после добавления воды, с получением указанного в заголовке соединения в виде бесцветного аморфного вещества, которое использовали без какой-либо дополнительной очистки (0,031 г, 0,120 ммоль, выход 90%). MS/ESI⁺ 258,2 [МН]⁺, Rt = 0,52 мин (Способ А).

Промежуточное соединение I4: 5-(1-аминоэтил}-2-(циклопропилметил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению I1, начиная с 5-(1-азидоэтил}-2-(циклопропилметил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Н4 (0,061 г, 0,206 ммоль), нагревая при 60°С в течение ночи после добавления воды, с получением указанного в заголовке соединения в виде коричневого масла, которое использовали без какой-либо дополнительной очистки (0,043 г). MS/ESI⁺ 270,2 [МН]⁺, Rt = 0,53 мин (Способ А).

Промежуточное соединение I5: 5-(1-аминоэтил)-2,6-диФенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению I1, начиная с 5-(1-азидоэтил)-2,6-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-она Н5 (0,028 г, 0,088 ммоль), с получением указанного в заголовке соединения в виде коричневого масла, которое использовали без какой-либо дополнительной очистки (0,023 г). MS/ESI⁺ 292,2 [МН]⁺, Rt = 0,55 мин (Способ А).

Промежуточное соединение и соединение J1: 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил}-2-бензил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

К смеси 2-бензил-5-(1-гидроксиэтил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она G1 (0,100 г, 0,326 ммоль), 3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-4-амина (0,111 г, 0,424 ммоль) и PPh₃ (0,128 г, 0,489 ммоль) в безводном THF (9 мл) по каплям при к.т. добавляли раствор DIAD (0,083 мл, 0,424 ммоль) в THF (1 мл), и реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч. Растворитель удаляли, и остаток очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 98:2) с получением указанного в заголовке соединения (0,146 г, 0,265 ммоль, выход 81%). MS/ESI⁺ 550,2 [МН]⁺, Rt 0,97 мин (Способ А).

Промежуточное соединение и соединение J2: 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил}-2-метил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению J1, начиная с 5-(1-гидроксиэтил}-2-метил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она G2 (0,065 г, 0,26 ммоль), перемешивали в течение 2 ч, и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 98:2) с получением указанного в заголовке соединения (0,102 г). MS/ESI⁺ 474,2 [МН]⁺, Rt 0,71 мин (Способ А).

Промежуточное соединение и соединение J3: 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)этил)-6-фенил-2-(пропан-2-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению J1, начиная с 5-(1-гидроксиэтил)-6-фенил-2-(пропан-2-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-она G3 (0,070 г, 0,271 ммоль), перемешивали в течение 2 ч и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с диоксидом кремния-NH (от DCM до смеси DCM:EtOAc = 85:15) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,101 г). MS/ESI⁺ 502,2 [MH]⁺, Rt 0,87 мин (Способ А).

Промежуточное соединение и соединение J4: 5-(1-(4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил}-2-(циклопропилметил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению J1, начиная с 2-(циклопропилметил)-5-(1-гидроксиэтил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она G4 (0,086 г), перемешивали в течение 2 ч и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 98:2) с получением указанного в заголовке соединения (0,105 г). MS/ESI⁺ 514,2 [МН]⁺, Rt 0,89 мин (Способ А).

Промежуточное соединение и соединение J5: 5-(1-(4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-сПпиримидин-1-ил)этил)-2,6-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению J1, начиная с 5-(1-гидроксиэтил)-2,6-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-она G5 (0,050 г, 0,17 ммоль), перемешивали в течение 2 ч и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 98:2), с последующим фильтрованием через картридж SCX (1 г), промывая МеОН и затем элюируя 2М NH₃ в МеОН с получением указанного в заголовке соединения (0,033 г). MS/ESI⁺ 536,2 [МН]⁺, Rt 0,91 мин (Способ А).

Промежуточное соединение и соединение J6: 5-(1-(4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)этил)-6-фенил-2-(пиридин-2-илметил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению J1, начиная с 5-(1-гидроксиэтил)-6-фенил-2-(пиридин-2-илметил)-2,3-дигидропиридазин-3-она G6 (0,041 г, 0,133 ммоль), перемешивали в течение 2 ч и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 98:2) с получением указанного в заголовке соединения (0,031 г). MS/ESI⁺ 551,1 [МН]⁺, Rt 0,70 мин (Способ А).

Промежуточное соединение и соединение J7: 5-(1-(4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)этил}-2-бензил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению J1, начиная с 2-бензил-5-(1-гидроксиэтил)-2,3-дигидропиридазин-3-она G7 (0,140 г), перемешивали в течение 2 ч и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 98:2) с получением указанного в заголовке соединения (0,287 г, 0,607 ммоль). MS/ESI⁺ 474,0 [МН]⁺, Rt 0,84 мин (Способ А).

Промежуточное соединение и соединение J8: 5-(1-(4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)этил}-2-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению J1, начиная с 5-(1-гидроксиэтил}-2-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она G8 (0,080 г, 0,37 ммоль), перемешивали в течение 2 ч и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 98:2) с получением указанного в заголовке соединения (0,170 г). MS/ESI⁺ 460,2 [МН]⁺, Rt 0,79 мин (Способ А).

Промежуточное соединение и соединение J9: 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил}-2-метил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению J1, начиная с 5-(1-гидроксиэтил}-2-метил-2,3-дигидропиридазин-3-она G9 (0,100 г, 0,649 ммоль), перемешивали в течение 2 ч и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 98:2) с получением указанного в заголовке соединения (0,115 г). MS/ESI⁺ 398,1 [МН]⁺, Rt 0,58 мин (Способ А).

Промежуточное соединение и соединение J10: 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)этил}-2-трет-бутил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению J1, начиная с 2-трет-бутил-5-(1-гидроксиэтил)-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она G10 (0,100 г, 0,367 ммоль), перемешивали в течение ночи и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с диоксидом кремния-NH (DCM:MeOH = от 99:1 до 90:10) с получением указанного в заголовке соединения (0,135 г). MS/ESI⁺ 516,3 [МН]⁺, Rt 1,11 мин (Способ А).

Промежуточное соединение и соединение J11: 5-(1-(4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)этил}-2-бензил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению J1, начиная с 2-бензил-5-(1-гидроксиэтил)-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она G11 (0,088 г, 0,287 ммоль), перемешивали в течение ночи и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с диоксидом кремния-NH (от DCM до смеси DCM:EtOAc = 90:10). Дополнительная очистка посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с диоксидом кремния-NH (циклогексан:EtOAc = от 90:10 до 50:50) требовалась для получения указанного в заголовке соединения в виде бесцветного аморфного вещества (0,095 г). MS/ESI⁺ 550,2 [МН]⁺, Rt 1,06 мин (Способ А).

Промежуточное соединение и соединение J12: 5-(1-(4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)этил}-2-метил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению J1, начиная с 5-(1-гидроксиэтил}-2-метил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она G12 (0,065 г, 0,282 ммоль), перемешивали в течение 2 ч; добавляли дополнительное количество PPh₃ (0,3 экв.), а затем DIAD (0,3 экв.), и реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение еще 2 ч. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с диоксидом кремния-NH (от DCM до смеси DCM:EtOAc = 90:10) с последующим фильтрованием через картридж SCX (5 г), промывая МеОН и затем элюируя 1 М NH₃ в МеОН с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,070 г, 0,148 ммоль, выход 52%). MS/ESI⁺ 474,2 [МН]⁺, Rt 0,77 мин (Способ А).

Промежуточное соединение и соединение J13: 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил)-2,4-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению J1, начиная с 5-(1-гидроксиэтил)-2,4-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-она G13 (0,087 г, 0,298 ммоль), перемешивали в течение 2 ч и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с диоксидом кремния-NH (от DCM до смеси DCM:EtOAc = 90:10) с последующим фильтрованием через картридж SCX (2 г), промывая МеОН и затем элюируя 1 М NH₃ в МеОН. Дополнительная очистка посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с диоксидом кремния-NH (циклогексан:EtOAc = от 80:20 до 40:60) требовалась для получения указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,080 г, 0,149 ммоль, выход 50%). MS/ESI⁺ 536,2 [МН]⁺, Rt 1,00 мин (Способ А).

Промежуточное соединение и соединение J14: 5-(1-(4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил)этил}-2-[2-(морфолин-4-ил)этил1-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению J1, начиная с 5-(1-гидроксиэтил}-2-[2-(морфолин-4-ил)этил]-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она G14 (0,372 г), перемешивали в течение ночи и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с диоксидом кремния-NH (от DCM до смеси DCM:MeOH = 95:5) с получением указанного в заголовке соединения в виде желтого масла (0,114 г). MS/ESI⁺ 573,2 [МН]⁺, Rt 0,49 мин (Способ А).

Промежуточное соединение и соединение J15: 5-(1-(4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил)-4-фенил-2-(пиридин-3-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению J1, начиная с 5-(1-гидроксиэтил)-4-фенил-2-(пиридин-3-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-она G15 (0,121 г), перемешивали в течение ночи; добавляли дополнительное количество DIAD (1 экв.), и реакционную смесь перемешивали при к.т. в течение ночи. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (DCM:MeOH = от 99:1 до 97:3) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,080 г). MS/ESI⁺ 536,9 [МН]⁺, Rt 0,79 мин (Способ А).

Промежуточное соединение и соединение J16: 5-(1-(4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил}-2-бензил-4-циклопентил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению J1, начиная с 2-бензил-4-циклопентил-5-(1-гидроксиэтил)-2,3-дигидропиридазин-3-она G16 (0,358 г, 1,201 ммоль), перемешивали в течение ночи, и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:EtOAc = от 95:5 до 60:40) с последующим фильтрованием на картридже SCX, промывая МеОН и затем элюируя 2 М NH₃ в МеОН, с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого твердого вещества (0,070 г, 0,148 ммоль, выход 52%). MS/ESI⁺ 542,2 [МН]⁺, Rt 1,21 мин (Способ А).

Промежуточное соединение и соединение J17: 5-({4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}метил)-2-бензил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично промежуточному соединению J1, начиная с 2-бензил-5-(гидроксиметил)-2,3-дигидропиридазин-3-она G17 (0,030 г, 0,138 ммоль), перемешивали в течение 2 ч и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 98:2) с получением указанного в заголовке соединения (0,063 г). MS/ESI⁺ 460,2 [MH]⁺, Rt 0,80 мин (Способ А).

Пример 1: 5-(1-Г4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил1этил}-2-бензил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Смесь 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил}-2-бензил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она J1 (0,094 г, 0,17 ммоль), (3-фтор-5-гидроксифенил)бороновой кислоты (0,029 г, 0,188 ммоль) и Pd(PPh₃)₄ (10 мг, 0,008 ммоль) в DME (12 мл), этанола (2 мл) и насыщенного водного карбоната натрия (4 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 4 часов. Реакционную смесь гасили путем добавления воды и экстрагировали DCM; органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с диоксидом кремния-NH (от DCM до смеси DCM:MeOH = 80:20) с получением указанного в заголовке соединения (32,2 мг, 0,06 ммоль, выход 35%). MS/ESI⁺ 534,3 [МН]⁺, Rt 0,95 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.20 (br. s., 1 Н), 8.08 (s, 1 Н), 7.21-7.36 (m, 10 H), 6.98-7.00 (m, 1 H), 6.83-6.87 (m, 1 H), 6.74-6.80 (m, 1 H), 6.64-6.69 (m, 1 H), 6.04 (q, 1 H), 6.00-8.00 (m, 2 H), 5.19-5.34 (m, 2 H), 1.66 (d, 3 H).

Пример 2: 5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-метил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Смесь 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил}-2-метил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она J2 (0,102 г), (3-фтор-5-гидроксифенил)бороновой кислоты (0,037 г, 0,236 ммоль), Pd(PPh₃)₄ (12 мг, 0,01 ммоль) в DME (12 мл), этанола (2 мл) и насыщенного водного карбоната натрия (4 мл) нагревали при 80°С в течение 4 часов. Реакционную смесь гасили путем добавления воды и экстрагировали DCM; органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 80:20) с получением указанного в заголовке соединения (10,5 мг, 0,022 ммоль). MS/ESI⁺ 458,3 [МН]⁺, Rt 0,73 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.20 (br. s., 1 Н), 8.09 (s, 1 Н), 7.24-7.31 (m, 5 Н), 6.90-6.93 (m, 1 Н), 6.84-6.88 (m, 1 Н), 6.77-6.82 (m, 1 Н), 6.64-6.69 (m, 1 Н), 6.25-7.50 (m, 2 Н), 6.01 (q, 1 Н), 3.66 (s, 3 Н), 1.65 (d, 3 Н).

Пример 3: 5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-6-фенил-2-(пропан-2-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично примеру 2, начиная с 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил)-6-фенил-2-(пропан-2-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-она J3 (0,100 г), нагревая при 80°С в течение ночи; добавляли дополнительно (3-фтор-5-гидроксифенил)бороновую кислоту (0,5 экв.) и Pd(PPh₃)₄ (0,05 экв.), и смесь нагревали при той же самой температуре в течение еще 7 ч. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 95:5) с получением указанного в заголовке соединения в виде бледно-желтого порошка (0,045 г, 0,093 ммоль). MS/ESI⁺ 486,3 [МН]⁺, Rt 0,88 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.22 (br. s., 1 Н), 8.12 (s, 1 Н), 7.25-7.37 (m, 5 Н), 6.83-6.89 (m, 2 Н), 6.76-6.82 (m, 1 Н), 6.64-6.70 (m, 1 Н), 6.06 (q, 1 Н), 6.00-8.00 (m, 2 Н), 5.09-5.20 (m, 1 Н), 1.65 (d, 3 Н), 1.22-1.30 (m, 6 Н).

Пример 4: 5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-(циклопропилметил)-6-фенил-2.3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично примеру 2, начиная с 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил}-2-(циклопропилметил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она J4 (0,105 г), нагревая при 80°С в течение 16 ч, и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 80:20) с получением указанного в заголовке соединения (0,0153 г, 0,031 ммоль). MS/ESI⁺ 498,3 [МН]⁺, Rt 0,89 мин (Способ А).

¹Н NMR (500 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.20 (s, 1 Н), 8.10 (s, 1 Н), 7.23-7.34 (m, 5 Н), 6.92 (s, 1 Н), 6.86 (s, 1 Н), 6.76-6.81 (m, 1 Н), 6.63-6.69 (m, 1Н), 6.30-7.90 (m, 2 Н), 6.05 (q, 1 Н), 3.83-4.03 (m, 2 Н), 1.66 (d, 3 Н), 1.16-1.32 (m, 1 Н), 0.42-0.51 (m, 2 Н), 0.29-0.41 (m, 2 Н).

Пример 5: 5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил)-2,6-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично примеру 2, начиная с 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил)-2,6-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-она J5 (0,033 г), нагревая при 80°С в течение 4 ч, и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 80:20) с получением указанного в заголовке соединения (0,0142 г,0,027 ммоль). MS/ESI⁺ 520,3 [МН]⁺, Rt 0,91 мин (Способ А).

¹Н NMR (500 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.23 (s, 1 Н), 8.13 (s, 1 Н), 7.59-7.64 (m, 2 Н), 7.46-7.52 (m, 2 Н), 7.36-7.44 (m, 3 Н), 7.24-7.34 (m, 3 Н), 7.07 (s, 1 Н), 6.89 (s, 1 Н), 6.80-6.85 (m, 1 Н), 6.65-6.71 (m, 1 Н), 6.11 (q, 1 Н), 1.71 (d, 3 Н).

Пример 6: 5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-6-фенил-2-(пиридин-2-илметил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично примеру 2, начиная с 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил)-6-фенил-2-(пиридин-2-илметил)-2,3-дигидропиридазин-3-она J6 (0,031 г), нагревая при 80°С в течение 16 ч, и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 80:20) с получением указанного в заголовке соединения (7,7 мг, 0,014 ммоль). MS/ESI⁺ 535,3 [МН]⁺, Rt 0,73 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.24 (s, 1 Н), 8.50 (d, 1 Н), 8.11 (s, 1 Н), 7.76 (td, 1 Н), 7.20-7.32 (m, 7 Н), 7.02 (s, 1 Н), 6.87 (s, 1 Н), 6.77-6.83 (m, 1 Н), 6.65-6.71 (m, 1 Н), 6.20-8.00 (m, 2 Н), 6.09 (q, 1 Н), 5.31-5.46 (m, 2 Н), 1.69 (d, 3 Н).

Пример 7: 5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-6ензил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично примеру 2, начиная с 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил}-2-бензил-2,3-дигидропиридазин-3-она J7 (0,287 г, 0,607 ммоль), нагревая при 80°С в течение 2 ч, и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с диоксидом кремния-NH (от DCM до смеси DCM:MeOH = 80:20) с получением указанного в заголовке соединения (0,026 г, 0,057 ммоль, выход 9%). MS/ESI⁺ 458,0 [МН]⁺, Rt 0,85 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.22 (br. s., 1 Н), 8.26 (s, 1 Н), 7.95 (d, J=2,1 Гц, 1 Н), 7.23-7.35 (m, 5 Н), 6.91-6.94 (m, 1 Н), 6.86-6.91 (m, 1 Н), 6.64-6.71 (m, 2 Н), 6.06 (q, J=7,0 Гц, 1 Н), 6.00-8.00 (m, 2 Н), 5.15-5.24 (m, 2 Н), 1.85 (d, J=7,2 Гц, 3 Н).

Пример 8: 5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично примеру 2, начиная с 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил}-2-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она J8 (0,170 г), нагревая при 80°С в течение 2 ч, и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с диоксидом кремния-NH (от DCM до смеси DCM:MeOH = 80:20) с получением указанного в заголовке соединения (0,032 г, 0,072 ммоль). MS/ESI⁺ 444,3 [МН]⁺, Rt 0,82 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.23 (s, 1 Н), 8.29 (s, 1 Н), 8.09 (d, 1 Н), 7.38-7.54 (m, 5 Н), 6.94-6.97 (m, 1 Н), 6.89-6.94 (m, 1 Н), 6.77-6.80 (m, 1 Н), 6.65-6.71 (m, 1 Н), 6.25-8.00 (m, 2 Н), 6.13 (q, 1 Н), 1.91 (d, 3 Н).

Пример 9: 5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-метил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично примеру 2, начиная с 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил}-2-метил-2,3-дигидропиридазин-3-она J9 (0,115 г), нагревая при 80°С в течение 4 ч, и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 80:20) с получением указанного в заголовке соединения (0,067 г, 0,175 ммоль). MS/ESI⁺ 382,3 [MH]⁺, Rt 0,62 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.20 (s, 1 Н), 8.27 (s, 1 Н), 7.89 (d, 1 Н), 6.92-6.94 (m, 1 Н), 6.87-6.92 (m, 1 Н), 6.64-6.71 (m, 2 Н), 6.01-6.09 (m, 1 Н), 6.10-8.00 (m, 2 Н), 3.59 (s, 3 Н), 1.85 (d, 3 Н).

Пример 10: 5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-трет-бутил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично примеру 2, начиная с 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил}-2-трет-бутил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она J10 (0,135 г), нагревая при 80°С в течение 3 ч, и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с диоксидом кремния-NH (от EtOAc до EtOAc:МеОН = 80:20) и сушили с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,046 г, 0,092 ммоль). MS/ESI⁺ 500,4 [МН]⁺, Rt 1,06 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.28 (br. s., 1 Н), 8.18 (s, 1 Н), 8.10 (s, 1 Н), 7.41-7.52 (m, 3 Н), 7.30-7.38 (m, 2 Н), 6.94-6.98 (m, 1 Н), 6.89-6.94 (m, 1 Н), 6.66-6.73 (m, 1 Н), 6.20-7.80 (m, 2 Н), 5.82 (q, 1 Н), 1.78 (d, 3 Н), 1.57 (s, 9 Н).

Пример 11: 5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-бензил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично примеру 2, начиная с 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил}-2-бензил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она J11 (0,93 г), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (DCM:MeOH = от 99:1 до 90:10) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,041 г, 0,077 ммоль). MS/ESI⁺ 534,3 [МН]⁺, Rt 1,02 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.23 (s, 1 Н), 8.20 (s, 1 Н), 8.15 (s, 1 Н), 7.42-7.50 (m, 3 Н), 7.27-7.37 (m, 7 Н), 6.88-6.95 (m, 2 Н), 6.66-6.71 (m, 1 Н), 6.40-8.05 (m, 2 Н), 5.83 (q, J=7,2 Гц, 1 Н), 5.16-5.31 (m, 2 Н), 1.78 (d, J=7,0 Гц, 3 Н).

Пример 12: 5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-метил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично примеру 2, начиная с 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил}-2-метил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она J12 (0,069 г, 0,146), нагревая при 80°С в течение 2 ч; добавляли дополнительное количество (3-фтор-5-гидроксифенил)бороновой кислоты (1,1 экв.) и Pd(PPh₃)₄ (0,05 экв.), и смесь нагревали при той же самой температуре в течение ночи. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:MeOH = 94:6) с получением указанного в заголовке соединения в виде не совсем белого твердого вещества (0,033 г, 0,072 ммоль, выход 49%). MS/ESI⁺ 458,2 [МН]⁺, Rt 0,71 мин (Способ В).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.22 (br. s., 1 Н), 8.15 (s, 1 Н), 8.11 (s, 1 Н), 7.41-7.50 (m, 3 Н), 7.30-7.36 (m, 2 Н), 6.92-6.95 (m, 1 Н), 6.87-6.92 (m, 1 Н), 6.65-6.71 (m, 1 Н), 6.10-7.80 (m, 2 Н), 5.77-5.84 (m, 1 Н), 3.64 (s, 3 Н), 1.77 (d, J=7,2 Гц, 3 Н).

Пример 13: 5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил)-2,4-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично примеру 2, начиная с 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил)-2,4-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-она J13 (0,078 г, 0,146 ммоль), нагревая при 80°С в течение 2 ч; добавляли дополнительное количество (3-фтор-6-гидроксифенил)бороновой кислоты (1,1 экв.) и Pd(PPh₃)₄ (0,05), и смесь нагревали при той же самой температуре в течение ночи. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от DCM до смеси DCM:EtOAc = 40:60) с получением указанного в заголовке соединения в виде бежевого твердого вещества (0,037 г, 0,071 ммоль, выход 49%). MS/ESI⁺ 520,3 [МН]⁺, Rt 0,97 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.22 (s, 1 Н), 8.34 (s, 1 Н), 8.18 (s, 1 Н), 7.53-7.59 (m, 2 Н), 7.38-7.52 (m, 8 Н), 6.90-6.97 (m, 2 Н), 6.66-6.72 (m, 1 Н), 6.20-8.30 (m, 2 Н), 5.85-5.92 (m, 1 Н), 1.84 (d, 3 Н).

Пример 14: 5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d)пиримидин-1-ил]этил}-2-[2-(морфолин-4-ил)этил]-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично примеру 2, начиная с 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил}-2-[2-(морфолин-4-ил)этил]-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она J14 (0,114), нагревая при 80°С в течение ночи; добавляли дополнительное количество (3-фтор-5-гидроксифенил)бороновой кислоты (1,1 экв.) и Pd(PPh₃)₄ (0,05 экв.), и смесь нагревали при той же самой температуре в течение еще 2 ч. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с диоксидом кремния-NH (от DCM до смеси DCM:MeOH = 90:10) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,056 г, 0,099 ммоль). MS/ESI⁺ 557,4 [МН]⁺, Rt 0,54 мин (Способ А).

¹Н NMR (500 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.22 (br. s., 1 Н), 8.14-8.18 (m, 2 Н), 7.37-7.50 (m, 3 Н), 7.28-7.36 (m, 2 Н), 6.91-6.95 (m, 1 Н), 6.85-6.91 (m, 1 Н), 6.68 (dt, 1 Н), 5.93-8.36 (m, 2 Н), 5.82 (q, 1 Н), 4.10-4.23 (m, 2 Н), 3.45-3.53 (m, 4 Н), 2.63 (t, 2 Н), 2.34-2.44 (m, 4 Н), 1.78 (d, 3 Н).

Пример 15: 5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-4-фенил-2-(пиридин-3-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично примеру 2, начиная с 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил)-4-фенил-2-(пиридин-3-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-она J15 (0,080 г), нагревая при 65°С в течение ночи; добавляли дополнительное количество (3-фтор-6-гидроксифенил)бороновой кислоты (1,1 экв.) и Pd(PPh₃)₄ (0,06), и смесь нагревали при 80°С в течение 2 ч. Неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже с диоксидом кремния-NH (DCM:MeOH = от 99:1 до 90:10) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,024 г, 0,046 ммоль). MS/ESI⁺ 521,3 [МН]⁺, Rt 0,81 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.23 (br. s., 1 Н), 8.82 (d, 1Н), 8.59 (dd, 1 Н), 8.41 (s, 1 Н), 8.19 (s, 1 Н), 8.03-8.09 (m, 1 Н), 7.42-7.57 (m, 6 Н), 6.91-6.99 (m, 2 Н), 6.66-6.73 (m, 1 Н), 6.00-8.00 (m, 2 Н), 5.91 (q, 1 Н), 1.85 (d, 3 Н).

Пример 16: 5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-бензил-4-циклопентил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично примеру 2, начиная с 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил}-2-бензил-4-циклопентил-2,3-дигидропиридазин-3-она J16 (0,200 г, 0,369 ммоль), нагревая при 80°С в течение ночи, и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (от смеси циклогексан:EtOAc = 90:10 до 100% EtOAc) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,107 г, 0,099 ммоль, выход 55%). MS/ESI⁺ 526,4 [МН]⁺, Rt 1,17 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.20 (s, 1 Н), 8.25 (s, 1 Н), 7.94 (s, 1 Н), 7.20-7.37 (m, 5 Н), 6.85-6.96 (m, 2 Н), 6.64-6.76 (m, 1 Н), 6.33-6.41 (m, 1 Н), 5.95-7.77 (m, 2 Н), 5.00-5.31 (m, 2 Н), 3.52 (квин., 1 Н), 1.32-2.13 (m, 11 Н).

Пример 17: 5-{1-[4-амино-3-(5-гидроксипиридин-3-ил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-бензил-4-циклопентил-2,3-дигидропиридазин-3-он

К смеси 5-(1-{4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}этил}-2-бензил-4-циклопентил-2,3-дигидропиридазин-3-она J16 (0,214 г, 0,395 ммоль), 5-(тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)пиридин-3-ола (0,105 г, 0,474 ммоль) в DME (20 мл) добавляли Pd(PPh₃)₄ (0,023 г, 0,019 ммоль), этанол (3 мл) и насыщенный водный карбонат натрия (5 мл), и реакционную смесь перемешивали при 80°С в течение 3 ч. Реакционную смесь гасили путем добавления воды и экстрагировали DCM; органический слой сушили над сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали. Остаток очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (циклогексан:EtOAc = от 98:2 до 80:20) с получением указанного в заголовке соединения (0,093 г, 0,183 ммоль, выход 46%). MS/ESI⁺ 509,4 [МН]⁺, Rt 0,94 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.12-10.25 (m, 1 Н), 8.31 (d, 1 Н), 8.26 (s, 1 Н), 8.22 (d, 1 Н), 7.95 (s, 1 Н), 7.40 (dd, 1 Н), 7.22-7.35 (m, 5 Н), 6.96-7.65 (m, 2 Н), 6.37 (q, 1 Н), 5.09-5.26 (m, 2 Н), 3.53 (квин., 1 Н), 1.87 (d, 3 Н), 1.33-2.17(m, 8Н).

Пример 18: 5-{[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]метил}-2-бензил-2,3-дигидропиридазин-3-он

Получали аналогично примеру 2, начиная с 5-({4-амино-3-йодо-1Н-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил}метил)-2-бензил-2,3-дигидропиридазин-3-она J17 (0,063 г), нагревая при 80°С в течение 2 ч, и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с диоксидом кремния-NH (от DCM до смеси DCM:MeOH = 80:20) с получением указанного в заголовке соединения (0,015 г, 0,03 ммоль). MS/ESI⁺ 444,2 [МН]⁺, Rt 0,82 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 10.19 (br. s., 1 Н), 8.28 (s, 1 Н), 7.90 (d, J=2,01 Гц, 1 Н), 7.24-7.34 (m, 5 Н), 6.91-6.93 (m, 1 Н), 6.85-6.90 (m, 1 Н), 6.64-6.70 (m, 1 Н), 6.55-6.57 (m, 1 Н), 6.40-7.80 (m, 2 Н), 5.53 (s, 2 Н), 5.20 (s, 2 Н).

Пример 19: 4-амино-6-{[1-(1-бензил-6-оксо-3-фенил-1,6-дигидропиридазин-4-ил)этил]амино)пиримидин-5-карбонитрил

К раствору 5-(1-аминоэтил}-2-бензил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она I1 (0,056 г, 0,183 ммоль) в трет-BuOH (2 мл) добавляли 4-амино-6-хлорпиримидин-5-карбонитрил (0,028 г, 0,183 ммоль), а затем DIPEA (0,064 мл, 0,366 ммоль), и полученную в результате смесь нагревали до температуры дефлегмации в течение ночи. Растворитель удаляли при пониженном давлении, и неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (DCM:MeOH = от 99:1 до 90:10) с получением указанного в заголовке соединения (0,044 г, 0,10 ммоль, выход 57%). MS/ESI⁺ 424,3 [МН]⁺, Rt 0,98 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 7.96 (s, 1 Н), 7.77 (d, 1 Н), 7.55-7.59 (m, 2 Н), 7.43-7.50 (m, 3 Н), 7.24-7.37 (m, 7 Н), 7.04 (s, 1 Н), 5.20-5.30 (m, 2 Н), 5.01-5.10 (m, 1 H), 1.23 (d, 3 H).

Пример 20: 4-амино-6-(1-(1-метил-6-оксо-3-фенил-1,6-дигидропиридазин-4-ил)этиламино)пиримидин-5-карбонитрил

Получали аналогично примеру 19, начиная с 5-(1-аминоэтил}-2-метил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она I2 (0,032 г, 0,141 ммоль), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (DCM:MeOH = от 99:1 до 90:10) с получением указанного в заголовке соединения (0,033 г, 0,09 ммоль, выход 67%). MS/ESI⁺ 348,2 [МН]⁺, Rt 0,73 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 7.96 (s, 1 Н), 7.75 (d, 1 Н), 7.55-7.60 (m, 2 Н), 7.42-7.51 (m, 3 Н), 7.27 (br. s., 2 Н), 6.98 (s, 1 Н), 4.97-5.05 (m, 1 Н), 3.65 (s, 3 Н), 1.22 (d, 3 Н).

Пример 21: 4-амино-6-({1-[6-оксо-3-фенил-1-(пропан-2-ил)-1,6-дигидропиридазин-4-ил]этил}амино)пиримидин-5-карбонитрил

Получали аналогично примеру 19, начиная с 5-(1-аминоэтил)-6-фенил-2-(пропан-2-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-она 13 (0,030 г, 0,116 ммоль), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage SNAP с диоксидом кремния-NH (циклогексан:EtOAc = от 80:20 до 40:60) с получением указанного в заголовке соединения в виде белого твердого вещества (0,029 г, 0,077 ммоль, выход 67%). MS/ESI⁺ 376,1 [MH]⁺, Rt 0,87 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 7.97 (s, 1 Н), 7.77 (d, 1 Н), 7.55-7.61 (m, 2 Н), 7.43-7.51 (m, 3 Н), 7.28 (br. s., 2 Н), 6.96 (s, 1 Н), 5.09-5.19 (m, 2 Н), 1.19-1.32 (m, 9Н).

Пример 22: 4-амино-6-({1-[1-(циклопропилметил)-6-оксо-3-фенил-1,6-дигидропиридазин-4-ил]этил}амино)пиримидин-5-карбонитрил

Получали аналогично примеру 19, начиная с 5-(1-аминоэтил}-2-(циклопропилметил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она I4 (0,020 г), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (DCM:MeOH = от 99:1 до 90:10) с получением указанного в заголовке соединения (0,0187 г, 0,048 ммоль). MS/ESI⁺ 388,3 [MH]⁺, Rt 0,90 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 7.98 (s, 1 Н), 7.79 (d, 1 Н), 7.56-7.61 (m, 2 Н), 7.44-7.51 (m, 3 Н), 7.30 (br. s., 2 Н), 7.00 (s, 1 Н), 5.04-5.12 (m, 1 Н), 3.86-4.00 (m, 2 Н), 1.20-1.30 (m, 4 Н), 0.45-0.51 (m, 2 Н), 0.32-0.40 (m, 2 Н).

Пример 23: 4-амино-6-{[1-(6-оксо-1,3-дифенил-1,6-дигидропиридазин-4-ил)этил]амино}пиримидин-5-карбонитрил

Получали аналогично примеру 19, начиная с 5-(1-аминоэтил)-2,6-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-она I5 (0,023 г), и очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (DCM:MeOH = от 99:1 до 90:10) с получением указанного в заголовке соединения (17,2 мг, 0,042 ммоль). MS/ESI⁺ 410,3 [МН]⁺, Rt 0,93 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 8.01 (s, 1 Н), 7.84 (d, 1 Н), 7.64-7.69 (m, 2 Н), 7.58-7.64 (m, 2 Н), 7.45-7.54 (m, 5 Н), 7.38-7.45 (m, 1 Н), 7.32 (br. s., 2 Н), 7.13 (s, 1 Н), 5.08-5.17 (m, 1 Н), 1.28 (d, 3 Н).

Пример 24: 2-бензил-6-фенил-5-{1-[(9Н-пурин-6-ил)амино]этил}-2,3-дигидропиридазин-3-он

К раствору 5-(1-аминоэтил}-2-бензил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она 11 (0,056 г, 0,183 ммоль) в трет-BuOH (2 мл) добавляли 6-бромпурин (0,036 г, 0,183 ммоль), а затем DIPEA (0,064 мл, 0,366 ммоль), и полученную в результате смесь нагревали до температуры дефлегмации в течение ночи. Растворитель удаляли при пониженном давлении, и неочищенное вещество очищали посредством флэш-хроматографии на картридже Biotage с силикагелем (DCM:MeOH = от 99:1 до 90:10) с получением указанного в заголовке соединения (0,0337 г, 0,079 ммоль, выход 43%). MS/ESI⁺ 424,3 [МН]⁺, Rt 0,85 мин (Способ А).

¹Н NMR (400 МГц, DMSO-d₆) δ млн^-1 13.01 (br. s., 1 Н), 8.05-8.48 (m, 3 Н), 7.69 (br. s., 2 Н), 7.44-7.57 (m, 3 Н), 7.24-7.39 (m, 5 Н), 7.04 (br. s., 1 H), 5.08-5.34 (m, 3 H), 1.27 (br. s., 3 H).

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ СОЕДИНЕНИЙ ПО ИЗОБРЕТЕНИЮ.

Определение ингибирующей активности в отношении фермента PI3K in vitro в бесклеточном анализе

Человеческие рекомбинантные белки PI3Kα, PI3Kβ, PI3Kγ и PI3Kδ приобретали в Millipore Ltd (Billerica, MA). Соединения растворяли в концентрации 0,5 мМ в DMSO и тестировали в разных концентрациях на их активность в отношении ферментов PI3K с использованием набора ADP-Glo™ Kinase Assay (Promega, Madison Wl) согласно инструкциям производителя.

Кратко, киназные реакции осуществляли в 384-луночных белых планшетах (Greiner Bio-one GmbH, Frickenhausen). В каждую лунку вносили 0,1 мкл тестируемых соединений и 2,5 мкл 2х реакционного буфера (40 мМ Трис (трис(гидроксиметил)аминометан) рН 7,5; 0,5 мМ EGTA (этиленгликоль-тетрауксусная кислота); 0,5 мМ Na₃VO₄; 5 мМ β-глицерофосфат, 0,1 мг/мл BSA (бычий сывороточный альбумин), 1 мМ DTT (дитиотреитол)), содержащего 50 мкМ субстратов PI и PS (натриевая соль L-α-фосфатидилинозитола и L-α-фосфатидил-L-серин, Sigma-Aldrich, St. Louis МО) и рекомбинантные белки PI3K (0,25 нг/мкл PI3Kγ; 1 нг/мкл PI3Kδ; 0,125 нг/мкл PI3Kα; 1 нг/мкл PI3Kβ).

Реакции начинали посредством добавления 2,5 мкл 2х раствора АТР (аденозинтрифосфата) в каждую лунку (конечные концентрации: PI3Kγ АТР 30 мкМ; PI3Kδ АТР 80 мкМ; PI3Kα АТР 50 мкМ; PI3Kβ АТР 100 мкМ) и инкубировали в течение 60 мин при комнатной температуре. Затем каждую киназную реакционную смесь инкубировали в течение 40 мин с 5 мкл реагента ADP-Glo™, обеспечивая возможность удаления неиспользованной АТР. Затем в каждую лунку добавляли реагент для детектирования киназ (10 мкл) для превращения ADP (аденозиндифосфата) в АТР и для обеспечения возможности измерения вновь синтезированной АТР с использованием люциферин-люциферазной реакции. После 60 мин инкубации измеряли сигнал люминесценции с использованием многомаркерного ридера Wallac EnVision^® (PerkinElmer, Waltham MA).

Аппроксимацию кривых и вычисление IC50 (концентрация соединения, обеспечивающая 50% ингибирование) осуществляли с использованием четырехпараметрической логистической модели в XLfit (IDBS, Guilford, UK) для Microsoft Excel (Microsoft, Redmont, WA).

Соединения в соответствии с изобретением демонстрировали IC50 даже ниже 100 нМ, или даже IC50 менее 10 нМ в анализе ингибирования PI3K-дельта, описанном здесь выше.

Результаты представлены в таблице ниже.

где соединения классифицируют в зависимости от эффективности в соответствии с их ингибиторной активностью в отношении PI3K -альфа, -бета, -гамма и -дельта следующим образом:

+++: IC50 менее 10 нМ

++: IC50 в диапазоне 10-1000 нМ

+: IC50 более 1000 нМ

Настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или к его фармацевтически приемлемой соли, или к его энантиомерам, или к его диастереоизомерам, или к их смеси, обладающему способность ингибировать фосфоинозитид-3-киназу (PI3K), а также к фармацевтической композиции, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль.

,

В формуле I R₁-R₅, Cy, Z, m, n, p имеют значения, указанные в формуле изобретения. 2 н. и 11 з.п. ф-лы, 24 пр.

1. Соединение формулы (I)

,

где

R1 и R4 могут быть одинаковыми или разными и независимо выбраны из группы, состоящей из: H, (C1-C6)алкила, (C1-C6)аминоалкила, (C3-C7)циклоалкила, (C2-C6)алкенила и арила;

R2 и R3 могут быть одинаковыми или разными и выбраны из группы, состоящей из: H и (C1-C6)алкила;

R5 выбран из группы, состоящей из: (C1-C6)алкила, (C1-C6)аминоалкила, (C3-C7)циклоалкила, (C5-C7)циклоалкенила, (C2-C6)алкенила, арила, гетероарила и гетероциклоалкила;

Cy представляет собой гетероарил, который может быть возможно и независимо замещен одной или более чем одной группой, выбранной из галогена, -OH, -(CH2)pNR6R7, -CN, (C1-C6)алкила, арила и гетероарила, где указанные арил и гетероарил могут быть возможно и независимо замещены одной или более чем одной группой, выбранной из -OH, галогена, -NR6R7, (C1-C6)алкила, (C1-C6)алкокси;

R6, R7 в каждом случае могут иметь одинаковые или разные значения и независимо выбраны из группы, состоящей из -H и (C1-C6)алкила;

Z, когда присутствует, представляет собой -NH-;

m равен нулю или 1;

n равен 1 или 2;

p в каждом случае независимо равен нулю или представляет собой целое число в диапазоне от 1 до 3;

где арил представляет собой фенил;

гетероарил относится к моно-, би- или трициклическим кольцевым системам с 5-15 кольцевыми атомами, в которых по меньшей мере одно кольцо является ароматическим и в которых по меньшей мере один кольцевой атом представляет собой гетероатом или гетерогруппу, выбранные из N, NH, S или O; и

гетероциклоалкил относится к насыщенным или частично ненасыщенным моноциклическим циклоалкильным группам, которые имеют от 3 до 6 кольцевых атомов и в которых по меньшей мере один кольцевой атом углерода заменен по меньшей мере одним гетероатомом или гетерогруппой, выбранными из N, NH, S или O;

или его фармацевтически приемлемые соли, или его энантиомеры, или его диастереоизомеры, или их смесь.

2. Соединение по п. 1 в форме смеси энантиомеров или диастереоизомеров.

3. Соединение по п. 1, где

R2 выбран из H и (C1-C6)алкила;

R3 представляет собой H;

R1, R4, R5 , m, n, p, Z и Cy являются такими, как определено в п. 1,

или его фармацевтически приемлемые соли.

4. Соединение по любому из пп. 1-3, где

R2 выбран из H и (C1-C6)алкила;

R3 представляет собой H;

Cy представляет собой гетероарил, выбранный из группы, состоящей из (I-1) - (I-9), где (I-1) представляет собой 3H-пурин-3-ил, (I-2) представляет собой 9H-пурин-9-ил, (I-3) представляет собой 9H-пурин-6-ил, (I-4) представляет собой 1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил, (I-5) представляет собой 6-оксо-5H,6H,7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил, (I-6) представляет собой пиримидин-4-ил, (I-7) представляет собой пиримидин-2-ил, (I-8) представляет собой пиразин-2-ил, (I-9) представляет собой 1,3,5-триазин-2-ил; который может быть возможно и независимо замещен одной или более чем одной группой, выбранной из галогена, -OH, -(CH2)pNR6R7, -CN, (C1-C6)алкила, или группой, выбранной из арила и гетероарила, которая может быть возможно и независимо замещена одной или более чем одной группой, выбранной из -OH, галогена, -NR6R7, (C1-C6)алкила, (C1-C6)алкокси;

где все другие переменные являются такими, как определено выше в п. 1;

или его фармацевтически приемлемые соли.

5. Соединение по п. 4, где Cy представляет собой 1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил, возможно и независимо замещенный одной или более чем одной группой, выбранной из галогена, -OH, -(CH2)pNR6R7, -CN, (C1-C6)алкила, или группой, выбранной из арила и гетероарила, которая может быть возможно и независимо замещена одной или более чем одной группой, выбранной из -OH, галогена, -NR6R7, (C1-C6)алкила, (C1-C6)алкокси;

где m равен нулю, и все другие переменные являются такими, как определено в п. 1;

или его фармацевтически приемлемые соли.

6. Соединение по п. 5, где

R1 и R4 могут быть одинаковыми или разными и независимо выбраны из группы, состоящей из: H, (C3-C7)циклоалкила, представляющего собой циклопентил, и арила, представляющего собой фенил;

R2 выбран из H и (C1-C6)алкила, представляющего собой метил;

R3 представляет собой H;

R5 выбран из группы, состоящей из (C1-C6)алкила, представляющего собой метил, изопропил или трет-бутил, (C3-C7)циклоалкила, представляющего собой циклопропил, арила, представляющего собой фенил, гетероарила, представляющего собой пиридинил, и гетероциклоалкила, представляющего собой морфолинил;

Cy представляет собой гетероарил, представляющий собой 1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил, возможно и независимо замещенный одной или более чем одной группой, выбранной из галогена, представляющего собой йод, -(CH2)pNR6R7, представляющего собой -NH2, арила, представляющего собой фенил, гетероарила, представляющего собой пиридинил, где указанные арил и гетероарил могут быть возможно и независимо замещены одной или более чем одной группой, выбранной из -OH и галогена, представляющего собой фтор;

где R6 и R7 представляют собой -H;

m равен нулю;

n равен 1;

p в каждом случае независимо равен 0, или 1, или 2;

или его фармацевтически приемлемые соли.

7. Соединение по п. 4, где Cy представляет собой (I-6) пиримидин-4-ил, возможно замещенный одной или более чем одной группой, выбранной из галогена, -OH, -(CH2)pNR6R7, -CN, (C1-C6)алкила, или группой, выбранной из арила и гетероарила, которая может быть возможно и независимо замещена одной или более чем одной группой, выбранной из -OH, галогена, NR6R7, (C1-C6)алкила, (C1-C6)алкокси;

где m равен 1, и все другие переменные являются такими, как определено в п. 1;

или его фармацевтически приемлемые соли.

8. Соединение по п. 7, где

R1 представляет собой арил, представляющий собой фенил, и R4 представляет собой H;

R2 представляет собой (C1-C6)алкил, представляющий собой метил;

R3 представляет собой H;

R5 выбран из группы, состоящей из (C1-C6)алкила, представляющего собой метил или изопропил, (C3-C7)циклоалкила, представляющего собой циклопропил, арила, представляющего собой фенил;

Cy представляет собой (I-6) пиримидин-4-ил, замещенный группой -(CH2)pNR6R7, представляющей собой -NH2, и -CN;

m равен 1;

R6, R7 представляют собой -H;

Z представляет собой -NH-;

n равен 1;

p в каждом случае независимо представляет собой ноль или 1;

или его фармацевтически приемлемые соли.

9. Соединение по п. 1, выбранное из:

5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-бензил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она;

5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-метил-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она;

5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-6-фенил-2-(пропан-2-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-она;

5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-(циклопропилметил)-6-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она;

5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2,6-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-она;

5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-6-фенил-2-(пиридин-2-илметил)-2,3-дигидропиридазин-3-она;

5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-бензил-2,3-дигидропиридазин-3-она;

5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она;

5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-метил-2,3-дигидропиридазин-3-она;

5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-трет-бутил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она;

5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-бензил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она;

5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-метил-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она;

5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2,4-дифенил-2,3-дигидропиридазин-3-она;

5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-[2-(морфолин-4-ил)этил]-4-фенил-2,3-дигидропиридазин-3-она;

5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-4-фенил-2-(пиридин-3-ил)-2,3-дигидропиридазин-3-она;

5-{1-[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-бензил-4-циклопентил-2,3-дигидропиридазин-3-она;

5-{1-[4-амино-3-(5-гидроксипиридин-3-ил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]этил}-2-бензил-4-циклопентил-2,3-дигидропиридазин-3-она;

5-{[4-амино-3-(3-фтор-5-гидроксифенил)-1H-пиразоло[3,4-d]пиримидин-1-ил]метил}-2-бензил-2,3-дигидропиридазин-3-она;

4-амино-6-{[1-(1-бензил-6-оксо-3-фенил-1,6-дигидропиридазин-4-ил)этил]амино}пиримидин-5-карбонитрила;

4-амино-6-(1-(1-метил-6-оксо-3-фенил-1,6-дигидропиридазин-4-ил)этиламино)пиримидин-5-карбонитрила;

4-амино-6-({1-[6-оксо-3-фенил-1-(пропан-2-ил)-1,6-дигидропиридазин-4-ил]этил}амино)пиримидин-5-карбонитрила;

4-амино-6-({1-[1-(циклопропилметил)-6-оксо-3-фенил-1,6-дигидропиридазин-4-ил]этил}амино)пиримидин-5-карбонитрила;

4-амино-6-{[1-(6-оксо-1,3-дифенил-1,6-дигидропиридазин-4-ил)этил]амино}пиримидин-5-карбонитрила;

2-бензил-6-фенил-5-{1-[(9H-пурин-6-ил)амино]этил}-2,3-дигидропиридазин-3-она,

и их фармацевтически приемлемых солей.

10. Фармацевтическая композиция, ингибирующая фосфоинозитид-3-киназу (PI3K), содержащая эффективное количество соединения по любому из пп. 1-9 или его фармацевтически приемлемой соли в смеси с одним или более чем одним фармацевтически приемлемым носителем или эксципиентом.

11. Соединение по любому из пп. 1-9 для применения в качестве лекарственного средства, ингибирующего фосфоинозитид-3-киназу (PI3K).

12. Соединение по любому из пп. 1-9 или его фармацевтически приемлемые соли для применения для лечения расстройства, ассоциированного с механизмами действия ферментов PI3K (фосфоинозитид-3-киназы).

13. Соединение для применения по п. 12, где расстройство, ассоциированное с механизмами действия ферментов PI3K, выбрано из группы, состоящей из респираторных заболеваний, включающих идиопатический хронический кашель, кашлевую астму, кашель, ассоциированный с опухолью органов грудной клетки или раком легкого, вирусный или поствирусный кашель, кашлевой синдром верхних дыхательных путей (UACS) или кашель, вызванный стеканием слизи из носоглотки, или кашель, ассоциированный с гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью (как кислотным, так и некислотным рефлюксом), астму, хронический бронхит, хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), интерстициальное заболевание легких (такое как идиопатический легочный фиброз (IPF)), застойную сердечную недостаточность, саркоидоз или инфекцию (такую как коклюш); вирусных инфекций (включающих вирусные инфекции дыхательных путей и вирусное обострение респираторных заболеваний, таких как астма и COPD); невирусных респираторных инфекций (включающих аспергиллез и лейшманиоз); аллергических заболеваний (включающих аллергический ринит и атопический дерматит); аутоиммунных заболеваний (включающих ревматоидный артрит и рассеянный склероз); воспалительных расстройств (включающих воспалительное заболевание кишечника); сердечно-сосудистых заболеваний (включающих тромбоз и атеросклероз); гемобластозов; нейродегенеративных заболеваний; панкреатита; полиорганной недостаточности; заболеваний почек; агрегации тромбоцитов; рака; подвижности сперматозоидов; отторжения при трансплантации; отторжения трансплантата; повреждений легких; и боли (включая боль, ассоциированную с ревматоидным артритом или остеоартритом, боль в спине, общую воспалительную боль, постгерпетическую невралгию, диабетическую нейропатию, воспалительную нейропатическую боль (травма), невралгию тройничного нерва и центральную боль).