СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ПРОДУКТИВНОСТИ БАКТЕРИЙ ESCHERICHIA COLI Российский патент 2019 года по МПК C12N1/38 C12R1/19 

Изобретение относится к биохимии, а именно к химической стимуляция роста или активности бактерий Escherichia coli путем введения химического соединения и может быть использовано в биотехнологии и микробиологии для повышения продуктивности микроорганизмов при культивировании.

Известен способ повышения продуктивности микроорганизмов E. coli [RU 2476593 С1, МПК C12N 1/20; C12N 1/38, опубл. 27.02.2013], который заключается в подготовке суспензии микроорганизмов в питательной среде М9. Одновременно подготавливают раствор изотопа магния в виде сульфата из оксида MgO и 30% серной кислоты. Полученный раствор соединения сульфата магнитного изотопа магния 25Mg в количестве 2,2 ммоль/л вносят в питательную среду, содержащую суспензию микроорганизмов. Ведут культивирование микроорганизмов при перемешивании со скоростью 120 об/мин и термостатировании при 37°Св течение не менее 24 часов.

Этот способ осуществляют с использованием богатой питательной среды и изотопа магния, требующего специального разрешения для работы с ним.

Техническим результатом предложенного изобретения является расширение арсенала средств аналогичного назначения.

Предложенный способ повышения продуктивности бактерий Escherichia coli, также как в прототипе, включает приготовление суспензии бактерий, которую добавляют в стерильную питательную среду с химическим соединением, перемешивание и термостатирование в течение не менее 24 часов.

Согласно изобретению в качестве химического соединения используют порошок пирувата лития в количестве не более 10 ммоль/л.

В качестве питательной среды для внесения порошка пирувата лития используют или мясопептонный бульон или физиологический раствор.

Предложенное использование порошка пирувата лития позволило увеличить продуктивность бактерий Escherichia coli как в благоприятной, так и в неблагоприятной питательной среде.

Использование порошка пирувата лития в количестве более 10 ммоль/л приводит к ингибированию ферментных и транспортных систем бактерий.

На фиг. 1 представлена зависимость количества бактерий (logKOE) от состава питательной среды, где 1 - без использования пирувата лития, 2 - с добавлением пирувата лития.

Музейный штамм Escherichia coli K12TG1 предварительно инкубирововали на мясопептонном агаре (Merck) в течение 24 часов при температуре 37°С. Затем приготовили суспензию бактерий Escherichia coli плотностью 10⁸ КОЕ/мл согласно стандарту Макфарланда (HiMediaLaboratories).

Навеску порошка пирувата лития в количестве 10 ммоль/л внесли в питательную среду: в мясопептонный бульон (МПБ) и в физиологический раствор (0,9% хлорид натрия)), а затем стерилизовали при температуре 120°С в течение 20 мин.

Полученную суспензию бактерий Escherichia coli в количестве 1% (об.) внесли в стерильную питательную среду с порошком пирувата лития.

Для контроля роста бактерий использовали образец, содержащий питательную среду и тестируемый штамм Escherichia coli без химического соединения пирувата лития.

Культивирование бактерий Escherichia coli проводили в термостате-шейкере (WiseCube) при температуре 37°С со скоростью вращения 90 об/мин в течение 24 часов. Количество бактерий определяли чашечным методом Коха. Результаты изменения колониеобразующих единиц (КОЕ) на питательных средах (мясопептонный бульон (МПБ) и физиологический раствор (физ. раствор)) без добавления (столбец 1) и при добавлении пирувата лития (столбец 2) представлены на фиг. 1.

По результатам экспериментов выявлен стимулирующий эффект пирувата лития на бактерии Escherichia coli на питательных средах (столбец 2) относительно контрольной пробы (столбец 1), в которой отсутствует пируват лития. Установлено, что на обедненной питательной среде (физиологический раствор) наблюдается наибольший стимулирующий эффект воздействия пирувата лития на продуктивность бактерий Escherichiacoli, которая увеличилась не менее чем на 0,30 Log КОЕ/мл относительно контрольной пробы.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ повышения продуктивности бактерий Escherichia coli. Способ включает культивирование бактерий Escherichia coli в стерильной питательной среде с пируватом лития в концентрации 10 ммоль/л питательной среды. Способ обеспечивает увеличение стимуляции роста бактерий E.coli. 2 з.п. ф-лы, 1 ил.

1. Способ повышения продуктивности бактерий Escherichia coli, включающий приготовление суспензии бактерий, которую добавляют в стерильную питательную среду с химическим соединением, перемешивание и термостатирование в течение не менее 24 ч, отличающийся тем, что в качестве химического соединения используют пируват лития в концентрации 10 ммоль/л питательной среды.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве питательной среды для внесения пирувата лития используют физиологический раствор.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в качестве питательной среды для внесения пирувата лития используют мясопептонный бульон.