Настоящее изобретение относится к способам лечения заболеваний или состояний, в которые вовлечена экспрессия или активность конвертазы пробелков типа субтилизина/кексина 9 (PCSK9), путем введения специфичных к PCSK9 антител или их антигенсвязывающих фрагментов и, предпочтительно, путем дополнительного введения ингибитора 3-гидрокси-3-метил-глутарил-CoA-редуктазы (HMG-CoA-редуктаза). Кроме того, настоящее изобретение относится к специфичным к PCSK9 антителам или их антигенсвязывающим фрагментам (предпочтительно, в комбинации с ингибиторами HMG-CoA-редуктазы) для применения при лечении заболеваний или состояний, в которые вовлечена экспрессия или активность PCSK9.

Также настоящее изобретение относится к изделиям, содержащим упаковочный материал, специфичные к PCSK9 антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, и ярлык или вкладыш в упаковку, на которых указано, какие группы пациентов можно лечить указанными антителами или фрагментами, какие группы пациентов нельзя лечить указанными антителами или фрагментами и какой режим дозирования следует использовать.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способам исследования эффективности специфичных к PCSK9 антител или их антигенсвязывающих фрагментов для лечения определенных заболеваний или состояний и для лечения конкретных подгрупп пациентов.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОМУ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Конвертаза пробелков типа субтилизина/кексина 9 (PCSK9) представляет собой конвертазу пробелков, относящуюся к подсемейству протеазы K семейства секреторных субтилаз. Кодируемый белок синтезируется в качестве растворимого зимогена, который претерпевает аутокаталитический внутримолекулярный процессинг в эндоплазматической сети. Данные указывают на то, что PCSK9 увеличивает уровень холестерина LDL путем стимуляции деградации рецептора LDL, который опосредует эндоцитоз LDL в печени - основной путь выведения LDL из кровотока. Структура белка PCSK9 указывает на то, что он имеет сигнальную последовательность, за которой следует продомен, каталитический домен который содержит консервативную триаду остатков (D186, H226 и S386), и C-концевой домен. Он синтезируется в качестве растворимого предшественника размером 74 кДа, который претерпевает аутокаталитическое расщепление в ER с образованием продомена размером 14 кДа и каталитического фрагмента размером 60 кДа. Было показано, что аутокаталитическая активность требуется для секреции. После расщепления продомен остается прочно связанным с каталитическим доменом.

Антитела к PCSK9 описаны, например, в WO 2008/057457, WO 2008/057458, WO 2008/057459, WO 2008/063382, WO 2008/125623, и US 2008/0008697. Антитела против PCSK9, которые особенно пригодны для применения на практике настоящего изобретения, описаны в US 2010/0166768 A1, содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.

ТЕХНИЧЕСКИЕ ПРОБЛЕМЫ, ЛЕЖАЩИЕ В ОСНОВЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ

Статины относятся к наиболее широко используемым лекарственным средствам в мире. Хотя статины, как правило, проявляют превосходный профиль безопасности, желательно далее оптимизировать профиль безопасности путем снижения уже низкого уровня нежелательных побочных эффектов (таких как миопатия).

Несмотря на широкую доступность средств, снижающих уровень липидов, таких как статины, приблизительно 30% всех взрослых пациентов, которых лечили от гиперхолестеринемии в США между 1999 и 2006 годами, не достигали их рекомендованных целевых уровней LDL-С. Причины этого включают плохое соблюдение терапии, устойчивость/непереносимость лекарственных средств и положительную взаимосвязь между частотой неблагоприятных явлений и увеличением дозировки. Более того, поскольку наиболее эффективные средства, снижающие уровень липидов, могут снизить уровни LDL-С только на вплоть до 55%, частота достижения заданных уровней у пациентов, у которых требуется значительное снижение LDL-C, таких как пациенты с семейной гиперхолестеринемией, часто является значительно более низкой, чем можно ожидать. Таким образом, требуются более эффективные средства, снижающие уровень липидов, и режимы лечения для повышения частоты достижения заданных уровней у этих пациентов.

Совершенно неожиданно, авторы изобретения по настоящему изобретению открыли, что введение антител против PCSK9 или их фрагментов увеличивает активность статинов в отношении снижения уровней LDL-холестерина при введении в конкретных режимах дозирования и/или конкретным группам пациентов.

Таким образом, совместное введение антител против PCSK9 или их фрагментов увеличивает эффективность терапии статинами и позволяет снизить дозировку статинов, тем самым, снижая нежелательные побочные эффекты.

Более того, авторы настоящего изобретения открыли, что конкретные режимы дозирования антител против PCSK9 и/или статинов лучше подходят для снижения уровней LDL-холестерина, чем другие. Авторы изобретения также открыли, что для некоторых подгрупп пациентов более полезно, чем для других, лечение антителами против PCSK9 или их фрагментами и/или статинами. Кроме того, авторы изобретения открыли, что лечение антителами против PCSK9 или их фрагментами и/или статинами противопоказано некоторым подгруппам пациентов.

В представленном выше обзоре не обязательно описаны все проблемы, решаемые настоящим изобретением.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В первом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания или состояния, в которое вовлечена экспрессия или активность PCSK9, включающему:

введение терапевтического количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфично связывают hPCSK9 (конвертаза пробелков типа субтилизина/кексина человека 9), индивидууму, нуждающемуся в этом, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в дозировке в диапазоне от 5 мг до 500 мг, и

введение терапевтического количества ингибитора HMG-CoA-редуктазы указанному индивидууму, где ингибитор HMG-CoA-редуктазы вводят в дозировке в диапазоне от 0,05 мг до 100 мг.

Во втором аспекте настоящее изобретение относится к антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которые специфично связывают hPCSK9 (конвертаза пробелков типа субтилизина/кексина человека 9), для применения при лечении заболевания или состояния, в которые вовлечена экспрессия или активность PCSK9,

где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент предназначены для введения в дозировке в диапазоне от 5 мг до 500 мг,

где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, кроме того, предназначены для введения в комбинации с ингибитором HMG-CoA-редуктазы в дозировке в диапазоне от 0,05 мг до 100 мг.

В третьем аспекте настоящее изобретение относится к изделию, содержащему: (a) упаковочный материал; (b) антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфично связывают hPCSK9; и (c) ярлык или вкладыш в упаковку, находящиеся в упаковочном материале, на которых указано, что пациентов, которым проводят лечение указанным антителом или антигенсвязывающим фрагментом, можно лечить от заболевания или состояния, выбранного из группы, состоящей из гиперхолестеринемии, гиперлипидемии, дислипидемии, атеросклероза и сердечно-сосудистых заболеваний.

В четвертом аспекте настоящее изобретение относится к изделию, содержащему: (a) упаковочный материал; (b) антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфично связывают hPCSK9; и (c) ярлык или вкладыш в упаковку, находящиеся в упаковочном материале, на которых указана информация о лечении антителом или его антигенсвязывающим фрагментом совместно с применением статина.

В пятом аспекте настоящее изобретение относится к изделию, содержащему (a) упаковочный материал; (b) антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфично связывают hPCSK9; и (c) ярлык или вкладыш в упаковку, на которых указано, что лечение антителом или его антигенсвязывающим фрагментом вместе со статином противопоказано для пациентов, относящихся к одной или нескольким из следующих групп: (i) курильщики; (ii) лица в возрасте 70 лет и старше; (iii) лица, страдающие гипертензией; (iv) беременные женщины; (v) женщины, пытающиеся забеременеть; (vi) женщины, кормящие грудью; (vii) лица, которые имеют или когда-либо имели заболевание, поражающее печень; (viii) лица, которые имели какие-либо необъясненные аномальные показатели функции печени в тестах крови; (ix) лица, которые употребляют чрезмерные количества спиртных напитков; (x) лица, имеющие проблемы с почками; (xi) лица, страдающие гипотиреозом; (xii) лица, страдающие мышечными нарушениями; (xiii) лица, ранее сталкивавшиеся с мышечными проблемами в ходе лечения снижающей уровень липидов терапией; (xiv) лица, имеющие серьезные проблемы с дыханием; (xv) лица, принимающие одно или несколько из следующих лекарственных средств: лекарственные средства, изменяющие работу иммунной системы (например, циклоспорин или антигистамины), антибиотики или противогрибковые средства (например, эритромицин, кларитромицин, кетоконазол, итраконазол, рифампицин, фусидовая кислота), лекарственные средства, регулирующие уровень липидов (например, гемфиброзил, колестипол), блокаторы кальциевых каналов (например, верапамил, дилтиазем), лекарственные средства, регулирующие сердечный ритм (дигоксин, амиодарон), ингибиторы протеаз, используемые при лечении ВИЧ (например, нельфинавир), варфарин, пероральные контрацептивы, антациды или зверобой; или (xvi) лица, выпивающие более 0,1 л грейпфрутового сока в сутки; (xvii) лица, имеющие индекс массы тела (BMI) более 40; (xviii) лица, имеющие индекс массы тела (BMI) менее 18; (xix) лица, страдающие диабетом 1 типа или диабетом 2 типа; (xx) лица, положительные по гепатиту B или гепатиту C; или (xxi) лица, имеющие известную чувствительность к лекарственным средствам на основе моноклональных антител.

В шестом аспекте настоящее изобретение относится к способу исследования эффективности антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфично связывают hPCSK9, для лечения заболевания или состояния, выбранного из группы, состоящей из гиперхолестеринемии, гиперлипидемии, дислипидемии, атеросклероза и сердечно-сосудистых заболеваний, причем указанный способ включает:

лечение выбранной группы пациентов указанным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, где каждый пациент в указанной группе имеет уровень холестерина LDL (LDL-C) более 100 мг/дл; и

определение эффективности указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента путем определения уровня LDL-C в группе пациентов до и после введения указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, где снижение уровня LDL-C по меньшей мере на 25% относительно уровня до введения дозы по меньшей мере у 75% группы пациентов указывает на то, что указанные антитело или его антигенсвязывающий фрагмент являются эффективными для лечения указанного заболевания или состояния в указанной группе пациентов.

В седьмом аспекте настоящее изобретение относится к способу исследования эффективности антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфично связывают hPCSK9, для лечения заболевания или состояния, выбранного из группы, состоящей из гиперхолестеринемии, гиперлипидемии, дислипидемии, атеросклероза и сердечно-сосудистых заболеваний, причем указанный способ включает:

определение эффективности антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые используют для лечения выбранной группы пациентов указанным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, где каждый пациент в указанной группе имеет уровень холестерина LDL (LDL-C) более 100 мг/дл, путем определения уровня LDL-C в группе пациентов до и после введения указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, где снижение уровня LDL-C по меньшей мере на 25% относительно уровня до введения дозы по меньшей мере у 75% группы пациентов указывает на то, что указанные антитело или его антигенсвязывающий фрагмент являются эффективными для лечения указанного заболевания или состояния в указанной группе пациентов.

В восьмом аспекте настоящее изобретение относится к упаковке, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфично связывают hPCSK9 (см. раздел "Предпочтительные антитела для применения настоящего изобретения на практике") и ярлык, причем указанный ярлык содержит напечатанное сообщение, которое информирует пациента, что лечение антителом вместе со статином показано при одном или нескольких показаниях, выбранных из группы, состоящей из гиперхолестеринемии, гиперлипидемии, дислипидемии, атеросклероза и сердечно-сосудистых заболеваний.

В девятом аспекте настоящее изобретение относится к упаковке, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфично связывают hPCSK9 (см. раздел "Предпочтительные антитела для применения настоящего изобретения на практике") и ярлык, причем указанный ярлык содержит напечатанное сообщение, которое информирует пациента, что лечение антителом вместе со статином противопоказано для пациентов, относящихся к одной или нескольким из следующих групп: (i) курильщики; (ii) лица в возрасте 70 лет и старше; (iii) лица, страдающие гипертензией; (iv) беременные женщины; (v) женщины, пытающиеся забеременеть; (vi) женщины, кормящие грудью; (vii) лица, которые имеют или когда-либо имели заболевание, поражающее печень; (viii) лица, которые имели какие-либо необъясненные аномальные показатели функции печени в тестах крови; (ix) лица, которые употребляют чрезмерные количества спиртных напитков; (x) лица, имеющие проблемы с почками; (xi) лица, страдающие гипотиреозом; (xii) лица, страдающие мышечными нарушениями; (xiii) лица, ранее сталкивавшиеся с мышечными проблемами в ходе лечения снижающей уровень липидов терапией; (xiv) лица, имеющие серьезные проблемы с дыханием; (xv) лица, принимающие одно или несколько из следующих лекарственных средств: лекарственные средства, изменяющие работу иммунной системы (например, циклоспорин или антигистамины), антибиотики или противогрибковые средства (например, эритромицин, кларитромицин, кетоконазол, итраконазол, рифампицин, фусидовая кислота), лекарственные средства, регулирующие уровень липидов (например, гемфиброзил, колестипол), блокаторы кальциевых каналов (например, верапамил, дилтиазем), лекарственные средства, регулирующие сердечный ритм (дигоксин, амиодарон), ингибиторы протеаз, используемые при лечении ВИЧ (например, нельфинавир), варфарин, пероральные контрацептивы, антациды или зверобой; или (xvi) лица, выпивающие более 0,1 л грейпфрутового сока в сутки; (xvii) лица, имеющие индекс массы тела (BMI) более 40; (xviii) лица, имеющие индекс массы тела (BMI) менее 18; (xix) лица, страдающие диабетом 1 типа или диабетом 2 типа; (xx) лица, положительные по гепатиту B или гепатиту C; или (xxi) лица, имеющие известную чувствительность к лекарственным средствам на основе моноклональных антител.

В десятом аспекте настоящее изобретение относится к способу регуляции уровня LDL в крови, включающему:

введение терапевтического количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфично связывают hPCSK9 (конвертаза пробелков типа субтилизина/кексина человека 9) индивидууму, нуждающемуся в этом, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в дозировке в диапазоне от 5 мг до 500 мг, и

введение терапевтического количества ингибитора HMG-CoA-редуктазы указанному индивидууму, где ингибитор HMG-CoA-редуктазы вводят в дозировке в диапазоне от 0,05 мг до 100 мг.

В одиннадцатом аспекте настоящее изобретение относится к способу предупреждения эффектов (постоянно) увеличенного уровня LDL в крови, включающему:

введение терапевтического количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфично связывают hPCSK9 (конвертаза пробелков типа субтилизина/кексина человека 9), индивидууму, нуждающемуся в этом, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в дозировке в диапазоне от 5 мг до 500 мг, и

введение терапевтического количества ингибитора HMG-CoA-редуктазы указанному индивидууму, где ингибитор HMG-CoA-редуктазы вводят в дозировке в диапазоне от 0,05 мг до 100 мг.

В двенадцатом аспекте настоящее изобретение относится к способу определения того, пригодно ли фармацевтическое соединение для смягчения, улучшения, ингибирования или предупреждения заболевания или состояния, в которые вовлечена активность или экспрессия PCSK9, включающему: (a) введение индивидууму соединения, которое специфично связывается с PCSK9, предпочтительно, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, специфично связывающихся с PCSK9, и (b) определение того, какая часть PCSK9 в крови связана с соединением согласно (a).

В тринадцатом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания или состояния, в которые вовлечена экспрессия или активность PCSK9, включающему

введение терапевтического количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфично связывают hPCSK9 (конвертаза пробелков типа субтилизина/кексина человека 9) индивидууму, нуждающемуся в этом,

где индивидуум, нуждающийся в этом, относится к одной или нескольким из следующих групп индивидуумов: (i) индивидуумы с уровнем холестерина LDL (LDL-C) в сыворотке по меньшей мере 100 мг/дл; (ii) индивидуумы, имеющие уровень HDL-C в сыворотке менее 40 мг/дл; (iii) индивидуумы, имеющие уровень холестерина в сыворотке по меньшей мере 200 мг/дл; (iv) индивидуумы, имеющие уровень триацилглицерина в сыворотке по меньшей мере 150 мг/дл, где указанный уровень триацилглицерина определяют натощак после голодания в течение по меньшей мере 8 часов; (v) индивидуумы в возрасте по меньшей мере 35 лет; (vi) индивидуумы моложе 75 лет; (vii) индивидуумы, имеющие BMI 25 или более; (viii) мужчины; (ix) женщины; (x) индивидуумы, у которых введение указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приводит к снижению уровня LDL-C в сыворотке по меньшей мере на 30 мг/дл относительно уровня до введения дозы; или (xi) индивидуумы, у которых введение указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приводит к снижению уровня LDL-C в сыворотке по меньшей мере на 20% относительно уровня до введения дозы.

В четырнадцатом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания или состояния, в которые вовлечена экспрессия или активность PCSK9, включающему

введение терапевтического количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфично связывают hPCSK9 (конвертаза пробелков типа субтилизина/кексина человека 9), индивидууму, нуждающемуся в этом,

где индивидуум, нуждающийся в этом, не относится к одной или нескольким из следующих групп индивидуумов: (i) курильщики; (ii) лица в возрасте 70 лет и старше; (iii) лица, страдающие гипертензией; (iv) беременные женщины; (v) женщины, пытающиеся забеременеть; (vi) женщины, кормящие грудью; (vii) лица, которые имеют или когда-либо имели заболевание, поражающее печень; (viii) лица, которые имели какие-либо необъясненные аномальные показатели функции печени в тестах крови; (ix) лица, которые употребляют чрезмерные количества спиртных напитков; (x) лица, имеющие проблемы с почками; (xi) лица, страдающие гипотиреозом; (xii) лица, страдающие мышечными нарушениями; (xiii) лица, ранее сталкивавшиеся с мышечными проблемами в ходе лечения снижающей уровень липидов терапией; (xiv) лица, имеющие серьезные проблемы с дыханием; (xv) лица, принимающие одно или несколько из следующих лекарственных средств: лекарственные средства, изменяющие работу иммунной системы (например, циклоспорин или антигистамины), антибиотики или противогрибковые средства (например, эритромицин, кларитромицин, кетоконазол, итраконазол, рифампицин, фусидовая кислота), лекарственные средства, регулирующие уровень липидов (например, гемфиброзил, колестипол), блокаторы кальциевых каналов (например, верапамил, дилтиазем), лекарственные средства, регулирующие сердечный ритм (дигоксин, амиодарон), ингибиторы протеаз, используемые при лечении ВИЧ (например, нельфинавир), варфарин, пероральные контрацептивы, антациды или зверобой; или (xvi) лица, выпивающие более 0,1 л грейпфрутового сока в сутки; (xvii) лица, имеющие индекс массы тела (BMI) более 40; (xviii) лица, имеющие индекс массы тела (BMI) менее 18; (xix) лица, страдающие диабетом 1 типа или диабетом 2 типа; (xx) лица, положительные по гепатиту B или гепатиту C; или (xxi) лица, имеющие известную чувствительность к лекарственным средствам на основе моноклональных антител.

В пятнадцатом аспекте настоящее изобретение относится к антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которые специфично связывают hPCSK9 (конвертаза пробелков типа субтилизина/кексина человека 9), где антитело характеризуется одним или несколькими из следующих признаков при введении индивидууму, предпочтительно, человеку или не являющемуся человеком млекопитающему:

1. Снижение уровней липопротеинов низкой плотности (LDL-C) на по меньшей мере от приблизительно 25% до приблизительно 40% относительно уровня до введения дозы с устойчивым снижением на протяжении периода по меньшей мере 14 суток, где устойчивое снижение составляет, предпочтительно, по меньшей мере 25% и, более предпочтительно, по меньшей мере 30% относительно уровня до введения дозы, в частности, при введении в дозе от приблизительно 40 до приблизительно 60 мг, предпочтительно, от приблизительно 45 до приблизительно 55 мг и, более предпочтительно, от приблизительно 50 мг в режиме введения раз в две недели (через неделю, E2W).

2. Снижение уровня липопротеинов низкой плотности (LDL-C) на по меньшей мере от приблизительно 50% до приблизительно 65% относительно уровня до введения дозы с устойчивым снижением на протяжении периода по меньшей мере 14 суток, где устойчивое снижение составляет, предпочтительно, по меньшей мере 40% и, более предпочтительно, по меньшей мере 45% относительно уровня до введения дозы, в частности, при введении в дозе от приблизительно 100 мг E2W.

3. Снижение уровня липопротеинов низкой плотности (LDL-C) на по меньшей мере от приблизительно 60% до по меньшей мере приблизительно 75% [например, по меньшей мере приблизительно на 60%, по меньшей мере приблизительно на 65%, по меньшей мере приблизительно на 70% или по меньшей мере приблизительно на 75%] относительно уровня до введения дозы с устойчивым снижением на протяжении периода по меньшей мере 14 суток, где устойчивое снижение составляет, предпочтительно, по меньшей мере 55% и, более предпочтительно, по меньшей мере 60% относительно уровня до введения дозы, в частности, при введении в дозе приблизительно 150 мг E2W.

4. Снижение уровня липопротеинов низкой плотности (LDL-C) на по меньшей мере от приблизительно 40% до приблизительно 75% относительно уровня до введения дозы с устойчивым снижением на протяжении периода по меньшей мере 28 суток, где устойчивое снижение составляет, предпочтительно, по меньшей мере 35% и, более предпочтительно, по меньшей мере 40% относительно уровня до введения дозы, в частности, при введении в дозе приблизительно 200 мг E4W.

5. Снижение уровня липопротеинов низкой плотности (LDL-C) на по меньшей мере от приблизительно 50% до приблизительно 75% относительно уровня до введения дозы с устойчивым снижением на протяжении периода по меньшей мере 28 суток, где устойчивое снижение составляет, предпочтительно, по меньшей мере 40% и, более предпочтительно, по меньшей мере 45% относительно уровня до введения дозы, в частности, при введении в дозе приблизительно 300 мг E4W.

6. Увеличение уровня холестерина HDL в сыворотке по меньшей мере на 2%, по меньшей мере на 2,5%, по меньшей мере на 3%, по меньшей мере на 3,5%, по меньшей мере на 4%, по меньшей мере на 4,5%, по меньшей мере на 5% или по меньшей мере на 5,5% относительно уровня до введения дозы, в частности, при введении в дозе приблизительно 150 мг E2W.

7. Снижение уровня общего холестерина в сыворотке на по меньшей мере от приблизительно 25% до приблизительно 35% относительно уровня до введения дозы с устойчивым снижением на протяжении периода по меньшей мере 24 суток.

8. Снижение уровня общего холестерина в сыворотке на по меньшей мере от приблизительно 65% до приблизительно 80% относительно уровня до введения дозы с устойчивым снижением на протяжении периода по меньшей мере 24 суток.

9. Снижение уровней триглицеридов в сыворотке на по меньшей мере от приблизительно 25% до приблизительно 40% относительно уровня до введения дозы.

10. Небольшой или отсутствие поддающегося измерению эффекта на функцию печени, при определении по результатам измерения ALT и AST.

11. Небольшой или отсутствие поддающегося измерению эффекта на уровни тропонина.

12. Увеличение одного или нескольких из: уровни общего холестерина, уровни ApoB, уровни С не HDL, соотношение Apo-B/ApoA-1.

В шестнадцатом аспекте настоящее изобретение относится к антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которые специфично связывают hPCSK9 (конвертаза пробелков типа субтилизина/кексина человека 9), для применения при лечении заболевания или состояния, в которые вовлечена экспрессия или активность PCSK9, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент предназначены для введения в дозе приблизительно от 50 до 500 мг.

В семнадцатом аспекте настоящее изобретение относится к антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которые специфично связывают hPCSK9 (конвертаза пробелков типа субтилизина/кексина человека 9).

для применения при лечении заболевания или состояния, в которые вовлечена экспрессия или активность PCSK9.

где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент предназначены для введения индивидууму, относящемуся по меньшей мере к одной из следующих групп индивидуумов: (i) индивидуумы с уровнем холестерина LDL (LDL-C) в сыворотке по меньшей мере 100 мг/дл (т.е. по меньшей мере 2,6 ммоль/л) или по меньшей мере 115 мг/дл (т.е. по меньшей мере 3,0 ммоль/л); (ii) индивидуумы, имеющие уровень HDL-C в сыворотке менее 40 мг/дл; (iii) индивидуумы, имеющие уровень холестерина в сыворотке по меньшей мере 200 мг/дл; (iv) индивидуумы, имеющие уровень триацилглицерина в сыворотке по меньшей мере 150 мг/дл, где указанный уровень триацилглицеринов определяют натощак после голодания в течение по меньшей мере 8 часов; (v) индивидуумы в возрасте по меньшей мере 18, 24 или 35 лет; (vi) индивидуумы в возрасте 75 лет или моложе; (vii) индивидуумы, имеющие BMI 25 или более или 30 или более; (viii) мужчины; (ix) женщины; (x) индивидуумы, у которых введение указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приводит к снижению уровня LDL-C в сыворотке по меньшей мере на 30 мг/дл, по меньшей мере 40 мг/дл, по меньшей мере 45 мг/дл или по меньшей мере 50 мг/дл относительно уровня до введения дозы (особенно после лечения в течение 12 недель); или (xi) индивидуумы, у которых введение указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента приводит к снижению уровня LDL-C в сыворотке по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 25%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 35%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 45%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65% или по меньшей мере на 70% относительно уровня до введения дозы, особенно после лечения в течение 12 недель).

В восемнадцатом аспекте настоящее изобретение относится к антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которые специфично связывают hPCSK9 (конвертаза пробелков типа субтилизина/кексина человека 9), для применения при лечении заболевания или состояния, в которые вовлечена экспрессия или активность PCSK9,

где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент предназначены для введения индивидууму, который не относится к одной или нескольким из следующих групп индивидуумов: (i) курильщики; (ii) лица в возрасте 70 лет и старше; (iii) лица, страдающие гипертензией; (iv) беременные женщины; (v) женщины, пытающиеся забеременеть; (vi) женщины, кормящие грудью; (vii) лица, которые имеют или когда-либо имели заболевание, поражающее печень; (viii) лица, которые имели какие-либо необъясненные аномальные показатели функции печени в тестах крови; (ix) лица, которые употребляют чрезмерные количества спиртных напитков; (x) лица, имеющие проблемы с почками; (xi) лица, страдающие гипотиреозом; (xii) лица, страдающие мышечными нарушениями; (xiii) лица, ранее сталкивавшиеся с мышечными проблемами в ходе лечения снижающей уровень липидов терапией; (xiv) лица, имеющие серьезные проблемы с дыханием; (xv) лица, принимающие одно или несколько из следующих лекарственных средств: лекарственные средства, изменяющие работу иммунной системы (например, циклоспорин или антигистамины), антибиотики или противогрибковые средства (например, эритромицин, кларитромицин, кетоконазол, итраконазол, рифампицин, фусидовая кислота), лекарственные средства, регулирующие уровень липидов (например, гемфиброзил, колестипол), блокаторы кальциевых каналов (например, верапамил, дилтиазем), лекарственные средства, регулирующие сердечный ритм (дигоксин, амиодарон), ингибиторы протеаз, используемые при лечении ВИЧ (например, нельфинавир), варфарин, пероральные контрацептивы, антациды или зверобой; или (xvi) лица, выпивающие более 0,1 л грейпфрутового сока в сутки; (xvii) лица, имеющие индекс массы тела (BMI) более 40; (xviii) лица, имеющие индекс массы тела (BMI) менее 18; (xix) лица, страдающие диабетом 1 типа или диабетом 2 типа; (xx) лица, положительные по гепатиту B или гепатиту C; или (xxi) лица, имеющие известную чувствительность к лекарственным средствам на основе моноклональных антител.

В девятнадцатом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент в соответствии с настоящим изобретением, вместе с фармацевтически приемлемым эксципиентом или носителем.

В двадцатом аспекте настоящее изобретение относится к раствору для инъекций, описанному в настоящем описании, содержащему антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, и, предпочтительно, содержащему от приблизительно 40 мг до приблизительно 200 мг или от приблизительно 50 до приблизительно 200 мг, например, приблизительно 40 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 75 мг, приблизительно 100 мг, приблизительно 150 мг или приблизительно 200 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента на объем 1 мл.

В двадцать первом аспекте настоящее изобретение относится к сухому составу, как описано в настоящем описании, содержащему антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению, и, предпочтительно, содержащему от приблизительно 40 мг до приблизительно 500 мг, от 50 до приблизительно 500 мг, от приблизительно 50 до приблизительно 400, от приблизительно 50 до приблизительно 300, например, приблизительно 40 мг, приблизительно 50 мг, приблизительно 75 мг, приблизительно 100 мг, приблизительно 150 мг, приблизительно 200 мг, приблизительно 250 мг, приблизительно 300 мг, приблизительно 350 мг, приблизительно 400 мг, приблизительно 450 мг или приблизительно 500 мг и, более предпочтительно, приблизительно 50 мг, приблизительно 100 мг, приблизительно 150 мг, приблизительно 200 мг, приблизительно 250 мг, приблизительно 300 мг и, еще более предпочтительно, приблизительно 150 мг, приблизительно 200 мг или приблизительно 300 мг антитела или его антигенсвязывающего фрагмента на дозу.

В двадцать втором аспекте настоящее изобретение относится к антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, находящимся в одной из фармацевтических композиций согласно девятнадцатому аспекту.

В двадцать третьем аспекте настоящее изобретение относится к лекарственной форме, содержащей антитело, его антигенсвязывающий фрагмент или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению.

В двадцать четвертом аспекте настоящее изобретение относится к изделию, содержащему фармацевтическую композицию по настоящему изобретению, жидкий состав по настоящему изобретению или сухой состав по настоящему изобретению, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент по настоящему изобретению или одну или несколько лекарственной форм по настоящему изобретению и контейнер или упаковку.

В двадцать пятом аспекте настоящее изобретение относится к изделию, содержащему: (a) упаковочный материал; (b) антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфично связывают hPCSK9; и (c) ярлык или вкладыш в упаковку, находящиеся в упаковочном материале, на которых указано, что пациентов, которым проводят лечение указанным антителом или антигенсвязывающим фрагментом, можно лечить от заболевания или состояния, выбранного из группы, состоящей из гиперхолестеринемии, гиперлипидемии, дислипидемии, атеросклероза и сердечно-сосудистых заболеваний, и, кроме того, указано, что можно лечить индивидуумов, относящихся к одной или нескольким группам индивидуумов, как указано в тринадцатом аспекте.

В двадцать шестом аспекте настоящее изобретение относится к изделию, содержащему: (a) упаковочный материал; (b) антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфично связывают hPCSK9; и (c) ярлык или вкладыш в упаковку, находящиеся в упаковочном материале, на которых указано, что пациентов, которым проводят лечение указанным антителом или антигенсвязывающим фрагментом, можно лечить от заболевания или состояния, выбранного из группы, состоящей из гиперхолестеринемии, гиперлипидемии, дислипидемии, атеросклероза и сердечно-сосудистых заболеваний, и, кроме того, указано, что лечение пациентов указанным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом противопоказано для пациентов, относящихся к одной или нескольким группам индивидуумов, как указано в четырнадцатом аспекте.

В двадцать седьмом аспекте настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции или антителу или его антигенсвязывающего фрагмента по настоящему изобретению, таким как в соответствии с пятнадцатым или девятнадцатым аспектом настоящего изобретения, для применения при лечении заболевания или состояния, в которые вовлечена экспрессия или активность PCSK9.

В двадцать восьмом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения фармацевтической композиции по настоящему изобретению, например, в соответствии с девятнадцатым аспектом, включающему смешение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и необязательно ингибитора HMG-CoA-редуктазы с одним или несколькими фармацевтическими эксципиентами или носителями.

В двадцать девятом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения лекарственной формы по настоящему изобретению, включающему отмеривание количества фармацевтической композиции, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, жидкого состава или сухого состава в соответствии с настоящим изобретением, включающих одну или нескольких доз антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, и необязательно ингибитора HMG-CoA-редуктазы, и преобразование их в физически дискретные единицы, пригодные в качестве единичных дозировок для введения человеку и/или животному.

В тридцатом аспекте настоящее изобретение относится к способу получению или сборки изделия по настоящему изобретению, включающему упаковывание фармацевтической композиции, антитела, жидкого состава, сухого состава или одной или нескольких лекарственных форм по настоящему изобретению в контейнер, необязательно вместе с одним или несколькими из следующих: ярлык, инструкции по применению, устройство для применения.

В тридцать первом аспекте настоящее изобретение относится к способу исследования эффективности антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфично связывают hPCSK9, для лечения заболевания или состояния, выбранного из группы, состоящей из гиперхолестеринемии, гиперлипидемии, дислипидемии, атеросклероза и сердечно-сосудистых заболеваний, причем указанный способ включает:

лечение выбранной группы пациентов указанным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, где каждый пациент в указанной группе имеет уровень холестерина LDL (LDL-C) более 100 мг/дл; и

определение эффективности указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента путем определения уровня LDL-C в группе пациентов до и после введения указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, где снижение уровня LDL-C по меньшей мере на 25% относительно уровня до введения дозы по меньшей мере у 75% группы пациентов указывает на то, что указанные антитело или его антигенсвязывающий фрагмент являются эффективными для лечения указанного заболевания или состояния в указанной группе пациентов;

где каждый пациент относится к одной или нескольким группам индивидуумов, как указано в тринадцатом аспекте.

В тридцать втором аспекте настоящее изобретение относится к способу исследования эффективности антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфично связывают hPCSK9, для лечения заболевания или состояния, выбранного из группы, состоящей из гиперхолестеринемии, гиперлипидемии, дислипидемии, атеросклероза и сердечно-сосудистых заболеваний, причем указанный способ включает:

определение эффективности антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые используют для лечения выбранной группы пациентов указанным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, где каждый пациент в указанной группе имеет уровень холестерина LDL (LDL-C) более 100 мг/дл, путем определения уровня LDL-C в группе пациентов до и после введения указанного антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, где снижение уровня LDL-C по меньшей мере на 25% относительно уровня до введения дозы по меньшей мере у 75% группы пациентов указывает на то, что указанные антитело или его антигенсвязывающий фрагмент являются эффективными для лечения указанного заболевания или состояния в указанной группе пациентов;

где каждый пациент относится к одной или нескольким группам индивидуумов, как указано в тринадцатом аспекте.

В тридцать третьем аспекте настоящее изобретение относится к способу исследования эффективности соединения в отношении снижения уровней холестерина у индивидуума, включающему стадии: (a) предоставление животного отряда грызунов; (b) введение антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфично связывают PCSK9, животному отряда грызунов; (c) введение исследуемого соединения указанному животному отряда грызунов; (d) определение эффекта исследуемого соединения у животного отряда грызунов, где снижение уровня холестерина у животного отряда грызунов по сравнению с уровнем холестерина у контрольного животного указывает на то, что исследуемое соединение является эффективным в отношении снижения уровней холестерина у индивидуума, где контрольное животное представляет собой животное того же вида, что и указанное животное отряда грызунов, и где контрольному животному не вводили исследуемое соединение.

В тридцать четвертом аспекте настоящее изобретение относится к способу усиления активности снижения уровней LDL-C у индивидуума, которому проводят терапию статином, причем способ включает введение индивидууму антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфично связываются с конвертазой пробелков типа субтилизина/кексина человека 9 (hPCSK9), где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в дозировке в диапазоне от приблизительно 5 мг до приблизительно 500 мг, тем самым, усиливая активность терапии статином в отношении снижения LCL-C у индивидуума.

В тридцать пятом аспекте настоящее изобретение относится набору для лечения увеличенных уровней холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-C) у индивидуума, причем набор содержит (a) фармацевтическую лекарственную форму, содержащую антитело или его антигенсвязывающей фрагмент, которые специфично связываются с hPCSK9; и фармацевтически приемлемый носитель, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент присутствуют в дозировке в диапазоне от приблизительно 5 мг до приблизительно 500 мг; и (b) ярлык или вкладыш в упаковку с инструкциями по применению.

В тридцать шестом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения индивидуума, страдающего заболеванием или нарушением, характеризующимся повышенными уровнями холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-C), причем способ включает:

(a) выбор индивидуума с уровнем LDL-C в крови более 100 мг/дл; и

(b) введение указанному индивидууму композиции, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфично связываются с конвертазой пробелков типа субтилизина/кексина человека 9 (hPCSK9); тем самым, снижая уровни холестерина у индивидуума, нуждающегося в этом.

В двадцать шестом аспекте настоящее изобретение относится к способу снижения уровней холестерина у индивидуума, нуждающегося в этом, включающему:

(a) выбор индивидуума с уровнем холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-C) более 100 мг/дл; и

(b) введение указанному индивидууму композиции, содержащей антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, которые специфично связываются с конвертазой пробелков типа субтилизина/кексина человека 9 (hPCSK9); тем самым, снижая уровни холестерина у индивидуума, нуждающегося в этом.

В этом разделе "Сущность изобретения" не обязательно описаны все признаки настоящего изобретения. Другие варианты осуществления станут очевидными из обзора нижеследующего подробного описания.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На фиг.1 представлено процентное снижение уровней холестерина LDL (LDL-C) относительно исходного уровня для трех групп пациентов при введении антитела против PCSK9 316P. Эти группы пациентов представляют собой: (1) пациенты с семейной гиперхолестеринемией (HeFH); (2) пациенты с другими формами первичной гиперхолестеринемии (не-FH) на диете или со стабильной терапией аторвастатином; и (3) пациенты с другими формами первичной гиперхолестеринемии (не-FH) только на диете. Дозу 50 мг антитела против PCSK9 вводили подкожно на 1, 29 и 43. Результаты для групп пациентов, которым вводили антитело (50-мг-FH-нет; 50-мг-FH-да; 50-мг-комбинация), представлены сплошными линиями, в то время как пациенты, которым вводили плацебо (PBO-FH-нет; PBO-FH-да; PBO-комбинация) представлены пунктирными линиями.

На фиг.2 представлено процентное снижение уровней холестерина LDL (LDL-C) относительно исходного уровня для трех групп пациентов при введении антитела против PCSK9 316P. Эти группы пациентов представляют собой: (1) пациенты с семейной гиперхолестеринемией (HeFH); (2) пациенты с другими формами первичной гиперхолестеринемии (не-FH) на диете или со стабильной терапией аторвастатином; и (3) пациенты с другими формами первичной гиперхолестеринемии (не-FH) только на диете. Дозу 100 мг антитела против PCSK9 вводили подкожно на сутки 1, 29 и 43. Результаты для групп пациентов, которым вводили антитело (100-мг-FH-нет; 100-мг-FH-да; 100-мг-комбинация) представлены сплошными линиями, в то время как пациенты, которым вводили плацебо (PBO-FH-нет; PBO-FH-да; PBO-комбинация) представлены пунктирными линиями.

На фиг.3 представлено процентное снижение уровней холестерина LDL (LDL-C) относительно исходного уровня для трех групп пациентов при введении антитела против PCSK9 316P. Эти группы пациентов представляют собой: (1) пациенты с семейной гиперхолестеринемией (HeFH); (2) пациенты с другими формами первичной гиперхолестеринемии (не-FH) на диете или со стабильной терапией аторвастатином; и (3) пациенты с другими формами первичной гиперхолестеринемии (не-FH) только на диете. Дозу 100 мг антитела против PCSK9 вводили подкожно на 1, 29 и 43 сутки. Результаты для групп пациентов, которым вводили антитело (150-мг-FH-нет; 150-мг-FH-да; 150-мг-комбинация) представлены сплошными линиями, в то время как пациенты, которым вводили плацебо (PBO-FH-нет; PBO-FH-да; PBO-комбинация) представлены пунктирными линиями.

На фиг.4 представлена схема исследования для испытания 2 у группы пациентов, которым проводили снижающую уровень липидов терапию, отличную от аторвастатина, или которым не проводили терапию стабильной дозой аторвастатина 10 мг в течение по меньшей мере 6 недель перед скринингом, или пациентов, не подвергавшихся воздействию лекарственных средств.

На фиг.5 представлена схема исследования для испытания 2 у группы пациентов, которых лечили 10 мг аторвастатина в стабильной дозе на протяжении по меньшей мере 6 недель перед скринингом.

На фиг.6 представлено распределение средних величин LDL-C у пациентов испытания 1, которых лечили антителом 316P при стабильной дозе аторвастатина на протяжении 12 недель и LOCF (последнее проведенное наблюдение). Исследование было предназначено для оценки эффективности и безопасности антитела 316P у пациентов с гиперхолестеринемией с повышенным уровнем LDL-C (≥100 мг/дл или 2,59 ммоль/л), которым вводили стабильную дозу аторвастатина (10 мг, 20 мг или 40 мг). В ходе подготовительного периода пациентов стабилизировали в отношении лечения аторвастатином (10 мг, 20 мг или 40 мг), если они не были уже стабилизированы. После одной дополнительной недели пациентов централизованно случайным образом распределяли через IVRS/IWRS в соотношении 1:1:1:1:1:1 в одну из 6 групп лечения (плацебо, 316P 50 мг E2W, 316P 100 мг E2W, 316P 150 мг E2W, 316P 200 мг E4W, 316P 300 мг E4W) и проводили лечение двойным слепым способом в течение приблизительно 12 недель. Рандомизация Thr стратифицирована по дозе аторвастатина, вводимой перед введением. В ходе периода двойного слепого введения пациенты возвращались на их участок каждые 2 недели для проведения исследуемого введения (316P или плацебо). Затем после периода двойного слепого лечения следовал период наблюдения в течение 8 недель. Как может быть установлено из фиг.6, все группы лечения, за исключением группы пациентов, которым вводили плацебо, имели значительное и устойчивое снижение уровней LDL-C на протяжении всего периода испытания.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Определения

Перед подробным описанием настоящего изобретения следует понимать, что это изобретение не ограничивается конкретной методологией, протоколами и реагентами, описанными в настоящем описании, поскольку они могут варьировать. Также следует понимать, что терминология, используемая в настоящем описании, предназначена только для описания конкретных вариантов осуществления, и не предназначена для ограничения объема настоящего изобретения, который ограничивается только прилагаемой формулой изобретения, если не определено иначе, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют то же значение, которое обычно подразумевает специалист в области, к которой относится настоящее изобретение.

Предпочтительно, термины, используемые в рамках настоящего изобретения, определены, как описано в "A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations)", Leuenberger, H.G.W, Nagel, B. и Kölbl, H. eds. (1995), Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basel, Switzerland).

На протяжении описания и формулы изобретения, которые следуют, если контекст не требует иного, слово "содержать" и его варианты, такие как "содержит" и "содержащий", следует понимать как подразумевающие включение числа или стадии или группы чисел или стадий, но не исключение какого-либо другого числа или группы чисел или стадии.

На протяжении текста настоящего описания цитировано несколько документов (например: патентов, патентных заявок, научных публикаций, описаний изготовителей, данных о последовательностях, представленных под номером доступа GenBank и т.д.). Ничто в настоящем документе не следует истолковывать как допущение того, что это изобретение дает право на противопоставление факта создания изобретения с более ранним приоритетом. Некоторые из документов, цитированных в настоящем описании, характеризуются как "включенные в качестве ссылки". В случае противоречия между определениями и идеями таких включенных ссылок и определений или указаний, цитированных в настоящем описании, текст настоящего описания имеет приоритет.

Последовательности: все последовательности, упоминаемые в настоящем описании, описаны в прилагаемом списке последовательностей, полное содержание и раскрытие которого являются частью настоящего описания.

Подразумевают, что термин "приблизительно", когда его используют применительно к числовой величине, охватывает числовые величины в диапазоне, имеющем нижний предел, который на 5% ниже, чем указанная числовая величина, и имеющем верхний предел, который на 5% превышает указанную числовую величину.

Термин "конвертаза пробелков типа субтилизина/кексина человека 9" или "hPCSK9", как используют в рамках изобретения, относится к hPCSK9, имеющей последовательность нуклеиновой кислоты, представленную в SEQ ID NO: 754, и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 755, или ее биологически активному фрагменту.

Термины "специфично связывает", "специфичное связывание" и т.п., означают, что антитело или его антигенсвязывающий фрагмент образуют комплекс с антигеном, который относительно стабилен при физиологических условиях. Специфическое связывание может быть охарактеризовано с помощью равновесной константы диссоциации, составляющей по меньшей мере приблизительно 1×10^-6 M или менее (например, меньшая K_D обозначает более прочное связывание). Способы определения того, связываются ли две молекулы специфически, хорошо известны в данной области и включают, например, равновесный диализ, поверхностный плазмонный резонанс и т.п. Однако выделенное антитело, которое специфично связывает hPCSK9, может проявлять перекрестную реактивность в отношении других антигенов, таких как молекулы PCSK9 из других видов. Более того, полиспецифические антитела (например, биспецифические), которые связываются с hPCSK9 и одним или несколькими дополнительными антигенами, тем не менее, считаются антителами, которые "специфично связывают" hPCSK9, как используют в рамках изобретения.

Термин "K_D", как используют в рамках изобретения, относится к равновесной константе диссоциации конкретного взаимодействия антитело-антиген. Равновесную константу диссоциации, как правило, измеряют в "моль/л" (сокращенно обозначается как "M").

Под термином "медленная константа диссоциации", "Koff" или "kd" подразумевают антитело, которое диссоциирует от hPCSK9 с константой скорости 1×10^-3 c^-1 или менее, предпочтительно, 1×10^-4c^-1 или менее, при определении с использованием поверхностного плазмонного резонанса, например, BIACORE™.

Термин антитело с "высокой аффинностью" относится к mAb, имеющим аффинность связывания с hPCSK9 по меньшей мере 10^-10 M; предпочтительно, 10^-11M; еще более предпочтительно, 10^-12 M, при измерении с использованием поверхностного плазмонного резонанса, например, BIACORE™ или аффинной ELISA в растворе.

Термин "поверхностный плазмонный резонанс", как используют в рамках изобретения, относится к оптическому явлению, которое позволяет анализ биоспецифических взаимодействий в реальном времени путем детекции изменений концентраций белка в биосенсорной матрице, например, с использованием системы BIACORE™ (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway, N.J.).

"Эпитоп", также известный как антигенная детерминанта, представляет собой область антигена, которая распознается иммунной системой, в частности, антителами, B-клетками или T-клетками. Как используют в рамках изобретения, "эпитоп" является частью антигена, которая может связываться антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, как описано в настоящем описании. В этом контексте термин "связывание", предпочтительно, относится к "специфическому связыванию", как определено в настоящем описании. Эпитопы обычно состоят из химически активных поверхностных групп молекул, таких как аминокислоты, боковые цепи сахаров, фосфорильные группы или сульфонильные группы, и могут иметь определенные трехмерные структурные характеристики и/или определенные зарядовые характеристики. Конформационные и неконформационные эпитопы могут отличаться тем, что связывание первых, но не последних из них утрачивается в присутствии денатурирующих растворителей.

"Паратоп" является частью антитела, которая специфично связывается с эпитопом.

Термин "антитело", как используют в рамках изобретения, относится к молекулам иммуноглобулинов, содержащим четыре полипептидных цепи: две тяжелых (H) цепи и две легких (L) цепи, связанных дисульфидными связями. Термин "антитело" также включает все рекомбинантные формы антител, в частности, антитела, описанные в настоящем описании, например, антитела, экспрессируемые у прокариот, негликозилированные антитела и любые антигенсвязывающие фрагменты и производные антител, как описано ниже. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельной области тяжелой цепи ("HCVR" или "VH") и константной области тяжелой цепи (состоящей из доменов CH1, CH2 и CH3). Каждая легкая цепь состоит из вариабельной области легкой цепи ("LCVR или "VL") и константной области легкой цепи (CL). Области VH и VL можно далее подразделять на области гипервариабельности, называемые определяющими комплементарность областями (CDR), между которыми распределены области, которые являются более консервативными, называемые каркасными областями (FR). Каждая VH и VL состоит из трех CDR и четырех FR, расположенных с N-конца к С-концу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Вариабельные области тяжелой и легкой цепей содержат связывающий домен, который взаимодействует с антигеном. Константные области антител могут опосредовать связывание иммуноглобулина с тканями или факторами хозяина, включая различные клетки иммунной системы (например, эффекторные клетки) и первый компонент (C1q) классической системы комплемента.

Также возможна замена одного или нескольких остатков CDR или отсутствие одной или нескольких CDR. В научной литературе описаны антитела, в которых можно обходиться без одной или двух CDR. Padlan et al. (1995 FASEB J. 9:133-139) проанализировали контактные области между антителами и их антигенами, исходя из опубликованных кристаллических структур, и сделали заключение, что только приблизительно от одной пятой до одной трети остатков CDR в действительно контактируют с антигеном. Padlan также открыл множество антител, в которых одна или две CDR не имеют аминокислот, контактирующих с антигеном (также см. Vajdos et al. 2002 J Mol Biol 320:415-428).

Остатки CDR, не контактирующие с антигеном, можно идентифицировать, исходя из предшествующих исследований (например, часто не требуются остатки H60-H65 в CDRH2), в областях CDR по Kabat, находящихся вне CDR по Chothia, путем молекулярного моделирования и/или эмпирически. Если CDR или ее остаток(и) отсутствуют, они обычно заменены аминокислотой, занимающей соответствующее положение в другой последовательности антитела человека или консенсусным остатком таких последовательностей. Положения для замены в CDR и аминокислоты для замены также можно выбирать эмпирически. Эмпирические замены могут представлять собой консервативные или неконсервативные замены.

Термин "антигенсвязывающий фрагмент" антитела (или просто "связывающая часть"), как используют в рамках изобретения, относится к одному или нескольким фрагментам антитела, которые сохраняют способность специфично связываться с hPCSK9. Было показано, что антигенсвязывающую функцию антитела могут выполнять фрагменты полноразмерного антитела. Примеры связывающих фрагментов, охватываемых термином "антигенсвязывающий фрагмент" антитела, включают (i) Fab-фрагменты, одновалентные фрагменты, состоящие из доменов VL, VH, CL и CH; (ii) F(ab')₂-фрагменты, двухвалентные фрагменты, содержащие два Fab-фрагмента, связанных дисульфидным мостиком в шарнирной области; (iii) Fd-фрагменты, состоящие из VH- и CH-доменов; (iv) Fv-фрагменты, состоящие из VL- и VH-доменов одного плеча антитела, (v) dAb-фрагменты (Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546), которые состоят из VH-домена; (vi) выделенные определяющие комплементарность области (CDR), и (vii) комбинации двух или более выделенных CDR, которые необязательно могут быть связаны синтетическим линкером. Более того, хотя два домена Fv-фрагмента, VL и VH, кодируются отдельными генами, их можно связывать с использованием рекомбинантных способов через синтетический линкер, который обеспечивает образование ими единой белковой цепи, в которой области VL и VH образуют пару с формированием одновалентных молекул (известных как одноцепочечный Fv (scFv); см. например, Bird et al. (1988) Science 242: 423-426; и Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883). Такие одноцепочечные антитела также охватываются термином "антигенсвязывающий фрагмент" антитела. Следующим примером является слитый белок связывающий домен-иммуноглобулин, содержащий (i) полипептид связывающего домена, который является слитым с полипептидом шарнирной области иммуноглобулина, (ii) константную область CH2 тяжелой цепи иммуноглобулина, слитую с шарнирной областью, и (iii) константную область CH3 тяжелой цепи иммуноглобулина, слитую с константной областью CH2. Полипептид связывающего домена может представлять собой вариабельную область тяжелой цепи или вариабельную область легкой цепи. Слитые белки связывающий домен-иммуноглобулин дополнительно описаны в US 2003/0118592 и US 2003/0133939. Эти фрагменты антител получают с использованием общепринятых способов, известных специалистам в данной области, и фрагменты подвергают скринингу в отношении применимости аналогично тому, как и целые антитела. Следующими примерами "антигенсвязывающих фрагментов" являются так называемые микроантитела, которые происходят из единичных CDR. Например, Heap et al. описывают микроантитело из 17 аминокислотных остатков, происходящее из CDR3 тяжелой цепи антитела, направленного против гликопротеина оболочки gp120 ВИЧ-1 (Heap CJ et al. (2005) J. Gen. Virol. 86:1791-1800). Другие примеры включают небольшие миметики антител, содержащие две или более областей CDR, которые слиты друг с другом, предпочтительно, через собственные родственные им каркасные области. Такой небольшой миметик антитела, содержащий CDR1 VH и CDR3 VL, связанные через родственную FR2 VH, описан Qiu et al. (Qiu X-Q, et al. (2007) Nature biotechnology 25(8):921-929).

Таким образом, термин "антитело или его антигенсвязывающий фрагмент", как используют в рамках изобретения, относится к молекулам иммуноглобулинов и иммунологически активным частям молекул иммуноглобулинов, т.е. к молекулам, которые содержат антигенсвязывающий центр, который иммуноспецифически связывает антиген.

Антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, пригодные в рамках изобретения, могут быть из любого животного, включая птиц и млекопитающих. Предпочтительно, антитела или фрагменты происходят из человека, шимпанзе, грызунов (например, мышь, крыса, морская свинка или кролика), курицы, индейки, свиньи, овцы, козы, верблюда, коровы, лошади, осла, кошки или собаки. Особенно предпочтительно, чтобы антитела происходили из человека или мыши. Антитела по изобретению также включают химерные молекулы, в которых константная область антитела, происходящая из одного вида, предпочтительно, человека, скомбинирована с антигенсвязывающим центром, происходящим из другого вида, например, мыши. Более того, антитела по изобретению включают гуманизированные молекулы, в которых антигенсвязывающие центры антитела, происходящие из не являющегося человеком вида (например, из мыши) скомбинированы с константными и каркасными областями, происходящими из человека.

Как проиллюстрировано в настоящем описании, антитела по изобретению можно получать непосредственно из гибридом, которые экспрессируют антитело, или можно клонировать и рекомбинантно экспрессировать в клетке-хозяине (например, клетке CHO или лимфоците). Примерами клеток-хозяев являются микроорганизмы, такие как E. coli, и грибы, такие как дрожжи. Альтернативно их можно получать рекомбинантными способами в трансгенном не являющемся человеком животном или растении.

Термин "химерное антитело" относится к антителам, где одна часть каждой из аминокислотных последовательностей тяжелой и легкой цепей гомологична соответствующим последовательностям в антителах, происходящих из конкретного вида или относящихся к конкретному классу, в то время как остальной сегмент цепи гомологичен соответствующим последовательностям в другом виде или классе. Как правило, вариабельная область как легкой, так и тяжелой цепей, имитирует вариабельные области антител, происходящих из одного вида млекопитающих, в то время как константные части гомологичны последовательностям антител, происходящим из другого вида. Одно явное преимущество таких химерных форм состоит в том, что вариабельная область может быть удобным образом получена из известных в настоящее время источников с использованием свободно доступных B-клеток или гибридом из не являющихся человеком организмов-хозяев в комбинации с константными областями, происходящими, например, из препаратов клеток человека. Хотя вариабельная область имеет преимущество простоты получения и на ее специфичность не влияет источник, константная область, являющаяся человеческой, с меньшей вероятностью вызовет иммунный ответ у человека при инъекции антител, чем константная область из не являющегося человеком источника. Однако это определение не ограничивается конкретным примером.

Термин "гуманизированное антитело" относится к молекуле, имеющей антигенсвязывающий центр, который по существу происходит из иммуноглобулина не являющегося человеком вида, где остальная структура иммуноглобулина в молекуле основана на структуре и/или последовательности иммуноглобулина человека. Антигенсвязывающий центр может содержать либо полные вариабельные домены, слитые с константными доменами, либо только определяющие комплементарность области (CDR), пересаженные в подходящие каркасные области в вариабельных доменах. Антигенсвязывающие центры могут быть дикого типа или могут быть модифицированы посредством одной или нескольких аминокислотных замен, например, они могут быть модифицированы так, чтобы в большей степени напоминать иммуноглобулины человека. Некоторые формы гуманизированных антител сохраняют все последовательности CDR (например, гуманизированное антитело мыши, которое содержит все шесть CDR их антитела мыши). Другие формы имеют одну или несколько CDR, которые изменены в отношении исходного антитела.

Специалисту в данной области известны различные способы гуманизации антител, как описано Almagro & Fransson, содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме (Almagro JC и Fransson J (2008) Frontiers in Bioscience 13:1619-1633). Almagro & Fransson разделяют рациональные подходы и эмпирические подходы. Рациональные подходы характеризуются получением нескольких вариантов полученных способами инженерии антител и оценкой их связывания или любого другого представляющего интерес свойства. Если сконструированные варианты не дают ожидаемых результатов, начинают новый цикл конструирования и оценки связывания. Рациональные подходы включают пересадку CDR, изменение поверхности, супергуманизацию, и оптимизацию содержимого в цепях человека. Напротив, эмпирические подходы основаны на получении больших библиотек гуманизированных вариантов и выборе наилучших клонов с использованием технологий обогащения и высокопроизводительного скрининга. Таким образом, эмпирические подходы зависят от надежной системы отбора и/или скрининга, которая способна проводить поиск в широком множестве вариантов антител. Технологии дисплея in vitro, такие как фаговый дисплей и рибосомный дисплей, удовлетворяют этим требованиям и хорошо известны специалисту в данной области. Эмпирические подходы включают библиотеки FR, направленную селекцию, шаффлинг каркасных областей и инженерию антител человека.

Термин "антитело человека", как используют в рамках изобретения, включает антитела, имеющие вариабельные и константные области, происходящие из последовательностей иммуноглобулинов человека эмбрионального типа. mAb человека по изобретению могут включать аминокислотные остатки, не кодируемые последовательностями иммуноглобулинов человека эмбрионального типа (например, мутации, внесенные случайным или сайт-специфическим мутагенезом in vitro или путем соматической мутации in vivo), например, в CDR и, в частности, CDR3. Однако термин "антитело человека", как используют в рамках изобретения, не включает mAb, в которых последовательности CDR, происходящие из зародышевой линии другого вида млекопитающих (например, мыши), пересажены в последовательности FR человека. Антитела человека по изобретению включают антитела, выделенные из библиотек иммуноглобулинов человека или из животных, трансгенных по одному или нескольким иммуноглобулинам человека, и которые не экспрессируют эндогенные иммуноглобулины, как описано, например, в патенте США № 5939598, Kucherlapati & Jakobovits.

Термин "моноклональные антитело", как используют в рамках изобретения, относится к получению молекул антител с одной молекулярной композицией. Моноклональные антитело проявляет одну специфичность и аффинность связывания в отношении конкретного эпитопа. В одном из вариантов осуществления моноклональные антитела продуцируются гибридомой, которая включает B-клетку, полученную из не являющегося человеком животного, например, мыши, слитую с иммортализованной клеткой.

Термин "рекомбинантный антитело", как используют в рамках изобретения, включает все антитела, которые получают, экспрессируют, создают или выделяют рекомбинантными способами, такие как (a) антитела, выделенные из животного (например, мыши), которое является трансгенным или трансхромосомным в отношении генов иммуноглобулинов или гибридомы, полученной из этого животного, (b) антитела, выделенные из клетки-хозяина, трансформированной для экспрессии антитела, например, из трансфектомы, (c) антитела, выделенные из рекомбинантной комбинаторной библиотеки антител, и (d) антитела, полученные, экспрессированные, созданные или выделенные любыми другими способами, которые вовлекают сплайсинг последовательностей генов иммуноглобулинов с другими последовательностями ДНК.

Термин "трансфектома", как используют в рамках изобретения, включает рекомбинантные эукариотические клетки-хозяева, экспрессирующие антитело, такие как клетки CHO, клетки NS/0, клетки HEK293, клетки HEK293T, клетки растений или клетки грибов, в том числе клетки дрожжей.

Как используют в рамках изобретения, "гетерологичное антитело" определяют применительно к трансгенному организму, продуцирующему такое антитело. Этот термин относится к антителу, имеющему аминокислотную последовательность или кодирующему последовательность нуклеиновой кислоты, соответствующую последовательности, встречающейся в организме, не являющемся трансгенным организмом, и, как правило, происходящему из видов, отличных от трансгенного организма.

Как используют в рамках изобретения, "гетерогибридное антитело" относится к антителу, имеющему легкие и тяжелые цепи, происходящие из различных организмов. Например, антитело, имеющее тяжелую цепь человека, связанную с легкой цепью мыши, представляет собой гетерогибридное антитело.

Таким образом, "антитела и их антигенсвязывающие фрагменты", подходящие для применения в настоящем изобретении, включают, но не ограничиваются ими, поликлональные, моноклональные, одновалентные, биспецифические, гетероконъюгированные, полиспецифические, рекомбинантные, гетерологичные, гетерогибридные, химерные, гуманизированные (в частности, с пересаженными CDR), деиммунизированные антитела или антитела человека, Fab-фрагменты, Fab'-фрагменты, F(ab')₂-фрагменты, фрагменты, продуцируемые экспрессирующей Fab библиотекой, Fd, Fv, связанные дисульфидной связью Fv (dsFv), одноцепочечные антитела (например, scFv), диатела или тетратела (Holliger P. et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90(14), 6444-6448), нанотела (также известные как однодоменные антитела), антиидиотипические (анти-Id) антитела (включая, например, анти-Id к антителам по изобретению), и связывающие эпитоп фрагменты любого из указанных выше.

Антитела, описанные в настоящем описании, предпочтительно, являются выделенными. "Выделенное антитело", как используют в рамках изобретения, относится к антителу, которое по существу свободно от других mAb, имеющих отличающуюся антигенную специфичность (например, выделенное антитело, которое специфично связывает hPCSK9, по существу свободно от mAb, которые специфично связывают антигены, отличные от hPCSK9). Однако выделенное антитело, которое специфично связывает hPCSK9, имеет перекрестную реактивность в отношении других антигенов, таких как молекулы PCSK9 из других видов.

Как используют в рамках изобретения, "антагонист PCSK9" обозначает соединение, которое ингибирует по меньшей мере один вид биологической активности PCSK9, предпочтительно, активность протеазы PCSK9. Предпочтительные антагонисты PCSK9 характеризуются тем, что они связывают от 10% до 100% (предпочтительно, 50%-100%) PCSK9, присутствующего в крови, при использовании в стехиометрических количествах. Предпочтительные антагонисты PCSK9 по настоящему изобретению представляют собой нейтрализующие антитела.

"Нейтрализующее антитело", как используют в рамках изобретения (или "антитело, которое нейтрализует активность PCSK9"), относится к антителу, связывание которого с hPCSK9 приводит к ингибированию по меньшей мере одного вида биологической активности PCSK9, предпочтительно, к ингибированию активности протеазы PCSK9. Это ингибирование биологической активности PCSK9 можно оценивать путем измерения одного или нескольких индикаторов биологической активности PCSK9 посредством одного или нескольких стандартных анализов in vitro или in vivo, известных в данной области. Такие анализы описаны, например, в US 2010/0166768 A1, содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки в полном объеме.

Поскольку PCSK9 увеличивает уровень холестерина LDL в плазме путем обеспечения деградации рецептора LDL, активность PCSK9 имеет эффект при нескольких заболеваниях, связанных с увеличенными уровнями холестерина LDL в плазме. Таким образом, антагонисты PCSK9, такие как нейтрализующие антитела против hPCSK9 или их антигенсвязывающие фрагменты, пригодны для снижения увеличенного уровня общего холестерина, холестерина не-HDL, холестерина LDL и/или аполипопротеина B100 (ApoB100). Следовательно, антагонисты PCSK9 пригодны для смягчения, улучшения, ингибирования или предупреждения нескольких таких заболеваний, включая, но не ограничиваясь ими, гиперхолестеринемию, гиперлипидемию, дислипидемию, атеросклероз и сердечно-сосудистые заболевания.

В конкретных вариантах осуществления антитела против PCSK9 или их антигенсвязывающие фрагменты, описанные в настоящем описании, можно конъюгировать с терапевтической частью ("иммуноконъюгат"), такой как цитотоксин, химиотерапевтическое лекарственное средство, иммунодепрессант или радиоизотоп.

"Консервативная аминокислотная замена" представляет собой аминокислотную замену, в которой аминокислотный остаток замещен другим аминокислотным остатком, имеющим боковую цепь (R-группу) со сходными химическими свойствами (например, заряд или гидрофобность). Как правило, консервативная аминокислотная замена по существу не изменяет функциональные свойства белка. В случаях, где две или более аминокислотных последовательностей отличаются друг от друга консервативными заменами, процент или степень сходства можно повышать для поправки на консервативную природу замены. Способы внесения этой поправки хорошо известны специалистам в данной области. См., например, Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24: 307-331. Примеры групп аминокислот, которые имеют боковые цепи со сходными химическими свойствами, включают

1) алифатические боковые цепи: глицин, аланин, валин, лейцин и изолейцин;

2) алифатические гидроксилсодержащие боковые цепи: серин и треонин;

3) амидсодержащие боковые цепи: аспарагин и глутамин;

4) ароматические боковые цепи: фенилаланин, тирозин и триптофан;

5) основные боковые цепи: лизин, аргинин и гистидин;

6) кислотные боковые цепи: аспартат и глутамат, и

7) серосодержащие боковые цепи: цистеин и метионин.

Предпочтительные группы консервативных аминокислотных замен представляют собой: валин-лейцин-изолейцин, фенилаланин-тирозин, лизин-аргинин, аланин-валин, глутамат-аспартат и аспарагин-глутамин. Альтернативно консервативная замена представляет собой любую замену, имеющую положительную величину в логарифмической матрице вероятностей PAM250, описанной в Gonnet et al. (1992) Science 256: 1443-45. "Умеренно консервативная" замена представляет собой любую замену, имеющую неотрицательную величину в логарифмической матрице вероятностей PAM250. Учитывая известный генетический код и рекомбинантные и синтетические способы ДНК, квалифицированный ученый может легко сконструировать ДНК, кодирующую консервативные варианты аминокислот.

Как используют в рамках изобретения, "неконсервативные замены" или "неконсервативные аминокислотные замены" определяют как замену аминокислоты другой аминокислотой, приведенной в отличающейся группе из семи стандартных групп аминокислот 1)-7), представленных выше.

Термин "существенная идентичность" или "по существу идентичный" при указании на нуклеиновую кислоту или ее фрагмент указывает на то, что при оптимальным выравнивании с соответствующими нуклеотидными инсерциями или делециями с другой нуклеиновой кислотой (или комплементарной ей цепью), существует идентичность нуклеотидной последовательности по меньшей мере приблизительно в 90%, и более предпочтительно, по меньшей мере приблизительно в 95%, 96%, 97%, 98% или 99% нуклеотидных оснований при измерении с помощью любого хорошо известного алгоритма идентичности последовательностей, такого как FASTA, BLAST или GAP, как рассмотрено ниже.

Применительно к полипептидам, термин "существенное сходство" или "по существу сходный" означает, что две пептидных последовательности, при оптимальном выравнивании, например, с помощью программ GAP или BESTFIT с использованием веса пропусков по умолчанию, обладают по меньшей мере 90% идентичностью последовательностей, еще более предпочтительно, по меньшей мере 95%, 98% или 99% идентичностью последовательностей. Предпочтительно, положения остатков, которые не являются идентичными, отличаются консервативными аминокислотными заменами.

Сходство последовательностей для полипептидов, как правило, измеряют с использованием программного обеспечения для анализа последовательностей. Программное обеспечение для анализа белка сопоставляет сходные последовательности с использованием показателей сходства, приписываемых различным заменам, делециям и другим модификациям, включая консервативные аминокислотные замены. Например, программное обеспечение GCG содержит программы, такие как GAP и BESTFIT, которые можно использовать с параметрами по умолчанию для определения гомологии последовательностей или идентичности последовательностей между близкородственными полипептидами, такими как гомологичные полипептиды из различных видов организмов или между белком дикого типа и его мутеином. См., например, GCG Version 6.1. Полипептидные последовательности также можно сравнивать с использованием FASTA с параметрами по умолчанию или рекомендованными параметрами; программа в GCG Version 6.1. FASTA (например, FASTA2 и FASTA3) обеспечивает выравнивание и предоставляет процентную идентичность последовательностей в областях наилучшего перекрывания между последовательностью запроса и искомой последовательностью (Pearson (2000) выше). Другим предпочтительным алгоритмом при сравнении последовательности по изобретению с базой данных, содержащей большое количество последовательностей из различных организмов, является компьютерная программа BLAST, особенно BLASTP или TBLASTN, с использованием параметров по умолчанию. См., например, Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403 410 и (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389 402, все из которых включены в настоящее описание в качестве ссылок.

Когда процент идентичности последовательностей упоминается в настоящей заявке, эти проценты вычисляют относительно полной длины более длинной последовательности, если конкретно не указано иное. Это вычисление относительно полной длины более длинной последовательности применимо как к последовательностям нуклеиновых кислот, так и к полипептидным последовательностям.

Как используют в рамках изобретения, "лечить", "проведение лечения" или "лечение" заболевания или нарушения означает осуществление одного или нескольких из следующих: (a) снижение тяжести и/или длительности нарушения; (b) ограничение или предупреждение развития симптомов, характерных для нарушения(ий), подвергаемого лечению; (c) ингибирование ухудшения симптомов, характерных для нарушения(ий), подвергаемого лечению; (d) ограничение или предупреждение рецидива нарушения(ий) у пациентов, которые ранее имели нарушение(я); и (e) ограничение или предупреждение рецидива симптомов у пациентов, у которых ранее был симптомы нарушения(ий).

Как используют в рамках изобретения, "предупреждать", "проведение предупреждения", "предупреждение" или "профилактика" заболевания или нарушения означает предупреждение возникновения этого нарушения у индивидуума.

Как используют в рамках изобретения, выражения "предназначен для введения" и "намереваются вводить" имеет то же значение, что и "получен для введения". Иными словами, утверждение, что активное соединение "предназначено для введения", следует понимать так, что указанное активное соединение получено и преобразовано в дозы так, что указанное активное соединение находится в состоянии, способном осуществлять его терапевтическую активность.

Термины "терапевтически эффективное количество" или "терапевтическое количество" означают количество лекарственного средства или фармацевтического средства, которое индуцирует биологический или медицинский ответ в ткани, системе, животном или человеке, который является искомым для исследователя, ветеринара, врача или другого медицинского специалиста. Термин "профилактически эффективное количество" означает количество фармацевтического лекарственного средства, которое будет предупреждать или снижать риск возникновения биологического или медицинского события, которое исследователь, ветеринар, врач или другой медицинский специалист намеревается предупредить, в ткани, системе, у животного или человека. В частности, дозировка, которую вводят пациенту, может быть выбрана так, чтобы достигнуть желаемого снижения уровня холестирина LDL (липопротеин низкой плотности); дозировку, которую вводят пациенту, также можно титровать с течением времени для достижения заданного уровня LDL. Режим дозирования с использованием антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, как описано в настоящем описании, выбирают в соответствии с различными факторами, включая тип, вид, возраст, массу тела, индекс массы тела, пол и медицинское состояние пациента; тяжесть состояния, подвергаемого лечению; эффективность соединения, выбранного для введения; путь введения; цель введения; и функцию почек и печени пациента.

Как используют в рамках изобретения, "пациент" означает любого человека или не являющееся человеком животное, такое как млекопитающее, пресмыкающееся или птица, для которого может быть полезным лечение антителами и их антигенсвязывающими фрагментами, описанными в настоящем описании. Предпочтительно, "пациент" выбран из группы, состоящей из лабораторных животных (например, мышь или крыса), домашних животных (включая, например, морскую свинку, кролика, курицу, индейку, свинью, овцу, козу, верблюда, корову, лошадь, осла, кошку или собаку), грызуна или приматов, включая шимпанзе, гориллу, бонобо и человека. Особенно предпочтительно, чтобы "пациентом" был человек.

Термины "индивидуум" или "субъект" используют в настоящем описании взаимозаменяемо. Как используют в рамках изобретения, "индивидуум" относится к человеку или не являющемуся человеком животному (например, млекопитающие, птицы, пресмыкающиеся, рыбы, земноводные или беспозвоночные); предпочтительно, индивиду, для которого либо будут полезны различные аспекты настоящего изобретения (например, способ лечения или лекарственное средство, идентифицированное способами по настоящему изобретению), либо которого можно использовать в качестве лабораторного животного для идентификации или охарактеризации лекарственного средства или способа лечения. Индивидуумом может быть, например, человек, дикое животное, домашнее животное или лабораторное животное; примеры включают: млекопитающих, например, человека, не являющегося человеком примата (шимпанзе, бонобо, горилла), собаку, кошку, грызуна (например, мышь, морская свинка, крыса, хомячок или кролик), лошадь, осла, корову, овцу, козу, свинью, верблюда; птицу, такую как утка, голубь, индейка, гусь или курица; пресмыкающееся, такое как: морская черепаха, сухопутная черепаха, змея, ящерица, земноводное, такое как лягушка (например, Xenopus laevis); рыбу, такую как кои или данио; беспозвоночных, таких как черви (например, c.elegans) или насекомые (такие как муха, например, drosophila melanogaster). Термин индивидуум также включает различные морфологические стадии развития птиц, рыб, пресмыкающихся или насекомых, такие как яйцо, куколка, личинка или имаго. Кроме того, предпочтительно, чтобы индивидуум являлся "пациентом".

Как используют в рамках изобретения, "лекарственная форма" относится к физически дискретным единицам, пригодным в качестве единичных дозировок для человека и/или животных, причем каждая единица содержит заданное количество активного материала (например, от приблизительно 50 до приблизительно 500 мг антитела PCSK5 и/или, например, от 0,05 мг до 100 мг ингибитора HMG-CoA-редуктазы), вычисленное для достижения желаемого терапевтического эффекта, вместе с требуемым фармацевтическим разбавителем, носителем или наполнителем. Характеристики новых лекарственных форм по настоящему изобретению определяются и прямо зависят от (a) уникальных характеристик активного материала и конкретного терапевтического эффекта, которого намереваются достигнуть, и (b) ограничения в данной области в отношении составления такого активного материала для терапевтического применения у животных или человека, как описано в настоящем описании, и они являются признаками настоящего изобретения. Примерами подходящих лекарственных форм по настоящему изобретению являются флаконы, таблетки, капсулы, лепешки, суппозитории, пакеты с порошком, вафли, крахмальные капсулы, ампулы, отдельные множества любых из вышесказанных, и другие формы, как описано в настоящем описании или общеизвестно в данной области. Одна или несколько таких лекарственных форм антитела могут содержаться в изделии по настоящему изобретению, необязательно дополнительно содержащем одну или несколько лекарственных форм ингибитора HMG-CoA-редуктазы (например, таблетки в блистерной упаковке, содержащие в качестве активного ингредиента ингибитор HMG-CoA-редуктазы).

Термин "активный материал" относится к любому материалу с терапевтической активностью, такому как один или несколько активных ингредиентов. Активные ингредиенты, используемые в качестве лекарственных средств, можно легко получать в такой лекарственной форме с использованием фармацевтических материалов, которые сами по себе доступны в данной области и могут быть получены общепринятыми способами.

Следующие препараты являются иллюстративными для получения лекарственных форм по настоящему изобретению, и не предназначены для их ограничения. Можно получать несколько дозированных форм, являющихся вариантами осуществления настоящего изобретения. Например, единичная доза на флакон может содержать 0,5 мл, 1 мл, 2 мл, 3 мл, 4 мл, 5 мл, 6 мл, 7 мл, 8 мл, 9 мл, 10 мл, 15 мл или 20 мл антитела PCSK5 или его фрагмента в диапазоне от приблизительно 40 до приблизительно 500 мг антитела PCSK5. Если необходимо, эти препараты можно доводить до желаемой концентрации путем добавления в каждый флакон стерильного разбавителя. В одном из вариантов осуществления ингредиенты состава по изобретению предоставляют либо по отдельности, либо смешанными вместе в лекарственную форму, например, в качестве сухого лиофилизированного порошка или не содержащего воды концентрата в герметично закрытом контейнере, таком как флакон, ампула или саше, на которых указано количество активного вещества. Когда композиция предназначена для введения путем инфузии, ее можно распространять с помощью бутылки для инфузий, содержащей стерильную воду фармацевтической категории или солевой раствор. Когда композицию вводят путем инъекции, может быть предоставлена ампула стерильной воды для инъекций или солевого раствора, так чтобы ингредиенты можно было смешивать перед введением.

Составы по изобретению включают композиции лекарственных средств в виде сыпучих смесей, пригодных для получения фармацевтических композиций (например, композиций, которые пригодны для введения индивидууму или пациенту), которые можно использовать для получения лекарственных форм. В предпочтительном варианте осуществления композиция по изобретению представляет собой фармацевтическую композицию. Такие композиции содержат профилактически или терапевтически эффективное количество одного или нескольких профилактических или терапевтических средств (например, антитело по изобретению или другое профилактическое или терапевтическое средство), и фармацевтически приемлемый носитель. Предпочтительно, фармацевтические композиции изготавливают так, чтобы они были пригодными для данного пути введения индивидууму.

Активные материалы или ингредиенты (например, антитела или их фрагменты и ингибитор HMG-CoA-редуктазы) можно получать в качестве различных дозированных форм, включая твердые дозированные формы для перорального введения, такие как капсулы, таблетки, пилюли, порошки и гранулы, жидкие дозированные формы для перорального введения, такие как фармацевтически приемлемые эмульсии, микроэмульсии, растворы, суспензии, сиропы и эликсиры, инъецируемые препараты, например, стерильные инъецируемые водные или масляные суспензии, композиции для ректального или вагинального введения, предпочтительно, суппозитории, и дозированные формы для местного или чрескожного введения, такие как мази, пасты, кремы, лосьоны, гели, порошки, растворы, спреи, ингалируемые вещества или пластыри.

В конкретном варианте осуществления термин "фармацевтически приемлемый" означает одобренный регулирующим органом федерального правительства или правительства штата США или EMA (European Medicines Agency) или приведенный в фармакопее U.S. Pharmacopeia (United States Pharmacopeia-33/National Formulary-28 Reissue, опубликованная United States Pharmacopeial Convention, Inc., Rockville Md., дата публикации: April 2010) или другой общепризнанной фармакопеей для применения у животных, и, более конкретно, у человека. Термин "носитель" относится к разбавителю, адъюванту (например, адъювант Фрейнда (полный и неполный)), эксципиенту или наполнителю, с которым вводят лекарственное средство. Такие фармацевтические носители могут быть стерильными жидкостями, такими как вода и масла, включая масла из нефти, животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.п. Вода является предпочтительным носителем, когда фармацевтическую композицию вводят внутривенно. Также в качестве жидких носителей можно использовать солевые растворы и водные растворы декстрозы и глицерина, в частности для инъецируемых растворов. Подходящие фармацевтические эксципиенты включают крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат натрия, моностеарат глицерина, тальк, хлорид натрия, сухое снятое молоко, глицерин, пропилен, гликоль, воду, этанол и т.п. Для (дополнительных) эксципиентов и их применения также см. "Handbook of Pharmaceutical Excipients", fifth edition, R.C.Rowe, P.J. Seskey and S.C. Owen, Pharmaceutical Press, London, Chicago. Композиция, если желательно, также может содержать небольшие количества смачивающих веществ или эмульгаторов, или pH-буферных веществ. Эти композиции могут иметь форму растворов, суспензий, эмульсий, таблеток, пилюль, капсул, порошков, составов с замедленным высвобождением и т.п. Пероральный состав может включать стандартные носители, такие как маннит, лактоза, крахмал, стеарат магния, сахарин натрия, целлюлоза, карбонат магния фармацевтической категории и т.д. Примеры подходящих фармацевтических носителей описаны в "Remington's Pharmaceutical Sciences", E. W. Martin. Такие композиции содержат профилактически или терапевтически эффективное количество антитела, предпочтительно, в очищенной форме, вместе с подходящим количеством носителя, так чтобы обеспечивалась форма для надлежащего введения пациенту. Состав должен соответствовать способу введения.

Как правило, ингредиенты композиций по изобретению предоставляют либо отдельно, либо смешанными вместе в лекарственную форму, например, в качестве сухого состава для растворения, такого как лиофилизированный порошок, высушенный сублиационной сушкой порошок или не содержащий воды концентрат, в герметично закрытом контейнере, таком как ампула или саше, на которых указано количество активного вещества. Ингредиенты композиций по изобретению также могут быть предоставлены в качестве смешанного жидкого состава (т.е. раствор для инъекций или инфузий) в герметично закрытом контейнере, таком как ампула, саше, предварительно заполненный шприц или шприц для самоинъекций, или кассета для многоразового шприца или аппликатора (например, шприца-ручки или шприца для самоинъекций). Когда композиция предназначена для введения путем инфузии, ее можно распространять в бутылке для инфузий, содержащей стерильную воду или солевой раствор фармацевтической категории. Когда композицию вводят путем инъекции, может быть предоставлена ампула стерильной воды или солевого раствора для инъекций, так чтобы ингредиенты можно было смешивать перед введением.

Изобретение также относится к составу, упакованному в герметично закрытый контейнер, такой как ампула или саше, на которых указано количество антитела. В одном из вариантов осуществления состав по изобретению, содержащий антитело, предоставляют в качестве сухого состава, такого как стерилизованный лиофилизированный порошок, высушенный сублиационной сушкой порошок, высушенный распылительной сушкой порошок или не содержащий воды концентрат, в герметично закрытом контейнере, и его можно разбавлять, например, водой или солевым раствором до соответствующей концентрации для введения индивидууму. В другом варианте осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент предоставляют в качестве жидкого состава, такого как раствор для инъекций или инфузий. В одном из вариантов осуществления состав по изобретению, содержащий антитело, предоставляют в качестве сухого состава или в качестве жидкого состава в герметично закрытом контейнере в единичной дозировке по меньшей мере 40 мг, по меньшей мере 50 мг, более предпочтительно, по меньшей мере 75 мг, по меньшей мере 100 мг, по меньшей мере 150 мг, по меньшей мере 200 мг, по меньшей мере 250 мг, по меньшей мере 300 мг, по меньшей мере 350 мг, по меньшей мере 400 мг, по меньшей мере 450 мг или по меньшей мере 500 мг, антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. Лиофилизированный состав по изобретению, содержащий антитело, необходимо хранить при от 2 до 8°C в его исходном контейнере и антитело следует вводить в пределах 12 часов, предпочтительно, в пределах 6 часов, в пределах 5 часов, в пределах 3 часов, или в пределах 1 часа после восстановления. Состав по изобретению, содержащий антитела, можно составлять в качестве нейтральной или солевой форм. Фармацевтически приемлемые соли включают соли, образованные с анионами, такие как соли, происходящие из хлористоводородной, фосфорной, уксусной, щавелевой, виннокаменной кислот, и т.д., и соли, образованные с катионами, такие как соли, происходящие из гидроксида натрия, гидроксида калия, гидроксида аммония, гидроксида кальция, гидроксида железа, изопропиламина, триэтиламина, 2-этиламиноэтанола, гистидина, прокаина и т.д.

Взрослых индивидуумов характеризуют, как имеющих "гипертензию" или высокое кровяное давление, когда они имеют систолическое кровяное давление более 140 мм.рт.ст. и/или диастолическое кровяное давление более 90 мм.рт.ст.

Конкретные группы, которые можно лечить терапевтическими способами по изобретению, включают индивидуумов с одним или несколькими из следующих состояний: индивидуумы, для которых показан аферез LDL, индивидуумы с активирующими PCSK9 мутациями (мутации с приобретением функции, "GOF"), индивидуумы с повышенными уровням общего холестерина, индивидуумы с повышенными уровнями холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-C), индивидуумы с первичной гиперхолестеринемией, такие как индивидуумы с первичной семейной или несемейной гиперхолестеринемией, индивидуумы с гетерозиготной семейной гиперхолестеринемией (heFH); индивидуумы с гиперхолестеринемией, особенно с первичной гиперхолестеринемией с непереносимостью статинов или неконтролируемой статинами; и индивидуумы с риском развития гиперхолестеринемии, которых можно лечить профилактически. Другие показания включают гиперлипидемию и дислипидемию, особенно, если они связаны с вторичными причинами, такими как сахарный диабет 2 типа, холестатические заболевания печени (первичный билиарный цирроз), нефротический синдром, гипотиреоз, ожирение; и профилактика и лечение атеросклероза и сердечно-сосудистых заболеваний, таких как коронарная болезнь сердца (CHD). Состояния или нарушения, перечисленные для описанных выше групп или индивидуумов, представляют собой состояния или нарушения, при которых лечение антителом по изобретению является особенно пригодным.

Однако, в зависимости от тяжести вышеупомянутых заболеваний и состояний, лечение индивидуумов антителами и антигенсвязывающими фрагментами по изобретению может быть противопоказано при определенных заболеваниях и состояниях.

Термин "неблагоприятное явление" (или побочный эффект) относится к вредоносному и нежелательному эффекту вследствие медикаментозного лечения. Неблагоприятное явление может быть названо "побочным эффектом", когда считается, что оно является вторичным для главного или терапевтического эффекта. Некоторые неблагоприятные явления возникают только в начале, при увеличении или прекращении лечения. Неблагоприятные явления могут вызывать медицинские осложнения заболевания и отрицательно влиять на его прогноз. Примерами побочных эффектов являются аллергические реакции, рвота, головная боль или головокружение или любой другой эффект, описанный в настоящем описании.

Как используют в рамках изобретения, "лечить", "проведение лечения" или "лечение" заболевания или нарушения означает осуществление одного или нескольких из следующих: (a) снижение тяжести и/или длительности нарушения; (b) ограничение или предупреждение развития симптомов, характерных для нарушения(ий), подвергаемого лечению; (c) ингибирование ухудшения симптомов, характерных для нарушения(ий), подвергаемого лечению; (d) ограничение или предупреждение рецидива нарушения(ий) у пациентов, которые ранее имели нарушение(я); и (e) ограничение или предупреждение рецидива симптомов у пациентов, у которых ранее был симптомы нарушения(ий).

Как используют в рамках изобретения, "предупреждать", "проведение предупреждения", "предупреждение" или "профилактика" заболевания, состояния или нарушения означает предупреждение возникновения этого нарушения, заболевания или состояния у индивидуума.

Повышенные уровни общего холестерина понимают в контексте настоящего изобретения, как предпочтительно, уровни общего холестерина, составляющие 200 мг/дл или более, особенно 240 мг/дл или более. Международные руководства по лечению рекомендовали снижение LDL-C до <2,0-2,6 ммоль/л (<77-100 мг/дл) у пациентов с устоявшимися сердечно-сосудистыми заболеваниями (CVD) и до <1,8-2,0 ммоль/л (<70-77 мг/дл) в группах высокого риска, таких как группы с CVD вместе с диабетом, курением, плохо контролируемой гипертензией, метаболическим синдромом или предшествующим инфарктом миокарда. Таким образом, повышенные уровни LDL-C понимают в контексте настоящего изобретения как уровни LDL-C 77 мг/дл или более (особенно для пациентов с одной или несколькими из следующих характеристик: устоявшиеся CVD и одно или несколько из [диабета, курения, плохо контролируемой гипертензии, метаболического синдрома или предшествующего инфаркта миокарда]) и 100 мг/дл или более (особенно для пациентов с установившимися CVD), 130 мг/дл или более, или 160 мг/дл или 190 мг/дл или более. Низкие уровни липопротеинов высокой плотности (уровни HDL) в контексте настоящего изобретения понимают как предпочтительно составляющие менее чем приблизительно 40 мг/дл.

Термины "неконтролируемый статинами" или "устойчивый к статинам", особенно в контексте гиперлипидемии, гиперхолестеринемии и т.д., используют в настоящем описании синонимично и они относятся к состояниям, такими как гиперлипидемия, где лечение статином (т.е. регулярное введение статина, такого как аторвастатин, пациенту) не снижает в значительной степени уровень общего холестерина или LDL-C или не является достаточным для установления нормолипидемических уровней для пациента или для установления липидемического (например, общий холестерин или LDL-C) уровня, который не является существенным фактором риска для развития сердечно-сосудистых заболеваний. Этот означает, например, что лечение статинами не является достаточным для установления уровней менее 130 мг/дл, как правило, или менее 100 мг/дл (например, от приблизительно ≥77 мг/дл до приблизительно 100 мг/дл), особенно у пациентов с устоявшимися сердечно-сосудистыми заболеваниями, или для установления уровней приблизительно менее чем 77 мг/дл (например, приблизительно ≥70-77 мг/дл), особенно в группах высокого риска, таких как группы с CVD вместе с диабетом, курением, плохо контролируемой гипертензией, метаболическим синдромом или предшествующим инфарктом миокарда. В контексте настоящего изобретения, устойчивость к статинам предпочтительно, относится к устойчивости к аторвастатину.

Варианты осуществления изобретения

Настоящее изобретение далее описано дополнительно. В следующих абзацах различные аспекты изобретения определены более подробно. Каждый аспект, определенный таким путем, можно комбинировать с любым другим аспектом или аспектами, если явно не указано иное. В частности, любой признак, указанный как являющийся предпочтительным или преимущественным, можно комбинировать с любым другим признаком или признаками, указанными в качестве предпочтительных или преимущественных, если явно не указано иное.

В первом аспекте настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания или состояния, которые вызваны экспрессией или активностью PCSK9, включающему:

введение терапевтического количества антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, которые специфично связывают hPCSK9 (конвертаза пробелков типа субтилизина/кексина человека 9) индивидууму, нуждающемуся в этом, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в дозировке в диапазоне от 5 мг до 500 мг, и

введение терапевтического количества ингибитора HMG-CoA-редуктазы указанному индивидууму, где ингибитор HMG-CoA-редуктазы предпочтительно, вводят в дозировке в диапазоне от 0,05 мг до 100 мг.

В контексте настоящей заявки термин "заболевание или состояние, в которые вовлечена экспрессия или активность PCSK9," понимают как включающий любое заболевание или состояние, при которых применение антитела против PCSK-9 оказывает влияние.

В предпочтительных вариантах осуществления первого и других аспектов настоящего изобретения заболевание или состояние, в которые вовлечена экспрессия или активность PCSK9, смягчаются, улучшаются, ингибируются или предупреждаются с помощью антагониста PCSK9.

В следующих предпочтительных вариантах осуществления первого и других аспектов настоящего изобретения заболевание или состояние выбраны из группы, состоящей из: повышенных уровней общего холестерина, повышенных уровней холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-C), гиперхолестеринемии, в частности гиперхолестеринемии, неконтролируемой статинами, гиперлипидемии, дислипидемии, атеросклероза, сердечно-сосудистых заболеваний, первичной гиперхолестеринемии, такой как первичная семейная гиперхолестеринемия или первичная несемейная гиперхолестеринемия, гиперхолестеринемия (особенно первичная гиперхолестеринемия), не контролируемая статинами (в частности, неконтролируемая аторвастатином).

В предпочтительных вариантах осуществления первого и других аспектов настоящего изобретения индивидуумом, нуждающемся в этом, является индивидуум, для которого показан аферез LDL, индивидуум с активирующими PCSK9 мутациями, индивидуум с гетерозиготной семейной гиперхолестеринемией, индивидуум с первичной гиперхолестеринемией, индивидуум с первичной гиперхолестеринемией, не контролируемой статинами, индивидуум с риском развития гиперхолестеринемии, индивидуум с гиперхолестеринемией, индивидуум с гиперлипидемией, индивидуум с дислипидемией, индивидуум с атеросклерозом или индивидуум с сердечно-сосудистыми заболеваниями. Наиболее предпочтительно, индивидуумом, нуждающимся в этом, является человек.

В некоторых вариантах осуществления первого и других аспектов изобретения ингибитор HMG-CoA-редуктазы вводят три раза в сутки, два раза в сутки или один раз в сутки. В некоторых вариантах осуществления первого и других аспектов настоящего изобретения ингибитор HMG-CoA-редуктазы вводят каждые сутки, раз в двое суток, раз в трое суток, раз в четверо суток, раз в пять суток или раз в шесть суток. В некоторых вариантах осуществления первого и других аспектов настоящего изобретения ингибитор HMG-CoA-редуктазы вводят раз в неделю, раз в две недели, раз в три недели или раз в четыре недели. В некоторых вариантах осуществления первого и других аспектов настоящего изобретения ингибитор HMG-CoA-редуктазы вводят утром, днем или вечером. В предпочтительных вариантах осуществления ингибитор HMG-CoA-редуктазы вводят один раз в сутки, предпочтительно, перорально, предпочтительно, вечером.

Предпочтительно, ингибитор HMG-CoA-редуктазы представляет собой статин. Более предпочтительно, статин выбран из группы, состоящей из церивастатина, аторвастатина, симвастатина, питавастатина, розувастатина, флувастатина, ловастатина и правастатина.

В более предпочтительных вариантах осуществления первого и других аспектов настоящего изобретения, статин представляет собой

- церивастатин, вводимый в суточной дозировке от 0,05 мг до 2 мг, предпочтительно, в суточной дозировке 0,2 мг, 0,4 мг или 0,8 мг;

- аторвастатин, вводимый в суточной дозировке от 2 мг до 100 мг, предпочтительно, в суточной дозировке 10 мг, 20 мг, 40 мг или 80 мг;

- симвастатин, вводимый в суточной дозировке от 2 мг до 100 мг, предпочтительно, в суточной дозировке 5 мг, 10 мг, 20 мг, 40 мг или 80 мг;

- питавастатин, вводимый в суточной дозировке от 0,2 мг до 100 мг, предпочтительно, в суточной дозировке 1 мг, 2 мг, 5 мг, 10 мг или 20 мг;

- розувастатин, вводимый в суточной дозировке от 2 мг до 100 мг, предпочтительно, в суточной дозировке 5 мг, 10 мг, 20 мг или 40 мг;

- флувастатин, вводимый в суточной дозировке от 2 мг до 100 мг, предпочтительно, в суточной дозировке 20 мг, 40 мг или 80 мг;

- ловастатин, вводимый в суточной дозировке от 2 мг до 100 мг, предпочтительно, в суточной дозировке 10 мг, 20 мг, 40 мг или 80 мг; или

- правастатин, вводимый в суточной дозировке от 2 мг до 100 мг, предпочтительно, в суточной дозировке 10 мг, 20 мг, 40 мг или 80 мг.

В предпочтительных вариантах осуществления первого и других аспектов настоящего изобретения антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят индивидууму раз в две недели, раз в четыре недели или раз в месяц. Введение раз в четыре недели или введение раз в месяц (т.е. один раз в календарный месяц, например, каждый первый, второй и т.д. день месяца или каждый первый, второй, третий понедельник, вторник и т.д. каждого месяца, в противоположность введению раз в четыре недели) является предпочтительным ввиду соблюдения пациентом режима лечения. Введение раз в две неделю является предпочтительным ввиду низкого варьирования уровней холестерина в крови. Другие подходящие расписания для введения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента включают, но не ограничиваются ими, введение один раз в сутки, раз в двое суток, раз в трое суток, раз в четверо суток, раз в пять суток, раз в шесть суток, раз в неделю, раз в три недели, раз в пять недель, раз в шесть недель, раз в восемь недель, раз в десять недель и раз в двенадцать недель.

В предпочтительных вариантах осуществления первого и других аспектов настоящего изобретения антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в дозировке в диапазоне, например, от приблизительно 40 мг до приблизительно 500 мг, от приблизительно 50 мг до приблизительно 500 мг, приблизительно от 50 мг до 300 мг или приблизительно от 100 мг до 200 мг. В более предпочтительных вариантах осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в дозировке приблизительно 50 мг, приблизительно 100 мг, приблизительно 150 мг, приблизительно 200 мг, приблизительно 250 мг, приблизительно 300 мг, приблизительно 350 мг, приблизительно 400 мг, приблизительно 450 мг или приблизительно 500 мг. Дозы от приблизительно 50 до приблизительно 200 мг, например, приблизительно 50 мг, приблизительно 100 мг, приблизительно 150 мг или приблизительно 200 мг особенно пригодны для режима дозирования раз в две недели (т.е. применение через неделю), дозы от приблизительно 150 мг до приблизительно 400 мг, например, приблизительно 150 мг, приблизительно 200 мг, приблизительно 250 мг, приблизительно 300 мг приблизительно 350 мг или приблизительно 400 мг особенно пригодны для режима введения с более длительными интервалами, например, введение раз в три или четыре недели или раз в месяц.

Антитела и их антигенсвязывающие фрагменты, которые можно использовать для применения на практике первого и других аспектов настоящего изобретения, описаны в разделе "Предпочтительные антитела для применения настоящего изобретения на практике".

Во втором аспекте настоящее изобретение относится к антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, которые специфично связывают hPCSK9 (конвертаза пробелков типа субтилизина/кексина человека 9) для применения при лечении заболевания или состояния, в которые вовлечена экспрессия или активность PCSK9,

где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент предназначены для введения в дозировке в диапазоне от 5 мг до 500 мг,

где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, кроме того, предназначены для введения в комбинации с ингибитором HMG-CoA-редуктазы в дозировке в диапазоне от 0,05 мг до 100 мг.

В предпочтительных вариантах осуществления второго и других аспектов настоящего изобретения заболевание или состояние, в которые вовлечена экспрессия или активность PCSK9, смягчаются, улучшаются, ингибируются или предупреждаются с помощью антагониста PCSK9.

В следующих предпочтительных вариантах осуществления второго и других аспектов настоящего изобретения заболевание или состояние выбраны из группы, состоящей из: повышенных уровней холестерина липопротеинов низкой плотности (LDL-C), гиперхолестеринемии, в частности, гиперхолестеринемии, не контролируемой статинами, гиперлипидемии, дислипидемии, атеросклероза и сердечно-сосудистых заболеваний, в частности, первичной гиперхолестеринемии, такой как первичная семейная гиперхолестеринемия или первичная несемейная гиперхолестеринемия.

В предпочтительных вариантах осуществления второго и других аспектов настоящего изобретения антитело или его антигенсвязывающий фрагмент предназначены для введения индивидууму, для которого показан аферез LDL, индивидууму с активирующими PCSK9 мутациями, индивидууму с гетерозиготной семейной гиперхолестеринемией, индивидууму с первичной гиперхолестеринемией, индивидууму с первичной гиперхолестеринемией, неконтролируемой статинами, индивидууму с риском развития гиперхолестеринемии, индивидууму с гиперхолестеринемией, индивидууму с гиперлипидемией, индивидууму с дислипидемией, индивидууму с атеросклерозом или индивидууму с сердечно-сосудистыми заболеваниями. Наиболее предпочтительно, индивидуумом является человек.

В некоторых вариантах осуществления второго и других аспектов настоящего изобретения антитело или его антигенсвязывающий фрагмент предназначены для введения в комбинации с ингибитором HMG-CoA-редуктазы, который вводят три раза в сутки, два раза в сутки или один раз в сутки. В некоторых вариантах осуществления второго и других аспектов настоящего изобретения ингибитор HMG-CoA-редуктазы вводят раз в сутки, раз в двое суток, раз в трое суток, раз в четверо суток, раз в пять суток или раз в шесть суток. В некоторых вариантах осуществления второго и других аспектов настоящего изобретения ингибитор HMG-CoA-редуктазы вводят раз в неделю, раз в две недели, раз в три недели или раз в четыре недели. В некоторых вариантах осуществления второго и других аспектов настоящего изобретения ингибитор HMG-CoA-редуктазы вводят утром, днем или вечером. В предпочтительных вариантах осуществления ингибитор HMG-CoA-редуктазы вводят один раз в сутки, предпочтительно, перорально, предпочтительно, вечером.

В предпочтительных вариантах осуществления второго и других аспектов настоящего изобретения ингибитор HMG-CoA-редуктазы представляет собой статин. Более предпочтительно, станин выбран из группы, состоящей из церивастатина, аторвастатина, симвастатина, питавастатина, розувастатина, флувастатина, ловастатина и правастатина.

В более предпочтительных вариантах осуществления второго и других аспектов настоящего изобретения статин представляет собой