ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ИНГИБИТОРОВ BRAF ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ КОЖНЫХ РЕАКЦИЙ Российский патент 2020 года по МПК A61K31/52 A61P17/00 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Настоящая заявка претендует на приоритет Предварительной заявки на выдачу патента США №62/306147, которая подана 10 марта 2016 года и полное содержание которой включено в настоящую заявку посредством ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Изобретение относится к композициям, содержащим ингибиторы BRaf, и их использованию для лечения и/или предотвращения кожной реакции, вызванной лечением с применением ингибиторов EGFR и/или PI3K.

ПРЕДПОСЫЛКИ К СОЗДАНИЮ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Рецептор эпидермального фактора роста (EGFR) является рецепторной тирозинкиназой семейства ErbB. Активация EGFR приводит к гомодимеризации/гетеродимеризации, фосфорилированию специфических остатков тирозина и рекрутированию нескольких белков во внутриклеточной части рецепторов. В ответ на это с целью дальнейшего воздействия на клеточные мишени, включая ядерную активацию генов, связанных с пролиферацией клетки, выживаемостью, инвазией и метастазами, могут быть активированы нисходящие сигнальные пути, такие как путь Ras/Raf/MAPK и/или путь PI3K. Таким образом, сигнальные пути рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) участвуют в различных пролиферативных условиях, в которых EGFR активирован аномально. Нацеленные на эти пути различные терапевтические препараты используются для лечения различных связанных заболеваний, таких как рак легких, колоректальный рак, рак головы и шеи и рак поджелудочной железы. К терапевтическим препаратам (ингибиторам) относятся моноклональные антитела (такие как цетуксимаб, панитумумаб), которые направлены на внеклеточный домен EGFR, а также низкомолекулярные ингибиторы тирозинкиназы (такие как гефитиниб, эрлотиниб, лапатиниб), которые являются конкурентными ингибиторами тирозинкиназы рецептора.

Результатом способности ингибиторов EGFR блокировать специфические молекулярные пути, приводящие к неконтролируемому клеточному делению при раке, стало уменьшение частоты возникновения серьезных системных побочных эффектов, связанных с химиотерапией. Вместе с тем сообщалось о побочных эффектах от ингибиторов EGFR со стороны кожных покровов, вероятно, из-за часто встречающейся экспрессии EGFR в коже и придаточных структурах. Кожные побочные реакции на ингибиторы EGFR включают угревую папуло-пустулезную сыпь, аномальный рост волос на голове и/или лице, аномальный рост ресниц, паронихия с пиогенными гранулемами или без таковых, и телеангиэктазия.

BRaf представляет собой сигнальную трансдукцию протеинкиназы, участвующую в регуляции сигнального пути митоген-активированной протеинкиназы (MAPK или ERK). Мутации в BRaf могут вызывать конститутивную активацию сигнального пути через путь MAPK (MAPK), что может привести к неконтролируемой пролиферации клеток. Было обнаружено, что использование ингибиторов BRaf связано с блокированием сигнального пути MAPK, что может быть определено ингибированием или снижением уровня фосфорилированной ERK, который является нижележащим эффектором BRaf. В то же время было также отмечено, что, как ни парадоксально, в клетках BRaf дикого типа ингибиторы BRaf могут вызывать эффект, противоположный активации сигнального пути MAPK (что определено повышенными уровнями фосфорилированной ERK).

Следовательно, существует потребность в создании эффективных композиций, которые могут быть использованы для устранения или предотвращения кожной побочной реакции ингибиторов EGFR или ингибиторов PI3K у субъектов, получавших лечение с использованием таких ингибиторов.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Согласно некоторым вариантам осуществления предлагаются композиции, содержащие терапевтически эффективное количество ингибитора(ов) BRaf, а также их использование для лечения или предотвращения кожных реакций/состояний, индуцированных, вызванных или связанных с ингибиторами EGFR, у субъектов, получавших лечение с применением ингибиторов EGFR. В некоторых вариантах осуществления кожная реакция/состояние индуцируется, вызывается или связано с ингибиторами PI3K. В некоторых вариантах осуществления композиции, содержащие ингибиторы BRaf, могут применяться системно или местно. В некоторых иллюстративных вариантах осуществления композиции, содержащие ингибиторы BRaf, наносятся местно на пораженную область кожи. В некоторых вариантах осуществления к кожным реакциям относятся, в частности, такие состояния как: угревая (папуло-пустулезная) сыпь, аномальный рост волос на голове, аномальный рост волос на лице и/или ресниц, паронихия с пиогенными гранулемами или без таковых, и телеангиэктазия.

Согласно некоторым вариантам осуществления предлагается способ лечения кожной побочной реакции, вызванной лечением ингибитором EGFR нуждающегося в нем субъекта, предусматривающий применение терапевтически эффективного количества ингибитора BRaf или содержащей его фармацевтической композиции.

Согласно некоторым вариантам осуществления предлагается способ предотвращения кожной побочной реакции, вызванной лечением ингибитором EGFR нуждающегося в нем субъекта, предусматривающий применение терапевтически эффективного количества ингибитора BRaf или содержащей его фармацевтической композиции.

Согласно некоторым вариантам осуществления предлагается способ лечения нарушения состояния кожи, вызванного лечением ингибитором PI3K нуждающегося в нем субъекта, предусматривающий применение терапевтически эффективного количества ингибитора BRaf или содержащей его фармацевтической композиции.

Согласно некоторым вариантам осуществления предлагается способ предотвращения нарушения состояния кожи, вызванного лечением ингибитором PI3K нуждающегося в нем субъекта, предусматривающий применение терапевтически эффективного количества ингибитора BRaf или содержащей его фармацевтической композиции.

В некоторых вариантах осуществления предлагается использование для лечения или предотвращения кожной побочной реакции, вызванной лечением ингибитором EGFR, композиции, содержащей эффективное количество ингибитора BRaf. В некоторых вариантах осуществления композиция применяется местно.

В некоторых вариантах осуществления для лечения или предотвращения кожной реакции, вызванной лечением ингибитором PI3K, предлагается использование композиции, содержащей эффективное количество ингибитора BRaf, при этом композиция применяется местно.

В некоторых вариантах осуществления к числу ингибиторов BRaf может относиться любой подходящий препарат или лекарственное средство, способные ингибировать активность и/или экспрессию BRaf. В некоторых вариантах осуществления в качестве ингибитора BRaf можно выбрать BAY43-9006 (сорафениб), LGX818 (энкорафениб), PLX4032 (вемурафениб), GSK2118436 (дабрафениб), ARQ197 (тиватиниб), GSK1120212 (траметиниб), ARQ736, ARQ680, AZ628, СЕР-32496, С-1, С-15, С-19, С-А, GDC-0879, NMS-P186, NMS-P349, NMS-P383, NMS-P396, NMS-P730, PLX3603 (RO5212054), PLX4720 (дифторфенил-сульфонамин), PF-04880594, PLX4734, RAF265, R04987655, SB590885, BMS908662, WYE-130600, TAK632, MLN 2480, XL281 и их комбинации. Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления.

В некоторых вариантах осуществления в качестве ингибитора BRaf можно выбрать С-1, С-15, С-19 и С-А. Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления.

Описание С-1, С-15, С-19 и С-А представлено, например, у Карнахана и др. (Mol. Cancer Ther. (Молекулярная терапия рака) август 2010 г.; 9(8): 2399-410) и Смита и др. (J. Med. Chem. (Журнал медицинской химии), 2009, 52 (20), с. 6189-619), и включает в себя следующие молекулярные структуры:

С-1:

С-15:

С-19:

С-А:

В некоторых вариантах осуществления ингибитор BRaf проявляет парадоксальную активацию нисходящего MAPK (ERK).

В некоторых вариантах осуществления к числу ингибиторов EGFR может относиться любой подходящий препарат или лекарственное средство, способные ингибировать активность и/или экспрессию EGFR. В некоторых вариантах осуществления в качестве ингибитора EGFR можно выбрать: Иресса (гефитиниб), Тарцева (эрлотиниб), Тайкерб (лапатиниб), Эрбитукс (цетуксимаб), Вектибикс (панитумумаб), Капрелса (вандетаниб), Портрацца (нецитумумаб), Тагриссо (осимертиниб). Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления.

В некоторых вариантах осуществления к числу ингибиторов PI3K может относиться любой подходящий препарат или лекарственное средство, способные ингибировать активность и/или экспрессию PI3K. В некоторых вариантах осуществления в качестве ингибитора PI3K можно выбрать: GDC-0980 (апитолисиб), GDC-0941 (пиктилисиб), BAY 80-6946 (копанлисиб), BKM120 (пупарлисиб), NVP-BEZ235 (дактолисиб), IPI 145 (дувелисиб), иделалисиб (GS-1101 или CAL-101), вортманнин и LY294002. Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления.

В некоторых вариантах осуществления композиция представляет собой фармацевтическую композицию. В конкретных вариантах осуществления композиция находится в форме, пригодной для косметического или дерматологического применения.

В некоторых вариантах осуществления композиция представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую один или несколько ингибиторов BRaf и фармацевтически приемлемый носитель.

В некоторых вариантах осуществления композиция представляет собой композицию для местного применения. В некоторых вариантах осуществления композиция для местного применения представлена в выбранной форме мази, крема, геля, гидрогеля, пены, спрея или жидкости.

Согласно некоторым вариантам осуществления предлагается способ лечения или предотвращения нарушения состояния кожи, вызванного лечением нуждающегося в нем субъекта с применением ингибитора рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) и/или ингибитора фосфоинозитид-3-киназы (PI3K), предусматривающий применение к указанному субъекту ингибитора BRaf, осуществляя тем самым лечение нарушения состояния кожи.

В некоторых вариантах осуществления к нарушениям состояния кожи относятся такие состояния как угревая сыпь, папуло-пустулезная сыпь, аномальный рост волос на голове, аномальный рост волос на лице, аномальный рост волосяного покрова, аномальный рост ресниц, паронихия с пиогенными гранулемами или без таковых, и телеангиэктазия. В некоторых вариантах осуществления нарушением состояния кожи является угревая сыпь.

В некоторых вариантах осуществления перед применением ингибитора BRaf лечение субъекта осуществляется с применением ингибитора EGFR и/или ингибитора PI3K.

В некоторых вариантах осуществления можно выбрать местное или системное применение.

В некоторых вариантах осуществления при системном применении можно выбрать энтеральное или парентеральное применение. В некоторых вариантах осуществления системное применение включает в себя пероральное применение.

При дополнительных вариантах осуществления местное применение может предполагать локальное нанесение на кожу субъекта.

Согласно некоторым вариантам осуществления в случаях, когда нарушение состояния кожи связано с лечением с применением ингибитора EGFR и/или ингибитора PI3K, для лечения или предотвращения нарушения состояния кожи нуждающегося в нем субъекта предлагается фармацевтическая композиция, содержащая терапевтически эффективное количество ингибитора BRaf и фармацевтически приемлемого носителя.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция может быть составлена для системного или местного применения.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция может быть составлена для перорального применения. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция может быть представлена в лекарственной форме в виде таблетки, капсулы, жидкости, суспензии и порошка.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция может быть составлена для местного применения. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция может быть представлена в лекарственной форме в виде мази, крема, геля, гидрогеля, пены, спрея, лосьона, жидкости или дермального пластыря.

Согласно некоторым вариантам осуществления предлагается способ лечения или предотвращения угревой сыпи у нуждающегося в таком лечении или предотвращении субъекта, предусматривающий применение для лечения угревой сыпи у указанного субъекта фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество ингибитора BRaf.

Согласно некоторым вариантам осуществления предлагается способ определения или отбора из семейства ингибиторов BRaf подходящего ингибитора(ов) BRaf в качестве кандидата(ов) для клинических испытаний лекарственных средств для лечения и/или предотвращения кожной реакции, вызванной лечением с применением ингибитора EGFR и/или ингибиторов PI3K, включающий:

(i) предоставление семейства известных или новых ингибиторов BRaf;

(ii) определение указанными ингибиторами BRaf сигнального пути МАРК (ERK);

(iii) выбор ингибиторов BRaf с самым высоким парадоксальным эффектом активации МАРK в качестве кандидатов для клинического испытания для лечения или предотвращения указанной кожной реакции.

Другие варианты осуществления, особенности, преимущества и полный объем возможности применения настоящего изобретения станут очевидны из приведенных ниже подробного описания и чертежей. Вместе с тем, следует понимать, что подробное описание с указанием предпочтительных вариантов осуществления изобретения приводится только в качестве иллюстрации, поскольку из такого подробного описания для специалистов в этой области станут очевидными различные изменения и модификации сущности и объема изобретения.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг. 1А-С - Активация ERK в первичных кератиноцитах человека (НЕKа) после обработки ингибиторами BRaf (0,3 мкМ, 1 мкМ или 3 мкМ С-19 или вемурафенибом). Фиг. 1А - Пиктограмма, демонстрирующая результат Вестерн-блот-анализа фосфорилированного ERK (фосфо-ERK) в лизатах клеток НЕК после обработки указанными ингибиторами BRaf, отрицательная контрольная проба (клетки, подвергнутые обработке носителем (ДМСО 0,1%)), положительная контрольная проба (клетки, подвергнутые обработке смесью факторов роста (HKGS)) или клетки, не подвергнутые обработке (необработанные); Фиг. 1В - Пиктограмма, демонстрирующая результат Вестерн-блот-анализа общего ERK в лизатах клеток НЕК; Фиг. 1С - Гистограммы, демонстрирующие соотношение между фосфорилированным ERK и общим ERK, исходя из результатов денситометрического анализа и результатов Вестерн-блот-анализов, отображенных на Фиг. 1А-В. Маркеры размеров (Kd) обозначены цифрами слева от блотов, представленных на Фиг. 1А-В;

Фиг. 2А-С - Активация ERK в первичных кератиноцитах человека (HEKa) после обработки ингибиторами BRaf (0,3 мкМ, 1 мкМ или 3 мкМ С-1 или С-15). Фиг. 2А - Пиктограмма, демонстрирующая результат Вестерн-блот-анализа фосфорилированного ERK (фосфо-ERK) в лизатах клеток НЕК после обработки указанными ингибиторами BRaf, отрицательная контрольная проба (клетки, подвергнутые обработке носителем (ДМСО 0,1%)), положительная контрольная проба (клетки, подвергнутые обработке смесью факторов роста (HKGS)) или клетки, не подвергнутые обработке (необработанные); Фиг. 2В - Пиктограмма, демонстрирующая результат Вестерн-блот-анализа общего ERK в лизатах клеток НЕK; Фиг. 2С - Гистограммы, демонстрирующие соотношение между фосфорилированным ERK и общим ERK, исходя из результатов денситометрического анализа и результатов Вестерн-блот-анализов, отображенных на Фиг. 2А-В. Маркеры размеров (Kd) обозначены цифрами слева от блотов, представленных на Фиг. 2А-В;

Фиг. 3А-С - Активация ERK в первичных кератиноцитах человека (НЕKа) после обработки ингибиторами BRaf (0,3 мкМ, 1 мкМ или 3 мкМ С-А или ZM). Фиг. 3А - Пиктограмма, демонстрирующая результат Вестерн-блот-анализа фосфорилированного ERK (фосфо-ERK) в лизатах клеток НЕК после обработки указанными ингибиторами BRaf, отрицательная контрольная проба (клетки, подвергнутые обработке носителем (ДМСО 0,1%)), положительная контрольная проба (клетки, подвергнутые обработке смесью факторов роста (HKGS)) или клетки, не подвергнутые обработке (необработанные); Фиг. 3В - Пиктограмма, демонстрирующая результат Вестерн-блот-анализа общего ERK в лизатах клеток HEK; Фиг. 3С - Гистограммы, демонстрирующие соотношение между фосфорилированным ERK и общим ERK, исходя из результатов денситометрического анализа и результатов Вестерн-блот-анализов, отображенных на Фиг. 3А-В. Маркеры размеров (Kd) обозначены цифрами слева от блотов, представленных на Фиг. 3А-В;

Фиг. 4А-С - Активация ERK в первичных кератиноцитах человека (HEKa) после обработки различными ингибиторами BRaf (1 мкМ, С-19, С-1, С-15, СА или вемурафенибом). Фиг. 4А - Пиктограмма, демонстрирующая результат Вестерн-блот-анализа фосфорилированного ERK (фосфо-ERK) в лизатах клеток НЕК после обработки указанными ингибиторами BRaf, отрицательная контрольная проба (клетки, подвергнутые обработке носителем (ДМСО 0,1%)), положительная контрольная проба (клетки, подвергнутые обработке смесью факторов роста (HKGS)) или клетки, не подвергнутые обработке (необработанные); Фиг. 4В - Пиктограмма, демонстрирующая результат Вестерн-блот-анализа общего ERK в лизатах клеток НЕK; Фиг. 4С - Гистограммы, демонстрирующие соотношение между фосфорилированным ERK и общим ERK, исходя из результатов денситометрического анализа и результатов Вестерн-блот-анализов, отображенных на Фиг. 4А-В. Маркеры размеров (Kd) обозначены цифрами слева от блотов, представленных на Фиг. 4А-В; и

Фиг. 5A-D - Гистограммы, демонстрирующие влияние ингибиторов BRaf на пролиферацию клеток MIA РаСа2 KRAS. Клетки MIA-Раса2 были высеяны в ростовой среде, после чего в течение 24 часов голодали в бессывороточной среде. Затем к клеткам добавляют в различных концентрациях ингибиторы BRaf и через 72 часа пролиферацию клеток определяют с помощью анализа пролиферации АТФ-lite. Фиг. 5А - Гистограммы, демонстрирующие относительную пролиферацию (% носителя (ДМСО 0,1%)) клеток в присутствии ингибитора BRaf С-1 (в концентрациях 0,02 мкМ, 0,05 мкМ, 0,14 мкМ, 0,41 мкМ, 0,123 мкМ, 0,37 мкМ, 1,1 мкМ, 3,3 мкМ или 10 мкМ). Фиг. 5В - Гистограммы, демонстрирующие относительную пролиферацию (% носителя (ДМСО 0,1%)) клеток в присутствии ингибитора BRaf С-15 (в концентрациях 0,02 мкМ, 0,05 мкМ, 0,14 мкМ, 0,41 мкМ, 0,123 мкМ, 0,37 мкМ, 1,1 мкМ, 3,3 мкМ или 10 мкМ). Фиг. 5С - Гистограммы, демонстрирующие относительную пролиферацию (% носителя (ДМСО 0,1%)) клеток в присутствии ингибитора BRaf С-19 (в концентрациях 0,02 мкМ, 0,05 мкМ, 0,14 мкМ, 0,41 мкМ, 0,123 мкМ, 0,37 мкМ, 1,1 мкМ, 3,3 мкМ или 10 мкМ). Фиг. 5D - Гистограммы, демонстрирующие относительную пролиферацию (% носителя (ДМСО 0,1%)) клеток в присутствии ингибитора BRaf вемурафениб (в концентрациях 0,02 мкМ, 0,05 мкМ, 0,14 мкМ, 0,41 мкМ, 0,123 мкМ, 0,37 мкМ, 1,1 мкМ, 3,3 мкМ или 10 мкМ).

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ

Настоящим изобретением предлагаются композиции, способные лечить или предотвращать кожную реакцию, индуцированную или вызванную лечением ингибитором(ами) EGFR и/или ингибитором(ами) PI3K, и содержащие терапевтически эффективное количество одного или нескольких ингибиторов BRaf. В некоторых вариантах осуществления композиция представляет собой композицию для местного применения, пригодную для нанесения на пораженную область кожи.

В некоторых вариантах осуществления настоящим изобретением предлагаются композиции, способные лечить или предотвращать кожную реакцию, индуцированную или вызванную лечением ингибитором(ами) EGFR, и содержащие терапевтически эффективное количество одного или нескольких ингибиторов BRaf.

В некоторых вариантах осуществления к кожным реакциям, индуцированным или вызванным лечением ингибитором EGFR, относятся, в частности, такие состояния как: угревая (папуло-пустулезная) сыпь, аномальный рост волос на голове, аномальный рост волос на лице, аномальный рост волосяного покрова, аномальный рост ресниц, паронихия с пиогенными гранулемами или без таковых, и телеангиэктазия. В некоторых иллюстративных вариантах осуществления нарушением состояния кожи является угревая сыпь. В некоторых вариантах осуществления нарушением состояния кожи является угревая сыпь.

Согласно некоторым вариантам осуществления предлагаются композиции, содержащие терапевтически эффективное количество ингибитора(ов) BRaf, а также их использование для лечения или предотвращения кожных реакций, индуцированных или вызванных ингибиторами EGFR, у субъектов, получавших лечение с применением ингибиторов EGFR. В некоторых вариантах осуществления композиции, содержащие ингибиторы BRaf, применяются местно. В некоторых вариантах осуществления к кожным реакциям относятся, в частности, но не ограничиваясь этим, такие состояния как: угревая (папуло-пустулезная) сыпь, аномальный рост волос на голове, аномальный рост волос на лице, аномальный рост волосяного покрова, аномальный рост ресниц, паронихия с пиогенными гранулемами или без таковых, и телеангиэктазия.

В некоторых вариантах осуществления настоящим изобретением предлагаются композиции, способные лечить или предотвращать кожную реакцию, индуцированную или вызванную лечением ингибитором(ами) PI3K, и содержащие терапевтически эффективное количество одного или нескольких ингибиторов BRaf. В некоторых вариантах осуществления композиция представляет собой композицию для местного применения, пригодную для нанесения на пораженную область кожи. В некоторых вариантах осуществления к кожным реакциям, индуцированным или вызванным лечением ингибитором PI3K, относятся такие состояния как: угревая (папуло-пустулезная) сыпь, аномальный рост волос на голове, аномальный рост волос на лице, аномальный рост волосяного покрова, аномальный рост ресниц, паронихия с пиогенными гранулемами или без таковых, и телеангиэктазия. В некоторых иллюстративных вариантах осуществления состоянием кожи является угревая сыпь. В некоторых вариантах осуществления нарушением состояния кожи является угревая сыпь.

Согласно некоторым вариантам осуществления предлагаются композиции, содержащие терапевтически эффективное количество ингибитора(ов) BRaf, а также их использование для лечения или предотвращения кожных реакций, индуцированных или вызванных ингибитором(ами) PI3K, у субъектов, получавших лечение с применением ингибитора(ов) PI3K. В некоторых вариантах осуществления композиции, содержащие ингибиторы BRaf, применяются местно. В некоторых вариантах осуществления к кожным реакциям относятся, в частности, но не ограничиваясь этим, такие состояния как: угревая (папуло-пустулезная) сыпь, аномальный рост волос на голове, аномальный рост волос на лице, аномальный рост волосяного покрова, аномальный рост ресниц, паронихия с пиогенными гранулемами или без таковых, и телеангиэктазия.

Определения

С целью упрощения понимания настоящего изобретения ниже представлены определения ряда терминов и выражений. Следует понимать, что указанные термины и выражения предназначены для описания, а не ограничения, вследствие чего терминология или формулировки настоящего описания должны толковаться квалифицированным специалистом в области представленных в настоящем описании предмета и рекомендаций в сочетании со знаниями специалиста обычной квалификации в этой области техники.

В настоящем описании термины «BRAF», «В-Raf», «Braf» и «BRaf» могут использоваться взаимозаменяемо. Термины относятся к сериновой/треониновой протеинкиназе BRaf, участвующей в сигнальных путях клеток. Применительно к BRaf термин «ингибитор» касается композиции или молекулы одного или нескольких препаратов (лекарственных средств), которые могут влиять на активность и/или экспрессию мутированного или дикого типа BRaf. Ингибитор может быть селективным или неселективным. В некоторых вариантах осуществления ингибитор может проявлять парадоксальный эффект на MAPK, при котором ингибитор вызывает повышенную активность MAPK, например, в клетках, где целевым BRaf является Raf дикого типа. Ингибиторы BRaf известны в этой области. Например, описание таких ингибиторов представлено в публикации патентной заявки США № US 20130156768. Например, описание ингибиторов BRaf представлено в публикациях Карнахана и др. (Mol. Cancer Ther. (Молекулярная терапия рака) август 2010 г.; 9(8): 2399-410) и Смита и др. (J. Med. Chem. (Журнал медицинской химии), 2009, 52 (20), с. 6189-619). В некоторых вариантах осуществления термин ингибитор BRaf может охватывать композицию с этим ингибитором, производное, приемлемую соль и/или сольват.

При использовании в настоящем описании термин «EGFR» относится к эпидермальному рецептору фактора роста (EGFR), который представляет собой участвующую в клеточных сигнальных путях рецепторную тирозинкиназу семейства ErbB. Применительно к EGFR термин «ингибитор» касается одного или нескольких препаратов (лекарственных средств), композиции или молекулы, которые могут влиять на активность и/или экспрессию мутированного или дикого типа EGFR. Ингибитор может быть селективным или неселективным.

При использовании в настоящем описании термин «PI3K» относится к белкам фосфоинозитид-3-киназы. Белки PI3K катализируют выработку в клеточных мембранах липидных вторичных мессенджеров из фосфоинозитид-2-фосфата в фосфоинозитидтрифосфат. Путь фосфоинозитид-3-киназа/протеинкиназа-В/мишень рапамицина млекопитающих (PI3K/AKT/mTOR) является ключевым сигнальным путем для важных функций клеток, таких как контроль роста, метаболизм и инициация трансляции. Применительно к PI3K термин «ингибитор» касается одного или нескольких препаратов (лекарственных средств), композиции или молекулы, которые могут влиять на активность и/или экспрессию мутированного или дикого типа PI3K. Ингибитор может быть селективным или неселективным.

При использовании в настоящем описании термины «кожная реакция», «кожная побочная реакция» и «нарушение состояния кожи» могут использоваться взаимозаменяемо и касаются состояния кожи (кожного покрова), которое развилось/возникло/началось/индуцировано/вызвано/появилось в результате лечения ингибитором EGFR и/или ингибитором PI3K. В некоторых вариантах осуществления нарушение состояния кожи является побочным эффектом лечения ингибитором EGFR. В некоторых вариантах осуществления нарушение состояния кожи является побочным эффектом лечения ингибитором PI3K.

При использовании в настоящем описании термин «терапевтически эффективное количество» означает такое количество фармацевтического ингредиента, который существенным образом вызывает желаемый терапевтический или профилактический эффект, способствует ему или приводит к его достижению. В некоторых вариантах осуществления термин означает количество применимой композиции, которое обеспечивает терапевтический эффект при таком состоянии и режиме применения, в частности количество, которое устраняет или до некоторой степени предотвращает один или несколько симптомов подвергаемого лечению нарушения.

При использовании в настоящем описании термин «фармацевтически приемлемый носитель» означает разбавитель или носитель, который используется для улучшения доставки и/или усиления фармакокинетических свойств фармацевтического ингредиента, с которым он составлен, но не имеет собственного терапевтического эффекта и не индуцирует и не вызывает у субъекта какого-либо нежелательного или неблагоприятного эффекта или побочной реакции.

При использовании в настоящем описании термин «фармацевтическая композиция» означает терапевтически эффективное количество составов по настоящему изобретению вместе с соответствующими (приемлемыми) разбавителями, консервантами, разжижителями, эмульгаторами, адъювантами и/или носителями.

При использовании в настоящем описании термин «фармацевтически приемлемый носитель» означает разбавитель или носитель, который используется для улучшения доставки и/или усиления фармакокинетических свойств фармацевтического ингредиента, с которым он составлен, но не имеет собственного терапевтического эффекта и не индуцирует и не вызывает у субъекта какого-либо нежелательного или неблагоприятного эффекта или побочной реакции. Фармацевтически приемлемые носители хорошо известны специалистам в рассматриваемой области, и к ним относятся, среди прочего, фосфатный буфер и/или раствор натрия хлорида. Кроме того, в качестве таких фармацевтически приемлемых носителей могут выступать водные или неводные растворы, суспензии и эмульсии.

При использовании в настоящем описании термины «лечение» или «излечение» нарушения состояния кожи, индуцированного ингибиторами EGFR и/или PI3K, означают исцеление, устранение, излечение или восстановление состояния. При использовании в настоящем описании термины «предотвращение» или «предупреждение» нарушения состояния кожи, индуцированного ингибиторами EGFR и/или PI3K, означают недопущение возникновения соответствующего состояния кожи у субъекта. В некоторых вариантах осуществления термины означают предотвращение или недопущение нарушения состояния кожи. В некоторых вариантах осуществления предотвращение означает устранение поражения, связанного с нарушением состояния кожи.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор BRaf может включать в себя или содержать любой подходящий препарат или лекарственное средство, которые могут ингибировать активность и/или экспрессию BRaf. В некоторых вариантах осуществления в качестве ингибитора BRaf можно выбрать BAY43-9006 (сорафениб), LGX818 (энкорафениб), PLX4032 (вемурафениб), GSK2118436 (дабрафениб), ARQ197 (тиватиниб), GSK1120212 (траметиниб), ARQ736, ARQ680, AZ628, С-1, С-15, С-19, С-А, СЕР-32496, GDC-0879, NMS-P186, NMS-P349, NMS-P383, NMS-P396, NMS-P730, PLX3603 (RO5212054), PLX4720 (дифторфенил-сульфонамин), PF-04880594, PLX4734, RAF265, R04987655, SB590885, BMS908662, WYE-130600, TAK632, MLN 2480, XL281 и их комбинации. Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления.

Описание С-1, С-15, С-19 и С-А представлено, например, у Карнахана и др. (Mol. Cancer Ther. (Молекулярная терапия рака) август 2010 г.; 9(8): 2399-410) и Смита и др. (J. Med. Chem. (Журнал медицинской химии), 2009, 52 (20), с. 6189-619), и включает в себя следующие молекулярные структуры:

С-1:

C-15:

С-19:

С-А:

В некоторых вариантах осуществления ингибитор BRaf проявляет парадоксальный активирующий эффект MAPK.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор EGFR может включать в себя или содержать любой подходящий препарат или лекарственное средство, которые могут ингибировать активность и/или экспрессию EGFR. В некоторых вариантах осуществления в качестве ингибитора EGFR можно выбрать: Иресса (гефитиниб), Тарцева (эрлотиниб), Тайкерб (лапатиниб), Эрбитукс (цетуксимаб), Вектибикс (панитумумаб), Капрелса (вандетаниб), Портрацца (нецитумумаб), Тагриссо (осимертиниб) и их комбинации. Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор PI3K может включать в себя или содержать любой подходящий препарат или лекарственное средство, которые могут ингибировать активность и/или экспрессию PI3K. В некоторых вариантах осуществления в качестве ингибитора PI3K можно выбрать из: GDC-0980 (апитолисиб), GDC-0941 (пиктилисиб), BAY 80-6946 (копанлисиб), ВКМ120 (пупарлисиб), NVP-BEZ235 (дактолисиб), Дувелисиб (IPI-145), иделалисиб (GS-1101 или CAL-101), вортманнин и LY294002. Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления.

При том, что все лекарственные средства BRaf проявляют активность ингибитора BRaf, автор настоящего изобретения обнаружил, что многие из них непригодны для лечения или предотвращения кожной реакции, вызванной лечением с применением ингибиторов EGFR и/или PI3K.

Не желая связывать себя теорией, изобретатель полагает, что подходящими кандидатами на средство для лечения или предотвращения кожной реакции, вызванной лечением с применением ингибитора EGFR, ингибитора PI3K или их смесей, являются только те ингибиторы BRaf, которые проявляют парадоксальный эффект МАРК (активация МАРK).

В некоторых вариантах осуществления предлагаются ингибиторы BRaf, проявляющие парадоксальный эффект МАРK и пригодные для лечения или предотвращения кожной реакции, вызванной лечением с применением ингибитора EGFR, ингибитора PI3K или их смесей.

В настоящем изобретении впервые обнаружено, что благодаря своему парадоксальному эффекту МАРK ингибиторы BRaf пригодны для лечения нарушений состояния кожи, таких как угревая сыпь, которая вызвана или индуцируется лечением с применением ингибитора EGFR.

В некоторых вариантах осуществления предлагаются ингибиторы BRaf, проявляющие парадоксальный эффект МАРК и пригодные для лечения или предотвращения кожной реакции, вызванной лечением с применением ингибитора EGFR. В некоторых вариантах осуществления лечение ингибиторами EGFR представляет собой противоопухолевое лечение, применяемое к субъекту, страдающему от рака.

В настоящем изобретении впервые обнаружено, что благодаря своему парадоксальному эффекту МАРK ингибиторы BRaf пригодны для лечения нарушений состояния кожи, таких как угревая сыпь, которая вызвана или индуцируется лечением с применением ингибитора PI3K.

В некоторых вариантах осуществления предлагаются ингибиторы BRaf, проявляющие парадоксальный эффект МАРK (активацию МАРK) и пригодные для лечения или предотвращения кожной реакции, вызванной лечением с применением ингибитора PI3K. В некоторых вариантах осуществления лечение ингибитором PI3K представляет собой противоопухолевое лечение, применяемое к субъекту, страдающему от рака.

Парадоксальный эффект MAPK может служить полезным инструментом для отбора ингибиторов BRaf, пригодных для выбора из множества существующих или новых ингибиторов BRaf подходящих кандидатов для лечения или предотвращения кожной реакции, вызванной лечением с применением ингибитора EGFR, ингибитора PI3K или их смесей.

В некоторых вариантах осуществления предлагается способ отбора из семейства ингибиторов BRaf подходящих ингибиторов BRaf в качестве кандидатов для клинических испытаний лекарственных средств для лечения и/или предотвращения кожной реакции, вызванной лечением с применением ингибитора EGFR и/или ингибиторов PI3K, включающий:

(i) предоставление семейства известных или новых ингибиторов BRaf

(ii) измерение активации сигнального пути МАРK (ERK) указанными ингибиторами BRaf (см. ниже Пример 1)

(iii) выбор ингибиторов BRaf с самым высоким парадоксальным эффектом активации МАРK в качестве кандидатов для клинического испытания.

В некоторых вариантах осуществления композиция для использования в изобретении содержит терапевтически эффективное количество одного или нескольких ингибиторов BRaf и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит по меньшей мере один ингибитор BRaf и фармацевтически приемлемый носитель.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция может быть представлена в любой из ряда форм, пригодных для системного или местного применения.

В некоторых вариантах осуществления композиция для использования в изобретении содержит терапевтически эффективное количество одного или нескольких ингибиторов BRaf и фармацевтически приемлемый носитель и может применяться системно или местно. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит по меньшей мере один ингибитор BRaf и фармацевтически приемлемый носитель. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция может быть представлена в любой из ряда форм, пригодных для системного применения. В некоторых вариантах осуществления при системном применении можно выбрать энтеральное или парентеральное применение.

В некоторых вариантах осуществления при приготовлении фармацевтической композиции ингибитор BRaf может быть соответствующим образом составлен в виде комплексов включения, наноэмульсий и микроэмульсий.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция может быть составлена в любой из ряда форм, пригодных для дерматологического, местного и/или локального применения, как например, гель, суспензия, мазь, лосьон, жидкость, раствор, эмульсия или микроэмульсия, пленка, связующее вещество, порошок, клей, аэрозоль, спрей, пена, пластырь, повязка и т.п., а также их комбинации. Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления.

В некоторых вариантах осуществления применяемая доза и/или режим дозирования зависят от возраста, здоровья, веса, тяжести нарушения состояния кожи субъекта, применения лечения ингибиторами EGFR и/или PI3K, частоты лечения и характера желаемого эффекта. Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления.

В некоторых вариантах осуществления количество и характер ингибитора BRaf в любой стандартной лекарственной форме является терапевтически эффективным количеством, которое может варьироваться в зависимости от принимающего его субъекта, частоты применения, лечения ингибитором(ами) EGFR и/или PI3K, участка и степени тяжести нарушения состояния кожи и т.п. Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления.

В некоторых вариантах осуществления концентрация, количество или процентное содержание ингибиторов BRaf в составе может широко варьироваться и может зависеть от объема, вязкости, лекарственной формы и т.д. состава, а также от режима применения. Например, в некоторых вариантах осуществления концентрация ингибитора BRaf может варьироваться от 0,5 нМ до 1000 нМ и любых их поддиапазонов. Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления. Например, в некоторых вариантах осуществления количество ингибитора BRaf может варьироваться от 0,5 мкг до 1000 мг и любых их поддиапазонов. Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления. В некоторых вариантах осуществления количество ингибитора BRaf может находиться в диапазоне от 200 до 1000 микрограммов. Например, в некоторых вариантах осуществления процентное содержание ингибитора BRaf может находиться в диапазоне 0,005-5% от состава и любых их поддиапазонов. Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления. В некоторых вариантах осуществления процентное содержание ингибитора BRaf может находиться в диапазоне 0,01-3%. В некоторых вариантах осуществления процентное содержание ингибитора BRaf может находиться в диапазоне 0,1-3%.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция может дополнительно содержать, по меньшей мере, один дополнительный терапевтический препарат, способный влиять на нарушение состояния кожи.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции изобретения могут изготавливаться способом, который сам по себе известен специалистам в рассматриваемой области, например, посредством обычного смешивания, гранулирования, изготовления драже, инкапсулирования геля, растворения, экстракции или процессов лиофилизации.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор BRaf можно принимать с одним или несколькими терапевтическими препаратами в одной или в отдельных композициях. Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления.

В некоторых вариантах осуществления ингибитор BRaf (или содержащую его фармацевтическую композицию) можно применять до или после применения дополнительного терапевтического препарата или одновременно с ним (или с содержащей его фармацевтической композицией). Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция может доставляться в системе с контролируемым высвобождением.

В некоторых вариантах осуществления ингибиторы BRaf можно применять с использованием любых доступных традиционных способов и путей, пригодных для доставки обычных лекарственных средств, включая системные или локализованные маршруты. В целом, к предусмотренным изобретением способам применения относятся, в частности, но не ограничиваясь этим, энтеральный, парентеральный и ингаляционный способ.

В некоторых вариантах осуществления парентеральные способы применения, кроме ингаляционного, включают, среди прочего, местное, трансдермальное, подкожное, внутримышечное, интраорбитальное, интракапсулярное, интраспинальное, интрастернальное и внутривенное введение, то есть любым способом, кроме введения через пищеварительный тракт. Парентеральное введение может осуществляться для системной или местной доставки. Если требуется системная доставка, то применение обычно включает инвазивное или действующее системно местное или мукозальное применение фармацевтических препаратов.

В некоторых вариантах осуществления ингибиторы BRaf также могут доставляться субъекту посредством энтерального применения. К энтеральным способам применения относятся, в частности, но не ограничиваясь этим, пероральное и ректальное (т.е. с помощью свечей) применение.

Согласно некоторым вариантам осуществления нанесение означает применение местно. Согласно некоторым вариантам осуществления композиция составляется для местного нанесения на поверхности тела. Частные примеры составов для местного применения включают в себя формы в виде крема, мази, лосьона, геля, пены, суспензии, водных растворов или растворов на сорастворителях, бальзама и спрея. К другим соответствующим формам местного продукта для композиций по настоящему изобретению относятся, например, эмульсия, мусс, пена, лосьон, раствор и сыворотка. К дополнительным соответствующим формам местного продукта относятся пластыри, повязки и т.п.

В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция может быть в твердой или жидкой форме, такой как таблетки, порошки, капсулы, гранулы, растворы, суспензии, эликсиры, эмульсии, гели, кремы или суппозитории. К фармацевтически приемлемым носителям относятся камеди, крахмалы, сахара, целлюлозные материалы и их смеси. Препарат можно также вводить посредством внутривенной, внутриартериальной или внутримышечной инъекций жидкого препарата, принимать жидкий или твердый препарат перорально или применять наружно. Применение может также осуществляться путем использования ректальных свечей (суппозиториев).

Приготовление фармацевтических композиций, содержащих активный компонент, в этой области хорошо известно. Как правило, такие композиции изготавливают в виде аэрозолей полипептида, доставляемого в носоглотку или путем впрыскивания, либо в виде жидких растворов или суспензий, при этом также могут изготавливаться твердые формы, пригодные для растворения или приготовления суспензий в жидкости перед впрыскиванием. Также препарат может быть изготовлен в виде эмульсии. Активный терапевтический ингредиент часто смешивают с эксципиентами, которые являются фармацевтически приемлемыми и совместимыми с активным ингредиентом. Соответствующими эксципиентами являются, например, вода, раствор натрия хлорида, декстроза, глицерин, этанол и т.п. и их комбинации.

Кроме того, при желании в некоторых вариантах осуществления композиция может содержать незначительные количества вспомогательных веществ, повышающих эффективность активного ингредиента, как например, увлажняющие или эмульгирующие вещества, буферные средства для поддержания рН.

В некоторых вариантах осуществления активный компонент может быть составлен в композиции в виде нейтрализованных фармацевтически приемлемых солевых форм. К фармацевтически приемлемым солям относятся кислотно-аддитивные соли, которые образуются с неорганическими кислотами, такими как, например, соляная или фосфорная кислоты, или такими органическими кислотами, как уксусная, метансульфоновая, бензолсульфоновая, нафталинсульфоновая, щавелевая, винная, миндальная и тому подобное. Соли, образованные из свободных карбоксильных групп, также могут быть получены из неорганических оснований, таких как, например, гидроксиды натрия, калия, аммония, кальция или железа, и таких органических оснований, как изопропиламин, триметиламин, 2-этиламиноэтанол, гистидин, прокаин, и тому подобное.

В другом варианте осуществления активный состав может быть доставлен в везикуле, как например, липосома.

В некоторых вариантах осуществления для местного применения на поверхности тела (например, для нанесения на кожу) могут использоваться, например, кремы, мази, гели, лосьоны, растворы, растворы на сорастворителях, суспензии, пластыри, повязки, жидкости, пены и тому подобное. В целях удобства ингибиторы BRaf или их физиологически переносимые производные, такие как соли, гидраты и тому подобное, изготавливаются и применяются в виде растворов, суспензий или эмульсий в физиологически приемлемом разбавителе с фармацевтическим носителем или без него.

Согласно некоторым вариантам осуществления предлагаются комплекты с однократными дозами соответствующих ингибиторов BRaf, как например, пероральные, инъекционные или местные дозы.

Согласно некоторым вариантам осуществления в таких наборах помимо контейнеров, содержащих одноразовые дозы, имеется информационный листок-вкладыш с описанием порядка использования и сопутствующих преимуществ ингибиторов BRaf при лечении нарушения состояния кожи.

Согласно некоторым вариантам осуществления предлагается набор для использования при лечении или предотвращении нарушения состояния кожи, индуцированного, вызванного или связанного с лечением с применением ингибитора EGFR, включающий в себя композицию, содержащую терапевтически эффективное количество ингибитора BRaf, и инструкции по применению. В некоторых вариантах осуществления композиция представляет собой фармацевтическую композицию. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции предлагаются в соответствующей лекарственной форме. В некоторых вариантах осуществления можно выбрать лекарственную форму для системного или местного применения. В некоторых вариантах осуществления можно выбрать лекарственную форму для местного применения в виде (среди прочего): мази, крема, геля, гидрогеля, спрея, дермального пластыря, лосьона, повязки, жидкости или любых их комбинаций. Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления. В некоторых вариантах осуществления лекарственная форма для системного применения представляет собой пероральную форму, выбранную из следующих, но не ограничиваясь ими: таблеток, капсул, жидкости, суспензии и порошка или любой их комбинации. Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления.

Согласно некоторым вариантам осуществления предлагается набор для использования при лечении или предотвращении нарушения состояния кожи, индуцированного, вызванного или связанного с лечением с применением ингибитора PI3K, включающий в себя композицию, содержащую терапевтически эффективное количество ингибитора BRaf, и инструкции по применению. В некоторых вариантах осуществления композиция представляет собой фармацевтическую композицию. В некоторых вариантах осуществления фармацевтические композиции предлагаются в соответствующей лекарственной форме. В некоторых вариантах осуществления можно выбрать лекарственную форму для системного или местного применения. В некоторых вариантах осуществления можно выбрать лекарственную форму для местного применения в виде (среди прочего): мази, крема, геля, гидрогеля, спрея, дермального пластыря, лосьона, повязки, жидкости или любых их комбинаций. Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления. В некоторых вариантах осуществления лекарственная форма для системного применения представляет собой пероральную форму, выбранную из следующих, но не ограничиваясь ими: таблеток, капсул, жидкости, суспензии и порошка или любой их комбинации. Каждое возможное применение представляет собой отдельный вариант осуществления.

Термины «содержит», «содержащий», «включает», «включающий», «имеющийся» и родственные с ними слова означают «включающий, среди прочего». В некоторых вариантах осуществления термины «содержит» и «содержащий» ограничены значениями «состоит» и «состоящий» соответственно. Термин «состоящий из» означает «включающий только». Термин «состоящий в основном из» означает, что композиция, способ или структура могут включать в себя дополнительные ингредиенты, стадии и/или составные части, но только если дополнительные ингредиенты, стадии и/или составные части существенно не изменяют основные и новые характеристики заявленного состава, способа или структуры.

В настоящем описании, кроме случаев, когда контекстом в прямой форме требуется иное, единственное число включает в себя ссылки во множественном числе. Например, термин «состав» или «по меньшей мере, один состав» может включать в себя множество составов, включая их смеси.

Изложенное выше описание конкретных вариантов осуществления полностью отображает общий характер изобретения, которое другие лица, применяя имеющиеся знания, могут легко модифицировать и/или адаптировать для различного применения таких конкретных вариантов осуществления без излишнего экспериментирования и без отступления от общей концепции, и, следовательно, такие адаптации и модификации следует и необходимо понимать в значении и в серии эквивалентов описанных вариантов осуществления. Следует понимать, что применяемые в настоящем описании формулировки и термины предназначены для описания, а не ограничения. Средства, материалы и этапы для осуществления различных описанных химических структур и функций могут принимать различные альтернативные формы, без отступления от изобретения.

Приведенные ниже примеры представлены с целью более полной иллюстрации некоторых вариантов осуществления изобретения. Вместе с тем, они ни в коей мере не должны истолковываться как ограничивающие широкий объем изобретения.

ПРИМЕРЫ

Пример 1. Активация MAPK (ERK) различными ингибиторами BRaf в нормальных человеческих кератиноцитовых клетках (HEKa)

Чтобы определить влияние различных ингибиторов BRaf на активацию ERK в соответствующих кератиноцитовых клетках, в ответ на лечение ингибиторами BRaf в нормальных человеческих кератиноциовых клетках определяли уровень фосфорилирования ERK.

Процедура эксперимента:

Нормальные человеческие кератиноцитовые клетки НЕКа высевали в 10 см чашки (300 000 клеток/чашка) и инкубировали в течение ночи при 37°С, 5% CO2. На следующее утро клетки голодали в течение 2 часов, после чего подверглись обработке различными ингибиторами (или контрольными средствами) в течение 2 часов. После инкубации клетки лизировали буфером RIPA, а белковые экстракты подвергли Вестерн-блот-анализу для обнаружения фосфо-ERK и общего ERK2 с использованием соответствующих антител. Необработанные и обработанные 0,1% ДМСО клетки использовались для получения отрицательной контрольной пробы. В качестве положительной контрольной пробы использовалась комбинация факторов роста (HKGS) (Gibco кат.номер: S0015).

Вестерн-блот-анализ: 7,5 мкг общего экстракта были загружены на 10% или 12% акриламидные гели. После переноса мембраны блокировали в TBST/5% обезжиренным молоком и затем инкубировали антимышиным фосфо-ERK (1:1000 в TBST 5% BSA, ON при 4°С) и козьим антимышиным HRP (1:10000 в TBST 5% BSA, в течение 1 часа при комнатной температуре). Мембраны были визуализированы с использованием хемилюминесцентного субстрата SuperSignal West Pico. Затем HRP был инактивирован путем инкубации мембран в течение 1 часа с использованием 0,5% азида натрия. После промывки и определения методом ЭХЛ с целью обеспечения отсутствия сигнала мембраны повторно блокировали в течение 15 мин с TBST/5% обезжиренным молоком, а затем инкубировали с общим антикроличьим ERK2 (1:500 в TBST 5% BSA, ON при 4°С), козьим антикроличьим HRP (1:5000 в TBST 5% BSA, 1 час при комнатной температуре) и, наконец, визуализированы с использованием хемилюминесцентного субстрата SuperSignal West Pico. Полученные изображения (пленки) были отсканированы и сигнал был определен количественно с использованием программного обеспечения ImageJ.

Ингибиторы Braf, используемые в экспериментах, включали С-1, С-15, С-19 С-А или вемурафениб в концентрациях 0,3 мкМ; 1 мкМ или 3 мкМ. ZM (ZM336372) - ингибитор с - Raf, который используется в настоящих экспериментах в качестве активатора Braf и использовался в качестве контрольного средства.

Описание С-1, С-15, С-19, С-А и ZM336372 (контроль) представлено, например, у Карнахана и др. (Mol. Cancer Ther. (Молекулярная терапия рака) август 2010 г.; 9(8): 2399-410) и Смита и др. (J. Med. Chem. (Журнал медицинской химии), 2009, 52 (20), с. 6189-619), и включает в себя следующие молекулярные структуры:

С-1:

С-15:

С-19:

С-А:

ZM336372 (ZM)

Результаты представлены на Фиг. 1А-С - 4А-С.

Результаты, представленные на Фиг. 1А-С, демонстрируют активацию ERK (определенную увеличением относительного количества фосфорилированной ERK) в первичных кератиноцитах человека (HEKa) после обработки увеличенными количествами (0,3 мкМ, 1 мкМ или 3 мкМ) ингибиторов BRaf С-19 или вемурафениба.

Результаты, представленные на Фиг. 2А-С, демонстрируют активацию ERK (определенную увеличением относительного количества фосфорилированной ERK) в первичных кератиноцитах человека (HEKa) после обработки увеличенными количествами (0,3 мкМ, 1 мкМ или 3 мкМ) ингибиторов BRaf С-1 или С-15.

Результаты, представленные на Фиг. 3А-С, демонстрируют активацию ERK (определенную увеличением относительного количества фосфорилированной ERK) в первичных кератиноцитах человека (HEKa) после обработки увеличенными количествами (0,3 мкМ, 1 мкМ или 3 мкМ) ингибиторов BRaf С-А или ZM 336372 (ZM).

Результаты, представленные на Фиг. 4А-С, демонстрируют активацию ERK (определенную увеличением относительного количества фосфорилированной ERK) в первичных кератиноцитах человека (HEKa) после обработки 1 мкМ ингибиторов BRaf С-19, С-1, С-15, С А или вемурафениба или ZM (контрольного активатора).

Представленные выше результаты демонстрируют парадоксальный эффект различных ингибиторов BRaf на активацию нисходящего MAPK (ERK) в соответствующих кератиноцитовых клетках. Кроме того, результаты демонстрируют различную эффективность различных ингибиторов, применяемых в различных дозах (концентрации) при активации ERK.

Пример 2. Влияние ингибиторов BRaf на пролиферацию клеток MIA РаСа2 KRAS MIA (клетки MIA Раса, содержащие мутацию Ras).

Для демонстрации продолжительности эффекта ингибиторов BRaf был проведен анализ пролиферации с использованием клеточных линий MIA Раса, содержащих мутированный KRas.

Материалы и методы:

Материалы - клетки MIA РаСа2 KRAS (АТСС, CRM-CRL1420); DMEM (АТСС 30-2002); FBS (Biol. Industries, Кат. 04-007-1А); лошадиная сыворотка (Biol. Industries, Кат. 04-004-1В), антибиотики (P/S, Biol. Industries, Кат. 03-031-2В), трипсин (Biol. Industries, Кат. 03-050-1А), трипановый синий (Sigma Т8154); ДМСО (Sigma D2650), ингибиторы BRaf ((С-1 MedChem Express (HY-14177); С-15; С-19; Вемурафениб (Royal Pharma)), АТФ-lite (Perkin Elmer, Кат. 6016941)

Рост клеток: в 1-й день клетки высеяны в культуральную среду (DMED/FBS/лошадиная сыворотка и антибиотики). Впоследствии клетки пересевают и инкубируют в течение 24 часов в среде для голодания (то есть в обедненной сывороточной среде). После этого испытуемые составы (ингибиторы BRaf) в различных концентрациях добавляют к клеткам, и клетки инкубируют (при 37°С и 5% CO2) в течение дополнительных 72 часов.

Анализ пролиферации проводят с использованием реагента АТФ-lite в соответствии с протоколом производителя. Результаты считываются с помощью считывателя CLARIOstar (BMG) (режим: люминесценция, программа: ATPlite ТОР, время интервала измерения [с]: 0,25-1.

Результаты:

Результаты представлены на Фиг. 5A-D, которые демонстрируют влияние изменения концентрации различных ингибиторов BRaf на пролиферацию клеток MIA-Раса2. На Фиг. 5А показано влияние на клетки ингибитора BRaf С-1 при его применении в различных концентрациях. На Фиг. 5В показано влияние на клетки изменения концентрации ингибитора BRaf С-15. На Фиг. 5С показано влияние на клетки изменения концентрации ингибитора BRaf С-19. На Фиг. 5D показано влияние на клетки изменения концентрации вемурафениба.

Пример 3. Лечение нарушения состояния кожи у субъектов, подвергавшихся лечению с применением EGFR и/или PI3K, с использованием ингибиторов BRaf

Для лечения нарушений состояния кожи, вызванных лечением субъекта с помощью ингибитора EGFR и/или PI3K, субъектам, у которых были диагностированы такие нарушения состояния кожи (то есть, субъектам, которые подвергались или подвергаются лечению с применением ингибитора EGFR и/или PI3K), для лечения указанного состояния вводят ингибиторы BRaf. В качестве контроля предлагается лечение с помощью плацебо (носителя).

Вкратце, протокол лечения содержит следующие этапы:

Субъекты - Пациенты, подвергавшиеся лечению с применением ингибитора EGFR (включая цетуксимаб, панитумумаб, нецитумумаб, гефитиниб, эрлотиниб, лапатиниб, вандетаниб и/или осимертиниб) или ингибитор PI3K (включая бупарлисиб, дактолисиб, пиктилисиб и/или иделалисиб). У пациентов диагностированы нарушения состояния кожи (включая угревую сыпь).

Лечение - субъекты подвергаются лечению в течение 6-20 недель с использованием местного ингибитора BRaf в соответствующей лекарственной форме на одной стороне тела, на лице, шее и грудной клетке. Лекарственная форма представляет собой местную лекарственную форму, содержащую 0,1-3% ингибитора BRaf. Контроль - субъекты подвергаются лечению соответствующей композицией плацебо, которая не содержит ингибитора BRaf в качестве активного вещества. При местном применении лечение с помощью плацебо осуществляется на стороне тела, которая не лечится.

В течение периода лечения тестируются различные параметры, в том числе скорость проявления нарушения состояния кожи, тяжесть высыпания, область высыпания и другие связанные с ним явления. Тестируемые области тела включают лицо, шею и грудную клетку.

В конце периода экспериментального лечения для определения эффективности лечения тестируемые параметры определяются путем сравнения областей тела, подвергавшихся лечению, с областями, обрабатываемыми плацебо.

Пример 4. Лечение нарушения состояния кожи у субъектов, подвергавшихся лечению с применением EGFR и/или PI3K, с использованием ингибиторов BRaf, применяемых системно

Для лечения нарушений состояния кожи, вызванных лечением субъекта с помощью ингибитора EGFR и/или PI3K, субъектам, у которых были диагностированы такие нарушения состояния кожи (то есть, субъектам, которые подвергались или подвергаются лечению с применением ингибитора EGFR и/или PI3K), для лечения указанного состояния системно вводят ингибиторы BRaf. В качестве контроля предлагается лечение субъектов с помощью плацебо (носителя).

Вкратце, протокол лечения включает следующие этапы:

Субъекты - Пациенты, подвергавшиеся лечению с применением ингибитора EGFR (включая цетуксимаб, панитумумаб, нецитумумаб, гефитиниб, эрлотиниб, лапатиниб, вандетаниб и/или осимертиниб) или ингибитор PI3K (включая бупарлисиб, дактолисиб, пиктилисиб и/или иделалисиб). У пациентов диагностированы нарушения состояния кожи (включая угревую сыпь).

Лечение - субъекты подвергаются лечению в течение 6-20 недель с использованием системного ингибитора BRaf в соответствующей лекарственной форме. Лекарственная форма представляет собой лекарственную форму для перорального применения, содержащую 200-1000 микрограмм ингибитора BRaf. Контроль - субъекты подвергаются лечению соответствующей подходящей композицией плацебо, которая не содержит ингибитора BRaf в качестве активного вещества.

В течение периода лечения тестируются различные параметры, в том числе скорость проявления нарушения состояния кожи, тяжесть высыпания, область высыпания и другие связанные с этим явления. Тестируемые области тела включают лицо, шею и грудную клетку.

В конце периода экспериментального лечения для определения эффективности лечения тестируемые параметры определяются путем сравнения субъектов, подвергавшихся лечению, с субъектами, к которым применялись плацебо.

Настоящая группа изобретений относится к медицине, а именно к дерматологии, и касается использования ингибиторов BRaf для лечения кожных реакций. Для этого вводят эффективное количество ингибитора BRaf, проявляющего парадоксальный эффект активации МАРК. За счет этого парадоксального эффекта осуществляется эффективная коррекция нарушений состояния кожи, вызванных лечением ингибитором рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) и/или ингибитором фосфоинозитид-3-киназы (PI3K). 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 4 пр., 5 ил.

1. Применение ингибитора BRaf, проявляющего парадоксальный эффект активации МАРК, для лечения или предотвращения нарушения состояния кожи, вызванного лечением ингибитором рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) и/или ингибитором фосфоинозитид-3-киназы (PI3K) нуждающегося в этом субъекта, причем нарушение состояния кожи выбрано из угревой сыпи, папуло-пустулезной сыпи, патологического роста волос на голове, патологического роста волос на лице, патологического роста волосяного покрова, патологического роста ресниц, паронихии с пиогенными гранулемами или без них и телеангиэктазии, и причем ингибитор BRaf выбран из С-1, С-15, С-19, вемурафениба и их комбинаций.

2. Применение по п. 1, отличающееся тем, что ингибитор BRaf проявляет парадоксальный эффект активации MAPK в клетках с BRaf дикого типа, который определяется повышенными уровнями фосфорилированной ERK вместо ожидаемого ингибирования передачи сигнала МАРК.

3. Применение по п. 1, отличающееся тем, что нарушением состояния кожи является угревая сыпь.

4. Применение по п. 1, отличающееся тем, что ингибитор EGFR выбран из Иресса (гефитиниба), Тарцева (эрлотиниба), Тайкерб (лапатиниба), Эрбитукса (цетуксимаба), Вектибикса (панитумумаба), Капрелса (вандетаниба), Портрацца (нецитумумаба), Тагриссо (осимертиниба) и их комбинаций.

5. Применение по п. 1, отличающееся тем, что ингибитор PI3K выбран из GDC-0980 (апитолисиба), GDC-0941 (пиктилисиба), BAY 80-6946 (копанлисиба), BKM120 (пупарлисиба), NVP-BEZ235 (дактолисиба), IPI 145 (дувелисиба), иделалисиба (GS-1101 или CAL-101), вортманнина и LY294002 и их комбинаций.

6. Применение по п. 1, включающее введение указанного ингибитора BRaf указанному субъекту, причем введение выбрано из местного введения и системного введения.

7. Применение по п. 6, отличающееся тем, что системное введение выбрано из энтерального введения и парентерального введения.

8. Применение по п. 6, отличающееся тем, что системное введение представляет собой пероральное введение.

9. Применение по п. 6, отличающееся тем, что местное введение представляет собой локальное введение на кожу субъекта.

10. Применение фармацевтической композиции, содержащей терапевтически эффективное количество ингибитора BRaf, проявляющего парадоксальный эффект активации МАРК, и фармацевтически приемлемый носитель, для лечения или предотвращения угревой сыпи у нуждающегося в этом субъекта, причем указанный ингибитор BRaf выбран из С-1, С-15, С-19, вемурафениба и их комбинаций.

11. Применение по п. 10, отличающееся тем, что угревая сыпь является побочным эффектом, вызванным лечением субъекта ингибитором EGFR и/или ингибитором PI3K.

12. Применение по п. 10, включающее введение указанного ингибитора BRaf указанному субъекту, причем введение выбрано из местного введения и системного введения.

13. Применение по п. 12, отличающееся тем, что введение является местным введением.

14. Применение по п. 10, отличающееся тем, что композиция составлена в лекарственной форме, выбранной из мази, крема, геля, гидрогеля, спрея, дермального пластыря, пены, лосьона и жидкости.

15. Способ отбора из группы ингибиторов BRaf подходящих ингибиторов BRaf в качестве кандидатов для клинических испытаний лекарственных средств для лечения и/или предотвращения кожной реакции, вызванной лечением ингибитором EGFR и/или ингибитором PI3K, включающий:

(i) предоставление группы известных или новых ингибиторов BRaf;

(ii) измерение активации МАРК (ERK) указанными ингибиторами BRaf; и

(iii) выбор ингибиторов BRaf с самым высоким парадоксальным эффектом активации MAPK в качестве кандидатов для клинического испытания, при этом ингибиторами BRaf с парадоксальным эффектом активации MAPK являются ингибиторы BRaf, которые проявляют парадоксальный эффект активации MAPK в клетках BRaf дикого типа, определяемый повышенными уровнями фосфорилированной ERK вместо ожидаемого ингибирования передачи сигнала MAPK.