Составы на основе антитела к CD19 Российский патент 2021 года по МПК A61K39/395 C07K16/28 A61K47/12 A61K47/26 A61K47/36 A61K9/19 A61P35/00 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к стабильным лиофилизированным фармацевтическим составам на основе антитела к CD19 и предусматривает способы получения и способы применения таких составов.

Уровень техники изобретения

В-клетки представляют собой лимфоциты, которые играют большую роль в гуморальном иммунном ответе. Они продуцируются в костном мозге большинства млекопитающих и составляют 5-15% циркулирующего лимфоидного пула. Основная функция В-клеток состоит в создании антител к различным антигенам, и они являются неотъемлемым элементом адаптивной иммунной системы.

Вследствие их критической роли в регулировании иммунной системы расстройство регуляции В-клеток связано с различными нарушениями, такими как лимфомы и лейкозы. Среди таких нарушений находятся неходжкинская лимфома (NHL), хронический лимфоцитарный лейкоз (CLL) и острый лимфобластный лейкоз (ALL).

Молекула CD19 человека представляет собой структурно отличающийся рецептор клеточной поверхности, экспрессирующийся на поверхности В-клеток человека, в том числе без ограничения пре-В-клетки, В-клетки в ранней стадии развития (т.е. незрелые В-клетки), зрелые В-клетки через терминальную дифференцировку в плазматические клетки и злокачественные В-клетки. CD19 экспрессируется в большинстве случаев пре-В-клеточных острых лимфобластных лейкозов (ALL), неходжкинских лимфом, В-клеточных хронических лимфоцитарных лейкозов (CLL), пролимфоцитарных лейкозов, лейкозов ворсистых клеток, острых недифференцированных лимфоцитарных лейкозов и некоторых острых лимфобластных лейкозов с нулевым фенотипом (Nadler et al, J. Immunol., 131:244-250 (1983), Loken et al, Blood, 70:1316-1324 (1987), Uckun et al, Blood, 71:13-29 (1988), Anderson et al, 1984. Blood, 63:1424-1433 (1984), Scheuermann, Leuk. Lymphoma, 18:385-397 (1995)). Экспрессия CD19 на плазматических клетках дополнительно предполагает, что он может быть экспрессирован на дифференцированных В-клеточных опухолях, таких как множественная миелома, плазмоцитомы, опухоли Вальденстрема (Grossbard et al., Br. J. Haematol, 102:509-15 (1998); Treon et al, Semin. Oncol, 30:248-52 (2003)).

Следовательно, антиген CD19 представляет собой мишень для иммунотерапии при лечении неходжкинской лимфомы (в том числе каждый из подтипов, описанный в данном документе), хронического лимфоцитарного лейкоза и/или острого лимфобластного лейкоза.

MOR208 (ранее называемое XmAb5574) представляет собой полученное с помощью генной инженерии гуманизированное моноклональное Fc-антитело, которое связывает CD19. Увеличение связывания MOR208 Fc с FcγR, вследствие полученных с помощью генной инженерии мутаций XmAb, в значительной степени усиливает in-vitro антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC), антителозависимый

клеточно-опосредованный фагоцитоз (ADCP) антителозависимый клеточно-опосредованный фагоцитоз (апоптоз) в отношении опухоли по сравнению с немодифицированным антителом. Не было показано, что MOR208 опосредует комплементзависимую цитотоксичность.

MOR208 проходило и в настоящее время проходит клинические испытания в отношении CLL, ALL и NHL. В частности, завершены фаза I испытания под названием "Безопасность и переносимость XmAb®5574 при хроническом лимфоцитарном лейкозе" и фаза IIa испытания под названием "Исследование Fc-оптимизированного антитела к CD19 (MOR208) для лечения В-клеточного острого лимфобластного лейкоза (B-ALL)". Завершен набор на фазу Па испытания под названием "Исследование Fc-оптимизированного антитела к CD19 (MOR208) для лечения неходжкинской лимфомы (NHL)". Также продолжаются следующие испытания: фаза II/III испытания под названием "Испытание для оценки эффективности и безопасности MOR208 с бендамустином (BEN) по сравнению с ритуксимабом (RTX), с BEN у взрослых пациентов с рецидивирующей или рефрактерной диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомой (DLBCL) (B-MIND)", фаза II фаза II испытания под названием "Исследование для оценки эффективности и безопасности MOR208 с иделалисибом у пациентов с R/R CLL/SLL, предварительно получавших BTKi", фаза II испытания под названием "Исследование для оценки безопасности и эффективности леналидомида с MOR208 у пациентов с R-R DLBCL" и фаза II испытания под названием "Фаза II, MOR208 в комбинации с леналидомидом для пациентов с рецидивирующим или рефрактерным CLL, SLL или PLL или пожилых пациентов с CLL, SLL или PLL без лечения".

Терапевтические антитела и фрагменты антител представляют собой большие и более сложные молекулы, чем небольшие молекулы традиционных органических и неорганических лекарственных средств, так как антитела содержат множество функциональных групп в дополнение к сложным трехмерным структурам, а следовательно состав таких белков создает особые проблемы. Чтобы белок оставался биологически активным, состав должен сохранять конформационную целостность по меньшей мере коровой последовательности аминокислот белка, в то же время защищая множественные функциональные группы белка от распада. Составы на основе антител могут характеризоваться короткими сроками хранения, и составленные антитела могут потерять биологическую активность в результате химической и физической нестабильности во время хранения. Три наиболее распространенных пути распада белка представляют собой агрегацию, дезамидирование и окисление (Cleland et al., Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 10(4): 307-377 (1993)). В частности, агрегация может потенциально привести к усилению иммунного ответа у пациентов, что приводит к проблемам в отношении безопасности, и ее нужно минимизировать или предотвратить.

Краткое описание изобретения

Целью настоящего изобретения является предоставление составов на основе антител к CD19, и в частности составов на основе антител к CD19, характеризующихся подходящим сроком хранения.

Подходящие составы для терапевтических антител могут представлять собой водную фармацевтическую композицию или лиофилизат, который может быть восстановлен с целью получения раствора для введения пациенту.

В данном документе представлены лиофилизированные фармацевтические составы, содержащие антитело. В одном аспекте состав содержит антитело к CD19, буфер, сахарозу и поверхностно-активное вещество, где состав характеризуется показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

В одном аспекте в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, буфер, полисорбат в концентрации, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит а) трегалозу в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, или

b) маннит в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до приблизительно 50 мМ.

В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 содержит область HCDR1, содержащую последовательность SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2, содержащую последовательность NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3, содержащую последовательность GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1, содержащую последовательность RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2, содержащую последовательность RMSNLNS (SEQ ID NO: 5), и область LCDR3, содержащую последовательность MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 содержит область HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) и область LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью

EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) и вариабельную область легкой цепи с последовательностью DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQ ID NO: 11).

В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

В некоторых вариантах осуществления антитело к CD19 в составе характеризуется концентрацией, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 80 мг/мл. В некоторых вариантах осуществления антитело к CD19 в составе характеризуется концентрацией, составляющей приблизительно 40 мг/мл.

В некоторых вариантах осуществления указанный буфер в составе представляет собой цитратный буфер или фосфатный буфер.

В некоторых вариантах осуществления указанная трегалоза в составе характеризуется концентрацией, составляющей приблизительно 200 мМ. В некоторых вариантах осуществления указанная трегалоза в составе характеризуется концентрацией, составляющей 200 мМ.

В некоторых вариантах осуществления указанный маннит в составе характеризуется концентрацией, составляющей приблизительно 219 мМ, и сахароза в составе характеризуется концентрацией, составляющей приблизительно 29 мМ. В некоторых вариантах осуществления указанный маннит в составе характеризуется концентрацией, составляющей 219 мМ, и сахароза в составе характеризуется концентрацией, составляющей 29 мМ.

В некоторых вариантах осуществления состав характеризуется показателем рН, составляющим приблизительно 6,0. В некоторых вариантах осуществления состав характеризуется показателем рН, составляющим 6,0.

В некоторых вариантах осуществления указанный полисорбат в составе представляет собой полисорбат 20. В некоторых вариантах осуществления указанный полисорбат (например, полисорбат 20) в составе характеризуется концентрацией, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.). В некоторых вариантах осуществления указанный полисорбат (например, полисорбат 20) в составе характеризуется концентрацией, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.). В некоторых вариантах осуществления указанный полисорбат (например, полисорбат 20) в составе характеризуется концентрацией, составляющей 0,02% (вес/об.).

В дополнительном аспекте в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, цитрат в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, трегалозу в концентрации, составляющей приблизительно 200 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0.

В дополнительном аспекте в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей 40 мг/мл, цитрат в концентрации, составляющей 25 мМ, трегалозу в концентрации, составляющей 200 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0.

В дополнительном аспекте в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, цитрат в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, маннит в концентрации, составляющей приблизительно 219 мМ, сахарозу в концентрации, составляющей приблизительно 29 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0.

В дополнительном аспекте в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей 40 мг/мл, цитрат в концентрации, составляющей 25 мМ, маннит в концентрации, составляющей 219 мМ, сахарозу в концентрации, составляющей 29 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0.

В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 в составе не подвергается предварительной лиофилизации, например, является жидким. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 в составе представляет собой моноклональное антитело. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 в составе представляет собой полноразмерное антитело. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 в составе представляет собой антитело IgG. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 в составе представляет собой гуманизированное антитело или антитело человека. В некоторых вариантах осуществления указанное антитело к CD19 в составе представляет собой фрагмент антитела, содержащий антигенсвязывающую область. В некоторых вариантах осуществления фрагмент антитела представляет собой фрагмент Fab или фрагмент F(ab')2.

Описание графических материалов

Фигура 1: представлены аминокислотные последовательности MOR208.

Фигура 2: невидимые невооруженным глазом частицы (SVP) MOR208 подсчитывали через 3 месяца при 40°С. Сравнивали состав 3 и состав 9, и при этом состав маннит/сахароза образовывал больше частиц с течением времени, особенно в диапазоне между 2 мкм и 1000 мкм.

Подробное описание изобретения

Термин "антитело" означает моноклональные антитела, в том числе любой изотип, такой как IgG, IgM, IgA, IgD и IgE. Антитело IgG состоит из двух идентичных тяжелых цепей и двух идентичных легких цепей, которые соединены дисульфидными связями. Каждая тяжелая и легкая цепь содержит константную область и вариабельную область. Каждая вариабельная область содержит три сегмента, называемых "областями, определяющими комплементарность" ("CDR") или "гипервариабельными областями", которые в первую очередь отвечают за связывание с эпитопом антигена. На них ссылаются как CDR1, CDR2 и CDR3, нумеруя последовательно от N-конца. Более консервативные фрагменты вариабельных областей за пределами CDR называются "каркасными областями". Термин "фрагмент антитела" означает фрагмент Fv, scFv, dsFv, Fab, Fab', F(ab')2 или другой фрагмент, который содержит по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой цепи или вариабельную область легкой цепи, при этом каждая содержит CDR и каркасные области.

"VH" относится к вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина антитела или фрагмента антитела. "VL" относится к вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина антитела или фрагмента антитела.

Термин "CD19" относится к белку, известному как CD19, имеющему следующие синонимы: В4, В-лимфоцитарный антиген CD19, В-лимфоцитарный поверхностный антиген В4, CVID3, дифференцировочный антиген CD19, MGC12802 и Т-клеточный поверхностный антиген Leu-12.

Аминокислотная последовательность CD19 человека:

MPPPRLLFFLLFLTPMEVRPEEPLWKVEEGDNAVLQCLKGTSDGPTQQLTWSRESPLKPFLKLSLGLPGLGIHMRPLAIWLFIFNVSQQMGGFYLCQPGPPSEKAWQPGWTVNVEGSGELFRWNVSDLGGLGCGLKNRSSEGPSSPSGKLMSPKLYVWAKDRPEIWEGEPPCLPPRDSLNQSLSQDLTMAPGSTLWLSCGVPPDSVSRGPLSWTHVHPKGPKSLLSLELKDDRPARDMWVMETGLLLPRATAQDAGKYYCHRGNLTMSFHLEITARPVLWHWLLRTGGWKVSAVTLAYLIFCLCSLVGILHLQRALVLRRKRKRMTDPTRRFFKVTPPPGSGPQNQYGNVLSLPTPTSGLGRAQRWAAGLGGTAPSYGNPSSDVQADGALGSRSPPGVGPEEEEGEGYEEPDSEEDSEFYENDSNLGQDQLSQDGSGYENPEDEPLGPEDEDSFSNAESYENEDEELTQPVARTMDFLSPHGSAWDPSREATSLGSQSYEDMRGILYAAPQLRSIRGQPGPNHEEDADSYENMDNPDGPDPAWGGGGRMGTWSTR (SEQ ID NO: 7)

"MOR208" представляет собой антитело к CD19. Аминокислотная последовательность вариабельных доменов представлена на фигуре 1. Аминокислотная последовательность Fc-областей тяжелой и легкой цепи MOR208 представлена на фигуре 1. "MOR208" и "XmAb 5574" используются как синонимы для описания антитела, показанного на фигуре 1. Антитело MOR208 описано в заявке на патент США под порядковым №12/377251, которая включена посредством ссылки в полном своем объеме.

Дополнительные антитела, специфичные KCD19, описаны в патенте США №7109304 (Immunomedics), который включен в данный документ посредством ссылки в полном своем объеме; заявке на патент США под порядковым №11/917750 (Medarex), которая включена в данный документ посредством ссылки в полном своем объеме; заявке на патент США под порядковым №11/852106 (Medimmune), которая включена в данный документ посредством ссылки в полном своем объеме; заявке на патент США под порядковым №11/648505 (Merck Patent GmbH), которая включена в данный документ посредством ссылки в полном своем объеме; патенте США №7968687 (Seattle Genetics), который включен в данный документ посредством ссылки в полном своем объеме; и заявке на патент США под порядковым №12/710442 (Glenmark Pharmaceuticals), которая включена в данный документ посредством ссылки в полном своем объеме.

Кроме того, дополнительные антитела, специфичные в отношении CD19, описаны в WO 2005012493 (US 7109304), WO 2010053716 (US 12/266999) (Immunomedics); WO 2007002223 (US US8097703) (Medarex); WO 2008022152 (12/377251) и WO 2008150494 (Xencor), WO 2008031056 (US 11/852106) (Medimmune); WO 2007076950 (US 11/648505) (Merck Patent GmbH); WO 2009/052431 (US 12/253895) (Seattle Genetics) и WO 2010095031 (12/710442) (Glenmark Pharmaceuticals), WO 2012010562 и WO 2012010561 (International Drug Development), WO 2011147834 (Roche Glycart) и WO 2012/156455 (Sanofi), все из которых включены посредством ссылки в их полном объеме.

Термин "фармацевтический состав" относится к препарату для введения субъектам. Такими субъектами могут быть люди.

"Стабильный" состав представляет собой состав, который может быть введен пациентам после хранения. В аспектах состав практически сохраняет свои физические и химические свойства, а также свою биологическую активность при хранении. Различные аналитические методы для измерения стабильности белка доступны из уровня техники и рассмотрены, например, в Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., Нью-Йорк, Нью-Йорк, Pubs. (1991) и Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993).

Стабильность может быть оценена качественно и/или количественно всевозможными способами, включая оценку образования агрегатов (например, с применением эксклюзионной хроматографии, с помощью измерения мутности и/или с помощью визуального осмотра); с помощью оценки гетерогенности заряда с применением ионообменной хроматографии (IEC), эксклюзионной хроматографии (HP-SEC), анализа посредством SDS-PAGE для сравнения восстановленного и интактного антитела; оценки биологической активности или антигенсвязывающей функции антитела и т.д. Неустойчивость может вовлекать любое одно или несколько из: агрегации, дезамидирования (например, дезамидирование Asn), окисления (например, окисление Met), изомеризации (например, изомеризация Asp), отсечения/гидролиза/фрагментации (например, фрагментация шарнирной области), образования сукцинимида, неспаренного цистеина(-ов), удлинения N-конца, обработки С-конца, отличий гликозилирования и т.д.

Используемый в данном документе термин "биологическая активность" моноклонального антитела относится к способности антитела связываться с антигеном. Он может дополнительно включать связывание антитела с антигеном и может приводить к измеряемому биологическому ответу, который может быть измерен in vitro или in vivo.

Используемый в данном документе термин "буфер" относится к забуференному раствору, который противодействует изменениям рН вследствие действия его объединенных компонентов с кислотными и основными свойствами. Буфер по данному изобретению предпочтительно характеризуется показателем рН, находящимся в диапазоне от приблизительно 4,5 до приблизительно 7,0, предпочтительно от приблизительно 5,6 до приблизительно 7,0. В одном варианте осуществления буфер характеризуется показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, или рН составляет 6,0. Например, каждый из цитратного буфера или фосфатного буфера являются примерами буферов, которые будут контролировать показатель рН в данном диапазоне.

Используемый в данном документе термин "поверхностно-активное вещество" относится к поверхностно-активному средству. Предпочтительно, поверхностно-активное вещество представляет собой неионное поверхностно-активное вещество. Примеры поверхностно-активных веществ в данном документе включают полисорбат (например, полисорбат 20 и полисорбат 80); полоксамер (например, полоксамер 188); Тритон; додецилсульфат натрия (SDS); лаурилсульфат натрия; октилгликозид натрия; лаурил-миристил-, линолеил- или стеарил-сульфобетаин; лаурил-, миристил-, линолеил- или стеарил-саркозин; линолеил-, миристил- или цетил-бетаин; лауроамидопропил-кокамидопропил-, линолеамидопропил-, миристамидопропил-, пальмидопропил- или изостеарамидопропил-бетаин (например, лауроамидопропил); миристамидопропил-, пальмидопропил- или изостеарамидопропил-диметиламин; метилкокоил натрия- или динатрийметилолеилтаурат и серию MONAQUAT™ (Mona Industries, Inc., Патерсон, Нью-Джерси); полиэтилгликоль, полипропилгликоль и сополимеры этилена и пропиленгликоля (например, плюроники, PF68 и т.д.) и т.д. В одном варианте осуществления поверхностно-активное вещество в данном документе представляет собой полисорбат 20.

"Fc-область" означает константную область антитела, которая у людей может принадлежать к подклассу lgG1, 2, 3, 4 или другим подклассам. Последовательности Fc-областей человека доступны на IMGT, Human IGH C-REGIONs, http://www.imgt.org/IMGTrepertoire/Proteins/protein/human/IGH/IGHC/Hu_IGHCallgenes.html (взяты 16 мая 2011 г.).

"Введенный" или "введение" включает без ограничения доставку с помощью инъецируемой формы, такой как, например, внутривенный, внутримышечный, внутрикожный или подкожный путь доставки или путь доставки через слизистые, например, в виде назального спрея или аэрозоля для ингаляции или в виде проглатываемых раствора, капсулы или таблетки.

"Терапевтически эффективное количество" соединения или комбинации относится к количеству, достаточному для по меньшей мере частичного подавления клинических проявлений данного заболевания или нарушения и его осложнений. Количество, эффективное для конкретной терапевтической цели, будет зависеть от тяжести заболевания или травмы, а также от веса и общего состояния субъекта. Понятно, что подходящую дозу можно определить, используя обычные эксперименты, путем построения таблицы значений и тестирования различных точек в таблице; все из этих приемов являются обычными навыками подготовленного врача или клинического ученого.

"CDR" в данном документе определены либо у Chothia et al, или Kabat et al. См. Chothia С, Lesk AM. (1987) Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins. J Mol Biol., 196(4):901-17, которая включена в данный документ посредством ссылки в полном своем объеме. См. публикацию Kabat Е.А, Wu Т.Т., Perry Н.М., Gottesman K.S. and Foeller С. (1991). Sequences of Proteins of Immunological Interest. 5th edit., NIH Publication no. 91-3242, US Dept. of Health and Human Services, Washington, DC, которая включена в данный документ посредством ссылки в полном своем объеме.

"Перекрестно конкурирует" означает способность антитела или других связывающих средств препятствовать связыванию других антител или связывающих средств с CD19 в стандартном анализе конкурентного связывания. Способность или степень, с которой антитело или другое связывающее средство может препятствовать связыванию другого антитела или связывающей молекулы с CD19, а следовательно его способность перекрестно конкурировать в соответствии с настоящим изобретением, могут быть определены с использованием стандартных анализов конкурентного связывания. В одном подходящем анализе используется технология Biacore (например, с применением прибора BIAcore 3000 (Biacore, Уппсала, Швеция)), с помощью которого можно измерить степень взаимодействия, используя технологию на основе поверхностного плазмонного резонанса. В другом анализе для измерения перекрестной конкуренции используется подход на основе ELISA. Процесс с высокой пропускной способностью для "биннинга эпитопов" антител, основанный на их перекрестной конкуренции, описан в Международной патентной заявке № WO 2003/48731.

Термин "эпитоп" включает любую детерминанту белка, способную специфически связываться с антителом или иным образом взаимодействовать с молекулой. Эпитопные детерминанты обычно состоят из химически активных поверхностных группировок молекул, таких как боковые цепи аминокислот, или углеводов, или Сахаров, и могут характеризоваться специфическими свойствами трехмерных структур, а также определенными свойствами, обусловленными наличием электрического заряда. Эпитоп может быть "линейным" или "конформационным". Термин "линейный эпитоп" относится к эпитопу, в котором все точки взаимодействия между белком и молекулой для взаимодействия (такой как антитело) возникают линейно вдоль первичной аминокислотной последовательности белка (непрерывной). Термин "конформационный эпитоп" относится к эпитопу, в котором присутствуют прерывающиеся аминокислоты, которые объединяются вместе в трехмерную конформацию. В конформационном эпитопе точки взаимодействия расположены по аминокислотным остаткам на белке так, что отделены друг от друга.

"Связывает тот же эпитоп, что и" означает, что антитело или другое связывающее средство связывается с CD19 и содержит тот же эпитоп, что и антитело, приведенное в качестве примера. Эпитопы антитела, приведенного в качестве примера, и других антител к CD19 могут быть определены с использованием стандартных методов картирования эпитопов. Методы картирования эпитопов, хорошо известные из уровня техники, включают протоколы картирования эпитопов в Methods in Molecular Biology, Vol. 66 (Glenn E.Morris, Ed., 1996) Humana Press, Totowa, New Jersey. Например, линейные эпитопы могут быть определены с помощью, например, одновременного синтеза большого количества пептидов на твердых подложках, пептидов, соответствующих частям молекулы белка, и взаимодействия пептидов с антителами, в то время как пептиды все еще связаны с подложками. Такие методы известны из уровня техники и описаны, например, в патенте США №4708871; Geysen et al, (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 8:3998-4002; Geysen et al, (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:78-182; Geysen et al, (1986) Mol. Immunol. 23:709-715. Аналогичным образом, конформационные эпитопы легко идентифицируются с помощью определения пространственной конформации аминокислот, как например, обмен водорода/дейтерия, рентгеновская кристаллография и двухмерный ядерный магнитный резонанс. См., например, Epitope Mapping Protocols выше. Антигенные области белков также могут быть идентифицированы с использованием стандартных графиков антигенности и гидрофобности, таких как рассчитанные с использованием, например, программного обеспечения Omiga версии 1.0, доступного от Oxford Molecular Group.В данной компьютерной программе используется способ Hopp/Woods, Норр et al, (1981) Proc. Natl. Acad. Sci USA 78:3824-3828 для определения профилей антигенности, и метод Kyte-Doolittle, Kyte et al, (1982) J. Mol. Biol. 157: 105-132 для построения графиков гидрофобности.

Варианты осуществления

В другом варианте осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, буфер, полисорбат в концентрации, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит а) трегалозу в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, или

b) маннит в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до приблизительно 50 мМ.

В другом варианте осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, цитратный буфер или фосфатный буфер, полисорбат в концентрации, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит а) трегалозу в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, или

b) маннит в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до приблизительно 50 мМ.

В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного буфера в составе составляет от 10 до 75 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного буфера в составе составляет от 20 до 50 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного буфера в составе составляет от 20 до 40 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного буфера в составе составляет от 20 до 30 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного буфера в составе составляет приблизительно 25 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного буфера в составе составляет 25 мМ. В некоторых вариантах осуществления указанный буфер в составе представляет собой цитратный буфер или фосфатный буфер.

В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного цитратного буфера в составе составляет от 10 до 75 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного цитратного буфера в составе составляет от 20 до 50 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного цитратного буфера в составе составляет от 20 до 30 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного цитратного буфера в составе составляет приблизительно 25 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного цитратного буфера в составе составляет 25 мМ.

В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного фосфатного буфера в составе составляет от 10 до 75 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного фосфатного буфера в составе составляет от 20 до 50 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного фосфатного буфера в составе составляет от 20 до 30 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного фосфатного буфера в составе составляет приблизительно 25 мМ. В некоторых вариантах осуществления концентрация указанного фосфатного буфера в составе составляет 25 мМ.

В другом варианте осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, цитратный буфер или фосфатный буфер в концентрации, составляющей от 20 до 50 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит а) трегалозу в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ,

или

b) маннит в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до приблизительно 50 мМ.

В другом варианте осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, цитратный буфер или фосфатный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит а) трегалозу в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ,

или

b) маннит в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до приблизительно 50 мМ.

В другом варианте осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит а) трегалозу в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ,

или

b) маннит в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до приблизительно 50 мМ.

В другом варианте осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, фосфатный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит а) трегалозу в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ,

или

b) маннит в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до приблизительно 50 мМ.

В дополнительном варианте осуществления указанное антитело к CD19 представляет собой полноразмерное антитело. В дополнительном варианте осуществления указанное антитело к CD19 представляет собой антитело IgG1, lgG2, lgG3 или lgG4.

В другом варианте осуществления указанное антитело к CD19 представляет собой гуманизированное антитело или антитело человека. В дополнительном варианте осуществления указанное антитело к CD19 представляет собой фрагмент антитела, содержащий антигенсвязывающую область. В дополнительном варианте осуществления указанный фрагмент антитела представляет собой фрагмент Fab или фрагмент F(ab')2.

В другом варианте осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при 2-8°С в течение по меньшей мере 6 месяцев, по меньшей мере 12 месяцев, по меньшей мере 18 месяцев, по меньшей мере 24 месяцев или по меньшей мере 36 месяцев.

В другом варианте осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при приблизительно 40°С в течение по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16 или больше недель. В некоторых вариантах осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при приблизительно 40°С в течение по меньшей мере приблизительно 1, 2, 3, 4, 5 или больше месяцев. В некоторых вариантах осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при приблизительно 25°С в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или больше месяцев. В некоторых вариантах осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при приблизительно 5°С в течение по меньшей мере 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 или больше месяцев. В некоторых вариантах осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при приблизительно 5+/-3°С в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 или больше месяцев. В некоторых вариантах осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при приблизительно -20°С в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 или больше месяцев. В некоторых вариантах осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при 5°С или -20°С в течение по меньшей 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48 или больше месяцев.

В дополнительном варианте осуществления антитело к CD19 в составе сохраняет по меньшей мере 60%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 80%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 95% своей биологической активности после хранения. В некотором варианте осуществления биологическую активность измеряют по связыванию антитела с CD19. В некотором варианте осуществления биологическую активность измеряют по связыванию антитела с CD19 в анализе связывания FACS CD19. В некотором варианте осуществления биологическую активность измеряют по активности ADCC указанного антитела к CD19. В некотором варианте осуществления стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является стерильным.

В дополнительном варианте осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является подходящим для введения субъекту. В дополнительном варианте осуществления указанный стабильный лиофилизированный фармацевтический состав является подходящим для внутривенного (IV) введения или подкожного введения.

В другом аспекте в данном документе представлено изделие, содержащее контейнер, в котором содержится стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, как раскрыто в данном документе. В одном варианте осуществления указанный контейнер представляет собой стеклянную пробирку или контейнер из металлического сплава. В дополнительном варианте осуществления металлический сплав представляет собой нержавеющую сталь 316L или Хастеллой.

В другом аспекте в данном документе представлен способ лечения заболевания или нарушения у субъекта, включающий введение субъекту эффективного количества состава, раскрытого в данном документе, где заболевание или нарушение представляет собой рак. В другом аспекте в данном документе представлено применение стабильного лиофилизированного фармацевтического состава, как раскрыто в данном документе, для лечения заболевания или нарушения у субъекта, включающее введение субъекту эффективного количества указанного состава, где заболевание или нарушения представляет собой рак. В дополнительном аспекте в данном документе представлено применение стабильного лиофилизированного фармацевтического состава, как раскрыто в данном документе, для изготовления лекарственного препарата для лечения заболевания или нарушения у субъекта, включающее введение субъекту эффективного количества указанного состава, где заболевание или нарушение представляет собой рак. В одном варианте осуществления заболевание или нарушение представляет собой неходжкинекую лимфому (в том числе каждый из подтипов, описанных в данном документе), хронический лимфоцитарный лейкоз и/или острый лимфобластный лейкоз. В вариантах осуществления неходжкинская лимфома выбрана из группы, состоящей из фолликулярной лимфомы, мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лимфомы лимфоидной ткани слизистых оболочек, лимфомы маргинальной зоны, диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы, лимфомы Беркитта и лимфомы из клеток мантийной зоны.

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит а) трегалозу в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ,

или

b) маннит в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до приблизительно 50 мМ,

где указанное антитело к CD19 содержит область HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) и область LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит а) трегалозу в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ,

или

b) маннит в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до приблизительно 50 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью

EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) и вариабельную область легкой цепи с последовательностью DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQ ID NO: 11).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от приблизительно 20 мг/мл до приблизительно 125 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей от приблизительно 0,005% (вес/об.) до приблизительно 0,06% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит а) трегалозу в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ,

или

b) маннит в концентрации, составляющей от приблизительно 180 мМ до приблизительно 240 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей от приблизительно 10 мМ до приблизительно 50 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит

a) трегалозу в концентрации, составляющей приблизительно 200 мМ,

или

b) маннит в концентрации, составляющей приблизительно 219 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей приблизительно 29 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит область HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) и область LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит

a) трегалозу в концентрации, составляющей приблизительно 200 мМ,

или

b) маннит в концентрации, составляющей приблизительно 219 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей приблизительно 29 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) и вариабельную область легкой цепи с последовательностью DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQ ID NO: 11).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит

a) трегалозу в концентрации, составляющей приблизительно 200 мМ,

или

b) маннит в концентрации, составляющей приблизительно 219 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей приблизительно 29 мМ,

где указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKD STYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит

a) трегалозу в концентрации, составляющей приблизительно 200 мМ,

или

b) маннит в концентрации, составляющей приблизительно 219 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей приблизительно 29 мМ,

где указанное антитело к CD19 содержит вариабельную область тяжелой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 85%, 86%, 87%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью к последовательности EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHVWRQAPGKGLEWIGYINPYNDGTKYNEKF QGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTLN/TVSS (SEQ ID NO: 10), и вариабельную область легкой цепи, характеризующуюся по меньшей мере 85%, 86%, 87%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью к последовательности DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQ ID NO: 11).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит

a) трегалозу в концентрации, составляющей приблизительно 200 мМ,

или

b) маннит в концентрации, составляющей приблизительно 219 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей приблизительно 29 мМ,

где указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи, характеризующийся по меньшей мере 85%, 86%, 87%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью к последовательности

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8), и константный домен легкой цепи, характеризующийся по меньшей мере 85%, 86%, 87%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентичностью к последовательности RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит трегалозу в концентрации, составляющей приблизительно 200 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит область HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) и область LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит маннит в концентрации, составляющей приблизительно 219 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей приблизительно 29 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит область HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) и область LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит трегалозу в концентрации, составляющей приблизительно 200 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) и вариабельную область легкой цепи с последовательностью DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLNSGVPD RFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQ ID NO: 11).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит маннит в концентрации, составляющей приблизительно 219 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей приблизительно 29 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) и вариабельную область легкой цепи с последовательностью DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLNSGVPD RFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQ ID NO: 11).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит трегалозу в концентрации, составляющей приблизительно 200 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSL SLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKD STYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит маннит в концентрации, составляющей приблизительно 219 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей приблизительно 29 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKD STYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, фосфатный буфер в концентрации, составляющей от 20 до 40 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит трегалозу в концентрации, составляющей приблизительно 200 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKD STYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, фосфатный буфер в концентрации, составляющей от 20 до 40 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит маннит в концентрации, составляющей приблизительно 219 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей приблизительно 29 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKD STYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, фосфатный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит трегалозу в концентрации, составляющей приблизительно 200 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей приблизительно 40 мг/мл, фосфатный буфер в концентрации, составляющей приблизительно 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей приблизительно 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим приблизительно 6,0, где состав дополнительно содержит маннит в концентрации, составляющей приблизительно 219 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей приблизительно 29 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKD STYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим 6,0, где состав дополнительно содержит трегалозу в концентрации, составляющей 200 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит область HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) и область LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим 6,0, где состав дополнительно содержит маннит в концентрации, составляющей 219 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей 29 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит область HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) и область LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим 6,0, где состав дополнительно содержит трегалозу в концентрации, составляющей 200 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) и вариабельную область легкой цепи с последовательностью DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQ ID NO: 11).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим 6,0, где состав дополнительно содержит маннит в концентрации, составляющей 219 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей 29 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) и вариабельную область легкой цепи с последовательностью DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLNSGVPD RFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQ ID NO: 11).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим 6,0, где состав дополнительно содержит трегалозу в концентрации, составляющей 200 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей 40 мг/мл, фосфатный буфер в концентрации, составляющей 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим 6,0, где состав дополнительно содержит трегалозу в концентрации, составляющей 200 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации, составляющей 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим 6,0, где состав дополнительно содержит маннит в концентрации, составляющей 219 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей 29 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRWSVLTWHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

В некоторых вариантах осуществления в данном документе представлен стабильный лиофилизированный фармацевтический состав, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей 40 мг/мл, фосфатный буфер в концентрации, составляющей 25 мМ, полисорбат в концентрации, составляющей 0,02% (вес/об.), и с показателем рН, составляющим 6,0, где состав дополнительно содержит маннит в концентрации, составляющей 219 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей 29 мМ, где указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSWTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASWCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

Демонстрационные примеры

Демонстрационный пример 1. Определение биофизических характеристик MOR208

Биофизические свойства MOR208 анализировали с целью определения характеристик, скрининга компонентов перед составлением и применения высоких концентраций.

Для оценки структурной стабильности MOR208 проводили эксперименты с термическим плавлением с применением DSF (дифференциальная сканирующая флуориметрия) и CD-спектроскопии. Образцы MOR208 разбавляли до концентрации, составляющей 1,1 мг/мл. Добавляли гидрофобный краситель sypro-orange для выявления разворачивания белка и получали соответствующие кривые плавления. Образцы демонстрировали относительно низкую температуру плавления, составляющую 47°С, которую определяли посредством ступенчатого увеличения интенсивности флуоресценции.

MOR208 представляет собой гуманизированное моноклональное антитело, связывающееся с CD19 на В-клетках и их клетках-предшественниках. Fc-область получали с помощью генной инженерии (S239D/I332E) для усиления эффекторных функций, поддерживающих истощение В-клеток. В соответствии с текущей рабочей гипотезой данный формат Fc-области приводит к гибкости СН2-домена, что приводит к усилению активности ADCC, но может сопровождаться снижением температуры плавления Fc-домена.

Более того, скрининговое исследование в отношении рН проводили с применением DSC, RALS и ITF для идентификации наиболее стабильного диапазона рН для белка. В исследовании был охвачен диапазон рН от 3,5 до 8,0. Измерения выполняли в смешанной буферной системе, охватывающей требуемый диапазон рН. Наиболее стабильный диапазон рН для MOR208 на основе полученных результатов идентифицировали между показателями рН, составляющими 6,0 и 7,0.

Следовательно, идентифицировали две буферные системы, которые обеспечивают достаточную буферную способность в диапазоне рН между рН 6,0 и 7,0 и являются фармацевтически приемлемыми для парентерального применения:

- цитрат (рН 5,5; 6,0);

- гистидин (рН 6,0; 6,5; 7,0).

Дополнительные измерения DSC, RALS и ITF проводили для тестирования термической стабильности MOR208 в 25 мМ цитратном буфере и 25 мМ гистидиновом буфере. Только цитрат при рН 5,5 демонстрировал значительно более низкие температуры перехода, тогда как все остальные тестируемые образцы демонстрировали сопоставимую термическую стабильность. Данное заключение также подтверждали с помощью тестирования RALS и ITF.

Кроме того, тестировали влияние ионной силы, Сахаров, полиолов и полисорбата 20 на термическую стабильность MOR208. Выбирали 25 мМ цитратный буфер при рН 6,0 в качестве основной буферной системы для получения образцов, содержащих NaCl, или сахар, или полисорбат 20. Измерения продемонстрировали, что добавление NaCl увеличивало термическую стабильность MOR208 в зависимости от температуры первого перехода, составляющей 52°С. Данное наблюдение подтверждали с помощью измерений ITF. Результаты тестирования RALS не выявляли какого-либо влияния NaCl на термическую стабильность MOR208.

Влияние Сахаров (трегалозы и сахарозы) и маннита на термическую стабильность MOR208 тестировали с использованием концентраций 200 мМ для трегалозы, 210 мМ для сахарозы и смеси 180 мМ маннит/45 мМ сахароза. Такие концентрации выбирали для сдвига состава в изоосмотический диапазон. Результаты тестирования DSC, RALS и ITF указывали, что трегалоза и сахароза имели сопоставимое влияние на термическую стабильность MOR208, при этом смесь маннит/сахароза незначительно снижала температуру первого перехода на прим. 0,8°С.

Влияние полисорбата 20 на термическую стабильность MOR208 тестировали с использованием концентраций, составляющих 0,02%, 0,04%, 0,08% и 0,12%. Результаты измерений DSC и RALS не продемонстрировали значительного влияния полисорбата 20 в тестируемых концентрациях на термическую стабильность MOR208.

Влияние MgCl₂ на термическую стабильность MOR208 тестировали с использованием концентраций, составляющих 1, 5 и 10 мМ. Результаты измерений DSC и RALS не демонстрировали значительного влияния MgCl₂ в тестируемых концентрациях на термическую стабильность MOR208.

Демонстрационный пример 2. Исследование стабильности жидких составов для MOR208

На основе определения биофизических характеристик MOR208 следующие 6 разных жидких составов тестировали в исследовании стабильности.

Для исследования стабильности выбирали следующие составы:

- состав F1: 10 мМ цитрат, рН 6,0+0,01% PS 20+150 мМ NaCl;

- состав F2: 25 мМ цитрат, рН 6,0+0,02% PS 20+125 мМ NaCl;

- состав F3: 25 мМ цитрат, рН 6,0+0,02% PS 20+200 мМ трегалоза;

- состав F4: 25 мМ цитрат, рН 6,0+0,02% PS 20+210 мМ сахароза;

- состав F5: 25 мМ гистидин, рН 6,0+0,02% PS 20+140 мМ NaCl;

- состав F6: 25 мМ гистидин, рН 6,0+0,02% PS 20+230 мМ трегалоза;

- состав F7: 25 мМ сукцинат, рН 6,0+0,02% PS 20+215 мМ трегалоза;

- состав F8: 25 мМ гистидин, рН 6,5+0,02% PS 20+240 мМ трегалоза.

Концентрация белка составляла 20 мг/мл для всех составов. Заливали 10 мл из каждого состава в пробирку объемом 10 мл, закрывали резиновой пробкой с покрытием и хранили в перевернутом состоянии при контролируемой температуре, составляющей 25°С, в течение 12 недель. Аналитическое тестирование проводили перед хранением (t0), через 4, 8 и 12 недель.

Составы 1, 3, 5 и 7 образовывали менее заметные невооруженным глазом частицы в течение 12 недель по сравнению с другими составами. Частицы измеряли с помощью MFI. Состав 5 демонстрировал наиболее низкое число SVP в диапазоне >10 мкм и >25 мкм.

Уровень агрегатов и мономеров в составах тестировали с помощью HP SEC. Составы 2, 3, 7 и 8 демонстрировали более высокий показатель увеличения количества агрегатов в течение 12 недель по сравнению с другими составами.

Осмоляльность состава 4 увеличивалась после 4 недель хранения, что скорее всего указывает на распад сахарозы, содержащейся в составе.

Сдвиг рН также указывает на распад сахарозы в составе 4.

Дополнительное тестирование HIC показало, что составы 6, 7 и 8 демонстрировали более сильное снижение % площади в пике 3 по сравнению с другими составами. В особенности, состав 8 демонстрировал сильное снижение от 66,1% (исходное значение) до 52,2% через 12 недель.

С помощью определения физико-химических характеристик MOR208 идентифицировали наиболее стабильный диапазон рН между показателями рН, составляющими 6,0 и 7,0.

Цитратный, гистидиновый и сукцинатный буферы выбирали в качестве фармацевтически приемлемых буферных систем в указанном диапазоне рН. Все буферные системы применяли при концентрации 25 мМ, обеспечивающей достаточную буферную способность для концентрации белка, составляющей 20 мг/мл. Добавление NaCl в минимальной концентрации, составляющей 125 мМ, оказывало незначительный положительный эффект в отношении термической стабильности MOR208 (на основе данных DSC). Добавление сахарозы, трегалозы, маннита/сахарозы и полисорбата 20 не изменяло термическую стабильность MOR208.

На основе аналитических результатов составы F1, F3 и F5 идентифицировали как наиболее стабильные составы.

- Состав F1: 10 мМ цитрат, рН 6,0+0,01% PS 20+150 мМ NaCl;

- состав F3: 25 мМ цитрат, рН 6,0+0,02% PS 20+200 мМ трегалоза;

- состав F5: 25 мМ гистидин, рН 6,0+0,02% PS 20+140 мМ NaCl.

Образцы таких 3 составов дополнительно выдерживали при 25°С в течение не более 8 месяцев и снова тестировали. Составы 1 и 5 обеспечивали наиболее высокую стабильность, но все жидкие составы образовывали невидимые невооруженным глазом частицы через 8 месяцев, что превышает требования фармакопеи (частицы NMT 6000 ≥10 мкм в каждой пробирке и частицы NMT 600 ≥25 мкм в каждой пробирке). Следовательно, требуемый срок хранения, составляющий по меньшей мере 24 месяца при 2-8°С, не был достигнут одним из протестированных жидких составов с концентрацией белка, составляющей 20 мг/мл.

Данный факт привел к решению начать разработку лиофилизированной лекарственной формы.

Демонстрационный пример 3. Исследование возможности применения лиофилизации

Состав 3 и новый состав 9 включали в исследование возможности применения лиофилизации с концентрацией MOR208, составляющей 40 мг/мл.

Состав 3: 25 мМ цитрат;

200 мМ дигидрат трегалозы;

0,02% полисорбат 20;

рН 6,0.

Состав 9: 25 мМ цитрат;

219 мМ маннит;

29 мМ сахароза;

0,02% полисорбат 20;

рН 6,0.

Внешний вид лиофилизированного лекарственного средства

Внешний вид лиоф. таблетки для обоих составов был приемлемым. Состав, содержащий трегалозу, был полностью аморфным и демонстрировал более высокую степень усадки, что является только внешним наблюдением и, как правило, не связано с качеством или стабильностью продукта. Состав, содержащий маннит, был частично кристаллическим и обеспечивал получение таблетки с высокой степенью фармацевтической элегантности без усадки.

Качество лиофилизированного MOR208 тестировали и сравнивали с качеством продукта до лиофилизации. В следующей таблице 1 подытожены результаты составов 3 и 9.

Проводили дополнительное исследование лиофилизации, которое было направлено только на тестирование невидимых невооруженным глазом частиц (SVP) до и после лиофилизации. Результаты исследования перечислены в таблице 2 и ясно указывают на то, что процесс лиофилизации не привел к увеличению количества SVP.

На основе результатов тестирования не наблюдали отрицательного влияния процесса лиофилизации на качество продукта. Оба состава обеспечивали приемлемый внешний вид таблетки. Время восстановления составляет менее 60 секунд для состава, содержащего 40 мг белка на мл. Восстановление проводили посредством добавления 5 мл воды для инъекции. Уровень содержания влаги в составе маннит/сахароза являлся более высоким по сравнению с составом, содержащим трегалозу, что обусловлено более высокой плотностью лиофилизированной таблетки. Осмоляльность и содержание белка (УФ-сканирование) снижались после лиофилизации, поскольку продукт разбавляли в результате процедуры восстановления. Уровень агрегации не увеличивался во время лиофилизации, и после восстановления подсчитывали небольшое число невидимых невооруженным глазом частиц. В результате оба состава являлись подходящими для лиофилизации MOR208, и исследование возможности применения лиофилизации успешно завершили. После этого исследования проводили исследование стабильности с ускоренной деградацией препарата с обоими составами при 40°С в течение периода, составляющего 3 месяца.

Демонстрационный пример 4. Исследование стабильности с ускоренной деградацией препарата

После того как исследование возможности применения лиофилизации было успешно завершено, проводили первое исследование стабильности при 40°С (относительная влажность 75%) в течение 3 месяцев для сравнения обоих составов. Тестирование стабильности включало тестирование в отношении цвета и видимых частиц. Кроме того, продукты тестировали с помощью HP-SEC (агрегация), HIC, IEC, анализа связывания (CD16 Biacore), MFI (невидимые невооруженным глазом частицы) и SDS-Page.

Тестирование HP-SEC продемонстрировало более высокий показатель увеличения количества агрегатов для F9 после 3 месяцев хранения (таблица 3). Уровень агрегатов для F3 увеличивался от 0,8% до 1,7%, тогда как уровень агрегатов F9 увеличивался от 0,8% до 2,6%.

Невидимые невооруженным глазом частицы тестировали в отношении t0 и через 4 недели, 8 недель и 12 недель с помощью способа MFI. При сравнении обоих составов было очевидно, что состав маннит/сахароза образовывал больше частиц с течением времени, особенно в диапазоне между 2 мкм и 1000 мкм (фигура 2).

На основе аналитических результатов состав 3, содержащий трегалозу, демонстрировал более высокую стабильность при 40°С по сравнению с составом 9. Отличия в стабильности наблюдали в SVP (MFI) и уровне агрегатов (HPSEC).

Вывод

Исследование возможности применения лиофилизации продемонстрировало, что MOR208 может быть лиофилизировано без влияния на качество продукта с использованием обоих составов и концентрации белка, составляющей 40 мг/мл. Условиями стабильности являлись 40°С (относительная влажность 75%) в течение периода, составляющего 3 месяца. Во время этого исследования стабильности состав, содержащий трегалозу, идентифицировали как состав с более высокой стабильностью по сравнению с составом маннит/сахароза.

Демонстрационный пример 5. Определение срока хранения

Для долгосрочного исследования стабильности MOR208 в составе 3 помещали на хранение в режиме реального времени при 5°С±3°С и тестировали при ускоренном хранении при 25°С±2°С.

Проведенные исследования стабильности предусматривали методику, пригодную для оценки стабильности, и современные способы отслеживания лекарственных средств в отношении концентрации, активности, чистоты, фармацевтических и микробиологических параметров во время хранения.

Применяли следующие параметрические способы, которые считаются основными тестами, пригодными для оценки стабильности:

- Определение чистоты с помощью HP-SEC

Характеризующие стабильность свойства HP-SEC были продемонстрированы с помощью анализа соответствующего образца в стрессовых условиях. Более того, способность обнаружения агрегатов верифицировали с помощью аналитического ультрацентрифугирования.

- Определение гомогенности и чистоты с помощью IEC и CGE в восстанавливающих/невосстанавливающих условиях

Для обнаружения фрагментов применяли CGE в невосстанавливающих условиях; химические модификации, которые приводят к образованию соединений, отличающихся по заряду вследствие дезамидирования, определяли с помощью IEC.

- Анализы активности

Анализы специфической активности продукта, анализ связывания CD19 (FACS), анализ связывания CD16 (SPR) и анализ активности ADCC продемонстрировали чувствительность к соответствующему образцу в стрессовых условиях.

Результаты хранения в режиме реального времени при 5°С±3°С и ускоренного хранения при 25°С±3°С сведены в таблице 4 и таблице 5, соответственно.

Обсуждение результатов

Содержание и активность

Функциональную активность MOR208 отслеживали с помощью трех разных анализов активности: анализ связывания CD19 (FACS), анализ связывания CD16 (SPR) и анализ активности, основанный на ADCC. Комбинация таких трех анализов охватывает связывание антигена, соответствующее эффекторное связывание, а также основной механизм действия (ADCC).

Оба анализа связывания не демонстрируют четких или значимых тенденций с течением времени. Анализ активности, основанный на ADCC, демонстрирует некоторое увеличение с течением времени (как в реальном времени, так и в условиях ускоренной деградации), но поскольку анализ также демонстрирует более высокую вариабельность, то тенденция еще не считается значительной. Таким образом, все анализы содержания и активности находятся в рамках описания и не указывают на какие-либо критические изменения в качестве продукта в течение 36 месяцев.

Чистота

В течение 36 месяцев хранения при предполагаемой температуре хранения, составляющей 5±3°С, ни один из анализов чистоты (т.е. HP-SEC, IEC, CGE в восстанавливающих и невосстанавливающих условиях) не указывает на критические изменения в чистоте продукта. В условиях ускоренной деградации при 25°С±2°С HP-SEC демонстрирует только одно изменение значений в последней контрольной точке (уменьшение значений мономера/увеличение значений фрагмента для одного инкремента), но это не отображается данными за длительный период времени, а следовательно считается незначительным. IEC не демонстрирует каких-либо тенденций в условиях долгосрочных испытаний, но имеет четкую тенденцию к уменьшению группы главного пика/увеличению группы основного пика в условиях ускоренной деградации.

Таким образом, все анализы чистоты находятся в рамках описания и не указывают на критические изменения в качестве продукта в течение 36 месяцев.

Фармацевтические тесты

В течение 36 месяцев хранения при предполагаемой температуре хранения 5±3°С ни один из фармацевтических тестов не указывает на критическое изменение с течением времени. Таким образом, все фармацевтические тесты находятся в рамках описания и не указывают на критические изменения в качестве продукта в течение 36 месяцев.

--->

SEQUENCE LISTING

<110> MorphoSys AG

<120> Anti-CD19 Antibody Formulations

<130> MS247

<160> 11

<170> BiSSAP 1.0

<210> 1

<211> 5

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> synthetic construct

<400> 1

Ser Tyr Val Met His

1 5

<210> 2

<211> 6

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> synthetic construct

<400> 2

Asn Pro Tyr Asn Asp Gly

1 5

<210> 3

<211> 12

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> synthetic construct

<400> 3

Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Thr Arg Val Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 4

<211> 16

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> synthetic construct

<400> 4

Arg Ser Ser Lys Ser Leu Gln Asn Val Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr

1 5 10 15

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> synthetic construct

<400> 5

Arg Met Ser Asn Leu Asn Ser

1 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> synthetic construct

<400> 6

Met Gln His Leu Glu Tyr Pro Ile Thr

1 5

<210> 7

<211> 556

<212> PRT

<213> Homo sapiens

<220>

<223> CD19

<400> 7

Met Pro Pro Pro Arg Leu Leu Phe Phe Leu Leu Phe Leu Thr Pro Met

1 5 10 15

Glu Val Arg Pro Glu Glu Pro Leu Val Val Lys Val Glu Glu Gly Asp

20 25 30

Asn Ala Val Leu Gln Cys Leu Lys Gly Thr Ser Asp Gly Pro Thr Gln

35 40 45

Gln Leu Thr Trp Ser Arg Glu Ser Pro Leu Lys Pro Phe Leu Lys Leu

50 55 60

Ser Leu Gly Leu Pro Gly Leu Gly Ile His Met Arg Pro Leu Ala Ile

65 70 75 80

Trp Leu Phe Ile Phe Asn Val Ser Gln Gln Met Gly Gly Phe Tyr Leu

85 90 95

Cys Gln Pro Gly Pro Pro Ser Glu Lys Ala Trp Gln Pro Gly Trp Thr

100 105 110

Val Asn Val Glu Gly Ser Gly Glu Leu Phe Arg Trp Asn Val Ser Asp

115 120 125

Leu Gly Gly Leu Gly Cys Gly Leu Lys Asn Arg Ser Ser Glu Gly Pro

130 135 140

Ser Ser Pro Ser Gly Lys Leu Met Ser Pro Lys Leu Tyr Val Trp Ala

145 150 155 160

Lys Asp Arg Pro Glu Ile Trp Glu Gly Glu Pro Pro Cys Leu Pro Pro

165 170 175

Arg Asp Ser Leu Asn Gln Ser Leu Ser Gln Asp Leu Thr Met Ala Pro

180 185 190

Gly Ser Thr Leu Trp Leu Ser Cys Gly Val Pro Pro Asp Ser Val Ser

195 200 205

Arg Gly Pro Leu Ser Trp Thr His Val His Pro Lys Gly Pro Lys Ser

210 215 220

Leu Leu Ser Leu Glu Leu Lys Asp Asp Arg Pro Ala Arg Asp Met Trp

225 230 235 240

Val Met Glu Thr Gly Leu Leu Leu Pro Arg Ala Thr Ala Gln Asp Ala

245 250 255

Gly Lys Tyr Tyr Cys His Arg Gly Asn Leu Thr Met Ser Phe His Leu

260 265 270

Glu Ile Thr Ala Arg Pro Val Leu Trp His Trp Leu Leu Arg Thr Gly

275 280 285

Gly Trp Lys Val Ser Ala Val Thr Leu Ala Tyr Leu Ile Phe Cys Leu

290 295 300

Cys Ser Leu Val Gly Ile Leu His Leu Gln Arg Ala Leu Val Leu Arg

305 310 315 320

Arg Lys Arg Lys Arg Met Thr Asp Pro Thr Arg Arg Phe Phe Lys Val

325 330 335

Thr Pro Pro Pro Gly Ser Gly Pro Gln Asn Gln Tyr Gly Asn Val Leu

340 345 350

Ser Leu Pro Thr Pro Thr Ser Gly Leu Gly Arg Ala Gln Arg Trp Ala

355 360 365

Ala Gly Leu Gly Gly Thr Ala Pro Ser Tyr Gly Asn Pro Ser Ser Asp

370 375 380

Val Gln Ala Asp Gly Ala Leu Gly Ser Arg Ser Pro Pro Gly Val Gly

385 390 395 400

Pro Glu Glu Glu Glu Gly Glu Gly Tyr Glu Glu Pro Asp Ser Glu Glu

405 410 415

Asp Ser Glu Phe Tyr Glu Asn Asp Ser Asn Leu Gly Gln Asp Gln Leu

420 425 430

Ser Gln Asp Gly Ser Gly Tyr Glu Asn Pro Glu Asp Glu Pro Leu Gly

435 440 445

Pro Glu Asp Glu Asp Ser Phe Ser Asn Ala Glu Ser Tyr Glu Asn Glu

450 455 460

Asp Glu Glu Leu Thr Gln Pro Val Ala Arg Thr Met Asp Phe Leu Ser

465 470 475 480

Pro His Gly Ser Ala Trp Asp Pro Ser Arg Glu Ala Thr Ser Leu Gly

485 490 495

Ser Gln Ser Tyr Glu Asp Met Arg Gly Ile Leu Tyr Ala Ala Pro Gln

500 505 510

Leu Arg Ser Ile Arg Gly Gln Pro Gly Pro Asn His Glu Glu Asp Ala

515 520 525

Asp Ser Tyr Glu Asn Met Asp Asn Pro Asp Gly Pro Asp Pro Ala Trp

530 535 540

Gly Gly Gly Gly Arg Met Gly Thr Trp Ser Thr Arg

545 550 555

<210> 8

<211> 330

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> synthetic construct

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Asp Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Glu Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 9

<211> 107

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> synthetic construct

<400> 13

Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu

1 5 10 15

Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe

20 25 30

Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln

35 40 45

Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser

50 55 60

Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu

65 70 75 80

Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser

85 90 95

Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys

100 105

<210> 10

<211> 121

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> synthetic construct

<400> 10

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Val Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Asn Asp Gly Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Gln Gly Arg Val Thr Ile Ser Ser Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Gly Thr Tyr Tyr Tyr Gly Thr Arg Val Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 11

<211> 112

<212> PRT

<213> Artificial sequence

<220>

<223> synthetic construct

<400> 11

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Gln Asn Val

20 25 30

Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Arg Met Ser Asn Leu Asn Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile

65 70 75 80

Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Met Gln His

85 90 95

Leu Glu Tyr Pro Ile Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<---

Группа изобретений относится к биотехнологии, а именное к фармацевтическому составу на основе антитела к CD19 и его применению для лечения лимфомы или лейкоза, которые экспрессируют CD19. Стабильный лиофилизированный фармацевтический состав содержит антитело к CD19 в концентрации от 20 мг/мл до 125 мг/мл, буфер, полисорбат в концентрации от 0,005% (вес/об.) до 0,06% (вес/об.) и с показателем pH, составляющим 6,0, а также a) трегалозу в концентрации от 180 мМ до 240 мМ или b) маннит в концентрации от 180 мМ до 240 мМ и сахарозу в концентрации от 10 мМ до 50 мМ. Указанное антитело к CD19 содержит область HCDR1 с SEQ ID NO: 1, область HCDR2 с SEQ ID NO: 2, область HCDR3 с SEQ ID NO: 3, область LCDR1 с SEQ ID NO: 4, область LCDR2 с SEQ ID NO: 5 и область LCDR3 с SEQ ID NO: 6, константный домен тяжелой цепи SEQ ID NO: 8 и константный домен легкой цепи с SEQ ID NO: 9. Лиофилизированный фармацевтический состав является стабильным при 2-8°С в течение по меньшей мере 36 месяцев. 5 н. и 38 з.п. ф-лы, 5 табл., 3 пр., 2 ил.

1. Стабильный лиофилизированный фармацевтический состав для лечения лимфомы или лейкоза, которые экспрессируют CD19, при этом состав содержит антитело к CD19 в концентрации, составляющей от 20 мг/мл до 125 мг/мл, буфер, полисорбат в концентрации, составляющей от 0,005% (вес/об.) до 0,06% (вес/об.), и с показателем pH, составляющим 6,0, где состав дополнительно содержит

a) трегалозу в концентрации, составляющей от 180 мМ до 240 мМ, или

b) маннит в концентрации, составляющей от 180 мМ до 240 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей от 10 мМ до 50 мМ,

где указанное антитело к CD19 содержит область HCDR1 с последовательностью SYVMH (SEQ ID NO: 1), область HCDR2 с последовательностью NPYNDG (SEQ ID NO: 2), область HCDR3 с последовательностью GTYYYGTRVFDY (SEQ ID NO: 3), область LCDR1 с последовательностью RSSKSLQNVNGNTYLY (SEQ ID NO: 4), область LCDR2 с последовательностью RMSNLNS (SEQ ID NO: 5) и область LCDR3 с последовательностью MQHLEYPIT (SEQ ID NO: 6),

и где указанное антитело к CD19 содержит константный домен тяжелой цепи с последовательностью

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPDVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPEEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK (SEQ ID NO: 8) и константный домен легкой цепи с последовательностью

RTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKD STYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC (SEQ ID NO: 9).

2. Состав по п. 1, где концентрация указанного антитела к CD19 в составе составляет 40 мг/мл.

3. Состав по п. 1 или 2, где указанный буфер представляет собой цитратный буфер или фосфатный буфер.

4. Состав по п. 3, где концентрация указанного цитратного буфера или фосфатного буфера составляет от 20 до 50 мМ.

5. Состав по п. 4, где концентрация указанного цитратного буфера или фосфатного буфера составляет 25 мМ.

6. Состав по любому из пп. 1-5, где концентрация указанной трегалозы в составе составляет 200 мМ.

7. Состав по любому из пп. 1-5, где концентрация указанного маннита в составе составляет 219 мМ, и концентрация указанной сахарозы в составе составляет 29 мМ.

8. Состав по любому из пп. 1-7, где указанный полисорбат в составе представляет собой полисорбат 20.

9. Состав по любому из пп. 1-8, где концентрация указанного полисорбата в составе составляет 0,02%.

10. Состав по любому из пп. 1-9, где указанное антитело к CD19 содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) и вариабельную область легкой цепи с последовательностью DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQ ID NO: 11).

11. Состав по любому из пп. 1-10, где состав является стабильным при 2-8°C в течение по меньшей мере 6 месяцев, по меньшей мере 12 месяцев, по меньшей мере 18 месяцев, по меньшей мере 24 месяцев или по меньшей мере 36 месяцев.

12. Состав по любому из пп. 1-5 или 10, где количество указанного антитела к CD19 составляет 40 мг/мл, концентрация указанного цитратного буфера составляет 25 мМ, концентрация указанной трегалозы составляет 200 мМ, концентрация полисорбата составляет 0,02% (вес/об.), и указанный состав характеризуется показателем pH, составляющим 6,0.

13. Состав по любому из пп. 1-5 или 10, где количество указанного антитела к CD19 составляет 40 мг/мл, концентрация указанного цитратного буфера составляет 25 мМ, концентрация указанного маннита составляет 219 мМ, и концентрация указанной сахарозы составляет 29 мМ, концентрация полисорбата составляет 0,02% (вес/об.), и указанный состав характеризуется показателем pH, составляющим 6,0.

14. Состав по любому из пп. 1-13 для лечения неходжкинской лимфомы.

15. Состав по п. 14, где неходжкинская лимфома представляет собой фолликулярную лимфому.

16. Состав по п. 14, где неходжкинская лимфома представляет собой мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому.

17. Состав по п. 14, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому лимфоидной ткани слизистых оболочек.

18. Состав по п. 14, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому маргинальной зоны.

19. Состав по п. 14, где неходжкинская лимфома представляет собой диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому.

20. Состав по п. 14, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому Беркитта.

21. Состав по п. 14, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому из клеток мантийной зоны.

22. Состав по любому из пп. 1-13 для лечения хронического лимфоцитарного лейкоза.

23. Состав по любому из пп. 1-13 для лечения острого лимфобластного лейкоза.

24. Изделие для лечения лимфомы или лейкоза, которые экспрессируют CD19, содержащее контейнер, в котором содержится стабильный лиофилизированный фармацевтический состав по любому из пп. 1-23.

25. Раствор для лечения лимфомы или лейкоза, которые экспрессируют CD19, который восстановлен из стабильного лиофилизированного фармацевтического состава по п. 1, где этот раствор содержит указанное антитело к CD19 в концентрации, составляющей от 20 мг/мл до 125 мг/мл, буфер, полисорбат в концентрации, составляющей от 0,005% (вес/об.) до 0,06% (вес/об.), и характеризуется показателем pH, составляющим 6,0, где состав дополнительно содержит

a) трегалозу в концентрации, составляющей от 180 мМ до 240 мМ, или

b) маннит в концентрации, составляющей от 180 мМ до 240 мМ, и сахарозу в концентрации, составляющей от 10 мМ до 50 мМ.

26. Раствор по п. 25, который содержит указанное антитело к CD19 в количестве 40 мг/мл, цитратный буфер в концентрации 25 мМ, трегалозу в концентрации 200 мМ, полисорбат концентрации 0,02% (вес/об.) и характеризуется показателем pH, составляющим 6,0.

27. Раствор по п. 25 или 26, где указанное антитело к CD19 содержит вариабельную область тяжелой цепи с последовательностью EVQLVESGGGLVKPGGSLKLSCAASGYTFTSYVMHWVRQAPGKGLEWIGYINPYNDGTKYNEKFQGRVTISSDKSISTAYMELSSLRSEDTAMYYCARGTYYYGTRVFDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 10) и вариабельную область легкой цепи с последовательностью DIVMTQSPATLSLSPGERATLSCRSSKSLQNVNGNTYLYWFQQKPGQSPQLLIYRMSNLNSGVPDRFSGSGSGTEFTLTISSLEPEDFAVYYCMQHLEYPITFGAGTKLEIK (SEQ ID NO: 11).

28. Раствор по любому из пп. 25-27 для лечения неходжкинской лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза или острого лимфобластного лейкоза.

29. Применение раствора по любому из пп. 25-27 в способе лечения лимфомы или лейкоза, которые экспрессируют CD19, у субъекта, где лечение включает введение субъекту эффективного количества этого раствора.

30. Применение по п. 29 в способе лечения неходжкинской лимфомы, хронического лимфоцитарного лейкоза или острого лимфобластного лейкоза у субъекта.

31. Применение по п. 30, где неходжкинская лимфома выбрана из группы, состоящей из фолликулярной лимфомы, мелкоклеточной лимфоцитарной лимфомы, лимфомы лимфоидной ткани слизистых оболочек, лимфомы маргинальной зоны, диффузной крупноклеточной В-клеточной лимфомы, лимфомы Беркитта, лимфомы из клеток мантийной зоны.

32. Применение по п. 30, где неходжкинская лимфома представляет собой диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому.

33. Способ лечения лимфомы или лейкоза, которые экспрессируют CD19, у нуждающегося в этом индивидуума, включающий введение терапевтически эффективного количества раствора по любому из пп. 25-27.

34. Способ по п. 33, где у индивидуума имеется неходжкинская лимфома.

35. Способ по п. 34, где неходжкинская лимфома представляет собой фолликулярную лимфому.

36. Способ по п. 34, где неходжкинская лимфома представляет собой мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому.

37. Способ по п. 34, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому лимфоидной ткани слизистых оболочек.

38. Способ по п. 34, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому маргинальной зоны.

39. Способ по п. 34, где неходжкинская лимфома представляет собой диффузную крупноклеточную В-клеточную лимфому.

40. Способ по п. 34, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому Беркитта.

41. Способ по п. 34, где неходжкинская лимфома представляет собой лимфому из клеток мантийной зоны.

42. Способ по п. 33, где индивидуум имеет хронический лимфоцитарный лейкоз.

43. Способ по п. 33, где индивидуум имеет острый лимфобластный лейкоз.