ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

По настоящей заявке испрашивается приоритет на основании предварительной патентной заявки США с серийным № 62/088286, поданной 5 декабря 2014 г., полное содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки и по отношению к которой испрашивается приоритет.

ВВЕДЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к способам и композициям для лечения рака. Изобретение относится к химерным антигенным рецепторам (CAR), которые специфически нацелены на рецептор, связанный с G-белками (например, представитель D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками (GPRC5D)), иммунореактивным клеткам, содержащим такие CAR, и способам применения таких клеток для лечения рака (например, множественной миеломы).

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Клеточная иммунотерапия является терапией, обладающей потенциалом для излечения рака. T-клетки и другие иммунные клетки могут быть модифицированы для нацеливания на опухолевые антигены путем введения генетического материала, кодирующего искусственные или синтетические рецепторы для антигена, называемые химерными антигенными рецепторами (CAR), которые специфичны для выбранных антигенов. Недавно таргетированная T-клеточная терапия с использованием CAR зарекомендовала себя как клинически успешный подход к лечению злокачественных заболеваний крови.

Множественная миелома (MM) является вторым по распространенности злокачественным заболеванием крови⁹. Примерно 25% пациентов имеют цитогенетику с высокой степенью риска, что предвещает средний период выживания менее 2 лет^10,11. Несмотря на достигнутый в последнее время прогресс, независимо от цитогенетики, заболевание по-прежнему считается неизлечимым, за исключением иммунотерапевтического эффекта «трансплантат против миеломы» (GvM) аллогенного трансплантата. Однако использование аллогенных трансплантатов ограничено несоответствием требованиям и высокой частотой связанной с трансплантацией заболеваемости и смертности¹². Аналогично эффекту GvM, потенциально излечивающий эффект T-клеток может быть достигнут с минимальной токсичностью за счет аутологичной адоптивной T-клеточной терапии.

Миелома может быть идеальным заболеванием для тестирования адоптивной T-клеточной терапии. Во-первых, как указано выше, аллогенные трансплантаты продемонстрировали, что T-клетки могут быть средством радикального лечения, даже при минимальной сопутствующей химиотерапии, или без нее, например, после немиелоаблативной трансплантации или пост-трансплантационных инфузий донорских лимфоцитов. Во-вторых, кондиционирующая химиотерапия, возможно, через механизм истощения регуляторных T-клеток (Treg), повышает эффективность адоптивной T-клеточной терапии^5,13, в силу этого период сразу после аутологичной трансплантации может быть оптимальным моментом для введения T-клеток, и миелома является одним из нескольких заболеваний, при которых аутологичная трансплантация стволовых клеток является стандартом лечения. В-третьих, иммуномодулирующее лекарственное средство леналидомид может повышать эффективность терапии на основе CAR, как было показано на мышах¹⁴, и леналидомид обычно используют для лечения MM. В-четвертых, адоптивная T-клеточная терапия лучше всего работает в случае заболеваний, поражающих преимущественно костный мозг, таких как ALL^7,8, по сравнению с солидными опухолями или экстрамедуллярным CLL⁵, и аналогично ALL, миелома является заболеванием костного мозга.

Хотя есть множество причин ожидать, что адоптивная T-клеточная терапия может быть эффективной при MM, применение адоптивной T-клеточной терапии при миеломе также связано с особыми проблемами. В отличие от других B-клеточных злокачественных новообразований, экспрессия CD19 имеет место лишь у 2% пациентов с миеломой¹⁵. Более того, в отличие от CD19, все обычные внеклеточные иммунофенотипические маркеры при миеломе (CD138, CD38 и CD56) также экспрессируются на других важных типах клеток, и авторы изобретения прогнозируют, что CAR для любой из этих мишеней приводили бы к неприемлемой токсичности «внеопухолевых мишеней»⁷, которая может быть фатальной даже в случае мишеней, антитела к которым хорошо переносятся, как было в ситуации с нацеленными на HER2 CAR¹⁶. Для решения этих проблем авторы изобретения идентифицировали внеклеточные мишени с прогнозируемой высокой экспрессией в MM и ограниченной экспрессией в важных нормальных тканях, которые могут быть оптимальными мишенями для адоптивной T-клеточной терапии MM. Соответственно, существует потребность в новых терапевтических стратегиях для конструирования CAR, нацеленных на антигены, которые на высоком уровне экспрессируются в клетках MM и ограниченно экспрессируются в нормальных тканях, для лечения множественной миеломы; стратегиях, которые могут приводить к эффективной эрадикации опухолей с минимальной токсичностью и иммуногенностью.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение, в целом, относится к химерным антигенным рецепторам (CAR), специфически нацеленным на рецептор, связанный с G-белками, иммунореактивным клеткам, содержащим такие CAR, и применению таких CAR и иммунореактивных клеток для лечения множественной миеломы.

Настоящее изобретение относится к CAR. В одном неограничивающем примере CAR содержит внеклеточный антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный домен, при этом внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически связывается с рецептором, связанным с G-белками. В конкретных вариантах осуществления рецептор, связанный с G-белками, является представителем D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками (GPRC5D). В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически связывается с GPRC5D с аффинностью связывания (K_D), составляющей от примерно 1×10^-9M до примерно 3×10^-6 M. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv). В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv мыши. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv человека. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой Fab, который, необязательно, является сшитым. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный связывающий домен представляет собой F(ab)₂. В конкретных вариантах осуществления любая из вышеуказанных молекул может находиться в слитом белке с гетерологичной последовательностью, образуя внеклеточный антигенсвязывающий домен.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 и 386.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375 и 387.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 и 386; и (b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375 и 387.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374, и 386, а также их консервативных модификаций.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375, и 387, а также их консервативных модификаций.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 и 386, а также их консервативных модификаций, и (b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375, и 387, а также их консервативных модификаций.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 и 386. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375 и 387. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 2; (b) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 5, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 6; (c) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 9, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 10; (d) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 13, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 14; (e) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 17, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 18; (f) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 21, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 22; (g) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 25, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 26; (h) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 29, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 30; (i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 33, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 34; (j) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 37, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 38; (k) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 41, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 42; (l) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 45, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 46; (m) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 49, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 50; (n) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54; (o) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58; (p) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62; (q) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66; (r) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70; (s) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 73, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 74; (t) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 77, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 78; (u) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 81, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 82; (v) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 85, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 86; (w) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 89, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 90; (x) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 93, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 94, (y) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 302, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 303; (z) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 314, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 315; (aa) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 326, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 327; (ab) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 338, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 339; (ac) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 350, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 351; (ad) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 362, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 363; (ae) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 374, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 375; или (af) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 386, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 387. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53; и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57; и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61; и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62. В другом варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65; и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66. В другом варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69; и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит обе из указанных тяжелой и легкой цепей, необязательно, с последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. Например, в конкретных неограничивающих вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, и (ii) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и (ii) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53, и (ii) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и (ii) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, и (ii) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (i) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, и (ii) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (a) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 126, 132, 138, 144, 150, 156, 162, 168, 174, 180, 186, 192, 198, 204, 210, 216, 222, 228, 234, 240, 246, 252, 258, 264, 306, 318, 330, 342, 354, 366, 378 и 390; и (b) CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 129, 135, 141, 147, 153, 159, 165, 171, 177, 183, 189, 195, 201, 207, 213, 219, 225, 231, 237, 243, 249, 255, 261, 267, 309, 321, 333, 345, 357, 369, 381 и 393.

В конкретных вариантах осуществления CDR2 вариабельной области тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 125, 131, 137, 143, 149, 155, 161, 167, 173, 179, 185, 191, 197, 203, 209, 215, 221, 227, 233, 239, 245, 251, 257, 263, 305, 317, 329, 341, 353, 365, 377 и 389, а также их консервативных модификаций; и (b) CDR2 вариабельной области легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 128, 134, 140, 146, 152, 158, 164, 170, 176, 182, 188, 194, 200, 206, 212, 218, 224, 230, 236, 242, 248, 254, 260, 266, 308, 320, 332, 344, 356, 368, 380 и 392, а также их консервативных модификаций.

В конкретных вариантах осуществления CDR1 вариабельной области тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 124, 130, 136, 142, 148, 154, 160, 166, 172, 178, 184, 190, 196, 202, 208, 214, 220, 226, 232, 238, 244, 250, 256, 262, 304, 316, 328, 340, 352, 364, 376 и 388, а также их консервативных модификаций; и (b) CDR1 вариабельной области легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 127, 133, 139, 145, 151, 157, 163, 169, 175, 181, 187, 193, 199, 205, 211, 217, 223, 229, 235, 241, 247, 253, 259, 265, 307, 319, 331, 343, 355, 367, 379 и 391, а также их консервативных модификаций.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: (a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 124, 130, 136, 142, 148, 154, 160, 166, 172, 178, 184, 190, 196, 202, 208, 214, 220, 226, 232, 238, 244, 250, 256, 262, 304, 316, 328, 340, 352, 364, 376 и 388; (b) CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 125, 131, 137, 143, 149, 155, 161, 167, 173, 179, 185, 191, 197, 203, 209, 215, 221, 227, 233, 239, 245, 251, 257, 263, 305, 317, 329, 341, 353, 365, 377 и 389; (c) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 126, 132, 138, 144, 150, 156, 162, 168, 174, 180, 186, 192, 198, 204, 210, 216, 222, 228, 234, 240, 246, 252, 258, 264, 306, 318, 330, 342, 354, 366, 378 и 390; (d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 127, 133, 139, 145, 151, 157, 163, 169, 175, 181, 187, 193, 199, 205, 211, 217, 223, 229, 235, 241, 247, 253, 259, 265, 307, 319, 331, 343, 355, 367, 379 и 391; (e) CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 128, 134, 140, 146, 152, 158, 164, 170, 176, 182, 188, 194, 200, 206, 212, 218, 224, 230, 236, 242, 248, 254, 260, 266, 308, 320, 332, 344, 356, 368, 380 и 392; и (f) CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 129, 135, 141, 147, 153, 159, 165, 171, 177, 183, 189, 195, 201, 207, 213, 219, 225, 231, 237, 243, 249, 255, 261, 267, 309, 321, 333, 345, 357, 369, 381 и 393.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит (a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 124, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 125, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 126, или ее консервативную модификацию; (b) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 130, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 131 или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 132, или ее консервативную модификацию; (c) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 136, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 137, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 138, или ее консервативную модификацию; (d) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 142, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 143, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 144, или ее консервативную модификацию; (e) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 148, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 149, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 150, или ее консервативную модификацию; (f) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 154, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 155, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 156, или ее консервативную модификацию; (g) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 160, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 161, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 162, или ее консервативную модификацию; (h) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 166, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 167, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 168, или ее консервативную модификацию; (i) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 172, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 173, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 174, или ее консервативную модификацию; (j) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 178, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 179, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 180, или ее консервативную модификацию; (k) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 184, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 185, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 186, или ее консервативную модификацию; (l) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 190, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 191, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 192, или ее консервативную модификацию; (m) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 196, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 197, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 198, или ее консервативную модификацию; (n) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 202, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 203, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 204, или ее консервативную модификацию; (o) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210, или ее консервативную модификацию; (p) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216, или ее консервативную модификацию; (q) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222, или ее консервативную модификацию; (r) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228, или ее консервативную модификацию; (s) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 232, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 233, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 234, или ее консервативную модификацию; (t) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 238, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 239, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 240, или ее консервативную модификацию; (u) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 244, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 245, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 246, или ее консервативную модификацию; (v) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 250, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 251, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 252, или ее консервативную модификацию; (w) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 256, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 257, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 258, или ее консервативную модификацию; (x) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 262, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 263, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 264, или ее консервативную модификацию; (y) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 304, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 305, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 306, или ее консервативную модификацию; (z) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 316, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 317, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 318, или ее консервативную модификацию; (aa) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 328, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 329, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 330, или ее консервативную модификацию; (ab) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 340, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 341, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 342, или ее консервативную модификацию; (ac) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 352, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 353, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 354, или ее консервативную модификацию; (ad) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 364, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 365, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 366, или ее консервативную модификацию; (ae) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 376, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 377, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 378, или ее консервативную модификацию; или (af) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 388, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 389, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 390, или ее консервативную модификацию. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 202; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 203; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 204. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210. В другом неограниченном варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216. В другом неограничивающем варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222. В другом варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227; и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: (a) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 127, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 129, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 130, или ее консервативную модификацию; (b) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 133, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 134, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую SEQ ID NO: 135 или ее консервативную модификацию; (c) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 139, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 140, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 141, или ее консервативную модификацию; (d) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 145, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую SEQ ID NO: 146 или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 147, или ее консервативную модификацию; (e) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 151, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 152, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 153, или ее консервативную модификацию; (f) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 157, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 158, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 159, или ее консервативную модификацию; (g) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 163, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 164, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 165, или ее консервативную модификацию; (h) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 169, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 170, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую SEQ ID NO: 171 или ее консервативную модификацию; (i) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 175, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 176, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 177, или ее консервативную модификацию; (j) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 181, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 182, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 183, или ее консервативную модификацию; (k) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 187, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 188, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 189, или ее консервативную модификацию; (l) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 193, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 194, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 195, или ее консервативную модификацию; (m) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 199, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 200, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 201, или ее консервативную модификацию; (n) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 205, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 206, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 207, или ее консервативную модификацию; (o) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213, или ее консервативную модификацию; (p) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219, или ее консервативную модификацию; (q) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225, или ее консервативную модификацию; (r) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230 или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231, или ее консервативную модификацию; (s) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 235, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 236, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 237, или ее консервативную модификацию; (t) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 241, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 242, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 243, или ее консервативную модификацию; (u) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 247, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 248, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 249, или ее консервативную модификацию; (v) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 253, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 254, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 255, или ее консервативную модификацию; (w) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 259, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 260, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 261, или ее консервативную модификацию; (x) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 265, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 266, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 267, или ее консервативную модификацию; (y) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 307, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 308, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 309, или ее консервативную модификацию; (z) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 319, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 320, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 321, или ее консервативную модификацию; (aa) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 331, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 332, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 333, или ее консервативную модификацию; (ab) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 343, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 344, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 345, или ее консервативную модификацию; (ac) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 355, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 356, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 357, или ее консервативную модификацию; (ad) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 367, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 368, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 369, или ее консервативную модификацию; (ae) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 379, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 380, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 381, или ее консервативную модификацию; или (af) CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 391, или ее консервативную модификацию; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 392, или ее консервативную модификацию; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 393, или ее консервативную модификацию. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 205; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 206; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 207. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219. В другом неограничивающем варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225. В другом неограничивающем варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: (a) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 124; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 125; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 126; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 127; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 128; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 129; (b) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 130; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 131; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 132; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 133; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 134; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 135; (c) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 136; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 137; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 138; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 139; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 140; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 141; (d) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 142; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 143; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 144; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 145; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 146; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 147; (e) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 148; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 149; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 150; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 151; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 152; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 153; (f) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 154; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 155; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 156; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 157; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 158; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 159; (g) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 160; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 161; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 162; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 163; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 164; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 165; (h) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 166; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 167; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 168; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 169; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 170; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 171; (i) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 172; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 173; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 174; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 175; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 176; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 177; (j) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 178; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 179; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 180; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 181; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 182; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 183; (k) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 184; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 185; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 186; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 187; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 188; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 189; (l) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 190; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 191; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 192; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 193; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 194; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 195; (m) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 196; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 197; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 198; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 199; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 200; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 201; (n) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 202; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 203; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 204; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 205; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 206; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 207; (o) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213; (p) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219; (q) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225; (r) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231; (s) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 232; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 233; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 234; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 235; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 236; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 237; (t) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 238; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 239; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 240; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 241; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 242; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 243; (u) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 244; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 245; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 246; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 247; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 248; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 249; (v) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 250; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 251; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 252; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 253; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 254; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 255; (w) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 256; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 257; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 258; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 259; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 260; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 261; (x) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 262; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 263; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 264; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 265; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 266; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 267; (y) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 304; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 305; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 306; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 307; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 308; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 309; (z) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 316; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 317; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 318; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 319; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 320; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 321; (aa) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 328; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 329; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 330; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 331; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 332; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 333; (ab) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 340; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 341; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 342; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 343; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 344; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 345; (ac) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 352; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 353; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 354; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 355; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 356; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 357; (ad) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 364; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 365; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 366; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 367; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 368; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 369; (ae) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 376; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 377; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 378; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 379; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 380; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 381; или (af) CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 388; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 389; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 390; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 391; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 392; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 393. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 202; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 203; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 204; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 205; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 206; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 207. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219. В другом неограничивающем варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225. В другом неограничивающем варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит: CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226; CDR2 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227; CDR3 вариабельной области тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228; CDR1 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229; CDR2 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230; и CDR3 вариабельной области легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231. В конкретных вариантах осуществления scFv человека содержит вариабельную область тяжелой цепи, вариабельную область легкой цепи, пептидный линкер между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи, а также His-метку и HA-метку. В конкретных вариантах осуществления аминокислотная последовательность His-метки и HA-метки содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 275, которая приведена ниже:

TSGQAGQHHHHHHGAYPYDVPDYAS [SEQ ID NO: 275]

Нуклеотидная последовательность, кодирующая SEQ ID NO: 275, соответствует SEQ ID NO: 276, которая приведена ниже:

ACTAGTGGCCAGGCCGGCCAGCACCATCACCATCACCATGGCGCATACCCGTACGACGTTCCGGACTACGCTTCT [SEQ ID NO: 276].

В конкретных вариантах осуществления GPRC5D содержит аминокислотную последовательность приведенную в SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя, тремя или четырьмя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа в N-концевой области, содержащей аминокислоты 1-27 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа в области ECL1, содержащей аминокислоты 85-93 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа в области ECL2, содержащей аминокислоты 145-167 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа в области ECL3, содержащей аминокислоты 226-239 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 16-23 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 15-23 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 16-25 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 10-17 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 5-17 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 85-95 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 157-164 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 157-167 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 230-237 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 229-237 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 230-243 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа, содержащей аминокислоты 227-237 из SEQ ID NO: 97.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя или тремя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 16-25 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа, содержащей аминокислоты 157-164 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 229-237 из SEQ ID NO: 97. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя или тремя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 5-17 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа, содержащей аминокислоты 85-95 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 157-164 из SEQ ID NO: 97. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217, V_L CDR2 содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной или двумя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 15-23 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 230-243 из SEQ ID NO: 97. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя или тремя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 10-17 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа, содержащей аминокислоты 157-167 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 227-237 из SEQ ID NO: 97. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231.

В соответствии с настоящим изобретением, внеклеточный антигенсвязывающий домен ковалентно связан с трансмембранным доменом. Внеклеточный антигенсвязывающий домен может содержать сигнальный пептид, который ковалентно связан с 5ʹ-концом внеклеточного антигенсвязывающего домена. В конкретных вариантах осуществления трансмембранный домен CAR содержит полипептид CD8, полипептид CD28, полипептид CD3ζ, полипептид CD4, полипептид 4-1BB, полипептид OX40, полипептид ICOS, полипептид CTLA-4, полипептид PD-1, полипептид LAG-3, полипептид 2B4, полипептид BTLA, синтетический пептид (не на основе белка, связанного с иммунным ответом) или их сочетание. В конкретных вариантах осуществления трансмембранный домен содержит полипептид CD8. В конкретных вариантах осуществления трансмембранный домен содержит полипептид CD28.

В соответствии с настоящим изобретением, внутриклеточный домен содержит полипептид CD3ζ. В конкретных вариантах осуществления внутриклеточный домен дополнительно содержит по меньшей мере одну сигнальную область. В конкретных вариантах осуществления по меньшей мере одна сигнальная область содержит полипептид CD28, полипептид 4-1BB, полипептид OX40, полипептид ICOS, полипептид DAP-10, полипептид PD-1, полипептид CTLA-4, полипептид LAG-3, полипептид 2B4, полипептид BTLA, синтетический пептид (не на основе белка, связанного с иммунным ответом) или их сочетание. В конкретных вариантах осуществления сигнальная область представляет собой костимулирующую сигнальную область. В конкретных вариантах осуществления костимулирующая сигнальная область содержит полипептид CD28, полипептид 4-1BB, полипептид OX40, полипептид ICOS, полипептид DAP-10 или их сочетание. В конкретных вариантах осуществления по меньшей мере одна костимулирующая сигнальная область содержит полипептид CD28. В конкретных вариантах осуществления по меньшей мере одна костимулирующая сигнальная область содержит полипептид 4-1BB. В конкретных вариантах осуществления трансмембранный домен содержит полипептид CD28, внутриклеточный домен содержит полипептид CD3ζ и костимулирующий сигнальный домен содержит полипептид CD28.

В конкретных вариантах осуществления CAR экспрессируется рекомбинантно. CAR может экспрессироваться с вектора. В конкретных вариантах осуществления вектор представляет собой γ-ретровирусный вектор.

Настоящее изобретение также относится к выделенным иммунореактивным клеткам, содержащим вышеописанные CAR. В конкретных вариантах осуществления выделенная иммунореактивная клетка трансдуцирована CAR, например, CAR конститутивно экспрессируется на поверхности иммунореактивной клетки. В конкретных вариантах осуществления выделенная иммунореактивная клетка дополнительно трансдуцирована по меньшей мере одним костимулирующим лигандом, вследствие чего иммунореактивная клетка экспрессирует по меньшей мере один костимулирующий лиганд. В конкретных вариантах осуществления по меньшей мере один костимулирующий лиганд выбирают из группы, состоящей из 4-1BBL, CD80, CD86, CD70, OX40L, CD48, TNFRSF14, а также их сочетаний. В конкретных вариантах осуществления выделенная иммунореактивная клетка дополнительно трансдуцирована по меньшей мере одним цитокином, вследствие чего иммунореактивная клетка секретирует по меньшей мере один цитокин. В конкретных вариантах осуществления по меньшей мере один цитокин выбирают из группы, состоящей из IL-2, IL-3, IL-6, IL-7, IL-11, IL-12, IL-15, IL-17, IL-21, а также их сочетаний. В некоторых вариантах осуществления выделенную иммунореактивную клетку выбирают из группы, состоящей из T-клетки, клетки-естественного киллера (NK), цитотоксического T-лимфоцита (CTL), регуляторной T-клетки, человеческой эмбриональной стволовой клетки, лимфоидной клетки-предшественника, клетки-предшественника T-клетки и плюрипотентной стволовой клетки, из которой могут дифференцироваться лимфоидные клетки. В конкретных вариантах осуществления иммунореактивная клетка представляет собой T-клетку.

Настоящее изобретение также относится к молекулам нуклеиновой кислоты, кодирующим раскрытые в настоящем документе CAR, векторам, содержащим молекулы нуклеиновой кислоты, и клеткам-хозяевам, экспрессирующим такие молекулы нуклеиновой кислоты. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 397. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 398. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 399. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 400. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 401. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 402. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 403. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 406. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 407. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты имеет нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 408. В конкретных вариантах осуществления вектор представляет собой γ-ретровирусный вектор. В конкретных вариантах осуществления клетка-хозяин представляет собой T-клетку.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способам применения вышеописанной иммунореактивной клетки для уменьшения опухолевой нагрузки у субъекта. Например, настоящее изобретение относится к способу уменьшения опухолевой нагрузки у субъекта, включающему введение эффективного количества раскрытой в настоящем документе иммунореактивной клетки субъекту, в результате чего индуцируется гибель опухолевых клеток у субъекта. В конкретных вариантах осуществления способ приводит к уменьшению количества опухолевых клеток. В другом варианте осуществления способ приводит к уменьшению размера опухоли. В другом варианте осуществления способ приводит к уничтожению опухоли у субъекта. В конкретных вариантах осуществления субъект является человеком. В конкретных вариантах осуществления иммунореактивная клетка представляет собой T-клетку. В конкретных вариантах осуществления опухоль представляет собой множественную миелому или макроглобулинемию Вальденстрема. В конкретных вариантах осуществления опухоль представляет собой множественную миелому.

Кроме того, настоящее изобретение относится к способам применения вышеописанной иммунореактивной клетки для увеличения или продления срока выживания субъекта, имеющего неоплазию. Например, настоящее изобретение относится к способу увеличения или продления срока выживания субъекта, имеющего неоплазию, включающему введение эффективного количества раскрытой в настоящем документе иммунореактивной клетки субъекту, в результате чего увеличивается или продлевается срок выживания субъекта. В конкретных вариантах осуществления неоплазия представляет собой множественную миелому или макроглобулинемию Вальденстрема. В конкретных вариантах осуществления неоплазия представляет собой множественную миелому. В конкретных вариантах осуществления способ приводит к уменьшению или уничтожению опухолевой нагрузки у субъекта.

Настоящее изобретение также относится к способам получения иммунореактивной клетки, которая связывается с рецептором, связанным с G-белками. В одном неограничивающем примере способ включает введение в иммунореактивную клетку нуклеотидной последовательности, кодирующей химерный антигенный рецептор (CAR), который содержит внеклеточный антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный домен, при этом внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически связывается с рецептором, связанным с G-белками. В конкретных вариантах осуществления рецептор, связанный с G-белками, является представителем D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками (GPRC5D). В конкретном неограничивающем варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv.

Настоящее изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим эффективное количество раскрытых в настоящем документе иммунореактивных клеток и фармацевтически приемлемый эксципиент. В конкретных вариантах осуществления фармацевтические композиции предназначены для лечения неоплазии. В конкретных вариантах осуществления неоплазия представляет собой множественную миелому или макроглобулинемию Вальденстрема. В конкретных вариантах осуществления неоплазия представляет собой множественную миелому.

Настоящее изобретение также относится к наборам для лечения неоплазии, включающим раскрытые в настоящем документе иммунореактивные клетки. В конкретных вариантах осуществления набор дополнительно включает письменные инструкции по применению иммунореактивной клетки для лечения неоплазии. В конкретных вариантах осуществления неоплазия представляет собой множественную миелому или макроглобулинемию Вальденстрема. В конкретных вариантах осуществления неоплазия представляет собой множественную миелому.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУР

Следующее далее подробное описание, приведенное в качестве примера, но не предназначенное для ограничения изобретения конкретными описанными вариантами осуществления, может быть понятным в сочетании с сопроводительными чертежами.

На фигуре 1 представлен химерный антигенный рецептор, нацеленный на рецептор, связанный с G-белками, в соответствии с одним неограничивающим вариантом осуществления настоящего изобретения.

На фигуре 2 показана экспрессия GPRC5D человека в нормальных тканях и линиях раковых клеток человека.

На фигуре 3 показана экспрессия раскрытого в настоящем документе GPRC5D CAR на T-клетках человека.

На фигуре 4 показана цитолитическая активность раскрытого в настоящем документе GPRC5D CAR в отношении клеток 3T3, избыточно экспрессирующих GPRC5D.

На фигуре 5 показана цитолитическая активность раскрытого в настоящем документе GPRC5D CAR в отношении линии клеток множественной миеломы человека.

На фигуре 6 представлен химерный антигенный рецептор, нацеленный на GPRC5D, в соответствии с одним неограничивающим вариантом осуществления настоящего изобретения.

На фигуре 7 представлена молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая GPRC5D-нацеленный CAR в соответствии с одним неограничивающим вариантом осуществления настоящего изобретения.

На фигуре 8 представлена молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая GPRC5D-нацеленный CAR в соответствии с одним неограничивающим вариантом осуществления настоящего изобретения.

На фигуре 9 представлена молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая GPRC5D-нацеленный CAR в соответствии с одним неограничивающим вариантом осуществления настоящего изобретения.

На фигуре 10 показана цитотоксичность нацеленных на GPRC5D CAR T-клеток в отношении линий клеток множественной миеломы человека.

На фигуре 11 показана индукция секреции цитокинов GPRC5D-нацеленных CAR T-клеток.

На фигуре 12 показана противоопухолевый активность GPRC5D-нацеленных CAR T-клеток.

На фигурах 13A и 13B показана цитолитическая активность GPRC5D-нацеленных CAR T-клеток. (A) Показано процентное содержание GFP⁺ клеток опухолевой линии в момент времени 0. (B) Показан процент уничтожения GFP⁺ клеток опухолевой линии в момент времени 36 часов.

На фигуре 14 проиллюстрирована технология CLIPS. Реакция CLIPS происходит между группами брома каркаса CLIPS и тиоловыми группами боковых цепей остатков цистеина. Реакция является быстрой и специфической в мягких условиях. С использованием этой элегантной химии, природные белковые последовательности превращаются в CLIPS-конструкты с целым диапазоном структур. Слева направо: две разные одиночные T2 петли, T3 двойная петля, конъюгированные T2+T3 петли, стабилизированный бета-слой и стабилизированная альфа-спираль (Timmerman et al., J. Mol. Recognit. 2007; 20: 283-29).

На фигуре 15 показан скрининг комбинаторной библиотеки CLIPS. Целевой белок (слева), содержащий прерывистый конформационный эпитоп, превращают в матричную библиотеку (центр). Комбинаторные пептиды синтезируют на запатентованной миникарте и химически преобразуют в CLIPS-конструкты с определенными пространственными структурами (справа).

На фигуре 16 представлен T3-петлевой конструкт CLIPSTM.

На фигурах 17A-17D показана технология тепловых карт. (A) Таблица комбинированных пептидов с двумя подпоследовательностями, обозначенными «Петля 1» и «Петля 2». (B) Данные из A представлены в виде матрицы. (C) Шкала цветовой индикации представленной тепловой карты. (D) Изображение тепловой карты для данных из A.

На фигуре 18 представлены профили интенсивности, полученные для ET150-2. Линии проведены от начального остатка до конечного остатка одного пептида на высоте, на которой был получен сигнал для этого пептида.

На фигуре 19 представлен анализ методом тепловых карт данных, полученных для ET150-5 в условиях высокой строгости.

На фигуре 20 приведены профили интенсивности, полученные для ET150-18.

На фигуре 21 приведены профили интенсивности, полученные для ET150-8.

На фигуре 22 представлено схематическое изображение GPCR, содержащего семь трансмембранных спиралей (TM) и 3 внеклеточные области (ECL). Цветными стрелками указаны сайты связывания для каждого антитела.

На фигуре 23 представлен анализ при помощи диаграммы рассеяния всех данных, полученных для каждого образца. По диагонали представлено распределение статистических данных.

На фигуре 24 представлены результаты FACS-анализа анти-GPRC5D антител.

На фигуре 25 представлены результаты FACS-анализа анти-GPRC5D антител.

На фигуре 26 представлена молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая GPRC5D-нацеленный CAR в соответствии с одним неограничивающим вариантом осуществления настоящего изобретения.

На фигуре 27 представлена молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая GPRC5D-нацеленный CAR в соответствии с одним неограничивающим вариантом осуществления настоящего изобретения.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение, в целом, относится к химерным антигенным рецепторам (CAR), нацеленным на рецептор, связанный с G-белками ((например, представитель D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками (GPRC5D)). В одном неограничивающем примере CAR содержит внеклеточный антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный домен, при этом внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически связывается с рецептором, связанным с G-белками. Настоящее изобретение также относится к иммунореактивным клеткам (например, T-клетке, клетке-естественному киллеру (NK), цитотоксическому T-лимфоциту (CTL), регуляторной T-клетке, человеческой эмбриональной стволовой клетке, лимфоидной клетке-предшественнику, клетке-предшественнику T-клетки и плюрипотентной стволовой клетке, из которой могут дифференцироваться лимфоидные клетки), экспрессирующим CAR, нацеленные на рецептор, связанный с G-белками, и способам применения таких иммунореактивных клеток для лечения рака, например, множественной миеломы.

I. Определения

Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем документе, имеют то значение, которое им обычно придают специалисты в области, к которой относится данное изобретение. В следующих литературных источниках специалист может найти определения многих терминов, используемых в рамках данного изобретения: Singleton et al., Dictionary of Microbiology and Molecular Biology (2-е издание, 1994); The Cambridge Dictionary of Science and Technology (Walker ed., 1988); The Glossary of Genetics, 5-е издание, R. Rieger et al. (eds.), Springer Verlag (1991); и Hale & Marham, The Harper Collins Dictionary of Biology (1991). Следующие термины, используемые в настоящем документе, имеют значения, определенные для них ниже, если не указано иное.

Используемый в настоящем документе термин «примерно» или «приблизительно» означает допустимый диапазон ошибки для конкретной величины, что может определять рядовой специалист в данной области; этот диапазон будет зависеть частично от того, каким образом величину определяют или измеряют, то есть, от ограничений системы измерения. Например, «примерно» может означать «в пределах 3 или более чем 3 стандартных отклонений», в соответствии с практикой в данной области. Альтернативно, «примерно» может означать «диапазон вплоть до 20%, предпочтительно до 10%, более предпочтительно до 5% и даже более предпочтительно до 1% от конкретной величины». Альтернативно, особенно в случае биологических систем или процессов, термин может означать «в пределах порядка величины», предпочтительно в пределах 5-кратного значения, и более предпочтительно, в пределах 2-двукратного значения величины.

Используемый в настоящем документе термин «популяция клеток» означает группу из по меньшей мере двух клеток, имеющих сходные или разные фенотипы. В неограничивающих примерах популяция клеток может включать по меньшей мере примерно 10, по меньшей мере примерно 100, по меньшей мере примерно 200, по меньшей мере примерно 300, по меньшей мере примерно 400, по меньшей мере примерно 500, по меньшей мере примерно 600, по меньшей мере примерно 700, по меньшей мере примерно 800, по меньшей мере примерно 900, по меньшей мере примерно 1000 клеток, имеющих сходные или разные фенотипы.

Используемый в настоящем документе термин «антитело» означает не только интактные молекулы антител, но также и фрагменты молекул антител, которые сохраняют способность связывать иммуноген. Такие фрагменты также хорошо известны в данной области и постоянно используются как in vitro, так и in vivo. Соответственно, используемый в настоящем документе термин «антитело» означает не только интактные молекулы иммуноглобулинов, но также и хорошо известные активные фрагменты F(ab')₂ и Fab. Фрагменты F(ab')₂ и Fab, которые лишены Fc-фрагмента интактного антитела, быстрее удаляются из системы циркуляции и могут отличаться меньшим неспецифическим связыванием с тканями, чем интактное антитело (Wahl et al., J. Nucl. Med. 24: 316-325 (1983). Антитела по изобретению включают полноразмерные природные антитела, биспецифические антитела; химерные антитела; Fab, Fabʹ, одноцепочечные фрагменты V-области (scFv), слитые полипептиды и необычные антитела.

Используемый в настоящем документе термин «одноцепочечный вариабельный фрагмент» или «scFv» означает слитый белок из вариабельных областей тяжелой (V_H) и легкой (V_L) цепей иммуноглобулина (например, мыши или человека), ковалентно связанных, с образованием V_H::V_L гетеродимера. Тяжелая (V_H) и легкая (V_L) цепи либо связаны напрямую, либо связаны с помощью закодированного пептидного линкера (например, длиной 10, 15, 20, 25 аминокислот), который соединяет N-конец V_H с C-концом V_L или C-конец V_H с N-концом V_L. Как правило, линкер бывает богат остатками глицина для гибкости, а также остатками серина или треонина для растворимости. Линкер может связывать вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи внеклеточного антигенсвязывающего домена. Неограничивающие примеры линкеров приведены в Shen et al., Anal. Chem. 80(6): 1910-1917 (2008) и WO 2014/087010, полное содержание которых включено в настоящий документ посредством ссылки. В конкретных вариантах осуществления линкер представляет собой линкер G4S.

В неограничивающем примере линкер имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 897, которая представлена ниже.

GGGGSGGGGSGGGGS [SEQ ID NO: 284]. В конкретных вариантах осуществления нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 284, приведена в SEQ ID NO: 285, которая представлена ниже:

GGTGGAGGTGGATCAGGTGGAGGTGGATCTGGTGGAGGTGGATCT [SEQ ID NO: 285].

В другом неограничивающем примере линкер имеет аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98, которая представлена ниже.

SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMA [SEQ ID NO: 98]

В конкретных вариантах осуществления нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, приведена в SEQ ID NO: 99, которая представлена ниже:

tctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggcc [SEQ ID NO: 99]

Несмотря на удаление константных областей и введение линкера, белки scFv сохраняют специфичность исходного иммуноглобулина. Антитела, представляющие собой одноцепочечный полипептид Fv, могут экспрессироваться с нуклеиновой кислоты, содержащей кодирующие V_H и V_L последовательности, как описано в Huston, et al. (Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 85: 5879-5883, 1988). Смотри также патенты США №№ 5091513, 5132405 и 4956778; и публикации патентов США №№ 20050196754 и 20050196754. Описаны антагонистические scFv, обладающие ингибирующей активностью (смотри, например, Zhao et al., Hyrbidoma (Larchmt) 2008 27(6): 455-51; Peter et al., J Cachexia Sarcopenia Muscle 2012 August 12; Shieh et al., J Imunol 2009 183(4): 2277-85; Giomarelli et al., Thromb Haemost 2007 97(6): 955-63; Fife et al., J Clin Invst 2006 116(8): 2252-61; Brocks et al., Immunotechnology 1997 3(3): 173-84; Moosmayer et al., Ther Immunol 1995 2(10: 31-40). Описаны агонистические scFv, обладающие стимулирующей активностью (смотри, например, Peter et al., J Biol Chem 2003 25278(38): 36740-7; Xie et al., Nat Biotech 1997 15(8): 768-71; Ledbetter et al., Crit Rev Immunol1997 17(5-6): 427-55; Ho et al., BioChim Biophys Acta 2003 1638(3): 257-66).

Используемый в настоящем документе термин «F(ab)» означает фрагмент структуры антитела, который связывается с антигеном, но является одновалентным и не имеет Fc-части, например, при расщеплении антитела ферментом папаином образуются два F(ab)-фрагмента и Fc-фрагмент (например, константная область тяжелой (H) цепи; Fc-область, которая не связывается с антигеном).

Используемый в настоящем документе термин «F(ab')₂» означает фрагменты антитела, получаемые при расщеплении пепсином целых IgG антител, причем данный фрагмент имеет две антигенсвязывающие области (ab') (двухвалентные), причем каждая (ab') область содержит две отдельные аминокислотные цепи, часть H-цепи и легкая (L) цепь соединены S-S связью для связывания антигена и при этом оставшиеся части H-цепей связаны вместе. «F(ab')₂»-фрагмент может быть разделен на два отдельных Fab'-фрагмента.

Используемый в настоящем документе термин «вектор» означает любой генетический элемент, такой как плазмида, фаг, транспозон, космида, хромосома, вирус, вирион и так далее, который способен к репликации, будучи связан с правильными контрольными элементами, и который может переносить последовательности генов в клетки. Таким образом, термин охватывает клонирующие и экспрессионные векторы, а также вирусные векторы и плазмидные векторы.

Используемый в настоящем документе термин «экспрессионный вектор» означает рекомбинантную нуклеотидную последовательность, то есть, молекулу рекомбинантной ДНК, содержащую нужную кодирующую последовательность и соответствующие нуклеотидные последовательности, необходимые для экспрессии функционально связанной кодирующей последовательности в конкретном организме-хозяине. Нуклеотидные последовательности, необходимые для экспрессии в прокариотах, как правило, включают промотор, оператор (необязательно) и сайт связывания рибосомы, часто наряду с другими последовательностями. В эукариотических клетках, как известно, используются промоторы, энхансеры, а также последовательности терминации и сигналы полиаденилирования.

Используемый в настоящем документе термин «CDR» означает аминокислотные последовательности определяющей комплементарность области антитела, которые представляют собой гипервариабельные области тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов. Смотри, например, Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4-е издание, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987). Как правило, антитела содержат по три области CDR, или CDR, в вариабельных областях тяжелой цепи и легкой цепи. CDR предоставляют большинство контактирующих остатков для связывания антитела с антигеном или эпитопом. В конкретных вариантах осуществления границы областей CDR определяют, используя систему Kabat (Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, пятое издание, U.S. Department of Health и Human Services, NIH Publication No. 91-3242).

Используемый в настоящем документе термин «аффинность» означает меру силы связывания. Без привязки к конкретной теории, аффинность зависит от близости, создаваемой стереохимическим соответствием, между антигенсвязывающим центром антитела и антигенными детерминантами, от размера области контакта между ними и от распределения заряженных и гидрофобных групп. Аффинность также включает термин «авидность», который означает силу связи антиген-антитело после образования обратимых комплексов. Методы расчета аффинности антитела для антигена известны в данной области, они включают проведение экспериментов по связыванию для расчета аффинности. Активность антитела в функциональных анализах (например, в анализе методом проточной цитометрии) также является отражением аффинности антитела. Антитела и показатели аффинности можно фенотипически характеризовать и сравнивать с использованием функциональных анализов (например, анализа методом проточной цитометрии).

Молекулы нуклеиновой кислоты, полезные в способах по изобретению, включают любую молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид по изобретению или его фрагмент. Такие молекулы нуклеиновой кислоты не обязательно должны быть на 100% идентичны эндогенной нуклеотидной последовательности, однако они, как правило, будут иметь существенную идентичность. Полинуклеотиды, имеющие «существенную идентичность» с эндогенной последовательностью, как правило, способны гибридизоваться с по меньшей мере одной цепью двухцепочечной молекулы нуклеиновой кислоты. «Гибридизация» означает спаривание, с образованием двухцепочечной молекулы, между комплементарными полинуклеотидными последовательностями (например, гена, описанного в настоящем документе) или их частями в разных условиях строгости. (Смотри, например, Wahl, G. M. and S. L. Berger (1987) Methods Enzymol. 152: 399; Kimmel, A. R. (1987) Methods Enzymol. 152: 507).

Например, концентрация соли в строгих условиях, как правило, будет составлять менее примерно 750 мМ NaCl и 75 мМ цитрата тринатрия, предпочтительно менее примерно 500 мМ NaCl и 50 мМ цитрата тринатрия, и более предпочтительно менее примерно 250 мМ NaCl и 25 мМ цитрата тринатрия. Низкую строгость условий гибридизации можно получать в отсутствие органических растворителей, например, формамида, в то время как высокую строгость условий гибридизации можно получать в присутствии по меньшей мере примерно 35% формамида, и более предпочтительно по меньшей мере примерно 50% формамида. Температура в строгих условиях, как правило, включает температуру по меньшей мере примерно 30°C, более предпочтительно по меньшей мере примерно 37°C и наиболее предпочтительно по меньшей мере примерно 42°C. Различные дополнительные параметры, такие как время гибридизации, концентрация детергента, например, додецилсульфата натрия (SDS), а также включение или исключение ДНК-носителя, хорошо известны специалистам в данной области. Комбинируя эти различные условия по мере необходимости, можно добиваться различных уровней строгости. В предпочтительном варианте осуществления гибридизация будет происходить при 30°C в растворе, содержащем 750 мМ NaCl, 75 мМ цитрата тринатрия и 1% SDS. В более предпочтительном варианте осуществления гибридизация будет происходить при 37°C в растворе, содержащем 500 мМ NaCl, 50 мМ цитрата тринатрия, 1% SDS, 35% формамида и 100 мкг/мл денатурированной ДНК спермы лосося (оцДНК). В наиболее предпочтительном варианте осуществления гибридизация будет происходить при 42°C в растворе, содержащем 250 мМ NaCl, 25 мМ цитрата тринатрия, 1% SDS, 50% формамида и 200 мкг/мл оцДНК. Полезные вариации этих условий будут очевидны для специалистов в данной области.

В большинстве случаев строгость условий на этапах промывания после гибридизации также будут варьироваться. Строгость условий при промывании может определяться концентрацией соли и температурой. Как описано выше, строгость условий при промывании можно повышать путем снижения концентрации соли или путем повышения температуры. Например, концентрация соли в строгих условиях на этапах промывания предпочтительно будет составлять менее примерно 30 мМ NaCl и 3 мМ цитрата тринатрия, и наиболее предпочтительно менее примерно 15 мМ NaCl и 1,5 мМ цитрата тринатрия. Температура в строгих условиях на этапах промывания, как правило, будет включать температуру по меньшей мере примерно 25°C, более предпочтительно по меньшей мере примерно 42°C, и еще более предпочтительно по меньшей мере примерно 68°C. В предпочтительном варианте осуществления этапы промывания будут проводиться при 25°C в растворе, содержащем 30 мМ NaCl, 3 мМ цитрата тринатрия и 0,1% SDS. В более предпочтительном варианте осуществления этапы промывания будут проводиться при 42°C в растворе, содержащем 15 мМ NaCl, 1,5 мМ цитрата тринатрия и 0,1% SDS. В более предпочтительном варианте осуществления этапы промывания будут проводиться при 68°C в растворе, содержащем 15 мМ NaCl, 1,5 мМ цитрата тринатрия и 0,1% SDS. Дополнительные вариации этих условий будут очевидны для специалистов в данной области. Методы гибридизации хорошо известны специалистам в данной области и описаны, например, в Benton and Davis (Science 196: 180, 1977); Grunstein and Rogness (Proc. Natl. Acad. Sci., USA 72: 3961, 1975); Ausubel et al. (Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience, New York, 2001); Berger and Kimmel (Guide to Molecular Cloning Techniques, 1987, Academic Press, New York); и Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York.

Выражение «по существу идентичны» означает, что полипептид или молекула нуклеиновой кислоты проявляет по меньшей мере 50% идентичности с эталонной аминокислотной последовательностью (например, любой из аминокислотных последовательностей, описанных в настоящем документе) или нуклеотидной последовательностью (например, например, любой из нуклеотидных последовательностей, описанных в настоящем документе). Предпочтительно, такая последовательность на по меньшей мере 60%, более предпочтительно 80% или 85%, и более предпочтительно 90%, 95% или даже 99% идентична на аминокислотном или нуклеотидном уровне последовательности, используемой для сравнения.

Идентичность последовательностей, как правило, определяют с использованием программ анализа последовательностей (например, пакета программ для анализа последовательностей от Genetics Computer Group, University of Wisconsin Biotechnology Center, 1710 University Avenue, Madison, Wis. 53705; программ BLAST, BESTFIT, GAP или PILEUP/PRETTYBOX). Такие программы сопоставляют идентичные или сходные последовательности путем присвоения степени гомологии в случае различных замен, делеций и/или других модификаций. В иллюстративном подходе для определения степени идентичности можно использовать программу BLAST с показателем вероятности от e^-3 до e^-100, указывающим на близкородственную последовательность.

Используемый в настоящем документе термин «аналог» означает структурно родственный полипептид или молекулу нуклеиновой кислоты, обладающие функцией эталонного полипептида или молекулы нуклеиновой кислоты.

Используемый в настоящем документе термин «лиганд» означает молекулу, которая связывается с рецептором. В частности, лиганд связывает рецептор на другой клетке, делая возможным межклеточное узнавание и/или взаимодействие.

Используемый в настоящем документе термин «заболевание» означает любое состояние или расстройство, которое нарушает или препятствует нормальному функционированию клетки, ткани или органа. Примеры заболеваний включают неоплазию или инфицирование патогенами клетки.

Используемый в настоящем документе термин «эффективное количество» означает количество, достаточное для достижения терапевтического эффекта. В конкретных вариантах осуществления «эффективное количество» представляет собой количество, достаточное для остановки, ослабления или ингибирования непрерывной пролиферации, роста или метастазирования (например, инвазии или миграции) неоплазии.

Используемый в настоящем документе термин «гетерологичные молекула нуклеиновой кислоты или полипептид» означает молекулу нуклеиновой кислоты (например, молекулу кДНК, ДНК или РНК) или полипептид, которые обычно не присутствуют в клетке или образце, полученном из клетки. Такая нуклеиновая кислота может быть из другого организма или она, например, может представлять собой молекулу мРНК, которая обычно не экспрессируется в клетке или образце.

Используемый в настоящем документе термин «иммунореактивная клетка» означает клетку, которая функционирует при иммунном ответе, либо ее предшественника или потомство.

Используемый в настоящем документе термин «модуляция» означает положительное или отрицательное изменение. Иллюстративная модуляция включает изменение на примерно 1%, примерно 2%, примерно 5%, примерно 10%, примерно 25%, примерно 50%, примерно 75% или примерно 100%.

Используемый в настоящем документе термин «увеличение» означает положительное изменение на по меньшей мере примерно 5%, включая, но без ограничения, положительное изменение на примерно 5%, на примерно 10%, на примерно 25%, на примерно 30%, на примерно 50%, на примерно 75% или на примерно 100%.

Используемый в настоящем документе термин «уменьшение» означает отрицательное изменение на по меньшей мере примерно 5%, включая, но без ограничения, отрицательное изменение на примерно 5%, на примерно 10%, на примерно 25%, на примерно 30%, на примерно 50%, на примерно 75% или на примерно 100%.

Используемый в настоящем документе термин «выделенная клетка» означает клетку, которая отделена от молекулярных и/или клеточных компонентов, которые обычно окружают клетку.

Используемый в настоящем документе термин «выделенный», «очищенный» или «биологически чистый» относится к материалу, который в разной степени свободен от компонентов, которые обычно окружают его в его естественном состоянии. «Выделенный» указывает на состояние отделенности от исходного источника или окружающей среды. «Очищенный» указывает на более высокую степень отделенности, чем при выделении. «Очищенный» или «биологически чистый» белок в достаточной степени свободен от других материалов, так что любые примеси существенно не влияют на биологические свойства белка или не вызывают другие неблагоприятные последствия. То есть, нуклеиновая кислота или пептид по данному изобретению являются очищенными, если они по существу свободны от клеточного материала, вирусного материала или культуральной среды в случае получения методами рекомбинантной ДНК, либо химических предшественников или других химических реагентов в случае химического синтеза. Чистоту и гомогенность, как правило, определяют методами аналитической химии, например, электрофорезом в полиакриламидном геле или высокоэффективной жидкостной хроматографией. Термин «очищенный» может указывать на то, что нуклеиновая кислота или белок образуют практически одну полосу в геле при электрофорезе. В случае белка, который может быть подвергнут модификациям, например, фосфорилированию или гликозилированию, различные модификации могут приводить к образованию разных выделенных белков, которые могут быть очищены отдельно.

Используемый в настоящем документе термин «секретируемый» относится к полипептиду, который высвобождается из клетки секреторным путем через эндоплазматический ретикулум, аппарат Гольджи и в виде везикула, который временно сливается с клеточной плазматической мембраной, выводя белки из клетки.

Используемый в настоящем документе термин «специфически связывает» или «специфически связывается с» или «специфически нацелен» означает, что полипептид или его фрагмент узнает и связывает интересующую биологическую молекулу (например, полипептид), но практически не узнает и не связывает другие молекулы в образце, например, биологическом образце, который естественным образом содержит полипептид по изобретению.

Используемый в настоящем документе термин «лечение» или «терапия» означает клиническое вмешательство в попытке изменить течение заболевания у индивидуума или клетки, которые подвергают лечению, и которое может производиться либо в профилактических целях, либо во время клинической патологии. Терапевтические эффекты лечения включают, но не ограничиваются ими, предотвращение возникновения или рецидива заболевания, ослабление симптомов, уменьшение любых прямых или косвенных патологических последствий заболевания, предотвращение метастазирования, снижение скорости прогрессирования заболевания, облегчение или ослабление болезненного состояния, а также достижение ремиссии или более благоприятного прогноза. В случае предотвращения заболевания или нарушения, лечение может предотвращать ухудшение состояния вследствие заболевания у субъекта с текущим или диагностированным заболеванием, или у субъекта, предположительно имеющего заболевание, однако лечение также способно предотвращать начало развития заболевания или симптома заболевания у субъекта, имеющего риск развития заболевания или предположительно имеющего заболевание.

Используемый в настоящем документе термин «субъект» означает любое животное (например, млекопитающее), включая, но без ограничения, людей, приматов, кроме человека, грызунов и тому подобное (например, которые будут получать конкретное лечение или от которых будут получены клетки).

II. Рецептор, связанный с G-белками

Рецепторы, связанные с G-белками («GPR»), также известные как рецепторы с семью трансмембранными доменами, 7TM рецепторы, гептаспиральные рецепторы, серпантинные рецепторы и рецепторы, сопряженные с G-белками, составляют большое белковое семейство рецепторов, которые воспринимают молекулы за пределами клетки и активируют внутренние пути передачи сигнала и, в конечном итоге, клеточные ответы. Рецепторы GPCR можно разделить на шесть классов на основании гомологии последовательностей и функционального сходства: класс A (родопсин-подобные), класс B (семейство рецепторов секретина), класс C (метаботропные глутаматные рецепторы/рецепторы феромона), класс D (рецепторы феромона спаривания грибков), Class E (рецепторы циклической АМФ) и класс F (Frizzled/Smoothened). В конкретных вариантах осуществления GRP представляют собой GRP класса C. В конкретных неограничивающих вариантах осуществления GRP класса C является представителем D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками.

Представитель D группы 5 семейства C рецепторов, связанных с G-белками (GPRC5D), представляет собой рецептор-сироту с неизвестными лигандами или функциями у человека. Он является членом семейства индуцируемых ретиноевой кислотой связанных с G-белками рецепторов. Он избыточно экспрессируется в клетках множественной миеломы (MM) и не экспрессируется, или экспрессируется на гораздо более низком уровне, в клетках любого другого типа, доброкачественных или злокачественных, как показано на фигуре 2. Несколько групп идентифицировали этот ген, как дифференциально экспрессируемый на высоком уровне, при профилировании экспрессии генов в клетках первичной MM по сравнению с нормальной тканью¹ или другими злокачественными заболеваниями крови^2-4. Показано, что более высокий уровень экспрессии мРНК коррелирует с более низкой общей выживаемостью¹ пациентов. Поверхностное окрашивание пунктатов костного мозга от пациентов с MM показало окрашивание, специфичное для плазматических клеток⁴. Насколько известно авторам изобретения, это первый случай, когда GPRC5D был выбран мишенью для терапевтического средства. Кроме того, насколько известно авторам изобретения, это первый случай создания CAR, нацеленного на какой-либо из рецепторов, связанных с G-белками.

В некоторых неограничивающих вариантах осуществления GPRC5D представляет собой GPRC5D человека, содержащий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 97, или ее фрагменты.

SEQ ID NO: 97 приведена ниже:

MYKDCIESTGDYFLLCDAEGPWGIILESLAILGIVVTILLLLAFLFLMRKIQDCSQWNVL PTQLLFLLSVLGLFGLAFAFIIELNQQTAPVRYFLFGVLFALCFSCLLAHASNLVKLVRG CVSFSWTTILCIAIGCSLLQIIIATEYVTLIMTRGMMFVNMTPCQLNVDFVVLLVYVLFL MALTFFVSKATFCGPCENWKQHGRLIFITVLFSIIIWVVWISMLLRGNPQFQRQPQWDDP VVCIALVTNAWVFLLLYIVPELCILYRSCRQECPLQGNACPVTAYQHSFQVENQELSRAR DSDGAEEDVALTSYGTPIQPQTVDPTQECFIPQAKLSPQQDAGGV

[SEQ ID NO: 97]

N-концевая область GPRC5D человека содержит аминокислоты 1-27 из SEQ ID NO: 97. Область внеклеточной петли 1 (ECL1) GPRC5D человека содержит аминокислоты 85-93 из SEQ ID NO: 97. Область внеклеточной петли 2 (ECL2) GPRC5D человека содержит аминокислоты 145-167 из SEQ ID NO: 97. Область внеклеточной петли 3 (ECL3) GPRC5D человека содержит аминокислоты 226-239 из SEQ ID NO: 97.

III. Химерный антигенный рецептор (CAR).

Химерные антигенные рецепторы (CAR) представляют собой сконструированные рецепторы, которые сообщают или придают интересующую специфичность иммунной эффекторной клетке. CAR можно использовать для придания специфичности моноклонального антитела T-клетке; при этом перенос их кодирующей последовательности осуществляют с помощью ретровирусных векторов.

Известно три поколения CAR. CAR «первого поколения», как правило, состоят из внеклеточного антигенсвязывающего домена (например, одноцепочечных вариабельных фрагментов (scFv)), слитого с трансмембранным доменом, слитым с цитоплазматическим/внутриклеточным доменом цепи T-клеточного рецептора. CAR «первого поколения», как правило, имеют внутриклеточный домен из CD3ξ-цепи, который является основным передатчиком сигналов от эндогенных TCR. CAR «первого поколения» могут обеспечивать узнавание de novo антигена и вызывать активацию как CD4⁺, так и CD8⁺ T-клеток через их сигнальный домен CD3ζ-цепи в одной слитой молекуле, независимо от опосредованного HLA представления антигена. В CAR «второго поколения» добавлены внутриклеточные домены из разных костимулирующих молекул (например, CD28, 4-1BB, ICOS, OX40) к цитоплазматическому хвосту CAR для обеспечения дополнительных сигналов для T-клетки. CAR «второго поколения» включают те, которые обеспечивают как костимуляцию (например, CD28 или 4-1BB), так и активацию (CD3ζ). Доклинические исследования показали, что CAR «второго поколения» способны повышать противоопухолевую активность T-клеток. Например, устойчивая эффективность T-клеток, модифицированных CAR «второго поколения», была продемонстрирована в клинических испытаниях по таргетированию молекулы CD19 у пациентов с хроническим лимфобластным лейкозом (CLL) и острым лимфобластным лейкозом (ALL). CAR «третьего поколения» включают те, которые обеспечивают множественную костимуляцию (например, CD28 и 4-1BB) и активацию (CD3ζ).

В соответствии с настоящим изобретением, CAR содержат внеклеточный антигенсвязывающий домен, трансмембранный домен и внутриклеточный домен, при этом внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с рецептором, связанным с G-белками. В конкретных вариантах осуществления рецептор, связанный с G-белками, представляет собой GPRC5D. В конкретном неограничивающем варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv. В конкретном неограничивающем варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой Fab, который, необязательно, является сшитым. В конкретном неограничивающем варианте осуществления внеклеточный связывающий домен представляет собой F(ab)₂. В конкретном неограничивающем варианте осуществления любая из вышеуказанных молекул может находиться в слитом белке с гетерологичной последовательностью, образуя внеклеточный антигенсвязывающий домен.

В конкретных неограничивающих вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен описанного в настоящем документе CAR имеет высокую специфичность связывания, а также высокую аффинность связывания с рецептором, связанным с G-белками (например, GPRC5D). Например, в таких вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен CAR (представляющий собой, например, scFv или его аналоги) связывается с GPRC5D с константой диссоциации (K_D), составляющей примерно 3×10^-6 M или менее. В конкретных вариантах осуществления K_Dсоставляет примерно 1×10^-6 M или менее, примерно 1×10^-7 M или менее, примерно 1×10^-8 M или менее, или примерно 1×10^-9 M или менее, примерно 1×10^-10 M или менее, или примерно 1×10^-11 M или менее. В конкретных вариантах осуществления K_D составляет примерно 1×10^-8 M или менее. В конкретных вариантах осуществления K_Dсоставляет от примерно 1×10^-11 M до примерно 3×10^-6 M, например, от примерно 1×10^-11 M до примерно 1×10^-10 M, от примерно 1×10^-10 M до примерно 1×10^-9 M, от примерно 1×10^-9 M до примерно 1×10^-8 M, от примерно 1×10^-8 M до примерно 1×10^-7 M или от примерно 1×10^-7 M до примерно 1×10^-6 M, или от примерно 1×10^-6 M до примерно 3×10^-6 M. В конкретных вариантах осуществления K_D составляет от примерно 1×10^-9 M до примерно 1×10^-8 M. В конкретных вариантах осуществления K_D составляет от примерно 1×10^-9 M до примерно 1,5×10^-9 M. В конкретных вариантах осуществления K_D составляет примерно 1,2×10^-9 M. В конкретных вариантах осуществления K_D составляет от примерно 4×10^-9 M до примерно 5×10^-9 M. В конкретных вариантах осуществления K_D составляет примерно 5×10^-9 M. В конкретных вариантах осуществления K_D составляет примерно 4,8×10^-9 M. В конкретных вариантах осуществления K_D составляет от примерно 8×10^-9 M до примерно 9×10^-9 M. В конкретных вариантах осуществления K_D составляет примерно 8×10^-9 M. В конкретных вариантах осуществления K_D составляет примерно 8,1×10^-9 M.

Связывание внеклеточного антигенсвязывающего домена (представляющего собой, например, scFv или его аналог) раскрытого в настоящем документе CAR с рецептором, связанным с G-белками (например, GPRC5D), можно подтверждать, например, твердофазным иммуноферментным анализом (ELISA), радиоиммунным анализом (RIA), FACS-анализом, биоанализом (например, ингибированием роста) или вестерн-блоттингом. Каждый из этих анализов, как правило, позволяет обнаруживать наличие конкретных интересующих комплексов белок-антитело за счет использования меченого реагента (например, антитела или scFv), специфичного для интересующего комплекса. Например, scFv можно метить радиоактивной меткой и использовать в радиоиммунном анализе (RIA) (смотри, например, публикацию Weintraub, B., Principles of Radioimmunoassays, Seventh Training Course on Radioligand Assay Techniques, The Endocrine Society, March, 1986, содержание которой включено в настоящий документ посредством ссылки). Радиоактивный изотоп можно обнаруживать например, с помощью γ-счетчика или сцинтилляционного счетчика, или авторадиографии. В конкретных вариантах осуществления нацеленный на GPRC5D внеклеточный антигенсвязывающий домен мечен флуоресцентным маркером. Неограничивающие примеры флуоресцентных маркеров включают зеленый флуоресцентный белок (GFP), синий флуоресцентный белок (например, EBFP, EBFP2, азурит и mKa1ama1), циановый флуоресцентный белок (например, ECFP, лазурный и CyPet) и желтый флуоресцентный белок (например, YFP, цитрин, Венера и YPet). В конкретных вариантах осуществления нацеленный на GPRC5D scFv человека мечен GFP.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен раскрытого в настоящем документе CAR содержит одноцепочечный вариабельный фрагмент (scFv). В одном конкретном варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен раскрытого в настоящем документе CAR содержит scFv человека, который специфически связывается с GPRC5D человека. В другом конкретном варианте осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен раскрытого в настоящем документе CAR содержит scFv мыши, который специфически связывается с GPRC5D человека. В конкретных вариантах осуществления scFv идентифицируют путем скрининга фаговой библиотеки scFv с клетками (например, клетками 3T3), экспрессирующими GPRC5D.

Внеклеточный антигенсвязывающий домен CAR

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv) содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89 и 93. Нуклеотидными последовательностями, кодирующими аминокислотные последовательности SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89 и 93, являются SEQ ID NOS: 3, 7, 11, 15, 19, 23, 27, 31, 35, 39, 43, 47, 51, 55, 59, 63, 67, 71, 75, 79, 83, 87, 91 и 95, соответственно. В некоторых вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv) содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90 и 94. Нуклеотидными последовательностями, кодирующими аминокислотные последовательности SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90 и 94, являются SEQ ID NOS: 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28, 32, 36, 40, 44, 48, 52, 56, 60, 64, 68, 72, 76, 80, 84, 88, 92 и 96, соответственно. Последовательности SEQ ID NOS: 1-96 описаны в следующих далее таблицах 1-24.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv) содержит вариабельные области тяжелой и легкой цепи, содержащие аминокислотные последовательности, которые гомологичны аминокислотным последовательностям, описанным в настоящем документе и приведенным в таблицах 1-24. Например, и без ограничения, внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv) содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 и 386.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv) содержит вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375 и 387.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv) содержит (a) вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 1, 5, 9, 13, 17, 21, 25, 29, 33, 37, 41, 45, 49, 53, 57, 61, 65, 69, 73, 77, 81, 85, 89, 93, 302, 314, 326, 338, 350, 362, 374 и 386; и (b) вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 2, 6, 10, 14, 18, 22, 26, 30, 34, 38, 42, 46, 50, 54, 58, 62, 66, 70, 74, 78, 82, 86, 90, 94, 303, 315, 327, 339, 351, 363, 375 и 387.

Настоящее изобретение также относится к внеклеточным антигенсвязывающим доменам (например, scFv), которые содержат CDR вариабельной области тяжелой цепи и вариабельной области легкой цепи, например, CDR1, CDR2 и CDR3, приведенные в настоящем документе в таблицах 1-24. Границы областей CDR определены с использованием системы Kabat (Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, пятое издание, U.S. Department of Health и Human Services, NIH Publication No. 91-3242). Настоящее изобретение также относится к внеклеточным антигенсвязывающим доменам (например, scFv), которые имеют консервативные модификации последовательностей антитела, раскрытых в настоящем документе. Например, и без ограничения, внеклеточные антигенсвязывающие домены (например, scFv) по настоящему изобретению содержат вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, при этом одна или более из этих последовательностей CDR содержат конкретные аминокислотные последовательности, раскрытые в настоящем документе, или их консервативные модификации, и при этом внеклеточные антигенсвязывающие домены сохраняют желательные функциональные свойства.

В конкретных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к внеклеточному антигенсвязывающему домену (например, scFv), содержащему вариабельную область тяжелой цепи, при этом вариабельная область тяжелой цепи содержит: (a) CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 124, 130, 136, 142, 148, 154, 160, 166, 172, 178, 184, 190, 196, 202, 208, 214, 220, 226, 232, 238, 244, 250, 256, 262, 304, 316, 328, 340, 352, 364, 376 и 388, а также их консервативных модификаций; (b) CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 125, 131, 137, 143, 149, 155, 161, 167, 173, 179, 185, 191, 197, 203, 209, 215, 221, 227, 233, 239, 245, 251, 257, 263, 305, 317, 329, 341, 353, 365, 377 и 389, а также их консервативных модификаций; и (c) CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 126, 132, 138, 144, 150, 156, 162, 168, 174, 180, 186, 192, 198, 204, 210, 216, 222, 228, 234, 240, 246, 252, 258, 264, 306, 318, 330, 342, 354, 366, 378 и 390, а также их консервативных модификаций.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv) содержит вариабельную область легкой цепи, при этом вариабельная область легкой цепи содержит: (a) CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 127, 133, 139, 145, 151, 157, 163, 169, 175, 181, 187, 193, 199, 205, 211, 217, 223, 229, 235, 241, 247, 253, 259, 265, 307, 319, 331, 343, 355, 367, 379 и 391, а также их консервативных модификаций; (b) CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 128, 134, 140, 146, 152, 158, 164, 170, 176, 182, 188, 194, 200, 206, 212, 218, 224, 230, 236, 242, 248, 254, 260, 266, 308, 320, 332, 344, 356, 368, 380 и 392, а также их консервативных модификаций; и (c) CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 129, 135, 141, 147, 153, 159, 165, 171, 177, 183, 189, 195, 201, 207, 213, 219, 225, 231, 237, 243, 249, 255, 261, 267, 309, 321, 333, 345, 357, 369, 381 и 393, а также их консервативных модификаций.

Настоящее изобретение относится к внеклеточному антигенсвязывающему домену (например, scFv), содержащему вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, и вариабельную область легкой цепи, содержащую последовательности CDR1, CDR2 и CDR3, при этом: (a) CDR3 вариабельной области тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 126, 132, 138, 144, 150, 156, 162, 168, 174, 180, 186, 192, 198, 204, 210, 216, 222, 228, 234, 240, 246, 252, 258, 264, 306, 318, 330, 342, 354, 366, 378 и 390, а также их консервативных модификаций; и (b) CDR3 вариабельной области легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 129, 135, 141, 147, 153, 159, 165, 171, 177, 183, 189, 195, 201, 207, 213, 219, 225, 231, 237, 243, 249, 255, 261, 267, 309, 321, 333, 345, 357, 369, 381 и 393, а также их консервативных модификаций; при этом внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D человека). В конкретных вариантах осуществления CDR2 вариабельной области тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 125, 131, 137, 143, 149, 155, 161, 167, 173, 179, 185, 191, 197, 203, 209, 215, 221, 227, 233, 239, 245, 251, 257, 263, 305, 317, 329, 341, 353, 365, 377 и 389, а также их консервативных модификаций; и (b) CDR2 вариабельной области легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 128, 134, 140, 146, 152, 158, 164, 170, 176, 182, 188, 194, 200, 206, 212, 218, 224, 230, 236, 242, 248, 254, 260, 266, 308, 320, 332, 344, 356, 368, 380 и 392, а также их консервативных модификаций; при этом внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D человека). В конкретных вариантах осуществления CDR1 вариабельной области тяжелой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOs: 124, 130, 136, 142, 148, 154, 160, 166, 172, 178, 184, 190, 196, 202, 208, 214, 220, 226, 232, 238, 244, 250, 256, 262, 304, 316, 328, 340, 352, 364, 376 и 388, а также их консервативных модификаций; и (b) CDR1 вариабельной области легкой цепи содержит аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NOS: 127, 133, 139, 145, 151, 157, 163, 169, 175, 181, 187, 193, 199, 205, 211, 217, 223, 229, 235, 241, 247, 253, 259, 265, 307, 319, 331, 343, 355, 367, 379 и 391, а также их консервативных модификаций; при этом внеклеточный антигенсвязывающий домен специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D человека).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 100 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-153 scFv (другое название «ET150-3 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 2, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 1, смотри таблицу 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1, смотри таблицу 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2, смотри таблицу 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 2, смотри таблицу 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 1, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 2, смотри таблицу 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 124, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 125, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 126, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 127, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 128, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 129, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 124, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 125, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 126, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 127, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 128, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 129, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 1. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 124, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 125, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 126, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 127, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 128, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 129.

Таблица 1

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GYTFTSYY [SEQ ID NO: 124] GYTFTSYY [SEQ ID NO: 125] ARGMYRSLLFYDP [SEQ ID NO: 126] V_L RSNVGNYY [SEQ ID NO: 127] DNN [SEQ ID NO: 128] GTWDGSLSAHV [SEQ ID NO: 129] Полная V_H QVQLVQSGSELKKPGASVRVSCTASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGVINPNAGSTRYAQKFQGRVTMSTDTSTSTAYMDLSSLRSЭДТАVYYCARGMYRSLLFYDPWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 1] ДНК Caggtgcagctggtgcagtctgggtctgagttgaagaagcctggggcctcagtcagagtctcctgcacggcttctggatacaccttcaccagttactatatgcactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagtaatcaaccctaatgctggcagcacaagatacgcacagaaattccagggcagagtcaccatgagcactgacacgtccacgagcacagcctacatggacctgagcagtctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcgcgcggtatgtaccgttctctgctgttctacgatccgtggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 3] Полная V_L QSVLTQPPSVSAAPGQKVTIPCSGSRSNVGNYYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYFCGTWDGSLSAHVFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 2] ДНК Cagtctgtgttgacgcagccgccctcagtgtctgcggccccaggacagaaggtcaccatcccctgctctggaagccgttccaacgttgggaattattatgtgtcctggtaccagcaactcccaggaacagcccccaaactcctcatttatgacaataataagcgaccctcagggattcctgaccgattctctggctccaagtctggcacgtcagccaccctgggcatcaccggactccagactggggacgaggccgattatttctgcggaacatgggatggcagcctgagtgcccatgtcttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 4] scFv QSVLTQPPSVSAAPGQKVTIPCSGSRSNVGNYYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYFCGTWDGSLSAHVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGSELKKPGASVRVSCTASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGVINPNAGSTRYAQKFQGRVTMSTDTSTSTAYMDLSSLRSЭДТАVYYCARGMYRSLLFYDPWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 100]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 101 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-166 scFv (другое название «ET150-16 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 5, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 6, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv человека. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 5, смотри таблицу 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 5, смотри таблицу 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 6, смотри таблицу 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 6, смотри таблицу 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 5, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 6, смотри таблицу 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 130, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 131, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 132, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 133, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 134, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 135, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 130, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 131, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 132, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 133, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 134, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 135, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 2. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 130, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 131, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 132, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 133, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 134, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 135.

Таблица 2

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GFTFSNYA [SEQ ID NO: 130] ISGSGNT [SEQ ID NO: 131] ARGSVRYTDI [SEQ ID NO: 132] V_L SGAIAGAY [SEQ ID NO: 133] DDN [SEQ ID NO: 134] QSYDYDSSNVL [SEQ ID NO: 135] Полная V_H EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARGSVRYTDIWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 5] ДНК Gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttagcaactatgccatgagttgggtccgccaggctccagggaagggactggagtgggtctcagctattagtggtagtggtaacacatactacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgcggttctgttcgttacactgatatctggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 7] Полная V_L NFMLTQPHSVSESPGKTVSISCTRTSGAIAGAYVQWFQQRPGSAPTTVIYDDNKRPSGVPDRFSGSIDKSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDYDSSNVLFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 6] ДНК Aattttatgctgactcagccccactcagtgtcggagtctccggggaagacggtaagcatctcctgcacccgcaccagtggcgccattgccggcgcctatgtgcagtggttccagcagcgcccgggcagtgcccccaccactgtgatctatgacgataacaaaagaccctctggggtccctgatcggttctctgggtccatcgacaagtcctccaactctgcctccctcaccatctctggactgaagactgaggacgaggctgactattattgtcagtcttatgattatgatagcagcaatgtgctattcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 8] scFv NFMLTQPHSVSESPGKTVSISCTRTSGAIAGAYVQWFQQRPGSAPTTVIYDDNKRPSGVPDRFSGSIDKSSNSASLTISGLKTEDEADYYCQSYDYDSSNVLFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGNTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARGSVRYTDIWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 101]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 102 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-170 scFv (другое название «ET150-20 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 9, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 10, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 9, смотри таблицу 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 9, смотри таблицу 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 10, смотри таблицу 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 10, смотри таблицу 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 9, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 10, смотри таблицу 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 136, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 137, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 138, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 139, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 140, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 141, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 136, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 137, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 138, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 139, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 140, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 141, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 3. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 136, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 137, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 138, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 139, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 140, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 141.

Таблица 3

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GFTFNNYW [SEQ ID NO: 136] IKQDGSEK [SEQ ID NO: 137] ARSMSTAV [SEQ ID NO: 138] V_L QSISSY [SEQ ID NO: 139] AAS [SEQ ID NO: 140] QQSYSVPYT [SEQ ID NO: 141] Полная V_H EVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCATSGFTFNNYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYADSVRGRFTISRДНКKNSLSLQLNNLRAЭДТАVYYCARSMSTAWGYDEWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 9] ДНК Gaggtgcagctggtgcagtctgggggaggcttggtccagcctggggggtccctgagactctcctgtgcaacctctggattcacctttaataactattggatgagttgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtggccaacataaagcaagatggaagtgagaaatactacgcggactctgtgaggggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtctctgcaattgaacaacctgagagccgaggacacggccgtgtattactgtgcgcgctctatgtctactgcttggggttacgatgaatggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 11] Полная V_L DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPADFATYYCQQSYSVPYTFGQGTKLEIKR [SEQ ID NO: 10] ДНК Gacatccagttgacccagtctccatcctccctgtctgcatctgtcggagacagagtcaccatcacttgccgggcaagtcagagcattagcagctatttaaattggtatcaacagaaaccagggaaagcccctaagctcctgatctatgctgcatccagtttgcaaagtggggtcccatcaaggttcagtggcagtggatctgggacagatttcactctcaccatcagcagtctgcaacctgcagattttgcaacttactactgtcaacagagttacagtgtcccgtacacttttggccaggggaccaagctggagatcaaacgt [SEQ ID NO: 12] scFv DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISSYLNWYQQKPGKAPKLLIYAASSLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPADFATYYCQQSYSVPYTFGQGTKLEIKRSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGGGLVQPGGSLRLSCATSGFTFNNYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYADSVRGRFTISRДНКKNSLSLQLNNLRAЭДТАVYYCARSMSTAWGYDEWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 102]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 103 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-171 scFv (другое название «ET150-21 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 13, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 14, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 13, смотри таблицу 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 13, смотри таблицу 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 14, смотри таблицу 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 14, смотри таблицу 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 13, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 14, смотри таблицу 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 142, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 143, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 144, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 145, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 146, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 147, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 142, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 143, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 144, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 145, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 146, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 147, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 4. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 142, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 143, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 144, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 145, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 146, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 147.

Таблица 4

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GYTFTSYY [SEQ ID NO: 142] INPSGGST [SEQ ID NO: 143] ARGSSRWGGWTGDY [SEQ ID NO: 144] V_L SSDVGGYNF [SEQ ID NO: 145] DVS [SEQ ID NO: 146] SSYTSTRTVIFAGGTKVTVL [SEQ ID NO: 147] Полная V_H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARGSSRWGGWTGDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 13] ДНК Caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtttcctgcaaggcatctggatacaccttcaccagctactatatgcactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggaataatcaaccctagtggtggtagcacaaggtacgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccagggacacgtcaacgagcacagtctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcgcgcggttcttctcgctggggtggttggactggtgattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 15] Полная V_L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNFVSWYQQHPGKAPKVMIYDVSKRPSGISNRFSGSKSGNTASLTISGLQVEDEAEYYCSSYTSTRTVIFAGGTKVTVLG [SEQ ID NO: 14] ДНК Caatctgccctgactcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgatcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggtggttataactttgtctcctggtaccaacagcacccaggcaaagcccccaaagtcatgatttatgatgtcagtaagcggccctcagggatttctaatcgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccatctctgggctccaggttgaggacgaggctgaatattactgcagctcatatacaagcactagaactgtgatattcgccggagggaccaaggtcaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 16] scFv QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNFVSWYQQHPGKAPKVMIYDVSKRPSGISNRFSGSKSGNTASLTISGLQVEDEAEYYCSSYTSTRTVIFAGGTKVTVLG SRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTRYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARGSSRWGGWTGDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 103]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 104 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-175 scFv (другое название «ET150-25 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 17, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 18, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 17, смотри таблицу 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 17, смотри таблицу 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 18, смотри таблицу 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 18, смотри таблицу 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 17, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 18, смотри таблицу 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 148, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 149, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 150, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 151, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 152, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 153, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 148, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 149, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 150, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 151, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 152, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 153, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 5. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 148, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 149, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 150, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 151, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 152, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 153.

Таблица 5

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GSTFSSYA [SEQ ID NO: 148] ISGRGRST [SEQ ID NO: 149] ARYYKSKDH [SEQ ID NO: 150] V_L RSNIGTNY [SEQ ID NO: 151] RNH [SEQ ID NO: 152] AAWDDNLSGVV [SEQ ID NO: 153] Полная V_H EVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGSTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGRGRSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARYYKSSKDHWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 17] ДНК Gaggtgcagctggtggagactgggggaggcttggtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggatccacctttagcagctatgccatgagctgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcagctattagtggtcgtggtcgtagcacatactacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgctactacaaatcttctaaagatcattggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 19] Полная V_L QSVLTQPPSLSGAPGQRVTISCSGSRSNIGTNYVSWXQQLPGTAPKLLIYRNHQWPSGVPDRFTGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDNLSGVVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 18] ДНК Cagtctgtgttgacgcagccgccctcactgtctggggccccagggcagagggtcaccatctcttgttccggaagcaggtccaacatcggaactaattatgtatcctggnaccagcaactcccaggaacggcccccaaactcctcatctataggaatcatcagtggccctcaggggtccctgaccgattcactggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtgggctccggtccgaggatgaggctgattactactgtgcagcatgggatgacaatttgagtggtgtggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 20] scFv QSVLTQPPSLSGAPGQRVTISCSGSRSNIGTNYVSWXQQLPGTAPKLLIYRNHQWPSGVPDRFTGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDNLSGVVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVETGGGLVQPGGSLRLSCAASGSTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGRGRSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARYYKSSKDHWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 104]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 105 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-154 scFv (другое название «ET150-4 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 21, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 22, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 21, смотри таблицу 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 21, смотри таблицу 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 22, смотри таблицу 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 22, смотри таблицу 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 21, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 22, смотри таблицу 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 154, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 155, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 156, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 157, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 158, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 159, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 154, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 155, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 156, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 157, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 158, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 159, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 6. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 154, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 155, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 156, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 157, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 158, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 159.

Таблица 6

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H AYTFTDYY [SEQ ID NO: 154] INPKSGRT [SEQ ID NO: 155] ARVYGYSRWSGFDL [SEQ ID NO: 156] V_L SSNIGSNY [SEQ ID NO: 157] RNN [SEQ ID NO: 158] AAWDDSLSGYV [SEQ ID NO: 159] Полная V_H QVQLVQSGAEVQRPGASVRVSCKAIAYTFTDYYIHWVRQAPGQGPEWMGWINPKSGRTQYAPKFQDRVTLARETPISTASMELRGLTSDDTAVYYCARVYGYSRWSGFDLWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 21] ДНК Caggtccagctggtgcagtctggggctgaggtgcagaggcctggggcctcagtgagggtctcctgcaaggctattgcgtacaccttcaccgactactatatccactgggtgcgacaggcccctggacaagggcctgagtggatggggtggatcaaccctaaaagtggtcgcacacagtatgcaccgaagtttcaagacagggtcaccctggccagggagacgcccatcagcacagcctccatggagctgcgcggactgacatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgcgcgtttacggttactctcgttggtctggtttcgatctgtggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 23] Полная V_L QAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGYVFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 22] ДНК Caggctgtgctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatctcttgttctggaagcagctccaacatcggaagtaattatgtatactggtaccagcagctcccaggaacggcccccaaactcctcatctataggaataatcagcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtgggctccggtccgaggatgaggctgattattactgtgcagcatgggatgacagcctgagtggttatgtcttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 24] scFv QAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVQRPGASVRVSCKAIAYTFTDYYIHWVRQAPGQGPEWMGWINPKSGRTQYAPKFQDRVTLARETPISTASMELRGLTSDDTAVYYCARVYGYSRWSGFDLWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 105]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-156 scFv (другое название «ET150-6 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 25, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 26, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 25, смотри таблицу 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 25, смотри таблицу 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 26, смотри таблицу 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 26, смотри таблицу 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 25, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 26, смотри таблицу 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 160, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 161, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 162, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 163, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 164, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 165, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 160, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 161, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 162, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 163, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 164, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 165, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 7. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 160, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 161, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 162, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 163, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 164, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 165.

Таблица 7

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GYTFTTYY [SEQ ID NO: 160] INPNGGGT [SEQ ID NO: 161] ARGHKVYKSHPTGGYDR [SEQ ID NO: 162] V_L SRDVGGYNY [SEQ ID NO: 163] EVS [SEQ ID NO: 164] SSYTSSSTLD [SEQ ID NO: 165] Полная V_H QVQLVQSGAEVKQPGASVKVSCQASGYTFTTYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPNGGGTFYAQKFQDRVTMTRDTSTGTVYMELSSLRSDDTAVYYCARGHKVYKSHPTGGYDRWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 25] ДНК Caggtgcagctggtgcaatctggggctgaggtgaagcagcctggggcctcagtgaaggtttcctgccaggcatctggatacaccttcaccacttattatatgcactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggaataatcaaccctaatggtggtggcacattctacgcacagaagttccaggacagagtcaccatgaccagggacacgtccacgggcacagtctacatggaactgagcagcctgagatctgacgacactgccgtgtattactgtgcgcgcggtcataaagtttacaaatctcatccgactggtggttacgatcgttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 27] Полная V_L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSRDVGGYNYVSWYQQYPGKAPKLMIYEVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLDFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 26] ДНК Caatctgccctgactcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgatcaccatctcctgcactggaaccagccgtgacgttggtggttataactatgtctcctggtaccaacagtacccaggcaaagcccccaaactcatgatttatgaggtcagtaagcggccctcaggggtttctaatcgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgcagctcatataccagtagcagcactttagacttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 28] scFv QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSRDVGGYNYVSWYQQYPGKAPKLMIYEVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLDFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKQPGASVKVSCQASGYTFTTYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPNGGGTFYAQKFQDRVTMTRDTSTGTVYMELSSLRSDDTAVYYCARGHKVYKSHPTGGYDRWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 106]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-157 scFv (другое название «ET150-7 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 29, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 30, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 29, смотри таблицу 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 29, смотри таблицу 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 30, смотри таблицу 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 30, смотри таблицу 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 29, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 30, смотри таблицу 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 166, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 167, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 168, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 169, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 170, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 171, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 166, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 167, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 168, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 169, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 170, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 171, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 8. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 166, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 167, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 168, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 169, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 170, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 171.

Таблица 8

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GGTFSSYA [SEQ ID NO: 166] IIPIFGTA [SEQ ID NO: 167] ARSHVAWSLLDY [SEQ ID NO: 168] V_L SSNIGSNY [SEQ ID NO: 169] RNN [SEQ ID NO: 170] AAWDDSLSGVV [SEQ ID NO: 171] Полная V_H EVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTAKYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSЭДТАVYYCARSHVAWSLLDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 29] ДНК Gaggtccagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctgggtcctcggtgaaggtctcctgcaaggcttctggaggcaccttcagcagctatgctatcagctgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggagggattatccctatctttggtacagcaaaatatgcacagaagttccagggcagagtcacgattaccgcggacgaatccacgagcacagcctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcgcgctctcatgttgcttggtctctgctggattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 31] Полная V_L SYELTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVSWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGVVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 30] ДНК Tcctatgagctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatctcttgttctggaagcagctccaacatcggaagtaattatgtatcctggtaccagcagctcccaggaacggcccccaaactcctcatctataggaataatcagcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtgggctccggtccgaggatgaggctgattattactgtgcagcatgggatgacagcctgagtggtgtggtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 32] scFv SYELTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVSWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGVVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGTAKYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSЭДТАVYYCARSHVAWSLLDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 107]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 108 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-159 scFv (другое название «ET150-9 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 33, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 34, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 33, смотри таблицу 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 33, смотри таблицу 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 34, смотри таблицу 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 34, смотри таблицу 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 33, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 34, смотри таблицу 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 172, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 173, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 174, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 175, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 176, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 177, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 172, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 173, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 174, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 175, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 176, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 177, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 9. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 172, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 173, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 174, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 175, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 176, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 177.

Таблица 9

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GGTFSSYA [SEQ ID NO: 172] MNPNSGNT [SEQ ID NO: 173] ARYQSYKGSQSDS [SEQ ID NO: 174] V_L SSNIGSNY[SEQ ID NO: 175] RNN [SEQ ID NO: 176] AAWDDSLSGWV [SEQ ID NO: 177] Полная V_H QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGWMNPNSGNTGYAQKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSЭДТАVYYCARYQSYKGSQSDSWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 33] ДНК Caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctgggtcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggaggcaccttcagcagctatgctatcagctgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggatggatgaaccctaacagtggtaacacaggctatgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccaggaacacctccataagcacagcctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcgcgctaccagtcttacaaaggttctcagtctgattcttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 35] Полная V_L QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 34] ДНК Cagtctgtgttgacgcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatctcttgttctggaagcagctccaacatcggaagtaattatgtatactggtaccagcagctcccaggaacggcccccaaactcctcatctataggaataatcagcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtgggctccggtccgaggatgaggctgattattactgtgcagcatgggatgacagcctgagtggttgggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 36] scFv QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGWVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSYAISWVRQAPGQGLEWMGWMNPNSGNTGYAQKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSЭДТАVYYCARYQSYKGSQSDSWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 108]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 109 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-160 scFv (другое название «ET150-10 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 37, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 38, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 37, смотри таблицу 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 37, смотри таблицу 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 38, смотри таблицу 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 38, смотри таблицу 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 37, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 38, смотри таблицу 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 178, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 179, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 180, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 181, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 182, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 183, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 178, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 179, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 180, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 181, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 182, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 183, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 10. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 178, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 179, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 180, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 181, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 182, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 183.

Таблица 10

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GYTFTSYY[SEQ ID NO: 178] INPSGGST [SEQ ID NO: 179] ARGGSKKWSGEKWRRENFDY [SEQ ID NO: 180] V_L SSDVGGYNY [SEQ ID NO: 181] DVS [SEQ ID NO: 182] SSYTRSSTEV [SEQ ID NO: 183] Полная V_H EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARGGSKKWSGEKWRRENFDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 37] ДНК Gaggtccagctggtacagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtttcctgcaaggcatctggatacaccttcaccagctactatatgcactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggaataatcaaccctagtggtggtagcacaagctacgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccagggacacgtccacgagcacagtctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcgcgcggtggttctaaaaaatggtctggtgaaaaatggcgtcgtgaaaacttcgattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 39] Полная V_L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTRSSTEVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 38] ДНК Caatctgccctgactcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgatcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggtggttataactatgtctcctggtaccaacagcacccaggcaaagcccccaaactcatgatttatgatgtcagtaagcggccctcaggggtttctaatcgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgcagctcatatacaagaagcagcactgaggtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 40] scFv QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTRSSTEVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARGGSKKWSGEKWRRENFDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 109]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 110 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-161 scFv (другое название «ET150-11 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 41, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 42, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 41, смотри таблицу 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 41, смотри таблицу 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 42, смотри таблицу 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 42, смотри таблицу 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 41, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 42, смотри таблицу 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 184, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 185, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 186, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 187, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 188, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 189, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 184, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 185, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 186, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 187, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 188, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 189, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 11. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 184, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 185, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 186, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 187, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 188, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 189.

Таблица 11

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H EYTFTRHI [SEQ ID NO: 184] INPGNGNT [SEQ ID NO: 185] ARLPDQ [SEQ ID NO: 186] V_L SSNIGSNT [SEQ ID NO: 187] RNN [SEQ ID NO: 188] AAWDDSLSGL [SEQ ID NO: 189] Полная V_H QMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASEYTFTRHILHWVRQAPGQSLEWMGWINPGNGNTKYSQKFQVRVTFTRDTSASTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARLPDQWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 41] ДНК Cagatgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtttcctgcaaggcttctgaatacaccttcactaggcatattctacattgggtgcgccaggctcccggacaaagccttgagtggatgggatggatcaacccaggcaatggtaatacaaaatattcacagaagttccaggtcagagtcacctttaccagggacacatccgcgagcacagtctatatggagctgagcagcctgagatctgaagacacggccgtgtattactgtgcgcgcctgccggatcagtggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 43] Полная V_L SYVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGLFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 42] ДНК Tcctatgtgctgactcagccaccctcagcgtctgggacccccgggcagagggtcaccatctcttgttctggaagcagctccaacatcggaagtaatactgtaaactggtaccagcagctcccaggaacggcccccaaactcctcatctataggaataatcagcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcagtgggctccggtccgaggatgaggctgattattactgtgcagcatgggatgacagcctgagtggtctcttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 44] scFv SYVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGLFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASEYTFTRHILHWVRQAPGQSLEWMGWINPGNGNTKYSQKFQVRVTFTRDTSASTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARLPDQWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 110]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 111 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-162 scFv (другое название «ET150-12 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 45, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 46, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 45, смотри таблицу 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 45, смотри таблицу 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 46, смотри таблицу 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 46, смотри таблицу 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 45, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 46, смотри таблицу 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 190, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 191, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 192, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 193, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 194, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 195, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 190, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 191, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 192, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 193, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 194, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 195, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 12. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 190, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 191, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 192, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 193, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 194, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 195.

Таблица 12

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GFTFGDYG [SEQ ID NO: 190] INWNGGST [SEQ ID NO: 191] ARSKQDY [SEQ ID NO: 192] V_L SRDAGGYNY [SEQ ID NO: 193] EVT [SEQ ID NO: 194] SSYGGSNNFRV [SEQ ID NO: 195] Полная V_H EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFGDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRДНКKNSLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARSKQDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 45] ДНК Gaggtgcagctggtggagtctgggggaggtgtggtacggcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttggtgattatggcatgagctgggtccgccaagctccagggaaggggctggagtgggtctctggtattaattggaatggtggtagcacaggttatgcagactctgtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactccctgtatctgcaaatgaacagtctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgctctaaacaggattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 47] Полная V_L QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSRDAGGYNYFSWYQQHPGKAPKLLIYEVTKRPSGVPDRFSGSKSGKTASLTVSGLQADDEAVYYCSSYGGSNNFRVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 46] ДНК Cagtctgccctgactcagcctccctccgcgtccgggtctcctggacagtcagtcaccatctcctgcactggaaccagcagggacgctggtggttataattatttctcctggtaccaacaacacccaggcaaagcccccaaactcctgatttatgaggtcactaagcggccctcaggggtccctgatcgcttctctggctccaagtctggcaagacggcctccctgaccgtctctgggctccaggctgacgatgaggctgtatattactgcagctcatatggaggcagcaacaactttcgggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 48] scFv QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSRDAGGYNYFSWYQQHPGKAPKLLIYEVTKRPSGVPDRFSGSKSGKTASLTVSGLQADDEAVYYCSSYGGSNNFRVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFGDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRДНКKNSLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARSKQDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 111]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 112 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-163 scFv (другое название «ET150-13 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 49, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 50, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 49, смотри таблицу 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 49, смотри таблицу 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 50, смотри таблицу 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 50, смотри таблицу 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 49, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 50, смотри таблицу 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 196, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 197, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 198, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 199, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 200, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 201, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 196, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 197, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 198, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 199, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 200, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 201, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 13. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 196, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 197, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 198, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 199, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 200, и V_L CDR3 содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 201.

Таблица 13

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GFSFSGTA[SEQ ID NO: 196] ISSTGRST [SEQ ID NO: 197] ARVSFDY [SEQ ID NO: 198] V_L SSNIGAGYD [SEQ ID NO: 199] GNS [SEQ ID NO: 200] QSYDSSLSGSYV [SEQ ID NO: 201] Полная V_H EVQLVETGGNLVQPGASLRLSCAASGFSFSGTAMHWVRQAPGKGLEWVSTISSTGRSTYYRDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRGЭДТАVYYCARVSFDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 49] ДНК Gaggtgcagctggtggagactgggggaaacttggtacagccgggggcgtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcagctttagtggcactgccatgcactgggtccgccaggctccagggaaggggctggaatgggtctcgactattagtagtactgggcgtagcacatactacagagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagaggcgaggacacggccgtatattactgtgcgcgcgtttctttcgattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 51] Полная V_L QSVVTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGSYVFGTGTKLTVLG [SEQ ID NO: 50] ДНК Cagtctgtcgtgacgcagccgccctcagtgtctggggccccagggcagagggtcaccatctcctgcactgggagcagctccaacatcggggcaggttatgatgtacactggtaccagcagcttccaggaacagcccccaaactcctcatctatggtaacagcaatcggccctcaggggtccctgaccgattctctggctccaagtctggcacctcagcctccctggccatcactgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgccagtcctatgacagcagcctgagtggctcctacgtcttcggaactgggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 52] scFv QSVVTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLSGSYVFGTGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVETGGNLVQPGASLRLSCAASGFSFSGTAMHWVRQAPGKGLEWVSTISSTGRSTYYRDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRGЭДТАVYYCARVSFDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 112]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 113 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-151 scFv (другое название «ET150-1 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 53, смотри таблицу 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53, смотри таблицу 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 54, смотри таблицу 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54, смотри таблицу 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 53, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 54, смотри таблицу 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 202, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 203, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 204, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 205, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 206, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 207, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 202, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 203, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 204, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 205, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 206, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 207, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 14. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 202, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 203, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 204, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 205, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 206, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 207.

Таблица 14

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GFTFSSYA [SEQ ID NO: 202] ISGRGRST [SEQ ID NO: 203] ARYYHAGAFDL [SEQ ID NO: 204] V_L SSDVGGYNY [SEQ ID NO: 205] DVS [SEQ ID NO: 206] SSYTSSSTLV [SEQ ID NO: 207] Полная V_H EVQLVESGGAFVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMTWVRQAPGKGLEWVSTISGRGRSTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARYYHAGAFDLWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 53] ДНК Gaggtgcagctggtggagtctgggggagcctttgtacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttagcagctatgccatgacctgggtccgccaggctccagggaagggcctggaatgggtctcgactattagtggtcgtggtcgtagcacattctacgcagactccgtgaagggccggtttaccatctccagagacaattccaagaacacgctatatctgcaaatgaacagtctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgctactaccatgctggtgctttcgatctgtggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 55] Полная V_L QSVVTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 54] ДНК Cagtctgtcgtgacgcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgatcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggtggttataactatgtctcctggtaccaacagcacccaggcaaagcccccaaactcatgatttatgatgtcagtaagcggccctcaggggtttctaatcgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgcagctcatatacaagcagcagcactttggtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 56] scFv QSVVTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSKRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVESGGAFVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMTWVRQAPGKGLEWVSTISGRGRSTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARYYHAGAFDLWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 113]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 114 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-152 scFv (другое название «ET150-2 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 57, смотри таблицу 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, смотри таблицу 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 58, смотри таблицу 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58, смотри таблицу 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58, смотри таблицу 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213.

Таблица 15

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GYTFNRYA [SEQ ID NO: 208] ISAYNGNS [SEQ ID NO: 209] ARMAYDS [SEQ ID NO: 210] V_L SNDVGAYKY [SEQ ID NO: 211] DVF [SEQ ID NO: 212] FSLTSSNTYV [SEQ ID NO: 213] Полная V_H QMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFNRYAITWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNSHYAQKLQGRVTMTTDTSTGTAYMELRRLRSDDTAVYYCARMAYDSWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 57] ДНК Cagatgcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggttacacctttaacagatatgctatcacctgggtgcgacaggcccctggacaaggccttgagtggatgggatggatcagcgcttacaatggtaattcacactatgcacagaagctccagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgggcacagcctatatggagctgaggaggctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgcgcatggcttacgattcttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 59] Полная V_L QSVLTQPASVSGSPGQSLTISCTGTSNDVGAYKYVSWYQQYPGKAPKLILYDVFKRPSGVSNRFSGSKSDNTASLTISGLQAEDEADYYCFSLTSSNTYVFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 58] ДНК Cagtctgtgttgacgcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgctcaccatctcctgcactggaaccagcaatgacgttggtgcttataagtatgtctcctggtatcaacagtacccaggcaaagcccccaaactcatactttatgatgtctttaagcggccctcaggggtctctaatcgcttctctggctccaagtctgacaacacggcctccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgcttctcacttacaagcagtaacacttatgtcttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 60] scFv QSVLTQPASVSGSPGQSLTISCTGTSNDVGAYKYVSWYQQYPGKAPKLILYDVFKRPSGVSNRFSGSKSDNTASLTISGLQAEDEADYYCFSLTSSNTYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFNRYAITWVRQAPGQGLEWMGWISAYNGNSHYAQKLQGRVTMTTDTSTGTAYMELRRLRSDDTAVYYCARMAYDSWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 114]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 115 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-155 scFv (другое название «ET150-5 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFV, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 61, смотри таблицу 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, смотри таблицу 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 62, смотри таблицу 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62, смотри таблицу 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62, смотри таблицу 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219.

Таблица 16

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GFTFSDYY [SEQ ID NO: 214] ISSSGSTI [SEQ ID NO: 215] ARGYGKAYDQ [SEQ ID NO: 216] V_L RSNVGGNY [SEQ ID NO: 217] RSN [SEQ ID NO: 218] ATWDDSLSGFV [SEQ ID NO: 219] Полная V_H EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRДНКKNSLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARGYGKAYDQWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 61] ДНК Gaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtcaagcctggagggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtgactactacatgagctggatccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtttcatacattagtagtagtggtagtaccatatactacgcagactctgtgaagggccgattcaccatctccagggacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgcggttacggtaaagcttacgatcagtggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 63] Полная V_L QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNVGGNYVFWYQQVPGATPKLLIYRSNQRPSGVPDRFAGSKSGSSASLAISGLRSEDEADYYCATWDDSLSGFVFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 62] ДНК Cagtctgtgttgactcagccaccctcagcgtctgggacccccggacagagggtcaccatctcttgttctggaagcaggtccaacgtaggaggtaattatgtattttggtaccagcaagtccccggagcgacccccaaactcctcatctataggagtaatcagcggccctcgggggtccctgaccgattcgctggctccaagtctggctcctcagcctccctggccatcagtggactccggtccgaggatgaggctgattattactgtgcaacatgggatgacagcctgagtggttttgtcttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 64] scFv QSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSRSNVGGNYVFWYQQVPGATPKLLIYRSNQRPSGVPDRFAGSKSGSSASLAISGLRSEDEADYYCATWDDSLSGFVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSDYYMSWIRQAPGKGLEWVSYISSSGSTIYYADSVKGRFTISRДНКKNSLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARGYGKAYDQWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 115]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 116 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-158 scFv (другое название «ET150-8 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 65, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 66, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225.

Таблица 17

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GFTFRSHS [SEQ ID NO: 220] ISSDSTYT [SEQ ID NO: 221] ARSGGQWKYYDY [SEQ ID NO: 222] V_L SLRSYY [SEQ ID NO: 223] GKN [SEQ ID NO: 224] NSRDSSGNPPVV [SEQ ID NO: 225] Полная V_H QVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFRSHSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSDSTYTYYADSVKGRFTISRДНКKNSLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARSGGQWKYYDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 65] ДНК Caggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtccaccctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagaagccatagcatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatccattagtagtgatagtacttacacatactacgcagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgctctggtggtcagtggaaatactacgattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 67] Полная V_L SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNPPVVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 66] ДНК Tcttctgagctgactcaggaccctgctgtgtctgtggccttgggacagacagtcaggatcacatgccaaggagacagcctcagaagctattatgcaagctggtaccagcagaagccaggacaggcccctgtacttgtcatctatggtaaaaacaaccggccctcagggatcccagaccgattctctggctccagctcaggaaacacagcttccttgaccatcactggggctcaggcggaagatgaggctgactattactgtaactcccgggacagcagtggtaacccccctgtggtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 68] scFv SSELTQDPAVSVALGQTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSSSGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGNPPVVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVESGGGLVHPGGSLRLSCAASGFTFRSHSMNWVRQAPGKGLEWVSSISSDSTYTYYADSVKGRFTISRДНКKNSLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARSGGQWKYYDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 116]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 117 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-168 scFv (другое название «ET150-18 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 69, смотри таблицу 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, смотри таблицу 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 70, смотри таблицу 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70, смотри таблицу 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70, смотри таблицу 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231.

Таблица 18

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GFTFSNYA [SEQ ID NO: 226] INGRGSST [SEQ ID NO: 227] ARYISRGLGDS [SEQ ID NO: 228] V_L NSNIERNY[SEQ ID NO: 229] DND [SEQ ID NO: 230] GTWDSSLRGWV [SEQ ID NO: 231] Полная V_H EVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMNWVRQAPGKGLEWVSTINGRGSSTIYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAЭДТАTYYCARYISRGLGDSWGQGTLVTV [SEQ ID NO: 69] ДНК Gaggtgcagctggtggagtccgggggaggcttgatacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttagcaactatgccatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaactattaatggtcgtggtagtagtacaatctacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacagccacgtattactgtgcgcgctacatctctcgtggtctgggtgattcttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 71] Полная V_L QSVVTQPPSMSAAPGQQVTISCSGGNSNIERNYVSWYLQLPGTAPKLVIFDNDRRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLRGWVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 70] ДНК Cagtctgtcgtgacgcagccgccctcaatgtctgcggccccaggacagcaagtcaccatctcctgctctggaggcaactccaacattgagagaaattatgtatcctggtacctccagctccctggaacagcccccaaactcgtcatttttgacaatgataggcgaccctcagggattcctgaccgattctctggctccaagtctggcacgtcagccaccctgggcatcaccggactccagactggggacgaggccgattattactgcggaacatgggatagcagcctgagaggttgggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 72] scFv QSVVTQPPSMSAAPGQQVTISCSGGNSNIERNYVSWYLQLPGTAPKLVIFDNDRRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLRGWVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVESGGGLIQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMNWVRQAPGKGLEWVSTINGRGSSTIYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAЭДТАTYYCARYISRGLGDSWGQGTLVTV [SEQ ID NO: 117]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 118 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-164 scFv (другое название «ET150-14 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 73, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 74, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 73, смотри таблицу 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 73, смотри таблицу 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 74, смотри таблицу 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 74, смотри таблицу 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 73, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 74, смотри таблицу 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 232, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 233, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 234, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 235, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 236, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 237, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 232, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 233, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 234, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 235, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 236, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 237, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 19. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 232, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 233, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 234, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 235, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 236, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 237.

Таблица 19

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GYTFTSYY [SEQ ID NO: 232] INPSGGST [SEQ ID NO: 233 ARAGMGMDT [SEQ ID NO: 234] V_L SSDVGGYNY [SEQ ID NO: 235] EVS [SEQ ID NO: 236] SSYAGSNTLV [SEQ ID NO: 237] Полная V_H QMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARAGMGMDTWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 73] ДНК Cagatgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtttcctgcaaggcatctggatacaccttcaccagctactatatgcactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggaataatcaaccctagtggtggtagcacaagctacgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccagggacacgtccacgagcacagtctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcgcgcgctggtatgggtatggatacttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 75] Полная V_L QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSNTLVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 74] ДНК Cagtctgccctgactcagcctccctccgcgtccgggtctcctggacagtcagtcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggtggttataactatgtctcctggtaccaacagcacccaggcaaagcccccaaactcatgatttatgaggtcagtaagcggccctcaggggtccctgatcgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccgtctctgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgcagctcatatgcaggcagcaacaccttggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 76] scFv QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSNTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARAGMGMDTWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 118]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 119 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-165 scFv (другое название «ET150-15 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 77, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 78, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 77, смотри таблицу 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 77, смотри таблицу 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 78, смотри таблицу 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 78, смотри таблицу 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 77, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 78, смотри таблицу 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 238, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 239, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 240, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 241, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 242, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 243, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 238, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 239, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 240, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 241, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 242, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 243, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 20. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 238, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 239, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 240, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 241, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 242, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 243.

Таблица 20

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GYTFTAYS [SEQ ID NO: 238] INPSSGGA [SEQ ID NO: 239] ARNVGGQADD [SEQ ID NO: 240] V_L SSDIGGYNY [SEQ ID NO: 241] EVN [SEQ ID NO: 242] ASFAGRKTLV [SEQ ID NO: 243] Полная V_H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCRASGYTFTAYSLHWVRQAPGQGLEWMGWINPSSGGAVYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSGLRSDDTAVYYCARNVGGQADDWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 77] ДНК Caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcagggcttctggatacaccttcaccgcctactctttacactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggatggatcaaccctagcagtggtggcgcagtttatgcacagaaatttcagggtagggtcaccatgaccagggacacgtccatcagcacagcctacatggagctgagtggcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgcgcaacgttggtggtcaggctgatgactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 79] Полная V_L QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDIGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVNKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCASFAGRKTLVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 78] ДНК Caatctgccctgactcagcctccctccgcgtccgggtctcctggacagtcagtcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacattggtggttataactatgtctcctggtaccaacagcacccaggcaaagcccccaaactcatgatttatgaggtcaataagcggccctcaggggtccctgatcgcttctcgggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccgtctctgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgcgcctcatttgcgggcaggaagacattggtcttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 80] scFv QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDIGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVNKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCASFAGRKTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCRASGYTFTAYSLHWVRQAPGQGLEWMGWINPSSGGAVYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSGLRSDDTAVYYCARNVGGQADDWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 119]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 120 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-167 scFv (другое название «ET150-17 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 81, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 82, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 81, смотри таблицу 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 81, смотри таблицу 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 82, смотри таблицу 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 82, смотри таблицу 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 81, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 82, смотри таблицу 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 244, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 245, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 246, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 247, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 248, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 249, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 244, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 245, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 246, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 247, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 248, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 249, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 21. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 244, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 245, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 246, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 247, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 248, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 249.

Таблица 21

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GYTFTAYS [SEQ ID NO: 244] INPSSGGA [SEQ ID NO: 245] ARNVGGHADD [SEQ ID NO: 246] V_L STDIGGYNY [SEQ ID NO: 247] EVN [SEQ ID NO: 248] ASFAGRKTLV [SEQ ID NO: 249] Полная V_H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCRASGYTFTAYSLHWVRQAPGQGLEWMGWINPSSGGAVYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSGLRSDDTAVYYCARNVGGHADDWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 81] ДНК Caggtgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaaaaagcctggggcctcagtgaaagtctcctgcagggcttctggatacaccttcaccgcctactctttacactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggatggatcaaccctagcagtggtggcgcagtttatgcacagaaatttcagggtagggtcaccatgaccagggacacgtccatcagcacagcctacatggagctgagtggcctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgcgcaacgttggtggtcacgctgatgactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 83] Полная V_L QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSTDIGGYNYVSWYQHHPSKAPKLMIYEVNKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCASFAGRKTLVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 82] ДНК Caatctgccctgactcagcctccctccgcgtccgggtctcctggacagtcagtcaccatctcctgcactggaaccagcactgacattggtggttataactatgtctcctggtaccaacaccacccaagcaaagcccccaaactcatgatttatgaggtcaataagcggccctcaggggtccctgatcgcttctcgggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccgtctctgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgcgcctcatttgcgggcaggaagacattggtcttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 84] scFv QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSTDIGGYNYVSWYQHHPSKAPKLMIYEVNKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCASFAGRKTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCRASGYTFTAYSLHWVRQAPGQGLEWMGWINPSSGGAVYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSGLRSDDTAVYYCARNVGGHADDWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 120]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 121 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-169 scFv (другое название «ET150-19 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 85, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 86, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 85, смотри таблицу 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 85, смотри таблицу 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 86, смотри таблицу 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 86, смотри таблицу 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 85, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 86, смотри таблицу 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 250, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 251, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 252, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 253, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 254, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 255, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 250, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 251, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 252, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 253, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 254, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 255, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 22. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 250, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 251, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 252, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 253, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 254, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 255.

Таблица 22

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GFTFNTYG [SEQ ID NO: 250] ISANNGHT [SEQ ID NO: 251] ARGGYHHQMQRYYKATSVYSDY [SEQ ID NO: 252] V_L SSNIGNNY [SEQ ID NO: 253] DNN [SEQ ID NO: 254] GTWDSSLSGVV [SEQ ID NO: 255] Полная V_H QVQLVQSGGEVKKPGASVKVSCKASGFTFNTYGISWVRQAPGQGLEWMGWISANNGHTKSAQRFQDRVAMATDTSTSTAYMELRSLKFDDTAVYYCARGGYHHQMQRYYKATSVYSDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 85] ДНК Caggtccagctggtgcagtctggaggtgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggtttcacctttaacacctatggcatcagttgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggatggatcagcgctaacaatggtcacacaaagtctgcacagaggttccaggacagagtcgccatggccacagacacatccacgagcacggcctacatggagctgaggagcctgaaatttgacgacacggccgtgtattactgtgcgcgcggtggttaccatcatcagatgcagcggtactacaaagctacttctgtttactctgattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 87] Полная V_L QSVVTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSGVVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 86] ДНК Cagtctgtcgtgacgcagccgccctcagtgtctgcggccccaggacagaaggtcaccatctcctgctctggaagcagctccaacattgggaataattatgtatcctggtaccagcaactcccaggaacagcccccaaactcctcatttatgacaataataagcgaccctcagggattcctgaccgattctctggctccaagtctggcacgtctgccaccctgggcatcaccggactccagactggggacgaggccgattattactgcggaacatgggatagcagcctgagtggtgtggtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 88] scFv QSVVTQPPSVSAAPGQKVTISCSGSSSNIGNNYVSWYQQLPGTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSATLGITGLQTGDEADYYCGTWDSSLSGVVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGGEVKKPGASVKVSCKASGFTFNTYGISWVRQAPGQGLEWMGWISANNGHTKSAQRFQDRVAMATDTSTSTAYMELRSLKFDDTAVYYCARGGYHHQMQRYYKATSVYSDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 121]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 122 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-172 scFv (другое название «ET150-22 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 89, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 90, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 89, смотри таблицу 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 89, смотри таблицу 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 90, смотри таблицу 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 90, смотри таблицу 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 89, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 90, смотри таблицу 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 256, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 257, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 258, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 259, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 260, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 261, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 256, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 257, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 258, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 259, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 260, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 261, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 23. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 256, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 257, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 258, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 259, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 260, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 261.

Таблица 23

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GYTFTSYY [SEQ ID NO: 256] INPSGGSS [SEQ ID NO: 257] ARAGMGMDT [SEQ ID NO: 258] V_L SSDVGGYNY [SEQ ID NO: 259] EVS [SEQ ID NO: 260] SSYAGSNTLV [SEQ ID NO: 261] Полная V_H QMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSSSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARAGMGMDTWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 89] ДНК Cagatgcagctggtgcagtctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtttcctgcaaggcatctggatacaccttcaccagctactatatgcactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggaataatcaaccctagtggtggtagctcaagctacgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccagggacacgtccacgagcacagtctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacacggccgtgtattactgtgcgcgcgctggtatgggtatggatacttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 91] Полная V_L QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSNTLVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 90] ДНК Cagtctgccctgactcagcctccctccgcgtccgggtctcctggacagtcagtcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggtggttataactatgtctcctggtaccaacagcacccaggcaaagcccccaaactcatgatttatgaggtcagtaagcggccctcaggggtccctgatcgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccgtctctgggctccaggctgaggatgaggctgattattactgcagctcatatgcaggcagcaacaccttggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 92] scFv QSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYEVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSNTLVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSSSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARAGMGMDTWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 122]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 123 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-173 scFv (другое название «ET150-23 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 93, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 94, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 93, смотри таблицу 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 93, смотри таблицу 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 94, смотри таблицу 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 94, смотри таблицу 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 93, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 94, смотри таблицу 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 262, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 263, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 264, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 265, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 266, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 267, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 262, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 263, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 264, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 265, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 266, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 267, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 24. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 262, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 263, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 264, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 265, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 266, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 267.

Таблица 24

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GYTFTSYY [SEQ ID NO: 262] INPSGGST [SEQ ID NO: 263] ARDVISGFDS [SEQ ID NO: 264] V_L SSDVGGYNY [SEQ ID NO: 265] GVS [SEQ ID NO: 266] SSYAGVNNLM [SEQ ID NO: 267] Полная V_H QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARDVISGFDSWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 93] ДНК Caggtgcagctggtgcaatctggggctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtttcctgcaaggcatctggatacaccttcaccagctactatatgcactgggtgcgacaggcccctggacaagggcttgagtggatgggaataatcaaccctagtggtggtagcacaagctacgcacagaagttccagggcagagtcaccatgaccagggacacgtccacgagcacagtctacatggagctgagcagcctgagatctgaggacactgccgtgtattactgtgcgcgcgacgttatctctggtttcgattcttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctca [SEQ ID NO: 95] Полная V_L QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQSPGKAPRLMIYGVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGVNNLMFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 94] ДНК Cagtctgccctgactcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgatcaccatctcctgcactggaaccagcagtgacgttggtggttataactatgtctcctggtaccaacaatccccaggcaaagcccccagactcatgatttatggggtcagtaagcggccctctggggtccctgatcgcttctctggctccaagtctggcaacacggcctccctgaccgtctctgggctccaggctgaagatgaggctgattattactgcagctcatatgcaggcgtcaacaatttaatgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggt [SEQ ID NO: 96] scFv QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQSPGKAPRLMIYGVSKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGVNNLMFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARDVISGFDSWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 123]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 301 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-024 scFv (другое название «ET150-174 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 302, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 303, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 302, смотри таблицу 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 302, смотри таблицу 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 303, смотри таблицу 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 303, смотри таблицу 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 302, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 303, смотри таблицу 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 304, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 305, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 306, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 307, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 308, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 309, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 304, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 305, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 306, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 307, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 308, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 309, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 25. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 304, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 305, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 306, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 307, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 308, и V_L CDR3 содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 309.

Таблица 25

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GFTFGDYG [SEQ ID NO: 304] INWNGGST [SEQ ID NO: 305] ARSKQGY [SEQ ID NO: 306] V_L SRDAGGYNY [SEQ ID NO: 307] EVT [SEQ ID NO: 308] SSYGGSNNFRV [SEQ ID NO: 309] Полная V_H EVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFGDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRДНКKNSLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARSKQDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 302] ДНК GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGTGTGGTACGGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTGGTGATTATGGCATGAGCTGGGTCCGCCAAGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCTGGTATTAATTGGAATGGTGGTAGCACAGGTTATGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGCGCTCTAAACAGGATTACTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 310] Полная V_L MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSRDAGGYNYFSWYQQHPGKAPKLLIYEVTKRPSGVPDRFSGSKSGKTASLTVSGLQADDEAVYYCSSYGGSNNFRVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 302] ДНК ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGGGACGCTGGTGGTTATAATTATTTCTCCTGGTACCAACAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCCTGATTTATGAGGTCACTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAAGACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGGCTGACGATGAGGCTGTATATTACTGCAGCTCATATGGAGGCAGCAACAACTTTCGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT [SEQ ID NO: 311] scFv MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSALTQPPSASGSPGQSVTISCTGTSRDAGGYNYFSWYQQHPGKAPKLLIYEVTKRPSGVPDRFSGSKSGKTASLTVSGLQADDEAVYYCSSYGGSNNFRVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVESGGGVVRPGGSLRLSCAASGFTFGDYGMSWVRQAPGKGLEWVSGINWNGGSTGYADSVKGRFTISRДНКKNSLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARSKQDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 301] ДНК ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGCCCTGACTCAGCCTCCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCAGTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGGGACGCTGGTGGTTATAATTATTTCTCCTGGTACCAACAACACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCCTGATTTATGAGGTCACTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAAGACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGGCTGACGATGAGGCTGTATATTACTGCAGCTCATATGGAGGCAGCAACAACTTTCGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGTGTGGTACGGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTGGTGATTATGGCATGAGCTGGGTCCGCCAAGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCTGGTATTAATTGGAATGGTGGTAGCACAGGTTATGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCCCTGTATCTGCAAATGAACAGTCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGCGCTCTAAACAGGATTACTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 312]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 313 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-026 scFv (другое название «ET150-176 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 314, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 315, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 314, смотри таблицу 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 314, смотри таблицу 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 315, смотри таблицу 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 315, смотри таблицу 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 314, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 315, смотри таблицу 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 316, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 317, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 318, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 319, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 320, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 321, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 316, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 317, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 318, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 319, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 320, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 321, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 26. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 316, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 317, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 318, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 319, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 320, и V_L CDR3 содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 321.

Таблица 26

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GFTFSNYA [SEQ ID NO: 316] ITNSGRST [SEQ ID NO: 317] ARVTHRRYGSTFDS [SEQ ID NO: 318] V_L SSNIGSNT [SEQ ID NO: 319] SNN [SEQ ID NO: 320] AAWDDSVNGYV [SEQ ID NO: 321] Полная V_H QLQLQESGGGSVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAITNSGRSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLSLQMSSLRAЭДТАVYYCARVTHRRYGSTFDSRGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 314] ДНК CAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGGGGAGGCTCGGTACAGCCGGGGGGGTCTCTGAGACTGTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAACTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATCACTAATAGTGGTCGTAGTACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTCTTTGCAAATGAGCAGCCTGAGAGCCGAAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCGTTACTCATCGTCGTTACGGTTCTACTTTCGATTCTCGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA ACTAGTGGCCAGGCCGGCCAGC [SEQ ID NO: 322] Полная V_L MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELSYELTQPPSASGTPGQRVSISCSGSSSNIGSNTVNWYQQFPGTAPKLLIHSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGPQSEDEADYYCAAWDDSVNGYVFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 315] ДНК ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCTCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCAGCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGGAGTAATACTGTAAACTGGTACCAACAGTTCCCCGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCCATAGTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCCCCAGTCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCTTGGGATGACAGTGTGAATGGTTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGT [SEQ ID NO: 323] scFv MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELSYELTQPPSASGTPGQRVSISCSGSSSNIGSNTVNWYQQFPGTAPKLLIHSNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGPQSEDEADYYCAAWDDSVNGYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQLQLQESGGGSVQPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWVRQAPGKGLEWVSAITNSGRSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLSLQMSSLRAЭДТАVYYCARVTHRRYGSTFDSRGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 313] ДНК ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCTCCTATGAGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCAGCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGGAGTAATACTGTAAACTGGTACCAACAGTTCCCCGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCCATAGTAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCCCCAGTCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCTTGGGATGACAGTGTGAATGGTTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCCAGCTGCAGCTGCAGGAGTCGGGGGGAGGCTCGGTACAGCCGGGGGGGTCTCTGAGACTGTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAACTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATCACTAATAGTGGTCGTAGTACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTCTTTGCAAATGAGCAGCCTGAGAGCCGAAGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCGTTACTCATCGTCGTTACGGTTCTACTTTCGATTCTCGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 324]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 325 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-028 scFv (другое название «ET150-178 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 326, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 327, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 326, смотри таблицу 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 326, смотри таблицу 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 327, смотри таблицу 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 327, смотри таблицу 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 326, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 327, смотри таблицу 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 328, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 329, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 330, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 331, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 332, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 333, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 328, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 329, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 330, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 331, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 332, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 333, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 27. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 328, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 329, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 330, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 331, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 332, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 333.

Таблица 27

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GGTFRSYA [SEQ ID NO: 328] IIPMLDIT [SEQ ID NO: 329] ARTYSRSPFHMEDF [SEQ ID NO: 330] V_L SSNIGGNT [SEQ ID NO: 331] RNN [SEQ ID NO: 332] AAWDASRQGV [SEQ ID NO: 333] Полная V_H QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFRSYAITWVRQAPGQGLEWMGRIIPMLDITNYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSЭДТАVYYCARTYSRSPFHMEDFWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 326] ДНК CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCCGCAGCTATGCTATCACCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAGGATCATCCCTATGCTTGATATAACAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCACTTACTCTCGTTCTCCGTTCCATATGGAAGATTTCTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 334] Полная V_L MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGGNTVSWYQQVPGTAPRLLIFRNNQRPPGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDASRQGVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 327] ДНК ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGCCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAATATCGGAGGTAACACTGTCAGCTGGTACCAGCAGGTCCCAGGAACGGCCCCCAGACTCCTCATTTTTAGGAATAATCAACGGCCCCCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGACGCCAGTCGACAAGGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT [SEQ ID NO: 335] scFv MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQPVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGGNTVSWYQQVPGTAPRLLIFRNNQRPPGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDASRQGVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFRSYAITWVRQAPGQGLEWMGRIIPMLDITNYAQKFQGRVTITADKSTSTAYMELSSLRSЭДТАVYYCARTYSRSPFHMEDFWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 325] ДНК ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGCCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAATATCGGAGGTAACACTGTCAGCTGGTACCAGCAGGTCCCAGGAACGGCCCCCAGACTCCTCATTTTTAGGAATAATCAACGGCCCCCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGACGCCAGTCGACAAGGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGAGGCACCTTCCGCAGCTATGCTATCACCTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAAGGATCATCCCTATGCTTGATATAACAAACTACGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACGATTACCGCGGACAAATCCACGAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCACTTACTCTCGTTCTCCGTTCCATATGGAAGATTTCTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 336]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 337 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-029 scFv (другое название «ET150-179 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 338, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 339, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 338, смотри таблицу 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 338, смотри таблицу 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 339, смотри таблицу 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 339, смотри таблицу 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 338, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 339, смотри таблицу 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 340, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 341, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 342, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 343, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 344, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 345, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 340, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 341, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 342, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 343, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 344, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 345, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 28. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 340, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 341, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 342, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 343, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 344, и V_L CDR3 содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 345.

Таблица 28

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GFTFSSYA[SEQ ID NO: 340] ISGSGGST [SEQ ID NO: 341] ARKYQDV [SEQ ID NO: 342] V_L SSNIGSNT[SEQ ID NO: 343] RNN [SEQ ID NO: 344] AAWDDSLSGRV [SEQ ID NO: 345] Полная V_H EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRДНКKNTLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARKYQDVWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 338] ДНК GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGCGCAAATACCAGGATGTTTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 346] Полная V_L MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGRVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 339] ДНК ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATACTGTAAACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTAGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT [SEQ ID NO: 347] scFv MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNTVNWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGRVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRДНКKNTLYLQMNSLRAЭДТАVYYCARKYQDVWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 337] ДНК ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGTGCTGACGCAGCCGCCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATACTGTAAACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTAGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGCAGCTATGCCATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAGCTATTAGTGGTAGTGGTGGTAGCACATACTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGCGCAAATACCAGGATGTTTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 348]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 349 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-030 scFv (другое название «ET150-180 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 350, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 351, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 350, смотри таблицу 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 350, смотри таблицу 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 351, смотри таблицу 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 351, смотри таблицу 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 350, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 351, смотри таблицу 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 352, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 353, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 354, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 355, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 356, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 357, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 352, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 353, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 354, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 355, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 356, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 357, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 29. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 352, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 353, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 354, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 355, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 356, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 357.

Таблица 29

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GFSFSGTA [SEQ ID NO: 352] ISSTGRST [SEQ ID NO: 353] ARPVSSMTLSIQSDG [SEQ ID NO: 354] V_L SSNIGAGYD [SEQ ID NO: 355] GNS [SEQ ID NO: 356] QSYDSSLRGYV [SEQ ID NO: 357] Полная V_H QVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSFSGTAMHWVRQAPGKGLEWVSTISSTGRSTYYRDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRGЭДТАVYYCARPVSSMTLSIQSDGWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 350] ДНК CAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCAGCTTTAGTGGCACTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTCTCGACTATTAGTAGTACTGGGCGTAGCACATACTACAGAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGGCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGCGCCCGGTTTCTTCTATGACTCTGTCTATCCAGTCTGATGGTTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 358] Полная V_L MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGRAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLRGYVFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 351] ДНК ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGTGTTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGATGTACACTGGTACCAGCAGCTTCCAGGAAGAGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGTCCTATGACAGCAGCCTGAGAGGTTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGT [SEQ ID NO: 359] scFv MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGAGYDVHWYQQLPGRAPKLLIYGNSNRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAITGLQAEDEADYYCQSYDSSLRGYVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQVQLVQSGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSFSGTAMHWVRQAPGKGLEWVSTISSTGRSTYYRDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRGЭДТАVYYCARPVSSMTLSIQSDGWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 349] ДНК ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGTGTTGACGCAGCCGCCCTCAGTGTCTGGGGCCCCAGGGCAGAGGGTCACCATCTCCTGCACTGGGAGCAGCTCCAACATCGGGGCAGGTTATGATGTACACTGGTACCAGCAGCTTCCAGGAAGAGCCCCCAAACTCCTCATCTATGGTAACAGCAATCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCACTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCCAGTCCTATGACAGCAGCCTGAGAGGTTATGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCCAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGGAGGCGTGGTCCAGCCTGGGAGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCAGCTTTAGTGGCACTGCCATGCACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGGTCTCGACTATTAGTAGTACTGGGCGTAGCACATACTACAGAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGAGAGGCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGCGCCCGGTTTCTTCTATGACTCTGTCTATCCAGTCTGATGGTTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 360]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 361 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-031 scFv (другое название «ET150-181 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 362, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 363, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 362, смотри таблицу 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 362, смотри таблицу 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 363, смотри таблицу 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 363, смотри таблицу 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 362, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 363, смотри таблицу 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 364, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 365, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 366, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 367, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 368, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 369, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 364, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 365, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 366, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 367, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 368, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 369, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 30. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 364, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 365, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 366, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 367, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 368, и V_L CDR3 содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 369.

Таблица 30

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GYTFTSYY [SEQ ID NO: 364] INPSGGST [SEQ ID NO: 365] ARGQKYHSQYSRGGTGGGMTQDM [SEQ ID NO: 366] V_L SSNIGNNY [SEQ ID NO: 367] DNN [SEQ ID NO: 368] GTWDSSLRNWV [SEQ ID NO: 369] Полная V_H QMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARGQKYHSQYSRGGTGGGMTQDMWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 362] ДНК CAGATGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCAGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAATAATCAACCCTAGTGGTGGTAGCACAAGCTACGCACAAAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGGACACGTCCACGAGCACAGTCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCGGTCAGAAATACCATTCTCAGTACTCTCGTGGTGGTACTGGTGGTGGTATGACTCAGGATATGTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 370] Полная V_L MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSVVTQPPSVSAAPGQRVTISCSGGSSNIGNNYVSWFQQLPRTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSAALDITVLQTGDEADYYCGTWDSSLRNWVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 363] ДНК ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGTCGTGACGCAGCCGCCCTCTGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAGGTAGTTCCAACATTGGGAATAATTATGTTTCCTGGTTCCAACAACTCCCACGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCGCCCTGGACATCACCGTTCTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACTTGGGATAGCAGCCTGAGAAATTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT [SEQ ID NO: 371] scFv MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSVVTQPPSVSAAPGQRVTISCSGGSSNIGNNYVSWFQQLPRTAPKLLIYDNNKRPSGIPDRFSGSKSGTSAALDITVLQTGDEADYYCGTWDSSLRNWVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQMQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSЭДТАVYYCARGQKYHSQYSRGGTGGGMTQDMWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 361] ДНК ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGTCGTGACGCAGCCGCCCTCTGTGTCTGCGGCCCCAGGACAGAGGGTCACCATCTCCTGCTCTGGAGGTAGTTCCAACATTGGGAATAATTATGTTTCCTGGTTCCAACAACTCCCACGAACAGCCCCCAAACTCCTCATTTATGACAATAATAAGCGACCCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCGCCCTGGACATCACCGTTCTCCAGACTGGGGACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACTTGGGATAGCAGCCTGAGAAATTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCCAGATGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCACCAGCTACTATATGCACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGAATAATCAACCCTAGTGGTGGTAGCACAAGCTACGCACAAAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGGACACGTCCACGAGCACAGTCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCGGTCAGAAATACCATTCTCAGTACTCTCGTGGTGGTACTGGTGGTGGTATGACTCAGGATATGTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 372]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 373 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-032 scFv (другое название «ET150-182 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 374, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 375, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 374, смотри таблицу 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 374, смотри таблицу 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 375, смотри таблицу 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 375, смотри таблицу 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 374, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 375, смотри таблицу 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 376, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 377, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 378, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 379, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 380, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 381, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 376, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 377, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 378, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 379, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 380, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 381, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 31. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 376, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 377, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 378, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 379, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 380, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 381.

Таблица 31

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GYTFSRYY [SEQ ID NO: 376] MNPNSGNT [SEQ ID NO: 377] ARGRYHVIDY [SEQ ID NO: 378] V_L SSDVGGYNH [SEQ ID NO: 379] EVT [SEQ ID NO: 380] SSYAGSAHWV [SEQ ID NO: 381] Полная V_H EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSRYYIHWVRQAPGQGLEWMGWMNPNSGNTGYAQKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSЭДТАVYYCARGRYHVIDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 374] ДНК GAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCAGCAGGTACTATATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATGAACCCTAACAGTGGTAACACAGGCTATGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGAACACCTCCATAAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCGGTCGTTACCATGTTATCGATTACTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 382] Полная V_L MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSVLTQPPSASGSPGQSLTISCTGTSSDVGGYNHVSWYQQYPGKAPKLMIYEVTKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSAHWVFGGGTKLTVLG [SEQ ID NO: 375] ДНК ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGTGTTGACTCAGCCACCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCACTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACCATGTCTCCTGGTACCAACAGTACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCACTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGCAGGCAGCGCCCATTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGT [SEQ ID NO: 383] scFv MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQSVLTQPPSASGSPGQSLTISCTGTSSDVGGYNHVSWYQQYPGKAPKLMIYEVTKRPSGVPDRFSGSKSGNTASLTVSGLQAEDEADYYCSSYAGSAHWVFGGGTKLTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAEVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFSRYYIHWVRQAPGQGLEWMGWMNPNSGNTGYAQKFQGRVTMTRNTSISTAYMELSSLRSЭДТАVYYCARGRYHVIDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 373] ДНК ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGTCTGTGTTGACTCAGCCACCCTCCGCGTCCGGGTCTCCTGGACAGTCACTCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGTTGGTGGTTATAACCATGTCTCCTGGTACCAACAGTACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGAGGTCACTAAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCGTCTCTGGGCTCCAGGCTGAGGATGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATGCAGGCAGCGCCCATTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGTCCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCGAGGTCCAGCTGGTGCAGTCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGGCCTCAGTGAAGGTTTCCTGCAAGGCATCTGGATACACCTTCAGCAGGTACTATATACACTGGGTGCGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGATGGATGAACCCTAACAGTGGTAACACAGGCTATGCACAGAAGTTCCAGGGCAGAGTCACCATGACCAGGAACACCTCCATAAGCACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGCCTGAGATCTGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCGGTCGTTACCATGTTATCGATTACTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 384]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 385 и специфически связывается с полипептидом GPRC5D (например, полипептидом GPRC5D, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97, или его фрагментами), данный scFv обозначен ET150-033 scFv (другое название «ET150-183 scFv»).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv, который содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 386, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 387, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 386, смотри таблицу 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 386, смотри таблицу 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 387, смотри таблицу 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 387, смотри таблицу 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 386, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 387, смотри таблицу 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 388, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 389, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 390, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 391, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 392, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 393, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 388, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 389, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 390, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 391, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 392, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 393, или ее консервативные модификации, смотри таблицу 32. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 388, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 389, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 390, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 391, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 392, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 393.

Таблица 32

Антиген Полипептид GPRC5D, имеющий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 CDR 1 2 3 V_H GYTFNTYY [SEQ ID NO: 388] INPNNGGT [SEQ ID NO: 389] ARSYDY [SEQ ID NO: 390] V_L SSNIGSNY [SEQ ID NO: 391] RNN [SEQ ID NO: 392] AAWDDSLSGRV [SEQ ID NO: 393] Полная V_H QLQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFNTYYLHWVRQAPGQGLEWMGRINPNNGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSINTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSYDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 386] ДНК CAGCTGCAGCTGGTGCAATCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCAACACCTACTATCTGCACTGGGTACGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGACGGATCAACCCTAACAATGGTGGCACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAACACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCTCTTACGATTACTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 394] Полная V_L MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGRVFGTGTKVTVLG [SEQ ID NO: 387] ДНК ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGGCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATTATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTCGGGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGT [SEQ ID NO: 395] scFv MKKTAIAIAVALAGFATVAQAAELQAVLTQPPSASGTPGQRVTISCSGSSSNIGSNYVYWYQQLPGTAPKLLIYRNNQRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAISGLRSEDEADYYCAAWDDSLSGRVFGTGTKVTVLGSRGGGGSGGGGSGGGGSLEMAQLQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFNTYYLHWVRQAPGQGLEWMGRINPNNGGTNYAQKFQGRVTMTRDTSINTAYMELSRLRSDDTAVYYCARSYDYWGQGTLVTVSS [SEQ ID NO: 385] ДНК ATGAAAAAGACAGCTATCGCGATTGCAGTGGCACTGGCTGGTTTCGCTACCGTGGCCCAGGCGGCCGAGCTCCAGGCTGTGCTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGGCAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGCTCCAACATCGGAAGTAATTATGTATACTGGTACCAGCAGCTCCCAGGAACGGCCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAATAATCAGCGGCCCTCAGGGGTCCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGGCTCCGGTCCGAGGATGAGGCTGATTATTACTGTGCAGCATGGGATGACAGCCTGAGTGGTCGGGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGTCCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCCAGCTGCAGCTGGTGCAATCTGGGGCTGAGGTGAAGAAGCCTGGGTCCTCGGTGAAGGTCTCCTGCAAGGCTTCTGGATACACCTTCAACACCTACTATCTGCACTGGGTACGACAGGCCCCTGGACAAGGGCTTGAGTGGATGGGACGGATCAACCCTAACAATGGTGGCACAAACTATGCACAGAAGTTTCAGGGCAGGGTCACCATGACCAGGGACACGTCCATCAACACAGCCTACATGGAGCTGAGCAGGCTGAGATCTGACGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGCGCTCTTACGATTACTGGGGTCAAGGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCA [SEQ ID NO: 396]

Внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv), содержащий области V_H и/или V_L, имеющие высокую степень (то есть, 80% или более) гомологии с областями V_H и V_L последовательностей, приведенных выше, можно получать путем мутагенеза (например, сайт-направленного или ПЦР-опосредованного мутагенеза), с последующим тестированием закодированных измененных scFv на сохранение функции (то есть, аффинности связывания) с использованием анализов связывания, описанных в настоящем документе. В конкретных вариантах осуществления последовательность V_H, имеющая по меньшей мере примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологии, имеет замены (например, консервативные замены для получения консервативных модификаций последовательности), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, однако внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv), содержащий данную последовательность, сохраняет способность связываться с полипептидом GPRC5D. В конкретных вариантах осуществления последовательность V_L, имеющая по меньшей мере примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологии, имеет замены (например, консервативные замены), вставки или делеции относительно эталонной последовательности, однако внеклеточный антигенсвязывающий домен (например, scFv), содержащий данную последовательность, сохраняет способность связываться с полипептидом GPRC5D. В конкретных вариантах осуществления в общей сложности от примерно 1 до примерно 10 аминокислот были заменены, вставлены и/или делетированы в раскрытых последовательностях. Например, и без ограничения, последовательность V_H или последовательность V_L может иметь до примерно одного, до примерно двух, до примерно трех, до примерно четырех, до примерно пяти, до примерно шести, до примерно семи, до примерно восьми, до примерно девяти или до примерно десяти аминокислотных остатков, которые модифицированы и/или заменены. Неограничивающие примеры консервативных модификаций приведены ниже, например, в таблице 33.

Используемый в настоящем документе термин «консервативные модификации последовательности» означает аминокислотные модификации, которые существенно не затрагивают или не изменяют характеристики связывания раскрытого в настоящем документе CAR (например, внеклеточного антигенсвязывающего домена), содержащего аминокислотную последовательность. Такие консервативные модификации включают аминокислотные замены, добавления и делеции. Модификации могут быть внесены в человеческий scFv по настоящему изобретению стандартными методами, известными в данной области, такими как сайт-направленный мутагенез и ПЦР-опосредованный мутагенез. Аминокислоты могут быть разделены на группы на основании их физико-химических свойств, таких как заряд и полярность. Консервативные аминокислотные замены являются такими заменами, при которых аминокислотный остаток заменен аминокислотой, относящейся к той же группе. Например, аминокислоты могут быть разделены на группы на основании заряда: положительно заряженные аминокислоты включают лизин, аргинин, гистидин; отрицательно заряженные аминокислоты включают аспарагиновую кислоту, глутаминовую кислоту; нейтральные аминокислоты включают аланин, аспарагин, цистеин, глутамин, глицин, изолейцин, лейцин, метионин, фенилаланин, пролин, серин, треонин, триптофан, тирозин и валин. Кроме того, аминокислоты могут быть разделены на группы на основании полярности: полярные аминокислоты включают аргинин (основная полярная), аспарагин, аспарагиновую кислоту (кислая полярная), глутаминовую кислоту (кислая полярная), глутамин, гистидин (основная полярная), лизин (основная полярная), серин, треонин и тирозин; неполярные аминокислоты включают аланин, цистеин, глицин, изолейцин, лейцин, метионин, фенилаланин, пролин, триптофан и валин. Таким образом, один или более аминокислотных остатков в области CDR можно заменять другими аминокислотными остатками из той же группы, и измененное антитело можно тестировать на сохранение функции (то есть, функций, описанных в пунктах (c)-(l), выше) в функциональных анализах, описанных в настоящем документе. В конкретных вариантах осуществления не более одного, не более двух, не более трех, не более четырех, не более пяти остатков в конкретной последовательности или области CDR изменены. Иллюстративные консервативные аминокислотные замены приведены в таблице 33.

Таблица 33

Исходный остаток Иллюстративные консервативные аминокислотные замены Ala (A) Val; Leu; Ile Arg (R) Lys; Gln; Asn Asn (N) Gln; His; Asp, Lys; Arg Asp (D) Glu; Asn Cys (C) Ser; Ala Gln (Q) Asn; Glu Glu (E) Asp; Gln Gly (G) Ala His (H) Asn; Gln; Lys; Arg Ile (I) Leu; Val; Met; Ala; Phe Leu (L) Ile; Val; Met; Ala; Phe Lys (K) Arg; Gln; Asn Met (M) Leu; Phe; Ile Phe (F) Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr Pro (P) Ala Ser (S) Thr Thr (T) Val; Ser Trp (W) Tyr; Phe Tyr (Y) Trp; Phe; Thr; Ser Val (V) Ile; Leu; Met; Phe; Ala

В конкретных неограничивающих вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен CAR может содержать линкер, соединяющий вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи внеклеточного антигенсвязывающего домена. Используемый в настоящем документе термин «линкер» означает функциональную группу (например, химическую группу или полипептид), которая ковалентно связывает два или более пептидов, или нуклеиновых кислот так, что они становятся связанными друг с другом. Используемый в настоящем документе термин «пептидный линкер» означает одну или более аминокислот, используемых для связывания между собой двух белков (например, для связывания доменов V_H и V_L). Неограничивающие примеры пептидных линкеров описаны в Shen et al., Anal. Chem. 80(6): 1910-1917 (2008) и WO 2014/087010.

В одном неограничивающем примере линкер представляет собой линкер G4S, который содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 98, приведена в SEQ ID NO: 99. В одном неограничивающем примере линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 284. В конкретных вариантах осуществления нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 307, приведена в SEQ ID NO: 285.

В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 286, которая представлена ниже.

GGGGS [SEQ ID NO: 286].

В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 287, которая представлена ниже.

SGGSGGS [SEQ ID NO: 287].

В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 288, которая представлена ниже.

GGGGSGGGS [SEQ ID NO: 288].

В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 289, которая представлена ниже.

GGGGSGGGGS [SEQ ID NO: 289].

В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 290, которая представлена ниже.

GGGGSGGGGSGGGGGGGS [SEQ ID NO: 290].

В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 291, которая представлена ниже.

GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS [SEQ ID NO: 291].

В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 292, которая представлена ниже.

GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS [SEQ ID NO: 292].

В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 293, которая представлена ниже.

GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS [SEQ ID NO: 293].

В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 294, которая представлена ниже.

GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS [SEQ ID NO: 294].

В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 295, которая представлена ниже.

EPKSCDKTHTCPPCP [SEQ ID NO: 295].

В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 296, которая представлена ниже.

GGGGSGGGSEPKSCDKTHTCPPCP [SEQ ID NO: 296].

В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 297, которая представлена ниже.

ELKTPLGDTTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCP [SEQ ID NO: 297].

В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 298, которая представлена ниже.

GSGSGS [SEQ ID NO: 298].

В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 299, которая представлена ниже.

AAA [SEQ ID NO: 299].

Кроме того, внеклеточный антигенсвязывающий домен может содержать лидер или сигнальный пептид, который направляет образующийся белок в эндоплазматический ретикулум. Сигнальный пептид или лидер может быть необходим, если CAR должен быть гликозилирован и заякорен в клеточной мембране. Сигнальная последовательность или лидер может представлять собой пептидную последовательность (длиной примерно 5, примерно 10, примерно 15, примерно 20, примерно 25 или примерно 30 аминокислот), находящуюся на N-конце заново синтезированных белков, которая направляет их на путь секреции. В неограничивающих примерах сигнальный пептид ковалентно связан с 5ʹ-концом внеклеточного антигенсвязывающего домена. В конкретных вариантах осуществления сигнальный пептид содержит полипептид CD8, содержащий аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 268, которая представлена ниже.

MALPVTALLLPLALLLHAAR [SEQ ID NO: 268]

Нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 268, приведена в SEQ ID NO: 269, которая представлена ниже:

ATGGCTCTCCCAGTGACTGCCCTACTGCTTCCCCTAGCGCTTCTCCTGCATGCAGCTCGT [SEQ ID NO: 269]

В конкретных вариантах осуществления сигнальный пептид содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 282, которая представлена ниже.

METDTLLLWVLLLWVPGSTG [SEQ ID NO: 282]

Нуклеотидная последовательность, кодирующая аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 282, приведена в SEQ ID NO: 283, которая представлена ниже:

ATGGAAACCGACACCCTGCTGCTGTGGGTGCTGCTGCTGTGGGTGCCAGGATCCACAGGA [SEQ ID NO: 283]

В конкретных вариантах осуществления scFv человека содержит вариабельную область тяжелой цепи, вариабельную область легкой цепи, пептидный линкер между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи, а также His-метку и HA-метку. В конкретных вариантах осуществления аминокислотная последовательность His-метки и HA-метки содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 409, которая представлена ниже:

TSGQAGQHHHHHHGAYPYDVPDYAS [SEQ ID NO: 409]

Нуклеотидная последовательность, кодирующая SEQ ID NO: 409, приведена в SEQ ID NO: 410, которая представлена ниже:

ACTAGTGGCCAGGCCGGCCAGCACCATCACCATCACCATGGCGCATACCCGTACGACGTTCCGGACTACGCTTCT [SEQ ID NO: 410]

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с полипептидом GPRC5D человека, содержащим аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя, тремя или четырьмя из N-концевой области (аминокислоты 1-27 из SEQ ID NO: 97), области ECL1 (аминокислоты 85-93 из SEQ ID NO: 97), области ECL2 (аминокислоты 145-167 из SEQ ID NO: 97) и области ECL3 (аминокислоты 226-239 из SEQ ID NO: 97). В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа в N-концевой области, включая, но без ограничения, область эпитопа, содержащую аминокислоты 16-23 из SEQ ID NO: 97, и область эпитопа, содержащую аминокислоты 10-17 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в N-концевой области содержит аминокислоты 15-23 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в N-концевой области содержит аминокислоты 16-25 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в N-концевой области содержит аминокислоты 10-17 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в N-концевой области содержит аминокислоты 5-17 из SEQ ID NO: 97.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа в области ECL1, включая, но без ограничения, область эпитопа, содержащую аминокислоты 85-95 из SEQ ID NO: 97.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа в области ECL2, включая, но без ограничения, область эпитопа, содержащую аминокислоты 157-164 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в области ECL2 содержит аминокислоты 157-164 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в области ECL2 содержит аминокислоты 157-167 из SEQ ID NO: 97.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с областью эпитопа в области ECL3, включая, но без ограничения, область эпитопа, содержащую аминокислоты 230-237 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в области ECL3 содержит аминокислоты 229-237 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в области ECL3 содержит аминокислоты 230-243 из SEQ ID NO: 97. В конкретных вариантах осуществления область эпитопа в области ECL3 содержит аминокислоты 227-237 из SEQ ID NO: 97.

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя или тремя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 16-25 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа, содержащей аминокислоты 157-164 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 229-237 из SEQ ID NO: 97. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 15. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 57. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 58. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 57, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 58. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 208, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 209, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 210, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 211, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 212, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 213. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой ET150-2 scFv (или ET150-152 scFv).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя или тремя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 5-17 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа, содержащей аминокислоты 85-95 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 157-164 из SEQ ID NO: 97. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 16. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 61. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 62. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 61, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 62. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 214, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 215, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 216, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 217, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 218, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 219. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой ET150-155 scFv (или ET150-5 scFv).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной или двумя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 15-23 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 230-243 из SEQ ID NO: 97. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 65. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 66, смотри таблицу 17. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 65, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 66. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 220, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 221, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 222, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 223, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 224, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 225. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой ET150-8 scFv (или ET150-158 scFv).

В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен связывается с одной, двумя или тремя областями эпитопа, выбранными из группы, состоящей из области эпитопа, содержащей аминокислоты 10-17 из SEQ ID NO: 97, области эпитопа, содержащей аминокислоты 157-167 из SEQ ID NO: 97, и области эпитопа, содержащей аминокислоты 227-237 из SEQ ID NO: 97. Например, внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, и вариабельную область легкой цепи, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70, необязательно, с (iii) последовательностью линкера, например, пептидного линкера, между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи. В конкретных вариантах осуществления линкер содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 98. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой scFv. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой слитый белок scFv-Fc или полноразмерные IgG человека с областями V_H и V_L или CDR, выбранными из таблицы 18. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 69. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 80%, примерно 81%, примерно 82%, примерно 83%, примерно 84%, примерно 85%, примерно 86%, примерно 87%, примерно 88%, примерно 89%, примерно 90%, примерно 91%, примерно 92%, примерно 93%, примерно 94%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98% или примерно 99% гомологична аминокислотной последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 70. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 69, и V_L, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 70. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227, или ее консервативные модификации, и V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226, или ее консервативные модификации, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227, или ее консервативные модификации, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228, или ее консервативные модификации, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229, или ее консервативные модификации, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230, или ее консервативные модификации, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231, или ее консервативные модификации. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен содержит V_H CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 226, V_H CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 227, V_H CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 228, V_L CDR1, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 229, V_L CDR2, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 230, и V_L CDR3, содержащую аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 231. В конкретных вариантах осуществления внеклеточный антигенсвязывающий домен представляет собой ET150-18 scFv (или ET150-168 scFv).

Трансмембранный домен CAR

В конкретных неограничивающих вариантах осуществления трансмембранный домен CAR содержит гидрофобную альфа-спираль, которая проходит через по меньшей мере часть мембраны. Разные трансмембранные домены приводят к разной стабильности рецепторов. После узнавания антигена происходит кластеризация рецепторов и сигнал передается клетке. В соответствии с настоящим изобретением, трансмембранный домен CAR может содержать полипептид CD8, полипептид CD28, полипептид CD3ζ, полипептид CD4, полипептид 4-1BB, полипептид OX40, полипептид ICOS, полипептид CTLA-4, полипептид PD-1, полипептид LAG-3, полипептид 2B4, полипептид BTLA, синтетический пептид (не на основе белка, связанного с иммунным ответом) или их сочетание.

В конкретных вариантах осуществления трансмембранный домен раскрытого в настоящем документе CAR содержит полипептид CD8. Полипептид CD8 может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или 100% гомологична последовательности, имеющей регистрационный № NCBI: P10747 или NP_006130 (SEQ ID NO: 270), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены. В неограничивающих вариантах осуществления полипептид CD28 может иметь аминокислотную последовательность, которая представляет собой непрерывный фрагмент из SEQ ID NO: 270, имеющий длину по меньшей мере 20 или по меньшей мере 30, или по меньшей мере 40, или по меньшей мере 50 и вплоть до 220 аминокислот. Альтернативно или дополнительно, в неограничивающих различных вариантах осуществления полипептид CD28 имеет аминокислотную последовательность из 1-220, 1-50, 50-100, 100-150, 150-200 или 200-220 аминокислот из SEQ ID NO: 270. В конкретных вариантах осуществления CAR, раскрытый в настоящем документе, содержит трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, и внутриклеточный домен, содержащий костимулирующую сигнальную область, которая содержит полипептид CD28. В конкретных вариантах осуществления полипептид CD28, содержащийся в трансмембранном домене и внутриклеточном домене, имеет аминокислотную последовательность из аминокислот 114-220 из SEQ ID NO: 270.

SEQ ID NO: 270 приведена ниже:

1 MLRLLLALNL FPSIQVTGNK ILVKQSPMLV AYДНКVNLSC KYSYNLFSRE FRASLHKGLD

61 SAVEVCVVYG NYSQQLQVYS KTGFNCDGKL GNESVTFYLQ NLYVNQTDIY FCKIEVMYPP

121 PYLDNEKSNG TIIHVKGKHL CPSPLFPGPS KPFWVLVVVG GVLACYSLLV TVAFIIFWVR

181 SKRSRLLHSD YMNMTPRRPG PTRKHYQPYA PPRDFAAYRS [SEQ ID NO: 270]

В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты CD28» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид CD28. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты CD28, кодирующая полипептид CD28, содержащийся в трансмембранном домене и внутриклеточном домене (например, костимулирующей сигнальной области) раскрытого в настоящем документе CAR (аминокислоты 114-220 из SEQ ID NO: 270), содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 271, которая представлена ниже.

ATTGAAGTTATGTATCCTCCTCCTTACCTAGACAATGAGAAGAGCAATGGAACCATTATCCATGTGAAAGGGAAACACCTTTGTCCAAGTCCCCTATTTCCCGGACCTTCTAAGCCCTTTTGGGTGCTGGTGGTGGTTGGTGGAGTCCTGGCTTGCTATAGCTTGCTAGTAACAGTGGCCTTTATTATTTTCTGGGTGAGGAGTAAGAGGAGCAGGCTCCTGCACAGTGACTACATGAACATGACTCCCCGCCGCCCCGGGCCCACCCGCAAGCATTACCAGCCCTATGCCCCACCACGCGACTTCGCAGCCTATCGCTCC [SEQ ID NO: 271]

В конкретных вариантах осуществления трансмембранный домен раскрытого в настоящем документе CAR содержит полипептид CD8. Полипептид CD8 может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или 100% гомологична последовательности, имеющей регистрационный № NCBI: AAH25715 (SEQ ID NO: 404), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены. В неограничивающих вариантах осуществления полипептид CD8 может иметь аминокислотную последовательность, которая представляет собой непрерывный фрагмент из SEQ ID NO: 404, имеющий длину по меньшей мере 20 или по меньшей мере 30, или по меньшей мере 40, или по меньшей мере 50, или по меньшей мере 70, или по меньшей мере 100, или по меньшей мере 150, или по меньшей мере 200 и вплоть до 235 аминокислот. Альтернативно или дополнительно, в неограничивающих различных вариантах осуществления полипептид CD8 имеет аминокислотную последовательность из аминокислот 1-235, 1-50, 50-100, 100-150, 150-200, 130-210 или 200-235 из SEQ ID NO: 404. В конкретных вариантах осуществления полипептид CD8, содержащийся в трансмембранном домене, имеет аминокислотную последовательность из аминокислот 137-207 из SEQ ID NO: 404.

SEQ ID NO: 226 приведена ниже:

1 MALPVTALLL PLALLLHAAR PSQFRVSPLD RTWNLGETVE LKCQVLLSNP TSGCSWLFQP

61 RGAAASPTFL LYLSQNKPKA AEGLDTQRFS GKRLGDTFVL TLSDFRRENE GCYFCSALSN

121 SIMYFSHFVP VFLPAKPTTT PAPRPPTPAP TIASQPLSLR PEACRPAAGG AVHTRGLDFA

181 CDIYIWAPLA GTCGVLLLSL VITLYCNHRN RRRVCKCPRP VVKSGDKPSL SARYV [SEQ ID NO: 404].

В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты CD8» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид CD8. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты CD8, кодирующая полипептид CD8, содержащийся в трансмембранном домене раскрытого в настоящем документе CAR (аминокислоты 137-207 из SEQ ID NO: 404), содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 405, которая представлена ниже.

CCCACCACGACGCCAGCGCCGCGACCACCAACCCCGGCGCCCACGATCGCGTCGCAGCCCCTGTCCCTGCGCCCAGAGGCGTGCCGGCCAGCGGCGGGGGGCGCAGTGCACACGAGGGGGCTGGACTTCGCCTGTGATATCTACATCTGGGCGCCCCTGGCCGGGACTTGTGGGGTCCTTCTCCTGTCACTGGTTATCACCCTTTACTGCAAC [SEQ ID NO: 227]

В конкретных неограничивающих вариантах осуществления CAR также может содержать область спейсера, который связывает внеклеточный антигенсвязывающий домен с трансмембранным доменом. Область спейсера может быть достаточно гибкой, чтобы позволять антигенсвязывающему домену ориентироваться в разных направлениях для облегчения узнавания антигена. Область спейсера может представлять собой шарнирную область из IgG1, либо область CH₂CH₃ иммуноглобулина и части CD3.

Внутриклеточный домен CAR

В конкретных неограничивающих вариантах осуществления внутриклеточный домен CAR может содержать полипептид CD3ζ, который может активировать или стимулировать клетку (например, клетку лимфоидной линии, например, T-клетку). CD3ζ содержит три ITAM и передает сигнал активации клетке (например, клетке лимфоидной линии, например, T-клетке) после связывания антигена. Полипептид CD3ζ может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или примерно 100% гомологична последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 272, или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены. В неограничивающих вариантах осуществления полипептид CD3ζ может иметь аминокислотную последовательность, которая представляет собой непрерывный фрагмент из SEQ ID NO: 272, имеющий длину по меньшей мере 20, или по меньшей мере 30, или по меньшей мере 40, или по меньшей мере 50 и вплоть до 163 аминокислот. Альтернативно или дополнительно, в неограничивающих различных вариантах осуществления полипептид CD3ζ имеет аминокислотную последовательность из аминокислот 1-163, 1-50, 50-100, 100-150, или 150-163 из SEQ ID NO: 272. В конкретных вариантах осуществления полипептид CD3ζ, содержащийся в внутриклеточном домене раскрытого в настоящем документе CAR, имеет аминокислотную последовательность из аминокислот 52-163 из SEQ ID NO: 272.

SEQ ID NO: 272 приведена ниже:

1 MKWKALFTAA ILQAQLPITE AQSFGLLDPK LCYLLDGILF IYGVILTALF LRVKFSRSAD

61 APAYQQGQNQ LYNELNLGRR EEYDVLDKRR GRDPEMGGKP RRKNPQEGLY NELQKDKMAE

121 AYSEIGMKGE RRRGKGHDGL YQGLSTATKD TYDALHMQAL PPR [SEQ ID NO: 272]

В соответствии с настоящим изобретением «молекула нуклеиновой кислоты CD3ζ» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид CD3ζ. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты CD3ζ, кодирующая полипептид CD3ζ, содержащийся в внутриклеточном домене раскрытого в настоящем документе CAR (аминокислоты 52-163 из SEQ ID NO: 272), содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 273, которая представлена ниже.

AGAGTGAAGTTCAGCAGGAGCGCAGACGCCCCCGCGTACCAGCAGGGCCAGAACCAGCTCTATAACGAGCTCAATCTAGGACGAAGAGAGGAGTACGATGTTTTGGACAAGAGACGTGGCCGGGACCCTGAGATGGGGGGAAAGCCGAGAAGGAAGAACCCTCAGGAAGGCCTGTACAATGAACTGCAGAAAGATAAGATGGCGGAGGCCTACAGTGAGATTGGGATGAAAGGCGAGCGCCGGAGGGGCAAGGGGCACGATGGCCTTTACCAGGGTCTCAGTACAGCCACCAAGGACACCTACGACGCCCTTCACATGCAGGCCCTGCCCCCTCGCTAA [SEQ ID NO: 273]

В конкретных неограничивающих вариантах осуществления внутриклеточный домен CAR дополнительно содержит по меньшей мере одну сигнальную область. По меньшей мере одна сигнальная область может содержать полипептид CD28, полипептид 4-1BB, полипептид OX40, полипептид ICOS, полипептид DAP-10, полипептид PD-1, полипептид CTLA-4, полипептид LAG-3, полипептид 2B4, полипептид BTLA, синтетический пептид (не на основе белка, связанного с иммунным ответом) или их сочетание.

В конкретных вариантах осуществления сигнальная область представляет собой костимулирующую сигнальную область. В конкретных вариантах осуществления костимулирующая область содержит по меньшей мере одну костимулирующую молекулу, которая может обеспечивать оптимальную активацию лимфоцитов. Используемый в настоящем документе термин «костимулирующие молекулы» означает молекулы клеточной поверхности, отличные от антигенных рецепторов или их лигандов, которые необходимы для эффективного ответа лимфоцитов на антиген. По меньшей мере одна костимулирующая сигнальная область может содержать полипептид CD28, полипептид 4-1BB, полипептид OX40, полипептид ICOS, полипептид DAP-10 или их сочетание. Костимулирующая молекула может связываться с костимулирующим лигандом, представляющим собой белок, экспрессируемый на клеточной поверхности, который при связывании с его рецептором продуцирует костимулирующий ответ, то есть, внутриклеточный ответ, который влияет на стимуляцию, возникающую, когда антиген связывается с молекулой его CAR. Костимулирующие лиганды включают, но не ограничиваются ими, CD80, CD86, CD70, OX40L, 4-1BBL, CD48, TNFRSF14 и PD-L1. В качестве одного примера, лиганд 4-1BB (то есть, 4-1BBL) может связываться с 4-1BB (также известным как «CD137»), обеспечивая внутриклеточный сигнал, который в сочетании с сигналом CAR индуцирует эффекторную клеточную функцию CAR⁺ T-клетки. CAR, содержащие внутриклеточный домен, который содержит костимулирующую сигнальную область, содержащую 4-1BB, ICOS или DAP-10, описаны в патенте США 7446190 (например, нуклеотидная последовательность, кодирующая 4-1BB, приведена в SEQ ID NO: 15, нуклеотидная последовательность, кодирующая ICOS, приведена в SEQ ID NO: 16 и нуклеотидная последовательность, кодирующая DAP-10, приведена в SEQ ID NO: 17 в патенте США 7446190), полное содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки. В конкретных вариантах осуществления внутриклеточный домен CAR содержит костимулирующую сигнальную область, которая содержит полипептид CD28. В конкретных вариантах осуществления внутриклеточный домен CAR содержит костимулирующую сигнальную область, которая содержит две костимулирующие молекулы: CD28 и 4-1BB или CD28 и OX40.

4-1BB может действовать в качестве лиганда фактора некроза опухолей (TNF) и имеет стимулирующую активность. Полипептид 4-1BB может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или 100% гомологична последовательности, имеющей регистрационный № NCBI: P41273 или NP_001552 (SEQ ID NO: 274), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены. В конкретных вариантах осуществления полипептид 4-1BB, содержащийся в внутриклеточном домене раскрытого в настоящем документе CAR, имеет аминокислотную последовательность из аминокислот 214-255 из SEQ ID NO: 274. SEQ ID NO: 274 приведена ниже:

1 MGNSCYNIVA TLLLVLNFER TRSLQDPCSN CPAGTFCDNN RNQICSPCPP NSFSSAGGQR

61 TCDICRQCKG VFRTRKECSS TSNAECDCTP GFHCLGAGCS MCEQDCKQGQ ELTKKGCKDC

121 CFGTFNDQKR GICRPWTNCS LDGKSVLVNG TKERDVVCGP SPADLSPGAS SVTPPAPARE

181 PGHSPQIISF FLALTSTALL FLLFFLTLRF SVVKRGRKKL LYIFKQPFMR PVQTTQEEDG

241 CSCRFPEEEE GGCEL [SEQ ID NO: 274]

В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты 4-1BB» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид 4-1BB. В конкретных вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты 4-1BB, кодирующая полипептид 4-1BB, содержащийся в внутриклеточном домене раскрытого в настоящем документе CAR (аминокислоты 214-255 из SEQ ID NO: 274), содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 300, которая представлена ниже.

aaacggggcagaaagaagctcctgtatatattcaaacaaccatttatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaactg [SEQ ID NO: 300]

Полипептид OX40 может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или 100% гомологична последовательности, имеющей регистрационный № NCBI: P43489 или NP_003318 (SEQ ID NO: 275), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены.

SEQ ID NO: 275 приведена ниже:

1 MCVGARRLGR GPCAALLLLG LGLSTVTGLH CVGDTYPSND RCCHECRPGN GMVSRCSRSQ

61 NTVCRPCGPG FYNDVVSSKP CKPCTWCNLR SGSERKQLCT ATQDTVCRCR AGTQPLDSYK

121 PGVDCAPCPP GHFSPGDNQA CKPWTNCTLA GKHTLQPASN SSDAICEDRD PPATQPQETQ

181 GPPARPITVQ PTEAWPRTSQ GPSTRPVEVP GGRAVAAILG LGLVLGLLGP LAILLALYLL

241 RRDQRLPPDA HKPPGGGSFR TPIQEEQADA HSTLAKI [SEQ ID NO: 275]

В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты OX40» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид OX40.

Полипептид ICOS может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или 100% гомологична последовательности, имеющей регистрационный № NCBI: NP_036224 (SEQ ID NO: 276), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены.

SEQ ID NO: 276 приведена ниже:

1 MKSGLWYFFL FCLRIKVLTG EINGSANYEM FIFHNGGVQI LCKYPDIVQQ FKMQLLKGGQ

61 ILCDLTKTKG SGNTVSIKSL KFCHSQLSNN SVSFFLYNLD HSHANYYFCN LSIFDPPPFK

121 VTLTGGYLHI YESQLCCQLK FWLPIGCAAF VVVCILGCIL ICWLTKKKYS SSVHDPNGEY

181 MFMRAVNTAK KSRLTDVTL [SEQ ID NO: 276]

В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты ICOS» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид ICOS.

CTLA-4 представляет собой ингибирующий рецептор, экспрессируемый активированными T-клетками, который при связывании с соответствующими ему лигандами (CD80 и CD86; B7-1 и B7-2, соответственно) опосредует ингибирование или анергию активированной T-клетки. Как в доклинических, так и в клинических исследованиях, блокирование CTLA-4 путем системной инфузии антител приводило к усилению эндогенного противоопухолевого ответа, хотя в клинических исследованиях сопровождалось значительной непредвиденной токсичностью.

CTLA-4 содержит внеклеточный V-домен, трансмембранный домен и цитоплазматический хвост. Были охарактеризованы альтернативно сплайсированные варианты, кодирующие разные изоформы. Мембраносвязанная изоформа функционирует в виде гомодимера, связанного дисульфидной связью, в то время как растворимая изоформа функционирует в виде мономера. Внутриклеточный домен аналогичен таковому у CD28 в том, что он не имеет собственной каталитической активности и содержит один мотив YVKM, способный связывать PI3K, PP2A и SHP-2, и один богатый остатками пролина мотив, способный связывать SH3-содержащие белки. Одна функция CTLA-4 в ингибировании T-клеточных ответов, судя по всему, осуществляется непосредственно через дефосфорилирование SHP-2 и PP2A TCR-проксимальных сигнальных белков, таких как CD3 и LAT. CTLA-4 также может влиять на сигнализацию опосредованно, за счет конкуренции с CD28 за связывание CD80/86. Также показано, что CTLA-4 связывается и/или взаимодействует с PI3K, CD80, AP2M1 и PPP2R5A.

В соответствии с настоящим изобретением, полипептид CTLA-4 может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или примерно 100% гомологична последовательности UniProtKB/Swiss-Prot с регистрационным №: P16410.3 (SEQ ID NO: 277) (гомологию между ними можно определять с использованием стандартных программ, таких как BLAST или FASTA), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены.

SEQ ID NO: 277 приведена ниже:

1 MACLGFQRHK AQLNLATRTW PCTLLFFLLF IPVFCKAMHV AQPAVVLASS RGIASFVCEY

61 ASPGKATEVR VTVLRQADSQ VTEVCAATYM MGNELTFLDD SICTGTSSGN QVNLTIQGLR

121 AMDTGLYICK VELMYPPPYY LGIGNGTQIY VIDPEPCPDS DFLLWILAAV SSGLFFYSFL

181 LTAVSLSKML KKRSPLTTGV YVKMPPTEPE CEKQFQPYFI PIN [SEQ ID NO: 277]

В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты CTLA-4» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид CTLA-4.

PD-1 является отрицательным иммунорегулятором активированных T-клеток при взаимодействии с соответствующими ему лигандами PD-L1 и PD-L2, экспрессируемыми на эндогенных макрофагах и дендритных клетках. PD-1 представляет собой мембранный белок I типа из 268 аминокислот. PD-1 имеет два лиганда, PD-L1 и PD-L2, которые являются представителями семейства B7. Структура белка содержит внеклеточный домен IgV, за которым следует трансмембранная область и внутриклеточный хвост. Внутриклеточный хвост содержит два сайта фосфорилирования, находящиеся в тирозинсодержащем ингибиторном мотиве иммунорецепторов и тирозинсодержащем переключающем мотиве иммунорецепторов, PD-1 отрицательно регулирует сигналы TCR. SHP-I и SHP-2 фосфатазы связываются с цитоплазматическим хвостом PD-1 после связывания лиганда. Повышающая регуляция PD-L1 является одним из механизмов, позволяющих опухолевым клеткам ускользать от иммунной системы хозяина. В доклинических и клинических исследованиях блокирование PD-1 антагонистическими антителами индуцировало противоопухолевые ответы, опосредованные эндогенной иммунной системой хозяина.

В соответствии с настоящим изобретением, полипептид PD-1 может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или примерно 100% гомологична последовательности с регистрационным № NCBI: NP_005009.2 (SEQ ID NO: 278), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены.

SEQ ID NO: 278 приведена ниже:

1 MQIPQAPWPV VWAVLQLGWR PGWFLDSPDR PWNPPTFSPA LLVVTEGДНК TFTCSFSNTS

61 ESFVLNWYRM SPSNQTDKLA AFPEDRSQPG QDCRFRVTQL PNGRDFHMSV VRARRNDSGT

121 YLCGAISLAP KAQIKESLRA ELRVTERRAE VPTAHPSPSP RPAGQFQTLV VGVVGGLLGS

181 LVLLVWVLAV ICSRAARGTI GARRTGQPLK EDPSAVPVFS VDYGELDFQW REKTPEPPVP

241 CVPEQTEYAT IVFPSGMGTS SPARRGSADG PRSAQPLRPE DGHCSWPL [SEQ ID NO: 278]

В соответствии с настоящим изобретением «молекула нуклеиновой кислоты PD-1» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид PD-1.

Белок активации лимфоцитов 3 (LAG-3) является отрицательным иммунорегулятором иммунных клеток. LAG-3 принадлежит к суперсемейству иммуноглобулинов (Ig) и содержит 4 внеклеточных Ig-подобных домена. Ген LAG3 содержит 8 экзонов. Данные относительно последовательности, организации экзонов/интронов и хромосомной локализации указывают на близкое родство LAG3 с CD4. LAG3 также имеет название CD223 (кластер дифференцировки 223).

В соответствии с настоящим изобретением, полипептид LAG-3 может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или примерно 100% гомологична последовательности UniProtKB/Swiss-Prot с регистрационным №: P18627.5 (SEQ ID NO: 279), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены.

SEQ ID NO: 279 приведена ниже:

1 MWEAQFLGLL FLQPLWVAPV KPLQPGAEVP VVWAQEGAPA QLPCSPTIPL QDLSLLRRAG

61 VTWQHQPDSG PPAAAPGHPL APGPHPAAPS SWGPRPRRYT VLSVGPGGLR SGRLPLQPRV

121 QLDERGRQRG DFSLWLRPAR RADAGEYRAA VHLRDRALSC RLRLRLGQAS MTASPPGSLR

181 ASDWVILNCS FSRPDRPASV HWFRNRGQGR VPVRESPHHH LAESFLFLPQ VSPMDSGPWG

241 CILTYRDGFN VSIMYNLTVL GLEPPTPLTV YAGAGSRVGL PCRLPAGVGT RSFLTAKWTP

301 PGGGPDLLVT GDNGDFTLRL EDVSQAQAGT YTCHIHLQEQ QLNATVTLAI ITVTPKSFGS

361 PGSLGKLLCE VTPVSGQERF VWSSLDTPSQ RSFSGPWLEA QEAQLLSQPW QCQLYQGERL

421 LGAAVYFTEL SSPGAQRSGR APGALPAGHL LLFLILGVLS LLLLVTGAFG FHLWRRQWRP

481 RRFSALEQGI HPPQAQSKIE ELEQEPEPEP EPEPEPEPEP EPEQL [SEQ ID NO: 279]

В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты LAG-3» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид LAG-3.

Рецептор 2B4 (2B4) клеток-естественных киллеров на NK-клетках и подмножествах T-клеток опосредует не рестриктированное по MHC уничтожение клеток. В настоящее время функцию 2B4 продолжают изучать, при этом считается, что изоформа 2B4-S является активирующим рецептором, а изоформа 2B4-L является отрицательным иммунорегулятором иммунных клеток. 2B4 блокируется при связывании его высокоаффинного лиганда, CD48. 2B4 содержит тирозинсодержащий переключающий мотив, молекулярный переключатель, позволяющий белку связываться с разными фосфатазами. 2B4 также имеет название CD244 (кластер дифференцировки 244).

В соответствии с настоящим изобретением полипептид 2B4 может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или примерно 100% гомологична последовательности UniProtKB/Swiss-Prot с регистрационным №: Q9BZW8.2 (SEQ ID NO: 280), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены.

SEQ ID NO: 280 приведена ниже:

1 MLGQVVTLIL LLLLKVYQGK GCQGSADHVV SISGVPLQLQ PNSIQTKVDS IAWKKLLPSQ

61 NGFHHILKWE NGSLPSNTSN DRFSFIVKNL SLLIKAAQQQ DSGLYCLEVT SISGKVQTAT

121 FQVFVFESLL PDKVEKPRLQ GQGKILDRGR CQVALSCLVS RDGNVSYAWY RGSKLIQTAG

181 NLTYLDEEVD INGTHTYTCN VSNPVSWESH TLNLTQDCQN AHQEFRFWPF LVIIVILSAL

241 FLGTLACFCV WRRKRKEKQS ETSPKEFLTI YEDVKDLKTR RNHEQEQTFP GGGSTIYSMI

301 QSQSSAPTSQ EPAYTLYSLI QPSRKSGSRK RNHSPSFNST IYEVIGKSQP KAQNPARLSR

361 KELENFDVYS [SEQ ID NO: 280]

В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты 2B4» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид 2B4.

Экспрессия аттенюатора B- и T-лимфоцитов (BTLA) индуцируется в процессе активации T-клеток, и BTLA остается экспрессированным на Th1 клетках, но не на Th2 клетках. Подобно PD1 и CTLA4, BTLA взаимодействует с гомологом B7, B7H4. Однако, в отличие от PD-1 и CTLA-4, BTLA вызывает ингибирование T-клеток при взаимодействии с представителями семейства рецепторов фактора некроза опухолей (TNF-R), а не только представителями семейства B7 рецепторов клеточной поверхности. BTLA является лигандом для представителя 14 суперсемейства (рецепторов) фактора некроза опухолей (TNFRSF14), также известного как медиатор проникновения вируса герпеса (HVEM). Комплексы BTLA-HVEM отрицательно регулируют T-клеточные иммунные ответы. Показано, что активация BTLA приводит к ингибированию функции специфичных в отношении рака человеческих CD8⁺ T-клеток. BTLA также имеет название CD272 (кластер дифференцировки 272).

В соответствии с настоящим изобретением, полипептид BTLA может иметь аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на примерно 85%, примерно 90%, примерно 95%, примерно 96%, примерно 97%, примерно 98%, примерно 99% или примерно 100% гомологична последовательности UniProtKB/Swiss-Prot с регистрационным №: Q7Z6A9.3 (SEQ ID NO: 281), или ее фрагментам, и/или может, необязательно, иметь одну, две или три консервативные аминокислотные замены.

SEQ ID NO: 281 приведена ниже:

1 MKTLPAMLGT GKLFWVFFLI PYLDIWNIHG KESCDVQLYI KRQSEHSILA GDPFELECPV

61 KYCANRPHVT WCKLNGTTCV KLEDRQTSWK EEKNISFFIL HFEPVLPNDN GSYRCSANFQ

121 SNLIESHSTT LYVTDVKSAS ERPSKDEMAS RPWLLYRLLP LGGLPLLITT CFCLFCCLRR

181 HQGKQNELSD TAGREINLVD AHLKSEQTEA STRQNSQVLL SETGIYDNDP DLCFRMQEGS

241 EVYSNPCLEE NKPGIVYASL NHSVIGPNSR LARNVKEAPT EYASICVRS [SEQ ID NO: 281]

В соответствии с настоящим изобретением, «молекула нуклеиновой кислоты BTLA» означает полинуклеотид, кодирующий полипептид BTLA.

В конкретных вариантах осуществления CAR содержит внеклеточную антигенсвязывающую область, которая специфически связывается с рецептором, связанным с G-белками (например, GPRC5D), трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ζ и костимулирующую сигнальную область, которая содержит полипептид CD28, как показано на фигуре 1. Как показано на фигуре 1, CAR также содержит сигнальный пептид или лидер, ковалентно связанный с 5ʹ-концом внеклеточного антигенсвязывающего домена. В конкретных вариантах осуществления сигнальный пептид содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 282.

В конкретных вариантах осуществления CAR содержит внеклеточную антигенсвязывающую область, которая специфически связывается с рецептором, связанным с G-белками (например, GPRC5D), трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ζ и костимулирующую сигнальную область, которая содержит полипептид 4-1BB, как показано на фигуре 6. Как показано на фигуре 6, CAR также содержит сигнальный пептид или лидер, ковалентно связанный с 5ʹ-концом внеклеточного антигенсвязывающего домена. В конкретных вариантах осуществления сигнальный пептид содержит аминокислотную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 282.

В некоторых вариантах осуществления CAR по настоящему изобретению может дополнительно содержать индуцируемый промотор для экспрессии нуклеотидных последовательностей в клетках человека. Промоторы, используемые для экспрессии генов CAR, могут быть конститутивными промоторами, такими как промотор гена убиквитина C (UbiC).

Настоящее изобретение также относится к выделенной молекуле нуклеиновой кислоты, кодирующей CAR, нацеленный на рецептор, связанный с G-белками (например, GPRC5D), описанный в настоящем документе, или его функциональную часть. В конкретных вариантах осуществления выделенная молекула нуклеиновой кислоты кодирует раскрытый в настоящем документе CAR, нацеленный на рецептор, связанный с G-белками (например, GPRC5D), содержащий scFv, который специфически связывается с GPRC5D человека, трансмембранный домен, содержащий полипептид CD28, и внутриклеточный домен, содержащий полипептид CD3ξ и костимулирующую сигнальную область, содержащую полипептид CD28. В конкретных вариантах осуществления scFv представляет собой scFv человека. В конкретных вариантах осуществления scFv представляет собой scFv мыши. В одном конкретном неограничивающем примере выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 397, которая представлена ниже:

cagtctgtgttgacgcagcctgcctccgtgtctgggtctcctggacagtcgctcaccatctcctgcactggaaccagcaatgacgttggtgcttataagtatgtctcctggtatcaacagtacccaggcaaagcccccaaactcatactttatgatgtctttaagcggccctcaggggtctctaatcgcttctctggctccaagtctgacaacacggcctccctgaccatctctgggctccaggctgaggacgaggctgattattactgcttctcacttacaagcagtaacacttatgtcttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggcccagatgcagctggtgcagtctggagctgaggtgaagaagcctggggcctcagtgaaggtctcctgcaaggcttctggttacacctttaacagatatgctatcacctgggtgcgacaggcccctggacaaggccttgagtggatgggatggatcagcgcttacaatggtaattcacactatgcacagaagctccagggcagagtcaccatgaccacagacacatccacgggcacagcctatatggagctgaggaggctgagatctgacgacacggccgtgtattactgtgcgcgcatggcttacgattcttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctcagcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc [SEQ ID NO: 397]

В одном конкретном неограничивающем примере выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 398, которая представлена ниже:

cagtctgtgttgactcagccaccctcagcgtctgggacccccggacagagggtcaccatctcttgttctggaagcaggtccaacgtaggaggtaattatgtattttggtaccagcaagtccccggagcgacccccaaactcctcatctataggagtaatcagcggccctcgggggtccctgaccgattcgctggctccaagtctggctcctcagcctccctggccatcagtggactccggtccgaggatgaggctgattattactgtgcaacatgggatgacagcctgagtggttttgtcttcggaactgggaccaaggtcaccgtcctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggccgaggtgcagctggtggagtctgggggaggcttggtcaagcctggagggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagtgactactacatgagctggatccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtttcatacattagtagtagtggtagtaccatatactacgcagactctgtgaagggccgattcaccatctccagggacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgcggttacggtaaagcttacgatcagtggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctcagcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc [SEQ ID NO: 398]

В одном конкретном неограничивающем примере выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 399, которая представлена ниже:

TcttctgagctgactcaggaccctgctgtgtctgtggccttgggacagacagtcaggatcacatgccaaggagacagcctcagaagctattatgcaagctggtaccagcagaagccaggacaggcccctgtacttgtcatctatggtaaaaacaaccggccctcagggatcccagaccgattctctggctccagctcaggaaacacagcttccttgaccatcactggggctcaggcggaagatgaggctgactattactgtaactcccgggacagcagtggtaacccccctgtggtattcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggccCaggtgcagctggtggagtctgggggaggcctggtccaccctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcaccttcagaagccatagcatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcatccattagtagtgatagtacttacacatactacgcagactcagtgaagggccgattcaccatctccagagacaacgccaagaactcactgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacggccgtatattactgtgcgcgctctggtggtcagtggaaatactacgattactggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctcagcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc [SEQ ID NO: 399]

В одном конкретном неограничивающем примере выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 400, которая представлена ниже:

cagtctgtcgtgacgcagccgccctcaatgtctgcggccccaggacagcaagtcaccatctcctgctctggaggcaactccaacattgagagaaattatgtatcctggtacctccagctccctggaacagcccccaaactcgtcatttttgacaatgataggcgaccctcagggattcctgaccgattctctggctccaagtctggcacgtcagccaccctgggcatcaccggactccagactggggacgaggccgattattactgcggaacatgggatagcagcctgagaggttgggtgttcggcggagggaccaagctgaccgtcctaggttctagaggtggtggtggtagcggcggcggcggctctggtggtggtggatccctcgagatggccgaggtgcagctggtggagtccgggggaggcttgatacagcctggggggtccctgagactctcctgtgcagcctctggattcacctttagcaactatgccatgaactgggtccgccaggctccagggaaggggctggagtgggtctcaactattaatggtcgtggtagtagtacaatctacgcagactccgtgaagggccggttcaccatctccagagacaattccaagaacacgctgtatctgcaaatgaacagcctgagagccgaggacacagccacgtattactgtgcgcgctacatctctcgtggtctgggtgattcttggggtcaaggtactctggtgaccgtctcctcagcggccgcaattgaagttatgtatcctcctccttacctagacaatgagaagagcaatggaaccattatccatgtgaaagggaaacacctttgtccaagtcccctatttcccggaccttctaagcccttttgggtgctggtggtggttggtggagtcctggcttgctatagcttgctagtaacagtggcctttattattttctgggtgaggagtaagaggagcaggctcctgcacagtgactacatgaacatgactccccgccgccccgggcccacccgcaagcattaccagccctatgccccaccacgcgacttcgcagcctatcgctccagagtgaagttcagcaggagcgcagacgcccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctaggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaaccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcgccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgcaggccctgccccctcgc [SEQ ID NO: 400]

В одном конкретном неограничивающем примере выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 401, которая представлена ниже:

CCGGTGCCGCCACCATGGAAACCGACACCCTGCTGCTGTGGGTGCTGCTGCTGTGGGTGCCAGGATCCACAGGACAGTCT

GTCGTGACGCAGCCTGCCTCCGTGTCTGGGTCTCCTGGACAGTCGATCACCATCTCCTGCACTGGAACCAGCAGTGACGT

TGGTGGTTATAACTATGTCTCCTGGTACCAACAGCACCCAGGCAAAGCCCCCAAACTCATGATTTATGATGTCAGTAAGC

GGCCCTCAGGGGTTTCTAATCGCTTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCAACACGGCCTCCCTGACCATCTCTGGGCTCCAGGCT

GAGGACGAGGCTGATTATTACTGCAGCTCATATACAAGCAGCAGCACTTTGGTATTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGT

CCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCGAGGTGCAGC

TGGTGGAGTCTGGGGGAGCCTTTGTACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGC

AGCTATGCCATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGCCTGGAATGGGTCTCGACTATTAGTGGTCGTGGTCGTAG

CACATTCTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTTACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTATATCTGCAAATGA

ACAGTCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGCGCTACTACCATGCTGGTGCTTTCGATCTGTGGGGTCAA

GGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCAGAACAAAAACTCATCTCAGAAGAGGATCTGGCggccgcacccaccacgacgccagc

gccgcgaccaccaaccccggcgcccacgatcgcgtcgcagcccctgtccctgcgcccagaggcgtgccggccagcggcgg

ggggcgcagtgcacacgagggggctggacttcgcctgtgatatctacatctgggcgcccctggccgggacttgtggggtc

cttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaacaaacggggcagaaagaagctcctgtatatattcaaacaaccatt

tatgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaac

tgagagtgaagttcagcaggagcgcagagccccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatcta

ggacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaa

ccctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagc

gccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatg

caggccctgccccctcgctaacagccactcgaggatccggattagtccaatttgttaaagacaggatatcagtggtccag

gctctagttttgactcaacaatatcaccagctgaagcctatagagtacgagccatagataaaataaaagattttatttag

tctccagaaaaaggggggaatgaaagaccccacctgtaggtttggcaagctagcttaagtaacgccattttgcaaggcat

ggaaaaatacataactgagaatagagaagttcagatcaaggtcaggaacagatggaacagctgaatatgggccaaacagg

atatctgtggtaagcagttcctgccccggctcagggccaagaacagatggaacagctgaatatgggccaaacaggatatc

tgtggtaagcagttcctgccccggctcagggccaagaacagatggtccccagatgcggtccagccctcagcagtttctag

agaaccatcagatgtttccagggtgccccaaggacctgaaatgaccctgtgccttatttgaactaaccaatcagttcgct

tctcgcttctgttcgcgcgcttctgctccccgagctcaataaaagagcccacaacccctcactcggggcgccagtcctcc

gattgactgagtcgcccgggtacccgtgtatccaataaaccctcttgcagttgcatccgacttgtggtctcgctgttcct

tgggagggtctcctctgagtgattgactacccgtcagcgggggtctttcacacatgcagcatgtatcaaaattaatttgg

ttttttttcttaagtatttacattaaatggccatagtacttaaagttacattggcttccttgaaataaacatggagtatt

cagaatgtgtcataaatatttctaattttaagatagtatctccattggctttctactttttcttttatttttttttgtcc

tctgtcttccatttgttgttgttgttgtttgtttgtttgtttgttggttggttggttaatttttttttaaagatcctaca

ctatagttcaagctagactattagctactctgtaacccagggtgaccttgaagtcatgggtagcctgctgttttagcctt

cccacatctaagattacaggtatgagctatcatttttggtatattgattgattgattgattgatgtgtgtgtgtgtgatt

gtgtttgtgtgtgtgactgtgaaaatgtgtgtatgggtgtgtgtgaatgtgtgtatgtatgtgtgtgtgtgagtgtgtgt

gtgtgtgtgtgcatgtgtgtgtgtgtgactgtgtctatgtgtatgactgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgt

gtgtgtgtgtgtgttgtgaaaaaatattctatggtagtgagagccaacgctccggctcaggtgtcaggttggtttttgag

acagagtctttcacttagcttggAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAA

CTTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACA

GTTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATAT

GGTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCC

TGACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTC

ACCGTCATCACCGAAACGCGCGATGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATG

GTTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAA

TATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATT

TCCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAA

GATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCG

CCCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGC

AAGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACG

GATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAAC

GATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGG

AGCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTA

ACTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCT

GCGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAG

CACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAAT

AGACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGAT

TGATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAAC

GTGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTA

ATCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCC

GAAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGA

ACTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTT

ACCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAG

CTTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCATTGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAA

AGGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTAT

CTTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATG

GAAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTAT

CCCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGC

GAGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAG

CTGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCAC

CCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGC

TATGACCATGATTACGCCAAGCTTTGCTCTTAGGAGTTTCCTAATACATCCCAAACTCAAATATATAAAGCATTTGACTT

GTTCTATGCCCTAGGGGGCGGGGGGAAGCTAAGCCAGCTTTTTTTAACATTTAAAATGTTAATTCCATTTTAAATGCACA

GATGTTTTTATTTCATAAGGGTTTCAATGTGCATGAATGCTGCAATATTCCTGTTACCAAAGCTAGTATAAATAAAAATA

GATAAACGTGGAAATTACTTAGAGTTTCTGTCATTAACGTTTCCTTCCTCAGTTGACAACATAAATGCGCTGCTGAGCAA

GCCAGTTTGCATCTGTCAGGATCAATTTCCCATTATGCCAGTCATATTAATTACTAGTCAATTAGTTGATTTTTATTTTT

GACATATACATGTGAATGAAAGACCCCACCTGTAGGTTTGGCAAGCTAGCTTAAGTAACGCCATTTTGCAAGGCATGGAA

AAATACATAACTGAGAATAGAAAAGTTCAGATCAAGGTCAGGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATAT

CTGTGGTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTG

GTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGTCCCCAGATGCGGTCCAGCCCTCAGCAGTTTCTAGAGAA

CCATCAGATGTTTCCAGGGTGCCCCAAGGACCTGAAATGACCCTGTGCCTTATTTGAACTAACCAATCAGTTCGCTTCTC

GCTTCTGTTCGCGCGCTTATGCTCCCCGAGCTCAATAAAAGAGCCCACAACCCCTCACTCGGGGCGCCAGTCCTCCGATT

GACTGAGTCGCCCGGGTACCCGTGTATCCAATAAACCCTCTTGCAGTTGCATCCGACTTGTGGTCTCGCTGTTCCTTGGG

AGGGTCTCCTCTGAGTGATTGACTACCCGTCAGCGGGGGTCTTTCATTTGGGGGCTCGTCCGGGATCGGGAGACCCCTGC

CCAGGGACCACCGACCCACCACCGGGAGGTAAGCTGGCCAGCAACTTATCTGTGTCTGTCCGATTGTCTAGTGTCTATGA

CTGATTTTATGCGCCTGCGTCGGTACTAGTTAGCTAACTAGCTCTGTATCTGGCGGACCCGTGGTGGAACTGACGAGTTC

GGAACACCCGGCCGCAACCCTGGGAGACGTCCCAGGGACTTCGGGGGCCGTTTTTGTGGCCCGACCTGAGTCCTAAAATC

CCGATCGTTTAGGACTCTTTGGTGCACCCCCCTTAGAGGAGGGATATGTGGTTCTGGTAGGAGACGAGAACCTAAAACAG

TTCCCGCCTCCGTCTGAATTTTTGCTTTCGGTTTGGGACCGAAGCCGCGCCGCGCGTCTTGTCTGCTGCAGCATCGTTCT

GTGTTGTCTCTGTCTGACTGTGTTTCTGTATTTGTCTGAAAATATGGGCCCGGGCTAGACTGTTACCACTCCCTTAAGTT

TGACCTTAGGTCACTGGAAAGATGTCGAGCGGATCGCTCACAACCAGTCGGTAGATGTCAAGAAGAGACGTTGGGTTACC

TTCTGCTCTGCAGAATGGCCAACCTTTAACGTCGGATGGCCGCGAGACGGCACCTTTAACCGAGACCTCATCACCCAGGT

TAAGATCAAGGTCTTTTCACCTGGCCCGCATGGACACCCAGACCAGGTCCCCTACATCGTGACCTGGGAAGCCTTGGCTT

TTGACCCCCCTCCCTGGGTCAAGCCCTTTGTACACCCTAAGCCTCCGCCTCCTCTTCCTCCATCCGCCCCGTCTCTCCCC

CTTGAACCTCCTCGTTCGACCCCGCCTCGATCCTCCCTTTATCCAGCCCTCACTCCTTCTCTAGGCGCCCCCATATGGCC

ATATGAGATCTTATATGGGGCACCCCCGCCCCTTGTAAACTTCCCTGACCCTGACATGACAAGAGTTACTAACAGCCCCT

CTCTCCAAGCTCACTTACAGGCTCTCTACTTAGTCCAGCACGAAGTCTGGAGACCTCTGGCGGCAGCCTACCAAGAACAA

CTGGACCGA [SEQ ID NO: 401]

В одном конкретном неограничивающем примере выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 402, которая представлена ниже:

CCGGTGCCGCCACCATGGAAACCGACACCCTGCTGCTGTGGGTGCTGCTGCTGTGGGTGCCAGGATCCACAGGACAGTCT

GTGTTGACTCAGCCACCCTCAGCGTCTGGGACCCCCGGACAGAGGGTCACCATCTCTTGTTCTGGAAGCAGGTCCAACGT

AGGAGGTAATTATGTATTTTGGTACCAGCAAGTCCCCGGAGCGACCCCCAAACTCCTCATCTATAGGAGTAATCAGCGGC

CCTCGGGGGTCCCTGACCGATTCGCTGGCTCCAAGTCTGGCTCCTCAGCCTCCCTGGCCATCAGTGGACTCCGGTCCGAG

GATGAGGCTGATTATTACTGTGCAACATGGGATGACAGCCTGAGTGGTTTTGTCTTCGGAACTGGGACCAAGGTCACCGT

CCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCGAGGTGCAGC

TGGTGGAGTCTGGGGGAGGCTTGGTCAAGCCTGGAGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTCAGT

GACTACTACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTTTCATACATTAGTAGTAGTGGTAGTAC

CATATACTACGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCCAGGGACAACGCCAAGAACTCACTGTATCTGCAAATG

AACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTGCGCGCGGGTTACGGTAAAGCTTACGATCAGTGGGGTCAAG

GTACTCTGGTGACCGTCTCCTCAGAACAAAAACTCATCTCAGAAGAGGATCTGGCggccgcacccaccacgacgccagcg

ccgcgaccaccaaccccggcgcccacgatcgcgtcgcagcccctgtccctgcgcccagaggcgtgccggccagcggcggg

gggcgcagtgcacacgagggggctggacttcgcctgtgatatctacatctgggcgcccctggccgggacttgtggggtcc

ttctcctgtcactggttatcaccctttactgcaacaaacggggcagaaagaagctcctgtatatattcaaacaaccattt

atgagaccagtacaaactactcaagaggaagatggctgtagctgccgatttccagaagaagaagaaggaggatgtgaact

gagagtgaagttcagcaggagcgcagagccccccgcgtaccagcagggccagaaccagctctataacgagctcaatctag

gacgaagagaggagtacgatgttttggacaagagacgtggccgggaccctgagatggggggaaagccgagaaggaagaac

cctcaggaaggcctgtacaatgaactgcagaaagataagatggcggaggcctacagtgagattgggatgaaaggcgagcg

ccggaggggcaaggggcacgatggcctttaccagggtctcagtacagccaccaaggacacctacgacgcccttcacatgc

aggccctgccccctcgctaacagccactcgaggatccggattagtccaatttgttaaagacaggatatcagtggtccagg

ctctagttttgactcaacaatatcaccagctgaagcctatagagtacgagccatagataaaataaaagattttatttagt

ctccagaaaaaggggggaatgaaagaccccacctgtaggtttggcaagctagcttaagtaacgccattttgcaaggcatg

gaaaaatacataactgagaatagagaagttcagatcaaggtcaggaacagatggaacagctgaatatgggccaaacagga

tatctgtggtaagcagttcctgccccggctcagggccaagaacagatggaacagctgaatatgggccaaacaggatatct

gtggtaagcagttcctgccccggctcagggccaagaacagatggtccccagatgcggtccagccctcagcagtttctaga

gaaccatcagatgtttccagggtgccccaaggacctgaaatgaccctgtgccttatttgaactaaccaatcagttcgctt

ctcgcttctgttcgcgcgcttctgctccccgagctcaataaaagagcccacaacccctcactcggggcgccagtcctccg

attgactgagtcgcccgggtacccgtgtatccaataaaccctcttgcagttgcatccgacttgtggtctcgctgttcctt

gggagggtctcctctgagtgattgactacccgtcagcgggggtctttcacacatgcagcatgtatcaaaattaatttggt

tttttttcttaagtatttacattaaatggccatagtacttaaagttacattggcttccttgaaataaacatggagtattc

agaatgtgtcataaatatttctaattttaagatagtatctccattggctttctactttttcttttatttttttttgtcct

ctgtcttccatttgttgttgttgttgtttgtttgtttgtttgttggttggttggttaatttttttttaaagatcctacac

tatagttcaagctagactattagctactctgtaacccagggtgaccttgaagtcatgggtagcctgctgttttagccttc

ccacatctaagattacaggtatgagctatcatttttggtatattgattgattgattgattgatgtgtgtgtgtgtgattg

tgtttgtgtgtgtgactgtgaaaatgtgtgtatgggtgtgtgtgaatgtgtgtatgtatgtgtgtgtgtgagtgtgtgtg

tgtgtgtgtgcatgtgtgtgtgtgtgactgtgtctatgtgtatgactgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtgtg

tgtgtgtgtgtgttgtgaaaaaatattctatggtagtgagagccaacgctccggctcaggtgtcaggttggtttttgaga

cagagtctttcacttagcttggAATTCACTGGCCGTCGTTTTACAACGTCGTGACTGGGAAAACCCTGGCGTTACCCAAC

TTAATCGCCTTGCAGCACATCCCCCTTTCGCCAGCTGGCGTAATAGCGAAGAGGCCCGCACCGATCGCCCTTCCCAACAG

TTGCGCAGCCTGAATGGCGAATGGCGCCTGATGCGGTATTTTCTCCTTACGCATCTGTGCGGTATTTCACACCGCATATG

GTGCACTCTCAGTACAATCTGCTCTGATGCCGCATAGTTAAGCCAGCCCCGACACCCGCCAACACCCGCTGACGCGCCCT

GACGGGCTTGTCTGCTCCCGGCATCCGCTTACAGACAAGCTGTGACCGTCTCCGGGAGCTGCATGTGTCAGAGGTTTTCA

CCGTCATCACCGAAACGCGCGATGACGAAAGGGCCTCGTGATACGCCTATTTTTATAGGTTAATGTCATGATAATAATGG

TTTCTTAGACGTCAGGTGGCACTTTTCGGGGAAATGTGCGCGGAACCCCTATTTGTTTATTTTTCTAAATACATTCAAAT

ATGTATCCGCTCATGAGACAATAACCCTGATAAATGCTTCAATAATATTGAAAAAGGAAGAGTATGAGTATTCAACATTT

CCGTGTCGCCCTTATTCCCTTTTTTGCGGCATTTTGCCTTCCTGTTTTTGCTCACCCAGAAACGCTGGTGAAAGTAAAAG

ATGCTGAAGATCAGTTGGGTGCACGAGTGGGTTACATCGAACTGGATCTCAACAGCGGTAAGATCCTTGAGAGTTTTCGC

CCCGAAGAACGTTTTCCAATGATGAGCACTTTTAAAGTTCTGCTATGTGGCGCGGTATTATCCCGTATTGACGCCGGGCA

AGAGCAACTCGGTCGCCGCATACACTATTCTCAGAATGACTTGGTTGAGTACTCACCAGTCACAGAAAAGCATCTTACGG

ATGGCATGACAGTAAGAGAATTATGCAGTGCTGCCATAACCATGAGTGATAACACTGCGGCCAACTTACTTCTGACAACG

ATCGGAGGACCGAAGGAGCTAACCGCTTTTTTGCACAACATGGGGGATCATGTAACTCGCCTTGATCGTTGGGAACCGGA

GCTGAATGAAGCCATACCAAACGACGAGCGTGACACCACGATGCCTGTAGCAATGGCAACAACGTTGCGCAAACTATTAA

CTGGCGAACTACTTACTCTAGCTTCCCGGCAACAATTAATAGACTGGATGGAGGCGGATAAAGTTGCAGGACCACTTCTG

CGCTCGGCCCTTCCGGCTGGCTGGTTTATTGCTGATAAATCTGGAGCCGGTGAGCGTGGGTCTCGCGGTATCATTGCAGC

ACTGGGGCCAGATGGTAAGCCCTCCCGTATCGTAGTTATCTACACGACGGGGAGTCAGGCAACTATGGATGAACGAAATA

GACAGATCGCTGAGATAGGTGCCTCACTGATTAAGCATTGGTAACTGTCAGACCAAGTTTACTCATATATACTTTAGATT

GATTTAAAACTTCATTTTTAATTTAAAAGGATCTAGGTGAAGATCCTTTTTGATAATCTCATGACCAAAATCCCTTAACG

TGAGTTTTCGTTCCACTGAGCGTCAGACCCCGTAGAAAAGATCAAAGGATCTTCTTGAGATCCTTTTTTTCTGCGCGTAA

TCTGCTGCTTGCAAACAAAAAAACCACCGCTACCAGCGGTGGTTTGTTTGCCGGATCAAGAGCTACCAACTCTTTTTCCG

AAGGTAACTGGCTTCAGCAGAGCGCAGATACCAAATACTGTCCTTCTAGTGTAGCCGTAGTTAGGCCACCACTTCAAGAA

CTCTGTAGCACCGCCTACATACCTCGCTCTGCTAATCCTGTTACCAGTGGCTGCTGCCAGTGGCGATAAGTCGTGTCTTA

CCGGGTTGGACTCAAGACGATAGTTACCGGATAAGGCGCAGCGGTCGGGCTGAACGGGGGGTTCGTGCACACAGCCCAGC

TTGGAGCGAACGACCTACACCGAACTGAGATACCTACAGCGTGAGCATTGAGAAAGCGCCACGCTTCCCGAAGGGAGAAA

GGCGGACAGGTATCCGGTAAGCGGCAGGGTCGGAACAGGAGAGCGCACGAGGGAGCTTCCAGGGGGAAACGCCTGGTATC

TTTATAGTCCTGTCGGGTTTCGCCACCTCTGACTTGAGCGTCGATTTTTGTGATGCTCGTCAGGGGGGCGGAGCCTATGG

AAAAACGCCAGCAACGCGGCCTTTTTACGGTTCCTGGCCTTTTGCTGGCCTTTTGCTCACATGTTCTTTCCTGCGTTATC

CCCTGATTCTGTGGATAACCGTATTACCGCCTTTGAGTGAGCTGATACCGCTCGCCGCAGCCGAACGACCGAGCGCAGCG

AGTCAGTGAGCGAGGAAGCGGAAGAGCGCCCAATACGCAAACCGCCTCTCCCCGCGCGTTGGCCGATTCATTAATGCAGC

TGGCACGACAGGTTTCCCGACTGGAAAGCGGGCAGTGAGCGCAACGCAATTAATGTGAGTTAGCTCACTCATTAGGCACC

CCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATTGTGAGCGGATAACAATTTCACACAGGAAACAGCT

ATGACCATGATTACGCCAAGCTTTGCTCTTAGGAGTTTCCTAATACATCCCAAACTCAAATATATAAAGCATTTGACTTG

TTCTATGCCCTAGGGGGCGGGGGGAAGCTAAGCCAGCTTTTTTTAACATTTAAAATGTTAATTCCATTTTAAATGCACAG

ATGTTTTTATTTCATAAGGGTTTCAATGTGCATGAATGCTGCAATATTCCTGTTACCAAAGCTAGTATAAATAAAAATAG

ATAAACGTGGAAATTACTTAGAGTTTCTGTCATTAACGTTTCCTTCCTCAGTTGACAACATAAATGCGCTGCTGAGCAAG

CCAGTTTGCATCTGTCAGGATCAATTTCCCATTATGCCAGTCATATTAATTACTAGTCAATTAGTTGATTTTTATTTTTG

ACATATACATGTGAATGAAAGACCCCACCTGTAGGTTTGGCAAGCTAGCTTAAGTAACGCCATTTTGCAAGGCATGGAAA

AATACATAACTGAGAATAGAAAAGTTCAGATCAAGGTCAGGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATATC

TGTGGTAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGAACAGCTGAATATGGGCCAAACAGGATATCTGTGG

TAAGCAGTTCCTGCCCCGGCTCAGGGCCAAGAACAGATGGTCCCCAGATGCGGTCCAGCCCTCAGCAGTTTCTAGAGAAC

CATCAGATGTTTCCAGGGTGCCCCAAGGACCTGAAATGACCCTGTGCCTTATTTGAACTAACCAATCAGTTCGCTTCTCG

CTTCTGTTCGCGCGCTTATGCTCCCCGAGCTCAATAAAAGAGCCCACAACCCCTCACTCGGGGCGCCAGTCCTCCGATTG

ACTGAGTCGCCCGGGTACCCGTGTATCCAATAAACCCTCTTGCAGTTGCATCCGACTTGTGGTCTCGCTGTTCCTTGGGA

GGGTCTCCTCTGAGTGATTGACTACCCGTCAGCGGGGGTCTTTCATTTGGGGGCTCGTCCGGGATCGGGAGACCCCTGCC

CAGGGACCACCGACCCACCACCGGGAGGTAAGCTGGCCAGCAACTTATCTGTGTCTGTCCGATTGTCTAGTGTCTATGAC

TGATTTTATGCGCCTGCGTCGGTACTAGTTAGCTAACTAGCTCTGTATCTGGCGGACCCGTGGTGGAACTGACGAGTTCG

GAACACCCGGCCGCAACCCTGGGAGACGTCCCAGGGACTTCGGGGGCCGTTTTTGTGGCCCGACCTGAGTCCTAAAATCC

CGATCGTTTAGGACTCTTTGGTGCACCCCCCTTAGAGGAGGGATATGTGGTTCTGGTAGGAGACGAGAACCTAAAACAGT

TCCCGCCTCCGTCTGAATTTTTGCTTTCGGTTTGGGACCGAAGCCGCGCCGCGCGTCTTGTCTGCTGCAGCATCGTTCTG

TGTTGTCTCTGTCTGACTGTGTTTCTGTATTTGTCTGAAAATATGGGCCCGGGCTAGACTGTTACCACTCCCTTAAGTTT

GACCTTAGGTCACTGGAAAGATGTCGAGCGGATCGCTCACAACCAGTCGGTAGATGTCAAGAAGAGACGTTGGGTTACCT

TCTGCTCTGCAGAATGGCCAACCTTTAACGTCGGATGGCCGCGAGACGGCACCTTTAACCGAGACCTCATCACCCAGGTT

AAGATCAAGGTCTTTTCACCTGGCCCGCATGGACACCCAGACCAGGTCCCCTACATCGTGACCTGGGAAGCCTTGGCTTT

TGACCCCCCTCCCTGGGTCAAGCCCTTTGTACACCCTAAGCCTCCGCCTCCTCTTCCTCCATCCGCCCCGTCTCTCCCCC

TTGAACCTCCTCGTTCGACCCCGCCTCGATCCTCCCTTTATCCAGCCCTCACTCCTTCTCTAGGCGCCCCCATATGGCCA

TATGAGATCTTATATGGGGCACCCCCGCCCCTTGTAAACTTCCCTGACCCTGACATGACAAGAGTTACTAACAGCCCCTC

TCTCCAAGCTCACTTACAGGCTCTCTACTTAGTCCAGCACGAAGTCTGGAGACCTCTGGCGGCAGCCTACCAAGAACAAC

TGGACCGA [SEQ ID NO: 402]

В одном конкретном неограничивающем примере выделенная молекула нуклеиновой кислоты содержит нуклеотидную последовательность, приведенную в SEQ ID NO: 403, которая представлена ниже:

CCGGTGCCGCCACCATGGAAACCGACACCCTGCTGCTGTGGGTGCTGCTGCTGTGGGTGCCAGGATCCACAGGACAGTCT

GTCGTGACGCAGCCGCCCTCAATGTCTGCGGCCCCAGGACAGCAAGTCACCATCTCCTGCTCTGGAGGCAACTCCAACAT

TGAGAGAAATTATGTATCCTGGTACCTCCAGCTCCCTGGAACAGCCCCCAAACTCGTCATTTTTGACAATGATAGGCGAC

CCTCAGGGATTCCTGACCGATTCTCTGGCTCCAAGTCTGGCACGTCAGCCACCCTGGGCATCACCGGACTCCAGACTGGG

GACGAGGCCGATTATTACTGCGGAACATGGGATAGCAGCCTGAGAGGTTGGGTGTTCGGCGGAGGGACCAAGCTGACCGT

CCTAGGTTCTAGAGGTGGTGGTGGTAGCGGCGGCGGCGGCTCTGGTGGTGGTGGATCCCTCGAGATGGCCGAGGTGCAGC

TGGTGGAGTCCGGGGGAGGCTTGATACAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGCAGCCTCTGGATTCACCTTTAGC

AACTATGCCATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAGTGGGTCTCAACTATTAATGGTCGTGGTAGTAG

TACAATCTACGCAGACTCCGTGAAGGGCCGGTTCACCATCTCCAGAGACAATTCCAAGAACACGCTGTATCTGCAAATGA

ACAGCCTGAGAGCCGAGGACACAGCCACGTATTACTGTGCGCGCTACATCTCTCGTGGTCTGGGTGATTCTTGGGGTCAA

GGTACTCTGGTGACCGTCTCCTCAGAACAAAAACTCATCTCAGAGGAGGATCTGGCggccgcacccaccacgacgccagc