КОМБИНИРОВАННАЯ ТЕРАПИЯ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ЛЕГОЧНОЙ ГИПЕРТЕНЗИИ Российский патент 2021 года по МПК A61K31/497 A61K31/4985 A61K31/505 A61K45/06 A61K9/00 A61P9/12 

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА

[001] Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании предварительной заявки на патент США №62/413788, поданной 27 октября 2016 года, которая полностью включена в настоящее описание посредством ссылки.

ПРАВА ПРАВИТЕЛЬСТВА

[002] Настоящее изобретение было выполнено при поддержке правительства в рамках гранта R44HL102946, предоставленного Национальным институтом здравоохранения. Правительство имеет определенные права на настоящее изобретение.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[003] Легочная гипертензия (ЛГ) представляет собой редкое нарушение легочной сосудистой системы, которое связано с высокой заболеваемостью и смертностью. Патология указанного заболевания включает плексиформные поражения с дезорганизованным ангиогенезом и аномальную неоинтимальную клеточную пролиферацию, которые затрудняют кровоток через легочные артериолы. Киназы играют ключевую роль в росте и пролиферации клеток и могут быть применены для устранения патологии, лежащей в основе ЛГ. Для лечения ЛГ могут быть применены ингибиторы киназ.

ВКЛЮЧЕНИЕ ПОСРЕДСТВОМ ССЫЛКИ

[004] Каждый патент, публикация и отличный от патента источник, указанный в настоящей заявке, полностью включен в настоящее описание посредством ссылки, как если бы каждый из них был отдельно включен посредством ссылки.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[005] В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения предложен способ лечения состояния, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества ингибитора тирозинкиназы, терапевтически эффективного количества ингибитора фосфодиэстеразы типа 5 (PDEV) и терапевтически эффективного количества антагониста рецепторов эндотелина.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[006] На ФИГ. 1 представлены PDGFR-пути PDGFRαα, PDGFRαβ и PDGFRββ.

[007] На ФИГ. 2 показаны результаты анализа ELISA фосфорилированного PDGFRβ в фибробластах легких человека, обработанных различными концентрациями PDGFB в присутствии или отсутствии Соединения 1 и иматиниба.

[008] На ФИГ. 3 показано сравнение средних значений концентраций Соединения 1 в легких, артериях и венах крыс после ингаляции.

[009] На ФИГ. 4 показаны изменения в средних значениях концентраций Соединения 1 в артериях и венах в динамике.

[010] На ФИГ. 5 показаны результаты вестерн-блот-анализов pPDGFRβ и PDGFRβ, полученных из лизатов клеток легкого, полученных от крыс с легочной гипертензией, после лечения Соединением 1.

[011] На ФИГ. 6 показано увеличение экспрессии гена PDGFB в легких в модели гипоксии с AAV-PDGFB SU5416.

[012] На ФИГ. 7 показан эффект комбинированного лечения тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1 на % снижения систолического давления в правом желудочке (СДПЖ).

[013] На ФИГ. 8 показан эффект комбинированного лечения тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1 на гипертрофию правого желудочка (ПЖ/(ЛЖ + МЖП)).

[014] На ФИГ. 9 показаны срезы легкого, окрашенные гематоксилином и эозином, по сравнению с площадью просвета и медиа легочных артериол, демонстрирующие влияние комбинированного лечения тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1 на величину отношения площади просвета/медиа.

[015] На ФИГ. 10 приведено сравнение влияния монотерапии и комбинированного лечения тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1 на величину отношения площади просвета/медиа.

[016] На ФИГ. 11 показан эффект монотерапии и комбинированного лечения тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1 на фосфорилирование PDGFRβ (Y1021).

[017] На ФИГ. 12 показан эффект монотерапии и комбинированного лечения тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1 на фосфорилирование PDGFRα (Y751).

[018] На ФИГ. 13 показан эффект монотерапии и комбинированного лечения тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1 при проведении вестерн-блот-анализа фосфорилированного PDGFRβ в сравнении с общим PDGFRβ в присутствии актина в качестве контроля.

[019] На ФИГ. 14 показаны результаты вестерн-блоттинга, демонстрирующие снижение фосфорилирования MYPT в группе, получавшей лечение тадалафилом, амбризентаном и ингалируемым Соединением 1, в сравнении с группой, получавшей лечение только средой-носителем, и группой с тадалафилом и амбризентаном.

[020] На ФИГ. 15 показан эффект на фосфорилирование MYPT в группах, получавших лечение только средой-носителем; тадалафилом и амбризентаном; Соединением 1, а также тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1.

[021] На ФИГ. 16 показаны результаты вестерн-блоттинга, которые демонстрируют снижение фосфорилирования STAT3 по сравнению с общим содержанием STAT3 (pSTAT3/STAT3) в группах лечения.

[022] На ФИГ. 17 показан эффект на фосфорилирование STAT3 по сравнению с общим содержанием STAT3 (pSTAT3/STAT3) в группах, получавших лечение только средой-носителем; тадалафилом и амбризентаном; Соединением 1, а также тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1.

[023] На ФИГ. 18 показан эффект монотерапии и комбинированного лечения тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1 на дыхательный объем.

[024] На ФИГ. 19 показан эффект монотерапии и комбинированного лечения тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1 на частоту дыхания.

[025] На ФИГ. 20 показан эффект монотерапии и комбинированного лечения тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1 на минутный объем вентиляции легких.

[026] На ФИГ. 21 показан эффект монотерапии и комбинированного лечения тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1 на сопротивление дыхательных путей.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[027] Легочная гипертензия (ЛГ), также известная как легочная артериальная гипертензия (ЛАГ), представляет собой хроническое заболевание, которое поражает артерии, расположенные в легких и выходящие из правой стороны сердца. Если ее не лечить, ЛАГ может привести к сердечной недостаточности; таким образом, ЛАГ представляет собой нарушение, связанное с высокой заболеваемостью и смертностью. Всемирная организация здравоохранения подразделяет ЛГ на пять групп на основе первопричинного заболевания: ЛАГ, ЛГ вследствие заболевания левых отделов сердца, ЛГ вследствие заболеваний легких и/или гипоксии, хроническую тромбоэмболическую ЛГ (ХТЭЛГ) и ЛГ с другими, многофакторными механизмами.

[028] Патология ЛАГ включает сложные сосудистые образования, возникающие вследствие ремоделирования легочных артерий, называемые плексиформными поражениями, и аномальную неоинтимальную клеточную пролиферацию, которые затрудняют кровоток через легочные артериолы. Киназы играют ключевую роль в росте и пролиферации клеток и могут быть направлены на устранение патологии, лежащей в основе ЛАГ.

[029] ЛАГ может быть связана с несколькими этиологиями, включая семейные формы и предрасполагающие генетические аномалии, такие как генетические мутации рецептора костного морфогенетического белка II типа (BMPR2), эндоглина, активин-подобной рецепторной киназы 1 (ALK1), белка «матери против декапентаплегии 9» (mothers against decapentaplegic) (SMAD 9) и зависимых путей, аутоиммунные нарушения (например, системный склероз и склеродермию), врожденный порок сердца, заболевание печени с портальной гипертензией и ВИЧ-инфекции. При ЛАГ может наблюдаться среднее легочное артериальное давление ≥ 25 мм рт. ст. и давление заклинивания в легочных капиллярах или конечное диастолическое давление КДД в левом желудочке ≤ 15 мм рт. ст.

[030] Передача сигнала через путь фактора роста тромбоцитов (PDGF) может способствовать развитию и прогрессированию ЛАГ. Рецептор PDGF (PDGFR) имеет две основные изоформы: α и β. α- и β-изоформы PDGFR могут образовывать гомодимеры (т.е., PDGFRαα и PDGFRββ) и гетеродимеры (т.е., PDGFRαβ). В некоторых вариантах реализации PDGFRαα сокращенно обозначают как PDGFRα, и PDGFRββ сокращенно обозначают как PDGFRβ. Передача сигнала через разные изоформы PDGFR может активировать разные сигнальные пути.

[031] Лиганды, которые связывают рецепторы PDGFR, представляют собой одноцепочечные белки, такие как PDGFA и PDGFB, которые также могут образовывать гомодимеры и гетеродимеры. Лиганды, которые связывают PDGFRα, представляют собой PDGFAA и в меньшей степени PDGFAB и PDGFBB. PDGFBB является основным лигандом, который связывает PDGFRβ.

[032] Передача сигнала через рецепторы PDGFR играет важную роль в ЛАГ, и при ЛАГ активируется путь PDGF. На ФИГУРЕ 1 представлены PDGFR-пути PDGFRαα, PDGFRαβ и PDGFRββ и демонстрируется, что рецептор PDGFRβ может активировать пути AKT, ERK или STAT3, чтобы стимулировать приток кальция и ангиогенез. Гомодимер PDGFRα активирует пути PLCγ и PI3K и стимулирует только приток кальция. Гетеродимер PDGFRαβ активирует пути ERK и STAT3, стимулируя активность ядерного фактора каппа-β (NFκβ) и интерлейкина-6 (IL-6). Передача сигнала через PDGF также увеличивает факторы транскрипции, включая E2F4, Jun, ESR1, EST1, ETS1, SMAD1, SP1, STAT1, MYC, HIFA, LEF1, СЕВРВ и FOS. Сокращения: A, PDGFA; В, PDGFB; αα, гомодимер PDGFRα; αβ, гетеродимер PDGFRαβ; ββ, гомодимер PDGFRβ; PLCγ, фосфолипаза С гамма; PI3K, фосфоинозитид-3-киназа; ERK, регулируемая внеклеточными сигналами киназа (extracellular related kinase) (также известная как МАР-киназа р38); AKT, протеинкиназа В; STAT3, преобразователь сигнала и активатор транскрипции 3 (signal transduction and activator of transcription 3).

[033] Иматиниб представляет собой мощный ингибитор PDGF и является менее сильнодействующим в отношении изоформы PDGFRβ, чем изоформы PDGFRα. Иматиниб снижает систолическое давление в правом желудочке (СДПЖ) путем ингибирования PDGF и улучшает выживаемость при монокроталиновой модели ЛАГ у крыс. Иматиниб также улучшает сердечно-легочную гемодинамику у пациентов с прогрессирующей ЛАГ. Однако пероральное введение иматиниба связано со значительными побочными эффектами и не применяется для лечения и профилактики прогрессирующей ЛАГ.

[034] Легочное сосудистое русло является источником и мишенью для вазоактивных факторов. К числу наиболее важных вазоактивных факторов легочного сосудистого гомеостаза относятся факторы, которые обеспечивают использование циклического гуанозинмонофосфата (цГМФ) в качестве внутриклеточного вторичного мессенджера, включая оксид азота (NO) и семейство натрийуретических пептидов (например, предсердный натрийуретический пептид, мозговой натрийуретический пептид и натрийуретический пептид С-типа). PDEV присутствует в гладкой мышце стенки артерии в легких. Ингибиторы PDEV блокируют разрушающее действие цГМФ-специфической PDEV на циклический ГМФ в гладкомышечных клетках, выстилающих кровеносные сосуды. Примеры ингибиторов PDEV включают силденафил (Виагра®), тадалафил (Сиалис®) и варденафил (Левитра®).

[035] Растворимая гуанилатциклаза (рГЦ) представляет собой фермент в сигнальном пути NO. Когда NO связывается с простетической группой рГЦ, представляющей собой гем-группу, рГЦ катализирует синтез цГМФ, который способствует вазодилатации и ингибирует пролиферацию гладких мышц, рекрутинг лейкоцитов, агрегацию тромбоцитов и ремоделирование сосудов. Стимуляторы рГЦ непосредственно стимулируют рГЦ и увеличивают выработку цГМФ. Неограничивающие примеры стимуляторов рГЦ включают YC-1, BAY 41-2272, BAY 41-8543, риоцигуат (Адемпас®; BAY 63-2521), CFM-1571, BAY 60-4552, верицигуат (BAY 1021189) и А-350619.

[036] Антагонисты рецепторов эндотелина (ЕТ) представляют собой лекарственные средства, которые блокируют рецепторы ЕТ. Тремя классами антагонистов рецепторов ЕТ являются 1) селективные антагонисты рецепторов ET_A, которые воздействуют только на рецепторы ЕТ А; 2) двойные антагонисты, которые воздействуют на рецепторы ЕТ А и ЕТ В; и 3) селективные антагонисты рецепторов ET_B, которые воздействуют только на рецепторы ЕТ В. Примеры селективного антагониста рецепторов ETA включают ситаксентан, амбризентан, атрасентан, BQ-123 и зиботентан. Примеры двойных антагонистов включают бозентан (Траклир®), мацитентан (Опсамит®) и тезосентан.

Примеры селективных антагонистов рецепторов ET_B включают BQ-788 и А192621.

[037] В настоящем раскрытии описаны клинические эффекты добавления ингалируемого ингибитора PDGFR в схему приема ингибитора PDEV, антагониста рецепторов ЕТ и/или рГЦ.

Соединения согласно настоящему изобретению

[038] В раскрытом изобретении описаны терапевтические составы ингибиторов протеинкиназы и способы лечения легочных и сосудистых состояний. Соединения согласно настоящему изобретению могут модулировать фосфорилирование одной или более нижележащих (downstream) мишеней PDGFRα или PDGFRβ, где указанная нижележащая мишень представляет собой любой субстрат, который фосфорилируется в результате активации PDGFRα или PDGFRβ. В некоторых вариантах реализации указанная нижележащая мишень PDGFRα или PDGFRβ представляет собой AKT, PDGFR, STAT3, ERK1 или ERK2.

[039] В некоторых вариантах реализации неограничивающие примеры соединений согласно настоящему описанию включают соединения следующей формулы:

или их фармацевтически приемлемую соль,

где:

- W представляет собой NR¹, О, S или связь;

- каждый X и Y независимо представляет собой CR² или N;

- каждый R^1a, R^1b и R^1c независимо представляет собой Н, галоген, гидроксил, алкил, алкенил, алкинил, алкоксигруппу, простую эфирную группу, группу карбоновой кислоты, карбоксальдегидную группу, сложноэфирную группу, аминогруппу, амидную группу, карбонатную группу, карбаматную группу, простую тиоэфирную группу, сложную тиоэфирную группу, тиокислотную группу, арил, гетероциклил или гетероарил, любой из которых является замещенным или незамещенным;

- каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н, галоген, алкил, алкенил, алкинил, арил, гетероциклил или гетероарил, любой из которых является замещенным или незамещенным, или R^2a и R^2b совместно образуют карбонил;

- каждый Z¹, Z², Z³, Z⁴ и Z⁵ независимо представляет собой CR² или N; и

- каждый R¹ и R² независимо представляет собой Н, галоген, гидроксил, алкил, алкенил, алкинил, алкоксигруппу, простую эфирную группу, группу карбоновой кислоты, карбоксальдегидную группу, сложноэфирную группу, аминогруппу, амидную группу, карбонатную группу, карбаматную группу, простую тиоэфирную группу, сложную тиоэфирную группу, тиокислотную группу, арил, гетероциклил, гетероарил, сульфгидрил, нитро, нитрозо, циано, азидо, сульфоксидную группу, сульфоновую группу, сульфонамидную группу, группу сульфоновой кислоты, иминогруппу, ацильную группу, ацилоксигруппу, любая из которых является замещенной или незамещенной.

[040] В некоторых вариантах реализации W представляет собой NR¹, где R¹ представляет собой Н или алкил. В некоторых вариантах реализации W представляет собой NR¹, где R¹ представляет собой Н. В некоторых вариантах реализации каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или алкил. В некоторых вариантах реализации каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или метил. В некоторых вариантах реализации каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н и этил.

[041] В некоторых вариантах реализации каждый X и Y независимо представляет собой CR², где R² представляет собой Н, галоген, гидроксил или алкил. В некоторых вариантах реализации каждый X и Y независимо представляет собой N. В некоторых вариантах реализации X представляет собой CR², где R² представляет собой Н, и Y представляет собой N. В некоторых вариантах реализации X представляет собой N, и Y представляет собой CR², где R² представляет собой Н.

[042] В некоторых вариантах реализации каждый R^1a, R^1b и R^1c независимо представляет собой Н, галоген, гидроксил, алкил, арил или гетероарил, любой из которых является замещенным или незамещенным. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a, R^1b и R^1c независимо представляет собой Н, арил или гетероарил, любой из которых является замещенным или незамещенным. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a, R^1b и R^1c независимо представляет собой Н или арил, любой из которых является замещенным или незамещенным. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a, R^1b и R^1c независимо представляет собой Н или замещенный арил.

[043] В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b представляет собой Н, и R^1c представляет собой замещенный арил. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b представляет собой Н, и R^1c представляет собой замещенный фенил. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b представляет собой Н, и R^1c представляет собой фенил, замещенный гидроксилом, алкилом или алкокси. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b представляет собой Н, и R^1c представляет собой фенил, замещенный гидроксилом или алкокси. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b представляет собой Н, и R^1c представляет собой фенил, замещенный гидроксилом и алкокси. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b представляет собой Н, и R^1c представляет собой фенил, замещенный алкокси. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b представляет собой Н, и R^1c представляет собой фенил, замещенный метокси. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b представляет собой Н, и R^1c представляет собой фенил, замещенный двумя метоксигруппами. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b представляет собой Н, и R^1c представляет собой 3,4-диметоксифенил. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b представляет собой Н, и R^1c представляет собой 3-гидрокси-4-метоксифенил.

[044] В некоторых вариантах реализации каждый Z¹, Z², Z³, Z⁴ и Z⁵ независимо представляет собой CR², где R² представляет собой Н, галоген, гидроксил, алкил, простую эфирную группу, аминогруппу или амидную группу. В некоторых вариантах реализации каждый Z¹, Z², Z³, Z⁴ и Z⁵ независимо представляет собой CR², где R² представляет собой Н или амидную группу. В некоторых вариантах реализации каждый Z¹, Z³, Z⁴ и Z⁵ независимо представляет собой CR², где R² представляет собой Н; и Z² представляет собой CR², где R² представляет собой амидную группу. В некоторых вариантах реализации каждый Z¹, Z³, Z⁴ и Z⁵ независимо представляет собой CR², где R² представляет собой Н; и Z² представляет собой CR², где R² представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой Н, гидроксил, алкил, алкенил, арил, гетероциклил или гетероарил, любой из которых является замещенным или незамещенным. В некоторых вариантах реализации каждый Z¹, Z³, Z⁴ и Z⁵ независимо представляет собой CR², где R² представляет собой Н; и Z² представляет собой CR², где R² представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой арил или гетероарил, любой из которых является замещенным или незамещенным. В некоторых вариантах реализации каждый Z¹, Z³, Z⁴ и Z⁵ независимо представляет собой CR², где R² представляет собой Н; и Z² представляет собой CR², где R² представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой замещенный гетероарил. В некоторых вариантах реализации каждый Z¹, Z³, Z⁴ и Z⁵ независимо представляет собой CR², где R² представляет собой Н; и Z² представляет собой CR², где R² представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой замещенный пиридинил. В некоторых вариантах реализации каждый Z¹, Z³, Z⁴ и Z⁵ независимо представляет собой CR², где R² представляет собой Н; и Z² представляет собой CR², где R² представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой метилпиридинил. В некоторых вариантах реализации Z¹, Z³, Z⁴ и Z⁵ независимо представляет собой CR², где R² представляет собой Н; и Z² представляет собой CR², где R² представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой 2-метилпиридин-5-ил.

[045] В некоторых вариантах реализации W представляет собой NR¹, где R¹ представляет собой Н; каждый X и Y независимо представляет собой N; каждый R^1a и R^1b представляет собой Н; R^1c представляет собой замещенный арил; каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или алкил; каждый Z¹, Z³, Z⁴ и Z⁵ независимо представляет собой CR², где R² представляет собой Н; Z² представляет собой CR², где R² представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой замещенный гетероарил. В некоторых вариантах реализации W представляет собой NR¹, где R¹ представляет собой Н; каждый X и Y независимо представляет собой N; каждый R^1a и R^1b представляет собой Н; R^1c представляет собой замещенный фенил; каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или алкил; каждый Z¹, Z³, Z⁴ и Z⁵ независимо представляет собой CR², где R² представляет собой Н; Z² представляет собой CR², где R² представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой пиридинил. В некоторых вариантах реализации W представляет собой NR¹, где R¹ представляет собой Н; каждый X и Y независимо представляет собой N; каждый R^1a и R^1b представляет собой Н; R^1c представляет собой фенил с двумя алкоксизаместителями; каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или алкил; каждый Z¹, Z³, Z⁴ и Z⁵ независимо представляет собой CR², где R² представляет собой Н; Z² представляет собой CR², где R² представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой метилпиридинил. В некоторых вариантах реализации W представляет собой NR¹, где R¹ представляет собой Н; каждый X и Y независимо представляет собой N; каждый R^1a и R^1b представляет собой Н; R^1c представляет собой фенил, замещенный алкоксигруппой и гидроксильной группой; каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или алкил; каждый Z¹, Z³, Z⁴ и Z⁵ независимо представляет собой CR², где R² представляет собой Н; Z² представляет собой CR², где R² представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой метилпиридинил. В некоторых вариантах реализации W представляет собой NR¹, где R¹ представляет собой Н; каждый X и Y независимо представляет собой N; каждый R^1a и R^1b представляет собой Н; R^1c представляет собой фенил, замещенный алкоксигруппой и гидроксильной группой; каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или алкил; каждый Z¹, Z³, Z⁴ и Z⁵ независимо представляет собой CR², где R² представляет собой Н; Z² представляет собой CR², где R² представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой 2-метилпиридин-5-ил.

[046] В некоторых вариантах реализации неограничивающие примеры соединений согласно настоящему описанию включают соединения следующей формулы:

или их фармацевтически приемлемую соль,

где:

- каждый R^1a, R^1b и R^1c независимо представляет собой Н, галоген, гидроксил, алкил, алкенил, алкинил, алкоксигруппу, простую эфирную группу, группу карбоновой кислоты, карбоксальдегидную группу, сложноэфирную группу, аминогруппу, амидную группу, карбонатную группу, карбаматную группу, простую тиоэфирную группу, сложную тиоэфирную группу, тиокислотную группу, арил, гетероциклил или гетероарил, любой из которых является замещенным или незамещенным;

- каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н, галоген, алкил, алкенил, алкинил, арил, гетероциклил или гетероарил, любой из которых является замещенным или незамещенным; и

- каждый R^3a, R^3b, R^3c, R^3d и R^3e независимо представляет собой Н, галоген, гидроксил, алкил, алкенил, алкинил, алкоксигруппу, простую эфирную группу, группу карбоновой кислоты, карбоксальдегидную группу, сложноэфирную группу, аминогруппу, амидную группу, карбонатную группу, карбаматную группу, простую тиоэфирную группу, сложную тиоэфирную группу, тиокислотную группу, арил, гетероциклил, гетероарил, сульфгидрил, нитро, нитрозо, циано, азидо, сульфоксидную группу, сульфоновую группу, сульфонамидную группу, группу сульфоновой кислоты, иминогруппу, ацильную группу или ацилоксигруппу, любая из которых является замещенной или незамещенной.

[047] В некоторых вариантах реализации каждый R^1a, R^1b и R^1c независимо представляет собой Н, галоген, гидроксил, алкил, арил или гетероарил, любой из которых является замещенным или незамещенным. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a, R^1b и R^1c независимо представляет собой Н, арил или гетероарил, любой из которых является замещенным или незамещенным. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a, R^1b и R^1c независимо представляет собой Н или арил, где указанный арил является замещенным или незамещенным. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b представляет собой Н, и R^1c представляет собой арил, где указанный арил является замещенным или незамещенным. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b представляет собой Н, и R^1c представляет собой замещенный арил. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b представляет собой Н, и R^1c представляет собой фенил, замещенный галогеном, гидроксилом, алкилом или алкоксигруппой. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b представляет собой Н, и R^1c представляет собой фенил, замещенный двумя алкоксигруппами. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b представляет собой Н, и R^1c представляет собой 3,4-диметоксифенил. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b представляет собой Н, и R^1c представляет собой фенил, замещенный алкоксигруппой и гидроксильной группой. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b представляет собой Н, и R^1c представляет собой 3-гидрокси-4-метоксифенил.

[048] В некоторых вариантах реализации каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или алкил. В некоторых вариантах реализации каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или метил. В некоторых вариантах реализации каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или этил.

[049] В некоторых вариантах реализации каждый R^3a, R^3b, R^3c, R^3d и R^3e независимо представляет собой Н, галоген, гидроксил, алкил, алкоксигруппу, аминогруппу или амидную группу, любая из которых является замещенной или незамещенной. В некоторых вариантах реализации каждый R^3a, R^3b, R^3c, R^3d и R^3e независимо представляет собой Н, гидроксил или амидную группу, любая из которых является замещенной или незамещенной. В некоторых вариантах реализации каждый R^3a, R^3c, R^3d и R^3e независимо представляет собой Н, и R^3b представляет собой амидную группу. В некоторых вариантах реализации каждый R^3a, R^3c, R^3d и R^3e независимо представляет собой Н; и R^3b представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой Н, гидроксил, алкил, алкенил, арил, гетероциклил или гетероарил, любой из которых является замещенным или незамещенным. В некоторых вариантах реализации каждый R^3a, R^3c, R^3d и R^3e независимо представляет собой Н; и R^3b представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой арил или гетероарил, любой из которых является замещенным или незамещенным. В некоторых вариантах реализации каждый R^3a, R^3c, R^3d и R^3e независимо представляет собой Н; и R^3b представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой замещенный пиридинил. В некоторых вариантах реализации каждый R^3a, R^3c, R^3d и R^3e независимо представляет собой Н; и R^3b представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой метилпиридинил. В некоторых вариантах реализации каждый R^3a, R^3c, R^3d и R^3e независимо представляет собой Н; и R^3b представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой метилпиридин-5-ил.

[050] В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b независимо представляет собой Н; R^1c представляет собой замещенный арил; каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или алкил; каждый R^3a, R^3c, R^3d и R^3e независимо представляет собой Н; и R^3b представляет собой амидную группу. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b независимо представляет собой Н; R^1c представляет собой замещенный фенил; каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или метил; каждый R^3a, R^3c, R^3d и R^3e независимо представляет собой Н; и R^3b представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой замещенный гетероарил. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b независимо представляет собой Н; R^1c представляет собой замещенный фенил; каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или метил; каждый R^3a, R^3c, R^3d и R^3e независимо представляет собой Н; и R^3b представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой замещенный пиридинил. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b независимо представляет собой Н; R^1c представляет собой замещенный фенил; каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или метил; каждый R^3a, R^3c, R^3d и R^3e независимо представляет собой Н; и R^3b представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой метилпиридинил. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b независимо представляет собой Н; R^1c представляет собой фенил, замещенный двумя алкоксигруппами; каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или метил; каждый R^3a, R^3c, R^3d и R^3e независимо представляет собой Н; и R^3b представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой замещенный пиридинил. В некоторых вариантах реализации каждый R^1a и R^1b независимо представляет собой Н; R^1c представляет собой фенил, замещенный одной алкоксигруппой и одной гидроксильной группой; каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или метил; каждый R^3a, R^3c, R^3d и R^3e независимо представляет собой Н; и R^3b представляет собой NHC(O)R³, где R³ представляет собой замещенный пиридинил.

[051] В некоторых вариантах реализации неограничивающие примеры соединений согласно настоящему описанию включают соединения следующей формулы:

или их фармацевтически приемлемую соль,

где:

- каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н, галоген, алкил, алкенил, алкинил, арил, гетероциклил или гетероарил, любой из которых является замещенным или незамещенным;

- каждый R^4a, R^4b, R^4c и R^4d независимо представляет собой Н, галоген, гидроксил, алкил, алкоксигруппу, группу карбоновой кислоты, сложноэфирную группу, аминогруппу, амидную группу, сульфгидрил, нитро, нитрозо, циано, азидо, сульфоксидную группу, сульфоновую группу, сульфонамидную группу, группу сульфоновой кислоты или ацилоксигруппу, любая из которых является замещенной или незамещенной; и

- каждый R^5a, R^5b, R^5c, R^5d и R^5e независимо представляет собой Н, галоген, гидроксил, алкил, алкоксигруппу, группу карбоновой кислоты, сложноэфирную группу, аминогруппу или амидную группу, любая из которых является замещенной или незамещенной.

[052] В некоторых вариантах реализации каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или алкил. В некоторых вариантах реализации каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или метил. В некоторых вариантах реализации каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н или этил. В некоторых вариантах реализации каждый R^2a и R^2b независимо представляет собой Н и этил.

[053] В некоторых вариантах реализации каждый R^4a, R^4b, R^4c и R^4d независимо представляет собой Н, галоген, гидроксил или алкил. В некоторых вариантах реализации каждый R^4a, R^4b, R^4c и R^4d независимо представляет собой Н или алкил. В некоторых вариантах реализации каждый R^4a, R^4c и R^4d независимо представляет собой Н; и R^4b представляет собой алкил. В некоторых вариантах реализации каждый R^4a, R^4c и R^4d независимо представляет собой Н; и R^4b представляет собой метил.

[054] В некоторых вариантах реализации каждый R^5a, R^5b, R^5c, R^5d и R^5e независимо представляет собой Н, гидроксил, алкокси или аминогруппу, любая из которых является замещенной или незамещенной. В некоторых вариантах реализации каждый R^5a, R^5b, R^5c, R^5d и R^5e независимо представляет собой Н, гидроксил или алкокси. В некоторых вариантах реализации каждый R^5a, R^5d и R^5e независимо представляет собой Н; и каждый R^5b и R^5c независимо представляет собой гидроксил или алкокси. В некоторых вариантах реализации каждый R^5a, R^5d и R^5e независимо представляет собой Н; и каждый R^5b и R^5c независимо представляет собой алкокси. В некоторых вариантах реализации каждый R^5a, R^5d и R^5e независимо представляет собой Н; и каждый R^5b и R^5c независимо представляет собой метокси. В некоторых вариантах реализации каждый R^5a, R^5d и R^5e независимо представляет собой Н; R^5b представляет собой алкокси; и R^5c представляет собой гидроксил. В некоторых вариантах реализации каждый R^5a, R^5d и R^5e независимо представляет собой Н; R^5b представляет собой метокси; и R^5c представляет собой гидроксил.

[055] В некоторых вариантах реализации соединения согласно настоящему описанию представляют собой соединения формулы:

или их фармацевтически приемлемую соль с переменными, определенными выше.

[056] Неограничивающие примеры соединений согласно настоящему описанию включают следующие соединения:

или их фармацевтически приемлемую соль.

[057] Неограничивающие примеры соединений согласно настоящему описанию включают следующие соединения:

или их фармацевтически приемлемую соль.

[058] Неограничивающие примеры соединений согласно настоящему описанию включают следующие соединения:

или их фармацевтически приемлемую соль.

[059] Любое соединение согласно настоящему описанию может представлять собой любые или все его стереоизомеры, энантиомеры, диастереомеры, смеси, рацематы, атропоизомеры и таутомеры.

[060] Иллюстративным примером ингибитора киназы является Соединение 1, которое представляет собой соединение приведенной ниже формулы или его фармацевтически приемлемую соль.

Необязательные заместители для химических групп

[061] Неограничивающие примеры необязательных заместителей включают гидроксильные группы, сульфгидрильные группы, галогены, аминогруппы, нитрогруппы, нитрозогруппы, цианогруппы, азидогруппы, сульфоксидные группы, сульфоновые группы, сульфонамидные группы, карбоксильные группы, карбоксальдегидные группы, иминогруппы, алкильные группы, галогеналкильные группы, алкенильные группы, галогеналкенильные группы, алкинильные группы, галогеналкинильные группы, алкоксигруппы, арильные группы, арилоксигруппы, аралкильные группы, арилалкоксигруппы, гетероциклильные группы, ацильные группы, ацилоксигруппы, карбаматные группы, амидные группы, уретановые группы и сложноэфирные группы.

[062] Неограничивающие примеры алкильных и алкиленовых групп включают неразветвленные, разветвленные и циклические алкильные и алкиленовые группы. Алкильная или алкиленовая группа может представлять собой, например, C₁, C₂, С₃, C₄, С₅, C₆, C₇, С₈, С₉, C₁₀, С₁₁, С₁₂, С₁₃, С₁₄, С₁₅, C₁₆, C₁₇, C₁₈, C₁₉, C₂₀, C₂₁, C₂₂, C₂₃, C₂₄, C₂₅, C₂₆, C₂₇, C₂₈, C₂₉, C₃₀, C₃₁, C₃₂, С₃₃, C₃₄, C₃₅, С₃₆, C₃₇, C₃₈, C₃₉, C₄₀, C₄₁, C₄₂, C₄₃, C₄₄, C₄₅, C₄₆, C₄₇, C₄₈, C₄₉ или C₅₀ группу, которая является замещенной или незамещенной.

[063] Неограничивающие примеры неразветвленных алкильных групп включают метил, этил, пропил, бутил, пентил, гексил, гептил, октил, нонил и децил.

[064] Разветвленные алкильные группы включают любую неразветвленную алкильную группу, замещенную любым количеством алкильных групп. Неограничивающие примеры разветвленных алкильных групп включают изопропил, изобутил, втор-бутил и трет-бутил.

[065] Неограничивающие примеры циклических алкильных групп включают циклопропильную, циклобутильную, циклопентильную, циклогексильную, циклогептильную и циклооктильную группы. Циклические алкильные группы также включают конденсированные, мостиковые и спиробициклы и высшие конденсированные, мостиковые и спиросистемы. Циклическая алкильная группа может быть замещена любым количеством неразветвленных, разветвленных или циклических алкильных групп.

[066] Неограничивающие примеры алкенильных и алкениленовых групп включают неразветвленные, разветвленные и циклические алкенильные группы. Олефин или олефины алкенильной группы могут быть, например, Е-, Z-, цис-, транс-, концевыми или экзометиленовыми. Алкенильная или алкениленовая группа может представлять собой, например, C₂, С₃, С₄, С₅, C₆, С₇, C₈, С₉, C₁₀, С₁₁, С₁₂, С₁₃, С₁₄, С₁₅, C₁₆, С₁₇, C₁₈, С₁₉, С₂₀, С₂₁, С₂₂, С₂₃, С₂₄, С₂₅, С₂₆, С₂₇, С₂₈, С₂₉, C₃₀, С₃₁, С₃₂, С₃₃, С₃₄, С₃₅, С₃₆, С₃₇, С₃₈, С₃₉, С₄₀, С₄₁, С₄₂, С₄₃, С₄₄, С₄₅, С₄₆, С₄₇, С₄₈, С₄₉ или С₅₀ группу, которая является замещенной или незамещенной.

[067] Неограничивающие примеры алкинильных или алкиниленовых групп включают неразветвленные, разветвленные и циклические алкинильные группы. Тройная связь алкинильной или алкиниленовой группы может быть внутренней или концевой. Алкинильная или алкиниленовая группа может представлять собой, например, C₂, С₃, С₄, С₅, C₆, С₇, С₈, С₉, C₁₀, С₁₁, С₁₂, С₁₃, С₁₄, С₁₅, C₁₆, C₁₇, C₁₈, C₁₉, C₂₀, C₂₁, C₂₂, C₂₃, C₂₄, C₂₅, C₂₆, C₂₇, C₂₈, C₂₉, C₃₀, C₃₁, C₃₂, С₃₃, C₃₄, C₃₅, С₃₆, C₃₇, C₃₈, C₃₉, C₄₀, C₄₁, C₄₂, C₄₃, C₄₄, C₄₅, C₄₆, C₄₇, C₄₈, C₄₉ или C₅₀ группу, которая является замещенной или незамещенной.

[068] Галогеналкильная группа может представлять собой любую алкильную группу, замещенную любым количеством атомов галогена, например атомов фтора, хлора, брома и иода. Галогеналкенильная группа может представлять собой любую алкенильную группу, замещенную любым количеством атомов галогена. Галогеналкинильная группа может представлять собой любую алкинильную группу, замещенную любым количеством атомов галогена.

[069] Алкоксигруппа может представлять собой, например, атом кислорода, замещенный любой алкильной, алкенильной или алкинильной группой. Простой эфир или простая эфирная группа содержит алкоксигруппу. Неограничивающие примеры алкоксигрупп включают метокси, этокси, пропокси, изопропокси и изобутокси.

[070] Арильная группа может быть гетероциклической или негетероциклической. Арильная группа может быть моноциклической или полициклической. Арильная группа может быть замещена любым количеством заместителей, описанных в настоящем документе, например гидрокарбильных групп, алкильных групп, алкоксигрупп и атомов галогена. Неограничивающие примеры арильных групп включают фенил, толуил, нафтил, пирролил, пиридил, имидазолил, тиофенил и фурил.

[071] Арилоксигруппа может представлять собой, например, атом кислорода, замещенный любой арильной группой, например фенокси.

[072] Аралкильная группа может представлять собой, например, любую алкильную группу, замещенную любой арильной группой, например бензил.

[073] Арилалкоксигруппа может представлять собой, например, атом кислорода, замещенный любой аралкильной группой, например бензилокси.

[074] Гетероцикл может представлять собой любое кольцо, содержащее кольцевой атом, который не является углеродом, например N, О, S, Р, Si, В или любой другой гетероатом. Гетероцикл может быть замещен любым количеством заместителей, например алкильных групп и атомов галогена. Гетероцикл может быть ароматическим (гетероарил) или неароматическим. Неограничивающие примеры гетероциклов включают пиррол, пирролидин, пиридин, пиперидин, сукцинамид, малеимид, морфолин, имидазол, тиофен, фуран, тетрагидрофуран, пиран и тетрагидропиран.

[075] Ацильная группа может представлять собой, например, карбонильную группу, замещенную гидрокарбилом, алкилом, гидрокарбилокси, алкокси, арилом, арилокси, аралкилом, арилалкокси или гетероциклом. Неограничивающие примеры ацила включают ацетил, бензоил, бензилоксикарбонил, феноксикарбонил, метоксикарбонил и этоксикарбонил.

[076] Ацилоксигруппа может представлять собой атом кислорода, замещенный ацильной группой. Сложный эфир или сложноэфирная группа содержит ацилоксигруппу. Неограничивающий пример ацилоксигруппы или сложноэфирной группы представляет собой ацетат.

[077] Карбаматная группа может представлять собой атом кислорода, замещенный карбамоильной группой, где атом азота указанной карбамоильной группы является незамещенным, монозамещенным или дизамещенным одним или более из гидрокарбила, алкила, арила, гетероциклила или аралкила. Когда атом азота является дизамещенным, два заместителя совместно с указанным атомом азота могут образовывать гетероцикл.

[078] В настоящем раскрытии описаны терапевтические составы, содержащие ингибитор протеинкиназы и по меньшей мере один дополнительный агент для лечения легочных и сосудистых состояний. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1 и один дополнительный агент. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1 и ингибитор PDEV. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1 и тадалафил. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1 и силденафил. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1 и антагонист рецепторов ЕТ. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1 и селективный антагонист рецепторов ET_A, двойной антагонист или селективный антагонист рецепторов ET_B. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1 и селективный антагонист рецепторов ET_A. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1 и ситаксентан, амбризентан, атрасентан, BQ-123 или зиботентан. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1 и ситаксентан. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1 и амбризентан. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1 и двойной антагонист. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1 и мацитентан. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1 и стимулятор рГЦ. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1 и риоцигуат. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1 и верицигуат.

[079] В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1 и два дополнительных агента. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1, ингибитор PDEV и антагонист рецепторов ЕТ. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1, тадалафил и амбризентан. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1, ингибитор PDEV и стимулятор рГЦ. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1, тадалафил и риоцигуат. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1, и антагонист рецепторов ЕТ, и стимулятор рГЦ. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1, амбризентан и риоцигуат.

[080] В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1 и три дополнительных агента. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1, ингибитор PDEV, антагонист рецепторов ЕТ и стимулятор рГЦ. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит Соединение 1, тадалафил, амбризентан и риоцигуат.

Фармацевтически приемлемые соли

[081] В настоящем раскрытии предложено применение фармацевтически приемлемых солей любого терапевтического соединения, описанного в настоящем документе. Фармацевтически приемлемые соли включают, например, кислотно-аддитивные соли и основно-аддитивные соли. Кислота, которую добавляют к указанному соединению для получения кислотно-аддитивной соли, может представлять собой органическую кислоту или неорганическую кислоту. Основание, которое добавляют к указанному соединению для получения основно-аддитивной соли, может представлять собой органическое основание или неорганическое основание. В некоторых вариантах реализации фармацевтически приемлемая соль представляет собой соль металла. В некоторых вариантах реализации фармацевтически приемлемая соль представляет собой соль аммония.

[082] Соли, полученные из соответствующих оснований, включают соли щелочных металлов (например, натрия), щелочноземельных металлов, аммония и N-(алкила)₄⁺. Соли металлов могут быть получены в результате добавления неорганического основания к соединению согласно настоящему изобретению. Указанное неорганическое основание состоит из катиона металла в паре с основным противоионом, таким как, например, гидроксид, карбонат, бикарбонат или фосфат. Указанный металл может представлять собой щелочной металл, щелочноземельный металл, переходный металл или металл главной группы. В некоторых вариантах реализации указанный металл представляет собой литий, натрий, калий, цезий, церий, магний, марганец, железо, кальций, стронций, кобальт, титан, алюминий, медь, кадмий или цинк. В некоторых вариантах реализации соль металла представляет собой соль лития, соль натрия, соль калия, соль цезия, соль церия, соль магния, соль марганца, соль железа, соль кальция, соль стронция, соль кобальта, соль титана, соль алюминия, соль меди, соль кадмия или соль цинка.

[083] Соли аммония могут быть получены в результате добавления аммиака или органического амина к соединению согласно настоящему изобретению. В некоторых вариантах реализации указанный органический амин представляет собой триэтиламин, диизопропиламин, этаноламин, диэтаноламин, триэтаноламин, морфолин, N-метилморфолин, пиперидин, N-метилпиперидин, N-этилпиперидин, дибензиламин, пиперазин, пиридин, пиразол, пипиразол, имидазол, пиразин или пипиразин. В некоторых вариантах реализации соль аммония представляет собой соль триэтиламина, соль диизопропиламина, соль этаноламина, соль диэтаноламина, соль триэтаноламина, соль морфолина, соль N-метилморфолина, соль пиперидина, соль N-метилпиперидина, соль N-этилпиперидина, соль дибензиламина, соль пиперазина, соль пиридина, соль пиразола, соль пипиразола, соль имидазола, соль пиразина или соль пипиразина.

[084] Кислотно-аддитивные соли могут быть получены в результате добавления кислоты к соединению согласно настоящему изобретению. В некоторых вариантах реализации указанная кислота является органической. В некоторых вариантах реализации указанная кислота является неорганической. В некоторых вариантах реализации указанная кислота представляет собой хлористоводородную кислоту, бромистоводородную кислоту, иодистоводородную кислоту, азотную кислоту, азотистую кислоту, серную кислоту, сернистую кислоту, фосфорную кислоту, изоникотиновую кислоту, молочную кислоту, салициловую кислоту, винную кислоту, аскорбиновую кислоту, гентизиновую кислоту, глюконовую кислоту, глюкуроновую кислоту, сахарную кислоту, муравьиную кислоту, бензойную кислоту, глутаминовую кислоту, пантотеновую кислоту, уксусную кислоту, пропионовую кислоту, масляную кислоту, фумаровую кислоту, янтарную кислоту, метансульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, n-толуолсульфоновую кислоту, лимонную кислоту, щавелевую кислоту или малеиновую кислоту. В некоторых вариантах реализации соль указанной кислоты представляет собой ацетат, адипат, бензоат, бензолсульфонат, бутират, цитрат, диглюконат, додецилсульфат, формиат, фумарат, гликолят, гемисульфат, гептаноат, гексаноат, гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, лактат, малеат, малонат, метансульфонат, 2-нафталинсульфонат, никотинат, нитрат, пальмоат, фосфат, пикрат, пивалат, пропионат, салицилат, сукцинат, сульфат, тартрат, тозилат или ундеканоат.

[085] В некоторых вариантах реализации указанная соль представляет собой гидрохлоридную соль, гидробромидную соль, гидроиодидную соль, нитратную соль, нитритную соль, сульфатную соль, сульфитную соль, фосфатную соль, изоникотинатную соль, лактатную соль, салицилатную соль, тартратную соль, аскорбатную соль, гентизинатную соль, глюконатную соль, глюкуронатную соль, сахаратную соль, формиатную соль, бензоатную соль, глутаматную соль, пантотенатную соль, ацетатную соль, пропионатную соль, бутиратную соль, фумаратную соль, сукцинатную соль, метансульфонатную (мезилатную) соль, этансульфонатную соль, бензолсульфонатную соль, n-толуолсульфонатную соль, цитратную соль, оксалатную соль или малеатную соль.

[086] Основно-аддитивные соли могут быть получены в результате добавления основания к соединению согласно настоящему изобретению. В некоторых вариантах реализации указанное основание представляет собой гидроксид натрия, гидроксид калия, щелок, гидроксид кальция или гидроксид магния. В некоторых вариантах реализации указанное основание представляет собой метасиликат щелочного металла, гидроксид щелочного металла, карбонат натрия, бикарбонат натрия, перкарбонат натрия, персиликат натрия или метабисульфит калия.

Чистота соединений согласно настоящему изобретению

[087] Любое соединение согласно настоящему описанию может быть очищено. Соединение согласно настоящему описанию может иметь по меньшей мере 1% чистоту, по меньшей мере 2% чистоту, по меньшей мере 3% чистоту, по меньшей мере 4% чистоту, по меньшей мере 5% чистоту, по меньшей мере 6% чистоту, по меньшей мере 7% чистоту, по меньшей мере 8% чистоту, по меньшей мере 9% чистоту, по меньшей мере 10% чистоту, по меньшей мере 11% чистоту, по меньшей мере 12% чистоту, по меньшей мере 13% чистоту, по меньшей мере 14% чистоту, по меньшей мере 15% чистоту, по меньшей мере 16% чистоту, по меньшей мере 17% чистоту, по меньшей мере 18% чистоту, по меньшей мере 19% чистоту, по меньшей мере 20% чистоту, по меньшей мере 21% чистоту, по меньшей мере 22% чистоту, по меньшей мере 23% чистоту, по меньшей мере 24% чистоту, по меньшей мере 25% чистоту, по меньшей мере 26% чистоту, по меньшей мере 27% чистоту, по меньшей мере 28% чистоту, по меньшей мере 29% чистоту, по меньшей мере 30% чистоту, по меньшей мере 31% чистоту, по меньшей мере 32% чистоту, по меньшей мере 33% чистоту, по меньшей мере 34% чистоту, по меньшей мере 35% чистоту, по меньшей мере 36% чистоту, по меньшей мере 37% чистоту, по меньшей мере 38% чистоту, по меньшей мере 39% чистоту, по меньшей мере 40% чистоту, по меньшей мере 41% чистоту, по меньшей мере 42% чистоту, по меньшей мере 43% чистоту, по меньшей мере 44% чистоту, по меньшей мере 45% чистоту, по меньшей мере 46% чистоту, по меньшей мере 47% чистоту, по меньшей мере 48% чистоту, по меньшей мере 49% чистоту, по меньшей мере 50% чистоту, по меньшей мере 51% чистоту, по меньшей мере 52% чистоту, по меньшей мере 53% чистоту, по меньшей мере 54% чистоту, по меньшей мере 55% чистоту, по меньшей мере 56% чистоту, по меньшей мере 57% чистоту, по меньшей мере 58% чистоту, по меньшей мере 59% чистоту, по меньшей мере 60% чистоту, по меньшей мере 61% чистоту, по меньшей мере 62% чистоту, по меньшей мере 63% чистоту, по меньшей мере 64% чистоту, по меньшей мере 65% чистоту, по меньшей мере 66% чистоту, по меньшей мере 67% чистоту, по меньшей мере 68% чистоту, по меньшей мере 69% чистоту, по меньшей мере 70% чистоту, по меньшей мере 71% чистоту, по меньшей мере 72% чистоту, по меньшей мере 73% чистоту, по меньшей мере 74% чистоту, по меньшей мере 75% чистоту, по меньшей мере 76% чистоту, по меньшей мере 77% чистоту, по меньшей мере 78% чистоту, по меньшей мере 79% чистоту, по меньшей мере 80% чистоту, по меньшей мере 81% чистоту, по меньшей мере 82% чистоту, по меньшей мере 83% чистоту, по меньшей мере 84% чистоту, по меньшей мере 85% чистоту, по меньшей мере 86% чистоту, по меньшей мере 87% чистоту, по меньшей мере 88% чистоту, по меньшей мере 89% чистоту, по меньшей мере 90% чистоту, по меньшей мере 91% чистоту, по меньшей мере 92% чистоту, по меньшей мере 93% чистоту, по меньшей мере 94% чистоту, по меньшей мере 95% чистоту, по меньшей мере 96% чистоту, по меньшей мере 97% чистоту, по меньшей мере 98% чистоту, по меньшей мере 99% чистоту, по меньшей мере 99,1% чистоту, по меньшей мере 99,2% чистоту, по меньшей мере 99,3% чистоту, по меньшей мере 99,4% чистоту, по меньшей мере 99,5% чистоту, по меньшей мере 99,6% чистоту, по меньшей мере 99,7% чистоту, по меньшей мере 99,8% чистоту или по меньшей мере 99,9% чистоту.

Фармацевтические композиции согласно настоящему изобретению

[088] Фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению может представлять собой комбинацию любых фармацевтических соединений, описанных в настоящем документе, с другими химическими компонентами, такими как носители, стабилизаторы, разбавители, диспергирующие агенты, суспендирующие агенты, загустители и/или вспомогательные вещества. Указанная фармацевтическая композиция облегчает введение указанного соединения в организм. Фармацевтические композиции могут быть введены в терапевтически эффективных количествах в виде фармацевтических композиций с помощью различных форм и способов, включая, например, внутривенное, подкожное, внутримышечное, пероральное, парентеральное, офтальмологическое, подкожное, чрескожное, назальное, вагинальное и местное введение.

[089] Фармацевтическая композиция может быть введена местным способом, например, путем инъекции указанного соединения непосредственно в орган необязательно в виде депо-состава или имплантата или состава или имплантата с замедленным высвобождением. Фармацевтические композиции могут быть обеспечены в форме состава с быстрым высвобождением, в форме состава с пролонгированным высвобождением или в форме состава с промежуточным высвобождением. Форма быстрого высвобождения может обеспечить немедленное высвобождение. Состав с пролонгированным высвобождением может обеспечить контролируемое высвобождение или замедленное отсроченное высвобождение.

[090] В случае перорального введения фармацевтические композиции могут быть приготовлены путем объединения активных соединений с фармацевтически приемлемыми носителями или вспомогательными веществами. Такие носители могут быть применены для приготовления жидкостей, гелей, сиропов, эликсиров, кашиц или суспензий для перорального приема субъектом. Неограничивающие примеры растворителей, применяемых в перорально растворимом составе, могут включать воду, этанол, изопропанол, солевой раствор, физиологический раствор, диметилсульфоксид (ДМСО), диметилформамид, калий-фосфатный буфер, фосфатно-солевой буфер (PBS), натрий-фосфатный буфер, 4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфокислотный буфер (HEPES), 3-(N-морфолино)пропансульфокислотный буфер (MOPS), пиперазин-N,N'-бис(2-этансульфокислотный) буфер (PIPES) и солевой натрий-цитратный буфер (SSC). Неограничивающие примеры сорастворителей, применяемых в перорально растворимом составе, могут включать сахарозу, мочевину, кремофор, ДМСО и калий-фосфатный буфер.

[091] Фармацевтические препараты могут быть приготовлены для внутривенного введения. Фармацевтические композиции могут находиться в форме, подходящей для парентеральной инъекции в виде стерильной суспензии, раствора или эмульсии в масляных или водных переносящих средах, и могут содержать агенты для получения составов, такие как суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие агенты. Фармацевтические составы для парентерального введения включают водные растворы активных соединений в водорастворимой форме. Суспензии активных соединений могут быть получены в виде масляных суспензий для инъекций. Подходящие липофильные растворители или переносящие среды включают жирные масла, такие как кунжутное масло, или синтетические сложные эфиры жирных кислот, такие как этилолеат или триглицериды, или липосомы. Указанная суспензия также может содержать подходящие стабилизаторы или агенты, которые увеличивают растворимость соединений для обеспечения получения высококонцентрированных растворов. В качестве альтернативы активный ингредиент может находиться в форме порошка для разведения в подходящей переносящей среде, например стерильной апирогенной воде, перед применением.

[092] Активные соединения могут быть введены местно и могут быть приготовлены в составе различных местно вводимых композиций, таких как растворы, суспензии, лосьоны, гели, пасты, лекарственные палочки, бальзамы, кремы и мази. Такие фармацевтические композиции могут содержать солюбилизаторы, стабилизаторы, агенты, повышающие тоничность, буферы и консерванты.

[093] Указанные соединения могут быть приготовлены для ингаляции композиции. В некоторых вариантах реализации указанные соединения вводят посредством интраназального введения. В некоторых вариантах реализации указанные соединения вводят в виде раствора, суспензии или сухого порошка.

[094] Указанные соединения могут быть введены непосредственно в дыхательный тракт в виде аэрозоля. В некоторых вариантах реализации указанные соединения помещают в находящийся под давлением аэрозольный баллон с подходящими пропеллентами и адъювантами. В некоторых вариантах реализации указанные пропелленты представляют собой углеводородные пропелленты, такие как пропан, бутан или изобутен. В некоторых вариантах реализации составы аэрозоля могут включать другие ингредиенты, такие как сорастворители, стабилизаторы, поверхностно-активные вещества, антиоксиданты, смазывающие вещества и регуляторы рН. Указанные составы аэрозоля могут быть введены с применением дозирующего ингалятора.

[095] Указанные соединения могут быть введены в форме состава легочного сурфактанта. В некоторых вариантах реализации указанный состав легочного сурфактанта представляет собой Инфасурф®, Сурванту®, Куросурф® или синтетические составы легочного сурфактанта, такие как Экзосурф® и искусственные соединения, расширяющие легкие (ALEC). В некоторых вариантах реализации указанные составы сурфактанта вводят путем инсталляции в дыхательные пути (т.е., после интубации) или интратрахеально.

[096] Указанные соединения могут быть введены в виде порошка для ингаляций. В некоторых вариантах реализации указанные соединения могут быть введены в виде сухого порошка для ингаляций. В некоторых вариантах реализации состав указанного порошка может включать фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, такие как моносахариды (например, глюкоза, арабиноза), дисахариды (например, лактоза, сахароза, мальтоза), олигосахариды или полисахариды (например, декстран), полиспирты (например, сорбит, маннит, ксилит), соли (например, хлорид натрия, карбонат кальция) или любая их комбинация. В некоторых вариантах реализации указанные соединения вводят в не находящейся под давлением форме с применением небулайзера (nebulizer) или атомизатора (atomizer).

[097] В некоторых вариантах реализации Соединение 1 вводят путем ингаляции. В некоторых вариантах реализации Соединение 1 и дополнительные агенты вводят путем ингаляции. В некоторых вариантах реализации Соединение 1 вводят путем ингаляции, и дополнительные агенты вводят через желудочный зонд.

[098] Доставка соединения 1 в виде ингалируемого сухого порошка обеспечивает местную доставку в легкие, что приводит к снижению системного воздействия лекарственного средства и меньшему количеству побочных эффектов. В некоторых вариантах реализации более низкое системное воздействие лекарственного средства может снижать риск кровотечения, желудочно-кишечных побочных эффектов, гепатотоксичности, задержки жидкости или отека, нейтропении или лейкопении, анемии или инфекции. В некоторых вариантах реализации более низкое системное воздействие лекарственного средства может снижать риск желудочно-кишечных побочных эффектов, таких как тошнота, рвота или диарея.

[099] В некоторых вариантах реализации состав ингалируемого сухого порошка может содержать примерно 5%, примерно 10%, примерно 15%, примерно 20%, примерно 25%, примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45%, примерно 50%, примерно 55%, примерно 60%, примерно 65%, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95% масс. Соединения 1. В некоторых вариантах реализации состав ингалируемого сухого порошка может содержать примерно 40%, примерно 50% или примерно 60% масс. Соединения 1. В некоторых вариантах реализации состав ингалируемого сухого порошка может содержать примерно 5%, примерно 10%, примерно 15%, примерно 20%, примерно 25%, примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45%, примерно 50%, примерно 55%, примерно 60%, примерно 65%, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95% масс. лейцина. В некоторых вариантах реализации состав ингалируемого сухого порошка может содержать примерно 40%, примерно 50% или примерно 60% масс. лейцина. В некоторых вариантах реализации состав ингалируемого сухого порошка может содержать примерно 50% масс. Соединения 1 и примерно 50% масс. лейцина.

[0100] В некоторых вариантах реализации состав ингалируемого сухого порошка может содержать примерно 5%, примерно 10%, примерно 15%, примерно 20%, примерно 25%, примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45%, примерно 50%, примерно 55%, примерно 60%, примерно 65%, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95% сурфактанта на основе липидов. В некоторых вариантах реализации состав ингалируемого сухого порошка может содержать 1,2-дистеароил-sn-глицеро-3-фосфохолин (DSPC), дипальмитоилфосфатидилхолин (DPPC), 1,2-димиристоил-sn-глицеро-3-фосфорилхолин (DMPC) или липосомы.

[0101] Состав порошка, полученного с помощью распылительной сушки, содержащий Соединение 1 и лейцин, может иметь размеры частиц, подходящие для ингаляции. В некоторых вариантах реализации масс-медианный аэродинамический диаметр (ММАД) указанных частиц, измеренный путем каскадной импакции (cascade impaction) с помощью импактора нового поколения Next Generation Impactor (NGI), может составлять 1,9-3,8 микрона с геометрическим стандартным отклонением (GSD) 1,5-3,5. В некоторых вариантах реализации ММАД составляет примерно 1 микрон, примерно 1,5 микрона, примерно 2 микрона, примерно 2,5 микрона, примерно 3 микрона, примерно 3,5 микрона, примерно 4 микрона, примерно 4,5 микрона, примерно 5 микрон, примерно 5,5 микрона, примерно 6 микрон, примерно 6,5 микрона, примерно 7 микрон, примерно 7,5 микрона, примерно 8 микрон, примерно 8,5 микрона, примерно 9 микрон, примерно 9,5 микрона, примерно 10 микрон, примерно 11 микрон, примерно 12 микрон, примерно 13 микрон, примерно 14 микрон, примерно 15 микрон, примерно 16 микрон, примерно 17 микрон, примерно 18 микрон, примерно 19 микрон или примерно 20 микрон. В некоторых вариантах реализации ММАД составляет примерно 1 микрон. В некоторых вариантах реализации ММАД составляет от примерно 2 микрон до примерно 2,5 микрона. В некоторых вариантах реализации ММАД составляет примерно 2 микрона. В некоторых вариантах реализации ММАД составляет примерно 2,5 микрона. В некоторых вариантах реализации ММАД составляет менее примерно 5 микрон.

[0102] При осуществлении на практике способов лечения или применения, предложенных в настоящем описании, терапевтически эффективные количества соединений, описанных в настоящем документе, вводят в составе фармацевтических композиций субъекту, страдающему заболеванием или состоянием, подлежащим лечению. В некоторых вариантах реализации указанный субъект представляет собой млекопитающее, такое как человек. Терапевтически эффективное количество может широко варьироваться в зависимости от тяжести заболевания, возраста и относительного состояния здоровья субъекта, мощности применяемых соединений и других факторов.

[0103] Фармацевтические композиции могут быть приготовлены с применением одного или более физиологически приемлемых носителей, включающих вспомогательные вещества (excipients) и вспомогательные агенты (auxiliaries), которые способствуют переработке активных соединений в препараты, которые могут быть применены фармацевтически. Состав может быть модифицирован в зависимости от выбранного способа введения. Фармацевтические композиции, содержащие соединение, описанное в настоящем документе, могут быть изготовлены, например, с помощью процессов смешивания, растворения, эмульгирования, инкапсулирования, захвата или сжатия.

[0104] Указанные фармацевтические композиции могут содержать по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или вспомогательное вещество и соединения, описанные в настоящем документе, в форме свободного основания или фармацевтически приемлемой соли. Фармацевтические композиции могут содержать солюбилизаторы, стабилизаторы, агенты, повышающие тоничность, буферы и консерванты.

[0105] Способы получения композиций, содержащих соединения, описанные в настоящем документе, включают приготовление указанных соединений с одним или более инертными, фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами или носителями с получением твердой, полутвердой или жидкой композиции. Твердые композиции включают, например, порошки, таблетки, диспергируемые гранулы, капсулы и облатки. Жидкие композиции включают, например, растворы, в которых растворено соединение, эмульсии, содержащие соединение, или содержащие раствор липосомы, мицеллы или наночастицы, содержащие соединение, раскрытое в настоящем описании. Полутвердые композиции включают, например, гели, суспензии и кремы. Указанные композиции могут находиться в виде жидких растворов или суспензий, твердых форм, подходящих для растворения или суспендирования в жидкости перед применением, или в виде эмульсий. Указанные композиции также могут содержать незначительные количества нетоксичных вспомогательных веществ, таких как смачивающие или эмульгирующие агенты, буферные агенты для поддержания рН и другие фармацевтически приемлемые добавки.

[0106] Неограничивающие примеры лекарственных форм, подходящих для применения в настоящем изобретении, включают жидкость, порошок, гель, наносуспензию, наночастицу, микрогель, водные или масляные суспензии, эмульсию и любую их комбинацию.

[0107] Неограничивающие примеры фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, подходящих для применения в настоящем изобретении, включают связующие агенты, разрыхляющие агенты, антиадгезивы, антистатические агенты, поверхностно-активные вещества, антиоксиданты, покрывающие агенты, окрашивающие агенты, пластификаторы, консерванты, суспендирующие агенты, эмульгирующие агенты, противомикробные агенты, агенты, обеспечивающие сферонизацию, и любую их комбинацию.

[0108] В некоторых вариантах реализации состав содержит гидрофобную аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из триптофана, тирозина, лейцина, трилейцина, изолейцина и фенилаланина. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит примерно 10%, примерно 20%, примерно 30%, примерно 40%, примерно 50%, примерно 60%, примерно 70%, примерно 80% или примерно 90% гидрофобной аминокислоты от массы композиции. В некоторых вариантах реализации указанные составы согласно настоящему изобретению содержат лейцин. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит примерно 30%, примерно 40%, примерно 50%, примерно 60%, примерно 70% лейцина от массы композиции. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит примерно 50% лейцина от массы композиции. В некоторых вариантах реализации указанные составы согласно настоящему изобретению содержат трилейцин. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45%, примерно 50%, примерно 55%, примерно 60%, примерно 65% или примерно 70% трилейцина от массы композиции. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит примерно 50% трилейцина от массы композиции.

[0109] В некоторых вариантах реализации состав содержит липидный продукт, например примерно 10%, примерно 15%, примерно 20%, примерно 25%, примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45%, примерно 50%, примерно 55%, примерно 60%, примерно 65%, примерно 70%, примерно 75%, примерно 80%, примерно 85%, примерно 90% или примерно 95% липида от массы композиции. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит DSPC, DPPC, DMPC или липосомы. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45%, примерно 50%, примерно 55%, примерно 60%, примерно 65% или примерно 70% DSPC от массы композиции. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45%, примерно 50%, примерно 55%, примерно 60%, примерно 65% или примерно 70% DPPC от массы композиции. В некоторых вариантах реализации указанный состав содержит примерно 30%, примерно 35%, примерно 40%, примерно 45%, примерно 50%, примерно 55%, примерно 60%, примерно 65% или примерно 70% DMPC от массы композиции.

[0110] Композиция согласно настоящему изобретению может представлять собой, например, форму с немедленным высвобождением или состав с контролируемым высвобождением. Состав с немедленным высвобождением может быть приготовлен для обеспечения быстрого действия соединений. Неограничивающие примеры составов с немедленным высвобождением включают легкорастворимые составы. Состав с контролируемым высвобождением может представлять собой фармацевтический состав, который был адаптирован таким образом, чтобы скорости высвобождения и профили высвобождения активного агента могли соответствовать физиологическим и хронотерапевтическим требованиям, или в качестве альтернативы был приготовлен для осуществления высвобождения активного агента с запрограммированной скоростью. Неограничивающие примеры составов с контролируемым высвобождением включают гранулы, гранулы с отсроченным высвобождением, гидрогели (например, синтетического или природного происхождения), другие гелеобразующие агенты (например, гелеобразующие пищевые волокна), составы на основе матриц (например, составы, содержащие полимерный материал с диспергированным внутри него по меньшей мере одним активным ингредиентом), гранулы внутри матрицы, полимерные смеси и гранулярные массы.

[0111] В некоторых случаях состав с контролируемым высвобождением представляет собой форму с отсроченным высвобождением. Форма с отсроченным высвобождением может быть приготовлена для отсрочки действия соединения на длительный период времени. Форма с отсроченным высвобождением может быть приготовлена для отсрочки высвобождения эффективной дозы одного или более соединений, например, на примерно 4, примерно 8, примерно 12, примерно 16 или примерно 24 часа.

[0112] Состав с контролируемым высвобождением может представлять собой форму с замедленным высвобождением. Форма с замедленным высвобождением может быть приготовлена, например, для поддержания действия соединения в течение длительного периода времени. Форма с замедленным высвобождением может быть приготовлена для обеспечения эффективной дозы любого соединения, описанного в настоящем документе (например, обеспечения физиологически эффективного профиля в крови), в течение примерно 4, примерно 8, примерно 12, примерно 16 или примерно 24 часов.

[0113] Неограничивающие примеры фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ можно найти, например, в источниках Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995); Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975; Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980; и Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins 1999), каждый из которых полностью включен в настоящее описение посредством ссылки.

Способы введения

[0114] Несколько терапевтических агентов могут быть введены в любом порядке или одновременно. В некоторых вариантах реализации соединение согласно настоящему изобретению вводят в комбинации с, перед или после дополнительных терапевтических агентов. При одновременном введении несколько терапевтических агентов могут быть обеспечены в одной объединенной форме или в нескольких формах, например в виде нескольких отдельных пилюль. Указанные агенты могут быть упакованы вместе или по отдельности, в одну упаковку или во множество упаковок. Один или все из терапевтических агентов могут быть введены в нескольких дозах. При неодновременном введении интервал между несколькими дозами может варьироваться вплоть до примерно месяца.

[0115] В некоторых вариантах реализации Соединение 1 вводят перед вторым агентом. В некоторых вариантах реализации Соединение 1 вводят перед введением ингибитора PDEV или антагониста рецепторов ЕТ. В некоторых вариантах реализации Соединение 1 вводят перед введением ингибитора PDEV и антагониста рецепторов ЕТ. В некоторых вариантах реализации Соединение 1 вводят после введения первого агента. В некоторых вариантах реализации Соединение 1 вводят после введения ингибитора PDEV или антагониста рецепторов ЕТ. В некоторых вариантах реализации Соединение 1 вводят после введения ингибитора PDEV и антагониста рецепторов ЕТ.

[0116] Терапевтические агенты, описанные в настоящем документе, могут быть введены перед, во время или после возникновения заболевания или состояния, и временные рамки введения композиции, содержащей терапевтический агент, могут варьироваться. Например, указанные композиции могут быть применены в качестве профилактического средства и могут непрерывно вводиться субъектам с предрасположенностью к состояниям или заболеваниям, чтобы уменьшить вероятность возникновения указанного заболевания или состояния. Указанные композиции могут быть введены субъекту во время или как можно скорее после появления симптомов. Введение терапевтических агентов может быть начато в течение первых 48 часов после появления симптомов, в течение первых 24 часов после появление симптомов, в течение первых 6 часов после появления симптомов или в течение 3 часов после появления симптомов. Первичное введение может быть осуществлено с помощью любого практически применимого способа, например любым способом, описанным в настоящем документе, с применением любого состава, описанного в настоящем документе. Терапевтический агент может быть введен сразу, как только это практически осуществимо, после установления или подозрения на начало заболевания или состояния, и может вводиться в течение периода времени, необходимого для лечения указанного заболевания, такого как, например, от примерно 1 месяца до примерно 3 месяцев. Продолжительность лечения может варьироваться для каждого субъекта.

[0117] Фармацевтические композиции, предложенные в настоящем описании, могут быть введены совместно с другими видами терапии, например, химиотерапией, облучением, хирургическим вмешательством, противовоспалительными агентами и выбранными витаминами. Другие агенты могут быть введены до, после или одновременно с указанными фармацевтическими композициями.

[0118] В зависимости от предполагаемого способа введения указанные фармацевтические композиции могут находиться в форме твердых, полутвердых или жидких лекарственных форм, таких как, например, таблетки, суппозитории, пилюли, капсулы, порошки, жидкости, суспензии, лосьоны, кремы или гели, например в единичной лекарственной форме, подходящей для однократного введения точной дозы.

[0119] В случае твердых композиций нетоксичные твердые носители включают, например, маннит, лактозу, крахмал, стеарат магния, натриевый сахарин, тальк, целлюлозу, глюкозу, сахарозу и карбонат магния фармацевтической степени чистоты.

[0120] Неограничивающие примеры фармацевтически активных агентов, подходящих для комбинации с композициями согласно настоящему описанию, включают противоинфекционные средства, то есть аминогликозиды, противовирусные агенты, противомикробные средства, антихолинергические средства/антиспазматические средства, антидиабетические агенты, антигипертензивные агенты, противоопухолевые средства, сердечно-сосудистые агенты, агенты центральной нервной системы, модификаторы свертывания, гормоны, иммунологические агенты, иммуносупрессивные агенты и офтальмологические препараты.

[0121] Неограничивающие примеры лекарственных форм, подходящих для применения в настоящем описании, включают жидкость, эликсир, наносуспензию, водные или масляные суспензии, капли, сиропы и любую их комбинацию. Неограничивающие примеры фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ, подходящих для применения в настоящем описании, включают гранулирующие агенты, связующие агенты, смазывающие агенты, разрыхляющие агенты, подслащивающие агенты, глиданты, антиадгезивы, антистатические агенты, поверхностно-активные вещества, антиоксиданты, камеди, покрывающие агенты, окрашивающие агенты, ароматизирующие агенты, покрывающие агенты, пластификаторы, консерванты, суспендирующие агенты, эмульгирующие агенты, растительный целлюлозный материал и агенты, обеспечивающие сферонизацию, и любую их комбинацию.

[0122] Соединения могут быть доставлены с помощью липосомальной технологии. Применение липосом в качестве носителей лекарственных средств может повысить терапевтический индекс указанных соединений. Липосомы состоят из природных фосфолипидов и могут содержать смешанные липидные цепи с поверхностно-активными свойствами (например, яичный фосфатидилэтаноламин). В конструкции липосом могут быть применены поверхностные лиганды для прикрепления к нездоровой ткани. Неограничивающие примеры липосом включают многослойную везикулу (МСВ), малую однослойную везикулу (MOB) и большую однослойную везикулу (БОВ). Физико-химические свойства липосом могут быть модулированы для оптимизации проникновения через биологические барьеры и удержания в месте введения и для снижения вероятности развития преждевременного разрушения и токсичности для нецелевых тканей. Оптимальные свойства липосом зависят от способа введения: липосомы большого размера демонстрируют хорошее удержание при локальной инъекции, липосомы небольшого размера лучше подходят для обеспечения пассивного нацеливания. ПЭГилирование снижает поглощение липосом печенью и селезенкой и увеличивает время нахождения в кровотоке, что приводит к увеличению локализации в воспаленном месте вследствие эффекта повышенной проницаемости и удержания (EPR). Кроме того, поверхности липосом могут быть модифицированы для обеспечения селективной доставки инкапсулированного лекарственного средства к специфическим клеткам-мишеням. Неограничивающие примеры нацеливающих лигандов включают моноклональные антитела, витамины, пептиды и полисахариды, специфичные для рецепторов, сконцентрированных на поверхности клеток, связанных с заболеванием.

[0123] Композиции согласно настоящему изобретению могут быть упакованы в виде набора. В некоторых вариантах реализации набор содержит письменные инструкции по введению/применению указанной композиции. Письменный материал может представлять собой, например, этикетку. В письменном материале может говориться об условиях и способах введения. Инструкции предоставляют субъекту и наблюдающему врачу (supervising physician) наилучшие рекомендации по достижению оптимального клинического результата от введения терапии. Письменный материал может представлять собой этикетку. В некоторых вариантах реализации указанная этикетка может быть одобрена регулирующим органом, например Управлением по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных препаратов США (FDA), Европейским агентством лекарственных средств (ЕМА) или другими регулирующими органами. В некоторых вариантах реализации набор содержит устройство для ингаляционной доставки, такое как ингалятор, атомизатор или небулайзер. В некоторых вариантах реализации набор содержит капсулы для ингаляций с порошками в запечатанной блистерной упаковке.

Дозирование

[0124] Фармацевтические композиции, описанные в настоящем документе, могут находиться в единичных лекарственных формах, подходящих для однократного введения точных доз. В случае единичной лекарственной формы состав разделен на единичные дозы, содержащие соответствующие количества одного или более соединений. Единичная доза может находиться в форме упаковки, содержащей отдельные количества указанного состава. Неограничивающие примеры представляют собой жидкости во флаконах или ампулах. Композиции водных суспензий могут быть упакованы в однодозовые, не поддающиеся повторному закрыванию емкости. Многодозовые емкости с возможностью повторного закрывания могут быть применены, например, в комбинации с консервантом. Составы для парентеральной инъекции могут быть представлены в единичной лекарственной форме, например в ампулах, или в многодозовых емкостях с консервантом.

[0125] Соединение, описанное в настоящем документе, может присутствовать в композиции в количестве от примерно 1 мг до примерно 500 мг. Соединение, описанное в настоящем документе, может присутствовать в композиции в количестве примерно 1 мг, примерно 2 мг, примерно 3 мг, примерно 4 мг, примерно 5 мг, примерно 10 мг, примерно 15 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 35 мг, примерно 40 мг, примерно 45 мг, примерно 50 мг, примерно 55 мг, примерно 60 мг, примерно 65 мг, примерно 70 мг, примерно 75 мг, примерно 80 мг, примерно 85 мг, примерно 90 мг, примерно 95 мг, примерно 100 мг, примерно 125 мг, примерно 150 мг, примерно 175 мг, примерно 200 мг, примерно 250 мг, примерно 300 мг, примерно 350 мг, примерно 400 мг, примерно 450 мг или примерно 500 мг.

[0126] В некоторых вариантах реализации доза может быть выражена через количество лекарственного средства, деленное на массу субъекта, например миллиграммы лекарственного средства на килограммы массы тела субъекта. В некоторых вариантах реализации соединение согласно настоящему изобретению вводят в количестве, составляющем от примерно 5 мг/кг до примерно 50 мг/кг, от 250 мг/кг до примерно 2000 мг/кг, от примерно 10 мг/кг до примерно 800 мг/кг, от примерно 50 мг/кг до примерно 400 мг/кг, от примерно 100 мг/кг до примерно 300 мг/кг или от примерно 150 мг/кг до примерно 200 мг/кг.

[0127] В некоторых вариантах реализации доза Соединения 1 может составлять от примерно 2,5 мг до примерно 100 мг. В некоторых вариантах реализации доза Соединения 1 может составлять примерно 5 мг, примерно 10 мг, примерно 15 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 35 мг, примерно 40 мг, примерно 45 мг, примерно 50 мг, примерно 55 мг, примерно 60 мг, примерно 65 мг, примерно 70 мг, примерно 75 мг, примерно 80 мг, примерно 85 мг, примерно 90 мг, примерно 95 мг или примерно 100 мг. В некоторых вариантах реализации доза Соединения 1 может составлять примерно 0,1 мг/кг, примерно 0,2 мг/кг, примерно 0,3 мг/кг, примерно 0,4 мг/кг, примерно 0,5 мг/кг, примерно 0,6 мг/кг, примерно 0,7 мг/кг, примерно 0,8 мг/кг или примерно 0,9 мг/кг. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения описано введение примерно 0,5 мг/кг или примерно 0,6 мг/кг Соединения 1. В некоторых вариантах реализации доза Соединения 1 может составлять примерно 10 мг. В некоторых вариантах реализации доза Соединения 1 может быть введена один раз, два раза, три раза или четыре раза в сутки.

[0128] В некоторых вариантах реализации доза ингибитора PDEV может составлять примерно 5 мг, примерно 10 мг, примерно 15 мг, примерно 20 мг, примерно 25 мг, примерно 30 мг, примерно 35 мг, примерно 40 мг, примерно 45 мг или примерно 50 мг. В некоторых вариантах реализации доза ингибитора PDEV может составлять примерно 20 мг. В некоторых вариантах реализации доза ингибитора PDEV может составлять примерно 40 мг. В некоторых вариантах реализации доза ингибитора PDEV может быть введена один раз, два раза, три раза или четыре раза в сутки. В некоторых вариантах реализации 20 мг ингибитора PDEV вводят три раза в сутки. В некоторых вариантах реализации 40 мг ингибитора PDEV вводят один раз в сутки.

[0129] В некоторых вариантах реализации доза антагониста ЕТ может составлять примерно 1 мг, примерно 2 мг, примерно 3 мг, примерно 4 мг, примерно 5 мг, примерно 6 мг, примерно 7 мг, примерно 8 мг, примерно 9 мг, примерно 10 мг, примерно 11 мг, примерно 12 мг, примерно 13 мг, примерно 14 мг, примерно 15 мг, примерно 16 мг, примерно 17 мг, примерно 18 мг, примерно 19 мг или примерно 20 мг. В некоторых вариантах реализации доза антагониста ЕТ может составлять примерно 5 мг. В некоторых вариантах реализации доза антагониста ЕТ может составлять примерно 10 мг. В некоторых вариантах реализации доза антагониста ЕТ может быть введена один раз, два раза, три раза или четыре раза в сутки. В некоторых вариантах реализации 5 мг антагониста ЕТ вводят один раз в сутки. В некоторых вариантах реализации 10 мг антагониста ЕТ вводят один раз в сутки. В некоторых вариантах реализации 5 мг антагониста ЕТ вводят два раза в сутки.

[0130] В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения описано введение примерно 1 мг/кг, примерно 5 мг/кг, примерно 10 мг/кг, примерно 15 мг/кг или примерно 20 мг/кг ингибитора PDEV антагониста рецепторов ЕТ. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения описано введение примерно 10 мг/кг ингибитора PDEV. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения описано введение примерно 10 мг/кг антагониста рецепторов ЕТ.

Фармакокинетические и фармакодинамические измерения

[0131] Для описания состава, раскрытого в настоящем описании, могут быть применены компоненты фармакокинетического и фармакодинамического профиля. В некоторых вариантах реализации конкретный состав может быть описан с помощью любого из следующих параметров или их комбинации:

i) k10: константа скорости элиминации (первого порядка);

ii) k12: скорость перемещения из центральной в периферическую камеру;

iii) k21: скорость перемещения из периферической в центральную камеру;

iv) t_1/2альфа: период полураспределения;

v) t_1/2бета: период полувыведения;

vi) t_1/2ka: период полуабсорбции;

vii) V/F: кажущийся объем распределения лекарственного средства после внесосудистого введения;

viii) CL/F: кажущийся плазменный клиренс лекарственного средства после внесосудистого введения;

ix) V2/F: центральный объем распределения;

x) CL2/F: кажущийся межкамерный клиренс;

xi) С_макс: максимальная концентрация в плазме в равновесном состоянии;

xii) Т_макс: время до С_макс;

xiii) AUC_0-t: площадь под кривой «концентрация в плазме - время» от нуля до времени достижения последней концентрации, поддающейся количественному определению;

xiv) AUC_0-беск: площадь под кривой «концентрация в плазме - время» от нуля, экстраполированная до бесконечности;

xv) AUMC: суммарная площадь под кривой зависимости произведения (время х концентрация) от времени (first moment-time curve); или

xvi) MRT: среднее время удержания.

[0132] Фармакокинетические и фармакодинамические данные могут быть получены с применением различных экспериментальных методик. В некоторых вариантах реализации уровни концентрации лекарственного средства в плазме определяют с помощью валидированного метода жидкостной хроматографии/тандемной масс-спектрометрии (mass spectrometry-mass spectrometry) (ЖХ/МС-МС). В некоторых вариантах реализации фармакокинетические параметры могут быть определены с применением стандартного модельно-независимого (non-compartmental) метода. В некоторых вариантах реализации статистический анализ С_макс, AUC_0-t и AUC_0-беск выполняют с применением логарифмически преобразованных данных.

[0133] Соответствующие компоненты фармакокинетического и фармакодинамического профиля, описывающие конкретную композицию или состав, могут варьироваться из-за различий в метаболизме лекарственного средства у субъектов, представляющих собой людей. Фармакокинетические и фармакодинамические профили могут быть основаны на определении средних значений параметров группы субъектов. Указанная группа субъектов содержит любое разумное число субъектов, подходящее для определения репрезентативного среднего значения, например 5 субъектов, 10 субъектов, 15 субъектов, 20 субъектов, 25 субъектов, 30 субъектов, 35 субъектов или более. Указанное среднее значение определяют, например, путем вычисления средней величины всех измерений субъекта для каждого измеряемого параметра. Доза может быть модулирована для достижения желаемого фармакокинетического или фармакодинамического профиля, такого как желаемый или обеспечивающий эффект профиль крови, описанный в настоящем документе.

[0134] Фармакодинамические параметры могут представлять собой любые параметры, подходящие для описания композиций согласно настоящему изобретению. Например, фармакодинамический профиль может быть получен через период времени после введения дозы, составляющий, например, примерно нуль минут, примерно 1 минуту, примерно 2 минуты, примерно 3 минуты, примерно 4 минуты, примерно 5 минут, примерно 6 минут, примерно 7 минут, примерно 8 минут, примерно 9 минут, примерно 10 минут, примерно 11 минут, примерно 12 минут, примерно 13 минут, примерно 14 минут, примерно 15 минут, примерно 16 минут, примерно 17 минут, примерно 18 минут, примерно 19 минут, примерно 20 минут, примерно 21 минуту, примерно 22 минуты, примерно 23 минуты, примерно 24 минуты, примерно 25 минут, примерно 26 минут, примерно 27 минут, примерно 28 минут, примерно 29 минут, примерно 30 минут, примерно 31 минуту, примерно 32 минуты, примерно 33 минуты, примерно 34 минуты, примерно 35 минут, примерно 36 минут, примерно 37 минут, примерно 38 минут, примерно 39 минут, примерно 40 минут, примерно 41 минуту, примерно 42 минуты, примерно 43 минуты, примерно 44 минуты, примерно 45 минут, примерно 46 минут, примерно 47 минут, примерно 48 минут, примерно 49 минут, примерно 50 минут, примерно 51 минуту, примерно 52 минуты, примерно 53 минуты, примерно 54 минуты, примерно 55 минут, примерно 56 минут, примерно 57 минут, примерно 58 минут, примерно 59 минут, примерно 60 минут, примерно нуль часов, примерно 0,5 часа, примерно 1 час, примерно 1,5 часа, примерно 2 часа, примерно 2,5 часа, примерно 3 часа, примерно 3,5 часа, примерно 4 часа, примерно 4,5 часа, примерно 5 часов, примерно 5,5 часа, примерно 6 часов, примерно 6,5 часа, примерно 7 часов, примерно 7,5 часа, примерно 8 часов, примерно 8,5 часа, примерно 9 часов, примерно 9,5 часа, примерно 10 часов, примерно 10,5 часа, примерно 11 часов, примерно 11,5 часа, примерно 12 часов, примерно 12,5 часа, примерно 13 часов, примерно 13,5 часа, примерно 14 часов, примерно 14,5 часа, примерно 15 часов, примерно 15,5 часа, примерно 16 часов, примерно 16,5 часа, примерно 17 часов, примерно 17,5 часа, примерно 18 часов, примерно 18,5 часа, примерно 19 часов, примерно 19,5 часа, примерно 20 часов, примерно 20,5 часа, примерно 21 час, примерно 21,5 часа, примерно 22 часа, примерно 22,5 часа, примерно 23 часа, примерно 23,5 часа или примерно 24 часа.

[0135] Фармакокинетические параметры могут представлять собой любые параметры, подходящие для описания соединения или состава. C_max может составлять, например, не менее примерно 1 мкг/мл; не менее примерно 5 мкг/мл; не менее примерно 10 мкг/мл; не менее примерно 15 мкг/мл; не менее примерно 20 мкг/мл; не менее примерно 25 мкг/мл; не менее примерно 50 мкг/мл; не менее примерно 75 мкг/мл; не менее примерно 100 мкг/мл; не менее примерно 200 мкг/мл; не менее примерно 300 мкг/мл; не менее примерно 400 мкг/мл; не менее примерно 500 мкг/мл; не менее примерно 600 мкг/мл; не менее примерно 700 мкг/мл; не менее примерно 800 мкг/мл; не менее примерно 900 мкг/мл; не менее примерно 1000 мкг/мл; не менее примерно 1250 мкг/мл; не менее примерно 1500 мкг/мл; не менее примерно 1750 мкг/мл; не менее примерно 2000 мкг/мл или представлять собой любое другое значение C_max, подходящее для описания фармакокинетического профиля соединения или состава, описанного в настоящем документе. C_max может составлять, например, от примерно 1 мкг/мл до примерно 5000 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 4500 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 4000 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 3500 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 3000 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 2500 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 2000 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 1500 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 1000 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 900 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 800 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 700 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 600 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 500 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 450 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 400 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 350 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 300 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 250 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 200 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 150 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 125 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 100 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 90 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 80 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 70 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 60 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 50 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 40 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 30 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 20 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 10 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 5 мкг/мл; от примерно 10 мкг/мл до примерно 4000 мкг/мл; от примерно 10 мкг/мл до примерно 3000 мкг/мл; от примерно 10 мкг/мл до примерно 2000 мкг/мл; от примерно 10 мкг/мл до примерно 1500 мкг/мл; от примерно 10 мкг/мл до примерно 1000 мкг/мл; от примерно 10 мкг/мл до примерно 900 мкг/мл; от примерно 10 мкг/мл до примерно 800 мкг/мл; от примерно 10 мкг/мл до примерно 700 мкг/мл; от примерно 10 мкг/мл до примерно 600 мкг/мл; от примерно 10 мкг/мл до примерно 500 мкг/мл; от примерно 10 мкг/мл до примерно 400 мкг/мл; от примерно 10 мкг/мл до примерно 300 мкг/мл; от примерно 10 мкг/мл до примерно 200 мкг/мл; от примерно 10 мкг/мл до примерно 100 мкг/мл; от примерно 10 мкг/мл до примерно 50 мкг/мл; от примерно 25 мкг/мл до примерно 500 мкг/мл; от примерно 25 мкг/мл до примерно 100 мкг/мл; от примерно 50 мкг/мл до примерно 500 мкг/мл; от примерно 50 мкг/мл до примерно 100 мкг/мл; от примерно 100 мкг/мл до примерно 500 мкг/мл; от примерно 100 мкг/мл до примерно 400 мкг/мл; от примерно 100 мкг/мл до примерно 300 мкг/мл или от примерно 100 мкг/мл до примерно 200 мкг/мл.

[0136] T_max соединения или состава, описанного в настоящем документе, может составлять, например, не более примерно 0,5 часа, не более примерно 1 часа, не более примерно 1,5 часа, не более примерно 2 часов, не более примерно 2,5 часа, не более примерно 3 часов, не более примерно 3,5 часа, не более примерно 4 часов, не более примерно 4,5 часа, не более примерно 5 часов или представлять собой любое другое значение T_max, подходящее для описания фармакокинетического профиля соединения или состава, описанного в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации T_max соединения или состава, описанного в настоящем документе, составляет не более примерно 1 минуты, примерно 2 минуты, примерно 3 минуты, примерно 4 минуты, примерно 5 минут, примерно 6 минут, примерно 7 минут, примерно 8 минут, примерно 9 минут, примерно 10 минут, примерно 15 минут, примерно 20 минут или примерно 25 минут. T_max может составлять, например, от примерно 0,1 часа до примерно 24 часов; от примерно 0,1 часа до примерно 0,5 часа; от примерно 0,5 часа до примерно 1 часа; от примерно 1 часа до примерно 1,5 часа; от примерно 1,5 часа до примерно 2 часов; от примерно 2 часов до примерно 2,5 часа; от примерно 2,5 часа до примерно 3 часов; от примерно 3 часов до примерно 3,5 часа; от примерно 3,5 часа до примерно 4 часов; от примерно 4 часов до примерно 4,5 часа; от примерно 4,5 часа до примерно 5 часов; от примерно 5 часов до примерно 5,5 часа; от примерно 5,5 часа до примерно 6 часов; от примерно 6 часов до примерно 6,5 часа; от примерно 6,5 часа до примерно 7 часов; от примерно 7 часов до примерно 7,5 часа; от примерно 7,5 часа до примерно 8 часов; от примерно 8 часов до примерно 8,5 часа; от примерно 8,5 часа до примерно 9 часов; от примерно 9 часов до примерно 9,5 часа; от примерно 9,5 часа до примерно 10 часов; от примерно 10 часов до примерно 10,5 часа; от примерно 10,5 часа до примерно 11 часов; от примерно 11 часов до примерно 11,5 часа; от примерно 11,5 часа до примерно 12 часов; от примерно 12 часов до примерно 12,5 часа; от примерно 12,5 часа до примерно 13 часов; от примерно 13 часов до примерно 13,5 часа; от примерно 13,5 часа до примерно 14 часов; от примерно 14 часов до примерно 14,5 часа; от примерно 14,5 часа до примерно 15 часов; от примерно 15 часов до примерно 15,5 часа; от примерно 15,5 часа до примерно 16 часов; от примерно 16 часов до примерно 16,5 часа; от примерно 16,5 часа до примерно 17 часов; от примерно 17 часов до примерно 17,5 часа; от примерно 17,5 часа до примерно 18 часов; от примерно 18 часов до примерно 18,5 часа; от примерно 18,5 часа до примерно 19 часов; от примерно 19 часов до примерно 19,5 часа; от примерно 19,5 часа до примерно 20 часов; от примерно 20 часов до примерно 20,5 часа; от примерно 20,5 часа до примерно 21 часов; от примерно 21 часов до примерно 21,5 часа; от примерно 21,5 часа до примерно 22 часов; от примерно 22 часов до примерно 22,5 часа; от примерно 22,5 часа до примерно 23 часов; от примерно 23 часов до примерно 23,5 часа или примерно 23,5 часа до примерно 24 часов.

[0137] AUC_0-inf или AUC_0-t соединения или состава, описанного в настоящем документе, может составлять, например, не менее примерно 1 мкг/г⋅мин, не менее примерно 5 мкг/г⋅мин, не менее примерно 10 мкг/г⋅мин, не менее примерно 20 мкг/г⋅мин, не менее примерно 30 мкг/г⋅мин, не менее примерно 40 мкг/г⋅мин, не менее примерно 50 мкг/г⋅мин, не менее примерно 100 мкг/г⋅мин, не менее примерно 150 мкг/г⋅мин, не менее примерно 200 мкг/г⋅мин, не менее примерно 250 мкг/г⋅мин, не менее примерно 300 мкг/г⋅мин, не менее примерно 350 мкг/г⋅мин, не менее примерно 400 мкг/г⋅мин, не менее примерно 450 мкг/г⋅мин, не менее примерно 500 мкг/г⋅мин, не менее примерно 600 мкг/г⋅мин, не менее примерно 700 мкг/г⋅мин, не менее примерно 800 мкг/г⋅мин, не менее примерно 900 мкг/г⋅мин, не менее примерно 1000 мкг/г⋅мин, не менее примерно 1250 мкг/г⋅мин, не менее примерно 1500 мкг/г⋅мин, не менее примерно 1750 мкг/г⋅мин, не менее примерно 2000 мкг/г⋅мин, не менее примерно 2500 мкг/г⋅мин, не менее примерно 3000 мкг/г⋅мин, не менее примерно 3500 мкг/г⋅мин, не менее примерно 4000 мкг/г⋅мин, не менее примерно 5000 мкг/г⋅мин, не менее примерно 6000 мкг/г⋅мин, не менее примерно 7000 мкг/г⋅мин, не менее примерно 8000 мкг/г⋅мин, не менее примерно 9000 мкг/г⋅мин, не менее примерно 10000 мкг/г⋅мин или представлять собой любое другое значение AUC_(0-inf), подходящее для описания фармакокинетического профиля соединения, описанного в настоящем документе. AUC_(0-inf) соединения может составлять, например, от примерно 1 мкг/г⋅мин до примерно 10000 мкг/г⋅мин; от примерно 1 мкг/г⋅мин до примерно 10 мкг/г⋅мин; от примерно 10 мкг/г⋅мин до примерно 25 мкг/г⋅мин; от примерно 25 мкг/г⋅мин до примерно 50 мкг/г⋅мин; от примерно 50 мкг/г⋅мин до примерно 100 мкг/г⋅мин; от примерно 100 мкг/г⋅мин до примерно 200 мкг/г⋅мин; от примерно 200 мкг/г⋅мин до примерно 300 мкг/г⋅мин; от примерно 300 мкг/г⋅мин до примерно 400 мкг/г⋅мин; от примерно 400 мкг/г⋅мин до примерно 500 мкг/г⋅мин; от примерно 500 мкг/г⋅мин до примерно 600 мкг/г⋅мин; от примерно 600 мкг/г⋅мин до примерно 700 мкг/г⋅мин; от примерно 700 мкг/г⋅мин до примерно 800 мкг/г⋅мин; от примерно 800 мкг/г⋅мин до примерно 900 мкг/г⋅мин; от примерно 900 мкг/г⋅мин до примерно 1000 мкг/г⋅мин; от примерно 1000 мкг/г⋅мин до примерно 1250 мкг/г⋅мин; от примерно 1250 мкг/г⋅мин до примерно 1500 мкг/г⋅мин; от примерно 1500 мкг/г⋅мин до примерно 1750 мкг/г⋅мин; от примерно 1750 мкг/г⋅мин до примерно 2000 мкг/г⋅мин; от примерно 2000 мкг/г⋅мин до примерно 2500 мкг/г⋅мин; от примерно 2500 мкг/г⋅мин до примерно 3000 мкг/г⋅мин; от примерно 3000 мкг/г⋅мин до примерно 3500 мкг/г⋅мин; от примерно 3500 мкг/г⋅мин до примерно 4000 мкг/г⋅мин; от примерно 4000 мкг/г⋅мин до примерно 4500 мкг/г⋅мин; от примерно 4500 мкг/г⋅мин до примерно 5000 мкг/г⋅мин; от примерно 5000 мкг/г⋅мин до примерно 5500 мкг/г⋅мин; от примерно 5500 мкг/г⋅мин до примерно 6000 мкг/г⋅мин; от примерно 6000 мкг/г⋅мин до примерно 6500 мкг/г⋅мин; от примерно 6500 мкг/г⋅мин до примерно 7000 мкг/г⋅мин; от примерно 7000 мкг/г⋅мин до примерно 7500 мкг/г⋅мин; от примерно 7500 мкг/г⋅мин до примерно 8000 мкг/г⋅мин; от примерно 8000 мкг/г⋅мин до примерно 8500 мкг/г⋅мин; от примерно 8500 мкг/г⋅мин до примерно 9000 мкг/г⋅мин; от примерно 9000 мкг/г⋅мин до примерно 9500 мкг/г⋅мин или от примерно 9500 мкг/г⋅мин до примерно 10000 мкг/г⋅мин.

[0138] Концентрация в плазме соединения или состава, описанного в настоящем документе, может составлять, например, не менее примерно 1 нг/мл, не менее примерно 5 нг/мл, не менее примерно 10 нг/мл, не менее примерно 15 нг/мл, не менее примерно 20 нг/мл, не менее примерно 25 нг/мл, не менее примерно 50 нг/мл, не менее примерно 75 нг/мл, не менее примерно 100 нг/мл, не менее примерно 150 нг/мл, не менее примерно 200 нг/мл, не менее примерно 300 нг/мл, не менее примерно 400 нг/мл, не менее примерно 500 нг/мл или представлять собой любую другую концентрацию в плазме соединения или состава, описанного в настоящем документе. Указанная концентрация в плазме может составлять, например, от примерно 1 нг/мл до примерно 500 нг/мл; от примерно 1 нг/мл до примерно 5 нг/мл; от примерно 5 нг/мл до примерно 10 нг/мл; от примерно 10 нг/мл до примерно 25 нг/мл; от примерно 25 нг/мл до примерно 50 нг/мл; от примерно 50 нг/мл до примерно 75 нг/мл; от примерно 75 нг/мл до примерно 100 нг/мл; от примерно 100 нг/мл до примерно 150 нг/мл; от примерно 150 нг/мл до примерно 200 нг/мл; от примерно 200 нг/мл до примерно 250 нг/мл; от примерно 250 нг/мл до примерно 300 нг/мл; от примерно 300 нг/мл до примерно 350 нг/мл; от примерно 350 нг/мл до примерно 400 нг/мл; от примерно 400 нг/мл до примерно 450 нг/мл или от примерно 450 нг/мл до примерно 500 нг/мл.

[0139] Концентрация в плазме соединения или состава, описанного в настоящем документе, может составлять, например, не менее примерно 1 мкг/мл, не менее примерно 5 мкг/мл, не менее примерно 10 мкг/мл, не менее примерно 15 мкг/мл, не менее примерно 20 мкг/мл, не менее примерно 25 мкг/мл, не менее примерно 50 мкг/мл, не менее примерно 75 мкг/мл, не менее примерно 100 мкг/мл, не менее примерно 150 мкг/мл, не менее примерно 200 мкг/мл, не менее примерно 300 мкг/мл, не менее примерно 400 мкг/мл, не менее примерно 500 мкг/мл или представлять собой любую другую концентрацию в плазме соединения или состава, описанного в настоящем документе. Указанная концентрация в плазме может составлять, например, от примерно 1 мкг/мл до примерно 500 мкг/мл; от примерно 1 мкг/мл до примерно 5 мкг/мл; от примерно 5 мкг/мл до примерно 10 мкг/мл; от примерно 10 мкг/мл до примерно 25 мкг/мл; от примерно 25 мкг/мл до примерно 50 мкг/мл; от примерно 50 мкг/мл до примерно 75 мкг/мл; от примерно 75 мкг/мл до примерно 100 мкг/мл; от примерно 100 мкг/мл до примерно 150 мкг/мл; от примерно 150 мкг/мл до примерно 200 мкг/мл; от примерно 200 мкг/мл до примерно 250 мкг/мл; от примерно 250 мкг/мл до примерно 300 мкг/мл; от примерно 300 мкг/мл до примерно 350 мкг/мл; от примерно 350 мкг/мл до примерно 400 мкг/мл; от примерно 400 мкг/мл до примерно 450 мкг/мл или от примерно 450 мкг/мл до примерно 500 мкг/мл.

Показания к применению

[0140] В настоящем раскрытии описано применение комбинации соединений для лечения состояния. В некоторых вариантах реализации указанное состояние представляет собой легочное нарушение, например ЛАГ, ЛГ вследствие заболевания левых отделов сердца, ЛГ вследствие заболевания легких, ЛГ из-за сгустков крови в легких или ЛГ в результате нарушений со стороны крови и других редких нарушений.

[0141] В некоторых вариантах реализации в настоящем раскрытии описано применение комбинации соединений для лечения ЛАГ. В некоторых вариантах реализации ЛАГ представляет собой первичную ЛАГ, идиопатическую ЛАГ, наследственную ЛАГ, ЛАГ, вызванную лекарственными средствами и токсинами, или ЛАГ, связанную с другими системными заболеваниями. В некоторых вариантах реализации наследственная ЛАГ возникает из-за BMPR2, ALK1, эндоглина, SMAD9, кавеолина 1 (CAV1) или элемента 3 подсемейства К калиевых каналов (potassium channel subfamily K member 3) (KCNK3). В некоторых вариантах реализации ЛАГ, вызванная лекарственными средствами и токсинами, вызвана применением амфетаминов, метамфетаминов, кокаина или комбинации фенфлурамин-фентермин. В некоторых вариантах реализации ЛАГ связана с другими системными заболеваниями и возникает в результате заболевания соединительной ткани (например, склеродермии, системной красной волчанки, смешанного заболевания соединительной ткани и ревматоидного артрита), инфекции вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), портальной гипертензии или врожденного порока сердца. В некоторых вариантах реализации настоящее описание может быть применено для лечения легочной вено-окклюзионной болезни (ЛВОБ) или легочного капиллярного гемангиоматоза (ЛКГ).

[0142] В некоторых вариантах реализации ЛГ обусловлена заболеванием левых отделов сердца, например заболеванием левых отделов сердца, возникшим вследствие систолической дисфункции левого желудочка, диастолической дисфункции левого желудочка, порока клапанов сердца, затруднений притока и оттока в левых отделах сердца, не обусловленных пороком клапанов, или врожденных кардиомиопатий. В некоторых вариантах реализации ЛГ обусловлена заболеванием легких, например хронической обструктивной болезнью легких (ХОБЛ), интерстициальными легочными болезнями, нарушением дыхания во сне (например, апноэ во сне), нарушениями альвеолярной гиповентиляции, хроническим воздействием высоты или аномалиями развития легкого.

[0143] В некоторых вариантах реализации ЛГ представляет собой ХТЭЛГ. В некоторых вариантах реализации ЛГ представляет собой ЛГ с неясными или многофакторными механизмами, такую как ЛГ, возникшая вследствие гематологических нарушений (например, некоторых видов анемии, миелопролиферативных расстройств или спленэктомии), системных нарушений с поражением легких (например, саркоидоза, гистиоцитоза из клеток Лангерганса, нейрофиброматоза, васкулита или лимфангиолейомиоматоза), нарушений обмена веществ (например, редких заболеваний, связанных с нарушенным клеточным метаболизмом, или заболевания щитовидной железы) или других, неклассифицированных заболеваний (например, хронической почечной недостаточности, опухолей, закрывающих просвет легочных артерий, и других редких заболеваний).

[0144] В некоторых вариантах реализации состояние, подлежащее лечению, представляет собой легочное нарушение, связанное с не соответствующим норме систолическим давлением в правом желудочке (СДПЖ), давлением в легочной артерии, сердечным выбросом, гипертрофией правого желудочка или гипертрофией легочной артерии. В некоторых вариантах реализации состояние, подлежащее лечению, представляет собой рак легкого. В некоторых вариантах реализации состояние, подлежащее лечению, представляет собой легочную ангиосаркому.

ПРИМЕРЫ

ПРИМЕР 1: Исследования in vivo

[0145] Для исследования воздействия Соединения 1 отдельно и в комбинации с амбризентаном и тадалафилом использовали самцов крыс Sprague Dawley (SD) (масса: 300-330 г; Taconic). Животных содержали в стандартных клетках для крыс с 12-часовыми циклами чередования света и темноты, и у них был свободный доступ к стандартным корму для крыс и к воде. Уход за животными, также как и их применение, осуществляли в соответствии с Руководством по уходу и применению животных Национального института здравоохранения.

ПРИМЕР 2: Схема эксперимента

3.1 Фармакокинетическое исследование ингаляции

[0146] Самцы крыс Sprague Dawley вдыхали состав сухого порошка Соединения 1 (Соединение 1/лейцин) только через нос в течение 60 минут. Средняя накапливаемая доза для фармакокинетического исследования ингаляции составляла 0,4 мг/кг с предполагаемой накапливаемой дозой в 0,1. Крыс помещали в ингаляционную камеру (exposure tower) в шахматном порядке, чтобы обеспечить достаточное время для отбора проб между животными.

[0147] После того, как ингаляционная доза заканчивалась, крыс подвергали общей анестезии при помощи изофлурана, интубировали посредством трахеотомии и помещали на вентилятор с регулируемым давлением. Затем каждой крысе делали стернотомию. В установленные моменты времени образец венозной крови отбирали из правого желудочка (ПЖ), а образец артериальной крови отбирали из левого желудочка (ЛЖ). 1 мл крови помещали в пробирку Эппендорфа, содержащую 10 мкл ЭДТА для каждого образца, а образцы с венозной и артериальной кровью помещали на лед.

[0148] У крыс зажимали правую и левую легочные артерии, вены и бронхи. Доли легкого (т.е. правую верхнюю долю (RUL), правую среднюю долю (RML), правую нижнюю долю (RLL), вспомогательную долю легкого (Acc), левую верхнюю долю (LUL), левую среднюю долю (LML) и левую нижнюю долю (LLL)) удаляли, промокали для удаления крови и быстро замораживали в жидком азоте. Крыс умерщвляли под общим наркозом путем обескровливания. Образцы крови, полученные от крыс, разделяли в центрифуге, и аликвоты супернатантов плазмы помещали в пробирки Эппендорфа. Образцы плазмы и долей легкого хранили при минус 80°C до момента извлечения и анализа указанных образцов плазмы и долей легкого.

3.2 Исследование гипоксии с AAV-PDGFB SU5416

[0149] Аденоассоциированный вирус (AAV)-PDGFB вводили путем инсуффляции в легкие самцов крыс SD для того, чтобы вызвать гиперэкспрессию PDGFBB в легких. Применяли два серотипа AAV для получения крыс с гиперэкспрессией PDGFBB: AAV-5 и AAV6.2. У крыс гиперэкспрессия PDGFB осуществлялась под контролем цитомегаловирусного (CMV) промотора. 4,3×10¹² геномных копий (GC) AAV-5-PDGFB и 1,6×10¹¹ GC AAV-6.2-PDGFB вводили каждой крысе путем инсуффляции. В SEQ ID№: 1 показана последовательность PDGFB крысы, гиперэкспрессия которого осуществлялась под контролем CMV-промотора.

[0150] Через 4 недели при помощи внутрибрюшинной (i.p.) инъекции вводили 20 мг/кг семаксаниба (SU5416), и крыс содержали в камере с созданными условиями для гипоксии с ингалируемой фракцией кислорода (FiO₂) в 10% на протяжении 3 недель. Группы лечения поделили на четыре группы (ТАБЛИЦА 1): 1) с получением среды-носителя через желудочный зонд один раз в сутки и среды-носителя путем ингаляции два раза в сутки (V-V); 2) с получением 10 мг/кг тадалафила и 10 мг/кг амбризентана через желудочный зонд один раз в сутки и среды-носителя путем ингаляции два раза в сутки (TA-V); 3) с получением среды-носителя через желудочный зонд один раз в сутки и 0,6 мг/кг Соединения 1 путем ингаляции два раза в сутки (V-PK); и 4) с получением 10 мг/кг тадалафила и 10 мг/кг амбризентана через желудочный зонд один раз в сутки и 0,6 мг/кг Соединения 1 путем ингаляции два раза в сутки (ТА-PK). Ежедневное лечение проводили, начиная со 2 суток после удаления крыс из камеры с созданными условиями для гипоксии, и продолжали в течение 4 недель (28 дней).

[0151] В конце исследования измеряли СДПЖ у каждой из крыс, и животных гепаринизировали. Затем удаляли правую среднюю долю легкого и помещали ее в жидкий азот. Крысам выпускали кровь под общим наркозом, а оставшееся легкое и сердце удаляли. Легочную артерию перфузировали гепаринизированным солевым раствором и фиксировали с применением 10% формалина в условиях низкого давления. Камеры сердца вскрывали, взвешивали и фиксировали в формалине. Оставшееся легкое фиксировали в формалине путем инфузии через трахею. Для измерения СДПЖ у крыс животным давали изофлуран в качестве успокоительного, интубировали посредством трахеотомии и осуществляли искусственную вентиляцию легких с помощью вентилятора ТОРО™ с регулируемым давлением. Пиковое давление на вдохе составляло 18 см H₂O (вод. ст.), а положительное давление конца выдоха (PEEP) составляло 5 см H₂O (вод. ст.). Проводили стернотомию, и через верхушку ПЖ вставляли высокоточный катетер Scisense. Измеряемые параметры включали: конечно-систолическое давление в правом желудочке (КСДПЖ), конечно-диастолическое давление в ПЖ (КДДПЖ), гемодинамику ПЖ, гипертрофию ПЖ, конечно-диастолический объем в ПЖ, конечно-систолический объем в ПЖ, фракцию выброса ПЖ, передачу сигналов PDGFR, минутный сердечный выброс и систолическую работу.

3.3 Введение порошка Соединения 1 для ингаляции

[0152] Состав Соединения 1 содержал примерно 50% соединения 1 и примерно 50% лейцина. Указанные соединения растворяли в растворе этанол/вода, и полученную смесь подвергали распылительной сушке с получением сухого порошка с аэрозольными характеристиками, подходящими для ингаляции.

[0153] Доставку крысам порошка Соединения 1 для ингаляции осуществляли при помощи 12-портовой камеры для ингаляции только через нос с применением аэрозольного генератора Vilnius (VAG). Порошок Соединения 1 для ингаляции загружали в VAG, и устанавливали скорость потока в 3 л/мин в течение 60 минут. Количество ингалируемого Соединения 1 измеряли с помощью импактора Мерсера при скорости потока 1,5 л/мин. Масс-медианный аэродинамический диаметр (ММАД) аэрозольных частиц порошка Соединения 1 для ингаляции определяли с применением импактора нового поколения (NGI).

3.4 Плетизмография

[0154] Плетизмографию выполняли с помощью двухкамерного плетизмографа Emka и программного обеспечения Emka iox. Измеряемые параметры включали частоту дыхания, дыхательный объем, минутный объем вентиляции легких (MV), пиковый вдох и выдох, а также сопротивление дыхательных путей. Измерения проводились до введения первой дозы лекарственного средства и в конце исследования.

3.5 Гистология и морфометрический анализ

[0155] У находившихся под искусственной вентиляцией легких животных под общим наркозом удаляли сердце и легкие. Гепаринизированный солевой раствор вводили под давлением через главную легочную артерию. Правую среднюю долю быстро перерезали и помещали в жидкий азот для проведения количественной полимеразной цепной реакции (кПЦР) и вестерн-блоттинга. Удаляли сердце, а свободную стенку ПЖ, межжелудочковую перегородку и свободную стенку левого желудочка (ЛЖ) вскрывали и взвешивали. Забуференный формалин (10%) вводили под давлением в легочную артерию и трахею. Морфометрический анализ проводили на фиксированном 8 мкм срезе ткани, окрашенном при помощи Н&Е (гематоксилин и эозин). Площадь медиа и область просвета легочных артериол измеряли с использованием программного обеспечения ImageJ. Измерения проводились по меньшей мере на 20 легочных артериолах на срез на крысу. Определяли отношение площади просвета к общей площади медиа (L/M). При помощи отношения L/M нормировали изменение общей площади легочной артериолы.

3.6 Иммуногистохимия

[0156] Демаскировку антигена проводили с применением высокотемпературной демаскировки антигена. Иммуногистохимическое исследование срезов легких проводили для PDGFBB, общего PDGFRα, общего PDGFRβ, pPDGFRα и pPDGFRβ. Обнаружение сигнала осуществляли при помощи набора EXPOSE, содержащего пероксидазу хрена/диаминобензидин (HRP/DAB).

3.7 Вестерн-блот-анализ

[0157] Образцы легочной ткани гомогенизировали в буфере для лизиса с рН 7,4, содержащим 50 мМ Tris-HCl, 50 мМ NaCl, 5 мМ ЭДТА, 1% Тритон Х-100, 0,05% SDS, 50 мМ NaF, 10 мМ β-глицерофосфата, пирофосфат натрия, 100 мкМ Na₃VO₄ и ингибитор фосфатазы и протеазы. Лизаты нормировали и разделяли на 7,5% или 12% полиакриламидных гелях, и переносили на нитроцеллюлозные мембраны. После блокировки указанные мембраны исследовали при помощи одного из следующих антител: антитело против PDGFRβ, антитело против фосфорилированного PDGFRβ (Y1021), pMYPT, MYPT, pSTAT3 или STAT3. Образцы инкубировали в течение ночи на шюттель-аппарате с последующей часовой инкубацией в присутствии вторичных антител, конъюгированных с HRP. Связанные антитела определяли при помощи хемилюминесценции с применением системы обнаружения с усиленной хемилюминесценцией (ECL) и количественно определяли методом денситометрии с использованием блот-сканера Licor C-Digit®.

3.8 Экспрессия гена PDGFB

[0158] РНК из ткани легкого выделяли с применением реагента TRIzol™. Концентрацию РНК измеряли с применением спектрофотометра Nanodrop™ 1000. Равные количества РНК каждого образца транскрибировали на кДНК с применением высокопроизводительного набора для обратной транскрипции кДНК. Реакции обратной транскрипции (ОТ)-кПЦР проводили с применением мастер-микса для экспрессии генов TaqMan™ и праймеров/зондов TaqMan™ для PDGFB и 18S. Анализ экспрессии генов проводили с применением системы QuantStudio™ 6 Flex. Экспрессию гена нормировали к экспрессии 18S, который применяли в качестве гена «домашнего хозяйства».

3.9 Иммуноферментный твердофазный анализ (ELISA)

[0159] Наборы ELISA, специфичные в отношении β-рецептора фосфорилированного PDGF (Y751), применяли для сравнения эффекта дозы Соединения 1 и иматиниба на стимулированное PDGFBB фосфорилирование PDGFRP в фибробластах легких человека.

[0160] Фибробласты легких взрослого человека (HLFa) содержали в субкультуре с не более чем 8 пассажами. Клетки культивировали в модифицированной Дульбекко среде Игла (DMEM) с 5% фетальной бычьей сывороткой (FBS), 4 мМ GlutaMAX™ и IX растворе антибиотика-антимикотика. Клетки высевали в колбы Т-25 и выращивали до величины конфлюентности в приблизительно 70-80%. Как только клетки достигали показателя конфлюентности в приблизительно 70-80%, клетки обеспечивали бессывороточной средой в течение приблизительно 24 часов.

[0161] Клетки обрабатывали Соединением 1 или иматинибом для исследования ингибирования стимуляции pPDGFRβ (Y751) PDGFBB. Указанные клетки предварительно обрабатывали Соединением 1 в указанных концентрациях и инкубировали в инкубаторе с 5% CO₂ при 37°C в течение 30 минут. После предварительной обработки в колбы добавляли 50 нг/мл PDGFBB, и клетки инкубировали при 37°C, 5% CO₂ в течение 7,5 минут. После обработки клетки лизировали в буфере для лизиса клеток, содержащем фенилметансульфонилфторид (PMSF). Супернатанты лизата клеток собирали для количественного определения белка и анализировали с применением набора для анализа белка Micro ВСА™. Затем лизаты клеток применяли в сэндвич-варианте анализов ELISA для количественного определения количеств pPDGFRaльфa (Y849) и pPDGFRбета (Y751). Каждое исследование выполняли в двух повторностях.

[0162] Образцы разбавляли в буфере для анализа ELISA, переносили в микролунки, покрытые mAb против pPDGFR, и инкубировали при 37°C в течение 2 часов. После инкубации образца в лунке указанные лунки промывали 4 раза IX промывочным буфером для ELISA. Идентифицирующие антитела добавляли в каждую из лунок, и указанные образцы инкубировали в течение 1 часа в инкубаторе при 37°C. Лунки промывали после инкубации с идентифицирующим антителом. В каждую лунку добавляли вторичное антитело, связанное с HRP, и образцы инкубировали в течение 30 минут в инкубаторе при 37°C. После инкубации со связанными с HRP вторичными антителами, указанные лунки снова промывали. 3,3',5,5'-тетраметилбензидин (ТМВ) в качестве субстрата добавляли в каждую лунку и инкубировали в течение 10 минут в инкубаторе при 37°C. После инкубации с ТМВ в каждую из лунок, содержащую ТМВ, добавляли стоп-раствор. Планшет осторожно встряхивали в течение нескольких секунд, и лунки с образцами считывали при 450 нм с использованием спектрофотометрического планшета-ридера и программного обеспечения Genesis Lite.

3.10 Статистический анализ

[0163] Статистический анализ был выполнен с применением XLSTAT 2017.4. Данные представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего (SEM), если не указано иное. Различия между группами анализировали с применением дисперсионного анализа (ANOVA) с последующей поправкой по методу Бонферрони или теста Стьюдента-Ньюмана-Кеулса (SNK). В некоторых случаях тест Даннетта применяли для сравнения с контрольной группой. В тех случаях, когда дисперсия не была нормальной, выполняли непараметрический анализ Крускала-Уоллиса с последующей методикой Двасса-Стила-Кричлоу-Флигнера (Steel-Dwass-Critchlow-Fligner) для сравнения нескольких групп. Значение устанавливали на уровне р=0,05.

ПРИМЕР 3: Анализ ELISA PDGFRβ в фибробластах легких человека

[0164] На ФИГУРЕ 2 показаны результаты, полученные из анализа ELISA фосфорилированного PDGFRβ (pPDGFRβ) в фибробластах легких человека, обработанных PDGFB, в присутствии или отсутствии Соединения 1 и иматиниба. Соединение 1 было в примерно 2,5 раза более эффективным, чем иматиниб при ингибировании стимулированного PDGFB фосфорилирования PDGFRβ в фибробластах легких человека. Величина IC₅₀ Соединения 1 для ингибирования фосфорилирования PDGFRP составляла 0,1 мкМ. Величина IC₅₀ иматиниба для ингибирования фосфорилирования PDGFRβ составляла 0,25 мкМ.

ПРИМЕР 4: Фармакокинетика ингалируемого Соединения 1

[0165] После пассивной ингаляции крысами Соединения 1 в виде состава сухого порошка концентрация Соединения 1 в их легких была в 20-80 раз выше концентраций Соединения 1 в артериальной и венозной плазме. Средняя накапливаемая доза Соединения 1 составляла 0,4 мг/кг; n=2 для t=240 мин, 1440 мин; n=3 для всех остальных моментов времени.

[0166] На ФИГУРЕ 3 показано сравнение концентраций Соединения 1 в легких, артериях и венах у крыс после ингаляции. Концентрации Соединения 1 в артериях и венах были в несколько раз ниже концентрации Соединения 1 в легких; концентрации Соединения 1 в артериях и венах были близки к исходному уровню и не видны на графике. На ФИГУРЕ 4 показаны концентрации Соединения 1 в артериях и венах в меньшем масштабе в течение временного интервала в приблизительно 500 минут. Данные показывают, что максимальные средние значения концентраций Соединения 1 в артериях и венах составляли примерно 1 мкг/мл. Средние значения концентраций Соединения 1 быстро снижались после введения и достигали нулевого значения примерно через 400 минут после введения.

[0167] Двухкамерное фармакокинетическое моделирование проводили с применением РК Solver 2.0. Результаты показаны в ТАБЛИЦЕ 2 и ТАБЛИЦЕ 3. Конечный период полувыведения Соединения 1 в легких (t1/2β) составлял 385,9 минут по сравнению со 125 минутами в плазме. В ТАБЛИЦЕ 2 показаны фармакокинетические параметры для концентрации Соединения 1 в легких. В ТАБЛИЦЕ 3 показаны фармакокинетические параметры для концентрации Соединения 1 в венозной плазме.

ПРИМЕР 5: Вестерн-блот-анализы

[0168] Вестерн-блот-анализы с применением антитела, специфичного к pPDGFRβ, фосфорилированному по Y1021, проводили для определения воздействия ингалируемого Соединения 1 на уровни pPDGFRβ в легких животных, получавших лечение. Животные получали лечение ингалируемым Соединением 1 или средой-носителем. Образцы подвергали электрофорезу в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДНС-ПААГ), и полученный гель переносили на нейлоновую мембрану.

[0169] На ФИГУРЕ 5 показаны результаты вестерн-блот-анализа образцов, демонстрирующие, что обработка Соединением 1 снижала соотношение pPDGFRβ по сравнению с уровнями общего PDGFRβ. В верхней части ФИГУРЫ 5 показаны результаты вестерн-блоттинга после инкубации с первичным антителом, специфичным к pPDGFRβ, фосфорилированным по Y1021. В нижней части показан вестерн-блоттинг после инкубации с антителом, специфичным к общему PDGFRβ. Результаты показывают, что животные, получавшие лечение Соединением 1, демонстрировали пониженные уровни pPDGFRβ по сравнению с животными, получавшими лечение средой-носителем.

ПРИМЕР 6: Эффективность ингалируемого Соединения 1 в комбинации с тадалафилом и амбризентаном

[0170] Экспрессия гена PDGFB была увеличена в модели гипоксии с AAV-PDGFB SU5416 у крыс. Лечение 1) только средой-носителем; 2) тадалафилом + амбризентаном и средой-носителем; и 3) средой-носителем и Соединением 1 не оказывало значительного воздействия на уровни экспрессии гена PDGFB. Напротив, комбинированное лечение тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1 увеличивало экспрессию гена PDGFB приблизительно на 70%. На ФИГУРЕ 6 показано, что в группе, получавшей лечение тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1, наблюдали повышенную экспрессию гена PDGFRB в легких по сравнению с контрольной и другими группами лечения.

[0171] Комбинированное лечение тадалафилом в концентрации 10 мг/кг и амбризентаном в концентрации 10 мг/кг, вводимыми через желудочный зонд (TA-V, n = 8) один раз в сутки в течение четырех недель, снижало СДПЖ на 31% по сравнению с лечением только одной средой-носителем (V-V, n = 9) при гиперэкспрессии AAV-PDGFB в модели гипоксии SU5416 у крыс с легочной гипертензией (ЛГ). СДПЖ в группе V-V составляло 62,6±4,1 мм рт. ст., а СДПЖ в группе TA-V составляло 42,9±2,2 мм рт. ст. Состав сухого порошка Соединения 1 вводили путем пассивной ингаляции в средней дозе 0,6 мг/кг два раза в сутки в течение четырех недель, снижая систолическое давление в правом желудочке на 29% по сравнению с животными, получавшими лечение средой-носителем (СДПЖ 44,3±1,9 мм рт. ст., n=11). Лечение 10 мг/кг тадалафила и 10 мг/кг амбризентана, вводимыми ежедневно через желудочный зонд, в комбинации с ингалируемым Соединением 1 два раза в сутки в течение четырех недель (ТА-PK) снижало СДПЖ на 47% в сравнении с группой V-V (СДПЖ 33,2±1,2 мм рт. ст. ТА-РК n=9) (р=0,002 ТА-PK в сравнении с V-V, р=0,006 TA-V в сравнении с V-V и р=0,005 V-PK в сравнении с V-V). Значение СДПЖ не было получено для 1 крысы в группе V-PK и для 3 крыс в группе ТА-РК.

[0172] На ФИГУРЕ 7 показано, что лечение тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1 показало наибольшее снижение СДПЖ в % по сравнению с контрольной и другими группами лечения. *р<0,01 в сравнении с V-V; в сравнении с TA-V и V-PK. В ТАБЛИЦЕ 4 приведен эффект лечения на % снижения СДПЖ. Сокращения: AVG = среднее; SEM = стандартная ошибка среднего.

[0173] Гипертрофия правого желудочка также уменьшалась в группах лечения, о чем свидетельствует отношение массы ПЖ, деленной на массу ЛЖ и межжелудочковой перегородки (ПЖ/(ЛЖ + МЖП)). V-V (n = 9) 0,50±0,03; TA-V (n=8), 0,38±0,02; V-PK (n=11), 0,36±0,01 и ТА-РК (n=9), 0,28±0,01. По сравнению с группой, получавшей лечение средой-носителем (V-V), отношения ПЖ/(ЛЖ + МЖП) были снижены на 25% в группах ТА и V-PK и на 27% в группе ТА-РК. На ФИГУРЕ 8 показано, что лечение тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1 показало наибольшее снижение гипертрофии правого желудочка ПЖ/(ЛЖ + МЖП) по сравнению с контрольной и другими группами лечения. * р<0,01 в сравнении с V-V; в сравнении с TA-V и V-PK.

[0174] Величину отношения площади просвета/медиа легочных артериол улучшали при помощи лечения тадалафилом и амбризентаном, ингалируемым Соединением 1 и комбинацией тадалафила с амбризентаном и ингалируемым Соединением 1. V-V (n=9) 0,36±0,05; TA-V (n=8) 0,58±0,04; V-PK (n=12) 0,76±0,04; ТА-PK (n=12), 0,83±0,05. На ФИГУРЕ 9 показаны окрашенные гемотоксилином и эозином срезы легких, на которых показано сравнение площадей просвета и медиа легочных артериол, которые демонстрируют, что лечение Соединением 1 или лечение тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1 улучшало значения отношения площадей просвета/медиа легочных артериол по сравнению с контрольной группой и группой, получавшей лечение только тадалафилом и амбризентаном. На ФИГУРЕ 10 приведено сравнение воздействия монотерапии и комбинированного лечения тадалафилом, амбризентаном и Соединением 1 на величину отношения площадей просвета/медиа. Данные показывают, что в группе ТА-РК наблюдали повышенное отношение площадей просвета/медиа по сравнению с группами лечения V-V, TA-V и V-PK. * р<0,0001 в сравнении с ТА-PK в сравнении с V-V и V-PK в сравнении с V-V; в сравнении с TA-V в сравнении с V-V.

[0175] Иммуногистохимические исследования продемонстрировали снижение уровней фосфорилированного PDGFRβ (Y1021) и фосфорилированного PDGFRα (Y751) в легких крыс, получавших лечение ингалируемым Соединением 1 как в группе V-PK, так и в группе ТА-PK. На ФИГУРЕ 11 показано, что в группах V-PK и ТА-PK наблюдали снижение уровня pPDGFRβ (Y1021) по сравнению с группами лечения V-V и TA-V. На ФИГУРЕ 12 показано, что в группах V-PK и ТА-PK наблюдали снижение уровней pPDGFRα (Y751) по сравнению с группами лечения V-V и TA-V. Вестерн-блот-анализы также продемонстрировали снижение уровней pPDGFR (Y1021) в группах, получавших лечение ингалируемым Соединением 1, в группах V-PK и ТА-РК. На ФИГУРЕ 13 показаны результаты вестерн-блот-анализов, демонстрирующие, что в группах лечения V-PK и ТА-PK были обнаружены пониженные уровни pPDGFRβ (Y1021) по сравнению с группами лечения V-V и TA-V. На ФИГУРЕ 13 также показано, что в группах лечения V-PK и ТА-PK были обнаружены пониженные уровни pPDGFRβ (Y1021) по сравнению с уровнем общего PDGFRβ и β-актина в качестве контролей.

[0176] Снижение фосфорилирования фосфатазы легкой цепи миозина (pMYPT) также наблюдали в группе, получавшей лечение тадалафилом, амбризентаном и ингалируемым Соединением 1 (ТА-PK, n=9), по сравнению с группой, получавшей лечение только средой-носителем (V-V), и группой, получавшей лечение тадалафилом и амбризентаном (TA-V, n=8). На ФИГУРЕ 14 показаны результаты вестерн-блоттинга, отображающие снижение фосфорилирования MYPT в группе, получавшей лечение тадалафилом, амбризентаном и ингалируемым Соединением 1, по сравнению с группой, получавшей лечение только средой-носителем, и группой, получавшей лечение тадалафилом и амбризентаном. На ФИГУРЕ 15 показано, что в группе лечения ТА-PK наблюдали снижение соотношения pMYPT/MYP по сравнению с группами лечения V-V, TA-V и V-РК. *р=0,027 ТА-PK в сравнении с TA-V, р=0,016 ТА-РК в сравнении с V-V, анализ Крускала-Уоллиса.

[0177] Снижение фосфорилирования STAT3 (pSTAT3) наблюдали в группе, получавшей лечение тадалафилом, амбризентаном и ингалируемым Соединением 1 (ТА-PK, n=9), по сравнению с группой, получавшей лечение только средой-носителем (V-V, n=9). На ФИГУРЕ 16 показаны результаты вестерн-блот-анализа в группах лечения, который демонстрирует, что в группе, получавшей лечение ТА-PK, наблюдали наибольшее снижение pSTAT3 по сравнению с группами лечения V-V, TA-V и V-PK. На ФИГУРЕ 17 показано, что в группе TA-V и V-PK наблюдали одинаковое снижение pSTAT3, и что в группе лечения ТА-PK наблюдали наибольшее снижение величины отношения pSTAT3/STAT3. *р=0,04 по критерию Даннетта.

[0178] Исследования с помощью плетизмографии продемонстрировали тенденцию к увеличению дыхательного объема в группах V-PK и ТА-PK. Значительное снижение частоты дыхания в группе ТА-PK наблюдали без значительного изменения в MV. Значительное снижение в величине сопротивления дыхательных путей наблюдали в группе ТА-PK по сравнению с группой V-V. На ФИГУРЕ 18 показано, что лечение ТА-PK приводило к незначительному увеличению дыхательного объема по сравнению с группами лечения V-V, TA-V и V-PK. На ФИГУРЕ 19 показано, что лечение ТА-РК снижало частоту дыхания (число дыханий/мин) в группе по сравнению с группами V-V, TA-V и V-PK. *p=0,002 TA-PK в сравнении с V-V (поправка Бонферрони для сравнения нескольких групп). На ФИГУРЕ 20 показано, что лечение TA-V и V-PK приводило к небольшому уменьшению минутного объема вентиляции легких по сравнению с группой V-V; группа, получавшая лечение ТА-РК не продемонстрировала существенного изменения в минутном объеме вентиляции легких по сравнению с группой V-V. На ФИГУРЕ 21 показано, что лечение ТА-PK приводило к снижению величины удельного сопротивления дыхательных путей (Sraw) по сравнению с группами лечения V-V, TA-V и V-PK. ТА-РК в сравнении с V-V (тест Даннетта).

ВАРИАНТЫ РЕАЛИЗАЦИИ

[0179] В следующих неограничивающих вариантах реализации предложены иллюстративные примеры настоящего изобретения, но указанные варианты реализации не ограничивают объем настоящего изобретения.

[0180] Вариант реализации 1. Способ лечения состояния, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества ингибитора тирозинкиназы, терапевтически эффективного количества ингибитора фосфодиэстеразы типа 5 (PDEV) и терапевтически эффективного количества антагониста рецепторов эндотелина.

[0181] Вариант реализации 2. Способ согласно варианту реализации 1, в котором указанный субъект представляет собой человека.

[0182] Вариант реализации 3. Способ согласно варианту реализации 1 или 2, в котором указанный ингибитор тирозинкиназы имеет формулу:

или представляет собой фармацевтически приемлемую соль указанного соединения.

[0183] Вариант реализации 4. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-3, в котором указанный ингибитор PDEV представляет собой силденафил или его фармацевтически приемлемую соль.

[0184] Вариант реализации 5. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-3, в котором указанный ингибитор PDEV представляет собой тадалафил или его фармацевтически приемлемую соль.

[0185] Вариант реализации 6. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-3, в котором указанный ингибитор PDEV представляет собой варденафил или его фармацевтически приемлемую соль.

[0186] Вариант реализации 7. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-6, в котором указанный антагонист рецепторов эндотелина представляет собой селективный антагонист рецепторов ETA.

[0187] Вариант реализации 8. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-7, в котором указанный селективный антагонист рецепторов ETA представляет собой амбризентан или его фармацевтически приемлемую соль.

[0188] Вариант реализации 9. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-6, в котором указанный антагонист рецепторов эндотелина представляет собой двойной антагонист.

[0189] Вариант реализации 10. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-6 и 9, в котором указанный двойной антагонист представляет собой мацитентан или его фармацевтически приемлемую соль.

[0190] Вариант реализации 11. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-10, в котором введение указанного ингибитора тирозинкиназы осуществляют путем ингаляции.

[0191] Вариант реализации 12. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-11, в котором введение указанного ингибитора тирозинкиназы осуществляют с помощью ингалятора.

[0192] Вариант реализации 13. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-11, в котором введение указанного ингибитора тирозинкиназы осуществляют с помощью небулайзера.

[0193] Вариант реализации 14. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-11, в котором введение указанного ингибитора тирозинкиназы осуществляют с помощью атомизатора.

[0194] Вариант реализации 15. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-14, в котором введение указанного ингибитора PDEV и указанного антагониста рецепторов эндотелина является пероральным.

[0195] Вариант реализации 16. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-15, в котором указанное терапевтически эффективное количество указанного ингибитора тирозинкиназы составляет от примерно 0,25 мг/кг до примерно 1 мг/кг в сутки.

[0196] Вариант реализации 17. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-16, в котором указанное терапевтически эффективное количество указанного ингибитора PDEV составляет от примерно 20 мг до примерно 40 мг в сутки.

[0197] Вариант реализации 18. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-17, в котором указанное терапевтически эффективное количество указанного антагониста рецепторов эндотелина составляет от примерно 5 мг до примерно 10 мг в сутки.

[0198] Вариант реализации 19. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-18, в котором указанное состояние представляет собой легочное нарушение.

[0199] Вариант реализации 20. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-19, в котором указанное состояние представляет собой легочную гипертензию.

[0200] Вариант реализации 21. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-20, в котором указанное состояние представляет собой легочную артериальную гипертензию.

[0201] Вариант реализации 22. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-21, в котором указанный ингибитор тирозинкиназы приготовлен в виде сухого порошка для ингаляции.

[0202] Вариант реализации 23. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-3, 5, 7, 8 и 11-22, в котором указанный ингибитор PDEV представляет собой тадалафил или его фармацевтически приемлемую соль, и указанный антагонист рецепторов эндотелина представляет собой амбризентан или его фармацевтически приемлемую соль.

[0203] Вариант реализации 24. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-23, в котором указанное терапевтически эффективное количество указанного ингибитора тирозинкиназы составляет от примерно 0,25 мг/кг/сутки до примерно 0,5 мг/сутки, указанное терапевтически эффективное количество указанного ингибитора PDEV составляет примерно 1 мг/кг, и указанное терапевтически эффективное количество указанного антагониста рецепторов эндотелина составляет примерно 1 мг/кг.

[0204] Вариант реализации 25. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-3, 5, 7, 8 и 11-23, в котором тадалафил или его фармацевтически приемлемую соль и амбризентан или его фармацевтически приемлемую соль вводят перорально.

[0205] Вариант реализации 26. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-25, в котором указанный ингибитор тирозинкиназы вводят путем ингаляции.

[0206] Вариант реализации 27. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-26, дополнительно включающий введение указанному субъекту терапевтически эффективного количества стимулятора растворимой гуанилатциклазы.

[0207] Вариант реализации 28. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-27, в котором указанный стимулятор растворимой гуанилатциклазы представляет собой риоцигуат или его фармацевтически приемлемую соль.

[0208] Вариант реализации 29. Способ согласно любому из вариантов реализации 1-24, в котором указанный ингибитор растворимой гуанилатциклазы представляет собой верицигуат или его фармацевтически приемлемую соль.

Изобретение относится к способу лечения легочной артериальной гипертензии. Применяют комбинацию терапевтически эффективных количеств ингибитора тирозинкиназы, ингибитора фосфодиэстеразы типа 5 (PDEV), выбранного из силденафила, тадалафила или варденафила, и антагониста рецептора эндотелина, представляющего собой амбризентан. Комбинированное лечение увеличивало экспрессию гена PDGFB в легких приблизительно на 70%, снижало систолическое давление в правом желудочке на 47%, снижало гипертрофию правого желудочка на 27%. 16 з.п. ф-лы, 21 ил., 4 табл., 6 пр.

1. Способ лечения легочной артериальной гипертензии, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом,

а) терапевтически эффективного количества ингибитора тирозинкиназы, причем указанный ингибитор тирозинкиназы характеризуется формулой:

,

или его фармацевтически приемлемой соли;

б) терапевтически эффективного количества ингибитора фосфодиэстеразы типа 5 (PDEV), выбранного из группы, состоящей из силденафила, тадалафила, варденафила и фармацевтически приемлемой соли любого из указанных выше соединений; и

в) терапевтически эффективного количества антагониста рецептора эндотелина, причем указанный антагонист рецептора эндотелина представляет собой амбризентан или его фармацевтически приемлемую соль.

2. Способ по п. 1, в котором указанный субъект представляет собой человека.

3. Способ по п. 1, в котором указанный ингибитор PDEV представляет собой силденафил или его фармацевтически приемлемую соль.

4. Способ по п. 1, в котором указанный ингибитор PDEV представляет собой тадалафил или его фармацевтически приемлемую соль.

5. Способ по п. 1, в котором указанный ингибитор PDEV представляет собой варденафил или его фармацевтически приемлемую соль.

6. Способ по п. 1, в котором введение указанного ингибитора тирозинкиназы осуществляют путем ингаляции.

7. Способ по п. 1, в котором введение указанного ингибитора тирозинкиназы осуществляют с помощью ингалятора.

8. Способ по п. 1, в котором введение указанного ингибитора тирозинкиназы осуществляют с помощью небулайзера.

9. Способ по п. 1, в котором введение указанного ингибитора тирозинкиназы осуществляют с помощью атомизатора (atomizer).

10. Способ по п. 1, в котором введение указанного ингибитора PDEV и указанного антагониста рецепторов эндотелина является пероральным.

11. Способ по п. 1, в котором указанное терапевтически эффективное количество указанного ингибитора тирозинкиназы составляет от примерно 0,25 мг/кг до примерно 1 мг/кг в сутки.

12. Способ по п. 1, в котором указанное терапевтически эффективное количество указанного ингибитора PDEV составляет от примерно 20 мг до примерно 40 мг в сутки.

13. Способ по п. 1, в котором указанное терапевтически эффективное количество указанного антагониста рецепторов эндотелина составляет от примерно 5 мг до примерно 10 мг в сутки.

14. Способ по п. 1, в котором указанный ингибитор тирозинкиназы приготовлен в виде сухого порошка.

15. Способ по п. 1, в котором указанное терапевтически эффективное количество указанного ингибитора тирозинкиназы составляет от примерно 0,25 мг/кг/сутки до примерно 0,5 мг/кг/сутки, указанное терапевтически эффективное количество указанного ингибитора PDEV составляет примерно 1 мг/кг, и указанное терапевтически эффективное количество указанного антагониста рецепторов эндотелина составляет примерно 1 мг/кг.

16. Способ по п. 1, в котором тадалафил или его фармацевтически приемлемую соль и амбризентан или его фармацевтически приемлемую соль вводят перорально.

17. Способ по п. 15, в котором указанный ингибитор тирозинкиназы вводят путем ингаляции.