Производные триазола, проявляющие антиагрегационную активность Российский патент 2022 года по МПК C07D249/04 C07D249/16 A61K31/4192 A61K31/4196 A61P7/02 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к химии и медицине, а именно к фармацевтической химии и фармакологии, и может быть использовано для создания новых лекарственных средств профилактики тромбоза и тромбоэмболических осложнений.

Предшествующий уровень техники

Известно, что в качестве антиагрегационных средств последнего поколения разрешены к клиническому применению препараты L-цистеинамид, N⁶-(аминоиминометил)-N²-(3-меркапто-1-оксопропил)-L-лизилглицил-L-α-аспартил-L-триптофил-L-пролил-, циклический(1-6)-дисульфид («Интегрилин», Glaxo Operations UK Limited, Великобритания), N-(бутилсульфонил)-4-[4-(пиперидил)бутокси]-L-фенилаланин гидрохлорид моногидрат (Тирофибан, «Аграстат», Correvio, Великобритания), F(ab')2 фрагменты мышиных моноклональных антител FRaMon против рецептора фибриногена тромбоцитов - ГП IIb-IIIа («Монафрам®», ЗАО «Фрамон», Россия) [см. Holmes L.E. A randomized trial assessing the impact of three different glycoprotein IIb/IIIа antagonists on glycoprotein IIb/IIIа platelet receptor inhibition and clinical endpoints in patients with acute coronary syndromes / L.E. Holmes, R. Gupta, S. Rajendran, J. Luu, J.K. French, C.P. Juergens // Cardiovasc. Ther. - 2016, N21. doi: 10.1111/1755-5922.12203.].

Однако несмотря на то, что данные соединения по результатам клинических исследований оказываются наиболее эффективными в условиях интервеционной кардиологии, применение их ограничено по причине высокой стоимости, развития аутоиммунных реакций [Patrono, С.Antiplatelet agents for the treatment and prevention of atherothrombosis / C.

Patrono, F. Andreotti, H. Amesen // European Heart Journal. - 2011. - Vol.32. -P. 2922-2932.].

Наиболее близким аналогом изобретения и препаратом сравнения является ацетилсалициловая кислота (2-ацетилоксибензойная кислота), которая длительно и успешно применяется в практической медицине и имеет доказанную эффективность в качестве средства профилактики и лечения тромбоза и тромбоэмболических осложнений [2018 Guidelines for the Early Management of Patients With Acute Ischemic Stroke: A Guideline for Healthcare Professionals From the American Heart Association/American Stroke Association. Stroke.2018;49:e138].

Недостатком прототипа является высокая частота аспиринорезистентности, нежелательные клинические явления в виде ульцерогенного и гемморагических эффектов [Patrono, С.Antiplatelet agents for the treatment and prevention of atherothrombosis / C. Patrono, F. Andreotti, H. Arnesen // European Heart Journal. - 2011. - Vol.32. - P. 2922-2932].

Раскрытие изобретения Задачей изобретения является расширение арсенала биологически активных веществ, проявляющих антиагрегационную активность.

Технический результат при использовании изобретения - синтез веществ, проявляющих антиагрегационную активность.

Сущность изобретения: производные триазола (Ia-b) общей формулы:

проявляющие антиагрегационную активность

Осуществление изобретения

Заявляемые соединения синтезируют следующим образом.

Пример 1. Синтез 1-[(4-н-октилоксифенил)метил]-1H-бензотриазола (Iа).

К раствору 0,20 г (0,88 ммоль) 4-[(1H-бензотриазол-1-ил)метил]фенола в 6 мл метилэтилкетона при 20°С в атмосфере аргона добавляют при интенсивном перемешивании 0,17 г (0,88 ммоль) н-октилбромида, а затем 0,58 г (1,77 ммоль) карбоната цезия. Реакционную смесь кипятят в инертной среде с обратным холодильником в течение 6 ч, а затем отфильтровывают от неорганического осадка. Растворитель удаляют в вакууме. Образовавшийся остаток белого цвета промывают горячим гексаном и высушивают на воздухе.

Выход 0,21 г (70%). т.пл. 65-67°С.R_f 0,69 (этанол-четыреххлористый углерод, 1:3).

Элементный анализ. Найдено, %: С 74,86; Н 8,10. C₂₁H₂₇N₃O. Вычислено, %: С 74,74; Н 8,07.

ИК спектр, ν, см^-1: 1254 (С-О-С, вал.), 1453, 1518, 1620 (аром., вал.) 2873 (С₈Н₁₇, вал.).

Спектры ЯМР ¹Н (CDCl₃), δ, м. д.: 0,87-0,90 (3Н, т, СН₃), 1,30-1,75 (12Н, м, 6СН₂), 3,95-3,97 (2Н, т, СН₂), 5,82 (2Н, с, СН₂), 6,84-6,85 (аром. 2Н, д, СН=), 7,28-7,30 (аром. 2Н, д, СН=), 7,40-7,51 (аром. 2Н, м, СН=), 8,06-8,10 (аром. 2Н, м, СН=).

Заявляемое вещество представляет собой белое твердое вещество, растворимое в ДМСО, ДМФА, СНСl₃ и ацетоне.

Пример 2. Синтез 1-[(4-н-гексадецилоксифенил)метил]-1H-1,2,4-триазола (Ib).

К раствору 0,25 г (1,42 ммоль) 4-[(1H-1,2,4-триазола-1-ил)метил]фенола в 10 мл метилэтилкетона при 20°С в атмосфере аргона добавляют 0,44 г (1,42 ммоль) н-гексадецилбромида при интенсивном перемешивании, а затем 0,93 г (2,86 ммоль) карбоната цезия. Реакционную смесь кипятят в инертной среде с обратным холодильником в течение 5 ч, а затем отфильтровывают от неорганического осадка. Растворитель удаляют в вакууме. Образовавшийся остаток белого цвета перекристаллизовывают из гексана и высушивают на воздухе.

Выход 0,40 г (71%). т.пл. 68-70°С (гексан). R_f 0,44 (этанол-четыреххлористый углерод, 1:7).

Элементный анализ. Найдено, %: С 75,28; Н 10,50. C₂₅H₄₁N₃O. Вычислено, %: С 75,14; Н 10,34.

ИК спектр (KBr), ν, см^-1: 1253 (С-О-С, вал.), 1450, 1463, 1515, 1615 (аром., вал.), 2848, 2917 (С₁₆Н₃₃, вал.).

Спектры ЯМР ¹Н (CDCl₃), δ, м. д.: 0,89-0,91 (3Н, т, СН₃), 1,31-1,74 (28Н, м, 14СН₂), 3,97-3,99 (2Н, т, СН₂), 5,78 (2Н, с, СН₂), 6,75-6,76 (аром. 2Н, д, СН=), 7,14-7,15 (аром. 2Н, д, СН=), 7,95 (аром. 1Н, с, СН=), 8,56 (аром. 1Н, с, СН=).

Заявляемое вещество представляет собой белое кристаллическое вещество, растворимое в ДМСО, ДМФА, CHCl₃ и ССl₄.

Пример 3. Антиагрегационная активность соединений I а, b.

Эксперименты в условиях in vitro выполнены на крови здоровых доноров-мужчин в возрасте 18-24 лет. Общее количество доноров составило 22 человека. Забор крови для исследования соединений в отношении системы гемостаза проводился из кубитальной вены с использованием систем вакуумного забора крови BD Vacutainer® (Becton Dickinson and Company, США). В качестве стабилизатора венозной крови использовался 3,8% раствор цитрата натрия в соотношении 9:1. Все тесты проводились на обогащенной и обедненной тромбоцитами плазмах. Образцы богатой тромбоцитами плазмы получали центрифугированием цитратной крови при 1000 об/мин в течение 10 минут, бестромбоцитарной плазмы - при 3000 об/мин в течение 20 минут. В работе использовалась центрифуга ОПН-3.02 (ОАО ТНК "ДАСТАН", Киргизия). Исследование влияния на агрегацию тромбоцитов проводили по методу Born (Born G.G.V.Nature (London).-1962. -V. 194.) на агрегометре "АТ-02" (НПФ "Медтех", Россия). Определение антиагрегационной активности соединения I и ацетилсалициловой кислоты проводили в конечной концентрации 10^-3 моль/л. В качестве индукторов агрегации использовали аденозиндифосфат (АДФ) в концентрации 20 мкг/мл и коллаген в концентрации 5 мг/мл производства "Технология-Стандарт" (Россия). Проводили оценку максимальной амплитуды агрегации, скорости агрегации, времени достижения максимальной амплитуды и дезагрегации в присутствии изучаемых соединений при агрегации тромбоцитов, индуцированной АДФ. При коллаген-индуцированной агрегации тромбоцитов оценивали латентный период, во время которого происходит активация фосфолипазы С (что приводит к образованию вторичных посредников, вследствие чего развивается секреция тромбоцитарных гранул и синтез тромбоксана А₂).

Определение острой токсичности заявляемых соединений и аспирина проведено на 200 белых мышах самцах в возрасте 2 месяцев со средней массой тела 20-21 г. при внутрибрюшинном способе введения. Животные прошли карантин в течение 14 дней в условиях отдельного бокса вивария кафедры биологической химии БГМУ. Температурный режим помещения вивария поддерживался от +18 до +22 С.Освещение вивария совмещенное (естественное и люминисцентное). Еженедельно в помещении вивария проводилась 20 мин. бактерицидная обработка стационарным настенным бактерицидным облучателем. Животные имели круглосуточный свободный доступ к поилкам, получали набор натуральных продуктов (овощи, зерно) и стандартную диету, представленную в виде экструдированного гранулированного корма для содержания лабораторных животных (мышей, крыс, хомяков) соответствующего Декларации о соответствии №РОСС RU. ПР 98, Д 00497 до 07.02.2016 г. и содержащего в своем составе пшеницу, ячмень, шрот соевый, муку рыбную, дрожжи, отруби, а также витамины и минеральные вещества, витаминно-минеральный комплекс, растительный жир, антиоксидант.

Исследования выполнялись в соответствии правилами лабораторной практики (GLP), со статьей 11 Федерального закона от 12 апреля 2010 г. №61-ФЗ «Об обращении лекарственных средств» и «Руководства по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (М., 2012).

При проведении исследований на белых беспородных мышах при внутрибрюшинном введении вещества исследовали в дозах 100-500 мг/кг с шагом в 50 мг/кг. Количество вводимого вещества рассчитывали по объему введенного раствора в зависимости от массы тела с учетом максимально допустимого количества жидкости. Контрольная (интактная) группа животных включена в эксперимент для проведения сравнительной оценки состояния и поведения особей в контрольной и опытных группах. Данная группа животных по окончании первых суток наблюдений исключалась из эксперимента. Наблюдение за опытными группами проводилось в течение 14 суток.

Результаты исследования обработаны с применением статистического пакета Statistica 10,0 (StatSoft Inc, США). Проверку на нормальность распределения фактических данных выполняли с помощью критерия Шапиро-Уилка. Дисперсионный анализ проводили с помощью критерия Краскела-Уоллиса. Критический уровень значимости р для статистических критериев принимали равным 0,05. Величину LD50 вычисляли методом пробит-анализа с использованием программы BioStat 5.9 (AnalystSoft Inc.).

Установлено (таблица 1), что введение исследуемых соединений в кювету агрегометра приводит к удлинению реакции высвобождения тромбоцитов (lag-периода) на 15,7% (р<0.05) для Iа и 10,3% (р<0.05) для Ib, снижению амплитуды агрегации тромбоцитов на 29,4% (р<0.05) для Iа и 23,5% (р<0.05) для Ib, скорости агрегации тромбоцитов на 13,6% (р<0.05) для Iа и 7,4% (р<0.05) для Ib и удлинению времени достижения максимальной агрегации на 25,7% (р<0.05) и 18,3% (р<0.05) соответственно для Iа и Ib по сравнению с контролем. При этом ацетилсалициловая кислота не влияет на реакцию высвобождения тромбоцитов, уступая соединению Iа по действию на уровень агрегации тромбоцитов более чем в 2,2 раза (р<0.05), показатели скорости агрегации тромбоцитов на 28,6% (р<0.05) и времени достижения максимума агрегации более чем в 2,4 раза (р<0.05). При этом ацетилсалициловая кислота уступает соединению Ib по действию на уровень агрегации тромбоцитов более чем в 1,7 раза (р<0.05), показатели скорости агрегации тромбоцитов на 59,4% (р<0.05) и времени достижения максимума агрегации более чем в 1,7 раза (р<0.05).

Пример 4. Изучение острой токсичности соединений I a, b при внутрибрюшинном введении мышам.

В результате исследования установлено, что заявляемые соединения согласно классификации химических веществ по параметрам острой токсичности И.В. Березовской и критерию токсичности при оценке опасности химических соединений по И.В. Саноцкому и И.П. Улановой, относятся к классу малотоксичных веществ (таблица 2).

Таким образом, заявляемые соединения являются малотоксичными и эффективнее аспирина ингибируют процессы активации и агрегации тромбоцитов.

Изобретение относится к новым производным триазола общей формулы:

.

Технический результат: получены новые соединения, обладающие антиагрегационной активностью, которые могут быть использованы для создания новых лекарственных средств для профилактики тромбоза и тромбоэмболических осложнений. 3 з.п. ф-лы, 2 табл., 4 пр.

1. Производные триазола общей формулы:

2. Соединение по п. 1, представляющее собой 1-[(4-н-октилоксифенил)метил]-1H-бензотриазол.

3. Соединение по п. 1, представляющее собой 1-[(4-н-гексадецилоксифенил)метил]-1Н-1,2,4-триазол.

4. Производные по п. 1, проявляющие антиагрегационную активность.