Состав искусственной кишечной среды для исследования микробиоты слепой кишки курицы Российский патент 2022 года по МПК C12N1/20 G09B23/36 

Изобретение относится к питательным средам и моделированию биологических систем, а именно, к приготовлению питательных сред для моделирования состояния микробиоты в искусственных кишечных системах, в частности, исследования микробиоты слепой кишки курицы.

Известно устройство для автоматического моделирования желудочно-кишечного тракта в течение длительного времени, с изменяющимися условиями в процессе переваривания (см. CN209894792, G01N33/00, публ. 26.04.2019).

Известны искусственные модели кишечника, позволяющие воссоздавать условия для исследования процессов протекающих в кишечнике in vitro (см. CN108469395, G01N5/04, опубл.07.03.2018) описан способ моделирования переваривания риса.

Описано приспособление для моделирования пищеварения в ротовой полости (см. CN103680282, G09B25/00, опубл. 26.11.2013).

Большинство известных способов моделирования кишечника относится к моделям человека, например (см.CN210777450, G09B23/28, опубл. 16.06.2020), (см.MX2018004845 G09B23/00, 21.10. 2019).

Известны и модели пищеварительных систем животных, (см.CN105702146 G09B23/36, опубл. 22.06.2016) описывает динамическую систему имитации желудка и двенадцатиперстной кишки мыши. В патенте (CN104893957, C12M1/00, опубл. 09.09. 2015) описывается устройство для симуляции рубца жвачных. Бионическая пищеварительная система крысы описана в патенте (см.CN204423786, G09B23/36, опубл. 24.06.2015). Известна и система симулирующая пищеварение цыпленка (см. CN 101246650A, G09B23/36, 22.08.2008).

Известно, что микроорганизмы, колонизирующие кишечник, оказывают значительное влияние на процессы пищеварения. О масштабе влияния микроорганизмов можно судить по общему количество микробных клеток в кишечнике, которое превосходит число собственных клеток человеческого тела (Sender R, Fuchs S, Milo R (2016) Revised Estimates for the Number of Human and Bacteria Cells in the Body. PLoS Biol 14(8): e1002533. https://doi.org/10.1371/journal.pbio.1002533). Микробиота кишечника крупного рогатого скота оказывает влияние на качество продуцируемого молока (R. John Wallace1, Goor Sasson, Philip C. Garnsworthy, A heritable subset of the core rumen microbiome dictates dairy cow productivity and emissions, Science Advances 03 Jul 2019: Vol. 5, no. 7, DOI: 10.1126/sciadv.aav8391).

У курицы пищеварительная система по своей структуре и функции приспособлена к приему и перевариванию корма растительного происхождения. Большая роль в этом отводится слепым отросткам. Большинство исследований процессов, связанных с динамикой микробиоты в ЖКТ сельскохозяйственной птицы, сосредоточено на слепой кишке. У птиц слепая кишка является важным отделом, играющим особую роль не только в пищеварении, но и иммунных реакциях, поддержании гомеостаза. Микробиота слепой кишки наиболее многочисленна и разнообразна по сравнению с другими отделами пищеварительной системы. Генетическая идентификация показала гораздо более высокую распространенность филотипов с очень низким сходством последовательностей с известными культуральными изолятами. Слепые отростки являются основным местом разрушения клетчатки и образования летучих жирных кислот, здесь протекают различные процессы, оказывающие опосредованное влияние на здоровье и продуктивность животных.

Известные составы и среды, применяемые в искусственных кишечных системах, не обеспечивают необходимых условий для роста и проявления биологической активности микробиоты слепой кишки курицы, и не учитывают её влияние. Так, известна среда Viande levure glucose broth, включающая в состав Триптон 10 г/л, Дрожжевой экстракт 5 г/л, Экстракт мяса 2,4 г/л, Цистеина гидрохлорид 0,6 г/л, Декстроза 2,5 г/л, Натрия хлорид 5 г/л, и ее модификации, с варьируемым количеством исходных компонентов. (Crippen TL, Sheffield CL, Andrews K, Bongaerts R, Nisbet DJ. Bacterial Concentration and Diversity within Repetitive Aliquots Collected from Replicate Continuous-Flow Bioreactor Cultures. Open Microbiol J. 2008;2:60-65. doi:10.2174/1874285800802010060). Данная среда традиционно применяется для выращивания строгих анаэробов, она является очень питательной: в неё входит богатый витаминами и минеральными веществами дрожжевой экстракт, мясной экстракт, также богатый биологически активными веществами и минеральными компонентами, более того, в среде присутствует самый легкодоступный для всех бактерий сахар – глюкоза в высокой концентрации. На подобной среде наблюдается активный рост всех бактерий, так как она содержит очень широкий спектр питательных веществ и сложных соединений. Однако этот состав не соответствует естественному; подобные соединения, даже попав в просвет кишечника птицы, подверглись бы ферментативному расщеплению и всасыванию, моносахариды поглощаются практически полностью в кишечнике, в его тонком отделе, и не могли бы стать частью среды цекального отдела (Scanes, Colin G., ed. Sturkie's avian physiology. 6th Edition Elsevier, 2014. 1056 p.), поэтому их не может быть в составе питательной среды, имитирующей содержимое слепой кишки.

Статья (Crippen TL, Sheffield CL, Andrews K, Bongaerts R, Nisbet DJ. Bacterial Concentration and Diversity within Repetitive Aliquots Collected from Replicate Continuous-Flow Bioreactor Cultures. Open Microbiol J. 2008;2:60-65. doi:10.2174/1874285800802010060) ссылается на статью (Nisbet DJ, Corrier DE, Scanlan CM, Hollister AG, Beier RC, De-Loach JR. Effect of a defined continuous flow derived bacterial culture and dietary lactose on Salmonella typhimurium colonization in broiler chickens. Avian Dis 1993; 37: 1017-25.), авторы которой, в свою очередь, ссылаются на другую свою статью (Nisbet, D. J. , D . E . Corrier, an d J . R . DeLoach, Effect mixed cecal microflora maintained in continuous culture, an dietary lactose on Salmonella typhimurium colonization in broiler chicks. Avian Dis. 1993; 37:528-535.), где впервые используют Viande Levure glucose media, не приводя никаких обоснований выбору этой среды для моделирования условий цекального отдела кишечника курицы.

Предлагаемое изобретение описывает среду, способную поддерживать рост микробиоты в системах моделирования слепой кишки курицы.

Задачей изобретения является создание питательной среды, позволяющей в системах искусственного кишечника курицы моделировать микробиотическую компоненту пищеварения.

Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что состав искусственной кишечной среды для исследования микробиоты слепой кишки курицы в качестве основы содержит изолированный соевый белок, крахмал, масло подсолнечное нерафинированное и стимулирующие добавки: сульфат магния, хлорид натрия, гидроортофосфат калия, сульфат марганца, сульфат железа​(II), Tween 80, г/л:

Изолированный соевый белок - 10–20 г.

Крахмал - 0.5– 2.5 г.

Масло подсолнечное нерафинированное - 10–30 мл.

Сульфат магния (MgSO₄) - 0.25 – 1.5 г.

Хлорид натрия (NaCl) - 3 – 6 г.

Гидроортофосфат калия (K₂HPO₄) - 0.25 – 1.5 г.

Сульфат марганца (MnSO₄) - 0.05 – 0.06 г.

Сульфат железа ​(II) (FeSO₄)- 0.05– 0.06 г.

Tween 80 – 0.5-1.5 мл.

Дистиллированная вода до 1 л.

Технический результат заключается в создании питательной среды, позволяющей в системах искусственного кишечника курицы моделировать микробиотическую компоненту пищеварения.

Характеристика компонентов

Изолированный соевый белок с массовой долей белка 85+7 % (на абсолютно сухое вещество), пищевого качества.

Крахмал – пищевого качества.

Масло подсолнечное нерафинированное – пищевого качества.

Сульфат магния - реактив (сернокислый магний безводный), представляет собой белый кристаллический порошок, растворимый в воде; качества «химически чистый» (Purissimum). Формула MgSO₄.

Хлорид натрия - реактив (хлористый натрий), представляет собой бесцветные кристаллы или кристаллический порошок; легко растворим в воде; качества «химически чистый» (Purissimum). Формула NaCl.

Гидроортофосфат калия - реактив (калий гидроортофосфат безводный, калий фосфорнокислый двузамещенный) представляет собой порошок; растворим в воде; качества «химически чистый» (Purissimum). Формула K₂HPO₄.

Сульфат марганца - реактив (сернокислый марганец) - кристаллический порошок, хорошо растворяется в воде и не растворяется в спирте, качества «химически чистый» (Purissimum). Формула MnSO₄.

Сульфат железа (II) - реактив (железо(II) сернокислое) - безводное вещество бесцветное, непрозрачное, очень гигроскопичное, качества «химически чистый» (Purissimum). Формула FeSO₄.

Tween 80 — полиоксиэтилен (20) сорбитан моноолеат — неионное поверхностно-активное вещество, представитель группы полисорбатов. Маслянистая жидкость, по основной технологической функции эмульгатор и диспергирующий агент. Качество по ГОСТ 32770–2014.

Дистиллированная вода по ГОСТ 6709-72. Формула Н₂О.

Способ изготовления питательной основы предлагаемой среды для поддержания микробиоты в искусственных моделях кишечника заключается в следующем: необходимое количество подсолнечного масла переливают в лабораторный стакан подходящего объема (так, чтобы масло занимало в нем примерно 1/10 объема), добавляют Tween 80 и нагревают до 80°С. Так же необходимо нагреть достаточный для приготовления среды объем воды. После нагревания масло с Tween 80 тщательно взбивают до получения однородной эмульсии. После чего следует небольшими объемами вливать воду, не прекращая взбивать получающийся раствор. Когда лабораторный стакан наполнится, перелить его содержимое в колбу, внести остальные элементы среды, долить оставшееся количество воды, перемешать до гомогенного состояния.

Автоклавировать среду при температуре 121°С в течение 20 минут.

Получившуюся среду допустимо хранить в холодильнике в течение нескольких дней. При расслоении среду необходимо гомогенизировать на вортексе с соответствующей платформой для лабораторных колб. При необходимости довести рН среды до 7-7.5, применяя 0.1Н HCl или 0.1H NaOH

Пример 1

По указанной методике готовили среду, содержащую на 1 л: изолированный соевый белок - 20 г, крахмал водорастворимый – 0.5 г, масло подсолнечное нерафинированное - 30 мл, Tween 80 – 1.5 мл, MgSO₄ – 0.25 г, NaCl - 6 г, K₂HPO₄ – 0.25 г, MnSO₄ – 0.05 г, FeSO₄ – 0.05 г, дистиллированная вода - до 1 л.

В колбу, содержащую 100 мл среды, вносили 200 мкг размороженного стартера из содержимого слепой кишки кур, и инкубировали в анаэробной камере, в атмосфере 94% N₂, 5% CO₂, 1% O₂ при температуре 42°С в течение 24 часов.

Количество микроорганизмов, выросших на искусственной кишечной среде, представлено в таблице №1.

Таблица №1, КОЕ/мл

Штаммы Нативное содержимое кишечника Количество в искусственной среде Lactobacillus 3,3±0,5·10⁸ 2.0±0.5·10⁸ Bifidobacterium 1·10⁷ 1·10⁷ Enterococcus 1,5±0,4·10⁶ 3.8±0.4·10⁷ E.coli 5,0±1,1·10⁷ 1.4±0.7·10⁹ Citrobacter, Enterobacter и др. 4,3±1,2·10⁶ 1,4±0,3·10⁸

Пример 2

По указанной методике готовили среду, содержащую на 1 л: изолированный соевый белок - 20 г, крахмал водорастворимый – 0.5 г, масло подсолнечное нерафинированное - 30 мл, Tween 80 – 1.5 мл, MgSO₄ – 0.5 г, NaCl - 5 г, K₂HPO₄ – 0.5 г, MnSO₄ – 0.06 г, FeSO₄ – 0.05 г, дистиллированная вода - до 1 л.

В колбу, содержащую 100 мл среды, вносили 200 мкг размороженного стартера из содержимого слепой кишки кур, и инкубировали в анаэробной камере, в атмосфере 94% N₂, 5% CO₂, 1% O₂ при температуре 42°С в течение 24 часов.

Количество микроорганизмов, выросших на искусственной кишечной среде, представлено в таблице №2.

Таблица №2, КОЕ/мл

Штаммы Нативное содержимое кишечника Количество в искусственной среде Lactobacillus 3,3±0,5·10⁸ 2.2±0.6·10⁸ Bifidobacterium 1·10⁷ 1·10⁷ Enterococcus 1,5±0,4·10⁶ 4.0±0.9·10⁷ E.coli 5,0±1,1·10⁷ 1.5±0.6·10⁹ Citrobacter, Enterobacter и др. 4,3±1,2·10⁶ 0.8±0.3·10⁸

Пример 3

По указанной методике готовили среду, содержащую на 1 л: изолированный соевый белок - 20 г, крахмал водорастворимый – 0.5 г, масло подсолнечное нерафинированное - 30 мл, Tween 80 – 1.5 мл, MgSO₄ – 1.5 г, NaCl - 3 г, K₂HPO₄ – 1.5 г, MnSO₄ – 0.05 г, FeSO₄ – 0.06 г, дистиллированная вода - до 1 л.

В колбу, содержащую 100мл среды, вносили 200мкг размороженного стартера из содержимого слепой кишки кур, и инкубировали в анаэробной камере, в атмосфере 94% N₂, 5% CO₂, 1% O₂ при температуре 42°С в течение 24 часов.

Количество микроорганизмов, выросших на искусственной кишечной среде, представлено в таблице №3.

Таблица №3, КОЕ/мл

Штаммы Нативное содержимое кишечника Количество в искусственной среде Lactobacillus 3,3±0,5·10⁸ 1.9±0.5·10⁸ Bifidobacterium 1·10⁷ 1·10⁷ Enterococcus 1,5±0,4·10⁶ 4.4±0.8·10⁷ E.coli 5,0±1,1·10⁷ 2.3±0.4·10⁹ Citrobacter, Enterobacter и др. 4,3±1,2·10⁶ 1.1±0.4·10⁸

Пример 4

По указанной методике готовили среду, содержащую на 1 л: изолированный соевый белок - 20 г, крахмал водорастворимый – 0.5г, масло подсолнечное нерафинированное - 30 мл, Tween 80 – 1.5 мл, MgSO₄ - 0,5 г, NaCl - 5г, K₂HPO₄ – 0.5 г, MnSO₄ – 0.06г, FeSO₄ – 0.05 г, дистиллированная вода - до 1 л.

В колбу, содержащую 100 мл среды, вносили 200 мкг размороженного стартера из содержимого слепой кишки кур, и инкубировали в анаэробной камере, в атмосфере 94% N₂, 5% CO₂, 1% O₂ при температуре 42°С в течение 24 часов.

Количество микроорганизмов, выросших на искусственной кишечной среде, представлено в таблице №4.

Таблица №4, КОЕ/мл

Штаммы Нативное содержимое кишечника Количество в искусственной среде Lactobacillus 3,3±0,5·10⁸ 1.6±0.4·10⁸ Bifidobacterium 1·10⁷ 1·10⁸ Enterococcus 1,5±0,4·10⁶ 9.7±0.4·10⁶ E.coli 5,0±1,1·10⁷ 3.3±0.6·10⁷ Citrobacter, Enterobacter и др. 4,3±1,2·10⁶ 1.8±0.5·10⁶

Пример 5

По указанной методике готовили среду, содержащую на 1 л: изолированный соевый белок - 10 г, крахмал водорастворимый – 0.5 г, масло подсолнечное нерафинированное - 30 мл, Tween 80 – 1.5 мл, MgSO₄ – 0.5 г, NaCl - 5 г, K₂HPO₄ – 0.5 г, MnSO₄ – 0.05 г, FeSO₄ – 0.06 г, дистиллированная вода - до 1 л.

В колбу, содержащую 100 мл среды, вносили 200 мкг размороженного стартера из содержимого слепой кишки кур, и инкубировали в анаэробной камере, в атмосфере 94% N₂, 5% CO₂, 1% O₂ при температуре 42°С в течение 24 часов.

Количество микроорганизмов, выросших на искусственной кишечной среде, представлено в таблице №5.

Таблица №5, КОЕ/мл

Штаммы Нативное содержимое кишечника Количество в искусственной среде Lactobacillus 3,3±0,5·10⁸ 0.6±0.3·10⁸ Bifidobacterium 1·10⁷ 1·10⁸ Enterococcus 1,5±0,4·10⁶ 8.2±0.5·10⁶ E.coli 5,0±1,1·10⁷ 2.2±0,3·10⁷ Citrobacter, Enterobacter и др. 4,3±1,2·10⁶ 3.0±0.2·10⁶

Пример 6

По указанной методике готовили среду, содержащую на 1 л: изолированный соевый белок - 20 г, крахмал водорастворимый – 2.5 г, масло подсолнечное нерафинированное - 30 мл, Tween 80 – 1.5 мл, MgSO₄ – 0.5 г, NaCl - 5 г, K₂HPO₄ – 0.5 г, MnSO₄ – 0.05 г, FeSO₄ – 0.05 г, дистиллированная вода - до 1 л.

В колбу, содержащую 100 мл среды, вносили 200 мкг размороженного стартера из содержимого слепой кишки кур, и инкубировали в анаэробной камере, в атмосфере 94% N₂, 5% CO₂, 1% O₂ при температуре 42°С в течение 24 часов.

Количество микроорганизмов, выросших на искусственной кишечной среде, представлено в таблице №6.

Таблица №6, КОЕ/мл

Штаммы Нативное содержимое кишечника Количество в искусственной среде Lactobacillus 3,3±0,5·10⁸ 1.6±0.6·10⁸ Bifidobacterium 1·10⁷ 1·10⁸ Enterococcus 1,5±0,4·10⁶ 9.2±0.5·10⁶ E.coli 5,0±1,1·10⁷ 2.8±0.9·10⁷ Citrobacter, Enterobacter и др. 4,3±1,2·10⁶ 1.1±0.2·10⁶

Пример 7

По указанной методике готовили среду, содержащую на 1 л: изолированный соевый белок - 20 г, крахмал водорастворимый – 0.5 г, масло подсолнечное нерафинированное - 10 мл, Tween 80 – 0.5 мл, MgSO₄ - 0,5 г, NaCl - 5 г, K₂HPO₄ - 0,5 г, MnSO₄ – 0.05 г, FeSO₄ – 0.05 г, дистиллированная вода - до 1 л.

В колбу, содержащую 100мл среды, вносили 200 мкг размороженного стартера из содержимого слепой кишки кур, и инкубировали в анаэробной камере, в атмосфере 94% N₂, 5% CO₂, 1% O₂ при температуре 42°С в течение 24 часов.

Количество микроорганизмов, выросших на искусственной кишечной среде, представлено в таблице №7.

Таблица №7, КОЕ/мл

Штаммы Нативное содержимое кишечника Количество в искусственной среде Lactobacillus 3,3±0,5·10⁸ 0.8±0.4·10⁸ Bifidobacterium 1·10⁷ 1·10⁸ Enterococcus 1,5±0,4·10⁶ 11.5±0.7·10⁶ E.coli 5,0±1,1·10⁷ 2.4±0.2·10⁷ Citrobacter, Enterobacter и др. 4,3±1,2·10⁶ 2.1±0.3·10⁶

В указанных диапазонах концентраций компонентов среды наблюдается устойчивый рост микроорганизмов, колонизирующих кишечник кур. Развитие микроорганизмов на среде очень близко к нативному содержимому слепой кишки. Таким образом, состав среды, действительно, близок по составу к содержимому слепой кишки, и полученные с использованием такой среды результаты можно экстраполировать на живых птиц. Разработанная среда подходит для имитации процессов, происходящих в слепой кишке птицы, с высокой степенью последующей экстраполяции на живой организм. В таблице №8 приведены результаты испытаний.

Таблица №8

Нативное содержимое кишечника 1 2 3 4 5 6 7 Viande Levure glucose media Изолированный соевый белок, г Количество аминокислот в исследуемых образцах содержимого слепой кишки
2 20 20 20 20 10 20 20 Белково -пептидные компоненты
и аминокислоты
18 Крахмал, г Количество сахаров в исследуемых образцах содержимого слепой кишки
0,4 г/л 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 2,5 0,5 Декстроза
2,5 Масло подсолнечное нерафинированное, мл Количество жира в исследуемых образцах содержимого слепой кишки
39,8 30 30 30 30 30 30 10 - Tween 80, мл - 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 1,5 0,5 - MgSO₄, г - 0,25 0,5 1,5 0,5 0,5 0,5 0,5 - NaCl, г - 6 5 3 5 5 5 5 5 K₂HPO₄, г - 0,25 0,5 1,5 0,5 0,5 0,5 0,5 - MnSO₄, г - 0,05 0,06 0,05 0,06 0,05 0,05 0,05 - FeSO₄, г - 0,05 0,05 0,06 0,05 0,06 0,05 0,05 - Результаты исследования Lactobacillus 3,3±0,5·10⁸ 2.0±0.5·10⁸ 2.2±0.6·10⁸ 1.9±0.5·10⁸ 1.6±0.4·10⁸ 0.6±0.3·10⁸ 1.6±0.6·10⁸ 0.8±0.4·10⁸ - Bifidobacterium 1·10⁷ 1·10⁷ 1·10⁷ 1·10⁷ 1·10⁷ 1·10⁸ 1·10⁸ 1·10⁸ - Enterococcus 1,5±0,4·10⁶ 3.8±0.4·10⁷ 4.0±0.9·10⁷ 4.4±0.8·10⁷ 9.7±0.4·10⁶ 8.2±0.5·10⁶ 9.2±0.5·10⁶ 11.5±0.7·10⁶ 3.17·10⁷ E.coli 5,0±1,1·10⁷ 1.4±0.7·10⁹ 1.5±0.6·10⁹ 2.3±0.4·10⁹ 3.3±0.6·10⁷ 2.2±0,3·10⁷ 2.8±0.9·10⁷ 2.4±0.2·10⁷ Общее количество 7,2·10⁷ Citrobacter, Enterobacter и др. 4,3±1,2·10⁶ 1,4±0,3·10⁸ 0.8±0.3·10⁸ 1.1±0.4·10⁸ 1.8±0.5·10⁶ 3.0±0.2·10⁶ 1.1±0.2·10⁶ 2.1±0.3·10⁶

Список источников, цитированных в патентном описании:

1. CN108469395 (Zhejiang Gongshang University) 2018-03-07

2. CN103680282 (Nanchang University) 2013-11-26

3. CN209894792 (Hefei Polytechnic University) 2019-04-26

4. CN210777450 (桑喜成) 2020-06-16

5. MX2018004845 (Centro De Investig Y Asistencia En Tecnologia Y Diseno Del Estado De Jalisco A C) 2019-10-21

6. Crippen TL, Sheffield CL, Andrews K, Bongaerts R, Nisbet DJ. Bacterial Concentration and Diversity within Repetitive Aliquots Collected from Replicate Continuous-Flow Bioreactor Cultures. Open Microbiol J. 2008;2:60-65. doi.org/10.2174/1874285800802010060

7. CN105702146 (陈晓东) 2015-12-31

8. CN104893957 (Institute of Animal Science of CAAS, Hunan Agricultural University) 2015-09-09

9. CN204423786 (Nantong Donggainian New Material co Ltd) 2015-06-24

10. CN 101246650A (Institute of Animal Science of CAAS) 2008-02-22

11. R. John Wallace1, Goor Sasson, Philip C. Garnsworthy, A heritable subset of the core rumen microbiome dictates dairy cow productivity and emissions, Science Advances 03 Jul 2019: Vol. 5, no. 7, doi.org/10.1126/sciadv.aav8391

12. Sender R, Fuchs S, Milo R (2016) Revised Estimates for the Number of Human and Bacteria Cells in the Body. PLoS Biol 14(8): e1002533. doi.org/10.1371/journal.pbio.1002533

13. Scanes, Colin G., ed. Sturkie's avian physiology. 6th Edition Elsevier, 2014. 1056 p.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен состав искусственной кишечной среды для исследования микробиоты слепой кишки курицы, включающий изолированный соевый белок, крахмал, масло подсолнечное нерафинированное и стимулирующие добавки: сульфат магния, хлорид натрия, гидроортофосфат калия, сульфат марганца, сульфат железа (II), Tween 80 в определенной пропорции. Изобретение обеспечивает расширение арсенала питательных сред, используемых при моделировании биологических систем животных. 8 табл., 7 пр.

Состав искусственной кишечной среды для исследования микробиоты слепой кишки курицы, содержащий в качестве основы изолированный соевый белок, крахмал, масло подсолнечное нерафинированное и стимулирующие добавки: сульфат магния (MgSO₄), хлорид натрия (NaCl), гидроортофосфат калия (K₂HPO₄), сульфат марганца (MnSO₄), сульфат железа (II) (FeSO₄), Tween 80 при следующем соотношении компонентов, г/л:

Изолированный соевый белок 10–20 г Крахмал 0.5–2.5 г Масло подсолнечное нерафинированное 10–30 мл Сульфат магния (MgSO₄) 0.25–1.5 г Хлорид натрия (NaCl) 3–6 г Гидроортофосфат калия (K₂HPO₄) 0.25–1.5 г Сульфат марганца (MnSO₄) 0.05–0.06 г Сульфат железа ​(II) (FeSO₄) 0.05–0.06 г Tween 80 0.5–1.5 мл Дистиллированная вода до 1 л