Способ получения подвойного материала Л-2 в условиях in vitro Российский патент 2022 года по МПК A01H4/00 

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к биотехнологии, и может быть использовано в питомниководстве для массового производства оздоровленного посадочного материала плодовых (косточковых) культур, в частности культуры Л-2.

Изобретение представляет собой способ получения оптимизированной питательной среды для подвойного материала Л-2 в условииях in vitro., при котором черенкование пробирочных растений и высадку одноузловых черенков на агаризованную питательную среду, содержащую макро - и микроэлементы и витамины на основе прописи питательной среды, Fe-хелат, агар-агар, сахарозу, при этом в питательную среду добавляют высокую концентрацию солей (Хелат - Fe 50 мг/л и Ca(NO3)2 1000 мг/л) и для растительной активности растения пересаживают в питательную среду Мурасиге Скуга с содержанием 1,7 мг 6 БАП и куда добавляют в качестве стимулятора роста кристаллогидрат Ca(NO3)2*4H2O 220 мг/л., для растительной активности растения при следующем соотношении компонентов, мг/л нитрат аммония - 825 мг/л, нитрат калия - 950 мг/л, сульфат магния - 185 мг/л, гидрфосфат калия - 85 мг/л, борная кислота - 6,2 мг/л, сульффат марганца - 22,3 мг/л, хлорид кобальта - 0,025 мг/л, сульфат меди - 0,025 мг/л, сульфат цинка - 8,6 мг/л, молибдат натрия - 0,25 мг/л, раствор хелатного железа (сульфат железа - 5,6 мг/л, динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты - 37,3 мг/л), иодид калия - 0,83 мг/л, сахароза - 15 мг/л, агар - 8 мг/л. Пересадку проводят через 3 недели. При размножении особое внимание уделяют стекловидности или сверховодненности тканей, при этом оптимальные условия культивирования Л-2 являются: температура 22-26 градусов, освещенность 2500-5000 лк, при 16-ти часовом фотопериоде.

Наиболее близким техническим решением из известных является способ получения оздоровленных цитрусовых растений (в практике плодоводства известно применение БАВ на основе янтарной кислоты для повышения продуктивности и качества плодов черешни, вишни и сахарной свеклы. Л.А. Бадовская, Н.И. Ненько и др. (1997) успешно применяли препарат «Универсальный», состоящий из смеси янтарной кислоты, фумаровой кислот, малеиновой, и 2(5Н) - фуранона (содержание янтарной кислоты не менее 85%), посредством листовой обработки. Однако этот способ имеет следующие недостатки. Процесс приживаемости высаженных эксплантов желает оставлять лучшее - только 1/20 часть (т.е. 5%) приживаются. Приживаемость таких мелких структур также неудовлетворительна. Кроме того, все полученные растения требуют обязательного тестирования, так как до этой процедуры их фитосанитарный статус неизвестен.

Задача изобретения заключается в оптимизации питательной среды для подвойного материала Л-2 в условииях in vitro для массового производства оздоровленного посадочного материала плодовых (косточковых) культур.

Поставленная задача решается следующим образом: первый этап считается завершенным после получения небольшого конгламерата побегов длиной 0,5-1,5 см. Для увеличения коэффициента размножения в первых пассажах можно не разделять на отдельные единицы, а переносить на свежую питательную среду целиком. При использовании этого приема величина коэффициента размножения резко возрастает и может достигать 40-60 за пассаж. Полученные побеги пересаживают на питательную среду Мурасиге Скуга с содержанием 1,7 мг 6 БАП и куда добавляют в качестве стимулятора роста кристаллогидрат Ca(NO3)2*4H2O 220 мг/л, при следующем соотношении компонентов, мг/л нитрат аммония - 825 мг/л, нитрат калия - 950 мг/л, сульфат магния - 185 мг/л, гидрфосфат калия - 85 мг/л, борная кислота - 6,2 мг/л, сульффат марганца - 22,3 мг/л, хлорид кобальта - 0,025 мг/л, сульфат меди - 0,025 мг/л, сульфат цинка - 8,6 мг/л, молибдат натрия - 0,25 мг/л, раствор хелатного железа (сульфат железа - 5,6 мг/л, динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты - 37,3 мг/л), иодид калия - 0,83 мг/л, сахароза - 15 мг/л, агар - 8 мг/л. Пересадку проводят через 3 недели. При размножении особое внимание уделяют стекловидности или сверховодненности тканей, что можно определить по характерному блеску культур. Такие культуры выбраковываются, а условия культивирования (содержание агара, цитокининов, соотношение NH4, NO3, колебания температуры) корректируются. Оптимальные условия культивирования Л-2 являются: температура 22-26 градусов, освещенность 2000-5000 лк, при 16-ти часовом фотопериоде.

Сравнительный анализ питательных сред:

1. Обычная питательная среда (Мурасига и Скуга 1962 г.)

2. Модифицированная Мурасига и Скуга среда во Всероссийском научно-исследовательском институте генетики и селекции плодовых растений им. И.В. Мичурина

3. Предлагаемая питательная модифицированная среда

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения оптимизированной питательной среды для подвойного материала (Л-2) в условиях in vitro, при котором сначала происходит черенкование пробирочных растений и высадка одноузловых черенков на агаризованную питательную среду, содержащую макро- и микроэлементы и витамины на основе прописи питательной среды Мурасиге и Скуга. Полученные побеги пересаживают на питательную среду Мурасиге Скуга с содержанием 1,7 мг/л 6 БАП, куда добавляют в качестве стимулятора роста кристаллогидрат Ca(NO₃)₂*4H₂O 220 мг/л при следующем соотношении компонентов, мг/л: нитрат аммония 825 мг/л, нитрат калия 950 мг/л, сульфат магния 185 мг/л, гидрфосфат калия 85 мг/л, борная кислота 6,2 мг/л, сульфат марганца 22,3 мг/л, хлорид кобальта 0,025 мг/л, сульфат меди 0,025 мг/л, сульфат цинка 8,6 мг/л, молибдат натрия 0,25 мг/л, раствор хелатного железа (сульфат железа 5,6 мг/л, динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты 37,3 мг/л), иодид калия 0,83 мг/л, сахароза 15 мг/л, агар 8 мг/л, пересадку проводят через 3 недели, при размножении особое внимание уделяют стекловидности или сверховодненности тканей, при этом оптимальными условиями культивирования Л-2 являются: температура 22-26 градусов, освещенность 2500-5000 лк при 16-часовом фотопериоде. Изобретение позволяет повысить выход растений до 70%. 3 табл.

Способ получения подвойного материала Л-2 в условиях in vitro, включающий черенкование пробирочных растений и высадку одноузловых черенков на агаризованную питательную среду, содержащую макро- и микроэлементы и витамины на основе прописи питательной среды Мурасиге и Скуга, отличающийся тем, что полученные побеги пересаживают на питательную среду Мурасиге Скуга с содержанием 1,7 мг 6 БАП, куда добавляют в качестве стимулятора роста кристаллогидрат Ca(NO₃)₂*4H₂O 220 мг/л при следующем соотношении компонентов, мг/л: нитрат аммония 825 мг/л, нитрат калия 950 мг/л, сульфат магния 185 мг/л, гидрфосфат калия 85 мг/л, борная кислота 6,2 мг/л, сульфат марганца 22,3 мг/л, хлорид кобальта 0,025 мг/л, сульфат меди 0,025 мг/л, сульфат цинка 8,6 мг/л, молибдат натрия 0,25 мг/л, раствор хелатного железа (сульфат железа 5,6 мг/л, динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты 37,3 мг/л), иодид калия 0,83 мг/л, сахароза 15 мг/л, агар 8 мг/л, пересадку проводят через 3 недели, при этом оптимальными условиями культивирования Л-2 являются температура 22-26 градусов, освещенность 2500-5000 лк при 16-часовом фотопериоде.