Этил (3R*,3aR*,6aR*)-6-бензил-4-(дицианометилен)-5-оксо-2,3,6a-трифенилгексагидро-3aH-пирроло[3,2-d]изоксазол-3a-карбоксилат, обладающий противомикробной активностью Российский патент 2022 года по МПК C07D498/04 A61P31/04 

Изобретение относится к области органической химии, а именно к новому индивидуальному соединению - этил (3R*,3aR*,6aR*)-6-бензил-4-(дицианометилен)-5-оксо-2,3,6а-трифенилгексагидро-3aH-пирроло[3,2-d]изоксазол-3а-карбоксилату (1) формулы

обладающему противомикробной активностью, который может быть использован в качестве исходного продукта для синтеза новых гетероциклических соединений и в фармакологии.

Известны структурные аналоги заявляемого соединения - этил (3R*,3aR*,6aR*)-3-арил-4,5-диоксо-2,6а-дифенилгексагидро-3aH-пирроло[3,2-d]изоксазол-3а-карбоксилаты (2) [Diastereoselective 1,3-Dipolar Cycloaddition of Nitrones to 1H-Pyrrole-2,3-diones. Synthesis of pyrrolo[3,2-d]isoxazoles / A. A. Moroz et al. // Russian Journal of Organic Chemistry. - 2018. - V. 54. - №. 5. - P. 780-784] общей формулы

R¹=Me, Et; R²=Ph, COOMe; R³=Bn, Ph₂C=N, C₆H₄OMe-4, C₆H₄Me-4, C₆H₄Br-4; Ar=Ph, C₆H4Br-4, C₆H₄Cl-4, C₆H₄OMe-4.

Эталоном сравнения противомикробной эффективности выбран антибактериальный препарат диоксидин [Падейская Е.Н. Антибактериальный препарат диоксидин: особенности биологического действия и значение в терапии различных форм гнойной инфекции // Инфекции и антимикробная терапия. - 2001. - №. 5. - С.105-155], который широко применяется в лечебной практике и является аналогом по действию.

Задачей изобретения является изыскание новых соединений, обладающих противомикробной активностью, что позволит расширить ассортимент потенциальных противомикробных препаратов.

Поставленная задача решается получением этил (3R*,3aR*,6aR*)-6-бензил-4-(дицианометилен)-5-оксо-2,3,6а-трифенилгексагидро-3aH-пирроло[3,2-d]изоксазол-3а-карбоксилата (1), который обладает противомикробной активностью.

Заявляемое соединение (1) синтезируют путем взаимодействия этил 1-бензил-4-(дицианометилен)-5-оксо-2-фенил-4,5-дигидро-1H-пиррол-3-карбоксилата (3) с нитроном (4) в соотношении 1:1 в среде растворителя с последующим выделением целевого продукта, по следующей схеме:

Процесс ведут при кипячении, а в качестве растворителя используют безводный ацетонитрил либо другие инертные апротонные растворители.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Получение этил (3R*,3aR*,6aR*)-6-бензил-4-(дицианометилен)-5-оксо-2,3,6а-трифенилгексагидро-3aH-пирроло[3,2-d]изоксазол-3а-карбоксилата (1).

К раствору 1.0 ммоль этил 1-бензил-4-(дицианометилен)-5-оксо-2-фенил-4,5-дигидро-1H-пиррол-3-карбоксилата (3) в 4 мл безводного ацетонитрила добавляли 1.0 ммоль нитрона (4). Реакционную массу кипятили в течение 72 ч. Растворители упаривали при пониженном давлении, остаток перекристаллизовывали из этилового спирта. Выход 28%, т.пл. 150-153°С. Соединение (1) C₃₆H₂₈N₄O₄.

Найдено, %: С 74.29; Н 4.97; N 9.52.

Вычислено, %: С 74.47; Н 4.86; N 9.65.

Соединение (1) - желтое кристаллическое вещество, легкорастворимое в ДМСО, ДМФА, хлороформе, дихлорметане, трудно растворимое в ацетоне, спиртах, нерастворимое в воде и алканах. Устойчиво при хранении в обычных условиях.

ИК спектр (в вазелиновом масле), v, см^-1: 2238, 1739, 1711.

Спектр ¹Н ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ, м.д.: 7.74 уш. с (1H, Н_аром), 7.44 - 7.19 м (9Н, Н_аром), 7.17 - 7.12 м (3Н, Н_аром), 7.11 - 6.90 м (5Н, Н_аром), 6.83 - 6.77 м (2Н, Н_аром), 5.79 с (1H, СН), 4.88 д (1H, J=14.5 Гц, PhCH₂), 4.25 д (1H, J=14.6 Гц, PhCH₂), 3.71 дк (1H, J=10.6, 7.1 Гц, СН₃СН₂), 3.40 дк (1H, J=10.7, 7.2 Гц, СН₃СН₂), 0.80 т (3Н, J=7.2 Гц, СН₃СН₂). Спектр ¹³С ЯМР (101 МГц, CDCl₃) δ, м.д.: 164.88, 161.91, 159.94, 145.32, 135.88, 131.89, 131.49, 131.22, 130.56, 130.05, 129.82 (3С), 129.41,129.10,128.79 (2С), 128.55 (ЗС), 128.24 (2С), 127.94, 127.66, 127.22, 123.07 (2С), 110.37, 109.91, 101.31, 91.84, 78.77, 74.11, 63.53,46.74, 13.44.

Пример 2. Фармакологическое исследование этил (3R*,3aR*,6aR*)-6-бензил-4-(дицианометилен)-5-оксо-2,3,6а-трифенилгексагидро-3aH-пирроло[3,2-d]изоксазол-3а-карбоксилата (1) на наличие противомикробной активности.

Противомикробные свойства химического вещества изучали на 2-х коллекционных условно-патогенных штаммах микроорганизмов: Staphylococcus aureus (штамм 906) л Escherichia coli (штамм 1257).

Противомикробное действие выявляли методом двукратных серийных разведений в соответствии с методическими указаниями по изучению противомикробной активности препаратов [Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М.: И-во Медицина, 2005. - 832 с]. Готовили исходные разведения микроорганизмов в физиологическом растворе из суточной агаровой культуры по оптическому стандарту мутности (ОСО) на 5 ME с использованием денситометра. После ряда разведений конечная концентрация клеток в опыте составляла 2.5×10⁵ клеток/мл. В лунках стерильного 96 луночного плоскодонного микропланшета готовили два параллельных ряда двукратных серийных разведений химических соединений в бульоне РПБ. В каждой лунке содержалось 150 мкл определенной концентрации испытуемого вещества и 150 мкл инокулята культуры. В последних рядах содержалась питательная среда и культура в равных объемах (контроль). Максимально испытанная концентрация соответствовала 1000.0 мкг/мл, минимальная - 1.0 мкг/мл. Микропланшет помещали в термостат спектрофотометра Epoch и замеряли оптическую плотность (ОП) при длине волны 540 нм. Через 24 часа вновь регистрировали ОП культуральной жидкости.

Результаты оценивали с помощью программного обеспечения Gen 5 микропланшетного спектрофотометра Epoch. Последняя лунка ряда с задержкой роста и показателями ОП равной оптической плотности контрольной лунки соответствует минимальной подавляющей концентрацией соединения.

Противомикробную активность оценивали по минимально действующей концентрации. Эталоном сравнения служил известный из клинической практики препарат - диоксидин.

Проведенные исследования показали (см. таблицу), что соединение (1) проявляет ингибирующее действие относительно штамма Staphylococcus aureus в концентрации - 250.0 мкг/мл и относительно штамма. Escherichia coli в концентрации - 500.0 мкг/мл.

Предлагаемое соединение этил (3R*,3aR*,6aR*)-6-бензил-4-(дицианометилен)-5-оксо-2,3,6а-трифенилгексагидро-3аН-пирроло[3,2-d]изоксазол-3а-карбоксилат (1) обладает противомикробной активностью и может найти применение в качестве исходного продукта для синтеза гетероциклических систем и в фармакологии в качестве потенциального лекарственного средства с противомикробными свойствами.

Изобретение относится к этил (3R*,3aR*,6aR*)-6-бензил-4-(дицианометилен)-5-оксо-2,3,6a-трифенилгексагидро-3аН-пирроло[3,2-d]изоксазол-3а-карбоксилату указанной формулы, обладающему противомикробной активностью. 1 табл., 2 пр.

Этил (3R*,3aR*,6aR*)-6-бензил-4-(дицианометилен)-5-оксо-2,3,6a-трифенилгексагидро-3aH-пирроло[3,2-d]изоксазол-3a-карбоксилат формулы

,

обладающий противомикробной активностью.