Применение (5-(метоксикарбонил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)-L-пролина в качестве средства, обладающего противотуберкулезной активностью Российский патент 2022 года по МПК A61K31/401 C07D207/16 A61P31/06 

Изобретение относится к области фармакологии и медицины, в частности фтизиатрии, а именно к применению индивидуального соединения класса м-карбоксианилинов (5-(метоксикарбонил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)-L-пролина, обладающего противотуберкулезной активностью, который может найти применение в фармакологии и медицине в качестве противотуберкулезного средства.

Заявленное соединение (5-(метоксикарбонил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)-L-пролин (1) и способ его синтеза известны из уровня техники. Соединение (1) получается в результате трехкомпонентной реакции L-пролина (2), метил бензоилпирувата (3) и ацетона (4) (Synthesis of meta-substituted anilines via a three-component reaction of acetone, amines, and 1, 3-diketones / A.R. Galeev, M.V. Dmitriev, I.G. Mokrushin, I.V. Mashevskaya, A.N. Maslivets, M. Rubin // Organic & Biomolecular Chemistry. - 2019. - Vol. 17. - P. 10030-10044. DOI: 10.1039/C9OB02120E), согласно схеме, представленной ниже:

Противотуберкулезные свойства (5-(метоксикарбонил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)-L-пролина (1) или его близких аналогов не изучены. Из уровня техники можно выделить производные этил 1H-бензо[d]имидазол-5-карбоксилата (5) (Synthesis and evaluation of antimycobacterial activity of new benzimidazole aminoesters. / Y.K. Yoon, M.A. Ali, A.C. Wei, T.S. Choon, R. Ismail // European journal of medicinal chemistry. - 2015. - Vol. 93 - P.614-624. DOI: 10.1016/j.ejmech.2013.06.025), обладающие активностью в отношении М. tuberculosis штамма H₃₇Rv в концентрации 50-100 мкг/мл (МИК).

Целью изобретения является изыскание новых соединений, обладающих ингибирующей активностью в отношении Mycobacterium tuberculosis, что позволит расширить ассортимент потенциальных противотуберкулезных препаратов.

Поставленная цель решается изучением противотуберкулезной активности (5-(метоксикарбонил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)-L-пролина (1), который обладает противотуберкулезной активностью: минимальная ингибирующая концентрация (МИК) в отношении М. tuberculosis штамма H₃₇R-V составляет 25.0 мкг/мл. Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Получение (5-(метоксикарбонил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)-L-пролина (1).

К раствору 2.0 ммоль метил бензоилпирувата (3) в 2 мл ацетона (4) последовательно добавляли 0.6 ммоль уксусной кислоты, 1.0 г молекулярных сит 4А и 2.2 ммоль L-пролина (2). Реакционную массу выдерживали при 55°С в течение 24 ч. Затем растворитель отгоняли на ротационном испарителе, к остатку добавляли 5 мл NaHCO₃ (насыщ.) и смесь экстрагировали диэтиловым эфиром (3×5 мл). Водный слой подкисляли HCl (конц.) до рН 1-2, полученный осадок золотисто-оранжевого цвета отфильтровывали. Выход 51%, т.пл. 69-72°С. Соединение (1) C₁₉H₁₉NO₄. Устойчиво при хранении в обычных условиях.

HRMS (ESI+)m/z рассчитано для C₁₉H₂₀NO₄⁺(М+Н)⁺: 326.1387, найдено: 326.1389.

ИК спектр (в вазелиновом масле), ν, см^-1: 1717, 1598.

Спектр ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ, м.д.: 8.15 (уш. с, 1H), 7.64 (д, J=1.3 Гц, 1H), 7.57 (д, J=7.1 Гц, 2Н), 7.41 (т, J=7.4 Гц, 2Н), 7.36-7.30 (м, 1Н), 7.25 (д, J=1.8 Гц, 1H), 6.95 (т, J=1.9 Гц, 1H), 4.38 (дд, J=8.3, 2.6 Гц, 1H), 3.90 (с, 3Н), 3.66 (тд, J=8.4, 3.1 Гц, 1H), 3.44 (кв, J=8.0 Гц, 1H), 2.45-2.23 (м, 2Н), 2.22-1.91 (м, 2Н). Спектр ¹³С ЯМР (101 МГц, CDCl₃) δ, м.д.: 178.6, 167.7, 147.2, 142.7, 141.1, 131.7, 128.9 (2С), 127.7, 127.4 (2С), 117.5, 115.3, 112.2, 61.0, 52.2, 48.9, 31.1, 23.9.

Пример 2. Исследование (5-(метоксикарбонил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)-L-пролина (1) на противотуберкулезную активность.

Исследование противотуберкулезной активности производилось микрометодом двукратных серийных разведений в жидкой питательной среде с использованием индикатора роста резазурина натриевой соли [Resazurin Microtiter Assay Plate: Simple and Inexpensive Method for Detection of Drug Resistance in Mycobacterium tuberculosis. / J. C. Palomino, A. Martin, M. Camacho, H. Guerra, J. Swings, F. Portaels // Antimicrobail Agents and Chemotherapy. - 2002. - Vol. 46 N.8. - P.2720-2722. DOI: 10.1128/ААС.46.8.2720].

В лунках стерильного 96 луночного плоскодонного микропланшета готовили два параллельных ряда двукратных серийных разведений соединения (1) в питательной жидкой среде Мидлбрук 7Н, содержащей ростовую добавку ВАСТЕС MGIT OADC. Предварительно соединение (1) было растворено в ДМСО. В каждой лунке содержалось 150 мкл определенной концентрации испытуемого вещества.

Из 14-ти суточной культуры М. tuberculosis штамм H₃₇RV готовили бактериальную суспензию, которая была стандартизирована по оптическому стандарту мутности Мак-Фарланда №2 с использованием денситометра, после чего инокулят разводили 1:20 в питательной среде Мидлбрук 7Н9 и вносили в каждую лунку планшета по 150 мкл.

В последних рядах содержалась питательная среда и культура в равных объемах (контроль). Максимально испытанная концентрация соответствовала 100.0 мкг/мл, минимальная - 0.1 мкг/мл.

Планшеты запечатывали в полиэтиленовые пакеты и инкубировали при 37°С в течение 7 суток. После 7 дней инкубации в каждую лунку добавляли 50 мкл 0,02% раствора резазурина, культивировали при 37°С в течение 24 часов, затем оценивали визуально изменение окраски резазурина. Изменение цвета указывает на снижение резазурина и, следовательно, рост бактерий. МИК - минимальная концентрация химических веществ, которая предотвращала изменение цвета.

Проведенные исследования показали (см. таблицу), что соединение (1) проявляет ингибирующее действие в отношении М. tuberculosis штамма H37RV в концентрации - 25.0 мкг/мл.

Предлагаемое соединение (5-(метоксикарбонил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)-L-пролин (1) обладает противотуберкулезной активностью и может найти применение в фармакологии в качестве потенциального лекарственного средства.

Изобретение может быть использовано в области фармакологии и медицины, в частности фтизиатрии, и относится к новому применению (5-(метоксикарбонил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)-L-пролина в качестве средства, обладающего противотуберкулезной активностью. 1 табл., 2 пр.

Применение (5-(метоксикарбонил)-[1,1'-бифенил]-3-ил)-L-пролина формулы

в качестве противотуберкулезного средства.