Способ диагностики бруцеллеза с использованием роз-бенгал пробы с мышечной тканью животных, положительно реагирующих на бруцеллез Российский патент 2023 года по МПК G01N33/12 G01N33/53 

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к диагностике бруцеллеза.

Прототипом изобретения является способ диагностики бруцеллеза в молоке коров с использованием Роз-бенгал пробы с добавлением калия фосфорнокислого двухзамещенного трехводного на физиологическом растворе [8].

Способ диагностики бруцеллеза в молоке коров заключается в том, что в диагностическую пластинку с луночками вносят 0,05-0,06 мл свежего или консервированного формалином молока, в которую затем добавляют 0,015 мл 8-9%-ного раствора калия фосфорнокислого двухзамещенного трехводного на физиологическом растворе. После тщательного перемешивания компонентов реакции пластины покачивают в течение 4-5 минут. При положительном результате наблюдается аггютинация. Оценку результатов реакции проводят по общепринятой схеме. Контролем служит заведомо отрицательная и положительная проба молока на бруцеллез.

Еще одним прототипом изобретения является способ диагностики бруцеллеза с использованием Роз-бенгал пробы в мясе коров убитых через 1-1,5 месяца после двукратного введения (инфицирования) бруцелл из вакцинного штамма В. abortus 82 [7]. От туш убойных животных в области головы, шеи, грудинной и задней части, а также от сердца отбирали кусочки мышц и фарш из них для лабораторного анализа. Контролем служили продукты неинфицированных животных [1]. Из отобранных мышц мяса делали срезы в продольном направлении (как при исследовании на трихинеллез) величиной с пшеничное зерно, помещали их на стекло компрессориума и раздавливали с помощью покровного стекла, наносили по одной небольшой капле роз-бенгал теста, накрывали верхним стеклом компрессориума и раздавливали с помощью верхнего стекла и винтов до максимального отделения жидкости. Через 3-7 минут при комнатной температуре смесь жидкости вокруг кусочка исследовали с помощью трихинеллоскопа или микроскопа. Учет реакции мышечной жидкости и роз-бенгал теста повторяли с отжатой мясной жидкостью разных групп мышц. Результат считали положительным при наличии выраженной агглютинации, сомнительным при помутнении жидкости, отрицательным - если в смеси никаких изменений не выявляли.

Недостатком прототипов изобретения является то обстоятельство, что Роз-бенгал тест проводили с мясом коров убитых через 1-1,5 месяца после двукратного введения (инфицирования) бруцелл из вакцинного штамма В. abortus 82. Соответственно в нашей работе проведены исследования на положительно реагирующих на бруцеллез коровах, что реально дает преимущество данному эксперименту.

Технической задачей изобретения является экспресс диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота с использованием роз-бенгал пробы с мышечной тканью животных положительно реагирующих на бруцеллез для обнаружения продукции, полученной от больных бруцеллезом животных, при ветеринарно-санитарной экспертизе на рынках и других предприятиях, где производится убой животных.

Поставленная задача решается способом нанесения на небольшие срезы мяса коров, одной капли роз-бенгал теста, зажатием его в компрессориуме, выдерживанием в течение 2, 5 и 10 минут и последующим учетом реакции агглютинации.

Сущность изобретения заключается в следующем: из образцов мяса положительно реагирующих на бруцеллез коров производили срезы мышц в продольном направлении размером с пшеничное зерно (горошину) с использованием ножниц, помещали их на стекло комприссориума. Затем на поверхность каждого среза наносили по одной капле роз-бенгал теста, раздавливали путем накрывания верхнего стекла и закручивали гайками комприссориума с целью отделения жидкости. Затем жидкость с использованием пипеток помещали в лунки, на планшет, учитывали реакцию через 2, 5 и 10 минут. При этом сравнивали с контрольной сывороткой негативной для серологических реакций. Результат считали положительным - при выраженной агглютинации, сомнительным - при помутнении жидкости, отрицательным - при отсутствии изменений в жидкости.

Спустя 2 минуты во всех образцах (кусочки печени, мышцы диафрагмы, мышцы шеи) приготовленных из туш мяса с положительным результатом на бруцеллез, происходила агглютинация. Наблюдением за продуктами реакции установлено повышение интенсивности образования комочков в течение 10 минут.

В контрольных образцах жидкость оставалась прозрачной без примеси комочков на протяжении всего опыта. В этой связи, нами был сделан вывод о том, что данный метод с использованием роз-бенгал теста позволяет подтвердить поставленный диагноз на бруцеллез, и может быть рекомендован для ускоренной оценки и выявления, продукции полученной от инфицированных животных. Спустя трое суток после охлаждения исследуемых туш, результаты иммунологического тестирования роз-бенгал пробой с мышечными тканями были также положительными, однако, отмечено снижение интенсивности специфического взаимодействия и образования агглютининов.

Таким образом, данный метод позволяет проводить мониторинг благополучия по бруцеллезу и снижает вероятность попадания мяса от больных животных в торговую сеть и, следовательно, риск заражения бруцеллезом людей. Рекомендуем использовать данный метод на рынках, ярмарках, таможенных терминалах при проведении ветеринарно-санитарной экспертизы для повышения биологической безопасности и получения качественной продукции скотоводства [2, 3, 4, 5, 6].

Существенными признаками является то, что:

1. использовать роз-бенгал пробу с мышечной тканью можно в качестве экспресс-метода для специфической скрининговой индикации;

2. для проведения роз-бенгал теста можно использовать небольшие кусочки различных групп мышц: головы, шеи, грудинной и задней части туши, а также сердца.

На фигуре 1 изображено появление хлопьев в виде агглютинации на дне лунки в исследуемых образцах печени, мышц диафрагмы, мышц шеи.

На фигуре 2 в области нижней челюсти головы коровы изображена буква «б», которая обозначает, что голова получена от животного, положительно реагирующего на бруцеллез серологическими методами исследования.

На фигуре 3 изображено взятие мышц с различных частей туши коровы на исследование методом роз-бенгал пробы.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Меры личной безопасности работников, осуществляющих убой больных бруцеллезом животных / С.Ю. Веселовский, В.А. Агольцов Т.М. Гиро, Р.И. Ахмиров // 21-ая Международная научно-практическая конференция, посвященная памяти Василия Матвеевича Горбатова «Инновационно-технологическое развитие пищевой промышленности - тенденции, стратегии, вызовы» Москва, - 2018. - С. 47 - 48.

2. Практическое пособие по мониторингу бруцеллеза, туберкулеза, паратуберкулеза и лейкоза крупного рогатого скота: организационно-хозяйственные, ветеринарно-санитарные и зоогигиенические аспекты профилактики и ликвидации этих инфекций / под ред. академика РАН М.И. Гулюкина / Агентство творческих технологий. - Москва, 2014. - 74 с.

3. Предупреждение эпидемической проекции зоонозов в условиях регионального продовольственного рынка / А.В. Пашкин, В.В. Сочнев, А.В. Усенков и др. // Главные эпизоотологические параметры популяции животных. Сборник научных трудов ФГБОУ ВПО НГСХА, представленных на 2-й сессии Международной научно-практической конференции. Под редакцией В.В. Сочнева - 2015. - С. 146-154.

4. Сайлаубаев, С.Ж. Эффективные в условиях Казахстана противобруцеллезные мероприятия у крупного рогатого скота [Текст] / С.Ж. Сайлаубаев, В.И. Воробьев, А.С. Димова [и др.] // Методические рекомендации - Усть-Каменогорск, 2016. - 19 с.

5. Сенченко, Б.С. Ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов животного и растительного происхождения. Серия «Технология пищевых производств»- Ростов-на-Дону: Издательский центр «МарТ», 2001. - 704 с.

6. Сенченко, Б.С.Руководство по ветеринарно-санитарной экспертизе продуктов животного и растительного происхождения. / Б.С. Сенченко, А.Н. Трошин, A.M. Кавунник // Краснодар: Изд-во КГАУ. - 1998. - Т. 1. - 672 с.

7. Серегин, И.К. Экспресс-метод выявления мяса животных, больных бруцеллезом, на рынках и продовольственных ярмарках / И.К. Серегин, М.В. Туганова, С.Н. Золотухин // Ветеринария сельскохозяйственных животных - 2014. - №9. - С. 42-50.

8. Способ диагностики бруцеллеза SU 1697827 патент. Опубликовано: 1994.03.15 Патентообладатели: Государственный комитет по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР.

Изобретение относится к ветеринарии и биотехнологии. Предложен способ использования экспресс-метода для выявления специфической контаминации, вызванной возбудителем бруцеллеза, заключающийся в нанесении на небольшие срезы мяса коров, больных бруцеллезом и предварительно не привитых вакцинами против бруцеллеза, одной капли роз-бенгал теста, зажатием его в компрессориуме, выдерживанием его 2, 5 и 10 мин и последующим учетом агглютинации. Изобретение обеспечивает расширение арсенала способов мониторинга благополучия по бруцеллезу при проведении ветеринарно-санитарной экспертизы продукции скотоводства. 3 ил.

Способ использования экспресс-метода для выявления специфической контаминации, вызванной возбудителем бруцеллеза, заключающийся в нанесении на небольшие срезы мяса коров, больных бруцеллезом и предварительно не привитых вакцинами против бруцеллеза, одной капли роз-бенгал теста, зажатием его в компрессориуме, выдерживанием его 2, 5 и 10 мин и последующим учетом агглютинации.