Ссылка на Родственную Заявку

[0001] Согласно настоящей заявке испрашивается приоритет в соответствии с предварительной заявкой на выдачу патента США 62/481973, поданной 5 апреля 2017 г. раскрытие которой полностью включено в настоящий документ посредством ссылки.

Список последовательностей

[0002] Настоящая заявка содержит Список последовательностей, который был электронно представлен в формате ASCII и полностью включен в настоящий документ посредством ссылки. Электронная копия списка последовательностей, созданная 23 марта 2018 г., названа 022675_WO058_SL.txt и имеет размер 232360 бит.

Уровень техники изобретения

[0003] PD-1, также известный как белок запрограммированной смерти клеток 1 и CD279, представляет собой 268 аминокислотный рецептор клеточной поверхности, который принадлежит к суперсемейству иммуноглобулинов. PD-1 является членом семейства CD28 регуляторов T-клеток и экспрессируется на T-клетках, B-клетках и макрофагах. Он связывает лиганды PD-L1 (также известный как гомолог B7) и PD-L2 (также известный как B7-DC). PD-1 представляет собой мембранный белок I типа, структура которого содержит внеклеточный домен IgV, трансмембранную область и внутриклеточный хвост, содержащий два сайта фосфорилирования. Известный как белок иммунной контрольной точки, PD-1 функционирует в качестве индуцибельного иммуномодулирующего рецептора, принимающего участие, например, в отрицательной регуляции T-клеточных ответов на антигенную стимуляцию.

[0004] PD-L1 является основным лигандом для PD-1. Связывание PD-L1 с PD-1 ингибирует T-клеточную активность, снижая выработку цитокинов и подавляя пролиферацию T-клеток. Раковые клетки, которые экспрессируют PD-L1, способны использовать этот механизм для инактивации противоопухолевой активности T-клеток посредством связывания PD-L1 с рецептором PD-1. Ввиду своих свойств регулирования иммунного ответа PD-1 исследовали в качестве потенциальной мишени для иммунотерапии, включая лечение рака и аутоиммунных заболеваний. Для лечения некоторых видов рака в США и Европе были одобрены два антитела против PD-1, пембролизумаб и ниволумаб.

[0005] Другие белки иммунных контрольных точек включают в себя TIM-3 (белок 3, содержащий T-клеточный иммуноглобулин и домен муцина) и LAG-3 (ген активации лимфоцитов 3). TIM-3, также известный как HAVCR2 (клеточный рецептор 2 вируса гепатита А) или CD366, является членом семейства белков, содержащих T-клеточный иммуноглобулин и домен муцина. У людей TIM-3 кодируется геном Havcr2 и представляет собой гликопротеин I типа 33 кДа с мембранным дистальным доменом IgV и мембранным проксимальным доменом муцина. Он содержит консервативную область из пяти остатков Tyr во внутриклеточном домене, которые фосфорилируются при связывании лиганда. TIM-3 экспрессируется рядом различных клеток, происходящих как из адаптивных, так и из врожденных ветвей иммунной системы, включая T-клетки, дендритные клетки, макрофаги и клетки-натуральные киллеры (NK). Экспрессия TIM-3 низка на наивных T-клетках, но сильно повышается при активации T-клеток. В отличие от T-клеток врожденные клетки, такие как дендритные клетки, NK клетки и моноциты, обладают высокой базальной экспрессией TIM-3. TIM-3 связан с несколькими, главным образом промискуитентными, лигандами, включая галектин-9, фосфатидилсерин, CEACAM-1 и HMGB-1, но точная роль этих лигандов в настоящее время неизвестна.

[0006] Хотя было предположено, что TIM-3 является ингибитором контрольной точки, имеется довольно мало доказательств в поддержку идеи, что TIM-3 непосредственно опосредует подавление активации T-клеток или секреции цитокинов способом, похожим, например, на PD-1. Кроме того, в отличие от PD-1, TIM-3, по-видимому, имеет значение для регуляции клеток врожденной системы и, в частности, дендритных клеток. Большинство функциональных данных, относящихся к TIM-3 и его роли в иммунологии опухоли, получены в исследованиях in vivo с использованием различных антител. В большинстве этих исследований из-за плохой проверки антител неясно, опосредовано ли действие антител против TIM-3 ингибированием связывания лиганда или агонистическим действием на мишень. Ввиду его регуляторных свойств иммунного ответа TIM-3 исследовали в качестве потенциальной мишени для иммунотерапии, в том числе для лечения рака и аутоиммунных заболеваний. Одно антитело против TIM-3 в настоящее время находится в клинической разработке, но в настоящее время нет одобренных антител против TIM-3.

[0007] LAG-3, также известный как CD223, представляет собой белок суперсемейства иммуноглобулинов, который функционирует в качестве рецептора иммунной контрольной точки. Зрелый белок представляет собой трансмембранный белок I типа из 503 аминокислот с четырьмя внеклеточными Ig-подобными доменами. Он экспрессируется на различных типах клеток, включая активированные Т-клетки, Т-регуляторные (Treg) клетки, природные клетки-киллеры, В-клетки и плазмоцитоидные дендритные клетки. Информация о данных последовательности, организации экзона/интрона и хромосомной локализации LAG-3 указывает на то, что он тесно связан с CD4. Подобно CD4, LAG-3 связывает молекулы МНС II класса, хотя и с более высокой аффинностью и в отдельном сайте по сравнению с CD4.

[0008] LAG-3 является коингибирующим рецептором, который, как полагают, регулирует пролиферацию, активацию и гомеостаз Т-клеток способом, похожим на CTLA-4 и PD-1. При связывании лиганда с внеклеточным доменом, LAG-3 оказывает свое действие посредством последующей передачи сигналов через цитоплазматический домен. Лучше всего охарактеризованным лигандом для LAG-3 является МНС II класса (MHCII), но были описаны другие лиганды LAG-3, включая LSECtin. LAG-3 не имеет классических мотивов ITIM или ITSM, но имеет консервативный мотив KIEELE (SEQ ID NO: 397), который, как считается, необходим для оказания его ингибирующего действия на активность Т-клеток. Точный механизм, с помощью которого LAG-3 влияет на активность Т-клеток, понятен слабо. LAG-3 ингибирует экспансию Т-клеток, блокируя проникновение активированных Т-клеток в фазу роста клеточного цикла, что приводит к накоплению клеток в S-фазе. Также полагают, что LAG-3 имеет значение для усиления подавляющей активности регуляторных Т-клеток и для модулирования функции дендритных клеток. Раковые клетки обладают способностью усиливать экспрессию MHCII, который связывает LAG-3 с эффекторными Т-клетками, тем самым ингибируя их активность и вызывая ускользание опухоли от иммунного ответа.

[0009] Ввиду критической роли PD-1, LAG-3 и TIM-3 в качестве иммуномодуляторов, существует необходимость в новых и улучшенных комбинированных лекарственных средствах, которые нацелены на эти рецепторы, для лечения рака и определенных нарушений иммунной системы.

Сущность изобретения

[0010] Настоящее изобретение основано на открытии, что повышающая иммунитет эффективность антитела против PD-1, такого как описано в настоящем документе, значительно увеличивается при применении антитела в комбинации с антителом против TIM-3 и/или антителом против LAG-3. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что комбинированные лекарственные средства согласно настоящему изобретению особенно эффективны при лечении рака у пациента-человека путем активации собственного противоракового иммунитета пациента. По сравнению с доступными в настоящее время способами лечения рака, включая лечение антителами, предполагается, что комбинированные лекарственные средства согласно изобретению могут обеспечить превосходный клинический ответ.

[0011] Соответственно, в настоящем изобретении предложен способ усиления иммунитета у нуждающегося в этом пациента-человека, такого как онкопациент, путем введения пациенту (1) антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части, которое конкурирует с антителом, выбранным из группы, состоящей из 12819.15384, 12748.15381, 12748.16124, 12865.15377, 12892.15378, 12796.15376, 12777.15382, 12760.15375 и 13112.15380, за связывание с PD-1 человека или связывается с тем же самым эпитопом PD-1 человека, что и оно; и (2) антитела против TIM-3 или его антигенсвязывающей части и/или антитела против LAG-3 или его антигенсвязывающей части. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части, антитела против TIM-3 или его антигенсвязывающей части и антитела против LAG-3 или его антигенсвязывающей части.

[0012] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 связывается с эпитопом PD-1 человека, содержащим:

a) остатки V64, L128, P130, K131 и A132 SEQ ID NO: 388;

b) остатки V44 и T145 SEQ ID NO: 388;

c) остатки K131 и E136 SEQ ID NO: 388; или

d) остатки V44 и T145 SEQ ID NO: 388.

[0013] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 связывается с эпитопом PD-1 человека, содержащим:

a) остатки 56-64, 69-90 и 122-140 SEQ ID NO: 388;

b) остатки 69-90 и 122-140 SEQ ID NO: 388;

c) остатки 69-75 SEQ ID NO: 388;

d) остатки 136-140 SEQ ID NO: 388; или

e) остатки 69-75 и 136-140 SEQ ID NO: 388.

[0014] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 имеет по меньшей мере одно из следующих свойств:

a) связывается с PD-1 человека с KD 750 пМ или менее;

b) связывается с PD-1 яванского макака с KD 7 нМ или менее;

c) связывается с PD-1 мыши с KD 1 нМ или менее;

d) не связывается с PD-1 крысы;

e) увеличивает секрецию IL-2 в анализе стимулированной стафилококковым энтеротоксином B (SEB) цельной крови;

f) увеличивает секрецию IFN-γ в анализе однонаправленной реакции смешанной культуры лимфоцитов;

g) ингибирует взаимодействие PD-1 с PD-L1 по меньшей мере на 60% в концентрации 10 мкг/мл в конкурентном анализе методом проточной цитометрии;

h) блокирует связывание PD-L1 и PD-L2 с PD-1 по меньшей мере на 90% в концентрации 10 мкг/мл, что определяют с помощью анализа методом биослойной интерферометрии; и

i) ингибирует рост опухоли in vivo.

В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 имеет все указанные свойства.

[0015] В некоторых вариантах осуществления определяющие комплементарность области 1-3 тяжелой цепи (H-CDR) и определяющие комплементарность области 1-3 легкой цепи (L-CDR) антитела против PD-1 содержат аминокислотные последовательности из:

a) SEQ ID NO: 228-233, соответственно;

b) SEQ ID NO: 238-243, соответственно;

c) SEQ ID NO: 248-253, соответственно;

d) SEQ ID NO: 258-263, соответственно;

e) SEQ ID NO: 268-273, соответственно;

f) SEQ ID NO: 278-283, соответственно;

g) SEQ ID NO: 288-293, соответственно; или

h) SEQ ID NO: 298-303, соответственно.

[0016] В некоторых вариантах осуществления вариабельные домены тяжелой и легкой цепей антитела против PD-1 содержат аминокислотные последовательности из:

a) SEQ ID NO: 226 и 227, соответственно;

b) SEQ ID NO: 236 и 237, соответственно;

c) SEQ ID NO: 236 и 392, соответственно;

d) SEQ ID NO: 246 и 247, соответственно;

e) SEQ ID NO: 256 и 257, соответственно;

f) SEQ ID NO: 266 и 267, соответственно;

g) SEQ ID NO: 276 и 277, соответственно;

h) SEQ ID NO: 286 и 287, соответственно; или

i) SEQ ID NO: 296 и 297, соответственно.

[0017] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 содержит:

a) тяжелую цепь (HC), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 226 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375, и легкую цепь (LC), содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 227 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 379;

b) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 236 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 237 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 379;

c) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 236 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 392 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 379;

d) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 246 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 247 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 379;

e) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 256 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 257 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 379;

f) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 266 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 267 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 379;

g) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 276 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 277 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 379;

h) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 286 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 287 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 379; или

i) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 296 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 297 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 379.

[0018] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 конкурирует за связывание с TIM-3 человека или связывается с тем же самым эпитопом TIM-3 человека, что и антитело, выбранное из группы, состоящей из 15086.17145, 15086.15086, 15086.16837, 15086.17144, 20131, 20293, 15105, 15107, 15109, 15174, 15175, 15260, 15284, 15299, 15353, 15354, 17244, 17245, 19324, 19416, 19568, 20185, 20300, 20362 и 20621.

[0019] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 связывается с эпитопом TIM-3 человека, содержащим:

a) остатки P50, V60, F61, E62, G64, R69, I117, M118 и D120 SEQ ID NO: 389;

b) остатки F61, R69 и I117 SEQ ID NO: 389; или

c) остатки P50, F61, E62, I117, M118 и D120 SEQ ID NO: 389.

[0020] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 связывается с эпитопом TIM-3 человека, содержащим:

a) остатки 62-67 SEQ ID NO: 389; или

b) остатки 114-117 SEQ ID NO: 389.

[0021] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 имеет по меньшей мере одно из следующих свойств:

a) связывается с TIM-3 человека с KD 23 нМ или менее, что измеряют с помощью поверхностного плазмонного резонанса;

b) связывается с TIM-3 яванского макака с KD 22 нМ или менее, что измеряют с помощью поверхностного плазмонного резонанса;

c) связывается с TIM-3 человека с EC50 1,2 нМ или менее, что измеряют с помощью ELISA;

d) связывается с TIM-3 яванского макака с EC50 46 нМ или менее, что измеряют с помощью ELISA;

e) увеличивает секрецию IFN-γ в анализе однонаправленной реакции смешанной культуры лимфоцитов;

f) увеличивает секрецию IFN-γ в анализе двунаправленной реакции смешанной культуры лимфоцитов;

g) увеличивает секрецию TNF-α в анализе однонаправленной реакции смешанной культуры лимфоцитов;

h) увеличивает секрецию TNF-α из дендритных клеток; и

i) ингибирует взаимодействие TIM-3 с фосфатидилсерином.

В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 имеет по меньшей мере свойства a), c), d), e), g), h) и i).

[0022] В некоторых вариантах осуществления H-CDR1-3 и L-CDR1-3 антитела против TIM-3 содержат аминокислотные последовательности из:

a) SEQ ID NO: 8-13, соответственно;

b) SEQ ID NO: 18-23, соответственно;

c) SEQ ID NO: 28-33, соответственно;

d) SEQ ID NO: 38-43, соответственно;

e) SEQ ID NO: 48-53, соответственно;

f) SEQ ID NO: 58-63, соответственно;

g) SEQ ID NO: 68-73, соответственно;

h) SEQ ID NO: 78-83, соответственно;

i) SEQ ID NO: 88-93, соответственно;

j) SEQ ID NO: 98-103, соответственно;

k) SEQ ID NO: 108-113, соответственно;

l) SEQ ID NO: 118-123, соответственно;

m) SEQ ID NO: 128-133, соответственно;

n) SEQ ID NO: 138-143, соответственно;

o) SEQ ID NO: 148-153, соответственно;

p) SEQ ID NO: 158-163, соответственно;

q) SEQ ID NO: 168-173, соответственно;

r) SEQ ID NO: 178-183, соответственно;

s) SEQ ID NO: 188-193, соответственно;

t) SEQ ID NO: 198-203, соответственно;

u) SEQ ID NO: 208-213, соответственно; или

v) SEQ ID NO: 218-223, соответственно.

[0023] В некоторых вариантах осуществления вариабельные домены тяжелой и легкой цепей антитела против TIM-3 содержат аминокислотные последовательности из:

a) SEQ ID NO: 7 и 4, соответственно;

b) SEQ ID NO: 3 и 4, соответственно;

c) SEQ ID NO: 16 и 17, соответственно;

d) SEQ ID NO: 26 и 27, соответственно;

e) SEQ ID NO: 36 и 37, соответственно;

f) SEQ ID NO: 46 и 47, соответственно;

g) SEQ ID NO: 56 и 57, соответственно;

h) SEQ ID NO: 66 и 67, соответственно;

i) SEQ ID NO: 76 и 77, соответственно;

j) SEQ ID NO: 86 и 87, соответственно;

k) SEQ ID NO: 96 и 97, соответственно;

l) SEQ ID NO: 106 и 107, соответственно;

m) SEQ ID NO: 116 и 117, соответственно;

n) SEQ ID NO: 126 и 127, соответственно;

o) SEQ ID NO: 136 и 137, соответственно;

p) SEQ ID NO: 146 и 147, соответственно;

q) SEQ ID NO: 156 и 157, соответственно;

r) SEQ ID NO: 166 и 167, соответственно;

s) SEQ ID NO: 176 и 177, соответственно;

t) SEQ ID NO: 186 и 187, соответственно;

u) SEQ ID NO: 196 и 197, соответственно;

v) SEQ ID NO: 206 и 207, соответственно; или

w) SEQ ID NO: 216 и 217, соответственно.

[0024] В некоторых вариантах осуществления антитело против TIM-3 содержит:

a) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 7 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

b) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 4 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

c) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 16 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 17 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

d) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 26 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 27 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

e) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 36 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 37 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

f) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 46 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 47 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

g) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 56 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 57 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

h) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 66 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 67 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

i) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 76 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 77 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

j) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 86 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 87 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

k) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 96 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 97 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

l) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 106 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 107 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

m) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 116 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 117 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

n) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 126 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 127 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

o) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 136 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 137 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

p) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 146 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 147 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

q) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 156 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 157 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

r) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 166 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 167 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

s) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 176 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 177 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

t) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 186 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 187 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

u) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 196 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 197 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

v) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 206 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 207 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378; или

w) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 216 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 374, 375, 376 или 377, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 217 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378.

[0025] В некоторых вариантах осуществления антитело против LAG-3 конкурирует с антителом, выбранным из группы, состоящей из 15532, 15646, 15723, 15595, 15431, 15572 и 15011, за связывание с LAG-3 человека или связывается с тем же самым эпитопом LAG-3 человека, что и оно.

[0026] В некоторых вариантах осуществления антитело против LAG-3 связывается с эпитопом LAG-3 человека, содержащим:

a) остатки H85, P86, A87, P89, S91, W92 и G93 SEQ ID NO: 68;

b) остатки A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, G93, P94, P96, R98, Y99, T100, V101, P106, G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148 и R163 SEQ ID NO: 68;

c) остатки A40, Q41, P43, P46, P49, D52, T62, Q64, H65, Q66, P67, D68, P96, Y99, T100, V101, P106, G107, R119, E124, R129, G130, D131, S133, R137, P138, D143, R148 и R163 SEQ ID NO: 68; или

d) остатки G107, L109, R110 и S111 SEQ ID NO: 68.

[0027] В некоторых вариантах осуществления антитело против LAG-3 связывается с эпитопом LAG-3 человека, содержащим:

a) остатки 98-105 SEQ ID NO: 68;

b) остатки 78-105 и 123-131 SEQ ID NO: 68;

c) остатки 23-30, 40-66, 88-105, 123-137 и 148-152 SEQ ID NO: 68; или

d) остатки 23-30, 40-66, 98-105, 118-137 и 148-161 SEQ ID NO: 68.

[0028] В некоторых вариантах осуществления антитело против LAG-3 имеет по меньшей мере одно из следующих свойств:

a) в концентрации 20 мкг/мл уменьшает связывание LAG-3 человека с MHC II класса человека в клетках A375 более чем на 85% по сравнению с антителом отрицательного контроля, что определяют с помощью конкурентного анализа методом проточной цитометрии;

b) в концентрации 20 мкг/мл уменьшает связывание LAG-3 человека с MHC II класса человека в клетках A375 до 35%-85% по сравнению с антителом отрицательного контроля, что определяют с помощью конкурентного анализа методом проточной цитометрии;

c) блокирует связывание между LAG-3 человека, экспрессируемым в клетках Jurkat, и MHC II класса человека, экспрессируемым в клетках Raji;

d) связывается с LAG-3 человека с EC50 0,1 нМ или менее, что измеряют с помощью проточной цитометрии;

e) связывается с LAG-3 яванского макака с EC50 0,3 нМ или менее, что измеряют с помощью проточной цитометрии;

f) связывается с LAG-3 человека с KD 3,0×10^–8 или менее, что измеряют с помощью поверхностного плазмонного резонанса;

g) связывается с LAG-3 яванского макака с KD 1,5×10^–7 или менее, что измеряют с помощью поверхностного плазмонного резонанса;

h) связывается с LAG-3 мыши с KD 3,5×10^–8 или менее, что измеряют с помощью поверхностного плазмонного резонанса;

i) стимулирует выработку IL-2 в обработанных стафилококковым энтеротоксином B (SEB) мононуклеарных клетках периферической крови человека(PBMC);

j) уменьшает клеточные уровни LAG-3 в T-клетках человека;

k) уменьшает растворимые уровни LAG-3 в культуре T-клеток человека;

l) индуцирует регресс роста опухоли in vivo;

m) задерживает рост опухоли in vivo; и

n) не связывается с тем же самым эпитопом LAG-3 человека, что и антитело 25F7-Lag3.5.

В некоторых вариантах осуществления антитело против LAG-3 имеет по меньшей мере свойства a), c), d), e), f), g), i), j), k), m) и n).

[0029] В некоторых вариантах осуществления H-CDR1-3 и L-CDR1-3 антитела против LAG-3 содержат аминокислотные последовательности из:

a) SEQ ID NO: 318-323, соответственно;

b) SEQ ID NO: 308-313, соответственно;

c) SEQ ID NO: 328-333, соответственно;

d) SEQ ID NO: 338-343, соответственно;

e) SEQ ID NO: 348-353, соответственно;

f) SEQ ID NO: 358-363, соответственно; или

g) SEQ ID NO: 368-373, соответственно.

[0030] В некоторых вариантах осуществления вариабельные домены тяжелой и легкой цепей антитела против LAG-3 содержат аминокислотные последовательности из:

a) SEQ ID NO: 316 и 317, соответственно;

b) SEQ ID NO: 306 и 307, соответственно;

c) SEQ ID NO: 326 и 327, соответственно;

d) SEQ ID NO: 336 и 337, соответственно;

e) SEQ ID NO: 346 и 347, соответственно;

f) SEQ ID NO: 356 и 357, соответственно; или

g) SEQ ID NO: 366 и 367, соответственно.

[0031] В некоторых вариантах осуществления антитело против LAG-3 содержит:

a) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 316 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 317 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

b) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 306 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 307 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

c) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 326 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 327 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

d) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 336 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 337 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

e) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 346 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 347 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378;

f) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 356 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 357 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 378; или

g) HC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 366 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375, и LC, содержащую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 367 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 379.

[0032] В некоторых вариантах осуществления способ включает введение пациенту:

a) антитела против PD-1, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 228-233, соответственно; и антитела против TIM-3, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 8-13, соответственно;

b) антитела против PD-1, VH и VL которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 226 и 227, соответственно; и антитела против TIM-3, VH и VL которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 7 и 4, соответственно; или

c) антитела против PD-1, содержащего HC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 226 и 375, и LC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 227 и 379; и антитела против TIM-3, содержащего HC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 7 и 377, и LC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 4 и 378.

[0033] В некоторых вариантах осуществления способ включает введение пациенту:

a) антитела против PD-1, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 228-233, соответственно; и антитела против LAG-3, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 318-323, соответственно;

b) антитела против PD-1, VH и VL которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 226 и 227, соответственно; и антитела против LAG-3, VH и VL которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 316 и 317, соответственно; или

c) антитела против PD-1, содержащего HC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 226 и 375, и LC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 227 и 379; и антитела против LAG-3, содержащего HC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 316 и 375, и LC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 317 и 378.

[0034] В некоторых вариантах осуществления способ включает введение пациенту:

a) антитела против PD-1, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 228-233, соответственно; антитела против TIM-3, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 8-13, соответственно; и антитела против LAG-3, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 318-323, соответственно;

b) антитела против PD-1, VH и VL которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 226 и 227, соответственно; антитела против TIM-3, VH и VL которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 7 и 4, соответственно; и антитела против LAG-3, VH и VL которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 316 и 317, соответственно; или

c) антитела против PD-1, содержащего HC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 226 и 375, и LC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 227 и 379; антитела против TIM-3, содержащего HC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 7 и 377, и LC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 4 и 378; и антитела против LAG-3, содержащего HC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 316 и 375, и LC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 317 и 378.

[0035] Антитела или антигенсвязывающие части можно вводить пациенту одновременно (например, в одной фармацевтической композиции) или последовательно.

[0036] Лекарственные средства согласно настоящему изобретению полезны при лечении пациента, у которого есть рак, такой как гематологическая злокачественная опухоль (например, лейкоз, лимфома Ходжкина или неходжкинская лимфома) или солидная опухоль. В некоторых вариантах осуществления у пациента может быть меланома, немелкоклеточный рак легкого, рак мочевого пузыря, плоскоклеточный рак головы и шеи, рак яичников, рак толстого кишечника, почечноклеточный рак, карцинома из клеток Меркеля, фибросаркома, глиосаркома или глиобластома. Кроме того, лекарственные средства согласно настоящему изобретению могут включать облучение или по меньшей мере одно из химиотерапевтического средства, противоопухолевого средства и антиангиогенного средства.

[0037] Также в настоящем изобретении представлено полиспецифическое (например, биспецифическое или триспецифическое) антитело, которое специфически связывается с: a) PD-1 человека и TIM-3 человека; b) PD-1 человека и LAG-3 человека; или c) PD-1 человека, TIM-3 человека и LAG-3 человека. В некоторых вариантах осуществления полиспецифическое антитело содержит антигенсвязывающую часть антитела против PD-1, которое описано в настоящем документе, антигенсвязывающую часть антитела против TIM-3, которое описано в настоящем документе, и/или антигенсвязывающую часть антитела против LAG-3, которое описано в настоящем документе.

[0038] Также в настоящем изобретении предоставлена фармацевтическая композиция, содержащая (1) антитело против PD-1 или его антигенсвязывающую часть, которые описаны в настоящем документе, (2) антитело против TIM-3 или его антигенсвязывающую часть и/или антитело против LAG-3 или его антигенсвязывающую часть и (3) фармацевтически приемлемое вспомогательное средство. Антитело против TIM-3 и антитело против LAG-3 можно выбирать из тех, что описаны в настоящем документе.

[0039] В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция содержит:

a) антитело против PD-1, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 228-233, соответственно; антитело против TIM-3, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 8-13, соответственно; и антитело против LAG-3, H-CDR1-3 и L-CDR1-3 которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 318-323, соответственно;

b) антитело против PD-1, VH и VL которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 226 и 227, соответственно; антитело против TIM-3, VH и VL которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 7 и 4, соответственно; и антитело против LAG-3, VH и VL которого содержат аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 316 и 317, соответственно; или

c) антитело против PD-1, содержащее HC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 226 и 375, и LC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 227 и 379; антитело против TIM-3, содержащее HC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 7 и 377, и LC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 4 и 378; и антитело против LAG-3, содержащее HC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 316 и 375, и LC, которая содержит аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 317 и 378.

[0040] Антитела в композиции можно предоставить в равных количествах. В некоторых вариантах осуществления фармацевтическая композиция предназначена для применения при лечении пациента-человека в способе, описанном в настоящем документе. В отдельных вариантах осуществления фармацевтическая композиция предназначена для применения для усиления иммунитета у нуждающегося в этом пациента-человека, например, для лечения рака.

[0041] В настоящем изобретении также представлено антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть, которые описаны в настоящем документе, для применения в способе лечения, описанном в настоящем документе, например, для усиления иммунитета и/или лечения рака у нуждающегося в этом пациента-человека в комбинации с антителом против TIM-3 или его антигенсвязывающей частью и/или антителом против LAG-3 или его антигенсвязывающей частью. Антитело против TIM-3 и антитело против LAG-3 можно выбирать из тех, что описаны в настоящем документе.

[0042] В настоящем изобретении также представлено антитело против PD-1 или его антигенсвязывающая часть, которые описаны в настоящем документе, для применения при лечении пациента-человека в способе, описанном в настоящем документе.

[0043] В настоящем изобретении также представлено применение антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части, которые описаны в настоящем документе, для получения лекарственного средства для усиления иммунитета и/или лечения рака у нуждающегося в этом пациента (например, пациента-человека) в комбинации с антителом против TIM-3 или его антигенсвязывающей частью и/или антителом против LAG-3 или его антигенсвязывающей частью. В некоторых вариантах осуществления в настоящем изобретении предложено применение антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части, которые описаны в настоящем документе, и антитела против TIM-3 или его антигенсвязывающей части и/или антитела против LAG-3 или его антигенсвязывающей части, для получения лекарственного средства для усиления иммунитета у нуждающегося в этом пациента-человека, например, для лечения рака. Антитело против TIM-3 и антитело против LAG-3 можно выбирать из тех, что описаны в настоящем документе.

[0044] В настоящем изобретении также представлено применение антитела против PD-1 или его антигенсвязывающей части, которые описаны в настоящем документе, для получения лекарственного средства для лечения пациента-человека в способе, описанном в настоящем документе.

[0045] В настоящем изобретении дополнительно представлено готовое изделие, содержащее антитело против PD-1 или его антигенсвязывающую часть, которые описаны в настоящем документе, в комбинации с антителом против TIM-3 или его антигенсвязывающей частью и/или антителом против LAG-3 или его антигенсвязывающей частью, причем указанное готовое изделие подходит для усиления иммунитета и/или лечения рака у пациента (такого как пациент-человек), например, в способе лечения, описанном в настоящем документе. Антитело против TIM-3 и антитело против LAG-3 можно выбирать из тех, что описаны в настоящем документе.

Краткое Описание чертежей

[0046] На фиг. 1 представлен набор графиков, показывающий процентное увеличение уровней IFN-γ у трех пар доноров (Панели A-C) после лечения 10 мкг/мл контрольного антитела (IgG1 LALA или IgG2), антитела против PD-1 12819, антитела 15086 против TIM-3.17145 или комбинации антител 12819 и 15086.17145 в соотношении 1:1 после 5 дней культивирования в анализе однонаправленной MLR (реакция смешанной культуры лимфоцитов). Каждая точка на графике представляет двойное значение, а среднее значение показано горизонтальной полосой.

[0047] На фиг. 2 представлен набор графиков, показывающий процентное увеличение уровней IFN-γ у трех пар доноров (Панели A-C) после лечения 10 мкг/мл контрольного антитела (IgG1 LALA или IgG2), антитела против PD-1 12819, антитела 15086 против TIM-3.17145 или комбинации антител 12819 и 15086.17145 в соотношении 1:1 после 5 дней культивирования в анализе двунаправленной MLR. Каждая точка на графике представляет двойное значение, а среднее значение показано горизонтальной полосой.

[0048] На фиг. 3 представлена пара графиков, показывающих действие антитела 15086 против TIM-3.17145 по сравнению с положительным контрольным антителом против PD-1 12819 на пролиферацию T-клеток в анализе однонаправленной MLR. Антитела добавляли до итоговой концентрации 25 мкг/мл и инкубировали с растворимыми антителами к CD3 (Панель B) или без них (Панель A) в течение 5 дней перед добавлением 1 μCi/лунку 3H-тимидина в течение дальнейших 18 часов. Включение 3H-тимидина в собранные клетки определяли с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика.

[0049] На фиг. 4 представлен график, показывающий действие антитела 15086 против TIM-3.17145 на секрецию IL-12p40 из полученных из моноцитов дендритных клеток, инкубированных в течение 5 дней с 10 мкг/мл антитела. Уровни IL-12p40 в супернатантах клеток определяли с использованием ELISA.

[0050] На фиг. 5 представлена пара графиков, показывающих уровни экспрессии выбранных маркеров активации в полученных из моноцитов дендритных клетках после лечения 25 мкг/мл антитела 15086 против TIM-3.17145 в течение 24 часов. На панели A показан анализ экспрессии генов нескольких маркеров активации и костимулирующих молекул. На панели B показано подтверждение повышенных уровней CD80 и Cd86 с использованием FACS. Показанные наложения гистограмм представляют дендритные клетки CD11c+, и числа рядом с гистограммами обозначают значения MFI (средней интенсивности флюоресценции).

[0051] На фиг. 6 представлен график, показывающий воздействие нацеливания TIM-3 на рост опухоли в CD34+ гуманизированной мышиной модели NSG-SGM3 с имплантированной ксенотрансплантатной моделью LG1306, полученной из легкого пациента-человека (PDX). Мышей лечили антителом против TIM-3 15086.17145 в начальной дозе 10 мг/кг с последующей 5 мг/кг 5x Q5D. Серая область обозначает период лечения. Данные представлены в виде средних значений ± SEM. ** p<0,01.

[0052] На фиг. 7 представлена пара графиков, показывающих усиленное воздействие на уровни IL-2 комбинирования антитела 12819 против PD-1 с антителом 15532 против LAG-3 и/или антителом 15086.17145 против TIM-3 в анализе SEB (стафилококкового энтеротоксина B) + PBMC (мононуклеарных клеток периферической крови) для двух пар доноров (Панели A и B). Столбики показывают секрецию IL-2 из PBMC, обработанных 10 мкг/мл указанных антител или смесей антител и SEB в течение 48 часов. Знаки над столбиками показывают раздельное лечение, которое значительно отличается (p<0,05) от контрольного антитела (*), или смеси двух антител, которые значительно отличаются от лечения составляющими отдельными антителами (#).

[0053] На фиг. 8 представлена пара графиков, показывающих действие на рост опухоли 10 мг/кг антитела 12819 против PD-1, антитела C9B7W против LAG-3 (которое способно реагировать с LAG-3 мыши) или комбинации антител против PD-1 и против LAG-3 или лечение нейтральной основой в двух сингенных мышиных опухолевых моделях: MC38 (рак толстой кишки, Панель A) и ASB-XIV (рак легкого, Панель B). Серая область обозначает период лечения. Данные представлены в виде средних значений ± SEM (стандартная ошибка среднего значения). ** p<0,01, ***p<0,001, ****p<0,0001.

[0054] На фиг. 9 представлен график, показывающий действие на рост опухоли 10 мг/кг антитела 12819 против PD-1, антитела 15011 против LAG-3 или комбинации антител против PD-1 и против LAG-3 или лечение нейтральной основой, в ASB-XIV сингенной мышиной опухолевой модели. Серая область обозначает период лечения. Данные представлены в виде средних значений ± SEM. * p<0,05, ****p<0,0001.

[0055] На фиг. 10 представлена пара графиков, показывающих действие на рост опухоли антитела 12819 против PD-1, антитела 5D12 против TIM-3 или комбинации антител против PD-1 и против TIM-3 или действие лечения нейтральной основой на рост опухоли в двух сингенных мышиных опухолевых моделях: ASB-XIV (рак легкого, Панель A) и Sa1N (фибросаркома, Панель B). Лечение антителами у мышей с опухолями ASB-XIV проводили в дозе 10 мг/кг/мишень. Мышам с опухолями Sa1N вводили антитела против PD-1 и против TIM-3 в дозе 1 мг/кг и 10 мг/кг, соответственно. Серая область обозначает период лечения. Данные представлены в виде средних значений ± SEM. ** p<0,01, ***p<0,001, и ****p<0,0001.

[0056] На фиг. 11 представлен набор графиков, показывающих действие на рост опухоли 10 мг/кг антитела 12819 против PD-1, антитела 15086 против TIM-3 или комбинации антител против PD-1 и против TIM-3 или лечение нейтральной основой в модели человеческого ксенотрансплантата опухоли, где мышам с воссозданными PBMC человека имплантировали клеточную линию A375 меланомы человека. В каждом эксперименте использовали одного человека-донора PBMC, и на трех графиках представлено три разных донора (Панели A-C). Серая область обозначает период лечения. Данные представлены в виде средних значений ± SEM. *p<0,05 и **p<0,01.

[0057] На фиг. 12 представлен набор графиков, показывающих действие отдельного и двойного нацеливания PD-1 и TIM-3 на процентное значение выживания (Панель A) и рост опухоли (Панели B-E) у NOD-scid мышей с имплантированной смесью PBMC человека и клеток меланомы A375. Мышей лечили антителом 12819 против PD-1, антителом 15086.17145 против TIM-3 или комбинацией антител против PD-1 и против TIM-3. Лечение антителами проводили в дозе 10 мг/кг три раза в неделю для каждого антитела. Серая область обозначает период лечения. Данные на панели A представлены в виде процентного значения мышей с размером опухоли <400 мм³ в каждой группе лечения с течением времени.

[0058] На фиг. 13 представлен набор графиков, показывающих влияние отдельного, двойного и тройного нацеливания PD-1, LAG-3 и TIM-3 на процентное значение выживания (Панель A) и рост опухоли (Панели B-H) в сингенной опухолевой модели ASB-XIV с использованием антитела 12819 против PD-1, антитела C9B7W против LAG-3, антитела 5D12 против TIM-3, комбинации антител против PD1 и против LAG3, комбинации антител против PD1 и против TIM-3 или «тройного комбинирования» (которое относится к комбинации антител против PD-1, против LAG-3 и против TIM-3). Лечение антителами проводили в дозе 10 мг/кг для каждого антитела. Серая область обозначает период лечения.

Подробное Описание Изобретения

[0059] В настоящем изобретении предложены новые комбинированные лекарственные средства и композиции, которые нацелены на PD-1 человека, TIM-3 человека и/или LAG-3 человека за счет использования антител, которые связывают эти мишени. Лекарственные средства и композиции можно использовать для усиления иммунной системы у пациента-человека, такого как онкопациент. В рамках настоящего изобретения если не указано иное «PD-1» относится к PD-1 человека. Полипептидная последовательность PD-1 человека доступна под учетным номером Uniprot Q15116, показанном в данном документе, как SEQ ID NO: 388. В рамках настоящего изобретения если не указано иное «TIM-3» относится к TIM-3 человека. Полипептидная последовательность TIM-3 человека доступна под учетным номером Uniprot Q8TDQ0, показанном в данном документе, как SEQ ID NO: 389. В рамках настоящего изобретения если не указано иное «LAG-3» относится к LAG-3 человека. Полипептидная последовательность LAG-3 человека доступна под учетным номером Uniprot P18627, показанные в данном документе, как SEQ ID NO: 390.

[0060] Термин «антитело» (Ab) или «иммуноглобулин» (Ig), в рамках настоящего изобретения относится к тетрамеру, содержащему две тяжелые (H) цепи (приблизительно 50-70 кДа) и две легкие (L) цепи (приблизительно 25 кДа), взаимосвязанные дисульфидными связями. Каждая тяжелая цепь состоит из вариабельного домена тяжелой цепи (VH) и константной области тяжелой цепи (CH). Каждая легкая цепь состоит из вариабельного домена легкой цепи (VL) и константной области легкой цепи (CL). Домены VH и VL можно дополнительно подразделить на области гипервариабельности, называемые «определяющие комплементарность области» (CDR), перемежающиеся с областями, которые являются более консервативными, называемыми «каркасные области» (FR). Каждая VH и VL состоит из трех CDR (H-CDR в настоящем документе обозначает CDR из тяжелой цепи; а L-CDR в настоящем документе обозначает CDR из легкой цепи) и четырех FR, расположенных от аминоконца к карбоксильному концу в следующем порядке: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. Назначение номеров аминокислот в тяжелой или легкой цепе может происходить в соответствии с определениями IMGT® (Lefranc et al. Dev Comp Immunol 27(1):55-77 (2003)); или определениями Kabat, Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD (1987 и 1991)); Chothia & Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); или Chothia et al. Nature 342:878-883 (1989). Если не указано иное, все номера аминокислотных остатков антител, упоминаемых в этом раскрытии, представляют собой номера по схеме нумерации IMGT®.

[0061] Термин «рекомбинантное антитело» относится к антителу, которое экспрессируется из клетки или клеточной линии, содержащему нуклеотидную последовательность (последовательности), которые кодируют антитело, причем указанная нуклеотидная последовательность (последовательности) не связаны естественным образом с клеткой.

[0062] Термин «выделенный белок», «выделенный полипептид» или «выделенное антитело» относится к белку, полипептиду или антителу, которые из-за своего происхождения или источника получения (1) не связаны с природно ассоциированными компонентами, которые его сопровождают в нативном состоянии, (2) не содержат других белков того же вида, (3) экспрессируются клеткой другого вида и/или (4) не встречаются в природе. Таким образом, полипептид, который синтезирован химически или синтезирован в клеточной системе, отличающейся от клетки, из которой он естественным образом происходит, будет «выделен» из его природно ассоциированных компонентов. Белок также можно сделать по существу не содержащим природно ассоциированных компонентов путем выделения с использованием технологий очистки белков, хорошо известных в данной области.

[0063] Термин «аффинность» относится к мере притяжения между антигеном и антителом. Присущую силу притяжения антитела для антигена обычно выражают в виде константы равновесия аффинности связывания (KD) конкретного взаимодействия антитело-антиген. Считается, что антитело специфически связывается с антигеном, когда KD составляет ≤ 1 мМ, предпочтительно ≤ 100 нМ. Константу аффинности связывания KD можно измерять, например, с помощью поверхностного плазмонного резонанса (SPR) (BIAcoreTM) или биослойной интерферометрии, например, с использованием системы IBIS MX96 SPR от IBIS Technologies, системы ProteOnTM XPR36 SPR от Bio-Rad или системы OctetTM от ForteBio.

[0064] Термин «koff» относится к константе скорости диссоциации конкретного взаимодействия антитело-антиген. Константу скорости диссоциации koff можно измерять, например, с помощью биослойной интерферометрии, например, с использованием одной из перечисленных выше систем.

[0065] Термин «эпитоп» в рамках настоящего изобретения относится к участку (детерминанте) антигена, который специфически связывается с антителом или связанной молекулой, такой как биспецифическая связывающая молекула. Эпитопные детерминанты обычно состоят из химически активных поверхностных групп молекул, таких как боковые цепи аминокислот или углеводов или сахаров, и обычно имеют специфические трехмерные структурные характеристики, а также специфические характеристики заряда. Эпитоп может быть «линейным» или «конформационным». В линейном эпитопе все точки взаимодействия между белком (например, антигеном) и взаимодействующей молекулой (такой как антитело) расположены линейно вдоль первичной аминокислотной последовательности белка. В конформационном эпитопе точки взаимодействия расположены поперек аминокислотных остатков на белке, которые отделены друг от друга в первичной аминокислотной последовательности. После определения нужного эпитопа на антигене можно получать антитела к этому эпитопу с использованием технологий, хорошо известных в данной области. Например, антитело к линейному эпитопу можно получать, например, путем иммунизации животного пептидом, имеющим аминокислотные остатки линейного эпитопа. Антитело к конформационному эпитопу можно получать, например, путем иммунизации животного мини-доменом, содержащим соответствующие аминокислотные остатки конформационного эпитопа. Антитело к конкретному эпитопу также можно получить, например, путем иммунизации животного интересующей молекулой-мишенью или соответствующей ее частью, затем скрининга на связывание с эпитопом.

[0066] Связывается ли антитело с тем же самым эпитопом, что и антитело, которое описано в настоящем документе, или конкурирует за связывание с ним, можно определить за счет использования способов, известных в данной области, включая, без ограничения, конкурентные анализы, эпитоп-специфическая сортировка и аланиновое сканирование. В некоторых вариантах осуществления тестируемое антитело и антитело, которое описано в настоящем документе, связывают по меньшей мере с одним общим остатком (например, по меньшей мере с двумя, тремя, четырьмя, пятью, шестью, семью, восемью или девятью остатками) на белке-мишени (т.е. TIM-3, PD-1 или LAG-3). В дополнительных вариантах осуществления контактные остатки в белке-мишени полностью идентичны между тестируемым антителом и антителом, которое описано в настоящем документе. В одном варианте осуществления обеспечивают связывание антитела, которое описано в настоящем документе, с белком-мишенью в условиях насыщения, а затем измеряют способность тестируемого антитела связываться с белком-мишенью. Если тестируемое антитело способно связываться с белком-мишенью одновременно с эталонным антителом, то тестируемое антитело связывается с другим эпитопом, чем эталонное антитело. Однако, если тестируемое антитело не способно одновременно связываться с белком-мишенью, то тестируемое антитело связывается с тем же самым эпитопом, перекрывающимся эпитопом или эпитопом, который находится в непосредственной близости к эпитопу, связанному антителом, которое описано в настоящем документе. Этот эксперимент можно проводить с использованием, например, ELISA, RIA, BIACORETM, SPR, биослойной интерферометрии или проточной цитометрии. Для тестирования, конкурирует ли антитело с другим антителом, можно применить описанный выше метод конкуренции в двух направлениях, т.е. определение, блокирует ли известное антитело тестируемое антитело и наоборот. Подобные эксперименты с перекрестной конкуренцией можно проводить, например, с использованием прибора IBIS MX96 SPR или системы OctetTM.

[0067] Термин «химерное антитело» в самом широком смысле относится к антителу, которое содержит одну или более областей из одного антитела и одну или более областей из одного или более других антител, обычно это антитело, которое имеет частично человеческое происхождение, а частично нечеловеческое происхождение, т.е. частично получено от нечеловеческого животного, например, мыши, крысы или другого грызуна или птицы, такой как курица. Химерные антитела являются предпочтительными по сравнению с нечеловеческими антителами, чтобы снизить риск антительного ответа у человека, например, ответа человеческих противомышиных антител в случае мышиного антитела. Примером обычного химерного антитела является антитело, в котором последовательности вариабельного домена являются мышиными, тогда как последовательности константной области являются человеческими. В случае химерного антитела нечеловеческие части можно подвергать дополнительному изменению, чтобы гуманизировать антитело. Химерные антитела, описанные в настоящем документе, имеют куриные последовательности вариабельного домена и человеческие последовательности константной области.

[0068] Термин «гуманизировать» относится к тому факту, что, когда антитело имеет полностью или частично нечеловеческое происхождение (например, мышиное или куриное антитело, полученное в результате иммунизации мышей или куриц, соответственно, интересующим антигеном, или химерное антитело на основе такого мышиного или куриного антитела), можно заменить некоторые аминокислоты, в частности в каркасных областях и константных областях тяжелой и легкой цепей, чтобы избежать или минимизировать иммунный ответ у людей. Хотя невозможно точно спрогнозировать иммуногенность и, следовательно, антительный ответ у человека на конкретное антитело, нечеловеческие антитела имеют тенденцию быть более иммуногенными у людей, чем человеческие антитела. Было показано, что химерные антитела, где инородные константные области (например, грызунов или птиц) были заменены последовательностями человеческого происхождения, обычно являются менее иммуногенными, чем антитела полностью инородного происхождения, и в терапевтических антителах наблюдается тенденция к гуманизированным или полностью человеческим антителам. Таким образом, чтобы снизить риск антительного ответа у человека, можно гуманизировать химерные антитела или другие антитела нечеловеческого происхождения.

[0069] Для химерных антител гуманизация обычно включает модифицирование каркасных областей последовательностей вариабельного домена. В связи с гуманизацией чаще всего не следует изменять аминокислотные остатки, которые являются частью определяющих комплементарность областей (CDR), хотя в некоторых случаях может быть необходимо изменить отдельные аминокислотные остатки CDR, например, для удаления сайта гликозилирования, сайта дезамидирования, сайта изомеризации аспартата или ненужного остатка цистеина или метионина. N-связанное гликозилирование происходит путем присоединения олигосахаридной цепи к остатку аспарагина в трипептидной последовательности Asn-X-Ser или Asn-X-Thr, где X может быть любая аминокислота за исключением Pro. Удаление сайта N-гликозилирования можно обеспечить за счет мутации либо остатка Asn, либо Ser/Thr с другим остатком, предпочтительно путем консервативного замещения. Дезамидирование остатков аспарагина и глютамина может происходить в зависимости от таких факторов, как pH и поверхностное воздействие. Особенно чувствительны к дезамидированию остатки аспарагина, прежде всего, когда они присутствуют в последовательности Asn-Gly, и в меньшей степени в других дипептидных последовательностях, таких как Asn-Ala. Когда в последовательности CDR представлен такой сайт дезамидирования, в частности Asn-Gly, может быть поэтому желательно удалить сайт, обычно путем консервативного замещения, для удаления одного из вовлеченных остатков.

[0070] В данной области известно множество способов гуманизации последовательности антител; см., например, обзор Almagro & Fransson, Front Biosci. 13: 1619-1633 (2008). Одним из обычно используемых способов является трансплантация CDR, которая, например, для химерного антитела, полученного у мыши, включает идентификацию аналогов гена зародышевой линии человека по генам вариабельного домена мыши и трансплантацию в этот каркас последовательностей мышиной CDR. Специфичность взаимодействия антитела с антигеном-мишенью заключается главным образом в аминокислотных остатках, расположенных в шести CDR тяжелой и легкой цепи. Следовательно, аминокислотные последовательности в CDR гораздо более вариабельны между отдельными антителами, чем последовательности вне CDR. Поскольку последовательности CDR ответственны за большинство взаимодействий антитело-антиген, можно экспрессировать рекомбинантные антитела, которые имитируют свойства специфического встречающегося в природе антитела или, в более общем случае, любого специфического антитела с данной аминокислотной последовательностью, например, путем конструирования векторов экспрессии, которые экспрессируют последовательности CDR из конкретного антитела, трансплантированные в каркасные последовательности из другого антитела. В результате, можно «гуманизировать» нечеловеческое антитело и при этом по существу сохранить специфичность связывания и аффинность исходного антитела. Трансплантация CDR может быть основана на определениях CDR Кабата, хотя в более поздней публикации (Magdelaine-Beuzelin et al., Crit Rev.Oncol Hematol. 64: 210-225 (2007)) высказано предположение, что определение IMGT® (международная информационная система® ImMunoGeneTics, www.imgt.org) может улучшить результат гуманизации (см. Lefranc et al., Dev. Comp Immunol. 27: 55-77 (2003)).

[0071] В некоторых случаях трансплантация CDR может снижать специфичность и аффинность связывания и, следовательно, биологическую активность нечеловеческого антитела с трансплантированной CDR по сравнению с родительским антителом, из которого получены CDR. Для восстановления специфичности и аффинности связывания родительского антитела в выбранные позиции антитела с трансплантированной CDR, обычно в каркасных областях, можно вводить обратные мутации (иногда называемые «восстановление каркаса»). Позиции для возможных обратных мутаций можно идентифицировать с использованием информации доступной в литературе и базах данных антител. Аминокислотными остатками, которые являются кандидатами для обратных мутаций, обычно являются остатки, которые находятся на поверхности молекулы антитела, тогда как остатки, которые находятся внутри или которые имеют низкую степень воздействия на поверхность, обычно не будут изменяться.

[0072] Альтернативной технологией гуманизации для трансплантации CDR и обратной мутации является изменение поверхности, при которой не открытые на поверхности остатки нечеловеческого происхождения сохраняют, в то время как остатки на поверхности изменяют на остатки человека.

[0073] В некоторых случаях для улучшения аффинности связывания с эпитопом-мишенью может быть необходимо изменить один или более аминокислотных остатков CDR. Это известно как «созревание аффинности». В данной области известны различные способы созревания аффинности, например, метод сканирующего насыщающего мутагенеза in vitro, описанный Burks et al. Proc Natl Acad Sci USA, 94:412-417 (1997), и метод поэтапного созревания аффинности in vitro Wu et al. Proc Natl Acad Sci USA 95:6037-6042 (1998).

[0074] Термин «человеческое антитело» относится к антителу, в котором последовательности вариабельного домена и константной области получают из человеческих последовательностей. Термин охватывает антитела с последовательностями, которые получены из генов человека, но были модифицированы, например, для уменьшения иммуногенности, увеличения аффинности и/или увеличения стабильности. Кроме того, термин охватывает антитела, полученные рекомбинантно с использованием полученных от человека последовательностей в нечеловеческих клетках, которые могут передавать гликозилирование, не характерное для клеток человека. Термин также охватывает антитела, полученные в трансгенных нечеловеческих организмах с генами антител человека (например, у крыс OmniRat®).

[0075] В рамках настоящего изобретения термин «антигенсвязывающая часть» антитела (или просто «часть антитела»), относится к одному или более участкам или фрагментам антитела, которые сохраняют способность специфически связываться с антигеном (например, TIM-3 человека, PD-1 человека или LAG-3 человека или их частями). Было показано, что некоторые фрагменты полноразмерного антитела могут выполнять антигенсвязывающую функцию антитела. Примеры связывающих фрагментов, охватываемых термином «антигенсвязывающая часть», включают в себя (i) фрагмент Fab: моновалентный фрагмент, состоящий из доменов VL, VH, CL и CH1; (ii) фрагмент F(ab')2: бивалентный фрагмент, содержащий два фрагмента Fab, связанных дисульфидным мостиком в шарнирной области; (iii) фрагмент Fd, состоящий из доменов VH и CH1; (iv) фрагмент Fv, состоящий из доменов VL и VH одного плеча антитела, (v) фрагмент dAb, который состоит из домена VH; и (vi) выделенную определяющую комплементарность область (CDR), способную специфически связываться с антигеном. Кроме того, хотя два домена фрагмента Fv, VL и VH кодируются отдельными генами, их можно объединить, используя рекомбинантные способы, синтетическим линкером, который позволяет получить их в виде единой белковой цепи, в которой пара доменов VL и VH образует моновалентные молекулы (известные как одноцепочечные Fv (scFv)). Также в рамках изобретения находятся антигенсвязывающие молекулы, содержащие VH и/или VL. В случае VH молекула может также содержать одно или более из области CH1, шарнира, CH2 или CH3. Подобные одноцепочечные антитела также предполагают охват термином «антигенсвязывающая часть» антитела. Также охвачены другие формы одноцепочечных антител, такие как диатела. Диатела представляют собой бивалентные, биспецифические антитела, в которых домены VH и VL экспрессируются на одной полипептидной цепи, но с использованием линкера, который является слишком коротким, чтобы обеспечить спаривание между двумя доменами на одной и той же цепи, тем самым вынуждая домены спариваться с комплементарными доменами другой цепи и создавая два антигенсвязывающих сайта.

[0076] Части антител, такие как фрагменты Fab и F(ab')2, можно получать из целых антител с использованием общепринятых методов, таких как расщепление целых антител папаином или пепсином. Кроме того, антитела, части антител и молекулы иммуноадгезии можно получать с использованием стандартных методов рекомбинантной ДНК, например, которые описаны в настоящем документе.

[0077] Класс (изотип) и подкласс описанных в настоящем документе антител можно определить любым способом, известным в данной области. Обычно, класс и подкласс антитела можно определить с использованием антител, которые являются специфическими для конкретного класса и подкласса антитела. Такие антитела имеются в продаже. Класс и подкласс можно определить с помощью ELISA и вестерн-блоттинга, а также других методов. Альтернативно, класс и подкласс можно определить путем секвенирования всех или части константных областей тяжелых и/или легких цепей антител, сравнения их аминокислотных последовательностей с известными аминокислотными последовательностями различных классов и подклассов иммуноглобулинов и определения класса и подкласса антител. Предпочтительным изотипом согласно настоящему изобретению является изотип IgG.

[0078] При ссылке на конкретные аминокислотные остатки в данной позиции последовательности антитела указание, например, «35S» относится к позиции и остатку, то есть в этом случае указывает на наличие остатка серина (S) в позиции 35 последовательности. Точно так же указание, например, «13Q+35S» относится к двум остаткам в соответствующих позициях. Если не указано иное, все номера аминокислотных остатков антител, упомянутые в этом описании, соответствуют номерам в схеме нумерации IMGT®.

Антитела против PD-1

[0079] В некоторых вариантах осуществления антитела против PD-1, раскрытые в настоящем документе, могут быть химерными, с вариабельными доменами, полученными от куриц, и человеческими константными областями, или могут быть гуманизированными.

[0080] Антитела против PD-1, раскрытые в настоящем документе, могут быть обозначены либо 5-значным номером, например, «12819», либо 10-значным номером, например, «12819.15384». В рамках настоящего изобретения 5-значный номер относится ко всем антителам, имеющим последовательности CDR1-3 тяжелой и легкой цепей, показанные для этого номера, тогда как применение 10-значного номера относится к конкретному гуманизированному варианту. Например, 12819.15384 представляет собой конкретный гуманизированный вариант, имеющий последовательности CDR антитела 12819. 5-значный номер охватывает, например, 10-значные варианты, которые являются идентичными за исключением некоторых изменений в FR (например, отсутствие остатков SY на N-конце зрелой легкой цепи или наличие остатков SS вместо SY). Эти модификации не изменяют функциональные (например, антигенсвязывающие) свойства антител.

[0081] В некоторых вариантах осуществления комбинированное лекарственное средство или композиция содержит антитело против PD-1 или его антигенсвязывающую часть, причем антитело против PD-1 представляет собой антитело, упоминаемое в настоящем документе, как антитело 12819.15384, 12748.15381, 12748.16124, 12865.15377, 12892.15378, 12796.15376, 12777.15382, 12760.15375 или 13112.15380 или вариант любого из них, причем вариант может, например, содержать некоторые минимальные аминокислотные изменения относительно указанного антитела (например, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 аминокислотных изменений, которые могут быть, например, в каркасных областях) без потери антигенсвязывающей специфичности антитела.

[0082] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 конкурирует с любым из антител 12819.15384, 12748.15381, 12748.16124, 12865.15377, 12892.15378, 12796.15376, 12777.15382, 12760.15375 и 13112.15380 за связывание с PD-1 человека или связывается с тем же самым эпитопом PD-1 человека, что и они.

[0083] В некоторых вариантах осуществления любое из антител против PD-1 или антигенсвязывающих частей, описанных в настоящем документе, может конкурировать или перекрестно конкурировать с антителами 12865, 12892 и 12777 (например, антителами 12865.15377, 12892.15378 и 12777.15382) за связывание с PD-1. В некоторых вариантах осуществления любое из антител против PD-1 или антигенсвязывающих частей, описанных в настоящем документе, может конкурировать или перекрестно конкурировать с антителом 12819 (например, антителом 12819.15384) за связывание с PD-1. В некоторых вариантах осуществления любое из антител против PD-1 или антигенсвязывающих частей, описанных в настоящем документе, может конкурировать или перекрестно конкурировать с антителами 12760 и 13112 (например, антителами 12760.15375 и 13112.15380) за связывание с PD-1. В некоторых вариантах осуществления антитело имеет формат IgG1 или IgG2. В некоторых вариантах осуществления антитело имеет формат IgG1.

[0084] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 конкурирует или перекрестно конкурирует с антителом, CDR1-3 тяжелой цепи (H) и CDR1-3 легкой цепи (L) которого содержат, соответственно, SEQ ID NO: 228-233, 238-243, 248-253, 258-263, 268-273, 278-283, 288-293 или 298-303, за связывание с PD-1 человека, или связывается с тем же самым эпитопом PD-1 человека, что и оно.

[0085] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 содержит H-CDR3, содержащую аминокислотную последовательность H-CDR3 SEQ ID NO: 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290 или 300.

[0086] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 содержит H-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности H-CDR1-3, соответственно, из SEQ ID NO: 228-230, 238-240, 248-250, 258-260, 268-270, 278-280, 288-290 или 298-300.

[0087] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 имеет VH, аминокислотная последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична SEQ ID NO: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286 или 296.

[0088] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 имеет VH, который содержит SEQ ID NO: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286 или 296.

[0089] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 имеет VH, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична SEQ ID NO: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286 или 296; и CH, последовательность которой по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична SEQ ID NO: 375.

[0090] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 имеет HC, которая содержит аминокислотную последовательность VH SEQ ID NO: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286 или 296 и аминокислотную последовательность CH SEQ ID NO: 375.

[0091] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 имеет L-CDR3, содержащую аминокислотную последовательность L-CDR3 SEQ ID NO: 233, 243, 253, 263, 273, 283, 293 или 303.

[0092] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 содержит L-CDR1-3, содержащие аминокислотные последовательности L-CDR1-3, соответственно, SEQ ID NO: 231-233, 241-243, 251-253, 261-263, 271-273, 281-283, 291-293 или 301-303.

[0093] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 имеет VL, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности VL SEQ ID NO: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297 или 392.

[0094] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 имеет VL, который содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297 или 392.

[0095] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 имеет VL, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности VL SEQ ID NO: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297 или 392; и CL, последовательность которой по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична SEQ ID NO: 379.

[0096] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 имеет LC, которая содержит аминокислотную последовательность VL SEQ ID NO: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297 или 392 и аминокислотную последовательность CL SEQ ID NO: 379.

[0097] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 содержит любую из приведенных выше последовательностей тяжелой цепи и любую из приведенных выше последовательностей легкой цепи.

[0098] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 содержит H-CDR3 и L-CDR3, содержащие аминокислотные последовательности H-CDR3 и L-CDR3, соответственно, из SEQ ID NO: 230 и 233, 240 и 243, 250 и 253, 260 и 263, 270 и 273, 280 и 283, 290 и 293 или 300 и 303.

[0099] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 содержит H-CDR1-3 и L-CDR1-3, содержащие последовательности H-CDR1-3 и L-CDR1-3, соответственно, из SEQ ID NO: 228-233, 238-243, 248-253, 258-263, 268-273, 278-283, 288-293 или 298-303.

[0100] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 содержит VH, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286 или 296, и VL, последовательность которого по меньшей мере на 90% (например, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99%) идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297 или 392.

[0101] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 имеет VH, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286 или 296, и VL, который содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297 или 392.

[0102] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 имеет HC, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 226, 236, 246, 256, 266, 276, 286 или 296 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 375; и LC, которая содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 227, 237, 247, 257, 267, 277, 287, 297 или 392 и аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 379.

[0103] В некоторых вариантах осуществления антитело против PD-1 содержит аминокислотные последовательности H-CDR1-3 и L-CDR1-3 из: