УПАКОВКА И СПОСОБ ЕЕ ПОЛУЧЕНИЯ Российский патент 2023 года по МПК A61K38/47 A61K9/19 A61P43/00 A01J1/00 

Область техники

[0001]

Настоящее изобретение относится к упаковке, включающей фармацевтическую композицию, содержащую фермент в качестве активного ингредиента, которая помещается в контейнер, и к способу ее получения.

Уровень техники

[0002]

Фармацевтические композиции, содержащие в качестве активных ингредиентов ферменты, разрушающие сахариды, используют для различных заболеваний. Например, фармацевтические композиции для лечения лизосомной болезни, такие как Aldurazyme® (альдуразим), Elaprase® (элапраза), Naglazyme® (наглазим), Replagal® (реплагал) и Vimizim® (вимизим), в которых активные ингредиенты представляют собой ферменты, разрушающие сахариды, в количестве от примерно 3 мг/флакон до примерно 10 мг/флакон, продаются в виде жидких лекарственных форм для инъекций. Кроме того, в международной публикации No. WO 2012/081227, например, описано терапевтическое средство для лечения грыжи межпозвоночного диска, содержащее в качестве активного ингредиента фермент, разрушающий сахарид (в частности, хондроитиназу ABC).

Сущность изобретения

[0003]

Лиофилизированные препараты превосходят жидкие препараты с точки зрения снижения себестоимости реализации. С другой стороны, титры фермента часто уменьшаются из-за лиофилизации, и поэтому в производство лиофилизированных препаратов были внесены модификации, позволяющие получать продукты с желаемой ферментативной активностью. Например, в примерах международной публикации No. WO 2012/081227 описан пример, в котором, учитывая снижение титра в результате лиофилизации небольшого количества фермента, лиофилизированный препарат получают после того, как раствор фермента, приготовленный в большом избытке единичной дозы, как количество, необходимое для разовой дозы, был помещен в контейнер. Как описано в этой публикации, после того, как полученный лиофилизированный препарат был растворен и разбавлен, его отделяют в необходимом количестве для получения дозируемого раствора, содержащего активный компонент в количестве, необходимом для разовой дозы.

[0004]

В способе, где сначала получают раствор фермента в количестве, превышающем стандартную дозу, а затем отделяют часть в виде разовой дозы, оставшийся фермент, который не используют для введения, выбрасывают. Таким образом, оставшийся дорогостоящий фермент в некоторых случаях расходуется впустую. Кроме того, поскольку требуется процедура отделения небольшого количества от полученного раствора фермента, также необходимо помнить о потере активности во время процедуры.

[0005]

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что снижение титра, которое происходит во время получения упаковки, содержащей лиофилизированный препарат, неожиданно увеличивается, если количество содержащегося фермента, разрушающего сахарид, небольшое. Авторы настоящего изобретения также обнаружили, что это снижение титра особенно ощутимо, когда количество содержащегося фермента, разрушающего сахарид, находится на более низком уровне, чем в обычной фармацевтической композиции.

[0006]

Следовательно, целью настоящего изобретения является создание упаковки, включающей фармацевтическую композицию, содержащую фермент, разрушающий сахарид, в качестве активного ингредиента, находящуюся в контейнере, который подавляет снижение титра, когда количество фермента, разрушающего сахарид, содержащегося в контейнере, является небольшим.

[0007]

Один аспект настоящего изобретения относится к упаковке, включающей фармацевтическую композицию и контейнер, где фармацевтическая композиция представляет собой лиофилизированный препарат, включающий фермент, разрушающий сахарид, в качестве активного ингредиента, контейнер содержит фармацевтическую композицию и имеет по меньшей мере один материал, выбранный из группы, состоящей из тонкой керамики, силиконовых смол и фторсодержащих смол, на внутренней поверхности контейнера.

[0008]

Другой аспект настоящего изобретения относится к способу получения упаковки, включающей фармацевтическую композицию и контейнер, содержащий фармацевтическую композицию, причем способ включает стадию помещения раствора, включающего фермент, разрушающий сахарид, в контейнер, имеющий по меньшей мере один материал, выбранный из группы, состоящей из тонкой керамики, силиконовых смол и фторсодержащих смол на его внутренней поверхности, и стадию лиофилизации раствора для получения фармацевтической композиции.

Описание вариантов осуществления

[0009]

В соответствии с одним аспектом настоящего изобретения, можно обеспечить упаковку, включающую фармацевтическую композицию, содержащую фермент, разрушающий сахарид, содержащуюся в контейнере, где подавляется снижение титра, вызываемое низким количеством фермента, разрушающего сахарид, содержащегося в контейнере.

[0010]

Настоящее изобретение далее будет описано подробно, с пониманием того, что настоящее изобретение не ограничивается описанными вариантами осуществления. Используемый в настоящем описании термин «стадия» относится не только к независимой стадии, но также включает любую стадию, которую нельзя четко отличить от других стадий, если достигнута первоначальная цель стадии. Когда в композиции присутствуют несколько веществ, соответствующих каждому компоненту, содержание каждого компонента в композиции означает общее количество множества веществ в композиции, если не указано иное.

[0011]

(1) Фармацевтическая композиция и упаковка

Фармацевтическая композиция представляет собой лиофилизированный препарат, содержащий в качестве активного ингредиента разрушающий сахариды фермент. Фармацевтическая композиция может представлять собой стандартную лекарственную форму. Используемый в настоящем описании термин «стандартная доза» означает необходимое количество, полученное для однократного введения, причем стандартную лекарственную форму формулируют с фармацевтической композицией в стандартной дозе. Стандартная доза может включать добавленное количество, необходимое для получения раствора для однократного введения, в дополнение к эффективной дозе.

[0012]

Упаковка включает, по меньшей мере, контейнер и фармацевтическую композицию, содержащуюся в контейнере.

[0013]

«Фермент, разрушающий сахарид» конкретно не ограничен, при условии, что он может использоваться в качестве лекарственного средства. Примеры ферментов, разрушающих сахарид, могут включать, например, ферменты, разлагающие гликозаминогликаны; гликозидазы; пептиды: N-гликаназа (PNGaseF, эндоглюкозидаза H и др.), α-L-идуронидаза, α-галактозидаза, β-галактозидаза, β-глюкуронидаза, β-глюкоцереброзидаза, идурсульфаза, идуронат-2-сульфатаза, N-ацетилгалактозамин-6-сульфатаза, N-ацетилгалактозамин-4-сульфатаза и др. Примеры ферментов, разлагающих гликозаминогликан, включают, например, кератаназы, такие как кератаназа I и кератаназа II; гепариназы, такие как гепариназа I, гепариназа II и гепариназа III; гепаритиназы, такие как гепаритиназа IV, гепаритиназа V, гепаритиназа T-I, гепаритиназа T-II, гепаритиназа T-III и гепаритиназа T-IV; хондроитиназы, такие как хондроитиназа ABC, хондроитиназа ACI, хондроитиназа ACII, хондроитиназа ACIII, хондроитиназа B и хондроитиназа C; гиалуронидазы, такие как гиалуронидаза, полученная из Actinomycetes, и гиалуронидазы, полученные из Streptococcus, и т.п. Примеры гликозидаз включают, например, микробную β-галактозидазу, α-галактозидазу и т.п.

[0014]

В одном варианте осуществления фермент, разрушающий гликозаминогликан, используется в качестве фермента, разлагающего сахариды. Ферменты, разрушающие гликозаминогликан, включают гиалуронидазы, хондроитиназы, гепариназы, кератаназы, гепараназы, гепаритиназы и т.п. Хондроитиназы являются предпочтительными сахарид-разрушающими ферментами, среди которых хондроитиназа ABC, хондроитиназа B, хондроитиназа ACI и хондроитиназа ACII являются более предпочтительными, и особенно предпочтительной является хондроитиназа ABC (также известная как кондолиаза). Хондроитиназа ABC представляет собой фермент, который расщепляет гиалуроновую кислоту, хондроитинсульфат, хондроитин, дерматансульфат и т.п., на дисахариды или олигосахариды, которые включают ненасыщенные сахара.

[0015]

Нет никаких особых ограничений на источник фермента, разрушающего сахарид. В одном предпочтительном варианте осуществления используют фермент микробного происхождения, разрушающий сахарид. Например, неограничивающие примеры микробов включают микробы, принадлежащие к роду Bacillus, Escherichia, Pseudomonas, Flavobacterium, Proteus, Arthrobacter, Streptococcus, Bacteroides, Aspergillus, Elizabethkingia, Streptomyces, и тому подобное. Когда ферментом, разрушающим сахарид, является хондроитиназа ABC, например, примером может быть фермент, полученный из Proteus vulgaris (например, Proteus vulgaris хондроитиназа ABC).

[0016]

Способ получения фермента, разрушающего сахарид, и т.п. особо не ограничен. Примерный способ получения фермента, разрушающего сахарид, включает стадию получения культуры микробов или клеток животных, которые продуцируют фермент, разрушающий сахарид, и стадию сбора фермента, разрушающего сахарид, из культивированного продукта.

[0017]

Фермент, разрушающий сахарид, продуцируемый микробами, может быть исходным продуктом микробов, или он может быть получен после модификации микробов с помощью метода генной инженерии и т.п., как описано ниже, для получения целевого фермента. Например, когда ферментом, разрушающим сахарид, является хондроитиназа ABC, он может быть получен путем культивирования микроба, такого как Proteus vulgaris, или он может быть получен методом генной инженерии с использованием ДНК, кодирующей хондроитиназу ABC и т.п. Фермент, разрушающий сахарид, может иметь ту же аминокислотную последовательность, что и исходный продукт организма, но в качестве альтернативы она может иметь делецию, замену и/или добавление и т.п., некоторых аминокислот, при условии, что намеченная цель лекарственного средства все еще достигается.

[0018]

Примеры микроорганизмов могут включать, например, микроорганизмы, принадлежащие Bacillus, Escherichia, Pseudomonas, Flavobacterium, Proteus, Arthrobacter, Streptococcus, Bacteroides, Aspergillus, Elizabethkingia и Streptomyces. Условия роста (например, культуральная среда, условия культивирования и т.п.) для микроорганизма могут быть установлены специалистом в данной области по требованию, если они выбраны в соответствии с используемым микроорганизмом. Используя микроорганизм для получения фермента, разрушающего сахарид, можно получать большие количества с меньшими затратами, чем при получении фермента, разрушающего сахарид, с использованием клеток животных.

[0019]

Способ получения фермента, разрушающего сахарид, может включать стадию введения рекомбинантного вектора, который экспрессирует ген, кодирующий целевой фермент, разрушающий сахарид, в хозяина. Используемым вектором может быть, например, подходящий вектор экспрессии (например, фаговый вектор, плазмидный вектор или тому подобное) (предпочтительно включающий регуляторную последовательность, такую как промотор), который способен экспрессировать введенный ген. Вектор выбирают соответствующим образом для клеток-хозяев. Более конкретно, примеры этих систем вектор-хозяин включают комбинации Escherichia coli (E. coli) с векторами экспрессии для прокариотических клеток, такими как серии pET, pTrcHis, pGEX, pTrc99, pKK233-2, pEZZ18, pBAD, pRSET и pSE420; или комбинации клеток млекопитающих, таких как клетки COS-7 или клетки HEK293, с векторами экспрессии клеток млекопитающих, такими как серия pCMV, серия pME18S или pSVL; а также клетки насекомых, дрожжи и клетки-хозяева Bacillus subtilis и т.п., и их различные соответствующие векторы.

[0020]

Также в качестве вышеописанных векторов можно использовать векторы, которые сконструированы таким образом, чтобы экспрессировать слитые белки белков, кодируемых перенесенными генами, с маркерными пептидами, сигнальными пептидами и т.п. Примеры таких пептидов включают, например, белок A, сигнальную последовательность инсулина, His-метку, FLAG, CBP (кальмодулин-связывающий белок), GST (глутатион-S-трансферазу) и т.п. Независимо от используемого вектора, для лечения рестрикционными ферментами и т.п. можно использовать общий метод, который позволяет при необходимости связывать вставку последовательности нуклеиновой кислоты и вектор, причем связывание происходит после затупления, с липкими концами и т.п., при необходимости.

[0021]

Трансформация хозяина с помощью вектора может быть осуществлена общепринятым способом. Например, вектор может быть введен в организм хозяина для трансформации, с помощью способа, используемого коммерчески доступный реагент для трансфекции, или с помощью метода с использованием DEAE-декстрана, метода электропорации или способа, с использованием генной пушки и т.п.

[0022]

Условия роста (например, культуральная среда, условия культивирования и т.п.) для микроорганизмов, клеток животных или тому подобного, которые продуцируют фермент, разрушающий сахарид, выбирают в зависимости от используемых микроорганизмов или клеток. В случае, когда используют E. coli, например, в качестве основного компонента может быть использована, например, культуральная среда, соответствующим образом полученная со средой LB, и т.п. Также, например, когда клетки COS-7 используют в качестве клеток-хозяев, среду DMEM, содержащую около 2% (об./об.) Фетальной бычьей сыворотки, можно использовать для культивирования при условии 37°С.

[0023]

Фермент, разрушающий сахарид, может быть собран из продукта роста известными способами экстракции и очистки белков, в зависимости от формы получаемого фермента, разрушающего сахарид. Например, когда фермент, разрушающий сахарид, получают в растворимой форме, секретируемой в среде (супернатант клеточной культуры), среда может быть собрана и использована непосредственно в качестве фермента, разрушающего сахариды. Когда фермент, разрушающий сахарид, получают в растворимой форме, секретируемой в цитоплазму, или в нерастворимой (мембранносвязанной) форме, он может быть экстрагирован с помощью процедуры обработки, такой как экстракция путем разрушения клеток, такой как способ с использованием устройства азотной кавитации, гомогенизация, метод мельницы со стеклянными шариками, обработка ультразвуком, метод осмотического шока или метод замораживания-оттаивания, или метод экстракции поверхностно-активными веществами, или комбинация этих методов. Фермент, разрушающий сахарид, также может быть очищен обычными и общеизвестными способами предшествующего уровня техники, такими как высаливание, сульфат-аммонийное фракционирование, разделение методом центрифугирования, диализ, ультрафильтрация, адсорбционная хроматография, ионообменная хроматография, гидрофобная хроматография, обращенно-фазовая хроматография, гель-проникающая хроматография, аффинная хроматография или электрофорез, а также комбинация этих способов и т.п.

[0024]

Фермент, разрушающий сахарид, может быть использован отдельно или в виде комбинации двух или более различных типов. Фермент, разрушающий сахарид, может также иметь присоединение химически модифицированных групп, которые являются общеизвестными в уровне техники, такое как ацетилирование, полиалкиленгликолирование (например, полиэтиленгликолирование), алкилирование, ацилирование, биотинилирование, мечение (например, мечение флуоресцентным веществом, люминесцентным веществом и т.п.), фосфорилирование и сульфатирование.

[0025]

Фармацевтическая композиция может включать фармацевтически приемлемый носитель. Используемый в настоящем документе термин «фармацевтически приемлемый носитель» обычно представляет собой компонент, обычно используемый в лекарственных средствах, такой как обычно используемый эксципиент, связующее, буферный агент, вода для инъекций, средство, регулирующее тоничность, консервант или успокаивающее средство.

[0026]

Примеры буферных агентов включают, например, буферные агенты, содержащие один или несколько агентов, выбранных из группы, состоящей из хлористоводродной кислоты, гидроксида натрия, карбоната натрия, гидрогенкарбоната натрия, фосфорной кислоты, дигидрогенфосфата калия, гидрофосфата дикалия, дигидрогенфосфата натрия, гидрофосфата динатрия, аминоуксусной кислоты, бензоата натрия, лимонной кислоты, цитрата натрия, уксусной кислоты, ацетата натрия, винной кислоты, тартрата натрия, молочной кислоты, лактата натрия, этаноламина, аргинина, этилендиамина и т.п., среди которых по меньшей мере один из дигидрогенфосфата натрия и гидрофосфата динатрия является предпочтительным.

[0027]

Примеры средств, регулирующих тоничность, включают хлорид натрия, хлорид калия, глицерин, маннит, сорбит, борную кислоту, буру, глюкозу, пропиленгликоль и т.п.

[0028]

Например, конкретные примеры других фармацевтически приемлемых носителей включают декстраны, сахарозу, лактозу, мальтозу, ксилозу, трегалозу, маннит, ксилит, сорбит, инозит, сывороточный альбумин, желатин, креатинин, полиалкиленгликоль, неионогенные поверхностно-активные вещества (например, полиоксиэтиленовый эфир сорбита и жирной кислоты, полиоксиэтилен-гидрогенизированное касторовое масло, сложный эфир сахарозы и жирной кислоты и полиоксиэтилен-полиоксипропиленгликоль) и т.п., среди которых по меньшей мере один из сахарозы и полиалкиленгликоля являются предпочтительными, и, по меньшей мере, один из сахарозы и полиэтиленгликоля является более предпочтительным. Полиэтиленгликоль предпочтительно имеет среднюю молекулярную массу не менее 200 и не более 25000, и более предпочтительно он представляет собой твердое вещество при обычной температуре, например, со средней молекулярной массой не менее 2000 и не более 9000, и еще более предпочтительно не менее 3000 и не более 4000. Примеры полиэтиленгликоля могут включать, например, полиэтиленгликоль со средней молекулярной массой 3250, 3350 и 4000. Когда в качестве фармацевтически приемлемого носителя используют смесь полиэтиленгликоля и сахарозы, их предпочтительно смешивают так, чтобы массовое соотношение полиэтиленгликоль/сахароза обычно находилось в диапазоне от 1/10 до 10/1, и более предпочтительно, чтобы весовое соотношение полиэтиленгликоль/сахароза составляло около 2/1.

[0029]

Используемый в настоящем описании термин «контейнер» конкретно не ограничен, если только он может содержать фармацевтическую композицию. Примеры контейнеров включают шприцы, флаконы, ампулы, инъекторы и т.п., причем флаконы являются предпочтительными. Основным материалом контейнера может быть, например, стекло, пластик и т.п., причем предпочтительным является стекло. Стекло включает боросиликатное стекло, известково-натриевое стекло и т.п., например. Контейнер предпочтительно также имеет уплотнительный элемент или крышку, и более предпочтительно он имеет резиновую пробку. Не существует особых ограничений по размеру контейнера, который может быть не менее 0,5 мл и не более 100 мл, например, предпочтительно не менее 1 мл и не более 10 мл, более предпочтительно не менее 2 мл и не более 4 мл и наиболее предпочтительно 3 мл. Упаковка, включающая фармацевтическую композицию, содержащуюся в контейнере, может включать в себя инертный газ, такой как газообразный азот или газ аргон, или может быть деаэрирован.

[0030]

Контейнер может содержать по меньшей мере один материал, выбранный из группы, состоящей из тонкой керамики, силиконовых смол и фторсодержащих смол, на своей внутренней поверхности. Примеры тонкой керамики включают, например, оксид металла, нитрид металла и оксинитрид металла и т.п., такой как оксид кремния, нитрид кремния, оксинитрид кремния, оксид алюминия, нитрид алюминия и оксинитрид алюминия. Примеры фторсодержащей смолы включают, например, политетрафторэтилен, поливинилиденфторид, полихлортрифторэтилен, сополимер тетрафторэтилен-перфторалкилвиниловый эфир, сополимер тетрафторэтилен-гексафторпропилен, сополимер тетрафторэтилен-этилен, сополимер хлортрифторэтилен-этилен, и т.п. Силиконовые смолы включают органополисилоксаны (например, диметилполисилоксан и т.п.) и их модифицированные (например, такие как полиэфир-модифицированные, фенол-модифицированные, амин-модифицированные, силанол-модифицированные, триметилсилил-модифицированные, карбинол-модифицированные, карбоксил-модифицированные, эпокси-модифицированные, акрилированные или метакрил-модифицированные) формы. Такие материалы могут быть предусмотрены, по меньшей мере, на участках внутренней поверхности контейнера, которые должны контактировать с фармацевтической композицией. Такой материал предусмотрен, по меньшей мере, на части внутренней поверхности контейнера. В одном варианте осуществления материал предусмотрен на всей внутренней поверхности контейнера. В другом варианте осуществления сам контейнер выполнен из материала. В предпочтительном варианте осуществления контейнер снабжен пленкой, содержащей материал, на своей внутренней поверхности. Когда контейнер имеет пленку, содержащую материал на своей внутренней поверхности, толщина может составлять, например, не менее 0,1 мкм и не более 0,2 мкм. В более предпочтительном варианте осуществления пленка, содержащая материал, предусмотрена на всех участках внутренней поверхности контейнера, которые потенциально могут контактировать с фармацевтической композицией.

[0031]

В предпочтительном варианте с точки зрения стабильности при хранении, например, процент сохранения титра, материал выбран из группы, состоящей из оксида кремния, нитрида кремния, оксинитрида кремния, оксида алюминия, нитрида алюминия и оксинитрида алюминия. Материал более предпочтительно выбран из группы, состоящей из оксида кремния, нитрида кремния и оксинитрида кремния, еще более предпочтительно оксид кремния и наиболее предпочтительно диоксид кремния.

[0032]

Пленка, содержащая материал, может быть сформирована способом мокрого или сухого пленкообразования, известным в уровне техники. К способам мокрого пленкообразования относятся способы нанесения покрытий, например. Пленка, содержащая материал, предпочтительно формируется, например, с помощью сухого способа пленкообразования, такого как химическое осаждение из паровой фазы (CVD), физическое осаждение из паровой фазы, осаждение или распыление путем спрей-пиролиза, и более предпочтительно она образуется с помощью CVD или осаждения способом спрей-пиролиза. С точки зрения поддержания стабильности при хранении, например, процента сохранения титра, пленка более предпочтительно формируется с помощью CVD, причем более предпочтительным является плазменно-химическое осаждение из паровой фазы (плазменного CVD).

[0033]

Примеры контейнера включают, но не ограничиваются ими, например, контейнер, снабженный пленкой, содержащей материал, выбранный из группы, состоящей из оксида кремния, нитрида кремния и оксинитрида кремния, на внутренней поверхности, где пленка формируется методом CVD, контейнер, снабженный пленкой, содержащей диоксид кремния на внутренней поверхности, где пленка формируется методом CVD, контейнер, снабженный пленкой, содержащей материал, выбранный из группы, состоящей из оксида кремния, нитрида кремния и оксинитрида кремния, на внутренней поверхности, где пленка формируется методом плазменного CVD, и контейнер, снабженный пленкой, содержащей диоксид кремния на внутренней поверхности, где пленка сформирована плазменным CVD.

[0034]

Контейнер, снабженный пленкой, содержащей такой материал на внутренней поверхности, может представлять собой имеющийся в продаже флакон с покрытием диоксидом кремния, флакон с силиконовым покрытием или флакон с покрытием из фторсодержащей смолы и т.п.

[0035]

Считается, что обеспечение внутренней поверхности контейнера таким материалом, как описано выше, может, например, потенциально снизить загрязнение фармацевтической композиции посторонними включениями, такими как ионы металла, из основного материала контейнера. Считается, что снижение загрязнения посторонними включениями потенциально может быть связано с эффектом подавления снижения активности фермента согласно настоящему изобретению. Однако этот предлагаемый механизм никоим образом не ограничивает технический объем настоящего изобретения.

[0036]

Содержание воды в лиофилизированном препарате может составлять не более 5% (масс./масс.), например, предпочтительно не более 3% (масс./масс.) и более предпочтительно не более 2% (масс./масс.). Используемый в настоящем описании термин «содержание воды» представляет собой значение, измеренное методом кулометрического титрования.

[0037]

В одном варианте осуществления количество фермента, разрушающего сахарид, содержащееся в одном контейнере, может составлять, например, менее 10 мкг. Количество фермента, разрушающего сахарид, содержащегося в одном контейнере, может быть установлено в числовом диапазоне, состоящем из комбинаций любых числовых значений, среди которых менее 0,1 мкг, 0,5 мкг, 1 мкг, 2 мкг, 2,5 мкг, 4 мкг, 5 мкг, 6 мкг, 7 мкг, 8 мкг, 9 мкг, 9,5 мкг, 9,8 мкг и 10 мкг. В частности, количество фермента, разрушающего сахарид, содержащегося в одном контейнере, может быть не менее 0,1 мкг, не менее 0,5 мкг, не менее 1 мкг, не менее 2 мкг, не менее 2,5 мкг, или не менее 4 мкг, и не более 5 мкг, не более 6 мкм, не более 7 мкг, не более 9,5 мкг, или не более 9,8 мкг. В предпочтительном варианте осуществления количество фермента, разрушающего сахарид, содержащееся в одном контейнере, составляет не менее 0,1 мкг и не более 9,8 мкг. В более предпочтительном варианте осуществления количество фермента, разрушающего сахарид, содержащегося в одном контейнере, составляет не менее 2 мкг и не более 7 мкг. В особенно предпочтительном варианте осуществления количество фермента, разрушающего сахарид, содержащегося в одном контейнере, составляет не менее 2,5 мкг и не более 5 мкг.

[0038]

Термин «титр» означает активность фермента (единицы) на 1 мкг фермента, разрушающего сахарид, и выражается в единицах единица/мкг. В одном варианте осуществления титр лиофилизированного фермента, разрушающего сахарид, составляет не менее 0,3 (единица/мкг). В другом варианте осуществления титр лиофилизированного фермента, разрушающего сахарид, составляет не менее 0,3 (единица/мкг) и не более 1 (единица/мкг). В другом варианте осуществления титр лиофилизированного фермента, разрушающего сахарид, составляет не менее 0,32 (единица/мкг) и не более 1 (единица/мкг). В другом варианте осуществления титр лиофилизированного фермента, разрушающего сахарид, составляет не менее 0,33 (единица/мкг) и не более 1 (единица/мкг). В другом варианте осуществления титр лиофилизированного фермента, разрушающего сахарид, составляет не менее 0,36 (единица/мкг) и не более 1 (единица/мкг).

[0039]

В одном варианте осуществления титр лиофилизированного фермента, разрушающего сахарид, составляет не менее 0,3 (единица/мкг) и не более 0,5 (единица/мкг). В другом варианте осуществления титр лиофилизированного фермента, разрушающего сахарид, составляет не менее 0,33 (единица/мкг) и не более 0,5 (единица/мкг), или не менее 0,36 (единица/мкг) и не более 0,5 (единица/мкг).

[0040]

«Единица (Ед)» указывает на активность фермента, разрушающего сахарид, при этом 1 единица представляет собой количество, которое высвобождает эквивалент 1 микромоля продукта разложения из субстрата за единицу времени при оптимальной температуре и оптимальных условиях pH. Например, когда ферментом, разрушающим сахарид, является хондроитиназа ABC, 1 единица представляет собой количество, которое высвобождает 1 микромоль ненасыщенного дисахарида в минуту из хондроитинсульфата натрия (сложный эфир хондроитинсульфата натрия, соответствующего Japanese Pharmaceutical Codex 2002) в условиях pH 8,0, 37°С.

[0041]

В одном варианте осуществления титр фермента, разрушающего сахарид, предпочтительно является таким, чтобы фермент, разрушающий сахарид, в фармацевтической композиции, содержащейся в контейнере в количестве, необходимом для разовой дозы, составлял не менее 75%, и более предпочтительно не менее 80%, где 100% определяется как титр перед помещением в контейнер.

[0042]

В одном варианте осуществления активность фермента (активность фермента, разрушающего сахарид) на контейнер может составлять, например, менее 5 единиц. В другом варианте осуществления активность фермента на контейнер может составлять, например, не более 4,5 единиц. В другом варианте осуществления активность фермента на контейнер может составлять, например, не более 4,1 единиц. В другом варианте осуществления активность фермента на контейнер может составлять, например, не более 4 единиц. В другом варианте осуществления активность фермента на контейнер составляет, например, не менее 0,1 единицы и не более 4,5 единиц. В другом варианте осуществления активность фермента на контейнер составляет, например, не менее 0,1 единицы и не более 4,1 единиц. В другом варианте осуществления, активность фермента на контейнер составляет, например, не менее 0,1 единицы и не более 4 единиц. В другом варианте осуществления, активность фермента на контейнер составляет, не менее 0,9 единиц и не более 2,5 единиц, не менее 0,9 единиц и не более 2 единиц, не менее 1,25 единиц и не более 2 единиц, или 1,5 единиц.

[0043]

Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения можно обеспечить упаковку, имеющую стабильность при хранении в течение 12 месяцев или дольше. В предпочтительном варианте осуществления упаковка имеет стабильность при хранении в течение 24 месяцев или дольше, и в более предпочтительном варианте осуществления упаковка имеет стабильность при хранении в течение 36 месяцев или дольше. Хотя верхний предел стабильности при хранении особо не ограничен, он может составлять 48 месяцев или меньше, или 36 месяцев или меньше, например.

[0044]

В настоящем описании фраза «имеет стабильность при хранении» означает, что титр (%) после хранения в герметичном и защищенном от света состоянии при заданных условиях (например, 12 месяцев или дольше при 5°C±3°C, 6 месяцев или дольше при 25°C±2°C, или 3 месяца или дольше, или 6 месяцев или дольше при 40°C±2°C) поддерживается на фармацевтически приемлемом уровне. «Стабильность при хранении» в настоящем описании оценивается как процент сохранения титра (%), например. Например, процент сохранения титра после хранения образца в течение 12 месяцев или дольше при 5°C±3°C составляет, например, не менее 90%, и предпочтительно не менее 95%. Процент сохранения титра после хранения образца в течение 24 месяцев или дольше при 5°C±3°C составляет, например, не менее 90%, и предпочтительно не менее 95%. Процент сохранения титра после хранения образца в течение 36 месяцев или дольше при 5°C±3°C составляет, например, не менее 90%, и предпочтительно не менее 95%. Процент сохранения титра после хранения образца в течение 6 месяцев или дольше при 25°C±2°C составляет, например, не менее 90%, и предпочтительно не менее 95%. Процент сохранения титра после хранения образца в течение 3 месяцев или дольше при 40°C±2°C составляет, например, не менее 90%, и предпочтительно не менее 95%. Процент сохранения титра после хранения образца в течение 6 месяцев или дольше при 40°C±2°C составляет, например, не менее 65%, предпочтительно не менее 70%, и более предпочтительно не менее 75%. Термин «процент сохранения титра (%)» означает значение титра (%) после хранения упаковки по настоящему изобретению в условиях с заданной температурой (например, 5°C±3°C, 25°C±3°C или 40°C±2°C) в расчете на 100% титра в начале хранения. Значение 100% означает, что активность фермента одинакова в начале хранения и после хранения.

[0045]

Согласно одному варианту осуществления настоящего изобретения можно обеспечить упаковку со сроком хранения 12 месяцев или более. В предпочтительном варианте осуществления упаковка имеет срок хранения 24 месяца или более, и в более предпочтительном варианте осуществления упаковка имеет срок хранения 36 месяцев или более. Хотя верхний предел срока годности особо не ограничивается, он может составлять 48 месяцев или меньше, или 36 месяцев или меньше, например.

[0046]

Как используется в настоящем описании термин «срок годности» означает период, в течение которого можно ожидать, что лекарственное средство будет проявлять такую же эффективность с момента, когда было подтверждено, что лекарственное средство проявляет такую же эффективность, после последующего хранения конкретным способом хранения (например, герметично и защищенным от света при температуре 5°C±3°C, герметично и защищенным от света при температуре 25°C±2°C или герметично и защищенным от света при температуре 40°C ±2°C).

[0047]

Применение фармацевтической композиции, как описано в настоящем документе, может быть выбрано среди различных известных применений ферментов, разлагающих сахарид. Например, примеры использования фармацевтических композиций, содержащих ферменты, разрушающие сахарид, в качестве активных ингредиентов, могут включать, но не ограничиваются ими, лечение грыжи, лизосомной болезни, келоидов, гипертрофических рубцов, мышечной дистрофии и повреждения спинного мозга. В предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая композиция используется для лечения грыжи. В более предпочтительном варианте осуществления его используют для лечения грыжи межпозвоночного диска (например, грыжа диска поясничного отдела).

[0048]

Используемый в настоящем описании термин «лечение» включает не только полное излечение, но также облегчение всех или некоторых симптомов заболевания и подавление (включая поддержание и замедление прогрессирования) прогрессирования или профилактику заболевания. В настоящем описании профилактика включает предотвращение появления симптомов, связанных с заболеванием, когда симптомы не проявляются. Профилактика также включает, например, предотвращение появления органических поражений или подавление развития еще не проявившихся симптомов, когда присутствуют симптомы, связанные с заболеванием, даже если явных органических поражений не наблюдают.

[0049]

Термины «в качестве активного ингредиента» и «эффективная доза» в контексте настоящего описания означают количество ингредиента, подходящее для разумного соотношения риск/польза и достаточное для получения желаемого ответа без чрезмерных вредных побочных эффектов (токсичность, раздражение, и т.п.). Термины «в качестве активного ингредиента» и «эффективная доза» могут варьироваться в зависимости от различных факторов, таких как симптомы, физическая конституция, возраст и пол пациента, подлежащего лечению. Однако специалист в данной области может определить эффективную дозу на основании результатов одного или нескольких конкретных примеров испытаний в сочетании с общими общими техническими знаниями, без необходимости проведения отдельного теста для каждой комбинации различных факторов.

[0050]

Как используется в настоящем описании «пациент» означает животное и предпочтительно млекопитающее (например, человек, мышь, крыса, хомяк, морская свинка, кролик, собака, кошка, лошадь и т.п.) и более предпочтительно человека.

[0051]

В предпочтительном варианте фармацевтическая композиция, содержащаяся в контейнере, находится в стерильном состоянии. Нет никаких особых ограничений в отношении способа стерилизации фармацевтической композиции, и стерилизацию можно осуществлять любым способом, известным из уровня техники, таким как стерилизующее фильтрование или стерилизация сухим жаром.

[0052]

Форма введения фармацевтической композиции также особо не ограничивается и может быть выбрана в зависимости от заболевания, подлежащего лечению, симптомов, тяжести, характеристик пациента (например, возраста и т.п.) и т.п. Лиофилизированный препарат можно использовать в виде раствора в любом желаемом растворителе (например, воде для инъекций, физиологическом растворе и т.п.). Форма введения может представлять собой любой путь введения, например, такой как внутридисковая инъекция, внутривенная инъекция, внутримышечная инъекция, подкожная инъекция или капельная инфузия. Доза фармацевтической композиции также может быть надлежащим образом установлена специалистом в данной области в соответствии с заболеванием, подлежащим лечению, симптомами, тяжестью, характеристиками пациента (например, возрастом и т.п.) и т.п.

[0053]

Предпочтительные конкретные варианты настоящего изобретения теперь будут описаны в качестве примера, с пониманием, что они не предназначены для ограничения технического объема настоящего изобретения. Фармацевтическая композиция для лечения грыжи межпозвоночного диска может быть объяснена в качестве примера следующим образом. Но естественно, что применение фармацевтических композиций не может быть ограничено.

[0054]

(Упаковка 1)

Активный ингредиент: Хондроитиназа ABC

Материал, нанесенный на внутреннюю поверхность контейнера: Диоксид кремния

Количество активного ингредиента на контейнер: не менее 2,5 мкг и менее 10 мкг

Титр фермента: не менее 0,32 (единица/мкг) и не более 1 (единица/мкг)

Активность фермента на контейнер: не менее 0,4 единиц и не более 4,5 единиц

Применение: грыжа межпозвоночного диска

[0055]

(Упаковка 2)

Активный ингредиент: Хондроитиназа ABC

Материал, нанесенный на внутреннюю поверхность контейнера: Силиконовая смола

Количество активного ингредиента на контейнер: не менее 2,5 мкг и менее 10 мкг

Титр фермента: не менее 0,32 (единица/мкг) и не более 1 (единица/мкг)

Активность фермента на контейнер: не менее 0,4 единиц и не более 4,5 единиц

Применение: грыжа межпозвоночного диска

[0056]

(Упаковка 3)

Активный ингредиент: Хондроитиназа ABC

Материал, нанесенный на внутреннюю поверхность контейнера: фторсодержащая смола

Количество активного ингредиента на один контейнер: не менее 2,5 мкг и менее 10 мкг

Титр фермента: не менее 0,32 (единица/мкг) и не более 1 (единица/мкг)

Активность фермента на контейнер: не менее 1 единицы и не более 4,5 единиц

Применение: грыжа межпозвоночного диска

[0057]

(Упаковка 4)

Активный ингредиент: Хондроитиназа ABC

Материал, нанесенный на внутреннюю поверхность контейнера: По меньшей мере один, выбранный из диоксида кремния, силиконовой смолы и фторсодержащей смолы

Количество активного ингредиента на контейнер: не менее 2 мкг и не более 5 мкг

Титр фермента: не менее 0,32 (единица/мкг) и не более 0,5 (единица/мкг)

Активность фермента на контейнер: не менее 1,25 единиц и не более 2,5 единиц

Применение: грыжа межпозвоночного диска

(Упаковка 5)

Активный ингредиент: Хондроитиназа ABC

Материал, нанесенный на внутреннюю поверхность контейнера: По меньшей мере один, выбранный из диоксида кремния, силиконовой смолы и фторсодержащей смолы

Количество активного ингредиента на контейнер: не менее 2,5 мкг и не более 5 мкг

Титр фермента: не менее 0,32 (единица/мкг) и не более 0,5 (единица/мкг)

Активность фермента на контейнер: 1,5 единиц

Применение: грыжа межпозвоночного диска

[0058]

(2) Набор

В одном варианте осуществления, предоставлен набор, содержащий упаковку и листок-вкладыш или этикетку, объясняющие использование фармацевтической композиции для лечения грыжи, лизосомной болезни, келоидов, гипертрофических рубцов, мышечной дистрофии или повреждения спинного мозга.

[0059]

Достаточно, чтобы набор содержал упаковку, включающую фармацевтическую композицию, содержащуюся в контейнере, и листок-вкладыш или этикетку, объясняющую использование фармацевтической композиции для лечения грыжи, лизосомной болезни, келоидов, гипертрофических рубцов, мышечной дистрофии или повреждения спинного мозга. Другими словами, он также может содержать другие составляющие компоненты.

[0060]

(3) Способ получения

Один аспект настоящего изобретения относится к способу получения упаковки, содержащей фармацевтическую композицию, и контейнера, содержащего фармацевтическую композицию, способ получения включает первую стадию помещения раствора, содержащего фермент, разрушающий сахарид, в контейнер, содержащий по меньшей мере один материал, выбранный из группы, состоящей из тонкой керамики, силиконовых смол и фторсодержащих смол, на его внутренней поверхности, и вторую стадию лиофилизации раствора для получения фармацевтической композиции.

[0061]

На первой стадии, хотя растворитель, используемый для получения раствора, содержащего фермент, разрушающий сахарид, конкретно не ограничен, например, можно использовать буферный раствор, такой как вода, физиологический раствор или фосфатный буфер. Раствор также может включать фармацевтически приемлемый носитель, как указано выше. Хотя значение pH раствора, содержащего фермент, разрушающий сахарид, содержащегося в контейнере особо не ограничивается, оно предпочтительно находится в диапазоне от 6,5 или выше до 7,5 или ниже.

[0062]

В одном варианте осуществления раствор, содержащий фермент, разрушающий сахарид, содержится в контейнере на первой стадии, таким образом, чтобы активность фермента на контейнер составляла менее 5 единиц. В другом варианте осуществления, раствор, содержащий фермент, разрушающий сахарид, содержится в контейнере на первой стадии, таким образом, чтобы активность фермента на контейнер составляла не более 4,5 единиц. В другом варианте осуществления раствор, содержащий фермент, разрушающий сахарид, содержится в контейнере на первой стадии, таким образом, чтобы активность фермента на контейнер составляла не более 4,1 единиц. В другом варианте осуществления раствор, содержащий фермент, разрушающий сахарид, содержится в контейнере на первой стадии, таким образом, чтобы активность фермента на контейнер составляла не менее 0,5 единиц и не более 4,5 единиц. В другом варианте осуществления раствор, содержащий фермент, разрушающий сахарид, содержится в контейнере на первой стадии, таким образом, чтобы активность фермента на контейнер составляла не менее 0,5 единиц и не более 4,1 единиц. В предпочтительном варианте осуществления раствор, содержащий фермент, разрушающий сахарид, содержится в контейнере на первой стадии, таким образом, чтобы активность фермента на контейнер составляла не более 4 единиц. В более предпочтительном варианте осуществления раствор содержится в контейнере таким образом, чтобы активность фермента на контейнер составляла не менее 0,5 единиц и не более 4 единиц. В другом варианте осуществления раствор содержится в контейнере таким образом, чтобы активность фермента на контейнер составляла не менее 0,5 единиц и не более 3,5 единиц, не менее 1,1 единиц и не более 3 единиц, не менее 1 единицы и не более 2 единиц, не менее 1,25 единиц и не более 1,6 единиц, или 1,5 единиц.

[0063]

Вторая стадия включает стадию лиофилизации, на которой раствор, содержащий фермент, разрушающий сахарид, замораживают, и влагу удаляют путем сублимации в замороженном состоянии для сушки. На второй стадии сушку проводят до тех пор, пока содержание воды в фармацевтической композиции после лиофилизации не станет, например, не более 5% (масс./масс.). Сушку на второй стадии предпочтительно проводят до тех пор, пока содержание воды в фармацевтической композиции после лиофилизации станет не более 3% (масс./масс.), и более предпочтительно сушку проводят до тех пор, пока содержание воды станет не более 2% (масс./масс.).

[0064]

В способе получения согласно настоящему изобретению можно напрямую использовать описания, примеры, предпочтительные диапазоны и т.п. для описанных выше «(1) композиции и упаковки» и описанного выше «(2) набора».

[0065]

В качестве другого варианта настоящее изобретение также включает применение фармацевтической композиции и контейнера для получения упаковки, используемой для лечения грыжи, лизосомной болезни, келоидов, гипертрофических рубцов, мышечной дистрофии или повреждения спинного мозга, где фармацевтическая композиция представляет собой лиофилизированный препарат, содержащий по меньшей мере один фермент из числа ферментов, разрушающих сахарид, и матриксных металлопротеиназ в качестве активного ингредиента, и контейнер включает по меньшей мере один материал, выбранный из группы, состоящей из тонкой керамики, силиконовых смол и фторсодержащих смол, на своей внутренней поверхности. Кроме того, в качестве другого варианта настоящее изобретение также включает применение упаковки для лечения грыжи, лизосомной болезни, келоидов, гипертрофических рубцов, мышечной дистрофии или повреждения спинного мозга, при этом упаковка включает фармацевтическую композицию, которая представляет собой лиофилизированный препарат, содержащий по меньшей мере один фермент из ферментов, разрушающих сахарид, и матриксных металлопротеиназ в качестве активного ингредиента, находящийся в контейнере, который содержит по меньшей мере один материал, выбранный из группы, состоящей из тонкой керамики, силиконовых смол и фторсодержащих смол, на своей внутренней поверхности. Кроме того, в качестве другого варианта настоящее изобретение также включает упаковку для лечения грыжи, лизосомной болезни, келоидов, гипертрофических рубцов, мышечной дистрофии или повреждения спинного мозга, при этом упаковка включает фармацевтическую композицию, которая представляет собой лиофилизированный препарат, содержащий по меньшей мере один фермент из ферментов, разрушающих сахарид, и матриксных металлопротеиназ в качестве активного ингредиента, находящийся в контейнере, который содержит по меньшей мере один материал, выбранный из группы, состоящей из тонкой керамики, силиконовых смол и фторсодержащих смол, на своей внутренней поверхности.

[0066]

Далее будут описаны примерные варианты осуществления настоящего изобретения с пониманием того, что настоящее изобретение не ограничивается этими вариантами осуществления.

<1> Упаковка, включающая фармацевтическую композицию и контейнер, где фармацевтическая композиция представляет собой лиофилизированный препарат, содержащий по меньшей мере один фермент из ферментов, разрушающих сахариды, и матриксных металлопротеиназ в качестве активного ингредиента, контейнер содержит фармацевтическую композицию, и внутренняя поверхность контейнера содержит по меньшей мере один материал, выбранный из группы, состоящей из тонкой керамики, силиконовых смол и фторсодержащих смол.

[0067]

<2> Упаковка согласно <1>, где материал выбран из группы, состоящей из оксида кремния, нитрида кремния, оксинитрида кремния, оксида алюминия, нитрида алюминия и оксинитрида алюминия.

[0068]

<3> Упаковка согласно <2>, где оксид кремния представляет собой диоксид кремния.

[0069]

<4> Упаковка согласно любому из <1> - <3>, где контейнер содержит пленку, содержащую материал, на своей внутренней поверхности.

[0070]

<5> Упаковка согласно <4>, где пленка, содержащая материал, образована путем химического осаждения из паровой фазы, физического осаждения из паровой фазы, осаждения или распыления путем спрей-пиролиза.

[0071]

<6> Упаковка согласно <5>, где химическое осаждение из паровой фазы представляет собой плазменно-химическое осаждение из паровой фазы.

[0072]

<7> Упаковка согласно любому из <1> - <6>, где количество фермента, содержащегося на контейнер, составляет менее 10 мкг.

[0073]

<8> Упаковка согласно любому из <1> - <7>, где титр фермента составляет не менее 0,3 (единица/мкг).

[0074]

<9> Упаковка согласно любому из <1> - <8>, где активность фермента на контейнер составляет менее 5 единиц.

[0075]

<10> Упаковка согласно любому из <1> - <9>, где ферментативная активность фермента составляет не менее 75%, где 100% определяется как значение до лиофилизации.

[0076]

<11> Упаковка согласно любому из <1> - <10>, где упаковка имеет стабильность при хранении в течение не менее 12 месяцев при 5°C ± 3°C.

[0077]

<12> Упаковка согласно любому из <1> - <11>, где фермент представляет собой фермент, разрушающий гликозаминогликан.

[0078]

<13> Упаковка согласно <12>, где фермент, разрушающий гликозаминогликан, представляет собой хондроитиназу.

[0079]

<14> Упаковка согласно <13>, где хондроитиназа представляет собой хондроитиназу ABC.

[0080]

<15> Упаковка согласно любому из <1> - <14>, где матриксная металлопротеиназа представляет собой матриксную металлопротеиназу 7.

[0081]

<16> Упаковка согласно любому из <1> - <15>, где фармацевтическая композиция включает фармацевтически приемлемый носитель.

[0082]

<17> Упаковка согласно <16>, где носитель включает, по меньшей мере, одно из полиалкиленгликоля и сахарозы.

[0083]

<18> Упаковка согласно любому из <1> - <17>, где фармацевтическая композиция предназначена для лечения грыжи межпозвоночного диска, лизосомной болезни, келоидов, гипертрофических рубцов, мышечной дистрофии или повреждения спинного мозга.

[0084]

<19> Упаковка согласно любому из <1> - <18>, где контейнер представляет собой флакон, шприц или ампулу.

[0085]

<20> Фармацевтическая композиция, полученная лиофилизацией раствора, содержащего по меньшей мере один фермент из ферментов, разрушающих сахарид, и матриксных металлопротеиназ, в контейнере, содержащем по меньшей мере один материал, выбранный из группы, состоящей из тонкой керамики, силиконовых смол и фторсодержащих смол, на своей внутренней поверхности.

[0086]

<21> Фармацевтическая композиция согласно <20>, где титр фермента составляет не менее 0,3 единица/мкг.

[0087]

<22> Фармацевтическая композиция согласно <20> или <21>, где фармацевтическая композиция представляет собой стандартную лекарственную форму, имеющую количество фермента менее 10 мкг.

[0088]

<23> Фармацевтическая композиция согласно любому из <20> - <22>, где активность фермента составляет менее 5 единиц.

[0089]

<24> Фармацевтическая композиция согласно любому из <20> - <23>, где композиция имеет стабильность при хранении в течение не менее 12 месяцев при 5°C ± 3°C.

[0090]

<25> Фармацевтическая композиция по любому из <20> - <24>, где фермент представляет собой фермент, разрушающий гликозаминогликан.

[0091]

<26> Фармацевтическая композиция согласно <25>, где фермент, разрушающий гликозаминогликан, представляет собой хондроитиназу.

[0092]

<27> Фармацевтическая композиция согласно <26>, где хондроитиназа представляет собой хондроитиназу ABC.

[0093]

<28> Фармацевтическая композиция согласно любому из <20> - <27>, где матриксная металлопротеиназа представляет собой матриксную металлопротеиназу 7.

[0094]

<29> Фармацевтическая композиция согласно любому из <20> - <28>, где фармацевтическая композиция включает фармацевтически приемлемый носитель.

[0095]

<30> Фармацевтическая композиция согласно <29>, где носитель включает, по меньшей мере, одно из полиалкиленгликоля и сахарозы.

[0096]

<31> Фармацевтическая композиция согласно любому из <20> - <30>, где фармацевтическая композиция предназначена для лечения грыжи, лизосомной болезни, келоидов, гипертрофических рубцов, мышечной дистрофии или повреждения спинного мозга.

[0097]

<32> Набор, содержащий упаковку согласно любому из <1> - <19>, и листок-вкладыш или этикетку, объясняющую применение фармацевтической композиции для лечения грыжи, лизосомной болезни, келоидов, гипертрофических рубцов, мышечной дистрофии или повреждения спинного мозга.

[0098]

<33> Способ получения упаковки, включающей фармацевтическую композицию и контейнер, содержащий фармацевтическую композицию, причем способ получения включает стадию помещения раствора, содержащего по меньшей мере один фермент из ферментов, разрушающих сахарид, и матриксных металлопротеиназ, в контейнер, содержащий по меньшей мере один материал, выбранный из группы, состоящей из тонкой керамики, силиконовых смол и фторсодержащих смол, на своей внутренней поверхности, и стадию лиофилизации раствора для получения фармацевтической композиции.

[0099]

<34> Способ получения согласно <33>, где материал выбран из группы, состоящей из оксида кремния, нитрида кремния, оксинитрида кремния, оксида алюминия, нитрида алюминия и оксинитрида алюминия.

[0100]

<35> Способ получения согласно <34>, где оксид кремния представляет собой диоксид кремния.

[0101]

<36> Способ получения согласно любому из <33> - <35>, где внутренняя поверхность контейнера включает пленку, содержащую материал.

[0102]

<37> Способ получения согласно <36>, где пленка, содержащая материал, образована путем химического осаждения из паровой фазы, физического осаждения из паровой фазы, осаждения или распыления путем спрей-пиролиза.

[0103]

<38> Способ получения согласно <37>, где химическое осаждение из паровой фазы представляет собой плазменно-химическое осаждение из паровой фазы.

[0104]

<39> Способ получения согласно любому из <33> - <38>, где количество содержащегося фермента составляет менее 10 мкг.

[105]

<40> Способ согласно любому из <33> - <39>, где титр фермента в фармацевтической композиции составляет не менее 0,3 (единица/мкг).

[0106]

<41> Способ получения согласно любому из <33> - <40>, где ферментативная активность раствора, содержащегося в контейнере, составляет менее 5 единиц.

[0107]

<42> Способ получения согласно любому из <33> - <41>, где ферментативная активность фермента после лиофилизации составляет не менее 75%, где 100% определяется как ферментная активность до лиофилизации.

[0108]

<43> Способ получения согласно любому из <33> - <42>, где фермент представляет собой фермент, разрушающий гликозаминогликан.

[0109]

<44> Способ получения согласно <43>, где фермент, разрушающий гликозаминогликан, представляет собой хондроитиназу.

[0110]

<45> Способ получения согласно <44>, где хондроитиназа представляет собой хондроитиназу ABC.

[0111]

<46> Способ получения согласно любому из <33> - <45>, где матриксная металлопротеиназа представляет собой матриксную металлопротеиназу 7.

[0112]

<47> Способ получения согласно любому из <33> - <46>, где фармацевтическая композиция включает фармацевтически приемлемый носитель.

[0113]

<48> Способ получения согласно <47>, где носитель включает, по меньшей мере, одно из полиалкиленгликоля и сахарозы.

[0114]

<49> Способ получения согласно любому из <33> - <48>, где фармацевтическая композиция предназначена для лечения грыжи, лизосомной болезни, келоидов, гипертрофических рубцов, мышечной дистрофии или повреждения спинного мозга.

[0115]

<50> Способ получения согласно любому из <33> - <49>, где контейнер представляет собой флакон, шприц или ампулу.

Примеры

[0116]

Настоящее изобретение далее будет описано более подробно. Однако настоящее описание не предназначено для ограничения технического объема настоящего изобретения.

[0117]

<Пример получения 1>

1) Получение хондроитиназы ABC

Хондроитиназу ABC получали в соответствии со способом, описанным в опубликованной не прошедшей экспертизу патентной заявке Японии No. H6-153947. То есть был получен путем очистки от супернатанта культуры Proteus vulgaris. Титр полученной хондроитиназы ABC составил 0,40 Ед/мкг.

[0118]

2) Измерение активности фермента и измерение концентрации хондроитиназы ABC

Ферментативную активность хондроитиназы ABC измеряли следующим способом.

Образец фермента (хондроитиназа ABC) разбавляли в 4000 раз 0,01% (масс./об.) казеиновым реагентом (20 мМ фосфатный буфер). К 100 мкл разбавленного образца фермента добавляли и смешивали 400 мкл субстратного раствора (3 мг/мл эфира хондроитинсульфата натрия (Japanese Pharmaceutical Codex), 50 мМ 2-амино-2-гидроксиметил-1,3-пропандиола, 50 мМ ацетат натрия, pH 8). После осуществления реакции раствора при 37°C в течение 20 минут его нагревали в течение 1 минуты на водяной бане при 100°C. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и добавляли 5,0 мл 0,05 М хлористоводродной кислоты для получения раствора образца. Стандартную хондроитиназу ABC разбавляли в 400 раз 0,01% (масс./об.) казеиновым реагентом. Эту же процедуру для получения раствора образца проводили с 100 мкл разбавленного стандартного раствора хондроитиназы ABC, для получения стандартного раствора. Эту же процедуру для получения раствора образца проводили для 100 мкл 0,01% (масс./об.) казеинового реагента для получения контрольного раствора. Поглощение A_T, A_S и A_B при длине волны 232 нм измеряли для раствора образца, стандартного раствора и контрольного раствора с помощью спектрофотометрии в ультрафиолетовой и видимой областях, и активность ферментного раствора (Ед/мл) каждого определяли по следующей формуле. Здесь активность ферментного раствора представляет собой активность фермента на единицу объема жидкости.

[0119]

Активность ферментного раствора (Ед/мл) = (A_T-A_B)/(A_S-A_B)×4000/400×Us

A_T: Поглощение раствора образца

A_B: Поглощение контрольного раствора

A_S: Поглощение стандартного раствора

Us: Активность ферментного раствора стандартной хондроитиназы ABC (Ед/мл)

[0120]

1 Ед (единица) определяли как величину активности фермента, которая катализирует реакцию для освобождения 1 микромоля ненасыщенного дисахарида за 1 минуту в условиях реакции, указанных выше. Используемые в настоящем описании значения активности фермента определяли на основе активности ферментного раствора.

[0121]

Количество фермента хондроитиназы ABC (белка, мкг) измеряли по методу Лоури. То есть, 2,5 мл медно-аммиачного реактива добавляли и смешивали с 0,5 мл образца фермента (хондроитиназа ABC), разбавленного в 50 раз чистой водой, и смесь оставляли на 10 минут при комнатной температуре (20°C или выше и 25°C или ниже). Затем к жидкости добавляли 0,25 мл 1 моль/л фенольного реагента и оставляли на 30 минут при комнатной температуре для получения раствора образца. Бычий сывороточный альбумин растворяли в воде для получения раствора с концентрацией 30 мкг/мл, 40 мкг/мл, 50 мкг/мл, 60 мкг/мл или 70 мкг/мл, и ту же процедуру для образца фермента, разведенного в 50 раз, проводили для 0,5 мл каждого раствора для получения стандартного раствора. Такую же процедуру для образца фермента, разведенного в 50 раз, проводили также для 0,5 мл воды, для получения пустого раствора. Измеряли поглощение каждого раствора при длине волны 750 нм. Поглощение и концентрацию белка стандартного раствора строили методом линейной регрессии, чтобы определить стандартную кривую, наиболее точно аппроксимирующую каждую точку. Количество белка в каждом растворе образца определяли по полученной стандартной кривой и поглощению раствора образца.

[0122]

3) Получение буфера для ферментного раствора

Получали буфер для ферментного раствора, имеющий следующую композицию.

(Композиция; на 1 л дистиллированной воды для инъекций)

Гидрофосфат натрия (натрия гидрофосфат додекагидрат): 1,125 мг

Натрия дигидрофосфат: 0,3 мг

Сахароза: 5 мг

Полиэтиленгликоль 3350: 10 мг

pH: 6,5 или выше и 7,5 или ниже

[0123]

<Ссылочный пример>

Вышеописанный образец фермента (хондроитиназа ABC) растворяли в буфере для ферментного раствора. Полученный раствор фермента заливали в стеклянные флаконы (флакон 3010; продукт компании Fuji Glass Co., Ltd.) чтобы получить следующие количества фермента, соответственно:

Образец 1: 15,0 мкг/флакон (6,0 Ед/флакон)

Образец 2: 30,0 мкг/флакон (12,0 Ед/флакон)

Образец 3: 60,0 мкг/флакон (24,0 Ед/флакон)

[0124]

Ферментный раствор, содержащийся в каждом флаконе, лиофилизировали (до содержания воды не более 2% (масс./масс.) после лиофилизации). После лиофилизации давление внутри флакона восстанавливали с помощью газообразного азота и закрывали резиновой пробкой для получения упаковки.

[0125]

Каждый образец измеряли на активность фермента (Ед/флакон) после лиофилизации (n=3). Титр (Ед/мкг) после лиофилизации фермента рассчитывали на основании полученного значения активности фермента. Результаты представлены в таблице 1. Титр представляет собой активность фермента на количество фермента.

[0126]

[Таблица 1]

Образец 1 Образец 2 Образец 3 количество фермента
(мкг/флакон) 15,0 30,0 60,0 Активность фермента до лиофилизации
(Ед/флакон) 6,0 12,0 24,0 Активность фермента после лиофилизации
(Ед/флакон) 4,6 10,5 21,8 Титр после лиофилизации
(Ед/мкг) 0,307 0,350 0,363

[0127]

Как показано в Таблице 1, меньшее количество фермента, содержащегося во флаконе, приводит к более низкому титру.

[0128]

<Пример 1>

Раствор хондроитиназы ABC, полученный с использованием буфера для ферментного раствора, помещали в стеклянный флакон на 3 мл так, чтобы было 9,1 мкг фермента/флакон (3,63 Ед/флакон; Образец 4 - Образец 6) или 1,3 мкг фермента/флакон (0,50 Ед/флакон; Образец 7). В качестве стеклянных флаконов использовали флакон 3010 (продукт Fuji Glass Co., Ltd.; Образец 4), флакон 3010 silicoat (с покрытием из диоксида кремния, образованным путем спрей-пиролиз распыления (SPD) на внутренней поверхности флакона; продукт Fuji Glass Co., Ltd.; Образец 5) и SCHOTT^® Type I Plus (имеющий покрытие из диоксида кремния, образованное плазменно-импульсным химическим осаждением из паровой фазы (PICVD) на внутренней поверхности флакона; продукт Schott AG, Образец 6, Образец 7).

[0129]

Ферментный раствор, содержащийся в каждом флаконе, лиофилизировали (до содержания воды не более 2% (масс./масс.) после лиофилизации). После высушивания давление внутри флакона восстанавливали с помощью газообразного азота, и закрывали резиновой пробкой, для получения упаковки, содержащей стандартную дозу.

[0130]

Каждый образец измеряли на активность фермента (Ед/флакон) после лиофилизации (n=10). Титр (Ед/мкг) после лиофилизации фермента рассчитывали на основании полученного значения активности фермента. Результаты представлены в таблице 2.

[0131]

[Таблица 2]

Образец 4 Образец 5 Образец 6 Образец 7 количество фермента
(мкг/флакон) 9,1 9,1 9,1 1,3 Активность ферментов до лиофилизации
(Ед/флакон) 3,63 3,63 3,63 0,50 Активность фермента после лиофилизации
(Ед/флакон) 2,60 2,99 3,13 0,43 Титр после лиофилизации
(Ед/мкг) 0,286 0,328 0,344 0,331

[0132]

<Пример 2>

После закручивания упаковок Образца 4 и Образца 6 алюминиевыми крышками, их подвергали стерилизации сухим жаром при 250°C в течение 5 часов. Активности фермента после стерилизации сухим жаром составила 2,53 Ед/флакон для Образца 4 и 3,12 Ед/флакон для Образца 6.

[0133]

<Пример 3>

Ферментным раствором наполняли флакон 3010 (продукт Fuji Glass Co., Ltd.; Образец 8) и SCHOTT^® Type I Plus (продукт Schott AG; Образец 9) и лиофилизировали (до содержания воды не более 2% (масс./масс.)). После лиофилизации давление внутри флакона восстанавливали с помощью газообразного азота и закрывали резиновой пробкой для получения упаковки. Полученную упаковку хранили выдерживанием в течение 1 месяца, 3 месяцев или 6 месяцев в условиях 40±2°C с защитой от света и определяли титр после каждого периода хранения (n=3). В таблице 3 показаны результаты расчета процента сохранения титра (%) после каждого периода хранения, где 100% было определено как титр в начале хранения.

[0134]

[Таблица 3]

Процент сохранения титра (%) 1 месяц 3 месяца 6 месяцев Образец 8 94 92 65 Образец 9 95 96 76

[0135]

При хранении Образца 9 путем выдерживания в течение 12 месяцев в условиях 5°C±3°C с защитой от света процент сохранения титра составлял 98%.

[0136]

<Пример получения 2>

1) Получение хондроитиназы ABC

Хондроитиназу ABC получали в соответствии со способом, описанным в опубликованной не прошедшей экспертизу патентной заявке Японии No. H6-153947, таким же образом, как в примере получения 1. Титр полученной хондроитиназы ABC составил 0,42 Ед/мкг.

[0137]

<Пример 4>

Буфер для ферментного раствора добавляли к хондроитиназе ABC, полученной в примере получения 2, для получения ферментного раствора. Ферментный раствор наливали в стеклянный флакон таким образом, чтобы он содержал 9,8 мкг фермента/флакон (4,1 Ед/флакон; Образец 10 - Образец 12). Использовали стеклянные флаконы SCHOTT^® Type I Plus (имеющий покрытие из диоксида кремния, образованное плазменно-импульсным химическим осаждением из паровой фазы (PICVD) на внутренней поверхности флакона; продукт Schott AG, Образец 10), флакон с силиконовым покрытием (имеющий пленку из силиконовой смолы на внутренней поверхности флакона; продукт Iwata Glass Industrial Co., Ltd.; Образец 11), и флакон с фторсодержащим покрытием (имеющий пленку из политетрафторэтилена на внутренней поверхности флакона; продукт Universal Co., Ltd.; Образец 12).

[0138]

Ферментный раствор, содержащийся в каждом флаконе, лиофилизировали (до содержания воды не более 2% (масс./масс.) после лиофилизации). После высушивания давление внутри флакона восстанавливали с помощью газообразного азота, и закрывали резиновой пробкой, для получения упаковки, содержащей стандартную дозу.

[0139]

Каждый образец измеряли на активность фермента (Ед/флакон) после лиофилизации (n=3). Титр (Ед/мкг) после лиофилизации фермента рассчитывали на основании полученного значения активности фермента. Результаты представлены в таблице 4.

[Таблица 4]

Образец 10 Образец 11 Образец 12 количество фермента
(мкг/флакон) 9,8 9,8 9,8 Активность ферментов до лиофилизации
(Ед/флакон) 4,10 4,10 4,10 Активность фермента после лиофилизации
(Ед/флакон) 4,05 4,06 3,86 Титр после лиофилизации
(Ед/мкг) 0,415 0,416 0,395

[0140]

Хотя настоящее изобретение было описано применительно к конкретным примерам и различным вариантам осуществления, специалистам в данной области техники будет очевидно, что многочисленные модификации и применения описанных в настоящем документе вариантов осуществления возможны без отклонения от сущности и объема настоящего изобретение.

Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно заявке на патент Японии No. 2018-35884, поданной в патентное ведомство Японии 28 февраля 2018 г., и заявке на патент Японии No. 2018-141542, поданной в патентное ведомство Японии 27 июля 2018 г., и полное их содержание включено в настоящую заявку посредством ссылки. Вся литература, патентные заявки и технические стандарты, описанные в настоящем документе, включены в настоящий документ посредством ссылки в той же степени, как если бы отдельные литература, патентные заявки и технические стандарты были специально и индивидуально указаны для включения посредством ссылки.

Группа изобретений относится к упаковке для лечения грыжи, лизосомной болезни, келоидов, гипертрофических рубцов, мышечной дистрофии или повреждения спинного мозга, включающей фармацевтическую композицию и контейнер, где фармацевтическая композиция представляет собой лиофилизированный препарат, содержащий хондроитиназу ABC в качестве активного ингредиента и эксципиент, контейнер включает фармацевтическую композицию и имеет по меньшей мере один материал, выбранный из группы, состоящей из тонкой керамики, силиконовых смол и фторсодержащих смол, на внутренней поверхности контейнера, и количество хондроитиназы ABC на контейнер составляет менее 10 мкг, и также относится к способу получения упаковки для лечения грыжи, лизосомной болезни, келоидов, гипертрофических рубцов, мышечной дистрофии или повреждения спинного мозга, включающей фармацевтическую композицию и контейнер, содержащий фармацевтическую композицию, включающему: стадию помещения раствора, содержащего хондроитиназу ABC и эксципиент, в контейнер, имеющий по меньшей мере один материал, выбранный из группы, состоящей из тонкой керамики, силиконовых смол и фторсодержащих смол, на его внутренней поверхности, и стадию лиофилизации раствора, где количество хондроитиназы ABC на контейнер составляет менее 10 мкг. Группа изобретений обеспечивает подавление снижения активности фермента во время лиофилизации. 2 н. и 6 з.п. ф-лы, 4 табл., 4 пр.

1. Упаковка для лечения грыжи, лизосомной болезни, келоидов, гипертрофических рубцов, мышечной дистрофии или повреждения спинного мозга, включающая фармацевтическую композицию и контейнер, где

фармацевтическая композиция представляет собой лиофилизированный препарат, содержащий хондроитиназу ABC в качестве активного ингредиента и эксципиент,

контейнер включает фармацевтическую композицию и имеет по меньшей мере один материал, выбранный из группы, состоящей из тонкой керамики, силиконовых смол и фторсодержащих смол, на внутренней поверхности контейнера,

и количество хондроитиназы ABC на контейнер составляет менее 10 мкг.

2. Упаковка по п. 1, где эксципиент включает по меньшей мере одно из полиалкиленгликоля и сахарозы.

3. Упаковка по п. 1 или 2, где активность фермента на контейнер составляет менее 5 единиц.

4. Упаковка по любому из пп. 1-3, где хондроитиназа ABC имеет титр не менее 0,3 ед./мкг.

5. Способ получения упаковки для лечения грыжи, лизосомной болезни, келоидов, гипертрофических рубцов, мышечной дистрофии или повреждения спинного мозга, включающей фармацевтическую композицию и контейнер, содержащий фармацевтическую композицию, включающий:

стадию помещения раствора, содержащего хондроитиназу ABC и эксципиент, в контейнер, имеющий по меньшей мере один материал, выбранный из группы, состоящей из тонкой керамики, силиконовых смол и фторсодержащих смол, на его внутренней поверхности, и

стадию лиофилизации раствора,

где количество хондроитиназы ABC на контейнер составляет менее 10 мкг.

6. Способ по п. 5, где титр фермента в фармацевтической композиции составляет не менее 0,3 ед./мкг.

7. Способ по п. 5 или 6, где ферментативная активность раствора, помещаемого в контейнер, составляет менее 5 единиц.

8. Способ по любому из пп. 5-7, где эксципиент включает по меньшей мере одно из полиалкиленгликоля и сахарозы.