Штамм метициллинрезистентного Staphylococcus aureus (MRSA), характеризующийся устойчивостью к цефтаролину и используемый в качестве контрольной тест-культуры для определения чувствительности к бета-лактамным антибиотикам (варианты) Российский патент 2023 года по МПК C12N1/20 C12R1/445 

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Метициллинрезистентный штамм Staphylococcus aureus (MRSA) SA0422 cpt характеризуется mec-независимым механизмом устойчивостью к цефтаролину; Метициллинрезистентный штамм Staphylococcus aureus (MRSA) SA0146 cpt характеризуется устойчивостью к цефтаролину за счет мутаций в гене mecA. Штаммы могут быть использованы в качестве тест-культур для оценки чувствительности к антибактериальным препаратам; для поиска новых мишеней в клетке с целью разработки новых антибактериальных препаратов; для тестирования новых потенциальных антимикробных соединений. Штаммы были получены в ходе селекции in vitro в течение 40 пассажей на возрастающих концентрациях цефтаролина и характеризуются высоким уровнем устойчивости к цефтаролину (МПК ≥ 32 мкг/мл). Исходные штаммы представлены клиническими изолятами (штамм SA0146 cpt - генотип ST228; штамм SA0422 cpt - генотип ST8), выделенными в 2012 году от пациентов со стафилококковыми инфекциями и чувствительными к цефтаролину. Штамм SA0146 cpt имеет мутации в гене mecA (Glu447Lys, Tyr446Asn), штамм SA0422 cpt характеризуется mec-независимым механизмом устойчивости к цефтаролину и фенотип детерминирован мутациями в системе метаболизма вторичных сигнальных мессенджеров c-di-AMP (ген gdpP).

Золотистый стафилококк - бактериальный патоген, способный вызывать внутрибольничные и внебольничные инфекции разной степени тяжести: от легких кожных инфекций, до тяжелых форм пневмонии, менингита, остеомиелита, эндокардита и др. Клинические штаммы S. aureus могут быть метициллинрезистентными (MRSA), и кроме устойчивости к бета-лактамным антибиотикам, могут обладать устойчивостью к другим классам антибактериальных препаратов. Тем не менее, при массовых вспышках инфекций метициллинчувствительные штаммы S. aureus (MSSA) выделяются с большей частотой. S. aureus является одними из ведущих возбудителей пищевых инфекций и единственным возбудителем эксфолиативного дерматита. К группам риска, подверженным повышенной заболеваемости и тяжести заболеваний, относятся дети и люди старшего возраста, у которых ослаблена иммунная система. Цефтаролин и цефтобипрол одни из первых представителей бета-лактамных антибиотиков, проявляющих бактерицидную активность в отношении MRSA. Цефтаролин был одобрен для клинического применения в США в 2010 для лечения кожных стафилококковых инфекций, а в 2015 разрешен для лечения бактериемий. На сегодняшний день цефтаролин рассматривается как один из альтернативных высокоэффективных препаратов для лечения инфекций, вызванных MRSA [1]. Устойчивость MRSA к цефтаролину регистрируется редко и в основном связано с распространением определенных генетических линий, например ST228, ST239, ST5. Согласно данным международной программы AWARE, в 2010 году только 0,6% изолятов в США продемонстрировали сниженную чувствительность к цефтаролину, тогда как в Европе в 2012 году она составляла 7,8% [2]. По результатам другой международной программы ATLAS, охватывающей изоляты из США, Европы, Азии, Океании, собранных в 2012-2016 годах, количество устойчивых изолятов S. aureus составляло 0,4%, а количество с промежуточной чувствительностью (МПК=2 мкг/мл) - 6,2% [3]. В этой связи наличие тест-культур с известными верифицированными механизмами устойчивости являются важным аспектом для корректной оценки чувствительности к антибиотикам.

Проведенный патентный поиск показал, что отсутствуют аналоги штаммов с устойчивостью к цефтаролину для целей определения чувствительности к антибиотикам или как модельных микроорганизмов для поиска мишеней для разработки новых антибиотиков. Патенты, где в качестве штаммов выступает S. aureus, касаются других аспектов. Например, патент RU 2568058 посвящен описанию штамма S. aureus с персистирующими свойствами; патент RU 2058387 связан с приготовлением стафилококкого препарата, снижающего уровень сенсибилизации к инфекционным и неинфекционным аллергенам; патент RU 2722627 описывает способ использования S. aureus в качестве биосенсора при экспрессии флюоресцирующего белка. Однако, необходимо отметить, что в работах по селекции in vitro, проведенных раннее, были получены цефтаролин-устойчивые мутанты. В работе Greninger et al. [4] была проведена селекция устойчивости in vitro нескольких изолятов S. aureus к цефтаролину или цефтобипролу, в ходе которой были получены устойчивые мутанты с высоким уровнем МПК (64-128 и более мкг/мл). Авторы также провели полногеномное секвенирование и выявили геномные изменения у устойчивых мутантов. Так авторы получили мутантов с мутациями в пенициллинсвязывающем белке 4 (ПСБ4) и его промоторе, мутантов по гену gdpP, а также в других локусах генома, в частности, в других пенициллинсвязывающих белках (ПСБ). Стоит отметить, авторы не получили мутантов по гену mecA. А также у большинства мутантов наблюдались комбинации генетических событий, например мутации в ПСБ4+gdpP.

Принципиальным отличием заявляемых штаммов является наличие мутаций в mecA у штамма SA0146 cpt и уникальной мутации в gdpP (стоп-кодон в положении 545) у штамма SA0422 cpt. Также стоит отметить, что в данной работе в основном штаммы получены от одной генетической линии ST245, которая практически не представлена на территории РФ. Живые штаммы, полученные в данной работе не депонированы в известные коллекции, и следовательно, не доступны. В работе Banerjee et al. [5] также были использованы методы селекции in vitro, а также методы сайт-направленного мутагенеза по изучению устойчивости к цефтобипролу. Были получены различные мутанты, в том числе и с мутациями по гену mecA. Главным недостатком этой работы является отсутствие данных полногеномного секвенирования и как следствие полных данных об возможных дополнительных изменениях в геноме. В работе [6] после использования различных подходов, включая и селекцию in vitro описаны mec-независимые пути устойчивости к цефтаролину. Однако, все они связаны с одним модельным микроорганизмом и затрагивают только аспекты, связанные с мутациями и изменением экспрессии ПСБ4. В работе [7] впервые высказана роль о возможном влиянии мутаций в gdpP на устойчивость к бета-лактамам, однако прямой связи с цефтаролином исследовано не было, как и отсутствуют результаты полногеномного секвенирования. Анализ имеющихся публикаций, а также существующих патентов не выявляет наличие в публичных бактериальных депозитариях живых цефтаролин-устойчивых культур S. aureus, которые можно использовать для изучения механизмов устойчивости к бета-лактамам, а также для разработки новых антибактериальных препаратов. Отсутствуют эталонные штаммы, проявляющие устойчивость к цефтаролину и в Американской коллекции типовых культур микроорганизмов (АТСС, American Type Culture Collection).

Заявителем не выявлены источники, содержащие информацию о технических решениях, идентичных настоящему изобретению, что позволяет сделать вывод о его соответствии критерию «новизна».

Заявителю не известны какие-либо публикации, которые содержали бы сведения о влиянии отличительных признаков изобретения на достигаемый технический результат. В связи с этим, по мнению заявителя, можно сделать вывод о соответствии заявляемого технического решения критерию «изобретательский уровень».

Задачей изобретения является получение цефтаролин-устойчивых штаммов S. aureus с различными мутациями в геноме, для использования в качестве контрольных тест-культур в методах определения чувствительности к антибиотикам.

Технический результат настоящего изобретения заключается в получении штаммов S. aureus с мутациями в геноме, опосредующими устойчивость к цефтаролину.

Указанный результат достигается путем in vitro селекции штаммов на возрастающих концентрациях цефтаролина в среде до достижения высокого уровня стабильной устойчивости. Оценка устойчивости осуществляется методом серийных разведений в бульоне с определением минимальной подавляющей концентрации (МПК). Верификация геномных изменений осуществляется посредством полногеномного секвенирования устойчивых штаммов, полученных после селекции.

Сущность изобретения заключается в следующем.

Происхождение штаммов и селекция устойчивости in vitro

Штаммы S. aureus SA0422 cpt и S. aureus SA0146 cpt после инкубации при 37°C в аэробной атмосфере формируют ровные круглые колонии желтоватого цвета с неярко выраженным гемолизом на колумбийском агаре с 5% бараньей кровью (BioMedia, Россия). Морфологические, культуральные свойства типичны для вида S. aureus. Штамм SA0146 cpt был выделен от пациента со стафилококковой инфекцией в 2011 в РНИИТО им. Вредена, Санкт-Петербург и характеризовался полной чувствительностью к цефтаролину (МПК<2 мкг/мл). Штамм SA0422 cpt - клинический изолят, выделенный в НИИ скорой помощи им. Н.В. Склифосовского (Москва) у пациента со стафилококковой инфекцией и проявлял также полную чувствительность к цефтаролину (МПК<2 мкг/мл). Для получения резистентных фенотипов для обоих штаммов была проведена селекция устойчивости in vitro по следующей схеме.

Получали сливной рост на среде с высокими концентрациями цефтаролина в агаризованной среде. Выросшие колонии собирались с чашек и концентрировались в 2 мл физиологического раствора и вновь рассевались на свежий ряд чашек с концентрацией антибиотика ½ от минимальной бактерицидной концентрации. Культуры инкубировали до момента получения колоний, до 72 часов. При этом для всех изолятов отмечалось выраженная диссоциация, отражающаяся в изменении морфологии колоний. Всего было сделано 40 пересевов в течение трех месяцев. При этом, увеличение селекционирующей концентрации в среде осуществлялось при увеличении скорости появления колоний, так при появлении роста за менее чем 18 часов, увеличивали селекционирующую концентрацию. При этом каждые 5 пересевов проводили мониторинг изменения чувствительности к цефтаролину, и контроль контаминации культур. У штаммов наблюдался ступенчатый рост МПК. Так, после 10 пересева МПК составляла 4-16 мкг/мл. К 20 пересеву МПК увеличилась до 32-64 мкг/мл, и по завершению селекции этот уровень уже составлял 64-256 мкг/мл. Параллельно с мониторингом МПК, каждые 10 пересевов проводилось секвенирование генов mecA и pbp2. Только у изолята SA0146 cpt были выявлены мутации в гене mecA, при этом мутация в транспептидазном домене (Y446N) выявлена к 20 пересеву, к 40 пересеву дополнительно появилась мутация E447K. Эти мутации являются наиболее часто встречающимися и обуславливают высокий уровень устойчивости к цефтаролину. Для штамма SA0422 cpt гены mecA и pbp2 были интактными на протяжении всей селекции. Это свидетельствовало о формировании резистентности через другие механизмы.

Верификация механизмов резистентности

Механизмы устойчивости верифицированы методами полногеномного секвенирования. Проведен анализ всех мутационных событий, за мутационное событие принимали изменение нуклеотидной последовательности, приводящее к появлению миссенс или нонсенс мутаций, делеций, инсерций. Синонимичные мутации не анализировались. Предварительно для всех полученных ридов было проведено удаление адаптерных последовательностей, и фильтрация низкокачественных прочтений с использованием программ FastQC, trimmomatic. Геномы исходных штаммов (до селекции) были собраны de novo, с использованием SPAdes. Выравнивание на референс-геном осуществлялось с помощью программ: bowtie2 2.2.6, Пакет R 3.4.4 и breseq 0.33.1. Алгоритм анализа включал следующие этапы. На полученные сборки исходных геномов выравнивали риды этих же геномов, при этом все выявленные мутации и нуклеотидные гетеро - позиции отмечались как «ложные» и исключались из дальнейшего анализа при сравнении с мутантами, для предотвращения интерпретации ложноположительных мутаций. Помимо этого, из анализа были исключены все мобильные генетические элементы, профаговые области, адгезины, поверхностные белки вирулентности и протяженные нуклеотидные гомополимерные области, вследствие высокой скорости накопления неспецифических мутаций в этих локусах. Для выявления генетических изменений, риды штаммов после 5,20 и 40 пассажей, выравнивали на контиги контрольных геномов. Проводили аннотацию генетических изменений с помощью программы breseq в режиме mixed allele model. Коррекцию аннотаций, а также оценку гипотетических белков проводили с помощью NCBI protein BLAST и UniProt при этом использовали референс - геном S. aureus COL (GenBank: СР000046.1). Для детальной подтверждающей оценки гетеро-мутаций использовали визуальную оценку данных bam - файлов в программе Unipro Ugene.

Фенотипические характеристики

Штамм S. aureus SA0422 cpt - МПК цефтаролина 128 мкг/мл, при 10 пересевах на средах без антибиотиков МПК снижается до 32-64 мкг/мл. Устойчивость к бета-лактамам, фторхинолонам, аминогликозидам. Сохраняет чувствительность к гликопептидам, липопептидам, липогликопептидам, оксазолидинонам, рифампицину, тетрациклину, тигециклину, макролидам, линкозамидам, триметоприму/сульфаметоксазолу, фузидиевой кислоте и мупироцину. Скорость роста снижена по сравнению с оригинальным штаммом на 19±9% (время деления клеток на среде с сердечно-мозговой вытяжкой составляет 34±2 минуты, lag - период составляет 2,5 часа, относительная скорость роста составляет 0,33 μ^-час). Индуцированный аутолизис под воздействием 0,05% Тритона Х-100 в течение пяти часов составляет 78% клеток (увеличен на 26%, по сравнению с оригинальным штаммом до селекции).

Штамм S. aureus SA0146 cpt - МПК цефтаролина 32 мкг/мл, при 10 пересевах на средах без антибиотиков МПК не изменяется. Устойчивость к бета-лактамам, фторхинолонам, аминогликозидам, макролидам и линкозамидам. Сохраняет чувствительность к гликопептидам, липопептидам, липогликопептидам, оксазолидинонам, рифампицину, тетрациклину, тигециклину, триметоприму/сульфаметоксазолу, фузидиевой кислоте и мупироцину. Скорость роста после селекции не изменена по сравнению с оригинальным штаммом. Индуцированный аутолизис составляет 66% клеток (увеличен на 15%, по сравнению с оригинальным штаммом до селекции).

Генотипические характеристики:

Штамм S. aureus SA0422 cpt. Генотип ST8-t008-SCCmec IVc. Размер хромосомы 2,8Mb, плазмидные элементы общей протяженностью не более 80 Kb, GC состав - 32,7%.

Мутация в gdpP (R545*) является основным маркером устойчивости к цефтаролину, другие мутации представлены в Таблице 1.

Штамм S. aureus SA0146 cpt. Генотип ST228-t041-SCCmec IA. Размер хромосомы 2,9Mb, плазмидные элементы общей протяженностью не более 80 Kb, GC состав - 32,7%. Мутации в mecA являются основными маркерами устойчивости к цефтаролину, в Таблице 2 представлены все выявленные мутации.

Условия хранения штаммов

Условия хранения: лиофильно высушенная культура при температуре 4±2°С в защищенном от прямых солнечных лучей месте при относительной влажности воздуха не более 60% в течение 2 лет. После хранения культура образует однотипные колонии.

Примеры использования в качестве контрольных штаммов при постановке чувствительности к антибиотикам.

Пример 1

Антибиотикочувствительность оценивали методом серийных микроразведений с определением минимальной подавляющей концентрации (МПК) в бульоне Cation-Adjusted Mueller Hinton (САМН) II Broth («Becton Dickinson», США) в соответствие с протоколами CLSI от 2021 и EUCAST (версия 2021). Была использована субстанция цефтаролина «AstraZeneca», Англия). Постановку опыта проводил в 96 луночных планшетах (НПО «Медполимер», Санкт-Петербург). В качестве контрольной культуры были использованы S. aureus АТСС 29213 (чувствительный штамм) и S. aureus SA0422 cpt, S. aureus SA0146 cpt. Контроли использовались в каждой серии постановок, и в общей сложности было проведено не менее 10 измерений на каждый контрольный штамм. Постановка серийных разведений осуществлялась в соответствие с ISO 20776-1-2010. При обработке данных на платформе WHONET ver 5.6. рассчитывали следующие параметры: распределение и диапазон МПК, МПК50, МПК90, средняя геометрическая МПК (МПК_СГ), количество и процент чувствительных изолятов (S), устойчивых (R), с промежуточной чувствительностью (I). В качестве тестовых изолятов были выбраны клинические изоляты MRSA (n=256) из коллекции бактериальных культур ФГБУ ДНКЦИБ ФМБА России. В Таблице 3 Представлены результаты исследования.

Таблице 3. Результаты определения чувствительности к цефтаролину

Таким образом, штаммы SA0146 cpt и SA0422 cpt характеризуются стабильной устойчивостью к цефтаролину и могут быть использованы в качестве контрольных при оценке чувствительности к антибиотикам методом серийных разведений.

Пример 2

Постановка градиентных диффузионных тестов. В работу были включены 10 клинических изолятов MRSA с пограничной чувствительностью в цефтаролину (МПК=2 мкг/мл, определенные методом серийных разведений). Штаммы SA0146 cpt и SA0422 cpt использовались как контрольные (контроль резистентности). Использование градиентных диффузионных тестов с цефтаролином было осуществлено в соответствие с инструкцией производителя (92049 Ceftaroline CPT 0.016-256.0, Liofilchem®, USA). Полоска градиентного диффузионного теста состоит из стандартного градиента концентрации антибиотика, который используется для определения МПК (мкг/мл). Использовали агар Мюллера-Хинтона (БиоРад, США). Постановка диффузионного теста осуществлялась в соответствии ISO 20776-1-2010. Тестируемые изоляты характеризовались МПК 1-2 мкг/мл (рис. 1А), тест-штамм SA0146 cpt МПК - 24 мкг/мл (рис. 1С), тест-штамм SA0422 cpt МПК - 48 мкг/мл (рис. 1В).

Таким образом, штаммы SA0146 cpt и SA0422 cpt характеризуются стабильной устойчивостью к цефтаролину и могут быть использованы в качестве контрольных при оценке чувствительности к антибиотикам с использованием градиентных диффузионных тестов.

Пример 3

Анализ генов mecA и gdpP. В работу были включены 10 клинических изолятов MRSA с пограничной чувствительностью в цефтаролину (МПК=2 мкг/мл) и два контрольных штамма SA0146 cpt и SA0422 cpt. ДНК бактерий выделяли с использованием набора ДНК-сорб Б (ИнтерЛабСервис, Россия) с предварительной инкубацией клеточной взвеси при 99°С в течение часа. Для секвенирования были сконструированы праймеры (синтезированы в ЗАО Евроген, Россия), перекрывающие всю длину генов mecA и gdpP. ПЦР проводили с использованием наборов ScreenMix-HS (ЗАО Евроген, Россия), сиквенсовую реакцию проводили с помощью набора BrilliantDye Terminator v3.1 (NimaGen, The Netherlands). Секвенирование проводили на приборе 3730 DNA Analyzer (Applied Biosystems, Japan). Сборку секвенированных генов проводили в программе Contig Express Vector NTI™ (Invitrogen, USA), выявление мутаций проводили путем выравнивания нуклеотидных последовательностей генов изолятов до и после воздействия ванкомицином в программе Unipro UGENE. По результатам анализа не выявлено мутаций в гене gdpP у тестовых изолятов, в гене mecA выявлены мутации в неактивной части гена. У контрольного штамма SA0146 cpt выявлены мутации в mecA (Glu447Lys, Tyr446Asn) и у контрольного штамма SA0422 cpt выявлен стоп кодон в 545 положении гена gdpP.

Таким образом, штаммы SA0146 cpt и SA0422 cpt характеризуются стабильной устойчивостью к цефтаролину и могут быть использованы в качестве контрольных при оценке чувствительности к антибиотикам с использованием молекулярных методов, в частности методов секвенирования.

Штаммы метициллинрезистентных Staphylococcus aureus (SA0146 cpt, SA0422 cpt), характеризующиеся устойчивостью к цефтаролину могут быть использованы в качестве тест-культур для оценки чувствительности к цефтаролину и бета-лактамным антибиотикам; для поиска новых мишеней в клетке с целью разработки новых антибактериальных препаратов; для тестирования новых потенциальных антимикробных соединений.

Получение штаммов, их фенотипическая и генотипическая характеристика выполнялись в рамках выполнения проектов Российского Научного Фонда (проекты 18-75-10114 и 18-75-10114-П).

Литература

1. Lee H., Yoon E. J., Kim D. et al. Ceftaroline Resistance by Clone-Specific Polymorphism in Penicillin-Binding Protein 2a of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus II Antimicrob Agents Chemother. 2018. T. 62. №9. doi 10.1128/AAC.00485-18.

2. Farrell D.J., Castanheira M., Mendes R.E. et al. In vitro activity of ceftaroline against multidrug-resistant Staphylococcus aureus and Streptococcus pneumoniae: a review of published studies and the AWARE Surveillance Program (2008-2010) // Clin Infect Dis. 2012. T. 55 Suppl 3. C. S206-14. doi 10.1093/cid/cis563.

3. Zhang H., Xu Y., Jia P. et al. Global trends of antimicrobial susceptibility to ceftaroline and ceftazidime-avibactam: a surveillance study from the ATLAS program (2012-2016) // Antimicrob Resist Infect Control. 2020. T. 9. №1. C. 166. doi 10.1186/s13756-020-00829-z.

4. Greninger A.L., Chatterjee S.S., Chan L.C. et al. Whole-Genome Sequencing of Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus Resistant to Fifth-Generation Cephalosporins Reveals Potential Non-mecA Mechanisms of Resistance // PLoS One. 2016. T. 11. №2. C. e0149541. doi 10.1371/journal.pone.0149541.

5. Banerjee R., Gretes M., Harlem C. et al. A mecA-negative strain of methicillin-resistant Staphylococcus aureus with high-level beta-lactam resistance contains mutations in three genes // Antimicrob Agents Chemother. 2010. T. 54. №11. C. 4900-2. doi 10.1128/AAC.00594-10.

6. Chan L.C., Gilbert A., Basuino L. et al. PBP 4 Mediates High-Level Resistance to New-Generation Cephalosporins in Staphylococcus aureus II Antimicrob Agents Chemother. 2016. T. 60. №7. C. 3934-41. doi 10.1128/AAC.00358-16.

7. Griffiths J.M., O'Neill A.J. Loss of function of the gdpP protein leads to joint beta-lactam/glycopeptide tolerance in Staphylococcus aureus II Antimicrob Agents Chemother. 2012. T. 56. №1. C. 579-81. doi 10.1128/AAC.05148-11.

Изобретение относится к области биотехнологии. Метициллинрезистентный штамм Staphylococcus aureus (MRSA) SA0422 cpt характеризуется mec-независимым механизмом - устойчивостью к цефтаролину. Метициллинрезистентный штамм Staphylococcus aureus (MRSA) SA0146 cpt характеризуется устойчивостью к цефтаролину за счет мутаций в гене mecA. Штаммы были получены в ходе селекции in vitro в течение 40 пассажей на возрастающих концентрациях цефтаролина и характеризуются высоким уровнем устойчивости к цефтаролину (МПК≥32 мкг/мл). Исходные штаммы представлены клиническими изолятами (штамм SA0146 cpt - генотип ST228; штамм SA0422 cpt - генотип ST8), выделенными в 2012 году от пациентов со стафилококковыми инфекциями и чувствительными к цефтаролину. Штамм SA0146 cpt имеет мутации в гене mecA (Glu447Lys, Tyr446Asn), штамм SA0422 cpt характеризуется mec-независимым механизмом устойчивости к цефтаролину и фенотип детерминирован мутациями в системе метаболизма вторичных сигнальных мессенджеров c-di-AMP (ген gdpP). Штаммы депонированы в Государственную коллекцию патогенных микроорганизмов и клеточных культур (ГКПМ-Оболенск) под следующими регистрационными номерами: В-9990 (штамм SA0146 cpt) и В-9991 (SA0422 cpt). Штаммы могут быть использованы в качестве тест-культур для оценки чувствительности к антибактериальным препаратам; для поиска новых мишеней в клетке с целью разработки новых антибактериальных препаратов; для тестирования новых потенциальных антимикробных соединений. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 3 табл., 3 пр.

1. Штамм метициллинрезистентного Staphylococcus aureus SA0146 cpt, характеризующийся устойчивостью к цефтаролину за счет мутаций в гене mесА и используемый в качестве контрольной тест-культуры для определения чувствительности к бета-лактамным антибиотикам, депонирован в Государственную коллекцию патогенных микроорганизмов и клеточных культур (ГКПМ-Оболенск) под регистрационным номером В-9990.

2. Штамм метициллинрезистентного Staphylococcus aureus SA0422 cpt, характеризующийся устойчивостью к цефтаролину за счет мутаций в гене gdpP и используемый в качестве контрольной тест-культуры для определения чувствительности к бета-лактамным антибиотикам, депонирован в Государственную коллекцию патогенных микроорганизмов и клеточных культур (ГКПМ-Оболенск) под регистрационным номером В-9991.