НОВОЕ ФОСФАТЭФИРНОЕ СОЕДИНЕНИЕ, ИМЕЮЩЕЕ ПИРРОЛОПИРИМИДИНОВЫЙ СКЕЛЕТ, ИЛИ ЕГО ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМАЯ СОЛЬ Российский патент 2023 года по МПК C07H19/14 C07H1/00 A61K31/7064 A61P35/00 

Область техники, к которой относится изобретение

[0001]

Настоящее изобретение относится к новому фосфатэфирному соединению, имеющему пирролопиримидиновый скелет, обладающему отличным противоопухолевым эффектом, или его фармацевтически приемлемой соли. Настоящее изобретение также относится к комбинированному применению нового фосфатного эфира, имеющего пирролопиримидиновый скелет, или его фармацевтически приемлемой соли и алкилирующего средства и/или лучевой терапии.

Предпосылки создания изобретения

[0002]

Опухоли, характеризующиеся аномальной пролиферацией клеток, представляют собой трудноизлечимые заболевания, для которых все еще требуется эффективное лечение. Для пролиферации опухолевых клеток необходим биосинтез нуклеиновых кислот. Соединения, имитирующие молекулы, вовлеченные в биосинтез нуклеиновых кислот, активно разрабатываются в качестве антиметаболитов нуклеиновых кислот, нарушающих метаболизм нуклеиновых кислот в опухолях.

[0003]

Однако, даже если обнаружены соединения, обладающие высокоэффективным действием в качестве антиметаболитов нуклеиновых кислот, большинство соединений могут иметь проблемы с точки зрения токсичности или фармакокинетики и не могут использоваться в качестве клинически полезных лекарственных средств. Чтобы преодолеть проблемы и максимизировать эффективность, присущие этим соединениям, соединения иногда преобразовывают в пролекарства. Если соединение, обладающее противоопухолевым эффектом, преобразуют в пролекарство, фармакокинетика соединения и селективность его действия на раковую ткань, как ожидают, могут быть улучшены. Однако, несмотря на такие ожидания, соединение, обладающее высокоэффективным антиметаболическим действием в отношении нуклеиновых кислот, нелегко преобразовать в пролекарство, служащее в качестве клинически полезного лекарственного средства.

[0004]

В качестве соединения, имеющего пирролопиримидиновый скелет, были описаны дезоксирибонуклеозидные производные, имеющие 4-амино-5-галогено-7H-пирроло[2,3-d]пиримидиновый скелет (непатентная литература 1, 2, 3, 4), и дезоксирибонуклеозидное производное, имеющее атом йода в 5-положении (патентная литература 1). Однако не существует никаких описаний, предлагающих нуклеотидные производные, соответствующие этим нуклеозидным производным.

[0005]

Были описаны дезоксирибонуклеотидые производные, имеющие 4-амино-5-галогено-7H-пирроло[2,3-d]пиримидиновый скелет, (патентная литература 2, 3). Также было описано производное, имеющее атом фтора в 5-положении дезоксирибонуклеотидного производного (патентная литература 3). Кроме того, было описано дезоксирибонуклеотидное производное, имеющее 4-амино-7H-пирроло[2,3-d]пиримидиновый скелет (патентная литература 1). Однако, что касается этих нуклеотидов, в литературе нет никаких описаний, предлагающих пролекарства соответствующих нуклеозидных производных.

[0006]

Кроме того, было описано рибонуклеотидное производное, имеющее фосфат в 3'-положении, (непатентная литература 5). Однако, что касается этих нуклеотидных производных, в литературе не было описано соединение, имеющее атом галогена в 5-положении пирроло[2,3-d]пиримидинового скелета, и не предлагались пролекарства соответствующих нуклеозидных производных.

Перечень ссылочных документов

Патентная литература

[0007]

Патентная литература 1: WO 2013/009735

Патентная литература 2: WO 2014/124430

Патентная литература 3: WO 2017/165489

Непатентная литература

[0008]

Непатентная литература 1: Li et al., Acta Cryst. 2014, E70, o120

Непатентная литература 2: Perlikova et al., ChemMedChem, 2013, 8, 832-846

Непатентная литература 3: Naus et al., Bioorg. Med. Chem, 20, 2012, 5202-5214

Непатентная литература 4: Brown et al., J Med Chem. 2016 July 28; 59(14): 6860-6877

Непатентная литература 5: Ikehara et al., Chemical & Pharmaceutical Bulletin 1966, 14(12), 1338-46

Сущность изобретения

Техническая задача

[0009]

Настоящее изобретение обеспечивает соединение, имеющее пиримидиновый скелет, которое обладает более превосходной безопасностью по сравнению с существующими соединениями, имеющими пиримидиновый скелет и проявляет высокий противоопухолевый эффект. Настоящее изобретение также обеспечивает комбинированную терапию, включающую соединение, имеющее такой пиримидиновый скелет, и алкилирующее средство и/или лучевую терапию.

Решение задачи

[0010]

Авторами настоящего изобретения были найдены дезоксирибонуклеотидые производные, имеющие пирроло[2,3-d]пиримидиновый скелет, представленные общей формулой (1). Эти соединения имеют предварительно обусловленный атом галогена в 5-положении и фосфат в 3'-положении или 5'-положении.

[0011]

Более конкретно, вариант осуществления настоящего изобретения включает следующее.

[1] Соединение, представленное следующей общей формулой (1):

[Формула 1]

где

X представляет собой атом хлора, атом брома или атом йода,

Y, которые могут быть одинаковыми или отличными друг от друга, каждый представляет собой атом кислорода или атом серы,

m представляет собой целое число 0 или 1,

n представляет собой целое число 0 или 1 и

m+n=1,

или его фармацевтически приемлемая соль.

[2] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль в соответствии с пунктом [1], где X представляет собой атом брома или атом йода.

[3] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль в соответствии с пунктом [2], где X представляет собой атом йода.

[4] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль в соответствии с пунктом [3], где Y представляет собой атом кислорода.

[5] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль в соответствии с пунктом [4], где m=0 и n=1.

[6] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль в соответствии с пунктом [1], где X представляет собой атом брома или атом йода; Y представляет собой атом кислорода; m=0; и n=1.

[7] Соединение, выбранное из группы, состоящей из:

(1) ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфата;

(2) ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфата;

(3) O-(((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил) O, O-дигидрофосфоротиоата;

(4) (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил дигидрофосфата; и

(5) (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-chloro-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфата

или фармацевтически приемлемой соли такого соединения.

[8] Противоопухолевое средство, включающее соединение или его фармацевтически приемлемую соль в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] в качестве активного ингредиента.

[9] Фармацевтическая композиция, включающая соединение или его фармацевтически приемлемую соль в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и фармацевтически приемлемый носитель.

[10] Противоопухолевое средство в соответствии с пунктом [8] или фармацевтическая композиция в соответствии с пунктом [9], сформулированные в виде перорального препарата или инъекции.

[11] Способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий введение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7].

[12] Способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий введение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7], сформулированных в виде перорального препарата или инъекции, субъекту, нуждающемуся в этом.

[13] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] для применения в виде фармацевтической композиции.

[14] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] для профилактики и/или лечения опухоли.

[15] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль в соответствии с любым из пунктов [1]-[7], сформулированные в виде перорального препарата или инъекции, для применения в профилактике и/или лечении опухоли.

[16] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] для получения противоопухолевого средства.

[17] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] для получения фармацевтической композиции.

[18] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] для получения противоопухолевого средства, сформулированного в виде перорального препарата или инъекции.

[19] Противоопухолевое средство в соответствии с пунктом [8], способ профилактики и/или лечения опухоли в соответствии с пунктом [11] или [12], соединение или его фармацевтически приемлемая соль в соответствии с любым из пунктов [13]-[15] или применение в соответствии с любым из пунктов [16]-[18], где опухоль выбрана из группы, состоящей из рака головы и шеи (например, рака ротовой полости, фарингеального рака, рака гортани, рака носовой полости, рака придаточной пазухи, рака слюнных желез, рака щитовидной железы), рака желудочно-кишечного тракта (например, рака пищевода, рака желудка, рака двенадцатиперстной кишки, рака печени, рака желчных протоков (например, рака желчного пузыря/желчных протоков), рака поджелудочной железы, колоректального рака (например, рака толстой кишки, рака прямой кишки)), рака легкого (например, немелкоклеточного рака легкого, мелкоклеточного рака легкого, мезотелиомы), рака молочной железы, рака половых органов (например, рака яичников, рака матки (например, рака шейки матки, рака эндометрия)), рака мочевыводящих путей (например, рака почки, рака мочевого пузыря, рака предстательной железы, тестикулярной опухоли), опухоли гемопоэтических органов (например, лейкоза, злокачественной лимфомы, множественной миеломы), опухоли кости/мягкой ткани, рака кожи и опухоли головного мозга.

[20] Противоопухолевое средство, способ профилактики и/или лечения опухоли, соединение или его фармацевтически приемлемая соль или применение в соответствии с пунктом [19], где опухоль представляет собой опухоль головного мозга.

[21] Соединение, представленное следующей общей формулой (2):

[Формула 2]

где

X представляет собой атом хлора, атом брома или атом йода,

или его фармацевтически приемлемая соль.

[22] Противоопухолевое средство, включающее соединение или его фармацевтически приемлемую соль в соответствии с пунктом [21] в качестве активного ингредиента.

[23] Фармацевтическая композиция, включающая соединение или его фармацевтически приемлемую соль в соответствии с пунктом [21] и фармацевтически приемлемый носитель.

[24] Противоопухолевое средство в соответствии с пунктом [22] или фармацевтическая композиция в соответствии с пунктом [23], сформулированные в виде перорального препарата или инъекции.

[25] Способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий введение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с пунктом [21].

[26] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль в соответствии с пунктом [21] для профилактики и/или лечения опухоли.

[27] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с пунктом [21] для получения фармацевтической композиции или противоопухолевого средства.

[28] Противоопухолевое средство в соответствии с пунктом [22], способ профилактики и/или лечения опухоли в соответствии с пунктом [25], соединение или его фармацевтически приемлемая соль в соответствии с пунктом [26] или применение в соответствии с пунктом [27], где опухоль выбрана из группы, состоящей из рака головы и шеи (например, рака ротовой полости, фарингеального рака, рака гортани, рака носовой полости, рака придаточной пазухи, рака слюнных желез, рака щитовидной железы), рака желудочно-кишечного тракта (например, рака пищевода, рака желудка, рака двенадцатиперстной кишки, рака печени, рака желчных протоков (например, рака желчного пузыря/желчных протоков), рака поджелудочной железы, колоректального рака (например, рака толстой кишки, рака прямой кишки)), рака легкого (например, немелкоклеточного рака легкого, мелкоклеточного рака легкого, мезотелиомы), рака молочной железы, рака половых органов (например, рака яичников, рака матки (например, рака шейки матки, рака эндометрия)), рака мочевыводящих путей (например, рака почки, рака мочевого пузыря, рака предстательной железы, тестикулярной опухоли), опухоли гемопоэтических органов (например, лейкоза, злокачественной лимфомы, множественной миеломы), опухоли кости/мягкой ткани, рака кожи и опухоли головного мозга.

[29] Противоопухолевое средство, способ профилактики и/или лечения опухоли, соединение или его фармацевтически приемлемая соль или применение в соответствии с пунктом [28], где опухоль представляет собой опухоль головного мозга.

[30] Противоопухолевое средство или фармацевтическая композиция, состоящие из соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21], которые используют в комбинации с алкилирующим средством.

[31] Средство, усиливающее противоопухолевый эффект, включающее соединение или его фармацевтически приемлемую соль в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21], для усиления противоопухолевого эффекта алкилирующего средства.

[32] Противоопухолевое средство, включающее соединение или его фармацевтически приемлемую соль в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21], для лечения онкологического пациента, получившего введение алкилирующего средства.

[33] Способ лечения опухоли, включающий введение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21], которое используют в комбинации с алкилирующим средством.

[34] Способ усиления противоопухолевого эффекта алкилирующего средства, включающий введение пациенту соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21].

[35] Способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий введение противоопухолевого средства, состоящего из соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21], и алкилирующего средства.

[36] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21] для лечения опухоли, которое вводят в комбинации с алкилирующим средством.

[37] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21] для усиления противоопухолевого эффекта алкилирующего средства, которое вводят в комбинации с алкилирующим средством.

[38] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21] для лечения опухоли, которое отличается тем, что лечат онкологического пациента, получившего введение алкилирующего средства.

[39] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21] для усиления противоопухолевого эффекта алкилирующего средства, которое отличается тем, что лечат онкологического пациента, получившего введение алкилирующего средства.

[40] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21] для получения противоопухолевого средства, при этом противоопухолевое средство вводят в комбинации с алкилирующим средством.

[41] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21] для получения средства, усиливающего противоопухолевый эффект алкилирующего средства, при этом средство, усиливающее противоопухолевый эффект, вводят в комбинации с алкилирующим средством.

[42] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21] для получения противоопухолевого средства, при этом противоопухолевое средство вводят онкологическому пациенту, получившему введение алкилирующего средства, или онкологическому пациенту, который должен получить введение алкилирующего средства.

[43] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21] для получения средства, усиливающего противоопухолевый эффект алкилирующего средства, при этом средство, усиливающее противоопухолевый эффект, вводят онкологическому пациенту, получившему введение алкилирующего средства, или онкологическому пациенту, который должен получить введение алкилирующего средства.

[44] Противоопухолевое средство в соответствии с пунктом [30] или [32], средство, усиливающее противоопухолевый эффект, в соответствии с пунктом [31], способ в соответствии с любым из пунктов [33]-[35] или применение в соответствии с любым из пунктов [36]-[43], где алкилирующее средство представляет собой темозоломид.

[45] Противоопухолевое средство в соответствии с пунктом [30] или [32], средство, усиливающее противоопухолевый эффект, в соответствии с пунктом [31], способ в соответствии с любым из пунктов [33]-[35] или применение в соответствии с любым из пунктов [36]-[43], которые используют в комбинации с лучевой терапией в дополнение к алкилирующему средству.

[46] Противоопухолевое средство, состоящее из соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21], которое используют в комбинации с лучевой терапией.

[47] Средство, усиливающее противоопухолевый эффект, включающее соединение или его фармацевтически приемлемую соль в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21], для усиления противоопухолевого эффекта лучевой терапии.

[48] Противоопухолевое средство или фармацевтическая композиция, включающие соединение или его фармацевтически приемлемую соль в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21], для лечения онкологического пациента, получившего лучевую терапию.

[49] Способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий соединение или его фармацевтически приемлемую соль в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21], которое используют в комбинации с лучевой терапией.

[50] Способ усиления противоопухолевого эффекта лучевой терапии, включающий введение пациенту соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21].

[51] Способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий введение противоопухолевого средства, состоящего из соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21], онкологическому пациенту, получившему лучевую терапию.

[52] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21] для лечения опухоли, которое используют в комбинации с лучевой терапией.

[53] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21] для усиления противоопухолевого эффекта, которое используют в комбинации с лучевой терапией.

[54] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21] для лечения опухоли, которое лечит онкологического пациента, получившего лучевую терапию.

[55] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21] для усиления противоопухолевого эффекта, которое лечит онкологического пациента, получившего лучевую терапию.

[56] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21] для получения противоопухолевого средства, при этом противоопухолевое средство используют в комбинации с лучевой терапией.

[57] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21] для получения средства, усиливающего противоопухолевый эффект, при этом средство, усиливающее противоопухолевый эффект, используют в комбинации с лучевой терапией.

[58] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21] для получения противоопухолевого средства, при этом противоопухолевое средство вводят онкологическому пациенту, получившему лучевую терапию.

[59] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21] для получения средства, усиливающего противоопухолевый эффект, при этом средство, усиливающее противоопухолевый эффект, вводят онкологическому пациенту, получившему лучевую терапию.

[60] Противоопухолевое средство в соответствии с пунктом [46] или [48], средство, усиливающее противоопухолевый эффект, в соответствии с пунктом [47], способ в соответствии с любым из пунктов [49]-[51] или применение в соответствии с любым из пунктов [52]-[59], которые используют в комбинации с алкилирующим средством в дополнение к лучевой терапии.

[61] Противоопухолевое средство, средство, усиливающее противоопухолевый эффект, способ или применение в соответствии с пунктом [60], где алкилирующее средство представляет собой темозоломид.

[62] Комбинация, включающая: фармацевтическую композицию, включающую соединение или его фармацевтически приемлемую соль в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21]; и алкилирующее средство.

[63] Комбинированное лекарственное средство, включающее соединение или его фармацевтически приемлемую соль в соответствии с любым из пунктов [1]-[7] и [21] и алкилирующее средство.

[64] Комбинация в соответствии с пунктом [62] или комбинированное лекарственное средство в соответствии с пунктом [63], которые используют в комбинации с лучевой терапией.

[65] Комбинация в соответствии с пунктом [62] или комбинированное лекарственное средство в соответствии с пунктом [63], сформулированные в виде перорального препарата или инъекции.

Полезные эффекты изобретения

[0012]

Новое фосфатэфирное соединение, имеющее пирролопиримидиновый скелет, или его фармацевтически приемлемая соль является полезным в качестве противоопухолевого средства, обладающего отличной безопасностью и проявляющего высокий противоопухолевый эффект. Также новое фосфатэфирное соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль при использовании в комбинации с алкилирующим средством и/или лучевой терапией демонстрирует отличный сочетанный эффект.

Краткое описание чертежей

[0013]

[Фиг. 1] Фиг. 1 показывает IR (вертикальная ось) в последний день оценки, когда соединение Сравнительного примера 2 и Соединение Примера 2 вводили BALB/cA Jcl-nu/nu мышам, которым была трансплантирована клеточная линия опухоли головного мозга человека (U-87MG).

[Фиг. 2] Фиг. 2 показывает BWC (вертикальная ось) в отдельные дни оценки (горизонтальная ось), когда соединение Сравнительного примера 2 и Соединение Примера 2 вводили BALB/cA Jcl-nu/nu мышам, которым была трансплантирована клеточная линия опухоли головного мозга человека (U-87MG). представляет контрольную группу мышей (необработанные); представляет группу, получающую соединение Сравнительного примера 2; и представляет собой группу, получающую соединение Примера 2.

[Фиг. 3] Фиг. 3 показывает RTV (вертикальная ось) в отдельные дни оценки (горизонтальная ось), когда соединение Сравнительного примера 2 вводили BALB/cA Jcl-nu/nu мышам, которым была трансплантирована клеточная линия опухоли гемопоэтического органа человека (MV-4-11). представляет контрольную группу (необработанные); и представляет группу, получающую соединение Сравнительного примера 2.

[Фиг. 4] Фиг. 4 показывает BWC (вертикальная ось) в отдельные дни оценки (горизонтальная ось), когда соединение Сравнительного примера 2 вводили BALB/cA Jcl-nu/nu мышам, которым была трансплантирована клеточная линия опухоли гемопоэтического органа человека (MV-4-11). представляет контрольную группу (необработанные); и представляет группу, получающую соединение Сравнительного примера 2.

[Фиг. 5] Фиг. 5 показывает RTV (вертикальная ось) в отдельные дни оценки (горизонтальная ось), когда соединение Примера 2 вводили BALB/cA Jcl-nu/nu мышам, которым была трансплантирована клеточная линия опухоли гемопоэтического органа человека (MV-4-11). представляет контрольную группу мышей (необработанные); и представляет группу, получающую соединение Примера 2.

[Фиг. 6] Фиг. 6 показывает BWC (вертикальная ось) в отдельные дни оценки (горизонтальная ось), когда соединение Примера 2 вводили BALB/cA Jcl-nu/nu мышам, которым была трансплантирована клеточная линия опухоли гемопоэтического органа человека (MV-4-11). представляет контрольную группу (необработанные); и представляет группу, получающую соединение Примера 2.

[Фиг. 7] Фиг. 7 показывает изменения лимфоцитов (LYMPH) и моноцитов (MONO) в последний день оценки в группе BALB/cA Jcl-nu/nu мышей, которым была трансплантирована клеточная линия опухоли гемопоэтического органа человека (MV-4-11), получающих соединение Примера 2 и соединение Сравнительного примера 2, соответственно, по сравнению с контрольной группой (необработанные).

[Фиг. 8] Фиг. 8 показывает жизнеспособность клеток клеточной линии опухоли головного мозга человека (U-87MG), обработанных соединением Сравнительного примера 2 и лучевой терапией отдельно или в комбинации.

[Фиг. 9] Фиг. 9 показывает жизнеспособность клеток клеточной линии опухоли головного мозга человека (U-87MG), обработанных соединением Сравнительного примера 2 и темозоломидом (TMZ) отдельно или в комбинации.

Описание вариантов осуществления

[0014]

Далее настоящее изобретение будет описано более конкретно. Должно быть понятно, что объем настоящего изобретения не ограничивается вариантами осуществления, описанными ниже.

[0015]

<Определение терминов>

Термины, используемые в описании изобретения, имеют значения, обычно используемые в данной области техники, если не указано иное.

[0016]

<Соединение формулы (1)>

В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединение по настоящему изобретению, представленное следующей формулой (1):

[Формула 3]

где

X представляет собой атом хлора, атом брома или атом йода,

Y, которые могут быть одинаковыми или отличными друг от друга, каждый представляет собой атом кислорода или атом серы,

m представляет собой целое число 0 или 1,

n представляет собой целое число 0 или 1 и

m+n=1,

представляет собой новое соединение, имеющее пирроло[2,3-d]пиримидин в качестве основного скелета.

[0017]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединение по настоящему изобретению, представленное следующей формулой (1):

[Формула 4]

где

X представляет собой атом брома или атом йода,

Y, которые могут быть одинаковыми или отличными друг от друга, каждый представляет собой атом кислорода или атом серы,

m представляет собой целое число 0 или 1,

n представляет собой целое число 0 или 1 и

m+n=1,

представляет собой новое соединение, имеющее пирроло[2,3-d]пиримидин в качестве основного скелета.

[0018]

В соединении, представленном общей формулой (1), по настоящему изобретению X представляет собой атом хлора, атом брома или атом йода, предпочтительно атом брома или атом йода, и более предпочтительно атом йода.

[0019]

В соединении, представленном общей формулой (1), по настоящему изобретению Y, которые могут быть одинаковыми или отличными друг от друга, каждый представляет собой атом кислорода или атом серы. В соединении по настоящему изобретению каждый из Y предпочтительно представляет собой атом кислорода, с точки зрения баланса между противоопухолевым эффектом и токсичностью.

[0020]

В соединении, представленном общей формулой (1), по настоящему изобретению n представляет собой целое число 0 или 1. Более конкретно, n представляет собой количество фосфатных групп, замещенных гидрокси группой, в 5'-положении. В соединении по настоящему изобретению n предпочтительно представляет собой 1. Соединение по настоящему изобретению, если оно содержит фосфатную группу в качестве заместителя, может иметь лучшую водорастворимость, и его можно использовать не только в качестве перорального препарата, но также для инъекций.

[0021]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединение, представленное общей формулой (1), предпочтительно представляет собой соединение, где X представляет собой атом хлора, атом брома или атом йода, Y представляет собой атом кислорода или атом серы и m+n=1; и более предпочтительно соединение, где X представляет собой атом хлора, атом брома или атом йода, Y представляет собой атом кислорода, m=0 и n=1.

[0022]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединение, представленное общей формулой (1), представляет собой соединение, имеющее вышеуказанные заместители; предпочтительно соединение, где X представляет собой атом брома или атом йода; Y представляет собой атом кислорода и m+n=1; и более предпочтительно соединение, где X представляет собой атом брома или атом йода, Y представляет собой атом кислорода, m=0 и n=1.

[0023]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединение, представленное общей формулой (1), по настоящему изобретению предпочтительно представляет собой соединение, где X представляет собой атом йода, Y представляет собой атом кислорода или атом серы и m+n=1; и более предпочтительно соединение, где X представляет собой атом йода, Y представляет собой атом кислорода, m=0 и n=1.

[0024]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединение, представленное общей формулой (1), по настоящему изобретению предпочтительно представляет собой соединение, где X представляет собой атом брома, Y представляет собой атом кислорода или атом серы и m+n=1; и более предпочтительно соединение, где X представляет собой атом брома, Y представляет собой атом кислорода, m=0 и n=1.

[0025]

Конкретные примеры соединения по настоящему изобретению включают, но не ограничиваются этим, следующие соединения:

(1) ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфат,

(2) ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфат,

(3) O-(((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил) O, O-дигидрофосфоротиоат,

(4) (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил дигидрофосфат и

(5) (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-chloro-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфат,

или их фармацевтически приемлемые соли.

[0026]

Соединение по настоящему изобретению может быть выбрано из группы, состоящей из соединений (1)-(5) или их фармацевтически приемлемых солей, и предпочтительно соединение, выбранное из группы, состоящей из следующих:

(1) ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидро фосфат; и

(2) ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфат,

или фармацевтически приемлемая соль такого соединения.

[0027]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения обеспечивается соединение, представленное следующей формулой (2):

[Формула 5]

где

X представляет собой атом хлора, атом брома или атом йода,

или его фармацевтически приемлемая соль.

[0028]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения обеспечивается соединение, выбранное из группы, состоящей из следующих:

(1) (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ол,

(2) (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ол и

(3) (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ол,

или фармацевтически приемлемая соль такого соединения, как соединение по настоящему изобретению.

[0029]

<Способ получения соединения, представленного формулой (1)>

Далее будет описан способ получения соединения в соответствии с настоящим изобретением.

[0030]

Соединение, представленное формулой (1), по настоящему изобретению можно получить, например, следующим способом получения или способом, показанным в Примерах. Однако способ получения соединения, представленного формулой (1), по настоящему изобретению не ограничивается показанными в этих примерах реакций. Продукты, полученные на отдельных стадиях, можно подвергнуть следующим стадиям с использованием или без выделения/очистки методами выделения/очистки, известными в данной области техники, такими как концентрирование, концентрирование при пониженном давлении, кристаллизация, экстракция растворителем, повторное осаждение и хроматография. В следующем способе получения можно осуществить введение или удаление защитной группы, при необходимости, независимо от того, описано это или нет, и порядок отдельных стадий может быть соответственно изменен.

[0031]

В исходные соединения и конечные продукты, полученные на отдельных стадиях, при необходимости можно ввести защитную группу, которая легко преобразуется в функциональную группу. Это иногда эффективно для отдельных стадий или позволяет изменить порядок отдельных стадий. В качестве защитной группы для использования в настоящем изобретении можно использовать защитную группу, описанную, например, в литературе ["Protective Groups in Organic Synthesis" авторы Greene и Wuts, пятое издание, John Wiley & Sons Inc., 2014]. Защитную группу можно подходящим образом выбрать в зависимости от реакционных условий, используемых на каждой стадии. После осуществления реакции с введением защитной группы защитную группу при необходимости удаляют. Таким образом можно получить желаемое соединение.

[0032]

[Способ получения 1] Способ получения соединения, представленного общей формулой (1a)(в общей формуле (1) m=0)

[Формула 6]

где X, Y и n имеют значение, определенное выше, и A¹ представляет собой ацильную группу.

[0033]

(Первая стадия)

На этой стадии соединение, представленное общей формулой (2), и соединение, представленное общей формулой (3), подвергают взаимодействию в присутствии основания с получением соединения, представленного общей формулой (4).

[0034]

A¹ в соединении, представленном общей формулой (2), конкретно не ограничивается при условии, что ее можно удалить с использованием аммиака. Примеры включают ацильную группу, такую как бензоильная группа или ацетильная группа.

[0035]

Примеры основания для использования в реакции включают неорганические основания, такие как гидроксид натрия, гидрид натрия, гидроксид лития, гидрид калия и гидроксид калия. Растворитель, который можно использовать в реакции, конкретно не ограничивается при условии, что он не оказывает влияния на реакцию. Примеры растворителя включают ацетонитрил, диоксан, тетрагидрофуран, N, N-диметилацетамид, N, N-диметилформамид и диметилсульфоксид. Эти растворители можно использовать отдельно или в виде смеси. В реакции, при необходимости, можно использовать органический третичный амин, такой как трис(2-(2-метоксиэтокси)этил)амин. В этой реакции соединение, представленное общей формулой (3), используют в количестве около 0,5-20 моль и предпочтительно около 0,7-5 моль; основание используют в количестве 1,0-40 моль, предпочтительно около 1,4-10 моль; и органический третичный амин используют в количестве 0,01-10 моль и предпочтительно около 0,02-5 моль, в расчете на моль соединения, представленного общей формулой (2). Температура реакции находится в пределах от -30 до 100°C и предпочтительно от -20 до 60°C. Время реакции составляет от 0,1 до 48 часов и предпочтительно от 1 до 24 часов.

[0036]

(Вторая стадия)

На этой стадии соединение, представленное общей формулой (4), и аммиак подвергают взаимодействию с успешным получением соединения, представленного общей формулой (5).

[0037]

Растворитель, который можно использовать в реакции, конкретно не ограничивается при условии, что он не оказывает влияния на реакцию. Примеры растворителя включают диоксан, диметоксиэтан, тетрагидрофуран, N, N-диметилацетамид, диметилсульфоксид и воду. Эти растворители можно использовать отдельно или в виде смеси. В реакции аммиак используют в количестве около 3-1000 моль и предпочтительно около 5-500 моль в расчете на моль соединения, представленного общей формулой (4). Температура реакции находится в пределах от 0 до 200°C и предпочтительно от 20 до 150°C. Время реакции составляет от 0,1 до 48 часов и предпочтительно от 1 до 24 часов.

[0038]

(Третья стадия)

На этой стадии соединение, представленное общей формулой (5), и фосфорилирующий реагент подвергают взаимодействию для селективного фосфорилирования только 5'-положения с получением соединения, представленного общей формулой (1a).

[0039]

Фосфорилирующий реагент, который можно использовать в реакции, конкретно не ограничивается при условии, что он может селективно фосфорилировать 5'-положение. Примеры фосфорилирующего реагента включают фосфорилгалогениды, такие как оксихлорид фосфора, тиохлорид фосфора и оксибромид фосфора. В реакции, при необходимости, можно использовать основание. Примеры основания включают органические амины, такие как имидазол, 1-метилимидазол, триэтиламин, триэтиламин, трипропиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, пиридин, 4-(N, N-диметиламино)пиридин, лутидин и коллидин; и неорганические основания, такие как гидрокарбонат натрия, карбонат натрия и карбонат калия. Растворитель, который можно использовать в реакции, конкретно не ограничивается при условии, что он не оказывает влияния на реакцию. Примеры растворителя включают триметилфосфат, триэтилфосфат, трипропилфосфат, дихлорметан, хлороформ, этилацетат, тетрагидрофуран, диоксан, диэтиловый эфир, бензол, толуол, N, N-диметилацетамид и диметилсульфоксид. Эти растворители можно использовать отдельно или в виде смеси. В этой реакции фосфорилирующий реагент, указанный выше, используют в количестве 0,5-20 моль и предпочтительно около 1-10 моль, и основание используют в количестве 0,5-20 моль и предпочтительно около 1-10 моль, в расчете на моль соединения, представленного общей формулой (5). Температура реакции находится в пределах от -30 до 100°C и предпочтительно от -20 до 60°C. Время реакции составляет от 0,1 до 100 часов и предпочтительно от 1 до 48 часов.

[0040]

[Способ получения 2] Способ получения соединения, представленного общей формулой (1b)(в общей формуле (1) n=0)

[Формула 7]

где X, Y и m имеют значение, определенное выше; и A² и A³ каждый представляет собой ацильную группу.

[0041]

(Первая стадия)

На этой стадии нуклеозидное соединение, представленное общей формулой (5), или его соль и реагент для введения защитной группы для амино группы подвергают взаимодействию для селективной защиты только амино группы с получением соединения, представленного общей формулой (6).

[0042]

Защитная группа, выбранная в этой реакции, конкретно не ограничивается при условии, что она может быть удалена в щелочных условиях. Примеры защитной группы включают ацилгалогениды, такие как бензоилхлорид, п-хлорбензоилхлорид и ацетилхлорид, представленные как A²-Z (Z представляет собой удаляемую группу, такую как атом галогена).

[0043]

В этой реакции для селективной защиты амино группы осуществляют триметилсилилирование с использованием триметилхлорсилана для защиты сначала двух гидрокси групп в реакционной системе; затем A²-Z подвергают взаимодействию с амино группой в этой же реакционной системе; а затем также подвергают взаимодействию с аммиаком в этой же реакционной системе для удаления триметилсилильной группы. Таким образом получают соединение, представленное общей формулой (6). Растворитель, который можно использовать в реакции, конкретно не ограничивается при условии, что он не оказывает влияния на реакцию. Примеры растворителя включают дихлорметан, хлороформ, этилацетат, тетрагидрофуран, диоксан, диэтиловый эфир, бензол, толуол, N, N-диметилацетамид, N, N-диметилформамид и диметилсульфоксид. Эти растворители можно использовать отдельно или в виде смеси. В реакции, при необходимости, можно использовать основание. Примеры основания включают органические амины, такие как имидазол, 1-метилимидазол, триэтиламин, триэтиламин, трипропиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, пиридин, 4-(N, N-диметиламино)пиридин, лутидин и коллидин; и неорганические основания, такие как гидрокарбонат натрия, карбонат натрия и карбонат калия. Основание как таковое можно использовать в качестве растворителя. В реакции триметилхлорсилан используют в количестве около 1-20 моль и предпочтительно около 1-10 моль; A²-Z, указанный выше, используют в количестве около 1-20 моль, предпочтительно около 1-10 моль; основание используют в количестве около 1-1000 моль, предпочтительно около 1-500 моль; и аммиак используют в количестве около 1-10000 моль и предпочтительно около 1-1000 моль, в расчете на моль соединения, представленного общей формулой (5). Температура реакции находится в пределах от -30 до 100°C и предпочтительно от -10 до 60°C. Время реакции составляет от 0,1 до 100 часов и предпочтительно от 1 до 48 часов.

[0044]

(Вторая стадия)

На этой стадии соединение, представленное общей формулой (6), подвергают взаимодействию с реагентом для защиты, чтобы селективно защитить только гидрокси группу в 5'-положении, с получением соединения, представленного общей формулой (7).

[0045]

Защитная группа, выбираемая для этой реакции, конкретно не ограничивается при условии, что она удаляется одновременно с A² в щелочных условиях. Примеры реагента для введения защитной группы включают ацилгалогениды, такие как бензоилхлорид, п-хлорбензоилхлорид и ацетилхлорид, представленные как A³-Z (Z представляет собой удаляемую группу, такую как атом галогена). Растворитель, который можно использовать в реакции, конкретно не ограничивается при условии, что он не оказывает влияния на реакцию. Примеры растворителя включают дихлорметан, хлороформ, этилацетат, тетрагидрофуран, диоксан, диэтиловый эфир, бензол, толуол, N, N-диметилацетамид, N, N-диметилформамид и диметилсульфоксид. Эти растворители можно использовать отдельно или в виде смеси. В реакции, при необходимости, можно использовать основание. Примеры основания включают органические амины, такие как имидазол, 1-метилимидазол, триэтиламин, триэтиламин, трипропиламин, диизопропилэтиламин, N-метилморфолин, пиридин, 4-(N, N-диметиламино)пиридин, лутидин и коллидин; и неорганические основания, такие как гидрокарбонат натрия, карбонат натрия и карбонат калия. Основание как таковое можно использовать в качестве растворителя. В реакции A³-Z используют в количестве около 1-20 моль и предпочтительно около 1-10 моль, а основание используют в количестве около 1-1000 моль и предпочтительно около 1-500 моль, в расчете на моль соединения, представленного общей формулой (6). Температура реакции находится в пределах от -30 до 100°C и предпочтительно от -10 до 60°C. Время реакции составляет от 0,1 до 100 часов и предпочтительно от 1 до 48 часов.

[0046]

(Третья стадия)

На этой стадии соединение, представленное общей формулой (7), подвергают взаимодействию с фосфорилирующим реагентом для фосфорилирования гидрокси группы в 3'-положении с получением соединения, представленного общей формулой (8).

[0047]

Примеры фосфорилирующего реагента, который можно использовать в этой реакции, включают фосфорилгалогениды, такие как оксихлорид фосфора, тиохлорид фосфора и оксибромид фосфора. Растворитель, который можно использовать в реакции, конкретно не ограничивается при условии, что он не оказывает влияния на реакцию. Примеры растворителя включают триметилфосфат, триэтилфосфат, трипропилфосфат, дихлорметан, хлороформ, этилацетат, тетрагидрофуран, диоксан, диэтиловый эфир, бензол, толуол, N, N-диметилацетамид и диметилсульфоксид. Эти растворители можно использовать отдельно или в виде смеси. В этой реакции фосфорилирующий реагент, указанный выше, используют в количестве 0,5-20 моль и предпочтительно около 1-10 моль, в расчете на моль соединения, представленного общей формулой (7). Температура реакции находится в пределах от -30 до 100°C и предпочтительно от -20 до 60°C. Время реакции составляет от 0,1 до 100 часов и предпочтительно от 1 до 48 часов.

[0048]

(Четвертая стадия)

На этой стадии реагент для удаления защитной группы подвергают взаимодействию с соединением, представленным общей формулой (8). Таким образом, защитные группы A² и A³ удаляют с получением соединения, представленного общей формулой (1b). Растворитель, который можно использовать, конкретно не ограничивается при условии, что он не оказывает влияния на реакцию. Примеры растворителя включают метанол, этанол, пропанол, изопропанол, тетрагидрофуран, диоксан, диэтиловый эфир, N, N-диметилацетамид и воду. Эти растворители можно использовать отдельно или в виде смеси. Примеры реагента для удаления защитной группы, который можно использовать, включают моноалкиламины, такие как метиламин, этиламин и пропиламин; и неорганические основания, такие как гидрокарбонат натрия, карбонат натрия, карбонат калия, гидроксид натрия, гидроксид калия и гидроксид лития. В этой реакции реагент для удаления защитной группы используют в количестве 1-10000 моль и предпочтительно около 1-1000 моль, в расчете на моль соединения, представленного общей формулой (8). Температура реакции находится в пределах от -30 до 100°C и предпочтительно от -20 до 60°C. Время реакции составляет от 0,1 до 100 часов и предпочтительно от 0,2 до 48 часов.

[0049]

Как описано выше, можно получить соединение, представленное общей формулой (1), или его фармацевтически приемлемую соль, в частности соединение, представленное общей формулой (1a), имеющее фосфат в 5’-положении, или соединение, представленное общей формулой (1b), имеющее фосфат в 3'-положении.

[0050]

Соединение, представленное общей формулой (1), или его фармацевтически приемлемую соль, полученные таким образом, можно очистить способом, обычно используемым в данной области техники. Конкретные примеры способа очистки включают, но не ограничиваются этим, фракционирование с использованием хроматографии на силикагеле или обращеннофазовой хроматографии и экстрагирование с органическим слоем и водным слоем.

[0051]

Соединение по настоящему изобретению представляет собой новое фосфатэфирное соединение, имеющее пирролопиримидиновый скелет, или его фармацевтически приемлемую соль, в этом смысле новое нуклеотидное производное. Соединение по настоящему изобретению можно использовать как пролекарство, поскольку соединение преобразуется в активное нуклеозидное производное, обладающее противоопухолевым эффектом, путем удаления фосфата in vivo. Поскольку фармакокинетика, которую изначально имеет активное нуклеозидное производное, может быть еще более улучшена за счет этого механизма, и, кроме того, токсичность, которую имеет активное нуклеозидное производное, может быть уменьшена. Поэтому соединение по настоящему изобретению можно использовать в качестве превосходного противоопухолевого средства.

[0052]

Снижение токсичности в результате введения соединения по настоящему изобретению получают у любых видов животных, которым вводят соединение по настоящему изобретению. Снижается токсичность или нет, может быть подтверждено проверкой подавления, например, потери массы тела и восстановления компонентов крови у видов животных, получающих соединение.

[0053]

Если соединение по настоящему изобретению имеет изомеры, такие как оптический изомер, стереоизомер, ротационный изомер и таутомер, индивидуальные изомеры и смесь изомеров включены в соединение по настоящему изобретению, если не указано иное.

[0054]

Соль соединения по настоящему изобретению относится к фармацевтически приемлемой соли, такой как основно-аддитивная соль или кислотно-аддитивная соль.

[0055]

Соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль может присутствовать в аморфной форме или кристаллической форме. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль, даже если оно имеет монокристаллическую форму или представляет собой полиморфную смесь, включено в соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль. Соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль может быть в форме сольвата (например, гидрата) или в несольватированной форме. Как его сольват, так и несольватированная форма включены в соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль. Соединение, меченное, например, изотопами (например, ³H, ¹⁴C, ³⁵S, ¹²⁵I), включено в соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль.

[0056]

Соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, которые можно использовать в качестве лекарственного средства, могут быть получены в различных лекарственных формах в зависимости от профилактического или терапевтического назначения путем добавления, при необходимости, фармацевтически приемлемого носителя. Примеры лекарственной формы лекарственного средства включают пероральный препарат, инъекцию, суппозиторий, мазь и пластырь. Предпочтительно используют пероральный препарат или инъекцию, и более предпочтительным является использование инъекции. В другом варианте осуществления пероральный препарат более предпочтителен для использования как лекарственная форма лекарственного средства.

[0057]

Примеры лекарственной формы соединения по настоящему изобретению включают пероральный препарат или препарат для инъекций, содержащий соединение в соответствии с любым из (1)-(5):

(1) ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфат

(2) ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфат

(3) O-(((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил) O, O-дигидрофосфоротиоат

(4) (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ил дигидрофосфат

(5) (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфат,

или его фармацевтически приемлемую соль.

Различные лекарственные формы соединения по настоящему изобретению предпочтительно представляют собой пероральный препарат соединения в соответствии с (1) или его фармацевтически приемлемой соли, инъекционную форму соединения в соответствии с (1) или его фармацевтически приемлемой соли, пероральный препарат соединения в соответствии с (2) или его фармацевтически приемлемой соли, или инъекционную форму соединения в соответствии с (2) или его фармацевтически приемлемой соли.

[0058]

Каждую из этих лекарственных форм можно получить способом, известным специалистам в данной области техники.

[0059]

Термин "осуществлять лечение" или "лечение", используемый в описании изобретения, включает применение лечения в целях излечения рака или облегчения симптома рака, подавления прогрессирования, возникновения или рецидива рака, или ослабления симптома.

[0060]

Термин "эффективное количество", используемый в описании, относится к количеству фармацевтически активного лекарственного средства, достаточному для того, чтобы вызвать биологический или медицинский ответ в ткани, системе или у животного или человека. Эффективное количество определяется исследователем, ветеринаром, врачом или другими клиницистами. В одном варианте осуществления настоящего изобретения "эффективное количество" относится к количеству активного ингредиента лекарственного средства, достаточному для ослабления по меньшей мере одного клинического симптома у пациента-человека. В одном варианте осуществления настоящего изобретения "эффективное количество" может быть "профилактически эффективным количеством", т.е. количеством, достаточным для предотвращения рака. В одном варианте осуществления настоящего изобретения "эффективное количество" лекарственного средства, которое вводят в комбинации с алкилирующим средством, может быть соответствующим образом уменьшено по сравнению с эффективным количеством лекарственного средства, вводимого отдельно, с учетом не только лечебных эффектов обоих, т.е. соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли и алкилирующего средства, но также их побочных эффектов. В одном варианте осуществления настоящего изобретения "эффективное количество" лекарственного средства, которое используют в сочетании с лучевой терапией, может быть соответствующим образом уменьшено по сравнению с эффективным количеством лекарственного средства, вводимого отдельно, с учетом не только эффектов обоих, т.е. соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли и лучевой терапии, но также их побочных эффектов.

[0061]

Термин "субъект", используемый в описании, включает не только млекопитающее, но и не млекопитающее, предпочтительно человека. В одном варианте осуществления настоящего изобретения субъектом является пациент-человек, более конкретно, это может быть человек, который, как было диагностировано, нуждается в лечении клинических симптомов или медицинских состояний, связанных с раком, раскрытым в описании. Иногда субъекту может потребоваться существующее лечение рака или профилактическое лечение для предотвращения или снижения риска развития рака. "Необходимость" в существующем лечении для субъекта или профилактическом лечении рака, используемом в описании, включает не только необходимость, определенную медицинским работником, но также желание пациента пройти лечение.

[0062]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения обеспечивается противоопухолевое средство, включающее соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль в качестве активного ингредиента. В другом варианте осуществления настоящего изобретения обеспечивается способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий введение соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли субъекту, нуждающемуся в этом. Еще в одном варианте осуществления настоящего изобретения обеспечивается применение соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли для получения противоопухолевого средства. Еще в одном варианте осуществления настоящего изобретения обеспечивается соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль для применения в профилактике и/или лечении опухоли.

[0063]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения обеспечивается фармацевтическая композиция, включающая соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль. Фармацевтическая композиция в соответствии с одним вариантом осуществления настоящего изобретения включает соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель. В другом варианте осуществления настоящего изобретения обеспечивается применение соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли для получения фармацевтической композиции. Еще в одном варианте осуществления настоящего изобретения обеспечивается соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль для применения в качестве лекарственного средства.

[0064]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать в комбинации с алкилирующим средством и/или лучевой терапией.

[0065]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения обеспечивается соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, которые вводят в комбинации с алкилирующим средством. В другом варианте осуществления настоящего изобретения обеспечивается соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, которые вводят в комбинации с алкилирующим средством, для получения противоопухолевого средства. Еще в одном варианте осуществления настоящего изобретения обеспечивается соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, которые вводят в комбинации с алкилирующим средством, для лечения опухоли.

[0066]

В настоящем изобретении "алкилирующее средство" является активным против рака in vivo и является необязательным активным ингредиентом лекарственного средства, отличным от соединения по настоящему изобретению (или его фармацевтически приемлемой соли). Примеры алкилирующего средства, используемого в комбинации, включают пролекарство алкилирующего средства, которое должно использоваться в комбинации, свободную кислоту, свободное основание и фармацевтически приемлемую соль. Как правило, необязательное и подходящее дополнительное противораковое лекарственное средство можно использовать в любой комбинации с соединением по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой солью в однодозовом препарате (например, комбинации лекарственных средств с фиксированной дозой) или отдельно в одной или нескольких лекарственных формах. Однодозовый препарат обеспечивает одновременное введение активных ингредиентов лекарственного средства (одновременное введение различных активных ингредиентов лекарственного средства), последовательное введение или их раздельное введение субъекту. В конкретном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению и алкилирующее средство вводят в комбинации с интервалами в несколько минут, несколько часов или несколько дней. В одном варианте осуществления одно или несколько дополнительных противораковых лекарственных средств включены в фармацевтический продукт, как указано выше.

[0067]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения обеспечивается комбинированный продукт, который содержит фармацевтическую композицию, включающую соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, и алкилирующее средство. Фармацевтическая композиция, включающая соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль, и алкилирующее средство, которые содержатся в комбинированном продукте, можно вводить одновременно (одновременное введение различных активных ингредиентов лекарственных средств), последовательно или раздельно с интервалами в несколько минут, несколько часов, несколько дней, несколько недель или несколько месяцев.

[0068]

В настоящем изобретении примеры "алкилирующего средства" включают, но не ограничиваются этим, хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорфосфамид, цитофосфан, эстрамустин, ифосфамид, манномустин, мехлоретамин, мехлоретамин гидрохлорид, мелфалан, новембихин, фенестерин, преднимустин, тримустин хлорэтиламин, трофосфамид и урацилиприт; алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; нитрозомочевинные препараты, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимустин, стрептозотоцин и ТА-07; этиленимины, такие как алтретамин, тиотепа, триэтиленмеламин, триэтилентиофосфорамид, триэтиленфосфорамид и триметилоломеламин; метилмеламин; амбамустин; бендамустин; дакарбазин; этоглюцид; ирофульвен; мафосфамид; митобронитол; митолактол; пипоброман; прокарбазин; темозоломид; треосульфан; триазиквон и диангидрогалактитол.

[0069]

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения "алкилирующее средство" представляет собой хлорамбуцил, эстрамустин, ифосфамид, мелфалан, кармустин, фотемустин, ломустин, нимустин, ранимустин, алтретамин, бендамустин, дакарбазин, прокаррогазин, темозоломид или диангидрогалактитол. В другом предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения "алкилирующее средство" представляет собой эстрамустин, кармустин, ломустин, нимустин, ранимустин, бендамустин, прокарбазин, темозоломид или диангидрогалактитол. В наиболее предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения "алкилирующее средство" представляет собой темозоломид.

[0070]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения эти "алкилирующие средства" можно использовать отдельно или в комбинации.

[0071]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения алкилирующее средство можно вводить в комбинации, и лучевую терапию также используют в комбинации.

[0072]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения обеспечивается соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, которое используют в комбинации с лучевой терапией. В другом варианте осуществления настоящего изобретения обеспечивается применение соединения по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой соли, которое используют в комбинации с лучевой терапией, для получения противоопухолевого средства. Еще в одном варианте осуществления настоящего изобретения обеспечивается соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, которое используют в комбинации с лучевой терапией, для лечения опухоли.

[0073]

Методы применения лучевой терапии широко используются в данной области техники и описаны, например, в "Radiation Therapy Planning Guidelines 2016". Эти методы можно использовать в изобретении, описанном в данном описании.

[0074]

Лучевая терапия условно делится на внешнюю лучевую терапию и внутреннюю лучевую терапию. Внешняя лучевая терапия относится к терапии для лечения рака с применением излучения извне тела, тогда как внутренняя лучевая терапия представляет собой терапию для лечения рака с применением излучения изнутри тела. Во внешней лучевой терапии выбирают обычно применяемый метод терапии или облучения, такой как высокоэнергетическая лучевая терапия, трехмерная конформная лучевая терапия, лучевая терапия с модуляцией интенсивности (IMRT), лучевая терапия с визуальным контролем (IGRT), стереотаксическая лучевая терапия (SRT) и стереотаксическая радиохирургия (SRS). Во внутренней лучевой терапии выбирают брахитерапию и терапию открытым радиоизотопом. В этих лучевых терапиях тип радиального луча выбирают из электронного луча, рентгеновского луча, α (альфа) луча, β (бета) луча, γ (гамма) луча, протонного луча, луча тяжелых частиц, в зависимости от рака. В настоящем изобретении лучевая терапия и радиальные лучи, указанные выше, могут использоваться в комбинации и этим не ограничиваются.

[0075]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения лучевую терапию можно использовать в комбинации, и алкилирующее средство можно вводить также в комбинации.

[0076]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль можно использовать отдельно для лечения рака, а также использовать в комбинации с лучевой терапией. Когда соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль используют отдельно для лечения рака или когда соединение или его соль используют в комбинации с лучевой терапией, алкилирующее средство можно вводить в комбинации.

[0077]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединение, представленное формулой (I), которое можно использовать в комбинации с алкилирующим средством и/или лучевой терапией, представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из следующих соединений или их фармацевтически приемлемой соли:

(1) ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфат

(2) ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфат

(3) O-(((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил) O, O-дигидрофосфоротиоат

(4) (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ил дигидрофосфат и

(5) (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфат.

[0078]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединение по настоящему изобретению более предпочтительно может представлять собой соединение, выбранное из группы, состоящей из следующих соединений или их фармацевтически приемлемой соли:

(1) ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфат; и

(2) ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфат.

[0079]

В одном варианте осуществления настоящего изобретения соединение, представленное формулой (2), для использования в комбинации с алкилирующим средством и/или лучевой терапией представляет собой соединение, выбранное из группы, состоящей из следующих соединений:

(1) (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ол,

(2) (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ол и

(3) (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ол,

или его фармацевтически приемлемую соль.

[0080]

В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения соединение по настоящему изобретению вводят в эффективном количестве.

[0081]

В одном варианте осуществления алкилирующее средство вводят в эффективном количестве.

[0082]

В кнкретном варианте осуществления алкилирующее средство для использования в комбинации с соединением по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемой солью вводят в терапевтически эффективном количестве.

[0083]

В одном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению и алкилирующее средство вводят одновременно.

[0084]

В одном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению и алкилирующее средство вводят раздельно.

[0085]

В одном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению и алкилирующее средство вводят последовательно. В одном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению вводят до введения алкилирующего средства. В одном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению вводят после введения алкилирующего средства.

[0086]

В одном варианте осуществления введение соединения по настоящему изобретению и применение лучевой терапии осуществляют одновременно.

[0087]

В одном варианте осуществления введение соединения по настоящему изобретению и применение лучевой терапии осуществляют последовательно. В одном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению вводят до применения лучевой терапии. В одном варианте осуществления соединение по настоящему изобретению вводят после применения лучевой терапии.

[0088]

В одном варианте осуществления соединение, раскрытое в настоящем изобретении, или его фармацевтически приемлемую соль и алкилирующее средство вводят в форме единого фармацевтического продукта, содержащего их и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель.

[0089]

Примеры фармацевтически приемлемого носителя включают различные органические или неорганические носители, обычно используемые в качестве компонентов для фармацевтических продуктов. Примеры фармацевтически приемлемого носителя для смешивания с твердой композицией включают эксципиент, связующее, разрыхлитель, смазывающее вещество, покрывающий агент и краситель. Примеры фармацевтически приемлемого носителя для смешивания с жидкой композицией включают растворитель, добавку, способствующую растворению, суспендирующий агент, регулятор тоничности, буфер и успокаивающее средство. При необходимости также можно использовать фармацевтические добавки, такие как консервант, антиоксидант, подсластитель и стабилизатор.

[0090]

Для получения твердого перорального препарата добавляют соединение по настоящему изобретению и эксципиент, если необходимо, например, связующее, разрыхлитель, смазывающее вещество, краситель и ароматизатор. После этого из смеси можно формовать таблетки, таблетки с покрытием, гранулы, порошки и капсулы обычным способом.

[0091]

Для получения инъекционного препарата добавляют соединение по настоящему изобретению, регулятор pH, буфер, стабилизатор, регулятор тоничности, местный анестетик и т.д. Смесь можно использовать для получения препарата для подкожных, внутримышечных и внутривенных инъекций обычным способом.

[0092]

Эффективное количество соединения по настоящему изобретению, смешиваемое для получения каждой из вышеуказанных стандартных лекарственных форм, варьируется в зависимости от, например, симптома субъекта, для которого должно применяться соединение, и лекарственной формы, и обычно составляет 0,05-10000 мг для перорального препарата, 0,01-5000 мг для инъекции и 1-10000 мг для суппозитория, на стандартную лекарственную форму в виде пролекарства. В одном варианте осуществления настоящего изобретения эффективное количество соединения по настоящему изобретению, смешиваемое для получения стандартной лекарственной формы, предпочтительно составляет 0,05-1000 мг для перорального препарата, 0,01-500 мг для инъекции и 1-1000 мг для суппозитория, на стандартную лекарственную форму в виде пролекарства.

[0093]

Вводимое количество лекарственного средства, имеющего лекарственную форму, описанную выше, в день варьируется в зависимости от симптома, массы тела, возраста и пола субъекта и не может быть однозначно определено. Вводимое количество соединения по настоящему изобретению обычно может составлять 0,05-50000 мг на взрослого субъекта (массы тела: 50 кг) в день и предпочтительно 0,1-10000 мг в виде пролекарства. Величина дозы предпочтительно составляет 0,05-1000 мг для перорального препарата, 0,01-500 мг для инъекции и 1-1000 мг для суппозитория, в виде пролекарства.

[0094]

Примеры опухоли, при которой следует применять соединение по настоящему изобретению, включают, но конкретно не ограничиваются этим, рак головы и шеи (например, рак ротовой полости, фарингеальный рак, рак гортани, рак носовой полости, рак придаточной пазухи, рак слюнных желез, рак щитовидной железы), рак желудочно-кишечного тракта (например, рак пищевода, рак желудка, рак двенадцатиперстной кишки, рак печени, рак желчных протоков (например, рак желчного пузыря/желчных протоков), рак поджелудочной железы, колоректальный рак (например, рак толстой кишки, рак прямой кишки)), рак легкого (например, немелкоклеточный рак легкого, мелкоклеточный рак легкого, мезотелиома), рак молочной железы, рак половых органов (например, рак яичников, рак матки (например, рак шейки матки, рак эндометрия)), рак мочевыводящих путей (например, рак почки, рак мочевого пузыря, рак предстательной железы, тестикулярная опухоль), опухоль гемопоэтических органов (например, лейкоз, злокачественная лимфома, множественная миелома), опухоль кости/мягкой ткани, рак кожи и опухоль головный мозга.

[0095]

Примеры опухоли головного мозга, подлежащей лечению соединением по настоящему изобретению, включают метастатическую опухоль головного мозга и первичную опухоль головного мозга.

[0096]

Примеры опухоли головного мозга включают, но конкретно не ограничиваются этим, метастатические опухоли головного мозга (например, метастазы в головной мозг, например, рака легких, рака молочной железы, рака желудка, колоректального рака, рака мочевого пузыря, рака желчных путей и рака матки), пилоцитарную астроцитому, диффузную астроцитому, олигодендроглиому/олигоастроцитому, анапластическую астроцитому/анапластическую олигодендроглиому, анапластическую олигоастроцитому, глиобластому, эпендимому, анапластическую эпендимому, ганглиоглиному, центральную нейроцитому, медуллобластому, герминому, злокачественную лимфому центральной нервной системы, менингиому, шванному, GH-продуцирующую аденому гипофиза, PRL-продуцирующую аденому гипофиза, ACTH-продуцирующую аденому гипофиза, нефункциональную аденому гипофиза, краниофарингиому, хордому, гемангиобластому и эпидермоидную опухоль.

[0097]

Поскольку соединение по настоящему изобретению используют в виде пролекарства, его активное соединение, т.е. соединение, представленное общей формулой (1), где m и n каждый представляет собой 0, другие заместители имеют значение, определенное выше, или его фармацевтически приемлемую соль применяют при тех же опухолях, которые указаны выше.

[0098]

Поскольку соединение по настоящему изобретению используют в виде пролекарства, соединения, представленные следующими формулами, соответственно, которые являются активными соединениями, представленными:

(2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-олом;

(2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-олом; и

(2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-олом

или их фармацевтически приемлемыми солями, применяют при тех же карциномах, которые указаны выше.

[Формула 8]

[Формула 9]

[Формула 10]

Примеры

[0099]

Настоящее изобретение будет более конкретно описано при помощи Примеров и Примеров испытаний, показанных ниже, но настоящее изобретение не ограничивается этими Примерами.

[0100]

В качестве реагентов, используемых в Примерах, использовали коммерчески доступные реагенты, если не указано иное. Колоночную хроматографию на силикагеле и колоночную хроматографию на щелочном силикагеле осуществляли с использованием заполненных колонок, изготовленных Shoko Science Co., Ltd. или Biotage Ltd.

[0101]

Обращеннофазовую препаративную ВЭЖХ колоночную хроматографию осуществляли в следующих условиях. Соответствующим образом устанавливали объем вводимой пробы и градиент.

Колонка: CAPCELL PAK C18 MGIII, 30×50 мм, 5 мкм, изготовитель OSAKA SODA

УФ-детекция: 254 нм

Скорость потока в колонке: 40 мл/мин

Подвижная фаза: вода/ацетонитрил (0,1% муравьиной кислоты)

Объем вводимой пробы: 0,1-1,0 мл

Градиент вода/ацетонитрил 10% → 90% (7 минут)

[0102]

Спектры ЯМР измеряли с использованием спектрометра типа AL400 (400 МГц; изготовитель JEOL Ltd.(JEOL)), Mercury 400 (400 МГц; изготовитель Agilent Technologies), AVANCE NEO (400 МГц; Bruker), AVANCE III HD (500 МГц; Bruker). Когда тетраметилсилан содержался в дейтерированном растворителе, тетраметилсилан использовали в качестве внутреннего стандарта. В других случаях использовали ЯМР растворитель в качестве внутреннего стандарта. Все δ значения указаны в м.д.

[0103]

Спектры ЖХ-МС измеряли с использованием SQD, изготовитель Waters, в следующих двух условиях. Показаны [M+H]+ значения.

MS-детекция: ESI положительный режим

УФ-детекция: 254 и 210 нм,

Скорость потока в колонке: 0,5 мл/мин

Подвижная фаза: вода/ацетонитрил (0,1% муравьиной кислоты)

Объем вводимой пробы: 1 мкл

Колонка: Acquity BEH, 2,1×50 мм, 1,7 мкм

Градиент:

Время измерения
(минуты) Вода/Ацетонитрил
(0,1% муравьиной кислоты) 0 95 5 0,1 95 5 2,1 5 95 3,0 СТОП

[0104]

Следующие аббревиатуры имеют указанное ниже значение:

с: синглет

д: дублет

т: триплет

кв.: квартет

дд: двойной дублет

м: мультиплет

шир.: широкий

шир.с: широкий синглет

DMSO-d6: дейтерированный диметилсульфоксид

D2O: тяжелая вода

HPMC: гидроксипропилметилцеллюлоза

[0105]

[Сравнительный пример 1]

Синтез (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ола

[Формула 11]

[0106]

(Стадия 1)

5-Бром-4-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин (2,2 г) суспендировали в ацетонитриле (80 мл). К смеси добавляли трис(2-(2-метоксиэтокси)этил)амин (0,17 мл) и порошкообразный гидроксид калия (1,1 г). Смесь перемешивали при нагревании при 50°C в течение 5 часов. К этому смешанному раствору добавляли ацетонитрильный (20 мл) раствор ((2R,3R,4S,5R)-3-(бензоилокси)-5-бром-4-фтортетрагидрофуран-2-ил)метилбензоата (4,5 г), полученный способом, описанным в литературе (Bioorg. Med. Chem, 20, 2012,5202-5214), при комнатной температуре. Полученный смешанный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 часов. Брали часть раствора и подвергали анализу ЖХ-МС. На основании ЖХ-МС спектра подтверждали присутствие ((2R,3R,4S,5R)-3-(бензоилокси)-5-(5-бром-4-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтортетрагидрофуран-2-ил)метилбензоата. Затем осуществляли очистку в соответствии с обычно используемым способом с получением бензоата (5,1 г).

[0107]

(Стадия 2)

Бензоат (3,0 г), полученный на стадии 1 Сравнительного примера 1, суспендировали в смешанном растворе 25% водного раствора аммиака (16 мл) и 1,4-диоксана (16 мл). Суспензию перемешивали при 120°C в течение 5 часов. Брали часть раствора и подвергали анализу ЖХ-МС. На основании ЖХ-МС спектра подтверждали присутствие указанного в заголовке соединения. Затем осуществляли очистку в соответствии с обычно используемым способом с получением указанного в заголовке соединения (1,3 г).

¹H-ЯМР (DMSO-d6) δ (м.д.): 3,55-3,67 (2H, м), 3,74-3,78 (1H, м), 4,29-4,37 (1H, м), 5,02-5,17 (1H, м), 5,06 (1H, т, J=5,6 Гц), 5,87 (1H, д, J=4,8 Гц), 6,52 (1H, дд, J=4,4, 14 Гц), 6,83 (2H, шир.с), 7,48 (1H, д, J=2,0 Гц), 8,09 (1H, с)

ESI-MS: m/z 347, 349 (MH⁺)

[0108]

[Сравнительный пример 2]

Синтез (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ола

[Формула 12]

Указанное в заголовке соединение синтезировали в соответствии со способом, описанным в литературе (Bioorg. Med. Chem, 20, 2012, 5202-5214).

[0109]

[Сравнительный пример 3]

Синтез (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ола

[Формула 13]

Указанное в заголовке соединение синтезировали, исходя из 5-хлор-4-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидина, в соответствии со способом, описанным в Сравнительном примере 1.

¹H-ЯМР (DMSO-d6) δ (м.д.): 3,63-3,79 (3H, м), 4,34-4,39 (1H, м), 5,09-5,20 (2H, м), 5,90 (1H, с), 6,56 (1H, д, J=12 Гц), 6,93 (2H, шир.с), 7,46 (1H, с), 8,12 (1H, с)

ESI-MS: m/z 303, 305 (MH+)

[0110]

[Сравнительный пример 4]

Синтез (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4,4-дифтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ола

[Формула 14]

Указанное в заголовке соединение синтезировали в соответствии со способом, описанным в литературе (ChemMedChem, 8, 2013, 832-846).

[0111]

[Пример 1]

Синтез ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфата

(2R,3R,4S,5R)-5-(4-Амино-5-бром-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-3-ол (300 мг), полученный в Сравнительном примере 1, растворяли в триэтилфосфате (5 мл). К раствору при охлаждении льдом добавляли оксихлорид фосфора (0,16 мл). Полученный раствор перемешивали при 4°C в течение 12 часов. Брали часть раствора и подвергали анализу ЖХ-МС. На основании ЖХ-МС спектра подтверждали присутствие указанного в заголовке соединения. Затем осуществляли очистку в соответствии с обычно используемым способом с получением указанного в заголовке соединения (220 мг).

[0112]

[Пример 2]

Синтез ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфата

Соединение (200 мг), описанное в Сравнительном примере 2, растворяли в триэтилфосфате (2,5 мл). К раствору при охлаждении льдом добавляли оксихлорид фосфора (0,11 мл). Полученный раствор перемешивали при 4°C в течение 12 часов. Брали часть раствора и подвергали анализу ЖХ-МС. На основании ЖХ-МС спектра подтверждали присутствие указанного в заголовке соединения. Затем осуществляли очистку в соответствии с обычно используемым способом с получением указанного в заголовке соединения (158 мг).

[0113]

[Пример 3]

Синтез O-(((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил) O, O-дигидрофосфоротиоата

Соединение (100 мг), описанное в Сравнительном примере 2, растворяли в триэтилфосфате (1 мл). К раствору при охлаждении льдом добавляли 2,6-диметилпиридин (0,12 мл) и тиохлорид фосфора (0,077 мл). Полученный раствор перемешивали в течение 3 часов при охлаждении льдом. Брали часть раствора и подвергали анализу ЖХ-МС. На основании ЖХ-МС спектра подтверждали присутствие указанного в заголовке соединения. Затем осуществляли очистку в соответствии с обычно используемым способом с получением указанного в заголовке соединения (99 мг).

[0114]

[Пример 4]

Синтез (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ил дигидрофосфата

(Стадия 1)

Соединение (200 мг), описанное в Сравнительном примере 2, растворяли в пиридине (2,5 мл). К раствору добавляли хлортриметилсилан (0,32 мл) и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Затем к реакционному раствору добавляли бензоилхлорид (0,025 мл) и полученный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 3 часов. Затем реакционный раствор охлаждали льдом добавляли и воду (1 мл) и 30% водный раствор аммиака (1 мл). Полученный раствор перемешивали при комнатной температуре. Брали часть раствора и подвергали анализу ЖХ-МС. На основании ЖХ-МС спектра подтверждали присутствие N-(7-((2R,3S,4R,5R)-3-фтор-4-гидрокси-5-(гидроксиметил)тетрагидрофуран-2-ил)-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)бензамида. Затем осуществляли очистку в соответствии с обычно используемым способом с получением бензамида (105 мг).

[0115]

(Стадия 2)

Бензамид (105 мг), полученный на стадии 1 этого Примера, растворяли в пиридине (2 мл). К раствору добавляли бензоилхлорид (0,025 мл). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 12 часов. Брали часть раствора и подвергали анализу ЖХ-МС. На основании ЖХ-МС спектра подтверждали присутствие ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-бензамид-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метилбензоата. Затем осуществляли очистку в соответствии с обычно используемым способом с получением бензоата (105 мг).

[0116]

(Стадия 3)

Бензоат (105 мг), полученный на стадии 2 этого Примера, растворяли в триэтилфосфате (1,5 мл). К раствору при охлаждении льдом добавляли оксихлорид фосфора (0,065 мл). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 36 часов. Брали часть раствора и подвергали анализу ЖХ-МС. На основании ЖХ-МС спектра подтверждали присутствие ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-бензамид-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-(фосфонокси)тетрагидрофуран-2-ил)метилбензоата. Затем осуществляли очистку в соответствии с обычно используемым способом с получением бензоата (100 мг).

[0117]

(Стадия 4)

Бензоат (100 мг), полученный на стадии 3 этого Примера, растворяли в 40% водном растворе метиламина (3 мл). Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 2 часов. Брали часть раствора и подвергали анализу ЖХ-МС. На основании ЖХ-МС спектра подтверждали присутствие указанного в заголовке соединения. Затем осуществляли очистку в соответствии с обычно используемым способом с получением указанного в заголовке соединения (21 мг).

[0118]

[Пример 5]

Синтез ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфата

Указанное в заголовке соединение (88 мг) получали таким же способом, как в Примере 1, исходя из (2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-2-(гидроксиметил) тетрагидрофуран-3-ола (100 мг), полученного в Сравнительном примере 3.

[0119]

Химические структуры и значения физических свойств соединений Примеров 1-5 показаны в следующей Таблице 1.

[0120]

Таблица 1 Соединение № Химическая структура ¹H-ЯМР δ (м.д.) MS Пример 1 (DMSO-d6)
3,94-4,09(3H, м), 4,31-4,38 (1H, м), 5,03-5,18(1H, м), 6,00(1H, шир.с), 6,59(1H, дд, J=4,4, 16 Гц), 6,90(1H, шир.с), 7,45(1H, д, J=2 Гц), 8,12 (1H, с) m/z 427, 429 (MH⁺) Пример 2 (DMSO-d6)
3,97-4,12(3H, м), 4,35-4,41 (1H, м), 5,05-5,20(1H, м), 6,06(1H, шир.с), 6,59(1H, дд, J=4,4, 16 Гц), 6,76(1H, шир.с), 7,48(1H, д, J=2 Гц), 8,14 (1H, с) m/z 475 (MH⁺) Пример 3 (DMSO-d6)
3,97-4,18(3H, м), 4,36-4,43 (1H, м), 5,06-5,21(1H, м), 6,08(1H, шир.с), 6,60(1H, дд, J=4,4, 16,3 Гц), 6,77(2H, шир.с), 7,51(1H, д, J=2,4 Гц), 8,16 (1H, с) m/z 491
(MH⁺) Пример 4 (DMSO-d6)
3,58-3,67(2H, м), 3,98-4,05(1H, м), 4,54-4,62 (1H, м), 5,12-5,26(1H, м), 6,42(1H, дд, J=3,2, 20 Гц), 7,47(1H, д, J=2,4 Гц), 8,09 (1H, с) m/z 475 (MH⁺) Пример 5 (DMSO-d6)
3,97-4,12(3H, м), 4,35-4,41 (1H, м), 6,07(1H, шир.с), 6,62(1H, дд, J=4,4, 16 Гц), 6,96(2H, шир.с), 7,41(1H, д, J=1,6 Гц), 8,14 (1H, с) m/z 383, 385 (MH⁺)

[0121]

Соединения, полученные в Примерах и Сравнительных примерах, оценивали в следующих испытаниях.

[0122]

[Пример испытаний 1] Оценка 1 присутствия пролекарства в организме мыши и его абсорбция

Были установлены размеры доз соединения Сравнительного примера 1, триэтиламиновой соли соединения Примера 1, соединения Сравнительного примера 2 и соединения Примера 2, которые составляли 50 мг/10 мл/кг, 62 мг/10 мл/кг (50 мг/10 мл/кг в расчете на свободное соединение), 3 мг/10 мл/кг и 3,6 мг/10 мл/кг, соответственно. Растворы для введения получали с 0,5% водным раствором HPMC, чтобы соответствовать вышеуказанным размерам доз. Необходимо отметить, что раствор для введения триэтиламиновой соли соединения Примера 1 получали путем добавления 1 молярного эквивалента триэтиламина.

[0123]

Были установлены размеры доз соединения Сравнительного примера 3 и соединения Примера 5, которые составляли 3 мг/10 мл/кг и 3,8 мг/10 мл/кг, соответственно. Их растворы для введения получали с использованием 0,5% водного раствора HPMC, чтобы соответствовать вышеуказанным размерам доз.

[0124]

Необходимо отметить, что "мг/10 мл/кг" означает следующее: например, "50 мг/10 мл/кг" означает, что 50 мг испытываемого соединения на массу тела (1 кг) мыши диспергировали или растворяли в растворе (10 мл) для введения соединения. То же применимо к нижеследующему.

[0125]

Растворы для введения, полученные как описано выше, перорально вводили мышам (Balb/cA, самцы), которые перед этим не голодали, с использованием желудочного зонда.

[0126]

Мышей анестезировали изофлураном через 0,5, 1, 2, 4 и 6 часов после введения и брали кровь из лицевой вены с использованием специальной иглы (ветеринарный скальпель) и гематокритной пробирки с гепарином.

[0127]

Собранную кровь сразу подвергали центрифугированию (13000 об/мин, 2 минут, 4°C) для получения образцов плазмы. После удаления белков из образцов плазмы концентрации испытываемого соединения в образцах плазмы измеряли методом ЖХ/МС/МС.

[0128]

Значение "площади под кривой" (AUC) концентрации лекарственного средства в крови в зависимости от времени рассчитывали с использованием программы для анализа, такой как Phoenix (зарегистрированная торговая марка) WinNonlin (зарегистрированная торговая марка).

[0129]

Значения AUC (AUC 0-6 ч), полученные в перйод времени 0-6 часов после введения, показаны в следующих Таблицах. Более конкретно, результаты соединений Сравнительных примеров 1 и 2 и триэтиламиновой соли Примера 1, а также соединения Примера 2 показаны в Таблице 2; тогда как результаты соединений Сравнительного примера 3 и Примера 5 показаны в Таблице 3. В Таблице 2 и Таблице 3 "Сравнительный пример 1", "Сравнительный пример 2" и "Сравнительный пример 3" означают "соединение (Br форма) Сравнительного примера 1", "соединение (I форма) Сравнительного примера 2" и "соединение (Cl форма) Сравнительного примера 3", соответственно.

[0130]

Таблица 2 Соединение Доза AUC 0-6 ч (мкМ ∙ ч) Сравнительный пример 1 50 мг/кг (0,14 ммоль/кг) 20,25 Триэтиламиновая соль Примера 1 62 мг/кг (0,12 ммоль/кг) 28,37 в расчете на активное соединение Сравнительного примера 1 Сравнительный пример 2 3 мг/кг (7,6 мкмоль/кг) 0,21 Пример 2 3,6 мг/кг (7,6 мкмоль/кг) 0,34 в расчете на активное соединение Сравнительного примера 2

[0131]

Таблица 3 Соединение Доза AUC 0-6 ч (мкМ ∙ ч) Сравнительный пример 3 3 мг/кг (9,9 мкмоль/кг) 2,07 Пример 5 3,8 мг/кг (9,9 мкмоль/кг) 2,02 в расчете на активное соединение Сравнительного примера 3

[0132]

Из результатов, показанных выше, было обнаружено, что фосфатэфирное соединение Примера 1 представляет собой пролекарство соединения (Br форма) Сравнительного примера 1, служащего в качестве активного соединения. Также было обнаружено, что фосфатэфирное соединение Примера 2 представляет собой пролекарство соединения (I форма) Сравнительного примера 2, служащего в качестве активного соединения. Кроме того, значения AUC фосфатэфирных соединений Примеров 1 и 2. вероятно, были высокими по сравнению со значениями соответствующих активных соединений, показанных в Сравнительных примерах 1-2, вводимых перорально. Также было обнаружено, что соединение Примера 5 представляет собой пролекарство соединения (Cl форма) Сравнительного примера 3, служащего в качестве активного соединения.

[0133]

[Пример испытаний 2] Оценка 2 присутствия пролекарства в организме мыши и его абсорбция

Были установлены размеры доз динатриевой соли соединения Примера 1, динатриевой соли соединения Примера 2, динатриевой соли соединения Примера 3, динатриевой соли соединения Примера 4 и динатриевой соли соединения Примера 5, которые составляли 26 мг/5 мл/кг, 12 мг/5 мл/кг, 12 мг/5 мл/кг, 12 мг/5 мл/кг и 11 мг/5 мл/кг, соответственно. Растворы для введения получали путем растворения соединений в физиологическом растворе, чтобы соответствовать вышеуказанным размерам доз, соответственно. Необходимо отметить, что растворы для введения динатриевых солей соединений Примеров 1-4 получали путем добавления 2 молярных эквивалентов гидроксида натрия.

[0134]

Мышей (Balb/cA, самцы), которые перед этим не голодали, каждого иммобилизовали на специальном фиксированном столе, стерилизованном этанолом для дезинфекции. Каждый из растворов, полученных как описано выше, вводили через хвостовую вену с использованием шприца и иглы.

[0135]

Брали кровь из лицевой вены через 0,25, 0,5, 1, 2, 4 и 6 часов после введения с использованием специальной иглы (ветеринарный скальпель) и гематокритной пробирки с гепарином.

[0136]

Взятую кровь сразу подвергали центрифугированию (13000 об/мин, 2 минут, 4°C) для получения образцов плазмы. После удаления белков из образцов плазмы концентрации испытываемого соединения в образцах плазмы измеряли методом ЖХ/МС/МС.

[0137]

Значение AUC рассчитывали с использованием программы для анализа, такой как Phoenix (зарегистрированная торговая марка), WinNonlin (зарегистрированная торговая марка).

[0138]

Значения AUC (AUC 0-6 ч), полученные в перйод времени 0-6 часов после введения натриевых солей соединений Примера 1-4, показаны в Таблице 4; и значения AUC (AUC 0-6 ч), полученные в перйод времени 0-6 часов после введения натриевой соли соединения Примера 5, показаны в Таблице 5. В Таблице 4 и Таблице 5 "Сравнительный пример 1", "Сравнительный пример 2" и "Сравнительный пример 3" означают "соединение (Br форма) Сравнительного примера 1", "соединение (I форма) Сравнительного примера 2" и "соединение (Cl форма) Сравнительного примера 3", соответственно.

[0139]

Таблица 4 Соединение Доза AUC 0-6 ч (мкМ ∙ ч) Динатриевая соль Примера 1 26 мг/кг 15,9 в расчете на активное соединение Сравнительного примера 1 0,15 в расчете на Пример 1 Динатриевая соль Примера 2 12 мг/кг 6,07 в расчете на активное соединение Сравнительного примера 2 0,64 в расчете на Пример 2 Динатриевая соль Примера 3 12 мг/кг 4,28 в расчете на активное соединение Сравнительного примера 2 0,18 в расчете на Пример 3 Динатриевая соль Примера 4 12 мг/кг 9,76 в расчете на активное соединение Сравнительного примера 2 9,35 в расчете на Пример 4

[0140]

Таблица 5 Соединение Доза AUC 0-6 ч (мкМ ∙ ч) Динатриевая соль Примера 5 11 мг/кг 6,29 в расчете на активное соединение Сравнительного примера 3 0,08 в расчете на Пример 5

[0141]

Из результатов, показанных выше, было обнаружено, что фосфаэфирное соединение Примера 1 представляет собой пролекарство соединения (Br форма) Сравнительного примера 1, служащего в качестве активного соединения. Также было обнаружено, что соединения Примеров 2-4 являются пролекарствами соединения (I форма) Сравнительного примера 2, служащего в качестве активного соединения. Было также обнаружено, что соединение Примера 5 представляет собой пролекарство соединения (Cl форма) Сравнительного примера, служащего в качестве активного соединения.

[0142]

[Пример испытаний 3] Оценка 1 активности, направленной на подавление роста, в опухолевой клеточной линии человека

Человеческие опухолевые клеточные линии различного типа суспендировали в питательных средах, высевали в отдельные лунки многолуночного планшета и культивировали. Через день после начала культивирования добавляли серийно разбавленные растворы соединения. Культивирование осуществляли в течение последующих 3 дней. Клетки подсчитывали с использованием CellTiter-Glo (изготовитель Promega KK) в соответствии с протоколом, рекомендованным Promega KK. Жизнеспособность клеток рассчитывали в соответствии с уравнением, показанным ниже, и получали концентрацию (IC50 (мкМ)) соединения, при которой имело место ингибирование 50% клеточного роста.

Жизнеспособность клеток (%)=(T/C) × 100

T: Интенсивность света, излучаемого из лунки, содержащей соединение

C: Интенсивность света, излучаемого из лунки, не содержащей соединения

[0143]

Результаты для соединения (Br форма) Сравнительного примера 1 показаны в Таблице 6; тогда как результаты для соединения (I форма) Сравнительного примера 2 показаны в Таблице 7. В Таблице 6 и Таблице 7 "Сравнительный пример 1" и "Сравнительный пример 2" означают "соединение (Br форма) Сравнительного примера 1" и "соединение (I форма) Сравнительного примера 2", соответственно.

[0144]

Таблица 6 Тип Клеточная линия Сравнительный пример 1 Тип Клеточная линия Сравнительный пример 1 IC50 (мкМ) IC50 (мкМ) Опухоль кости человека A673 0,13 Рак легкого человека H2126 0,11 Рак молочной железы человека HCC1806 0,13 Рак легкого человека H2170 0,26 Рак молочной железы человека MCF7 0,08 Рак легкого человека H226 0,13 Опухоль головного мозга человека A172 0,14 Рак легкого человека H23 0,05 Опухоль головного мозга человека LN229 0,63 Рак легкого человека H441 0,14 Рак головы и шеи человека CA9-22 0,08 Рак легкого человека H460 0,08 Рак головы и шеи человека DOK 0,11 Рак легкого человека H526 0,17 Опухоль гемопоэтического органа человека HL60 0,30 Рак легкого человека H69 0,11 Опухоль гемопоэтического органа человека K562 0,11 Рак легкого человека Mero82 0,46 Опухоль гемопоэтического органа человека MOLT4 0,06 Рак легкого человека Mero83 0,35 Опухоль гемопоэтического органа человека MV-4-11 0,03 Рак легкого человека MESO1 0,41 Опухоль гемопоэтического органа человека RPMI8226 0,34 Рак легкого человека SDM103T2 0,58 Опухоль гемопоэтического органа человека CCRFCEM 0,05 Рак легкого человека Mero48a 0,16 Опухоль гемопоэтического органа человека BHL-89 0,23 Рак легкого человека SPC111 0,36 Опухоль гемопоэтического органа человека BC3 0,02 Рак яичника человека A2780 0,05 Опухоль гемопоэтического органа человека BCP1 0,11 Рак поджелудочной железы человека BXPC3 0,27 Рак почки человека 786-0 0,22 Рак поджелудочной железы человека CAPAN2 0,05 Колоректальный рак человека DLD1 0,05 Рак поджелудочной железы человека CFPAC1 0,11 Колоректальный рак человека HCT116 0,12 Рак поджелудочной железы человека MIAPACA2 0,07 Колоректальный рак человека HT29 0,11 Рак предстательной железы человека DU145 0,09 Колоректальный рак человека SW48 0,13 Рак кожи человека COLO792 0,89 Колоректальный рак человека SW620 0,23 Рак желудка человека HS746T 0,25 Рак легкого человека DMS273 0,40 Рак желудка человека MKN45 0,21 Рак легкого человека EBC1 0,06 Рак желудка человека N87 0,03 Рак легкого человека H1703 0,02 Рак желудка человека NUGC3 0,07 Рак легкого человека H1975 0,07 Рак мочевого пузыря человека HT1197 0,13 Рак легкого человека H2081 0,09 Рак мочевого пузыря человека HT1376 0,06

[0145]

Таблица 7 Тип Клеточная линия Сравнительный пример 2 IC50 (мкМ) Опухоль головного мозга человека A172 0,03 Опухоль головного мозга человека LN229 0,02 Опухоль гемопоэтического органа человека MOLT4 0,01 Опухоль гемопоэтического органа человека MV-4-11 0,004 Опухоль гемопоэтического органа человека CCRFCEM 0,04 Колоректальный рак человека DLD1 0,04 Колоректальный рак человека HCT116 0,09 Колоректальный рак человека HT29 0,13 Рак легкого человека H1703 0,04 Рак легкого человека H69 0,06 Рак поджелудочной железы человека CFPAC1 0,05 Рак поджелудочной железы человека MIAPACA2 0,04 Рак желудка человека MKN45 0,13

[0146]

Из результатов, показанных выше, было обнаружено, что соединения Сравнительного примера 1 и Сравнительного примера 2 обладают противоопухолевыми эффектами в отношении широкого спектра опухолей.

[0147]

[Пример испытаний 4] Оценка 2 активности, направленной на подавление роста опухолевой клеточной линии человека

Человеческие опухолевые клеточные линии различного типа суспендировали в питательных средах, высевали в отдельные лунки многолуночного планшета и культивировали. Через день после начала культивирования добавляли серийно разбавленные растворы соединения. Культивирование осуществляли в течение последующих 3 дней. Клетки подсчитывали с использованием CellTiter-Glo (изготовитель Promega KK) в соответствии с протоколом, рекомендованным Promega KK. Жизнеспособность клеток рассчитывали в соответствии с уравнением, показанным ниже, и получали концентрацию (IC50 (нМ)) соединения, при которой имело место ингибирование 50% клеточного роста.

[0148]

Жизнеспособность клеток (%)=(T/C) × 100

T: Интенсивность света, излучаемого из лунки, содержащей соединение

C: Интенсивность света, излучаемого из лунки, не содержащей соединения

Результаты для соединений Сравнительного примера 1 и Сравнительного примера 2 показаны в Таблице 8; тогда как результаты для соединения Сравнительного примера 3 показаны в Таблице 9. В Таблице 8 "Сравнительный пример 1" и "Сравнительный пример 2" означают "соединение (Br форма) Сравнительного примера 1" и "соединение (I форма) Сравнительного примера 2", соответственно. В Таблице 9 "Сравнительный пример 3" означает "соединение (Cl форма) Сравнительного примера 3".

[0149]

Таблица 8 Тип Клеточная линия Сравнительный пример 1 Тип Клеточная линия Сравнительный пример 2 IC50 (нМ) IC50 (нМ) Рак легкого человека A549 24 Рак легкого человека A549 14 Рак легкого человека H1650 11 Рак легкого человека H1650 8 Рак легкого человека H2122 17 Рак легкого человека H2122 9 Рак легкого человека H358 69 Рак легкого человека H358 52 Рак легкого человека HCC827 228 Рак легкого человека HCC827 176 Опухоль головного мозга человека A431 32 Опухоль головного мозга человека A431 18 Колоректальный рак человека RKO 31 Рак молочной железы человека SK-BR-3 23 Рак молочной железы человека SK-BR-3 26

[0150]

Таблица 9 Тип Клеточная линия Сравнительный пример 3 IC50 (нМ) Рак легкого человека A549 54 Рак легкого человека H1650 31 Рак легкого человека H2122 58 Рак легкого человека H358 273 Рак легкого человека HCC827 795 Опухоль головного мозга человека A431 124 Колоректальный рак человека RKO 135 Рак молочной железы человека SK-BR-3 88

[0151]

Из результатов, показанных выше, было обнаружено, что соединения Сравнительных примеров 1, 2 и 3 обладают противоопухолевыми эффектами в отношении широкого спектра опухолей.

[0152]

[Пример испытаний 5] Оценка 3 активности, направленной на подавление роста опухолевых клеточных линий человека

Опухолевые клеточные линии человека различного типа суспендировали в питательных средах, высевали в отдельные лунки многолуночного планшета и культивировали. Через день после начала культивирования добавляли серийно разбавленные растворы соединения. Культивирование осуществляли в течение последующих 3 дней. Клетки подсчитывали с использованием CellTiter-Glo (изготовитель Promega KK) в соответствии с протоколом, рекомендованным Promega KK. Жизнеспособность клеток рассчитывали в соответствии с уравнением, показанным ниже, и получали концентрацию (IC50 (нМ)) соединения, при которой имело место ингибирование 50% клеточного роста.

[0153]

Жизнеспособность клеток (%)=(T/C) × 100

T: Интенсивность света, излучаемого из лунки, содержащей соединение

C: Интенсивность света, излучаемого из лунки, не содержащей соединения

Результаты показаны в Таблице 10. В Таблице 10 "Сравнительный пример 2" и "Сравнительный пример 4" означают "соединение (I форма) Сравнительного примера 2" и "соединение (дифтор форма) Сравнительного примера 4", соответственно.

[0154]

Таблица 10 Тип Клеточная линия Сравнительный пример 2 IC50 (нМ) Сравнительный пример 4
IC50 (нМ) Рак легкого человека A427 98 1136 Рак легкого человека H520 29 465

[0155]

Из результатов, показанных выше, было обнаружено, что соединение Сравнительного примера 2 имеет IC50 более чем в 10 раз ниже, чем у соединения Сравнительного примера 4, и обладает отличным противоопухолевым эффектом.

[0156]

[Пример испытаний 6] Оценка 1 противоопухолевого эффекта и токсичности у мыши

Клеточную линию опухоли головного мозга человека (U-87 мг) подкожно трансплантировали в правую сторону груди каждого из BALB/cA Jcl-nu/nu мышей. После трансплантации опухоли измеряли большие оси (мм) и малые оси (мм) опухолей и рассчитывали объемы опухолей (TV). Мышей распределяли по отдельным группам таким образом, чтобы средние значения TV для групп были одинаковыми. День распределения мышей по группам был определен как День 0.

[0157]

Соединение Сравнительного примера 2 (I форма) перорально вводили в дозе 12 мг/кг/день каждый день с Дня 1, тогда как Соединение Примера 2 перорально вводили в дозе 14,4 мг/кг/день каждый день. После этого введение продолжали в течение времени, пока потеря массы тела была приемлемой, а затем осуществляли оценку. Ссылаясь на следующую литературу, введение с последующей оценкой/наблюдением продолжали до тех пор, пока потеря массы тела не составила 20% или больше.

LABIO 21, No. 30, OCT. 2007, P27

[0158]

В качестве показателей противоопухолевого эффекта и токсичности оценивали объем опухолей (TV) и значения массы тела (BW) по отдельным группам и определяли процент ингибирования роста опухоли (IR) на основании относительного объема опухоли (RTV) к объему в День 0 и изменение массы тела (BWC), соответственно, в соответствии со следующими уравнениями. Сравнивали значения IR и BWC контрольной группы (отсутствие лечения), группы введения соединения Примера 2 и группы введения соединения Сравнительного примера 2.

TV (мм³)=(большая ось × малая ось²)/2

RTV=(TV на момент оценки)/(TV в День 0)

IR (%)=(1 - (RTV группы введения на момент оценки)/(RTV контрольной группы на момент оценки)) × 100

BWC (%)=(BW на момент оценки - BW в День 0)/(BW в День 0) × 100

[0159]

IR-значения группы введения соединения Сравнительного примера 2 и группы введения соединения Примера 2 в последний день оценки (День 6 в случае использования соединения Сравнительного примера 2, и День 13 в случае использования соединения Примера 2) показаны на Фиг. 1, а значения BWC в зависимости от времени показаны на Фиг. 2.

[0160]

Как результат описанных выше испытаний, было отмечено, что введение продолжалось дольше в группе введения соединения Примера 2 по сравнению с группой введения соединения Сравнительного примера 2, другими словами, наблюдался высокий противоопухолевый эффект, в то время как эффект на массу тела был незначительным.

[0161]

На основании этих наблюдений было обнаружено, что соединение Примера 2 обладает высоким противоопухолевым эффектом и является отличным с точки зрения безопасности.

[0162]

[Пример испытаний 7] Оценка 2 противоопухолевого эффекта и токсичности у мыши

Клеточную линию опухоли гемопоэтического органа человека (MV-4-11) подкожно трансплантировали в правую сторону груди каждого из BALB/cA Jcl-nu/nu мышей. После трансплантации опухоли измеряли большие оси (мм) и малые оси (мм) опухолей и рассчитывали объем опухолей (TV). Мышей распределяли по отдельным группам таким образом, чтобы средние значения TV для групп были одинаковыми. День распределения мышей по группам был определен как День 0.

[0163]

Соединение Сравнительного примера 2 (I форма) перорально вводили в дозе 12 мг/кг/день каждый день с Дня 1; тогда как Соединение Примера 2 непрерывно вводили с использованием осмотического насоса (устройства, подобного шприцу) в течение 14 дней в дозе 20 мг/кг/день. После этого введение продолжали в течение времени, пока потеря массы тела была приемлемой, а затем осуществляли оценку. Ссылаясь на следующую литературу, введение с последующей оценкой/наблюдением продолжали до тех пор, пока потеря массы тела не составила 20% или больше.

LABIO 21, No. 30, OCT. 2007, P27

[0164]

Оценивали объем опухолей (TV) и значения массы тела (BW) по отдельным группам. В качестве показателей противоопухолевого эффекта и токсичности определяли значение относительного объема опухоли (RTV) к объему в День 0 и изменение массы тела (BWC) по сравнению с массой в День 0, соответственно, в соответствии со следующими уравнениями и наносили на график. Сравнивали значения RTV и BWC в зависимости от времени между контрольной группой (отсутствие лечения), группой введения соединения Примера 2 и группой введения соединения Сравнительного примера 2.

TV (мм³)=(большая ось × малая ось²)/2

RTV=(TV на момент оценки)/(TV в День 0)

BWC (%)=(BW на момент оценки - BW в День 0)/(BW в День 0) × 100

[0165]

Фиг. 3 и Фиг. 4 показывают RTV и BWC в зависимости от времени, соответственно, когда вводили соединение Сравнительного примера 2. Фиг. 5 и Фиг. 6 показывают RTV и BWC в зависимости от времени, соответственно, когда вводили Соединение Примера 2.

[0166]

В последний день оценки (День 11 в случае использования соединения Сравнительного примера 2, День 15 в случае использования соединение Примера 2) анализировали компоненты крови (лимфоциты: LYMPH (Лимфоциты), моноциты: МОНО (моноциты)) по отдельным группам в качестве еще одного показателя токсичности. Процент (T/C %) компонента крови каждой из группы введения соединения Примера 2 и группы введения соединения Сравнительного примера 2 относительно его значения в контрольной группе получали в соответствии со следующим уравнением. Результаты показаны на Фиг. 7.

T/C (%)=(Количество компонента крови в группе введения/(Количество компонента крови в контрольной группе) × 100

[0167]

Как результат описанных выше испытаний, было отмечено, что введение может продолжаться дольше в группе введения соединения Примера 2, чем в группе введения соединения Сравнительного примера 2, другими словами, наблюдался замечательный противоопухолевый эффект (была подтверждена регрессия опухоли), при этом эффект на массу тела и гематологическая токсичность были низкими.

[0168]

На основании вышеуказанных результатов было продемонстрировано, что соединение Примера 2 обладает высоким противоопухолевым эффектом и является отличным с точки зрения безопасности.

[0169]

[Пример испытаний 8] Оценка комбинированного применения соединения по изобретению и облучения

Клеточную линию опухоли головного мозга человека (U-87 мг) суспендировали в питательной среде, высевали в отдельные лунки многолуночного планшета и культивировали. В случае, когда облучение и добавление соединения осуществляли одновременно, обе обработки осуществляли через два дня после начала культивирования. В случае, когда добавление соединения предшествовало облучению, серийно разбавленный раствор соединения добавляли через день после начала культивирования, а облучение осуществляли через два дня после начала культивирования. В случае, когда облучение предшествовало добавлению соединения, облучение осуществляли через день после начала культивирования, а серийно разбавленный раствор соединения добавляли через два дня после начала культивирования. В день 5 после посева клетки фиксировали 25% водным раствором глутаральдегида и окрашивали окрашивающей жидкостью (0,05 масс./об.% кристаллического фиолетового в 20% метаноле). После добавления экстракта (0,1 N NaH₂PO₄:100% этанол=1:1) и перемешивания измеряли поглощение при 540 нм для определения количества клеток. Жизнеспособность клеток рассчитывали в соответствии со следующим уравнением и статистически обрабатывали в соответствии с t-критерием Стьюдента.

[0170]

Жизнеспособность клеток (%)=(T/C) × 100

T: Поглощение в лунке, которая подвергалась облучению или содержала соединение

C: Поглощение в лунке, которая не подвергалась облучению и не содержащала соединения

Результаты показаны на Фиг. 8.

[0171]

Как результат описанных выше испытаний, было отмечено, что даже если обработки осуществляли в любом порядке (в один и тот же день обработки, сначала соединение и сначала облучение), жизнеспособность клеток существенно снижалась при совместной обработке соединением Сравнительного примера 2 и облучением по сравнению с отдельными обработками.

[0172]

На основании вышеуказанных результатов было продемонстрировано, что соединение Сравнительного примера 2 проявляет сочетанный противоопухолевый эффект вместе с облучением.

[0173]

[Пример испытаний 9] Оценка сочетанного эффекта соединения и темозоломида (TMZ)

Клеточную линию опухоли головного мозга человека (U-87 мг) суспендировали в питательной среде, высевали в отдельные лунки многолуночного планшета и культивировали. В случае, когда одновременно добавляли два соединения, оба соединения добавляли через два дня после начала культивирования. В случае, когда сначала добавляли соединение по настоящему изобретению, серийно разбавленный раствор соединения добавляли через день после начала культивирования, а серийно разбавленный раствор TMZ добавляли через два дня после начала культивирования. В случае, когда сначала добавляли TMZ, серийно разбавленный раствор TMZ добавляли через день после начала культивирования, а серийно разбавленный раствор соединения добавляли через два дня после начала культивирования. В День 5 после посева клетки фиксировали 25% водным раствором глутаральдегида и окрашивали окрашивающей жидкостью (0,05 масс./об.% кристаллического фиолетового в 20% метаноле). После добавления экстракта (0,1 N NaH₂PO₄:100% этанол=1:1) и перемешивания измеряли поглощение при 540 нм для определения количества клеток. Жизнеспособность клеток рассчитывали в соответствии со следующим уравнением и статистически обрабатывали в соответствии с t-критерием Стьюдента.

[0174]

Жизнеспособность клеток (%)=(T/C) × 100

T: Поглощение в лунке, содержащей TMZ или соединение

C: Поглощение в лунке, не содержащей ни TMZ, ни соединения

Результаты показаны на Фиг. 9.

[0175]

Как результат описанных выше испытаний, даже если обработки осуществляли в любом порядке (в один и тот же день обработки, сначала соединение и сначала TMZ), существенное снижение жизнеспособности клеток наблюдали при комбинированной обработке соединением Сравнительного примера 2 и TMZ по сравнению с отдельными обработками.

[0176]

Исходя из вышеизложенного, было продемонстрировано, что комбинированное применение соединения Сравнительного примера 2 и TMZ проявляет сочетанный противоопухолевый эффект.

[0177]

Как описано выше, соединение по настоящему изобретению является полезным в качестве противоопухолевого средства, демонстрирующего отличную безопасность и высокий противоопухолевый эффект. Соединение по настоящему изобретению проявляет отличный сочетанный эффект при использовании в комбинации с алкилирующим средством и/или лучевой терапией.

Группа изобретений относится к области органической химии и фармацевтики и направлена на предоставление нового фосфатэфирного соединения, имеющего пирролопиримидиновый скелет и обладающего отличным противоопухолевым эффектом. Раскрывается соединение, представляющее собой: ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфат, или его фармацевтически приемлемая соль. Кроме того, раскрываются противоопухолевая фармацевтическая композиция, средство, усиливающее противоопухолевый эффект, комбинированное противоопухолевое средство, включающие в качестве активного ингредиента эффективное количество указанного выше соединения, способы профилактики или лечения опухоли, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, представленного соединения, в том числе в комбинации с алкилирующим средством или лучевой терапией. Также раскрыты варианты применения 2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфата или его фармацевтически приемлемой соли для профилактики или лечения опухоли, для усиления противоопухолевого эффекта алкилирующего средства, для получения противоопухолевой фармацевтической композиции или противоопухолевого средства. Группа изобретений обеспечивает эффективное противоопухолевое лечение, в том числе в комбинации с алкилирующим средством и/или лучевой терапией. 35 н. и 8 з.п. ф-лы, 9 ил., 10 табл., 14 пр.

1. Соединение, представляющее собой:

(1) ((2R,3R,4S,5R)-5-(4-амино-5-йод-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-7-ил)-4-фтор-3-гидрокситетрагидрофуран-2-ил)метил дигидрофосфата,

или его фармацевтически приемлемая соль.

2. Противоопухолевая фармацевтическая композиция, включающая в качестве активного ингредиента эффективное количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1, и фармацевтически приемлемый носитель.

3. Противоопухолевая фармацевтическая композиция по п. 2, сформулированная в виде перорального препарата или инъекции.

4. Способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий введение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1.

5. Способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1, сформулированных в виде перорального препарата или инъекции.

6. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1 для применения в виде фармацевтической композиции для профилактики и/или лечения опухоли.

7. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, сформулированные в виде перорального препарата или инъекции, для применения в профилактике и/или лечении опухоли.

8. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для получения противоопухолевой фармацевтической композиции.

9. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для получения противоопухолевого средства, сформулированного в виде перорального препарата или инъекции.

10. Противоопухолевая фармацевтическая композиция п. 2, способ профилактики и/или лечения опухоли по п. 4 или 5, соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 6 и 7 или применение по любому из пп. 8 и 9, где опухоль выбрана из группы, состоящей из рака головы и шеи, рака желудочно-кишечного тракта, рака легкого, рака молочной железы, рака половых органов, рака мочевыводящих путей, опухоли гемопоэтических органов, опухоли кости/мягкой ткани, рака кожи и опухоли головного мозга.

11. Противоопухолевая фармацевтическая композиция, способ профилактики и/или лечения опухоли, соединение или его фармацевтически приемлемая соль или применение по п. 10, где опухоль представляет собой опухоль головного мозга.

12. Комбинированное противоопухолевое средство или фармацевтическая композиция, состоящие из эффективного количества соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 и алкилирующего средства.

13. Средство, усиливающее противоопухолевый эффект, включающее эффективное количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1, для усиления противоопухолевого эффекта алкилирующего средства.

14. Противоопухолевое средство, включающее эффективное количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1, для лечения онкологического пациента, получившего введение алкилирующего средства.

15. Способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий введение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1, которые используют в комбинации с алкилирующим средством.

16. Способ усиления противоопухолевого эффекта алкилирующего средства, включающий введение пациенту соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1.

17. Способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий введение противоопухолевого средства, состоящего из соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1, и алкилирующего средства.

18. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для лечения опухоли, которые вводят в комбинации с алкилирующим средством.

19. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для усиления противоопухолевого эффекта алкилирующего средства, которые вводят в комбинации с алкилирующим средством.

20. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для лечения опухоли, которое лечит онкологического пациента, получившего введение алкилирующего средства.

21. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для усиления противоопухолевого эффекта алкилирующего средства, которое лечит онкологического пациента, получившего введение алкилирующего средства.

22. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для получения противоопухолевого средства, при этом противоопухолевое средство вводят в комбинации с алкилирующим средством.

23. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для получения средства, усиливающего противоопухолевый эффект алкилирующего средства, при этом средство, усиливающее противоопухолевый эффект, вводят в комбинации с алкилирующим средством.

24. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для получения противоопухолевого средства, при этом противоопухолевое средство вводят онкологическому пациенту, получившему введение алкилирующего средства, или онкологическому пациенту, который должен получить введение алкилирующего средства.

25. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для получения средства, усиливающего противоопухолевый эффект алкилирующего средства, при этом средство, усиливающее противоопухолевый эффект, вводят онкологическому пациенту, получившему введение алкилирующего средства, или онкологическому пациенту, который должен получить введение алкилирующего средства.

26. Противоопухолевое средство по п. 14, комбинированное противоопухолевое средство по п. 12, средство, усиливающее противоопухолевый эффект, по п. 13, способ по любому из пп. 15-17 или применение по любому из пп. 18-25, где алкилирующее средство представляет собой темозоломид.

27. Противоопухолевое средство по п. 14, комбинированное противоопухолевое средство по п. 12, средство, усиливающее противоопухолевый эффект, по п. 13, способ по любому из пп. 15-17 или применение по любому из пп. 18-25, которые используют в комбинации с лучевой терапией в дополнение к алкилирующему средству.

28. Применение противоопухолевого средства, состоящего из соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 в комбинации с лучевой терапией.

29. Средство, усиливающее противоопухолевый эффект, включающее эффективное количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1, для усиления противоопухолевого эффекта лучевой терапии.

30. Противоопухолевая фармацевтическая композиция, включающая эффективное количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1, для лечения онкологического пациента, получившего лучевую терапию.

31. Способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий соединение или его фармацевтически приемлемую соль по п. 1, которые используют в комбинации с лучевой терапией.

32. Способ усиления противоопухолевого эффекта лучевой терапии, включающий введение пациенту соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1.

33. Способ профилактики и/или лечения опухоли, включающий введение противоопухолевого средства, состоящего из соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1, онкологическому пациенту, получившему лучевую терапию.

34. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для лечения опухоли, которое используют в комбинации с лучевой терапией.

35. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для усиления противоопухолевого эффекта, которое используют в комбинации с лучевой терапией.

36. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для лечения опухоли, которое лечит онкологического пациента, получившего лучевую терапию.

37. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для усиления противоопухолевого эффекта, которое лечит онкологического пациента, получившего лучевую терапию.

38. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для получения противоопухолевого средства, при этом противоопухолевое средство используют в комбинации с лучевой терапией.

39. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для получения средства, усиливающего противоопухолевый эффект, при этом средство, усиливающее противоопухолевый эффект, используют в комбинации с лучевой терапией.

40. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для получения противоопухолевого средства, при этом противоопухолевое средство вводят онкологическому пациенту, получившему лучевую терапию.

41. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по п. 1 для получения средства, усиливающего противоопухолевый эффект, при этом средство, усиливающее противоопухолевый эффект, вводят онкологическому пациенту, получившему лучевую терапию.

42. Противоопухолевое средство по п. 30, комбинированное противоопухолевое средство или 28, средство, усиливающее противоопухолевый эффект, по п. 29, способ по любому из пп. 31-33 или применение по любому из пп. 34-41, которые используют в комбинации с алкилирующим средством в дополнение к лучевой терапии.

43. Противоопухолевое средство, средство, усиливающее противоопухолевый эффект, способ или применение по п. 42, где алкилирующее средство представляет собой темозоломид.