Способ исследования фармакокинетических свойств лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид Российский патент 2023 года по МПК C07D213/81 A61K31/4425 G16H70/40 G01N33/48 

Группа изобретений относится к фармакологии и клинической фармакологии и может быть использовано с целью оценки функциональной активности энисамия йодида для осуществления эффективной и безопасной фармакотерапии вирусных инфекций.

Из уровня техники способ исследования фармакокинетических свойств лекарственных препаратов, предназначенных для лечения глазного ишемического синдрома, включающий местное введение исследуемого лекарственного препарата в конъюнктивальный мешок или периокулярно человеку с глазным ишемическим синдромом или животному с обратимым нарушением кровообращения в сосудах сетчатки и последующее определение параметров, характеризующих распределение препарата в тканях сетчатки, путем многократной динамической регистрации общей элетроретинограммы. Для определения максимальной концентрации лекарственного препарата в тканях сетчатки и периода полувыведения лекарственного препарата в данном решении используют математические расчеты (RU 2253351, 16.08.2004 - далее источник информации [1]).

Способ известный из [1] имеет ряд недостатков, которые заключаются в том, что он применим только для исследования мышц радужки глаза, а также в том, что для определения распределения препарата в тканях сетчатки используется электроретинография (ЭРГ), заключающаяся в регистрации импульсов, генерируемых сетчаткой в ответ на дозированное воздействие света и имеющая применение только в офтальмологии.

Таким образом, данный способ имеет узкий диапазон применения в офтальмологии и не может быть применим для определения фармакокинетических свойств препаратов, относящихся к другим группам.

Техническим результатом заявленных решений является:

- Определение количественных характеристик процессов всасывания, распределения и элиминации лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид после его однократного и многократного применения в течение 5 дней на млекопитающих;

- Обоснование выбора путей и методов введения лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид после его однократного и многократного применения в течение 5 дней на млекопитающих;

- Выявление тканей, в которые лекарственное средство с действующим веществом энисамия йодид проникает наиболее интенсивно и/или в которых удерживается наиболее длительно после его однократного и многократного применения в течение 5 дней на млекопитающих;

- Установление основных путей элиминации лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид после его однократного и многократного применения в течение 5 дней на млекопитающих;

- Установление зависимости «концентрация-эффект» для лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид после его однократного и многократного применения в течение 5 дней на млекопитающих;

- Изучение фармакокинетики и распределения лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид во внутренние органы млекопитающие после его однократного и многократного применения в течение 5 дней на млекопитающих;

- Изучение распределения лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид во внутренние органы млекопитающие после его однократного и многократного применения в течение 5 дней на млекопитающих;

- Изучение тканевой доступности лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид, для контроля транспорта лекарственного средства в зону его действия, с целью определения эффекта лекарственного средства.

- Прогнозирование действия лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид у человека.

Указанные технические результаты реализуются в первом независимом пункте - способе исследования фармакокинетических свойств лекарственного препарата с действующим веществом энисамия йодид, включающем его внутрижелудочное однократное или многократное введение в одинаковой дозе млекопитающему, последующий отбор через определенные промежутки времени крови и органов у млекопитающих, определение концентрации энисамии йодида в плазме крови и в тканях органов млекопитающих с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым (УФ) детектированием и определение следующих параметров, характеризующих распределение энисамия йодида в тканях органов и в крови млекопитающих:

- Максимальная концентрация - C_max мкг/мл;

- Время достижения максимальной концентрации - T_max ч;

- Площадь под кривой «концентрация-время» - AUC мкг ч/г;

- Период полувыведения - Т1/2 ч;

- Среднее время удержания препарата в организме - MRT ч;

- Тканевая доступность энисамия йодида в ткани и органы крыс - ft.

Согласно второму пункту формулы изобретения внутрижелудочное однократное введение лекарственного препарата осуществляют один раз в день, натощак.

Согласно третьему пункту формулы изобретения внутрижелудочное многократное введение лекарственного препарата осуществляют один раз в день, натощак, в течение 5 дней.

Согласно четвертому пункту формулы изобретения одна доза для однократного или многократного внутрижелудочного введения лекарственного препарата млекопитающему составляет 100 мг/кг.

Согласно пятому пункту формулы изобретения осуществляют забор у млекопитающих печени, почек, легких, сердца и головного мозга.

Согласно шестому пункту формулы изобретения внутрижелудочном однократном введении лекарственного препарата у млекопитающих отбирают кровь и органы перед введением препарата и затем через 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч, 10 ч и 24 ч после введения препарата.

Согласно седьмому пункту формулы изобретения при внутрижелудочном многократном введении лекарственного препарата у млекопитающих отбирают кровь и органы перед последним введением препарата и затем через 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч, 10 ч и 24 ч после последнего введения препарата.

Согласно восьмому пункту формулы изобретения тканевая доступность ft энисамии йодида в ткани и органы крыс после однократного внутрижелудочного введения лекарственного препарата составляет: в печени 19,20; в почках 4,08; в сердце 13,05; в легких 3,67.

Согласно девятому пункту формулы изобретения тканевая доступность ft энисамия йодида в ткани и органы крыс после многократного внутрижелудочного введения лекарственного препарата составляет: в печени 11,51; в почках 5,37; в сердце 11,23; в легких 2,77.

Согласно десятому пункту формулы изобретения при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата максимальная концентрация C_max в плазме крови млекопитающих составляет от 0,367 до 0,851 мкг/мл.

Согласно одиннадцатому пункту формулы изобретения что при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата время достижения максимальной концентрации T_max в плазме крови млекопитающих составляет от 0,5 до 3,0 ч.

Согласно двенадцатому пункту формулы изобретения при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата площадь под кривой «концентрация-время» AUC в плазме крови млекопитающих составляет от 1,162 до 2,771 мкг ч/г.

Согласно тринадцатому пункту формулы изобретения при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата период полувыведения Т_1/2, в плазме крови млекопитающих составляет от 2,0 до 7,4 ч.

Согласно четырнадцатому пункту формулы изобретения при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата среднее время удержания препарата MRT в плазме крови млекопитающих составляет от 3,5 до 9,9 ч.

Согласно пятнадцатому пункту формулы изобретения при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата максимальная концентрация C_max в плазме крови млекопитающих составляет от 0,365 до 3,558 мкг/мл.

Согласно шестнадцатому пункту формулы изобретения при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата время достижения максимальной концентрации T_max в плазме крови млекопитающих составляет от 1,0 до 3,0 ч.

Согласно семнадцатому пункту формулы изобретения при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата площадь под кривой «концентрация-время» AUC в плазме крови млекопитающих составляет от 1,135 до 3,906 мкг ч/г.

Согласно восемнадцатому пункту формулы изобретения при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата период полувыведения Т_1/2, в плазме крови млекопитающих составляет от 1,6 до 6,8 ч.

Согласно девятнадцатому пункту формулы изобретения при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата среднее время удержания препарата в организме MRT в плазме крови млекопитающих составляет от 2,6 до 7,6 ч.

Согласно двадцатому пункту формулы изобретения при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата площадь под кривой «концентрация-время» AUC в печени млекопитающих составляет от 35,59 до 55,99 мкг ч/г.

Согласно двадцать первому пункту формулы изобретения при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата среднее время удержания препарата в организме MRT в печени млекопитающих составляет от 18,2 до 85,1 ч.

Согласно двадцать второму пункту формулы изобретения при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата период полувыведения Т_1/2 в печени млекопитающих составляет от 11,3 до 58,5 ч.

Согласно двадцать третьему пункту формулы изобретения при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата площадь под кривой «концентрация-время» AUC в печени млекопитающих составляет от 26,69 до 39,28 мкг ч/г.

Согласно двадцать четвертому пункту формулы изобретения при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата среднее время удержания препарата в организме MRT в печени млекопитающих составляет от 5,9 до 23,3 ч.

Согласно двадцать пятому пункту формулы изобретения при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата период полувыведения Т_1/2 в печени млекопитающих составляет от 4,6 до 26,0 ч.

Согласно двадцать шестому пункту формулы изобретения при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата площадь под кривой «концентрация-время» AUC в почках млекопитающих составляет от 7,35 до 10,55 мкг ч/г.

Согласно двадцать седьмому пункту формулы изобретения при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата среднее время удержания препарата в организме MRT в почках млекопитающих составляет от 48,9 до 90,4 ч.

Согласно двадцать восьмому пункту формулы изобретения что при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата период полувыведения Т_1/2 в почках млекопитающих составляет от 33,2 до 60,3 ч.

Согласно двадцать девятому пункту формулы изобретения при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата площадь под кривой «концентрация-время» AUC в почках млекопитающих составляет от 11,31 до 20,57 мкг ч/г.

Согласно тридцатому пункту формулы изобретения при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата среднее время удержания препарата в организме MRT в почках млекопитающих составляет от 18,6 до 351,4 ч.

Согласно тридцать первому пункту формулы изобретения при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата период полувыведения Т_1/2 в почках млекопитающих составляет от 11,2 до 244,0 ч.

Согласно тридцать второму пункту формулы изобретения при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата площадь под кривой «концентрация-время» AUC в сердце млекопитающих составляет от 23,59 до 30,51 мкг ч/г.

Согласно тридцать третьему пункту формулы изобретения при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата среднее время удержания препарата в организме MRT в сердце млекопитающих составляет от 28,6 до 36,2 ч.

Согласно тридцать четвертому пункту формулы изобретения при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата период полувыведения Т_1/2 в сердце млекопитающих составляет от 17,8 до 22,5 ч.

Согласно тридцать пятому пункту формулы изобретения при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата площадь под кривой «концентрация-время» AUC в сердце млекопитающих составляет от 27,28 до 31,84 мкг ч/г.

Согласно тридцать шестому пункту формулы изобретения при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата среднее время пребывания в организме MRT в сердце млекопитающих составляет от 23,0 до 38,0 ч.

Согласно тридцать седьмому пункту формулы изобретения при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата период полувыведения Т_1/2 в сердце млекопитающих составляет от 13,9 до 22,8 ч.

Согласно тридцать восьмому пункту формулы изобретения при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата площадь под кривой «концентрация-время» AUC в легких млекопитающих составляет от 4,31 до 11,15 мкг ч/г.

Согласно тридцать девятому пункту формулы изобретения при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата среднее время удержания препарата в организме MRT в легких млекопитающих составляет от 9,7 до 376,7 ч.

Согласно сороковому пункту формулы изобретения при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата период полувыведения Т_1/2 в легких млекопитающих составляет от 6,1 до 268,8 ч.

Согласно сорок первому пункту формулы изобретения при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата площадь под кривой «концентрация-время» AUC в легких млекопитающих составляет от 4,15 до 8,89 мкг ч/г.

Согласно сорок второму пункту формулы изобретения при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата среднее время пребывания в организме MRT в легких млекопитающих составляет от 8,0 до 32,2 ч.

Согласно сорок третьему пункту формулы изобретения при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата период полувыведения T_1/2 в легких млекопитающих составляет от 6,4 до 26,9 ч.

Согласно независимому сорок четвертому пункту формулы изобретения, касающемуся способа исследования фармакокинетических свойств лекарственного препарата с действующим веществом энисамия йодид, данный способ включает определение концентрации энисамия йодида в биологических образцах с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым (УФ) детектированием.

Согласно независимому сорок пятому пункту формулы изобретения, касающемуся способа исследования фармакокинетических свойств лекарственного препарата с действующим веществом энисамия йодид, данный способ включает определение концентрации энисамия йодида в биологических образцах с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым (УФ) детектированием, с элюированием энисамия йодида в виде симметричного пика с временем удерживания 6 мин, включающий использование:

- изократического режима метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием (ВЭЖХ-УФ);

- буферного раствора, содержащего триэтиламин, фосфорную кислоту и ион-парную добавку 1-октансульфонат натрия в качестве элюента;

- длины волны для детектирования 267±2 нм в специфической области дно дно-матричного спектра энисамия йодида.

В заявленной группе изобретений были исследованы параметры фармакокинетики энисамия йодида после однократного и многократного внутрижелудочного введения препарата Нобазит^®, таблетки, покрытые пленочной оболочкой, 250 мг (владелец РУ ОАО «Авексима», Россия, производитель ОАО «Ирбитский химфармзавод», Россия) с оценкой его распределения в органы и ткани млекопитающих.

В заявленной группе решений установлено, что:

- Действующее вещество исследуемого лекарственного средства энисамия йодид поступает в системный кровоток животных при его однократном введении;

- Отсутствует кумуляция действующего вещества в системном кровотоке при многократном введении;

- Энисамия йодид имеет высокое сродство к тканям печени, почек, сердца и легких млекопитающих.

Действующее вещество исследуемого лекарственного средства, прежде всего, относится к противовирусным средствам, производным изоникотиновой кислоты.

Из уровня техники известно, что основным назначением препаратов с действующим веществом энисамия йодида является подавление действия вирусов гриппа и других возбудителей ОРВИ за счет непосредственного (ингибирующего) влияния на процесс проникновения вирусов через клеточную мембрану.

Кроме того, препараты с действующим веществом энисамия йодид обладают интерфероногенными свойствами, способствуют повышению концентрации эндогенного интерферона (интерферона альфа и интерферона гамма) в плазме крови в 3-4 раза.

Указанное лекарственное средство повышает резистентность организма к вирусным инфекциям, снижает острые клинические проявления вирусной интоксикации, способствует сокращению продолжительности заболевания (см. Инструкция по медицинскому применению лекарственного препарата Нобазит® - далее источник информации [2]).

Заявленные способы позволяют оценить основные фармакокинетические параметры: максимальную концентрацию - C_max, время достижения максимальной концентрации - T_max, площадь под кривой «концентрация-время» - AUC, период полувыведения - Т_1/2, среднего времени пребывания в организме - MRT, тканевой доступности - ft энисамия йодида при однократном и многократном внутрижелудочном введении исследуемого препарата в одной дозе с оценкой распределения во внутренние органы.

Осуществление заявленных способов исследования фармакокинетических свойств лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид.

При передаче животных в эксперимент был проведен их клинический осмотр, после которого для эксперимента были переданы только клинически здоровые животные.

Перед проведением исследования, переданные в эксперимент животные были отправлены на адаптационный период.

Во время периода адаптации у животных каждый день контролировали состояние путем визуального осмотра. Отклонений не было выявлено.

Далее из переданных для исследования животных было сформировано две группы по 50 животных.

Каждая группа включала по десять подгрупп (по числу временных точек) по 5 животных в каждой подгруппе.

В экспериментальные группы были отобраны животные без признаков отклонений внешнего вида, так, чтобы индивидуальное значение массы не отклонялось от среднего значения по всем животным более чем на 20%.

Перед первым (группа 1) и последним (группа 2) введением исследуемого объекта животные были лишены утреннего кормления.

Лекарственное средство с действующим веществом энисамия йодид вводили экспериментальным животным внутрижелудочно, однократно и многократно в течение пяти дней.

Максимальная разовая доза (МРД) энисамия йодида составляла 1000 мг/60 кг (средняя масса тела человека) = 16,7 мг/кг.

При пересчете доз с учетом межвидовых коэффициентов эквивалентная доза для млекопитающих составила: 16,7 мг/кг × 6,2 (коэффициент пересчета) = 103,54 мг/кг ≈ 100 мг/кг.

Препараты вводили животным внутрижелудочно однократно (группа 1) и многократно (группа 2) в виде суспензии в инертном носителе (1% растворе крахмала).

Животные были лишены утреннего кормления перед первым (группа 1) и последним (группа 2) введением препарата, поскольку в исследовании предусмотрен пероральный путь введения и корм мог повлиять на биодоступность тестируемого препарата.

Определение концентрации энисамия йодида в биологических образцах проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием (ВЭЖХ-УФ).

Для проведения вышеуказанного хроматографического анализа в предложенном способе были подобраны следующие условия: был выбран изократический режим хроматографирования с использованием в качестве элюента буферного раствора, содержащего триэтиламин, фосфорную кислоту и ион-парную добавку 1-октансульфонат натрия и ацетонитрила.

Такой режим храматографирования обеспечивает элюирование энисамия йодида в виде симметричного пика с временем удерживания около 6 мин.

Для детектирования выбрана длина волны детектирования 267±2 нм, соответствующая поглощению в специфической области диодно-матричного спектра энисамия йодида.

Для подбора условий хроматографического анализа, процедуры пробоподготовки, а также проведения валидационных испытаний готовили растворы СО энисамия йодида.

Исходный раствор СО энисамия йодида (раствор СО 1) с концентрацией около 1 мг/мл (1000 мкг/мл) готовили растворением точной навески субстанции энисамия йодида в метаноле при обработке в УЗ-ванне в течение 3-5 мин при комнатной температуре.

Из полученного раствора методом последовательных разведений готовили серию рабочих растворов СО энисамия йодида (см. Таблица 1).

Раствор CO1 использовали для подбора условий хроматографического анализа. В процессе подбора варьировали градиентный и изократические режимы хроматографического анализа с целью выбора условий, при которых симметричный пик целевого аналита элюируется в интервале времен удерживания около 5-9 мин, а общее время регистрации хроматограммы не превышает 10-15 мин.

Анализ выполнен на хроматографе высокого давления LC-20 Prominence фирмы Shimadzu (Япония) с диодно-матричным детектором, колонкой Luna C₁₈(2) 4,6X150 мм (размер частиц сорбента 5 мкм) (Phenomenex, США) и предколонкой (3 мм) заполненной тем же сорбентом (Phenomenex, США) в изократическом режиме элюирования смесью буферного раствора (к 1 л воды очищенной прибавляли 1 мл триэтиламина, перемешивали, доводили рН раствора с помощью ортофосфорной кислоты до значения 2,5±0,2, перемешивали, растворяли 1,2 г 1-октансульфоната натрия, перемешивали) и ацетонитрила в соотношении 74:26, скорость подачи элюента 1 мл/мин, дозируемый объем проб 20 мкл, длина волны детектирования 267±2 нм. Регистрация и обработка хроматограмм выполнена с помощью программного обеспечения LabSolutions LCSolution Version 1.25 (Shimadzu, Япония).

В заявленной группе решений была выполнена подготовка и анализ калибровочных стандартов и проб для контроля качества (КК) для двух видов биоматериала - плазмы крови млекопитающих и печени млекопитающих.

По результатам анализа этих серии калибровочных стандартов получено уравнение регрессии вида у=а×х+b, где у - площадь пика энисамия йодида, усл. ед., х - концентрация энисамия йодида, мкг/мл плазмы крови или мкг/г для печени. С использованием соответствующего уравнения регрессии были рассчитаны концентрации калибровочных стандартов, принятых в итоговый расчет (обратный пересчет).

Полученные значения должны лежать в пределах ±15% от номинальных, ±20% для нижнего предела количественного определения (НПКО). Этому критерию должны соответствовать не менее чем 75% калибровочных стандартов не менее шести концентраций.

Правильность (точность) и прецизионность оценивали по образцам для контроля качества на четырех уровнях концентраций, перекрывающих диапазон калибровочной кривой; значения должны быть в пределах ±15% от номинальных значений, для НПКО - ±20%.

Расчет содержания энисамия йодида в биопробах (в мкг/мл для плазмы крови или мкг/г для органов и тканей) выполнен на основании уравнений регрессии у=14714×_х+4773,3 (коэффициент корреляции r=0,9979, для проб плазмы крови) и у=19589×х+5201,7 (коэффициент корреляции r=0,9994, для проб органов и тканей), полученных по результатам анализа серий калибровочных стандартов, приготовленных и проанализированных параллельно с подготовкой и анализом экспериментальных проб.

Хроматографирование каждой пробы, полученной при реализации способа выполнено в двух повторностях.

На основании полученных данных по площадям хроматографических пиков выполнен расчет содержания энисамия йодида в каждой пробе. Для дальнейшего расчета фармакокинетических параметров использовали средние значения содержания энисамия йодида.

При получении данных в предложенном способе исследования о содержании энисамия йодида выше его нижнего предела количественного определения, на достаточном количестве точек для дальнейшего расчета, выполнен расчет фармакокинетических параметров.

В предложенном способе исследуются такие параметры фармакокинетики как: C_max, T_max, AUC, MRT, T_1/2. Данные параметры рассчитываются внемодельным методом статистических моментов.

В случае, если при осуществлении способа значение фармакокинетического параметра было невозможно рассчитать, то в таблицах были поставлены обозначения «Missing».

При этом дальнейшую статистическую обработку проводили только для тех значений, которые удалось рассчитать.

Значения рассчитанных фармакокинетических параметров проверены на соответствие закону нормального распределения с помощью критерия Шапиро-Уилка.

Для статистической оценки различий между фармакокинетическими параметрами для двух групп животных были применены параметрические (двухвыборочный t-тест для средних) и непараметрические (тест Манна-Уитни) методы в зависимости от типа распределения данных.

Различия определены при уровне значимости р≤0,05. Статистический анализ был выполнен с помощью расчетов.

Изучение распределения энисамия йодида в органы и ткани после однократного введения исследуемого препарата.

Важным этапом при проведении фармакокинетических исследований является изучение тканевой доступности лекарственных средств. Основным результатом процессов распределения является транспорт лекарственного средства в зону действия, где оно взаимодействует со структурами, определяющими эффект препарата.

Интенсивность проникновения фармакологического средства в периферические ткани должна быть охарактеризована тканевой доступностью (ft), определяемой как отношение значения AUC в ткани (AUCT) к соответствующей величине AUC в плазме, а также значением периода полувыведения и среднего времени удержания (T_1/2,T и MRT).

Для исследуемого препарата было изучено распределение действующего вещества энисамия йодида в печени, почках, сердце, легких и головном мозге мышцах при однократном внутрижелудочном введении в дозе 100 мг/кг. В полученных образцах головного мозга млекопитающих действующее вещество исследованного препарата не было обнаружено (ниже НПКО использованной биоаналитической методики).

Усредненные фармакокинетические кривые в линейных и полулогарифмических координатах, приведены на Рисунках 1-2.

Для исследуемого лекарственного препарата в выбранной дозе наблюдали форму фармакокинетической кривой, характерную для лекарственных препаратов, применяемых наружно - наблюдали постепенный подъем концентрации энисамия йодида в плазме крови, максимальную концентрацию действующего вещества наблюдали через 0,5-3 ч после введения исследованного препарата, далее наблюдали постепенное ее снижение.

Через 10 ч после введения и далее во всех пробах концентрация энисамия йодида составила менее НПКО.

Таблица 2 содержит индивидуальные и средние значения основных фармакокинетических параметров, характеризующих биодоступность энисамия йодида при однократном введении изученного препарата в одной дозе.

После внутрижелудочного введения тестируемого препарата млекопитающих энисамия йодид достаточно быстро всасывается и определяется в плазме крови на протяжении не менее, чем 6-8 ч.

Период полувыведения составил около 4,5 ч, значение MRT - около 6,6 ч, что указывает на сравнительно короткое нахождение исследуемого вещества в системном кровотоке животных.

Среднее значение C_max в плазме крови составило около 0,6 мкг/мл, среднее значение T_max 1,9 ч.

Данные по изменению концентрации энисамия йодида в печени млекопитающих после однократного введения препарата представлены на Рисунках 3 и 4, усредненные фармакокинетические кривые в линейных и полулогарифмических координатах.

Анализируемое вещество в исследованных образцах печени определялось в течение 24 ч часов.

Максимальную концентрацию энисамия йодида наблюдали через 0,5-3 ч после введения препарата.

Далее наблюдали постепенное снижение концентрации энисамия йодида в печени млекопитающих (Рисунки 3 и 4).

Среднее содержание энисамия йодида в печени через 24 ч после введения препарата составило около 11% от его максимальной концентрации.

Основные параметры, характеризующие степень проникновения энисамия йодида в печень при однократном введении исследуемого препарата приведены в Таблице 3.

Величина тканевой доступности энисамия йодида (ft) для печени составила 19, 20.

Данные по изменению концентрации энисамия йодида в почках млекопитающие после однократного введения препарата представлены в Таблице 4, усредненные фармакокинетические кривые в линейных и полулогарифмических координатах - на Рисунках 5 и 6.

Анализируемое вещество в исследованных образцах почек определялось в течение 24 ч часов.

Максимальную концентрацию энисамия йодида наблюдали через 0,5-2 ч после введения препарата.

Далее наблюдали постепенное медленное снижение концентрации энисамия йодида в почках млекопитающие (Рисунки 5 и 6).

Среднее содержание энисамия йодида в почках через 24 ч после введения препарата составило около 42% от его максимальной концентрации.

Величина тканевой доступности энисамия йодида (ft) для почек составила 4,18.

Данные по изменению концентрации энисамия йодида в тканях сердца млекопитающие после однократного введения препарата представлены в Таблице 5, усредненные фармакокинетические кривые в линейных и полулогарифмических координатах - на Рисунках 7 и 8).

Анализируемое вещество в исследованных образцах сердца определялось в течение 24 ч часов.

Максимальную концентрацию энисамия йодида наблюдали через 0,5-4 ч после введения препарата.

Далее наблюдали постепенное медленное снижение концентрации энисамия йодида в сердце млекопитающие (Рисунки 7 и 8).

Среднее содержание энисамия йодида в сердце через 24 ч после введения препарата составило около 43% от его максимальной концентрации.

Основные параметры, характеризующие степень проникновения энисамия йодида в сердце приведены в Таблице 6.

Величина тканевой доступности энисамия йодида (ft) для сердца составила 13,05.

Данные по изменению концентрации энисамия йодида в легких млекопитающие после однократного введения препарата представлены в Таблице 6, усредненные фармакокинетические кривые в линейных и полулогарифмических координатах - на Рисунках 9 и 10.

Анализируемое вещество в исследованных образцах легких определялось в течение 24 ч часов.

Максимальную концентрацию энисамия йодида наблюдали через 0,5-2 ч после введения препарата.

Далее наблюдали постепенное медленное снижение концентрации энисамия йодида в легких млекопитающие (Рисунки 10 и 11).

Среднее содержание энисамия йодида в легких через 24 ч после введения препарата составило около 14,6% от его максимальной концентрации.

Основные параметры, характеризующие степень проникновения энисамия йодида в легкие приведены в Таблице 7.

Величина тканевой доступности энисамия йодида (ft) для легких составила 3,67.

После однократного введения исследуемого препарата отмечено интенсивное поступление и длительное нахождение действующего вещества в тканях печени, почек, сердца и легких.

В образцах головного мозга млекопитающие действующее вещество исследованного препарата не было обнаружено.

Изучение распределения энисамия йодида в органы и ткани после его многократного введения.

Данные по изменению концентрации энисамия йодида в печени млекопитающие после многократного введения препарата представлены в Таблице 8.

На Рисунках 11 и 12 приведены усредненные фармакокинетические кривые в линейных и полулогарифмических координатах.

Анализируемое вещество в исследованных образцах печени определялось в течение 24 ч часов.

Максимальную концентрацию энисамия йодида наблюдали через 1-3 ч после введения препарата.

Далее наблюдали постепенное снижение концентрации энисамия йодида в печени млекопитающие (Рисунки 11 и 12).

Среднее содержание энисамия йодида в печени через 24 ч после введения препарата составило около 3,3% от его максимальной концентрации.

Величина тканевой доступности энисамия йодида (ft) для печени составила 11,51.

По сравнению с однократным введением выявлены статистически значимые различия для параметра MRT (р<0,05, тест Манна-Уитни) - значение этого параметра после однократного введения было выше, чем после многократного введения; для параметров AUC0-24 и Т_1/2 различия статистически не значимы (р>0,05, тест Манна - Уитни).

Выявленные различия, вероятно, связаны с медленным выведением действующего вещества из тканей и индивидуальной вариабельностью животных.

Полученные данные не позволили предположить накопление действующего вещества в печени при многократном внутрижелудочном введении исследуемого препарата млекопитающие.

Данные по изменению концентрации энисамия йодида в почках млекопитающие после многократного введения препарата представлены в Таблице 9, усредненные фармакокинетические кривые в линейных и полулогарифмических координатах - на Рисунках 13 и 14.

Анализируемое вещество в исследованных образцах почек определялось в течение 24 ч часов.

Максимальную концентрацию энисамия йодида наблюдали через 1-3 ч после введения препарата.

Далее наблюдали постепенное снижение концентрации энисамия йодида в почках млекопитающие (Рисунки 13 и 14).

Среднее содержание энисамия йодида в почках через 24 ч после введения препарата составило около 23% от его максимальной концентрации.

Величина тканевой доступности энисамия йодида (ft) для 46 почек составила 5,37.

По сравнению с однократным введением выявлено статистически значимое увеличение параметра AUC0-24 (р<0,05, двухвыборочный t-тест для средних), однако для параметров MRT и Т_1/2 различия статистически не значимы (р>0,05, тест Манна-Уитни), что не позволило однозначно предположить накопление действующего вещества в почках при многократном внутрижелудочном введении исследуемого препарата млекопитаю1цим.

Данные по изменению концентрации энисамия йодида в сердце млекопитающих после многократного введения препарата представлены в таблице 10, усредненные фармакокинетические кривые в линейных и полулогарифмических координатах - на Рисунках 15 и 16.

Анализируемое вещество в исследованных образцах сердца определялось в течение 24 ч часов.

Максимальную концентрацию энисамия йодида наблюдали через 1-3 ч после введения препарата.

Далее наблюдали постепенное снижение концентрации энисамия йодида в сердце млекопитающих (Рисунки 15 и 16).

Среднее содержание энисамия йодида в сердце через 24 ч после введения препарата составило около 36% от его максимальной концентрации.

Основные параметры, характеризующие степень проникновения энисамия йодида в сердце приведены в Таблице 10.

Величина тканевой доступности энисамия йодида (ft) для сердца составила 11,23.

По сравнению с однократным введением не выявлены статистически значимые различия для параметров AUCO-24, MRT и Т_1/2 (р>0,05, двухвыборочный t-тест для средних).

Полученные данные позволили предположить отсутствие накопления действующего вещества в сердце при многократном внутрижелудочном введении исследуемого препарата млекопитающих.

Данные по изменению концентрации энисамия йодида в легких млекопитающих после многократного введения препарата представлены в Таблице 11, усредненные фармакокинетические кривые в линейных и полулогарифмических координатах - на Рисунках 17 и 18.

Анализируемое вещество в исследованных образцах легких определялось в течение 24 ч часов.

Максимальную концентрацию энисамия йодида наблюдали через 1-3 ч после введения препарата.

Далее наблюдали постепенное снижение концентрации энисамия йодида в легких млекопитающие (Рисунки 17 и 18).

Среднее содержание энисамия йодида в легких через 24 ч после введения препарата составило около 16% от его максимальной концентрации.

Основные параметры, характеризующие степень проникновения энисамия йодида в легкие приведены в Таблице 11.

Величина тканевой доступности энисамия йодида (ft) для легких составила 2,77.

По сравнению с однократным введением не выявлено статистически значимых различий для параметров AUCO-24, MRT и Т_1/2 (р>0,05, двухвыборочный t-тест для средних для параметра AUC0-24, тест Манна-Уитни для параметров MRT и Т_1/2).

Полученные данные позволили предположить отсутствие накопления действующего вещества в легких при многократном внутрижелудочном введении исследуемого препарата млекопитающим.

В полученных образцах головного мозга млекопитающих действующее вещество исследованного препарата не было обнаружено (ниже НПКО использованной биоаналитической методики).

Суммарные данные по тканевой доступности энисамия йодида в ткани и органы млекопитающих после однократного и многократного внутрижелудочного введения исследованного препарата представлены на Рисунке 19.

Таким образом, в заявленной группе решений было выявлено высокое сродство (интенсивное поступление и длительное нахождение) действующего вещества - энисамия йодида к тканям печени, почек, сердца и легких млекопитающих.

Показатели фармакокинетики энисамия йодида в плазме крови крыс после однократного внутрижелудочного введения исследуемого лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид, в дозе 100 мг/кг.

Основные показатели проникновения энисамия йодида в печень крыс после однократного внутрижелудочного введения исследуемого препарата с действующим веществом энисамия йодид, в дозе 100 мг/кг.

Основные показатели проникновения энисамия йодида в почки крыс после однократного внутрижелудочного введения энисамия йодид, в дозе 100 мг/кг.

Основные показатели проникновения энисамия йодида в сердце крыс после однократного внутрижелудочного введения энисамия йодид, в дозе 100 мг/кг.

Основные показатели проникновения энисамия йодида в сердце крыс после однократного внутрижелудочного введения энисамия йодид, в дозе 100 мг/кг.

Основные показатели проникновения энисамия йодида в легкие крыс после однократного внутрижелудочного введения энисамия йодид), в дозе 100 мг/кг.

Основные показатели проникновения энисамия йодида в печень крыс после многократного внутрижелудочного введения тестируемого препарата Нобазит^® 250 мг (МНН: энисамия йодид), таблетки, покрытые пленочной оболочкой (ОАО «Авексима», Россия) в дозе 100 мг/кг.

Основные показатели проникновения энисамия йодида в почки крыс после многократного внутрижелудочного введения исследуемого лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид, в дозе 100 мг/кг.

Основные показатели проникновения энисамия йодида в сердце крыс после многократного внутрижелудочного введения энисамия йодид, в дозе 100 мг/кг.

Основные показатели проникновения энисамия йодида в легкие крыс после многократного внутрижелудочного введения исследования лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид, в дозе 100 мг/кг.

Группа изобретений относится к области фармакологии и клинической фармакологии и раскрывает способ исследования фармакокинетических свойств лекарственного препарата с действующим веществом энисамия йодид, включающий его внутрижелудочное однократное или многократное введение в одинаковой дозе млекопитающему, последующий отбор крови и органов у млекопитающих, при однократном введении перед введением препарата и затем через 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч, 10 ч и 24 ч после введения препарата, а при многократном введении перед последним введением препарата и затем через 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч, 10 ч и 24 ч после последнего введения препарата, определение концентрации энисамии йодида в плазме крови и в тканях органов млекопитающих с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым (УФ) детектированием и определение параметров, характеризующих распределение энисамия йодида в тканях органов и в крови млекопитающих: максимальная концентрация - C_max мкг/мл; время достижения максимальной концентрации - T_max ч; площадь под кривой «концентрация-время» - AUC мкг ч/г; период полувыведения - T1/2 ч; среднее время удержания препарата в организме - MRT ч; тканевая доступность энисамия иодида в ткани и органы крыс - ft (варианты). Техническим результатом группы изобретений является определение количественных характеристик процессов всасывания, распределения и элиминации лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид после его однократного и многократного применения в течение 5 дней на млекопитающих; обоснование выбора путей и методов введения лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид после его однократного и многократного применения в течение 5 дней на млекопитающих; выявление тканей, в которые лекарственное средство с действующим веществом энисамия йодид проникает наиболее интенсивно и/или в которых удерживается наиболее длительно после его однократного и многократного применения в течение 5 дней на млекопитающих; установление основных путей элиминации лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид после его однократного и многократного применения в течение 5 дней на млекопитающих; установление зависимости «концентрация-эффект» для лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид после его однократного и многократного применения в течение 5 дней на млекопитающих; изучение фармакокинетики и распределения лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид во внутренние органы млекопитающие после его однократного и многократного применения в течение 5 дней на млекопитающих; изучение распределения лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид во внутренние органы млекопитающие после его однократного и многократного применения в течение 5 дней на млекопитающих; изучение тканевой доступности лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид, для контроля транспорта лекарственного средства в зону его действия, с целью определения эффекта лекарственного средства; прогнозирование действия лекарственного средства с действующим веществом энисамия йодид у человека. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 19 ил., 11 табл.

1. Способ исследования фармакокинетических свойств лекарственного препарата с действующим веществом энисамия йодид, включающий его внутрижелудочное однократное или многократное введение в одинаковой дозе млекопитающему, последующий отбор крови и органов у млекопитающих, при однократном введении перед введением препарата и затем через 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч, 10 ч и 24 ч после введения препарата, а при многократном введении перед последним введением препарата и затем через 0,5 ч, 1 ч, 2 ч, 3 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч, 10 ч и 24 ч после последнего введения препарата, определение концентрации энисамии йодида в плазме крови и в тканях органов млекопитающих с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым (УФ) детектированием и определение параметров, характеризующих распределение энисамия йодида в тканях органов и в крови млекопитающих:

- Максимальная концентрация - C_max мкг/мл,

- Время достижения максимальной концентрации - T_max ч,

- Площадь под кривой «концентрация-время» - AUC мкг ч/г;

- Период полувыведения - T1/2 ч;

- Среднее время удержания препарата в организме - MRT ч;

- Тканевая доступность энисамия йодида в ткани и органы крыс - ft.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что внутрижелудочное однократное введение лекарственного препарата осуществляют один раз в день, натощак.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что внутрижелудочное многократное введение лекарственного препарата осуществляют один раз в день, натощак, в течение 5 дней.

4. Способ по п.1, отличающийся тем, что одна доза для однократного или многократного внутрижелудочного введения лекарственного препарата млекопитающему составляет 100 мг/кг.

5. Способ по п.1, отличающийся тем, что осуществляют забор у млекопитающих печени, почек, легких, сердца и головного мозга.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата время достижения максимальной концентрации T_max в плазме крови млекопитающих составляет от 0,5 до 3,0 ч.

7. Способ по п.1, отличающийся тем, что при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата время достижения максимальной концентрации T_max в плазме крови млекопитающих составляет от 1,0 до 3,0 ч.

8. Способ исследования фармакокинетических свойств лекарственного препарата с действующим веществом энисамия йодид, включающий его внутрижелудочное однократное или многократное введение в одинаковой дозе млекопитающему, последующий отбор крови и органов у млекопитающих, определение тканевой доступности энисамия иодида в ткани и органы крыс, характеризующего распределение энисамия йодида в тканях органов и в крови млекопитающих с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым (УФ) детектированием, который после однократного внутрижелудочного введения лекарственного препарата составляет: в печени 19,20; в почках 4,08; в сердце 13,05; в легких 3,67, а после многократного внутрижелудочного введения лекарственного препарата составляет: в печени 11,51; в почках 5,37; в сердце 11,23; в легких 2,77.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что внутрижелудочное однократное введение лекарственного препарата осуществляют один раз в день, натощак.

10. Способ по п.8, отличающийся тем, что внутрижелудочное многократное введение лекарственного препарата осуществляют один раз в день, натощак, в течение 5 дней.

11. Способ по п.8, отличающийся тем, что одна доза для однократного или многократного внутрижелудочного введения лекарственного препарата млекопитающему составляет 100 мг/кг.

12. Способ по п.8, отличающийся тем, что осуществляют забор у млекопитающих печени, почек, легких, сердца и головного мозга.

13. Способ по п.8, отличающийся тем, что при однократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата время достижения максимальной концентрации T_max в плазме крови млекопитающих составляет от 0,5 до 3,0 ч.

14. Способ по п.8, отличающийся тем, что при многократном внутрижелудочном введении лекарственного препарата время достижения максимальной концентрации T_max в плазме крови млекопитающих составляет от 1,0 до 3,0 ч.

15. Способ исследования фармакокинетических свойств лекарственного препарата с действующим веществом энисамия йодид, включающий определение концентрации энисамия йодида в биологических образцах с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с ультрафиолетовым (УФ) детектированием, с элюированием энисамия йодида в виде симметричного пика с временем удерживания 6 мин, включающий использование:

- изократического режима метода высокоэффективной жидкостной хроматографии с ультрафиолетовым детектированием (ВЭЖХ-УФ);

- буферного раствора, содержащего очищенную воду в количестве 1 литр, триэтиламин в количестве 1 мл, ортофосфорную кислоту для доведения рН раствора до значения 2,5±0,2, 1-октансульфонат натрия в качестве ион-парной добавки в количестве 1,2 г и ацетонитрил в соотношении 74:26;

- длины волны для детектирования 267±2 нм в специфической области диодно-матричного спектра энисамия йодида.