Питательная среда для культивирования пастерелл в промышленных биореакторах Российский патент 2023 года по МПК C12N1/20 C12R1/01 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано при промышленном производстве живых и инактивированных вакцин против пастереллеза животных.

Составы питательных сред для культивирования пастерелл хорошо изучены на лабораторном и промышленном уровнях.

Известна Вакцина против стрептококкоза и пастереллеза нутрий по патенту №2099084, правообладатель Есепенок Виктор Арсеньтьевич и др., A61K 39/116, публ. 20.12.1997, где выращенные культуры стрептококков и пастерелл объединяют в соотношении 1:1 и добавляют 0,3% раствор формалина. По истечении срока инактивации и получения требуемых результатов контроля чистоты роста в бактериальную массу вносят адъювант - 3%-ный раствор гидроокиси алюминия из расчета 15% к объему культуры. Второй адъювант сапонин добавляют из расчета 100 мг на 1 л биомассы. Адъюванты вносят при непрерывном взбалтывании, качестве культуральной среды используются глюкоза 1,0 2,0, формалин 0,3 0,4, гидроокись алюминия 10 15, сапонин остальное.

Недостатками известного решения являются:

Концентрации микроорганизмов, получаемые согласно патенту составляют от ~2,5-3, но ниже 10-15 млрд. клеток/мл питательной среды, что ниже получаемых концентраций согласно предлагаемому составу питательной среды в заявленной композиции.

Известен Способ изготовления вакцины против пастереллеза, по патенту №2129015, Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности, C12N 1/20, публ. 20.04.1999, где процесс выращивания пастерелл проводят непрерывно-проточным хемостатным способом, т.е. с непрерывной подачей в ферментер определенных количеств питательной среды и раствора глюкозы, и также непрерывным сливом из аппарата такого же количества бактериальной суспензии, которая используется на последующих стадиях изготовления вакцины. Культивирование вакцинного штамма пастерелл в жидкой питательной среде на основе мясного гидролизата с регулированием рН на уровне 7,8 - 8,2 ед, и парциального давления растворенного в культуральной жидкости кислорода на уровне 30 - 40%, и начальной концентрацией глюкозы в питательной среде 1 - 5 г/л при скорости разбавления 0,5 - 0,9 1/ч чтобы суммарный объем поступающих за 1 час в ферментер питательной среды и раствора глюкозы составлял 0,5-0,9 объема суспензии в аппарате, а концентрация глюкозы в поступающей питательной среде была в пределах 1-5 г/л.

Недостатками известного решения являются:

а) высокая вероятность контаминации (загрязнения посторонней микрофлорой) аппаратов (ферментёров);

б) высокая частота мутаций у возбудителя, что может приводить к полной утере полезных (иммунологических) свойств.

При этом:

- имеющиеся положительные данные в краткосрочной перспективе (1, 2,3 месяца, как это заявлено в Патенте) не позволяют делать выводы о более длительных сроках касательно данных свойств;

- имеются недопустимые реактогенные варианты полученной вакцины;

в) не представлены данные о требуемом оборудовании касательно возможного для работы объёма ферментёра и мощности перемешивающего устройства, что может затруднять внедрение данного способа культивирования и используемой питательной среды для конкретного производства.

Известен Способ получения вакцины гемофильной тип b конъюгированной по патенту № 2704452 правообладателя ФГУП "Санкт-Петербургский НИИ вакцин и сывороток и предприятие по производству бактерийных препаратов", C12N 1/20, публ. 28.10.2019, где используется жидкая питательная среда следующего состава (г/л): глюкоза - 5,0; дрожжевой экстракт - 2,0; пептон - 15,0; NH4Cl - 0,7; Na2HPO4 - 2,5; КСl - 0,5; NaCl - 3,3; L-глутаминовая кислота - 1,2; L-цистеин - 0,015; НАД - 0,02; гемин - 0,04.

Недостатками известного решения являются:

Концентрации микроорганизмов, получаемые согласно патенту составляют от ~2,5-3, но ниже 10-15 млрд.клеток/мл питательной среды, что ниже получаемых концентраций согласно предлагаемому составу питательной среды в заявленной композиции.

В качестве прототипа заявитель рассматривает Авторское свидетельство №1566533, Способ изготовления вакцины против пастереллеза птиц, правообладателя - Всесоюзный научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности, A61K 39/102, публ. 15.11.1994, где для получения бактериальной массы пастерелл используют питательную среду на основе перевара Хоттингера. В питательную среду входит перевар Хоттингера, дрожжевой экстракт, натрий фосфорнокислый. Глубинное культивирование проводят в течение 6 - 8 ч при 37°C с учетом фаз физиологического состояния культуры.

Недостатком известного способа-прототипа является:

а) прототип не имеет в составе цистеина в требуемой концентрации - как это сделано в предлагаемой заявке -0,5-1г/л в питательной среде цистеина) и по этой причине не обеспечивается воспроизводимость требуемого урожай клеток 10-15 млрд.клеток/мл в четырёх из каждых пяти ферментаций, в то время как согласно данному способу известны случаи получения до 4- млрд.клеток/мл.;

б) не показаны объёмы требуемого оборудования для получения воспроизводимых значений по концентрации микроорганизмов;

в) не показаны воспроизводимость результатов в данном способе культивирования и используемого состава ПС;

г) используется дополнительное оборудование, а именно датчики и приборы для измерения окислительно-восстановительного потенциала питательной среды, что не всегда может быть достижимым при промышленном культивировании.

Достигаемый технический результат заключается в том, что заявленная питательная среда для культивирования бактерий позволяет повысить выход биомассы бактерий сократить продолжительность процесса и повысить скорость ферментации.

Питательная среда прототипа модифицирована добавлением печёночного экстракта 1л л на 800 л ПС, пептона Мартена 40 л на 800 л ПС и KH₂PO₄(водн.) 0,8 кг на 800 л ПС. Такая среда далее используется под названием «регламентная» ПС.

Заявленный результат достигается в питательной среде следующего состава, с расходами компонентов на конечный объём 800 л ПС:

ХМБ перевар пастереллёзный-120 л, HCl х.ч.-0,6 л, пептон -4 кг, NaCl-0,9 кг, KH₂PO₄(водн.) 0,8 кг, Na₂HPO₄*12H₂O-4 кг, цистеин- до 0,8 кг, дрожжевой экстракт 25-процентный -10л, MgSO₄*7H₂0- 400 , NaOH, 20%-до pH 7,8-8,0, вода-до 800л;

Таблица 1. выход микробных клеток для различных питательных сред в биореакторе с общим объёмом 1 м³. № Дата Штамм Концентрация клеток в конце процесса, X,
млрд/мл Начальный объём в реакторе,
V₀, л Конечный объём в реакторе, рассчитанный по сумме всех добавок и посевного материала,
V_Final, л Процент, %, увеличения урожайности по сравнению с Контролем согласно формуле: * 1 4.03 656 10 450 571 47 2 20.03 1231 11 400 514 45 3 20.03 1231 10 400 515 32 4 24.04 796 15 450 585 126 5 8.05 Т-80 12 450 577 78 6 8.05 Т-80 10 450 572 47 7 3.07 796 12 450 567 75 8 Контроль-ферментации регламентные, май-июль 2019 г. -»- Средняя 6,82 400-450 510-570 -»-

1. ТАБЛИЦА 1. Балансовые ФЕРМЕНТАЦИИ 4 МАРТА - 3 ИЮЛЯ 2020 Г.

* %=[(X*V_Final - 6,82*570)/(6,82*570)]*100%, где X - выход биомассы клеток, млрд/мл.

Таблица 1 показывает следующие особенности при ведении процесса культивирования клеток и получаемых культур клеток:

• Исключение из ПС печёночного экстракта и пептона Мартена;

• Время культивирования составляет 7-8 часов.

При этом:

Средний выход по концентрации клеток в каждых четырёх из пяти ферментаций составляет не менее 10,0 млрд кл.мл;

Процент, %, увеличения урожайности по сравнению с Контролем находится в пределах 32-126% для различных штаммов пастерелл;

• Расход основных питательных компонентов не превышает аналогичных показателей регламентных контрольных процессов.

• Иммуногенность полученной бактериальной массы не ниже показателей бактериальной массы полученной регламентным способом.

Описание способа получения заявленной композиции

Пример 1. Культивирование пастерелл регламентным методом.

Для приготовления 1 л питательной среды на основе ХМБ для культивирования пастерелл использовались следующие компоненты из расчёта на 1 л питательной среды:

1. Основной перевар Хоттингера - 0,175 л (175 мл)

2. HCl х.ч. - 0,0009 л (0,9 мл)

3. Пептон Мартена 0,05 л (50 мл)

4. Пептон - 0,005 кг (5 г)

5. Печеночный экстракт (говяжий) 1:1 - 0,02 л (20 мл)

6. NaHPO₄ * 12H₂O - 0,005 кг(5 г)

7. KH₂PO₄ - 0,001 кг (1 г)

8. NaCl х.ч. - 0,0007 кг(0,7 г)

9. Н₂О очищенная до 1 л

10. NaOH 20% - до рН 7,8 - 8,0.

Приготовление матровых расплодок

Получение расплодки культуры производственного штамма пастерелл во флаконах и баллонах .

Исходные материалы микроорганизмов хранились в лиофилизированном состоянии при температуре не выше -40 °С. Культивирование матровых расплодок происходило без аэрации и перемешивания, в баллонах из пластика и стекла, в течение 20-24 часов.

Для получения матровых расплодок пастереллы из запаянных пипеток или ампул засевались во флаконы вместимостью 0,2-0,5 л с питательной средой, предназначенной для культивирования пастерелл. Бульонную культуру из флаконов пересевали в матровые бутыли с питательной средой для культивирования пастерелл. По окончании культивирования посевной материал проверяли визуально (макроскопически) и микроскопией мазков, окрашенных по Граму. Чистый посевной материал использовали для засева питательной среды в реакторах.

Засев матриксной культуры в биореактор и культивирование

Для культивирования культур пастерелл использовали три биореактора. Штамм каждого серотипа выращивали в отдельном биореакторе. Посевной материал засевали в биореакторы из расчета 5-10% к объему питательной среды.

Производственное культивирование проводится в реакторе, снабженном магнитной мешалкой. В качестве барботёра используется «Свеча» диаметром 50 мм. Отбойники в ферментёрах не использовались.

Содержимое биореактора перемешивали 5-7 минут и инкубировали в течение первых двух часов без перемешивания при 36-37°С. Через два часа после засева постоянно перемешивали с подачей стерильного воздуха для аэрации до конца культивирования. Количество продуваемого воздуха 1-1,5 объема в минуту.

Для интенсификации роста культуры добавлялся стерильный 40%-ный раствор глюкозы из расчета 0,2% в пересчете на сухое вещество к объему растущей культуры (1 мл на 1 л среды) Раствор глюкозы подавали дробно, 3-4 раза в период культивирования, первую порцию добавляли через 2 часа после засева.

Культивировали пастереллезные культуры в биореакторах 10-14 часов при температуре 36-37°С. Культивирование завершалось, когда концентрация не увеличивается или увеличивается незначительно.

По окончании выращивания проводился контроль культуры на чистоту, определить рН и концентрацию микробных клеток. Предполагалось, что концентрация должна быть не менее 10 млрд/см³.

Среднее значение концентрации микроорганизмов (пастерелл) для различных штаммов при данном способе культивирования составило 6,82 миллиарда клеток/мл, с начальным объёмом культуральной жидкости в биореакторе 410-450 литров и конечном объёме культуральной жидкости 510-570 литров, см. Табл.1, графа/линия №8.

ПРИМЕР 2. Культивирование пастерелл, штамм 656, с модифицированной питательной средой.

Для культивирования штамма 656 использовалась модифицированная среда, содержащая ХМБ перевар пастереллёзный-120 л,

HCl х.ч. - 0,6 л,

пептон - 4 кг,

NaCl - 0,9 кг,

KH₂PO₄(водн.) 0,8 кг,

Na₂HPO₄*12H₂O - 4 кг,

цистеин - до 0,8 кг,

дрожжевой экстракт 25-процентный – 10 л,

MgSO₄*7H₂O - 400,

NaOH, 20% - до pH 7,8-8,0,

Вода водопроводная - до 800 л.

Показатели питательной среды

№
п/п Исследуемые компоненты Регламентная Экспериментальная 1 Аминный азот 175-200 мг/%. 175-200 мг/%. 2 NaCl 0,3%. 0,3%. 3 Пептон Не меньше 1,7 мг/%. Не меньше 1,7 мг/%.

Приготовление компонентов питательной среды, их смешение, приготовление посевного материалы пастерелл, посевы проводились согласно условиям, приведённым в ПРИМЕРЕ 1, за исключением дополнительных факторов, не использованных для приготовления питательной среды, а именно, добавления цистеины, дрожжевого экстракта, уменьшения концентрации пептона на 20%, исключения пептона Мартена и печёночного экстракта.

ПРИМЕР 2 показывает следующие особенности при ведении процесса культивирования клеток и получаемых культур клеток:

• Исключение из ПС печёночного экстракта и пептона Мартена;

• Время культивирования составляет 7-8 часов.

При этом:

Выход по концентрации клеток составляет не менее 10,0 млрд кл. мл;

Процент, %, увеличения урожайности по сравнению с Контролем находится в пределах 32-126% для различных штаммов пастерелл;

• Расход основных питательных компонентов не превышает аналогичных показателей регламентных контрольных процессов.

• Иммуногенность полученной бактериальной массы не ниже показателей бактериальной массы полученной регламентным способом, Таблица 1, графа/линия №1.

ПРИМЕР 3. Культивирование пастерелл, штамм 1231, с модифицированной питательной средой.

Для культивирования штамма 1231 использовалась модифицированная среда, содержащая ХМБ перевар пастереллёзный-120 л,

HCl х.ч. - 0,6 л,

пептон - 4 кг,

NaCl - 0,9 кг,

KH₂PO₄(водн.) 0,8 кг,

Na₂HPO₄*12H₂O - 4 кг,

цистеин - до 0,8 кг,

дрожжевой экстракт 25-процентный – 10 л,

MgSO₄*7H₂O - 400,

NaOH, 20% - до pH 7,8-8,0,

Вода водопроводная - до 800 л.

Приготовление компонентов питательной среды, их смешение, приготовление посевного материалы пастерелл, посевы проводились согласно условиям, приведённым в ПРИМЕРЕ 1, за исключением дополнительных факторов, не использованных для приготовления питательной среды, а именно, добавления цистеины, дрожжевого экстракта, уменьшения концентрации пептона на 20%, исключения пептона Мартена и печёночного экстракта.

ПРИМЕР 3 показывает следующие особенности при ведении процесса культивирования клеток и получаемых культур клеток:

• Исключение из ПС печёночного экстракта и пептона Мартена;

• Время культивирования составляет 7-8 часов.

При этом:

Выход по концентрации клеток составляет не менее 10,0 млрд кл.мл;

Процент, %, увеличения урожайности по сравнению с Контролем находится в пределах 32-126% для различных штаммов пастерелл;

• Расход основных питательных компонентов не превышает аналогичных показателей регламентных контрольных процессов.

• Иммуногенность полученной бактериальной массы не ниже показателей бактериальной массы полученной регламентным способом, Таблица 1, графа/линия №2.

ПРИМЕР 4. Культивирование пастерелл, штамм 1231, с модифицированной питательной средой.

Для культивирования штамма 1231 использовалась модифицированная среда, содержащая ХМБ перевар пастереллёзный-120 л,

HCl х.ч. - 0,6 л,

пептон - 4 кг,

NaCl - 0,9 кг,

KH₂PO₄(водн.) 0,8 кг,

Na₂HPO₄*12H₂O - 4 кг,

цистеин - до 0,8 кг,

дрожжевой экстракт 25-процентный – 10 л,

MgSO₄*7H₂0 - 400,

NaOH, 20% - до pH 7,8-8,0,

Вода водопроводная - до 800 л.

Приготовление компонентов питательной среды, их смешение, приготовление посевного материалы пастерелл, посевы проводились согласно условиям, приведённым в ПРИМЕРЕ 1, за исключением дополнительных факторов, не использованных для приготовления питательной среды, а именно, добавления цистеины, дрожжевого экстракта, уменьшения концентрации пептона на 20%, исключения пептона Мартена и печёночного экстракта.

ПРИМЕР 4 показывает следующие особенности при ведении процесса культивирования клеток и получаемых культур клеток:

• Исключение из ПС печёночного экстракта и пептона Мартена;

• Время культивирования составляет 7-8 часов.

При этом:

Выход по концентрации клеток составляет не менее 10,0 млрд кл. мл;

Процент, %, увеличения урожайности по сравнению с Контролем находится в пределах 32-126% для различных штаммов пастерелл;

• Расход основных питательных компонентов не превышает аналогичных показателей регламентных контрольных процессов.

• Иммуногенность полученной бактериальной массы не ниже показателей бактериальной массы полученной регламентным способом, Таблица 1, графа/линия №3.

ПРИМЕР 5. Культивирование пастерелл, штамм 796, с модифицированной питательной средой.

Для культивирования штамма 796 использовалась модифицированная среда, содержащая ХМБ перевар пастереллёзный-120 л,

HCl х.ч. - 0,6 л,

пептон - 4 кг,

NaCl - 0,9 кг,

KH₂PO₄(водн.) 0,8 кг,

Na₂HPO₄*12H₂O - 4 кг,

цистеин - до 0,8 кг,

дрожжевой экстракт 25-процентный – 10 л,

MgSO₄*7H₂O - 400 ,

NaOH, 20% - до pH 7,8-8,0,

Вода водопроводная - до 800 л.

Приготовление компонентов питательной среды, их смешение, приготовление посевного материалы пастерелл, посевы проводились согласно условиям, приведённым в ПРИМЕРЕ 1, за исключением дополнительных факторов, не использованных для приготовления питательной среды, а именно, добавления цистеины, дрожжевого экстракта, уменьшения концентрации пептона на 20%, исключения пептона Мартена и печёночного экстракта.

ПРИМЕР 5 показывает следующие особенности при ведении процесса культивирования клеток и получаемых культур клеток:

• Исключение из ПС печёночного экстракта и пептона Мартена;

• Время культивирования составляет 7-8 часов.

При этом:

Выход по концентрации клеток составляет не менее 10,0 млрд кл.мл;

Процент, %, увеличения урожайности по сравнению с Контролем находится в пределах 32-126% для различных штаммов пастерелл;

• Расход основных питательных компонентов не превышает аналогичных показателей регламентных контрольных процессов.

• Иммуногенность полученной бактериальной массы не ниже показателей бактериальной массы полученной регламентным способом, Таблица 1, графа/линия №4.

ПРИМЕР 5. Культивирование пастерелл, штамм Т-80, с модифицированной питательной средой.

Для культивирования штамма Т-80 использовалась модифицированная среда, содержащая ХМБ перевар пастереллёзный-120 л,

HCl х.ч. - 0,6 л,

пептон - 4 кг,

NaCl - 0,9 кг,

KH₂PO₄(водн.) 0,8 кг,

Na₂HPO₄*12H₂O - 4 кг,

цистеин - до 0,8 кг,

дрожжевой экстракт 25-процентный – 10 л,

MgSO₄*7H₂O - 400 ,

NaOH, 20% - до pH 7,8-8,0,

Вода водопроводная - до 800 л.

Приготовление компонентов питательной среды, их смешение, приготовление посевного материалы пастерелл, посевы проводились согласно условиям, приведённым в ПРИМЕРЕ 5 (таблица 1), за исключением дополнительных факторов, не использованных для приготовления питательной среды, а именно, добавления цистеины, дрожжевого экстракта, уменьшения концентрации пептона на 20%, исключения пептона Мартена и печёночного экстракта.

ПРИМЕР 5 показывает следующие особенности при ведении процесса культивирования клеток и получаемых культур клеток:

• Исключение из ПС печёночного экстракта и пептона Мартена;

• Время культивирования составляет 7-8 часов.

При этом:

Выход по концентрации клеток составляет не менее 10,0 млрд кл.мл;

Процент, %, увеличения урожайности по сравнению с Контролем находится в пределах 32-126% для различных штаммов пастерелл;

• Расход основных питательных компонентов не превышает аналогичных показателей регламентных контрольных процессов.

• Иммуногенность полученной бактериальной массы не ниже показателей бактериальной массы полученной регламентным способом, Таблица 1, графа/линия №5.

ПРИМЕР 6. Культивирование пастерелл, штамм Т-80, с модифицированной питательной средой.

Для культивирования штамма Т-80 использовалась модифицированная среда, содержащая ХМБ перевар пастереллёзный-120 л,

HCl х.ч. - 0,6 л,

пептон - 4 кг,

NaCl - 0,9 кг,

KH₂PO₄(водн.) 0,8 кг,

Na₂HPO₄*12H₂O - 4 кг,

цистеин - до 0,8 кг,

дрожжевой экстракт 25-процентный – 10 л,

MgSO₄*7H₂O - 400,

NaOH, 20% - до pH 7,8-8,0,

Вода водопроводная - до 800 л.

Приготовление компонентов питательной среды, их смешение, приготовление посевного материалы пастерелл, посевы проводились согласно условиям, приведённым в ПРИМЕРЕ 6 (Таблице1), за исключением дополнительных факторов, не использованных для приготовления питательной среды, а именно, добавления цистеины, дрожжевого экстракта, уменьшения концентрации пептона на 20%, исключения пептона Мартена и печёночного экстракта.

ПРИМЕР 6 показывает следующие особенности при ведении процесса культивирования клеток и получаемых культур клеток:

• Исключение из ПС печёночного экстракта и пептона Мартена;

• Время культивирования составляет 7-8 часов.

При этом:

Выход по концентрации клеток составляет не менее 10,0 млрд кл. мл;

Процент, %, увеличения урожайности по сравнению с Контролем находится в пределах 32-126% для различных штаммов пастерелл;

• Расход основных питательных компонентов не превышает аналогичных показателей регламентных контрольных процессов.

• Иммуногенность полученной бактериальной массы не ниже показателей бактериальной массы полученной регламентным способом, Таблица 1, графа/линия №6.

ПРИМЕР 7. Культивирование пастерелл, штамм 796, с модифицированной питательной средой.

Для культивирования штамма 796 использовалась модифицированная среда, содержащая ХМБ перевар пастереллёзный-120 л,

HCl х.ч. - 0,6 л,

пептон - 4 кг,

NaCl - 0,9 кг,

KH₂PO₄(водн.) 0,8 кг,

Na₂HPO₄*12H₂O - 4 кг,

цистеин - до 0,8 кг,

дрожжевой экстракт 25-процентный – 10 л,

MgSO₄*7H₂O - 400 ,

NaOH, 20% - до pH 7,8-8,0,

Вода водопроводная - до 800 л.

Приготовление компонентов питательной среды, их смешение, приготовление посевного материалы пастерелл, посевы проводились согласно условиям, приведённым в ПРИМЕРЕ 1, за исключением дополнительных факторов, не использованных для приготовления питательной среды, а именно, добавления цистеины, дрожжевого экстракта, уменьшения концентрации пептона на 20%, исключения пептона Мартена и печёночного экстракта.

ПРИМЕР 7 показывает следующие особенности при ведении процесса культивирования клеток и получаемых культур клеток:

• Исключение из ПС печёночного экстракта и пептона Мартена;

• Время культивирования составляет 7-8 часов.

При этом:

Выход по концентрации клеток составляет не менее 10,0 млрд кл.мл;

Процент,%, увеличения урожайности по сравнению с Контролем находится в пределах 32-126% для различных штаммов пастерелл;

• Расход основных питательных компонентов не превышает аналогичных показателей регламентных контрольных процессов.

• Иммуногенность полученной бактериальной массы не ниже показателей бактериальной массы полученной регламентным способом, Таблица 1, графа/линия №7.

Для получения питательной среды для культивирования пастерелл (Pasteurella multocida) используются промышленные биореакторы с общим объёмом до 1 м³.

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой питательную среду для культивирования пастерелл, содержащую ХМБ перевар пастереллёзный - 120 л, HCl х.ч. - 0,6 л, пептон - 4 кг, NaCl - 0,9 кг, KH₂PO₄ (водн.) - 0,8 кг, Na₂HPO₄*12H₂O - 4 кг, цистеин - до 0,8 кг, дрожжевой экстракт 25-процентный - 10 л, MgSO₄*7H₂О - 400, NaOH, 20% - до pH 7,8-8,0, вода - до 800 л, обеспечивающую выход/урожай клеток пастерелл не менее 10 млрд клеток в 1 мл с воспроизводимостью результата не менее чем в четырёх из каждых пяти ферментаций, без потери иммуногенных свойств получаемых вакцин. 1 табл., 7 пр.

Питательная среда для культивирования пастерелл в промышленных биореакторах, содержащая ХМБ перевар пастереллёзный - 120 л, HCl х.ч. - 0,6 л, пептон - 4 кг, NaCl - 0,9 кг, KH₂PO₄ (водн.) - 0,8 кг, Na₂HPO₄*12H₂O - 4 кг, цистеин - до 0,8 кг, дрожжевой экстракт 25-процентный - 10 л, MgSO₄*7H₂O - 400, NaOH, 20% - до pH 7,8-8,0, вода - до 800 л.