СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПАСТЕРЕЛЛЕЗА ПТИЦ Советский патент 1994 года по МПК A61K39/102 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в промышленном производстве сухой живой вакцины против пастереллеза птиц.

Цель изобретения - сокращение сроков накопления бактериальной массы, а также повышение качества и стабильности биологических свойств вакцины.

Для этого периодическое глубинное культивирование Пастеровского штамма Н проводят в оптимизированной питательной среде в течение 6-8 ч в соответствии с разработанным алгоритмом управления процессом.

П р и м е р 1. Способ изготовления вакцины с минимальными значениями параметров.

Для культивирования пастерелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера, приготовленную по следующей прописи, мас.%: Перевар Хоттингера 15,0 Дрожжевой экстракт 0,4 NaCl 0,1 Na₂HPO₄ 0,7 Вода дистиллированная до 100,0
Питательная среда содержит 170 мг% аминного азота и имеет рН 7,8. Среду засевают культурой пастерелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при 36,5^оС в течение 6 ч. На фазе приспособления окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -20 мВ. На фазе ускорения роста выращивание пастерелл проводят при рН 8,2 и парциальном давлении растворенного кислорода, равном 10% от насыщения. На фазе экспоненциального роста культивирование ведут при рН 7,8 и парциальном давлении растворенного кислорода, равном 30% от насыщения. Концентрацию глюкозы поддерживают на уровне 0,01%. Накопление биомассы в 1 мл среды составляет 5,4 млрд. Полученную культуру концентрируют и разводят защитной средой следующего состава, мас.%: Сахароза 10,0 Желатин 15 Калий-фосфатный буфер до100,0
Бактериальную суспензию фасуют во флаконы емкостью 20 см³ по 2 см³ и замораживают до -45^оС. Температуру биоматериала на фазе сублимации поддерживают в течение первых 12 ч -30^оС, в последующие 10 ч +23^оС.

Массовая доля влаги в вакцине 1%. Срок годности вакцины 10 месяцев.

П р и м е р 2. Способ изготовления вакцины с оптимальными значениями параметров.

Для культивирования пастерелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера, приготовленную по следующей прописи, мас.%: Перевар Хоттингера 17,5 Дрожжевой экстракт 0,5 NaCl 0,3 Na₂HPO₄ 0,8 Вода дистиллированная до 100,0
Питательная среда содержит 175 мг% аминного азота и имеет рН 7,9. Среду засевают культурой пастерелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при 37^оС в течение 7 ч. На фазе приспособления окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -40 мВ. На фазе ускорения роста выращивание пастерелл проводят при рН 8,4 и парциальном давлении растворенного кислорода, равном 15% от насыщения. На фазе экспоненциального роста культивирование проводят при рН 8,0 и парциальном давлении растворенного кислорода, равном 35% от насыщения. Накопление бактериальной массы в 1 мл среды составляет 40,2 млрд. Концентрацию глюкозы поддерживают на уровне 0,15%. Полученную культуру концентрируют и разводят защитной средой. Срок годности вакцины 10 месяцев.

П р и м е р 3. Способ изготовления вакцины с максимальными значениями параметров.

Для культивирования пастерелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера, приготовленную по следующей прописи, мас.%: Перевар Хоттингера 20,0 Дрожжевой экстракт 0,6 NaCl 0,5 Na₂HPO₄ 0,9 Вода дистиллированная до100,0
Питательная среда содержит 180 мг% аминного азота и имеет рН 8,0. Среду засевают культурой пастерелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при 37,5^оС в течение 8 ч. На фазе приспособления окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -60 мВ. На фазе ускорения роста выращивание пастерелл проводят при рН 8,6 и парциальном давлении растворенного кислорода, равном 20% от насыщения. На фазе экспоненциального роста культивируют при рН 8,2 и парциальном давлении растворенного кислорода, равном 40% от насыщения. Концентрацию глюкозы поддерживают на уровне 0,3%. Концентрация бактериальных клеток в 1 мл среды составляет 13,5 млрд. Полученную культуру концентрируют и разводят защитной средой. Срок годности вакцины 10 месяцев.

П р и м е р 4. Способ изготовления вакцины со значениями параметров ниже минимальных.

Для культивирования пастерелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера, приготовленную по следующей прописи, мас.%: Перевар Хоттингера 14,0 Дрожжевой экстракт 0,3 NaCl 0,05 Na₂HPO₄ 0,6 Вода дистиллированная до 100,0
Питательная среда содержит 160 мг% аминного азота и имеет рН 7,7. Среду засевают культурой пастерелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивирование проводят при 36^оС в течение 5,5 ч. На фазе приспособления окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -19 мВ. На фазе ускорения роста выращивание пастерелл проводят при рН 8,1 и парциальном давлении растворенного кислорода, равном 9% от насыщения. На фазе экспоненциального роста культивируют при рН 7,7 и парциальном давлении растворенного кислорода, равном 29% от насыщения. Концентрацию глюкозы поддерживают на уровне 0,009%. В полученной культуре наблюдали полиморфизм. Концентрация микробных клеток в 1 мл среды составляет 1,2 млрд.

П р и м е р 5. Способ изготовления вакцины со значениями параметров, выше максимальных.

Для культивирования пастерелл используют жидкую питательную среду на основе перевара Хоттингера, приготовленную по следующей прописи, мас.%: Перевар Хоттингера 21,0 Дрожжевой экстракт 0,7 NaCl 0,51 Na₂HPO₄ 1,0 Вода дистиллированная до100,0
Питательная среда содержит 190 мг% аминного азота и имеет рН 8,1. Среду засевают культурой пастерелл, выращенной в жидкой питательной среде аналогичного состава. Культивируют при 38^оС в течение 8,5 ч. На фазе приспособления окислительно-восстановительный потенциал культуральной жидкости снижают до -61 мВ. На фазе ускорения роста выращивание пастерелл проводят при рН 8,7 и парциальном давлении растворенного кислорода, равном 21% от насыщения. На фазе экспоненциального роста культивирование ведут при рН 8,3 и парциальном давлении растворенного кислорода, равном 41% от насыщения. Концентрацию глюкозы поддерживают на уровне 0,4%. В полученной культуре наблюдали полиморфизм. Концентрация пастерелл в 1 мл среды составляет 9,1 млрд. микробных клеток.

Таким образом, применение интенсифицированного способа культивирования с использованием усовершенствованной питательной среды позволяет повысить накопление жизнеспособных бактерий в 20 раз по сравнению с известными при сокращении времени методами выращивания с 16-18 ч до 6-8 ч. Вакцина, полученная этим способом, более стабильна по биологическим свойствам, в том числе и по иммуногенности.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано в промышленном производстве сухой живой вакцины против пастереллеза птиц. Цель изобретения - сокращение сроков накопления бактериальной массы, а также повышение качества и стабильности биологических свойств вакцины. Для этого для получения бактериальной массы пастерелл используют питательную среду на основе перевара Хоттингера. В питательную среду входит перевар Хоттингера, дрожжевой экстракт, натрий фосфорнокислый. Глубинное культивирование проводят в течение 6 - 8 ч при 37°С с учетом фаз физиологического состояния культуры. Использование данной питательной среды позволяет удешевить вакцину и повысить накопление жизнеспособных бактерий со стабильными биологическими свойствами.

СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ПАСТЕРЕЛЛЕЗА ПТИЦ, включающий засев пастеровского штамма 11, культивирования в жидкой питательной среде на основе перевара Хоттингера с регуляцией окислительно-восстановительного потенциала растворенного кислорода, рН, и концентрации глюкозы с последующим концентрированием и лиофилизацией полученной бактериальной суспензии, отличающийся тем, что, с целью сокращения сроков накопления бактериальной массы, а также повышения качества и стабильности биологических свойств вакцины, культивирование проводят в течение 6 - 8 ч в жидкой питательной среде, дополнительно содержащей дрожжевой экстракт, хлористый натрий и натрий фосфорнокислый двузамещенный, при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Перевар Хоттингера 15,0 - 20,0
Дрожжевой экстракт 0,4 - 0,6
Натрий хлористый 0,1 - 0,5
Натрий фосфорнокислый двузамещенный 0,7 - 0,9
Вода дистиллированная До 100,0
причем после засева окислительно-восстановительный потенциал снижают до -20 - 60 Мв и затем в течение 2 - 2,5 парциальное давление растворенного кислорода устанавливают 10 - 20% от насыщения при рН среды 8,2 - 8,6, после чего рН доводят до 7,8 - 8,2 при парциальном давлении кислорода 30 - 40% от насыщения, а концентрацию глюкозы на протяжении всего процесса поддерживают в пределах 0,01 - 0,3%.