ПРИМЕНЕНИЕ 5-[(1H-ИНДОЛ-3-ИЛ)МЕТИЛ]-7-МЕТИЛ-2,3-ДИГИДРО-1H-ПИРРОЛО[1,2-d][1,4]ДИАЗЕПИН-4(5H)-ОНА В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВОГРИБКОВОГО СРЕДСТВА В ОТНОШЕНИИ ДРОЖЖЕВЫХ ГРИБОВ Российский патент 2023 года по МПК A61K31/404 A61K31/551 A61P31/10 

Изобретение относится к области органической химии - новым биологически активным соединениям - замещенным пирроло[1,2-d][1,4]диазепинонам, а именно к 5-[(1H-индол-3-ил)метил]-7-метил-2,3-дигидро-1H-пирроло[1,2-d][1,4]диазепин-4(5Н)-ону 1 формулы:

соединение 1 обладает антимикотической активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве потенциального лекарственного средства с антимикотическими свойствами.

Аналогом по структуре заявляемому соединению является 7-хлор-4-(4-этилфенил)-5,6-дигидро-4H-бензо[f]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин 2, обладающий антимикотической активностью [Bioorg. Med. Chem. Lett. 2005, 15, 3453 - 3458; doi: 10.1016/j.bmcl.2005.05.007] формулы:

Эталоном сравнения был выбран кетоконазол 3 формулы:

который широко применяется в лечебной практике, и является аналогом по действию [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна, 2012. - с. 918; Med. Chem. Res. 2013, 22, 211 -218; doi: 10.1007/s00044-012-0021-2].

Задачей изобретения является поиск в ряду замещенных пирроло[1,2-d][1,4]диазепинонов веществ с выраженным антимикотическим действием и низкой токсичностью.

Поставленная задача достигается получением 5-[(1H-индол-3-ил)метил]-7-метил-2,3-дигидро-1H-пирроло[1,2-d][1,4]диазепин-4(5H)-она, который обладает антимикотической активностью.

Заявляемое соединение 1 синтезируют обработкой 5-метил-2-(2'-аминоэтил)фурана N-Boc-триптофаном при кипячении в течение 12 часов в абсолютном дихлорэтане в присутствии 1-этил-3-[3-(диметиламино)пропил]карбодиимида и N-метилморфолина. Затем образовавшийся неочищенный амид обрабатывают смесью ледяной уксусной и концентрированной соляной кислот при комнатной температуре с последующей нейтрализацией соляной кислоты Na₂CO₃, нагреванием реакционной смеси при 120°С и выделением целевого продукта стандартными методами синтетической органической химии по схеме:

Пример 1. Получение соединения 1. К перемешиваемому раствору 912 мг (3 ммоль) N-Boc-триптофана в 10 мл абсолютного дихлорэтана добавляют 400 мкл (3.2 ммоль) 5-метил-2-(2'-аминоэтил)фурана, 632 мг (3.3 ммоль) 1-этил-3-[3-(диметиламино)пропил]карбодиимида и 362 мкл (3.3 ммоль) N-метилморфолина. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 12 часов. Затем растворитель упаривают досуха при пониженном давлении. К раствору неочищенного амида в ледяной 22.5 мл АсОН добавляют 2.5 мл конц. HCl. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов. Затем к реакционной смеси порционно присыпают 4.4 г Na₂CO₃ и кипятят с обратным холодильником в течение 30 минут. Далее растворитель упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь петролейный эфир/этилацетат (9:1), очищенный продукт 1 перекристаллизовывают из смеси петролейный эфир/этилацетат. Выход 58%. Т_пл=201-202°С (с разложением). Найдено, %: С, 73.43; Н, 6.24; N, 14.68. C₁₈H₁₉N₃O. Вычислено, %: С, 73.69; Н, 6.53; N, 14.32. ИК спектр, (KBr), ν_max, см^-1: 3281, 3178, 1649, 1257, 1094. Спектр ЯМР ¹Н, (400 МГц, ДМСО-d₆), d, м.д.: 10.74 (уш. с, 1Н), 7.83 (уш. с, 1Н), 7.41-7.39 (м, 1Н), 7.33-7.31 (м, 1Н), 7.07-7.04 (м, 1Н), 6.99-6.95 (м, 1Н), 6.59 (с, 1Н), 5.73 (д, J=3.0 Гц, 1Н), 5.49 (д, J=3.0 Гц, 1Н), 4.77-4.74 (м, 1Н), 3.46-3.41 (м, 2Н), 3.35-3.32 (м, 1Н), 3.17-3.09 (м, 2Н), 2.96-2.87 (м, 1Н), 1.46 (с, 3Н). Спектр ЯМР ¹³С (100 МГц, ДМСО-d₆), d, м.д.: 170.4,135.9,130.3,128.8, 126.9, 123.8, 120.8, 118.4, 117.7, 111.2, 109.2, 105.5, 105.3, 62.8, 43.0, 31.0, 26.6, 11.5; m/z (%) (ЭУ, 70 эВ) 293 (97) [М⁺], 164 (57), 130 (100), 107 (60), 94 (17), 77 (12), 43 (64). Полученное соединение 1 представляет собой светло-бежевое кристаллическое вещество, растворимое в этаноле, толуоле, ацетоне, хлороформе, этилацетате.

Пример 2. Для характеристики антимикотической активности соединений использовали стандартные параметры: минимальная подавляющая концентрация (МПК), которую определяли модифицированным методом двукратных серийных разведений (Методические рекомендации: Грибы рода Candida, Методы выделения, идентификации на видовом уровне и определение чувствительности к противогрибковым препаратам, Москва, 2009; МУК 4.2.1890-04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам) и минимальная фунгицидная концентрация (МФК).

Тесты проводили с использованием культуры модельных микроорганизмов Candida albicans АТСС 10231 на питательной среде Мюллера-Хинтона с добавлением 2% глюкозы в 96-луночных полистироловых планшетах. Концентрация микроорганизмов в лунках перед началом культивирования составляла 2,5*10⁵ КОЕ/мл. Культивирование проводили при 37°С без перемешивания. Определение МПК и высевы для определения МФК производили через 24 ч. Исследуемые соединения растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) до полного растворения в концентрации 20 мг/мл и ниже, в зависимости от растворимости. Вносили в питательную среду так, чтобы количество DMSO не превышало 5%.

Пример 3. Острую токсичность (ЛД₅₀, мг/мл) соединения 1 определяли по методу Г.Н. Першина [Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии // М., С.100, 1971, 109-117]. Соединение 1 вводили внутрибрюшинно белым мышам массой 16-18 г в виде взвеси в 2% крахмальной слизи и наблюдали за поведением и гибелью животных в течение 10 суток. Для исследуемого соединения 1 ЛД₅₀ составляет > 1500 мг/кг.

Согласно классификации токсичности препаратов, соединение 1 относится к V классу практически нетоксичных препаратов [Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии: Справочник. М., 1977, стр. 196]. Результаты испытаний представлены в таблице:

Как видно из таблицы, заявляемое соединение 1 сопоставимо по антимикотической активности с препаратом сравнения (Кетоконазол) по отношению к С.albicans. Таким образом, это делает возможным использование 5-[(1Н-индол-3-ил)метил]-7-метил-2,3-дигидро-1Н-пирроло[1,2-d][1,4]диазепин-4(5H)-она 1 для создания новых лекарственных средств в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов.

Изобретение относится к области органической химии - новым биологически активным соединениям - замещенным пирроло[1,2-d][1,4]диазепинонам, а именно к 5-[(1H-индол-3-ил)метил]-7-метил-2,3-дигидро-1H-пирроло[1,2-d][1,4]диазепин-4(5Н)-ону формулы 1, который обладает антимикотической активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве потенциального лекарственного средства с антимикотическими свойствами. Представлено применение 5-[(1H-индол-3-ил)метил]-7-метил-2,3-дигидро-1H-пирроло[1,2-d][1,4]диазепин-4(5H)-она в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов. Изобретение обеспечивает 5-[(1H-индол-3-ил)метил]-7-метил-2,3-дигидро-1H-пирроло[1,2-d][1,4]диазепин-4(5H)-он с выраженным антимикотическим действием и низкой токсичностью. 1 табл., 3 пр.

Применение 5-[(1H-индол-3-ил)метил]-7-метил-2,3-дигидро-1H-пирроло[1,2-d][1,4]диазепин-4(5H)-она:

в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов.