ПРИМЕНЕНИЕ 4,6-ДИМЕТИЛ-1,2-ДИГИДРОПИРРОЛО[1,2-a]ПИРАЗИН-3(4H)-ОНА В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВОГРИБКОВОГО СРЕДСТВА В ОТНОШЕНИИ ДРОЖЖЕВЫХ ГРИБОВ Российский патент 2023 года по МПК A61K31/498 C07D487/04 A61P31/10 

Изобретение относится к области органической химии - биологически активным соединениям - замещенным пирроло[1,2-a]пиразинонам, а именно к 4,6-диметил-1,2-дигидропирроло[1,2-a]пиразин-3(4H)-ону 1 формулы

соединение 1 обладает антимикотической активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве потенциального лекарственного средства с антимикотическими свойствами.

Аналогом по структуре заявляемому соединению является 7-хлор-4-(4-этилфенил)-5,6-дигидро-4H-бензо[ƒ]пирроло[1,2-a][1,4]диазепин 2, обладающий антимикотической активностью [Bioorg. Med. Chem. Lett. 2005, 75, 3453-3458; doi: 10.1016/j.bmcl.2005.05.007] формулы

Эталоном сравнения был выбран кетоконазол 3 формулы

,

который широко применяется в лечебной практике, и является аналогом по действию [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна, 2012. - с. 918; Med. Chem. Res. 2013, 22, 211-218; doi: 10.1007/s00044-012-0021-2].

Задачей изобретения является поиск в ряду замещенных пирроло[1,2-a]пиразинонов веществ с выраженным антимикотическим действием и низкой токсичностью.

Поставленная задача достигается получением 4,6-диметил-1,2-дигидропирроло[1,2-a]пиразин-3(4H)-она, который обладает антимикотической активностью.

Заявляемое соединение 1 синтезируют обработкой 5-метилфурфуриламина N-Boc-аланином при кипячении в течение 12 часов в абсолютном дихлорэтане в присутствии 1-этил-3-[3-(диметиламино)пропил]карбодиимида и N-метилморфолина. Затем образовавшийся неочищенный амид обрабатывают смесью ледяной уксусной и концентрированной соляной кислот при комнатной температуре с последующей нейтрализацией соляной кислоты Na₂CO₃, нагреванием реакционной смеси при 120°С и выделением целевого продукта стандартными методами синтетической органической химии по схеме

Пример 1. Получение соединения 1. К перемешиваемому раствору N-Вос-аланина 567 мг (3 ммоль) в 10 мл абсолютного дихлорэтана добавляют 356 мкл (3.2 ммоль) 5-метилфурфуриламина, 632 мг (3.3 ммоль) 1-этил-3-[3-(диметиламино)пропил]карбодиимида и 362 мкл (3.3 ммоль) N-метилморфолина. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 12 часов. Затем растворитель упаривают досуха при пониженном давлении. К раствору неочищенного амида в ледяной 22.5 мл АсОН добавляют 2.5 мл конц. HCl. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов. Затем к реакционной смеси порционно присыпают 4.4 г Na₂CO₃ и кипятят с обратным холодильником в течение 30 минут. Далее растворитель упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь петролейный эфир/этилацетат (9:1), очищенный продукт 1 перекристаллизовывают из смеси петролейный эфир/этилацетат. Выход 68%. Найдено, %: С, 65.83; Н, 7.21; N, 17.18. C₉H₁₂N₂O. Вычислено, %: С, 65.83; Н, 7.37; N, 17.06. Спектр ЯМР ¹Н, (400 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 7.79 (уш. с, 1H), 5.91 (д, J=3.4 Гц, 1H), 5.88 (д, J=3.4 Гц, 1H), 4.69-4.53 (m, 2Н), 4.42 (дд, J=15.2, 4.6 Гц, 1Н),2.24 (с, 3Н), 1.56 (д, J=7.1 Гц, 3Н). Спектр ЯМР ¹³С (100 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 172.12, 126.33, 120.60, 107.52, 102.41, 53.11, 39.32, 19.98, 11.27. Полученное соединение 1 представляет собой светло-бежевое кристаллическое вещество, растворимое в этаноле, толуоле, ацетоне, хлороформе, этилацетате.

Пример 2. Для характеристики антимикотической активности соединений использовали стандартные параметры: минимальная подавляющая концентрация (МПК), которую определяли модифицированным методом двукратных серийных разведений (Методические рекомендации: Грибы рода Candida. Методы выделения, идентификации на видовом уровне и определение чувствительности к противогрибковым препаратам, Москва, 2009; МУК 4.2.1890-04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам) и минимальная фунгицидная концентрация (МФК).

Тесты проводили с использованием культуры модельных микроорганизмов Candida albicans АТСС 10231 на питательной среде Мюллера-Хинтона с добавлением 2%-ной глюкозы в 96-луночных полистироловых планшетах. Концентрация микроорганизмов в лунках перед началом культивирования составляла 2,5⋅10⁵ КОЕ/мл. Культивирование проводили при 37°С без перемешивания. Определение МПК и высевы для определения МФК производили через 24 ч. Исследуемые соединения растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) до полного растворения в концентрации 20 мг/мл и ниже, в зависимости от растворимости. Вносили в питательную среду так, чтобы количество DMSO не превышало 5%.

Пример 3. Острую токсичность (ЛД₅₀, мг/мл) соединения 1 определяли по методу Г.Н. Першина [Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии // М., С. 100, 1971, 109-117]. Соединение 1 вводили внутрибрюшинно белым мышам массой 16-18 г в виде взвеси в 2%-ной крахмальной слизи и наблюдали за поведением и гибелью животных в течение 10 суток. Для исследуемого соединения 1 ЛД₅₀ составляет >1500 мг/кг.

Согласно классификации токсичности препаратов, соединение 1 относится к V классу практически нетоксичных препаратов [Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии: Справочник. М., 1977, стр. 196]. Результаты испытаний представлены в таблице:

Как видно из таблицы, заявляемое соединение 1 превосходит в полтора раза по антимикотической активности препарат сравнения (Кетоконазол) по отношению к С. albicans. Таким образом, это делает возможным использование 4,6-диметил-1,2-дигидропирроло[1,2-a]пиразин-3(4H)-она 1 для создания новых лекарственных средств в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов Candida albicans.

Изобретение относится к применению 4,6-диметил-1,2-дигидропирроло[1,2-a]пиразин-3(4H)-она формулы 1 в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов Candida albicans. Соединение 1 обладает антимикотической активностью, а также низкой токсичностью, что позволяет применять его в медицине в качестве лекарственного средства с антимикотическими свойствами. 1 табл., 3 пр.

Применение 4,6-диметил-1,2-дигидропирроло[1,2-a]пиразин-3(4H)-она

в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов Candida albicans.