Применение 2-(4-бромфенил)-7-этил-1,2,4,5-тетрагидро-3H-пирроло[1,2-a][1,4]диазепин-3-она в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов Российский патент 2023 года по МПК A61K31/551 A61P31/10 C07D487/04 

Изобретение относится к области органической химии - биологически активным соединениям - замещенным пирроло[1,2-a][1,4]диазепинонам, а именно к 2-(4-бромфенил)-7-этил-1,2,4,5-тетрагидро-3H-пирроло[1,2-a][1,4]диазепин-3-ону 1 формулы:

соединение 1 обладает антимикотической активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве потенциального лекарственного средства с антимикотическими свойствами.

Аналогом по структуре заявляемому соединению является 7-хлор-4-(4-этилфенил)-5,6-дигидро-4H-бензо[ƒ]пирроло[1,2-a][1,4]диазепин 2, обладающий антимикотической активностью [Bioorg. Med. Chem. Lett. 2005, 75, 3453-3458; doi: 10.1016/j.bmcl.2005.05.007] формулы:

Эталоном сравнения был выбран кетоконазол 3 формулы:

который широко применяется в лечебной практике, и является аналогом по действию [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна, 2012. - с. 918; Med. Chem. Res. 2013, 22, 211 -218; doi: 10.1007/s00044-012-0021-2].

Задачей изобретения является поиск в ряду замещенных пирроло[1,2-a][1,4]диазепинонов веществ с выраженным антимикотическим действием и низкой токсичностью.

Поставленная задача достигается получением 2-(4-бромфенил)-7-этил-1,2,4,5-тетрагидро-3H-пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-3-она, который обладает антимикотической активностью.

Заявляемое соединение 1 синтезируют обработкой N-(4-бромфенил)-N-[(5-этилфуран-2-ил)метил]-3-(1,3-диоксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пропанамида гидразингидратом при кипячении с обратным холодильником в течение 5 минут в этаноле. Затем образовавшийся неочищенный амин обрабатывают смесью ледяной уксусной и концентрированной соляной кислот при комнатной температуре с последующей нейтрализацией соляной кислоты NaHCO₃, нагреванием реакционной смеси при 120°С и выделением целевого продукта стандартными методами синтетической органической химии по схеме:

Пример 1. Получение соединения 1. К перемешиваемому раствору 1.440 г (3 ммоль) N-(4-бромфенил)-N-[(5-этилфуран-2-ил)метил]-3-(1,3-диоксо-1,3-дигидро-2H-изоиндол-2-ил)пропанамида в 20 мл этанола добавляют 1.3 мл гидразингидрата (50-60%). Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 5 минут и охлаждают до комнатной температуры. Полученный осадок отфильтровывают и промывают холодным этанолом (3 × 5 мл). Растворитель упаривают досуха при пониженном давлении. Полученный остаток разбавляют 10 мл Н₂О и экстрагируют CHCl₃ (3×5 мл). Объединенные органические фракции промывают насыщенным раствором NaCl (3×5 мл), сушат над безводным Na₂SO₄ и упаривают досуха при пониженном давлении. К раствору неочищенного амина в 10 мл ледяной уксусной кислоты добавляют 1.5 мл концентрированной соляной кислоты. Реакционную смесь перемешивают в течение 24 ч при комнатной температуре. Затем к реакционной смеси порциями добавляют 1.5 г NaHCO₃, кипятят с обратным холодильником в течение 2 минут и выливают в 50 мл насыщенного водного раствора NaHCO₃ (50 мл). Образовавшийся осадок отфильтровывают, промывают водой (3×10 мл), высушивают и очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь петролейный эфир/этилацетат (9:1). Продукт перекристаллизовывают из смеси петролейный эфир/этилацетат. Выход 30%. Т_пл=125-126°С. Найдено, %: С, 57.51; Н, 5.18; N, 8.38. C₁₆H₁₇BrN₂O. Вычислено, %: С, 57.67; Н, 5.14; N, 8.41. ИК спектр, (KBr), ν_max, см^-1: 1705, 1653, 1465, 1238, 1082. Спектр ЯМР ¹Н, (400 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 7.48-7.46 (м, 2Н), 7.18-7.16 (м, 2Н), 5.97 (д, J=3.0 Гц, 1H), 5.87 (д, J=3.0 Гц, 1H), 4.83 (с, 2Н), 4.13 (т, J=5.6 Гц, 2Н), 3.24 (т, J=5.6 Гц, 2Н), 2.56 (кв, J=7.2 Гц, 2Н), 1.29 (т, J=7.2 Гц, 3Н). Спектр ЯМР ¹³С (100 МГц, CDCl₃), δ, м.д.: 171.3, 141.9, 137.5, 132.1 (2С), 127.3 (2С), 126.0, 120.1, 106.7, 103.9, 49.5, 42.1, 34.7, 19.8, 12.4; m/z (%) (ЭУ, 70 эВ) 334/332 (32/32) [М⁺], 149 (18), 134 (53), 120 (70), 108 (100), 93 (95), 79 (40), 55 (77), 43 (88). Полученное соединение 1 представляет собой светло-бежевое кристаллическое вещество, растворимое в этаноле, ацетоне, хлороформе, этилацетате.

Пример 2. Для характеристики антимикотической активности соединений использовали стандартные параметры: минимальная подавляющая концентрация (МПК), которую определяли модифицированным методом двукратных серийных разведений (Методические рекомендации: Грибы рода Candida. Методы выделения, идентификации на видовом уровне и определение чувствительности к противогрибковым препаратам, Москва, 2009; МУК 4.2.1890-04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам) и минимальная фунгицидная концентрация (МФК).

Тесты проводили с использованием культуры модельных микроорганизмов Candida albicans АТСС 10231 на питательной среде Мюллера-Хинтона с добавлением 2% глюкозы в 96-луночных полистироловых планшетах. Концентрация микроорганизмов в лунках перед началом культивирования составляла 2,5*10⁵ КОЕ/мл. Культивирование проводили при 37°С без перемешивания. Определение МПК и высевы для определения МФК производили через 24 ч. Исследуемые соединения растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) до полного растворения в концентрации 20 мг/мл и ниже, в зависимости от растворимости. Вносили в питательную среду так, чтобы количество ДМСО не превышало 5%.

Пример 3. Острую токсичность (ЛД₅₀, мг/мл) соединения 1 определяли по методу Г.Н. Першина [Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии // М., С. 100, 1971, 109-117]. Соединение 1 вводили внутрибрюшинно белым мышам массой 16-18 г в виде взвеси в 2% крахмальной слизи и наблюдали за поведением и гибелью животных в течение 10 суток. Для исследуемого соединения 1 ЛД₅₀ составляет >500 мг/кг.

Согласно классификации токсичности препаратов, соединение 1 относится к IV классу мало токсичных препаратов [Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии: Справочник. М., 1977, стр. 196]. Результаты испытаний представлены в таблице:

Антимикотическая активность и острая токсичность соединения 1.

Как видно из таблицы, заявляемое соединение 1 превышает по антимикотической активности препарат сравнения (Кетоконазол) в 1.5 раза по отношению к С. albicans. Таким образом, 2-(4-бромфенил)-7-этил-1,2,4,5-тетрагидро-3H-пирроло[1,2-a][1,4]диазепин-3-она 1 проявляет более высокую активность по сравнению с эталоном сравнения в отношении дрожжевых грибов, что делает возможным его использование для создания новых лекарственных средств в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов Candida albicans.

Изобретение относится к области медицинской химии, а именно к применению 2-(4-бромфенил)-7-этил-1,2,4,5-тетрагидро-3H-пирроло[1,2-a][1,4]диазепин-3-она формулы 1 в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов Candida albicans. Технический результат изобретения заключается в получении соединения, обладающего выраженной антимикотической активностью в отношении дрожжевых грибов Candida albicans, а также низкой токсичностью. 1 табл., 3 пр.

Применение 2-(4-бромфенил)-7-этил-1,2,4,5-тетрагидро-3H-пирроло[1,2-a][1,4]диазепин-3-она

в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов Candida albicans.