ПРИМЕНЕНИЕ 5-(4-МЕТОКСИФЕНИЛ)-7-МЕТИЛ-1,2,4,5-ТЕТРАГИДРО-3H-ПИРРОЛО[1,2-a][1,4]ДИАЗЕПИН-3-ОНА В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВОГРИБКОВОГО СРЕДСТВА В ОТНОШЕНИИ ДРОЖЖЕВЫХ ГРИБОВ Российский патент 2023 года по МПК A61K31/55 C07D487/04 A61P31/10 

Изобретение относится к области органической химии - новым биологически активным соединениям - замещенным пирроло[1,2а][1,4] диазепинонам, а именно к 5-(4-метоксифенил)-7-метил-1,2,4,5-тетрагидро-3H-пирроло[1,2а] [1,4]диазепин-3-ону 1 формулы:

соединение 1 обладает антимикотической активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве потенциального лекарственного средства с антимикотическими свойствами.

Аналогом по структуре заявляемому соединению является 7-хлор-4-(4-этилфенил)-5,6-дигидро-4H-бензо[f]пирроло[1,2-(а][1,4]диазепин 2, обладающий антимикотической активностью [Bioorg. Med. Chem. Lett. 2005, 15, 3453 -3458; doi: 10.1016/j.bmcl.2005.05.007] формулы:

Эталоном сравнения был выбран кетоконазол 3 формулы:

который широко применяется в лечебной практике и является аналогом по действию [Машковский М.Д. Лекарственные средства. 16-е изд., перераб., испр. и доп.-М.: Новая волна, 2012. - с. 918; Med. Chem. Res. 2013, 22, 211-218; doi: 10.1007/s00044-012-0021-2].

Задачей изобретения является поиск в ряду замещенных пирроло[1,2-а][1,4]диазепинонов веществ с выраженным антимикотическим действием и низкой токсичностью.

Поставленная задача достигается получением 5-(4-метоксифенил)-7-метил-1,2,4,5-тетрагидро-3H-пирроло[1,2-(а][1,4]диазепин-3-она, который обладает антимикотической активностью.

Заявляемое соединение 1 синтезируют обработкой 5-метилфурфуриламина Вос-3-амино-3-(4-метоксифенил)пропионовой кислотой при кипячении с обратным холодильником в течение 12 часов в абсолютном дихлорэтане в присутствии 1-этил-3-[3- (диметиламино)пропил]карбодиимида и N-метилморфолина. Затем образовавшийся неочищенный амид обрабатывают смесью ледяной уксусной и концентрированной соляной кислот при комнатной температуре с последующей нейтрализацией соляной кислоты Na₂CO₃ нагреванием реакционной смеси при 120°С и выделением целевого продукта стандартными методами синтетической органической химии по схеме:

Пример 1. Получение соединения 1. К перемешиваемому раствору 885 мг (3 ммоль) Вос-3-амино-3-(4-метоксифенил)пропионовой кислоты в 5 мл абсолютного дихлорэтана добавляют 367 мкл (3.3 ммоль) 5-метилфурфуриламина, 632 мг (3.3 ммоль) 1-этил-3-[3-(диметиламино)пропил]карбодиимида и 362 мкл (3.3 ммоль) N -метилморфолина. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 12 часов. Затем растворитель упаривают досуха при пониженном давлении. К раствору неочищенного амида в 22.5 мл ледяной АсОН добавляют 2.5 мл конц. HCl. Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 часов. Затем к реакционной смеси порционно присыпают 4.4 г Na₂CO₃ и кипятят с обратным холодильником в течение 30 минут. Далее растворитель упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь петролейный эфир/этилацетат (9:1), очищенный продукт 1 перекристаллизовывают из смеси петролейный эфир/этилацетат. Выход 48%. Т_пл=167-168°С. Найдено, %: С, 70.85; Н, 6.75; N, 10.19. C₁₆H₁₈N₂O2. Вычислено, %: С, 71.09; Н, 6.71; N, 10.36. ИК спектр, (KBr), ν_max, см^-1: 3198, 3078, 1672, 1246, 1030. Спектр ЯМР ¹Н, (400 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д.: 7.87 (уш. с, 1Н), 6.82-6.80 (м, 2Н), 6.75-6.73 (м, 2Н), 5.84 (д,j=3.2 Гц,1H), 5.69 (д,J=3.2 Гц,1H), 5.49 (дд, J=6.8 Гц, J=3.6 Гц, 1Н), 4.36 (дд, J=16.4 Гц, J=4.0 Гц, 1H), 4.16 (дд, J=16.4 Гц, J=6.8 Гц, 1H), 3.71 (с, ЗН), 3.35 (дд, J=14.0 Гц, J=3.6 Гц,1H), 2.80 (дд, J=14.0 Гц, J=6.8 Гц, 1H), 1.78 (с, ЗН). Спектр ЯМР ¹³С (100 МГц, ДМСО-d₆), δ, м.д.: 171.6, 158.0, 134.4, 129.5, 128.8, 126.5 (2С), 113.6 (2С), 105.7, 105.3, 54.9 (2С), 41.4, 38.6, 12.2; m/z (%) (ЭУ, 70 эВ) 270 (100) [М⁺], 226 (30), 161 (70), 134 (66), 108 (33), 94 (68), 81 (21), 43 (49). Полученное соединение 1 представляет собой светло-бежевое кристаллическое вещество, растворимое в этаноле, ацетоне, хлороформе, этилацетате.

Пример 2. Для характеристики антимикотической активности соединений использовали стандартные параметры: минимальная подавляющая концентрация (МПК), которую определяли модифицированным методом двукратных серийных разведений (Методические рекомендации: Грибы рода Candida. Методы выделения, идентификации на видовом уровне и определение чувствительности к противогрибковым препаратам, Москва, 2009; МУК 4.2.1890-04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам) и минимальная фунгицидная концентрация (МФК).

Тесты проводили с использованием культуры модельных микроорганизмов Candida albicans АТСС 10231 на питательной среде Мюллера-Хинтона с добавлением 2% глюкозы в 96-луночных полистироловых планшетах. Концентрация микроорганизмов в лунках перед началом культивирования составляла 2,5*10⁵ КОЕ/мл. Культивирование проводили при 37°С без перемешивания. Определение МПК и высевы для определения МФК производили через 24 ч. Исследуемые соединения растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) до полного растворения в концентрации 20 мг/мл и ниже, в зависимости от растворимости. Вносили в питательную среду так, чтобы количество ДМСО не превышало 5%.

Пример 3. Острую токсичность (ЛД₅₀, мг/мл) соединения 1 определяли по методу Г.Н. Першина [Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии // М., С. 100, 1971, 109-117]. Соединение 1 вводили внутрибрюшинно белым мышам массой 16-18 г в виде взвеси в 2% крахмальной слизи и наблюдали за поведением и гибелью животных в течение 10 суток. Для исследуемого соединения 1 ЛД₅₀ составляет > 1500 мг/кг.

Согласно классификации токсичности препаратов, соединение 1 относится к V классу практически нетоксичных препаратов [Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии: Справочник. М., 1977, стр. 196]. Результаты испытаний представлены в таблице:

Антимикотическая активность и острая токсичность соединения 1.

Как видно из таблицы, заявляемое соединение 1 сопоставимо по антимикотической активности с препаратом сравнения (Кетоконазол) по отношению к С. albicans. Таким образом, это делает возможным использование 5-(4-метоксифенил)-7-метил-1,2,4,5-тетрагидро-3H-пирроло[1,2-а][1,4]диазепин-3-она 1 для создания новых лекарственных средств в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов.

Изобретение относится к области органической химии и фармацевтики, а именно к противогрибковым средствам в отношении дрожжевых грибов. Раскрывается применение 5-(4-метоксифенил)-7-метил-1,2,4,5-тетрагидро-3H-пирроло[1,2-a][1,4]диазепин-3-она формулы 1 в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов. Изобретение обеспечивает эффективное противогрибковое действие в отношении дрожжевых грибов при низкой токсичности. 1 табл., 3 пр.

Применение 5-(4-метоксифенил)-7-метил-1,2,4,5-тетрагидро-3H-пирроло[1,2-a][1,4]диазепин-3-она:

в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов.