ПРИМЕНЕНИЕ 10-МЕТИЛ-6,7-ДИГИДРО-5H-ПИРИДО[2,3-b]-ПИРРОЛО[1,2-d][1,4]ДИАЗЕПИНА В КАЧЕСТВЕ ПРОТИВОГРИБКОВОГО СРЕДСТВА В ОТНОШЕНИИ ДРОЖЖЕВЫХ ГРИБОВ Российский патент 2023 года по МПК A61K31/551 A61P31/10 

Изобретение относится к области органической химии - новым биологически активным соединениям - замещенным пиридо[b]пирроло[1,2-d][1,4]диазепинам, а именно к 10-метил-6,7-дигидро-5Н-пиридо[2,3-b]пирроло[1,2-d][1,4]диазепину 1 формулы:

соединение 1 обладает антимикотической активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве лекарственного средства с антимикотическими свойствами.

Аналогом по структуре заявляемому соединению является 7-хлор-4-(4-этилфенил)-5,6-дигидро-4H-бензо[f]пирроло[1,2-а][1,4]диазепин 2, обладающий антимикотической активностью [Bioorg. Med. Chem. Lett. 2005, 15, 3453 - 3458; doi: 10.1016/j.bmcl.2005.05.007] формулы:

Эталоном сравнения был выбран кетоконазол 3 формулы:

который широко применяется в лечебной практике, и является аналогом по действию [Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна, 2012. - с. 918; Med. Chem. Res. 2013, 22, 211 -218; doi: 10.1007/s00044-012-0021-2].

Задачей изобретения является поиск в ряду замещенных пиридо[b]пирроло[1,2-d][1,4]диазепинов веществ с выраженным антимикотическим действием и низкой токсичностью.

Поставленная задача достигается получением 10-метил-6,7-дигидро-5Н-пиридо[2,3-b]пирроло[1,2-d][1,4]диазепина, который обладает антимикотической активностью.

Заявляемое соединение 1 синтезируют двухстадийным методом, который включает обработку N-[2-(5-метилфуран-2-ил)этил]-3-нитропиридин-2-амина 4 смесью ледяной уксусной и концентрированной соляной кислот при комнатной температуре и обработку полученного 7-[(3-нитропиридин-2-ил)амино]гептан-2,5-диона 5 порошком карбонильного железа в среде ледяной уксусной кислоты при кипячении с последующим выделением целевого продукта стандартными методами синтетической органической химии по схеме:

Пример 1. Получение соединения 1. Стадия 1. К раствору 741 мг (3 ммоль) N-[2-(5-метилфуран-2-ил)этил]-3-нитропиридин-2-амина 4 в 16 мл ледяной уксусной кислоты добавляют концентрированную соляную кислоту (12 М, 3.2 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 16 ч. Затем реакционную смесь выливают в H₂O (50 мл) и нейтрализуют до рН ~ 7 с помощью NaHCO₃. Продукт экстрагируют этилацетатом (3×30 мл). Объединенные органические фракции промывают насыщенным раствором NaCl (3×20 мл), сушат над безводным Na₂SO₄. Растворитель упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь петролейный эфир/этилацетат (4:1), очищенный продукт 5 получают в виде желтого масла. Выход 80%. Стадия 2. К раствору 398 мг (1.5 ммоль) 7-[(3-нитропиридин-2-ил)амино]гептан-2,5-диона 5 в ледяной уксусной кислоте (6 мл) добавляют 1.26 г (22.5 ммоль) карбонильного железа. Реакционную смесь кипятят с обратным холодильником в течение 15 минут. Затем реакционную смесь выливают в H₂O (100 мл) и нейтрализуют до рН ~ 7 с помощью NaHCO₃. Непрореагировавшее железо отфильтровывают и промывают горячим этилацетатом (3×5 мл). Водный слой экстрагируют этилацетатом (3×40 мл). Объединенные органические фракции промывают насыщенным раствором NaCl (3×20 мл), сушат над безводным Na₂S0₄. Растворитель упаривают досуха при пониженном давлении. Остаток очищают методом колоночной хроматографии на силикагеле, используя в качестве элюента смесь петролейный эфир/этилацетат (10:1). Продукт 1 перекристаллизовывают из смеси петролейный эфир/этилацетат. Выход 84%. Т_пл=151-152°С. Найдено, %: С, 72.33; Н, 6.49; N, 21.07. C₁₂H₁₃N₃.

Вычислено, %: С, 72.33; Н, 6.58; N, 21.09. ИК спектр, (CaF₂), ν_max, см^-1: 3232, 1595, 1523, 1410, 1325, 1304, 1242, 1220. Спектр ЯМР ¹Н, (400 МГц, ДМСО-d₆), d, м.д.: 7.98-7.99 (м, 1Н), 7.46 (д, J=7.6 Гц, 1Н), 6.80-6.77 (м, 1Н), 6.08 (уш. с, 1Н), 5.88 (д, J=3.2 Гц, 1Н), 5.83 (д, J=3.2 Гц, 1Н), 3.51-3.47 (м, 2Н), 2.76-2.73 (м, 2Н), 2.14 (с, 3Н). Спектр ЯМР ¹³С (100 МГц, ДМСО-d₆), d, м.д.: 152.9, 145.4, 133.4, 132.4, 127.5, 120.5, 113.6, 108.4, 103.7, 49.6, 25.1, 13.2. Полученное соединение 1 представляет собой бледно-желтое кристаллическое вещество, растворимое в хлороформе, толуоле, ацетоне, этаноле.

Пример 2. Для характеристики антимикотической активности соединений использовали стандартные параметры: минимальная подавляющая концентрация (МПК), которую определяли модифицированным методом двукратных серийных разведений (Методические рекомендации: Грибы рода Candida. Методы выделения, идентификации на видовом уровне и определение чувствительности к противогрибковым препаратам, Москва, 2009; МУК 4.2.1890-04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам) и минимальная фунгицидная концентрация (МФК).

Тесты проводили с использованием культуры модельных микроорганизмов Candida albicans АТСС 10231 на питательной среде Мюллера-Хинтона с добавлением 2% глюкозы в 96-луночных полистироловых планшетах. Концентрация микроорганизмов в лунках перед началом культивирования составляла 2,5*10⁵ КОЕ/мл. Культивирование проводили при 37°С без перемешивания. Определение МПК и высевы для определения МФК производили через 24 ч. Исследуемые соединения растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО) до полного растворения в концентрации 20 мг/мл и ниже, в зависимости от растворимости. Вносили в питательную среду так, чтобы количество DMSO не превышало 5%.

Пример 3. Острую токсичность (ЛД₅₀, мг/мл) соединения 1 определяли по методу Г.Н. Першина [Першин Г.Н. Методы экспериментальной химиотерапии // М., С. 100, 1971, 109-117]. Соединение 1 вводили внутрибрюшинно белым мышам массой 16-18 г в виде взвеси в 2% крахмальной слизи и наблюдали за поведением и гибелью животных в течение 10 суток. Для исследуемого соединения 1 ЛД₅₀ составляет > 500 мг/кг.

Согласно классификации токсичности препаратов, соединение 1 относится к IV классу мало токсичных препаратов [Измеров Н.Ф., Саноцкий И.В., Сидоров К.К. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии: Справочник. М., 1977, стр. 196]. Результаты испытаний представлены в таблице:

Как видно из таблицы, заявляемое соединение 1 сопоставимо по антимикотической активности с препаратом сравнения (Кетоконазол) по отношению к С.albicans. Таким образом, это делает возможным использование 10-метил-6,7-дигидро-5H-пиридо[2,3-b]пирроло[1,2-d][1,4]диазепина 1 для создания новых лекарственных средств в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов.

Изобретение относится к области органической химии - новым биологически активным соединениям - замещенным пиридо[b]пирроло[1,2-d][1,4]диазепинам, а именно к 10-метил-6,7-дигидро-5Н-пиридо[2,3-b]пирроло[1,2-d][1,4]диазепину формулы 1, который обладает антимикотической активностью, что позволяет предположить его использование в медицине в качестве лекарственного средства с антимикотическими свойствами. Представлено применение 10-метил-6,7-дигидро-5H-пиридо[2,3-b]пирроло[1,2-d][1,4]диазепина формулы (1) в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов. Изобретение обеспечивает 10-метил-6,7-дигидро-5H-пиридо[2,3-b]пирроло[1,2-d][1,4]диазепин формулы (1), обладающий выраженным антимикотическим действием и низкой токсичностью. 1 табл., 3 пр.

Применение 10-метил-6,7-дигидро-5H-пиридо[2,3-b]пирроло[1,2-d][1,4]диазепина:

в качестве противогрибкового средства в отношении дрожжевых грибов.