Применение 3,6-дигидрокси-6-метил-4-(4-фторфенил)-4,5,6,7-тетрагидро-2H-индазол-5-карбоксамида в качестве средства, обладающего противовоспалительной активностью Российский патент 2023 года по МПК A61K31/416 A61P29/00 

Изобретение относится к области применения биологически активных соединений класса 4-арил-3,6-дигидрокси-6-метил-4,5,6,7-тетрагидро-2H-индазол-5-карбоксамидов, а именно 3,6-дигидрокси-6-метил-4-(4-фторфенил)-4,5,6,7-тетрагидро-2H-индазол-5-карбоксамиду формулы(I):

I

обладающему противовоспалительной активностью, что позволяет предложить его использование в фармакологии и медицине в качестве противовоспалительного лекарственного средства.

Способ синтеза 4-арил-3,6-дигидрокси-6-метил-4,5,6,7-тетрагидро-2H-индазол-5-карбоксамидов известен из уровня техники [Синтез и биологическая активность 4-арил-3,6-дигидрокси-6-метил-4,5,6,7-тетрагидро-2H-индазол-5-карбоксамидов / В.Л. Гейн, Н.В. Носова, Д.Д. Лежнина, О.Н. Гейн, Э.В. Воронина, М.О. Старовойтова, М.В. Дмитриев // Журнал общей химии. - 2021. - Т. 91, №. 1. - С. 68-75].

Противовоспалительная активность 4-арил-3,6-дигидрокси-6-метил-4,5,6,7-тетрагидро-2H-индазол-5-карбоксамидов ранее не была исследована.

Задачей изобретения является поиск среди производных 4,5,6,7-тетрагидро-2H-индазол-5-карбоксамидов соединения, проявляющего высокую противовоспалительную активность при низкой токсичности.

Поставленная задача решается получением соединения 3,6-дигидрокси-6-метил-4-(4-фторфенил)-4,5,6,7-тетрагидро-2H-индазол-5-карбоксамида (I), проявляющего высокую противовоспалительную активность и обладающего низкой токсичностью.

Синтезируют заявляемое соединение (I) взаимодействием 4-гидрокси-4-метил-6-оксо-2-(4-фторфенил)циклогексан-1,3-дикарбоксамида (II) с гидразингидратом путем кипячения реагентов в этиловом спирте в отсутствии катализатора по схеме:

Схема 1

II I

Синтез исходного 4-гидрокси-4-метил-6-оксо-2-(4-фторфенил)циклогексан-1,3-дикарбоксамида (II) осуществлен по ранее описанной методике [Stereoselective synthesis of novel functionalized cyclohexanone derivatives via the condensation of aromatic aldehydes with acetoacetamide and the influence of the ortho-effect and autocondensation /V.L. Gein, N.V. Nosova, A.Y. Bazhina, A.N. Yankin, M.V. Dmitriev// Tetrahedron Lett.- 2019. - Vol. 60, N. 24. - P. 1592-1596].

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Получение заявляемого соединения (I).

К раствору 0,005 моль 4-гидрокси-4-метил-6-оксо-2-(4-фторфенил)циклогексан-1,3-дикарбоксамида в 20 мл этилового спирта по каплям добавляли 0,006 моль (20% избыток) гидразингидрата. Реакционную смесь кипятили в течение 4 часов, затем охлаждали, выпавшие кристаллы отфильтровывали и перекристаллизовывали из этилового спирта. Выход 72% (1,1 г), т. пл. 280-282°С (этанол).

Заявляемое соединение (I) представляет собой бесцветное кристаллическое вещество, растворимое в диметилсульфоксиде (ДМСО), диметилформамиде (ДМФА), при нагревании - в этиловом и изопропиловом спиртах, ацетоне, нерастворимое в воде, устойчивое при хранении.

ИК спектр (Specord M-80 в таблетках KBr), ν, см^-1: 3553 (OH), 3342 (NH), 1628 (CON). Спектр ЯМР ¹Н (Bruker 500 (рабочая частота 500.13 МГц) в ДМСО-d₆, внутренний стандарт - ТМС), δ, м. д.: 1.26 с (3Н, CH₃), 2.34 д (1Н, С⁴Н, J 10.0 Гц), 2.55 д (1Н, С⁷Н_АН_В, J 16.5 Гц), 2.62 д (1Н, С⁷Н_АН_В, J 16.4 Гц), 3.96 д ( 1Н, С⁵Н, J 10.0 Гц), 4.58 с (1Н, ОН), 6.95 с (1H, NH), 7.09 м (2H, С₆Н₄), 7.12 м (2H, С₆Н₄ + 1H, NH), 10.05 уш. с (2Н, NH, OH). Найдено, %: C 58.92; H 5.34; N 13.82. C₁₅H₁₆FN₃O₃. Вычислено, %: C 59.01; H 5.28; N 13.76.

Пример 2. Исследование острой токсичности и противовоспалительной активности заявляемого соединения (I).

Все исследовательские работы с лабораторными животными выполняли в соответствии с общепринятыми этическими нормами обращения с животными, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для исследовательских и иных научных целей [Европейская конвенция по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и других научных целях, Страсбург 1986].

Острую токсичность изучали на 8 нелинейных белых мышах массой 21-24 г, используя экспресс-метод В.Б. Прозоровского [Прозоровский, В. Б. Экспресс-метод определения средней эффективной дозы и её ошибки / В. Б. Прозоровский, М. П. Прозоровская, В. И. Демченко // Фармакология и токсикология. - 1978. - № 4. - С. 497-502.]. Исследуемое соединение (I) вводили однократно внутрибрюшинно в 2% крахмальной слизи в дозах 794, 1000, 1260 и 1580 мг/кг. Затем в течение 14 дней вели наблюдение за животными, фиксируя интенсивность двигательной активности, реакции на тактильные, звуковые и световые раздражители, частоту и глубину дыхательных движений, состояние волосяного и кожного покрова, окраску видимых слизистых оболочек, потребление воды и пищи [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / Под ред. А.Н. Миронова, Н.Д. Бунятян, А.Н. Васильева, О.Л. Верстаковой, М.В. Журавлевой, В.К. Лепахина, Н.В. Коробова, В.А. Меркулова, С.Н. Орехова, И.В. Сакаевой, Д.Б. Утешева, А.Н. Яворского. М.: Гриф и К, 2012. Ч. 1. 944 с.].

Установлено, что внутрибрюшинное введение животным исследуемых доз заявляемого соединения (I) не приводило к клиническим проявлениям признаков токсического действия, а также к гибели животных. Следовательно, ЛД₅₀ для заявляемого соединения (I) составляет более 1580 мг/кг. Согласно классификации токсичности веществ заявляемое соединение (I) относится к 5 классу токсичности и является практически нетоксичным соединением [Сидоров, К. К. Фармакология новых промышленных химических веществ. - 1973. - №13. - С.47 - 51.]. Это имеет большое преимущество по сравнению с препаратом сравнения мелоксикамом, для которого минимальная токсическая доза (TDL0) при внутрибрюшинном введении крысам может составлять 1,25 мг/кг [Safety Data Sheet acc. to OSHA HCS [Электронный ресурс]. - Режим доступа: https://cdn.caymanchem.com/cdn/msds/14906m.pdf].

Заявляемое соединение (I) исследовали на противовоспалительную активность. Эксперимент проводили на крысах-самцах массой 165-225 г. Острую воспалительную реакцию вызывали субплантарным введением 0,1 мл 1% раствора каррагенина в заднюю лапу животного [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / Под ред. А.Н. Миронова, Н.Д. Бунятян, А.Н. Васильева, О.Л. Верстаковой, М.В. Журавлевой, В.К. Лепахина, Н.В. Коробова, В.А. Меркулова, С.Н. Орехова, И.В. Сакаевой, Д.Б. Утешева, А.Н. Яворского. М.: Гриф и К, 2012. Ч. 1. 944 с]. Объем стопы у крыс измеряли онкометрически до введения каррагенина (контроль), а затем через 3 и 5 часов после его введения. Исследуемое соединение (I) вводили внутрибрюшинно в виде взвеси в 2%-ой крахмальной слизи в дозе 50 мг/кг за 30 мин до введения флогогена. Контрольной группе животных вводили эквиобъемное количество 2% крахмальной слизи. В качестве препарата сравнения использовали мелоксикам в дозе 50 мг/кг, вводимый внутрибрюшинно в 2% крахмальной слизи. Противовоспалительный эффект оценивали по показателю торможения отека, который выражали в процентах к показателям контрольной группы. Результаты исследований представлены в таблице 1.

Таблица 1
Противовоспалительная активность соединения (I) Исследуемое вещество доза, мг/кг количество животных % торможение отека стопы через 3 ч через 5 ч 3,6-дигидрокси-6-метил-4-(4-фторфенил)-4,5,6,7-тетрагидро-2H-индазол-5-карбоксамид 50 6 50,59* 68,83* мелоксикам 50 8 68,10* 74,07* Примечание: * - р<0,05 по отношению к контролю;

В ходе проведенных исследований выявлено, что исследуемое вещество (I) уменьшало выраженность каррагенинового отека лапы крыс через 3 и 5 часов после индукции воспалительной реакции. Выраженность торможения воспалительной реакции через 5 часов исследуемым соединением была сопоставима с препаратом сравнения.

Таким образом, заявляемое соединение 3,6-дигидрокси-6-метил-4-(4-фторфенил)-4,5,6,7-тетрагидро-2H-индазол-5-карбоксамид (I) при низкой токсичности по сравнению с препаратом сравнения проявляет высокую противовоспалительную активность.

Исследование выполнено при финансовой поддержке Пермского научно-образовательного центра «Рациональное недропользование», 2022 год.

Изобретение относится к области фармакологии и медицины, а именно к применению 3,6-дигидрокси-6-метил-4-(4-фторфенил)-4,5,6,7-тетрагидро-2H-индазол-5-карбоксамида формулы (I) в качестве средства, обладающего противовоспалительной активностью. Технический результат – выраженный противовоспалительный эффект и низкая токсичность, проявляемые соединением формулы I. 1 табл., 2 пр.

I

Применение 3,6-дигидрокси-6-метил-4-(4-фторфенил)-4,5,6,7-тетрагидро-2H-индазол-5-карбоксамида формулы (I)

I

в качестве средства, обладающего противовоспалительной активностью.